PRRS – Porcine respiratory reprodutive sindrome Qual
Contents
1. Armazenamento a 429C de PRRS mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 15 dias a partir da data de recep o temperatura ambiente PRRS mix CI CP e CN permanecem est veis durante 3 dias a partir da data de recep o PRRS mix CI CP e CN nunca devem ser deixados ou armazenados com a tampa aberta 2 RNA e cDNA As amostras de RNA e cDNA armazenadas em gua livre de RNases permanecem est veis durante 2 anos a 202C ou 80 C geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico responsabiliza se perante os seus clientes pelos defeitos no material e componentes dos seus produtos aplicados em condi es normais Os produtos da empresa que apresentam esta garantia devem ser substitu dos sem encargos para o cliente Esta garantia aplica se s para produtos que sejam manipulados e armazenados de acordo com as especifica es e recomenda es de utiliza o As reclama es devem ser enviadas por escrito directamente para a geneBOX e devem ser acompanhadas por uma c pia da guia de transporte ou factura do produto Este produto n o pode ser reformulado reembalado ou revendido em nenhuma forma sem o expresso consentimento da geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico 18 Protocolo de amplifica o por PCR 1 4 Pr an lise 1 Colheita de amostras Para garantir um teste de alta qualidade das amostras devem ser colhidas nas seguintes condi es A Plasma e s2. 3 Glicerol concentra o final 16 6 Vermelho de cresol concentra o final de 300ug ml Nome do Produto PRRS Qual PCR Box 1 0 Numero do Produto GB 4110 Utiliza o Detec o de PRRS Produ o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 cantanhede portugal N s geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico indubitavelmente declaramos que este produto ao qual se relaciona esta declara o de conformidade est em conformidade com os seguintes documentos normativos ISO 9001 2008 e ISO 13485 2004 Seguindo ainda as indica es da Directiva Europeia 98 79 CE sobre dispositivos m dicos de diagn stico in vitro conformidade de acordo com o Anexo IV transposto para as leis nacionais dos estados membros da Uni o Europeia Europeia A ficha e os documentos t cnicos deste produto s o mantidos na geneBOX biocant centro de inova o em biotecnologia 3060 197 Cantanhede Portugal Sandra Balseiro Directora T cnica 19 geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico garante que os primers presentes no PRRS Qual PCR Box apresentam as especificidades dadas nas folhas e tabelas de interpreta o de resultados do produto 1 PRRS mix Cl CP e CN Armazenamento a 20 C PRRS mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 12 meses a partir da data de produ o ver validade do lote na embalagem
3. A s ndrome provocada por este v rus representa uma das maiores causas de perdas econ micas no sector da suinicultura PRRS Qual PCR Box 1 0 um teste para diagn stico molecular desta infec o viral que permite a sua detec o com maior sensibilidade especificidade e rapidez do que os m todos tradicionais por cultura PRRS Qual PCR Box 1 0 detecta o gene ORF7 do v rus Altera es e melhoramento do Produto O kit PRRS Qual PCR Box 1 0 est constantemente a ser actualizado ao n vel da sua especificidade e interpreta o de modo a incluir novas variantes que venham a ser descritas Este produto pode tamb m ser melhorado de modo a aumentar o seu rendimento As altera es adi es ou modifica es de primers em rela o ao lote anterior est o detalhadas na tabela abaixo N A Folha de Dados de Seguran a 2 3 Material Safety Data Sheet MSDS 4 Informa o Toxicol gica Qu mico Toxicidade Glicerol LD50 oral 4090 mg kg ratinho LD50 oral 12600 mg kg rato LD50 oral 1480 mg kg humano 5 Estabilidade e reactividade Condi es a evitar Calor e humidade Incompatibilidades Bases e agentes oxidantes fortes 6 Protec o pessoal Protec o das m os use luvas apropriadas resistentes a qu micos Protec o dos olhos recomenda se o uso de culos de protec o qu mica 7 Manipula o e armazenamento Manipula o evite o contacto directo com a subst ncia Armazenamento armazen
4. Box1 0 Typing Kit M foi intensivamente testado utilizando a Taq da Reagente 5 Reagente 5 Lisboa Portugal 3 Mistura de reac o Para uma boa performance da tipagem com o PRRS Box1 0 Typing Kit M obrigat rio a utiliza o da PCR Master Mix fornecida com o Kit 4 Procedimentos de amplifica o No fim da PCR examine o grau de evapora o e de condensa o da mistura de reac o da PCR Se as perdas de volume forem superiores a 20 n o devem ser validados os resultados obtidos De forma a prevenir esta situa o devem adicionar previamente leo mineral mistura de reac o ou utilizar um adaptador de silicone para placas de 96 Tamb m se deve ter em aten o a temperatura de aquecimento do aparelho Se a temperatura de aquecimento n o for suficiente v o se verificar problemas de condensa o 5 Termociclador Recomenda se utiliza o de qualquer Termociclador que apresente as seguintes caracter sticas heating rate superior a 2 5 C sec cooling rate superior a 1 5 C sec gama de temperatures 4 1002C uniformidade de temperaturas 0 5 C heated lid superior a 100 C 6 Validade Como especificado na embalagem Se os problemas persistirem por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 17 Avisos e precau es 2 2 Os componentes dos kits s o resistentes s temperaturas de armazenamento indicadas O armazenamento dos kits a temperaturas n o recomendadas podem le
5. an 15 Guia t CNICO ss sssisisiaasas iassassaisasesesrasiisniasisticsio fas dantass ocastandanso 17 Garantia ssssssstsssasbsspsspssiseisa as besgbissena T 18 Aviso de Garantia sssssipesisissssesiiaisagasssadasasra sa pespsassapansetns gar a 18 Declara o de Conformidade ieaas 19 Refer ncias 1 Guo LJ Lu YH Wei YW Huang LP Liu CM Porcine circovirus type 2 PRRS genetic variation and newly emerging genotypes in China Virol J 2010 Oct 19 7 1 273 2 Savic B Milicevic V Bojkovski J Kureljusic B Ivetic V Pavlovic Detection rates of the swine torque teno viruses TTVs porcine circovirus type 2 PRRS and hepatitis E virus HEV in the livers of pigs with hepatitis Vet Res Commun 2010 Oct 34 7 641 8 3 Li J Yuan X Zhang C Miao L Wu J Shi J Xu S Cui S Wang J Ai H A mouse model to study infection against porcine circovirus type 2 viral distribution and lesions in mouse Virol J 2010 Jul 15 7 158 4 Lee G Han D Song JY Lee YS Kang KS Yoon S Genomic expression profiling in Iymph nodes with lymphoid depletion from porcine circovirus 2 infected pigs Gen Virol 2010 Oct 91 Pt 10 2585 91 5 Zhang H Li W Sheng Z Han H He Q Ultrasensitive detection of porcine circovirus type 2 using gold Ill enhanced chemiluminescence immunoassay Analyst 2010 Jul 135 7 1680 5 6 Lorincz M Cs gola A Biksi Szeredi L D n A Tuboly T Detection of porcine circovirus in rodents short communi
6. cation Acta Vet Hung 2010 Jun 58 2 265 8 7 Saha D Lefebvre DJ Van Doorsselaere J Atanasova K Barb F Geldhof M Karniychuk UU Nauwynck HJ Pathologic and virologic findings in mid gestational porcine foetuses after experimental inoculation with PRRSa or PRRSb Vet Microbiol 2010 Sep 28 145 1 2 62 8 8 Reiner G Bronnert B Hohloch C Fresen C Haack Willems H Reinacher M Qualitative and quantitative distribution of PRRS in wild boars and domestic pigs in Germany Vet Microbiol 2010 Sep 28 145 1 2 1 8 9 Grau Roma L Fraile L Segal s J Recent advances in the epidemiology diagnosis and control of diseases caused by porcine circovirus type 2 Vet J 2010 Mar 7 10 Vilcek S Viasakova M Jackova A LUX real time PCR assay for the detection of porcine circovirus type 2 J Virol Methods 2010 May 165 2 216 21 23 Folha de Dados de Seguran a 3 3 Material Safety Data Sheet MSDS Equipamento especial de combate ao inc ndio quando s o libertadas grandes quantidades de subst ncia trabalhe apenas com protec o adequada para olhos e pele 11 Medidas a tomar no caso de derrame acidental Precau es pessoais evite o contacto directo com a subst ncia Limpeza limpe normalmente a rea afectada n o s o necess rios cuidados adicionais Protec o da pele use uma bata de laborat rio 12 Informa o ecol gica N o existem dados dispon veis 13 Informa o sobre a elimina o Elimine
7. e temperatura aconselhada proteja do contacto com a luz Danifica o da embalagem protectora rejeitar o constituinte contido na embalagem 8 Perigos Os componentes da mistura de reac o podem ser perigosos se inalados ingeridos ou absorvidos pela pele Este material pode causar irrita o da pele dos olhos e do tracto respirat rio A ingest o de grandes quantidades desta mistura pode causar dores de est mago v mitos ou diarreia 9 Medidas de Primeiros Socorros No caso de contacto com os olhos deve lavar imediatamente os olhos com gua abundante por cerca de 15 minutos Deve consultar o seu m dico No caso de contacto com a pele deve lavar imediatamente a zona afectada com gua corrente e sab o Lave a roupa contaminada antes da sua utiliza o No caso de ingest o lave a boca com gua abundante Deve contactar o seu m dico se necess rio No caso de inala o mudar a v tima para um local arejado Se encontrar inanimado aplique respira o artificial Se apresentar dificuldades respirat rias aplique oxig nio Deve consultar o seu m dico 10 Medidas a tomar em caso de inc ndio Meios de extin o gua di xido de carbono p qu mico seco ou espuma apropriada Meios de extin o n o aconselhados n o existem restri es conhecidas Perigos espec ficos de exposi o em caso de inc ndio podem emitir fumos t xicos de di xido e mon xido de carbono nitrog nio f sforo cloreto de hidrog nio
8. e g s hidrog nio 21 Folha de Dados de Seguran a 1 3 Material Safety Data Sheet MSDS geneBOX R amp D Diagnostic Tests PCR Kits Produtos PCR da geneBOX Esta folha de dados de seguran a aplic vel a todos os produtos de PCR da geneBOX 1 Produtos Qu micos e Identifica o da Companhia Data de realiza o Mar o de 2011 Grupo do produto Produtos de PCR da geneBOX Manufactura o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410 946 fax 351 231 410 947 e mail info genebox com 2 Composi o e Informa o sobre os reagentes Componente Qu mico Nome vulgar N de lote Mistura de primers Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Mistura de reac o Desoxiribonucle tidos Nucle tidos Tamp o Cloreto de Magn sio Mgci2 Vermelho de Cresol Glicerol DNA polimerase Controlo interno Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Controlo positivo Acido Desoxiribonucleico DNA Controlo negativo H20 gua bidestilada est ril 3 Propriedades f sico qu micas Componente Aspecto Cor Odor Mistura de primers l quido incolor nenhum Mistura de reac o l quido vermelho rosa nenhum Controlo Interno l quido incolor nenhum Controlo Positivo l quido incolor nenhum Controlo Negativo l quido incolor nenhum 20 Controlo de Qualidade O kit PRRS Qual PCR Box 1 0 foi testado com RNAs extra dos de cul
9. eraturas inferiores a 1 Abra e feche os reagentes com cuidado Depois de utilizar armazene os restantes componentes do kit s temperaturas recomendadas devidamente fechados N o utilize o kit com a validade expirada 15 PROBLEMAS Falsos negativos de uma banda espec fica com o controlo interno normal POSSIVEIS CAUSAS Degrada o da amostra de RNA SUGEST ES Reextraia a amostra de RNA de material fresco Degrada o da amostra de cDNA Repita a reac o de transcri o reversa com um RNA de boa qualidade Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Esfrega o de bandas Degrada o da amostra de RNA Reextraia a amostra de RNA de material fresco Degrada o do cDNA da amostra Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Amostra de cDNA muito concentrada Verifique a qualidade e concentra o do cDNA Dissolva o cDNA em daH20 de forma a obter a concentra o exacta Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Problemas com tamp o de electroforese Fora de prazo ou Use um tamp o recomendado novo composi o errada 14 Protocolo de electroforese em gel de agarose Prepara o do gel de agarose a 4 1 2 3 4 Dissolver 8 gramas de p agarose em 200 ml de tamp o TAE 1X Dissolver completamente a agarose aquecendo a no microondas Arrefe a o gel at aproximadamente 502C Adicione pelo
10. m bons niveis de concentra o e integridade da amostra S ntese de cDNA Para a detec o de deste v rus por PCR necess rio sintetizar cDNA Recomenda se que a transcri o reversa para cDNA seja realizada utilizando kits com marca o CE que garantam a qualidade dos produtos finais obtidos Reagentes Amostra de cDNA Mistura de reac o PRRS mix Controlo interno CI Controlo positivo CP Controlo negativo CN gua bi destilada est ril n o fornecida Este componente apresenta alto potencial contaminante dado conter cDNA de PRRS recomenda se o m ximo cuidado no seu manuseamento Protocolo de amplifica o por PCR 4 4 Amplifica o por PCR 1 Agite brevemente todos os tubos do kit e os tubos de DNA 2 Para cada detec o pipete de acordo com a tabela Tabela Tubo PRRS mix Tubo Controlo Interno CI DNA de amostra Volume final NOTA Por cada utiliza o do kit deve correr pelo menos uma reac o CP e CN 3 Para o controlo positivo proceder como em 2 substituindo o DNA de amostra por 1 ul de Tubo Controlo Positivo CP 4 Para o controlo negativo proceder como em 2 substituindo o Controlo Interno por 1 ul de gua bidestilada est ril e o DNA de amostra por 1 ul de Tubo controlo negativo CN 5 Coloque os componentes da reac o no termociclador e corra o seguinte programa de PCR Programa PCR Fim 42C Infinito 1 6 Detecte os produtos do PCR com uma electrof
11. menos 20 pl de brometo de et dio 10 mg ml ou de Sybr Safe 10000x concentrado agarose Agite at estar completamente incorporado Numa superf cie nivelada monte a placa do gel com 96 po os Verta uma camada de gel com cerca de 5mm Deixe o gel arrefecer Aten o este reagente um forte agente mutag nico leia atentamente a MSDS do produto Electroforese 1 Submirja o gel na tina de electroforese com tamp o TAE 1X 2 Remova os pentes com cuidado do gel 3 Adicione 10 pl do produto de PCR em cada po o 4 Ligue a tina de electroforese corrente com uma voltagem m dia 115V 5 Deixe a electroforese correr por cerca de 20 minutos ou at o corante estar a 2 3 da linha 6 Ponha o gel no transiluminador 7 Fotografe o gel e identifique o 8 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 1 Tabela de Interpreta o de resultados Tabela I Interpreta o de an lises v lidas Controlo o o PRRS 485pb Interno 101pb E RE E E i S RC Tamanho da banda espec fica Tamanho da banda de Controlo Interno Interpreta o Valida o Tabela Il Interpreta o de an lises n o v lidas Controlo PRRS 485pb Interno 101pb Controlo positivo inv lido man Interpreta o E SR MA id E A reac reac reao fo E r reac o 12 Guia de resolu o de problemas PROBLEMAS Bandas controlo e espec ficas fracas Os controlos interno
12. o material de acordo com toda a regulamenta o aplic vel Grupo IV res duos hospitalares espec ficos 14 Informa o sobre o transporte No transporte dos Kits devem estar a seguradas as temperaturas n o devendo ultrapassar os 15 C A dura o do transporte n o deve ser superior a 3 dias de modo a garantir que todos os componentes do Kit cheguem em perfeitas condi es aos seus destinat rios 15 Contactos teis N mero Nacional de Emerg ncia 112 Centro de Informa o Anti Venenos 808 250 143 16 Outras informa es As informa es a cima dispon veis s o baseados no n vel de conhecimento actual devendo ser utilizado apenas como guia A geneBOX R amp D Diagnostic Tests n o se responsabiliza por qualquer dano causado pela manipula o inapropriada ou pelo contacto com os referidos produtos Para mais esclarecimentos por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 22 Folha de da Refer ncias dos de seguran issassaseessessasesarasraso seonieisasaopasdo Apresenta o A s ndrome reprodutiva e respirat ria porcina PRRS espec fica do g nero suis e pode causar abortos pr ximos ao parto partos prematuros mumifica o fetal leit es fracos e natimortos infertilidade e sinais respirat rios em diversas faixas et rias sendo end mica em v rios pa ses europeus O agente etiol gico desta s ndrome um v rus de pequena dimens o com genoma de RNA de cadeia simples
13. ogo eUe geneBox 000 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410946 fax 351 231 410947 e mail info genebox com 24 C digo do Produto 4110 PRRS Porcine respiratory reprodutive sindrome Qual PCR Box 1 0 Dispositivo para utiliza o in vitro Manual de I nstru es ogo eo geneBox 000 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO Vers o1 1 Abril de 2011 1 Apresenta o iecamasess ea ienguata ro mennicsias ias siena andas aaa 4 Altera es e Melhoramento do produto 4 Controlo da Qualidade ssssssssessressssrusrrsrrennirnrrrsnrirnsrrernsrrene 5 Sensibilidade e Especificidade 5 Componentes do PRRS Box 1 0 Typing Kit 6 Protocolo de amplifica o por PCR 7 Pr aN liS sinsir 7 Colheita sssasssssssaspsssoracopesnsaaso gs niiesegoipaaniadassnsinm as 7 Armazemamento snes nessa 7 EAN D ONO cscesuis ienes cincis rirau 8 Extrac o de RN Arisna ean 9 Reagent eSis 9 Amplifica o por PCR ias 9 Par metros do programa de PCR 10 Protocolo de electroforese em gel de agarose 11 Prepara o do gel a 4 11 Electro one Seyi reei reie eein 11 Tabela de interpreta o dos Resultados 12 Guia de resolu o de problemas 13 Avisos Precau es siena nara rren
14. orese em gel de agarose a 4 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 10 Avisos e precau es 1 2 A amplifica o por PCR permite nos obter milh es de c pias de DNA a partir de uma pequena quantidade de amostra Infelizmente isto tamb m verdade para o DNA contaminante que pode comprometer performance da nossa reac o Consequentemente pr ticas laboratoriais espec ficas podem evitar a presen a de amplifica es inespec ficas Em baixo encontram se descriminadas as recomenda es da Genebox Separe fisicamente as reas de pr PCR e de p s PCR O fluxo Laboratorial deve ser sempre unidireccional da rea pr PCR para a rea p s PCR Deve sempre utilizar se equipamentos espec ficos para cada area de trabalho prepara o de amostras pr amplifica o amplifica o e p s amplifica o Todos os equipamentos utilizados na rea de p s PCR n o devem sais desta zona Utilize micropipetas luvas e batas espec ficas para cada rea Utilize preferencialmente luvas sem talco uma vez que o talco pode inibir a reac o de PCR Utilize pontas de filtro de forma a minimizar contamina es cruzadas Verifique periodicamente as micropipetas de forma a assegurar a varia o de pipetagem inferior a 5 Utilize micropipetas adaptadas a cada volume de pipetagem Verifique periodicamente os termocicladores de forma a assegurar a varia o de temp
15. oro A amostra de sangue deve ser colhida para Tubos de colheita 2 10ml BD Vacutainer Blood EDTA ou Tubos de colheita Vacutainer BD Blood Serum vidro ou pl stico Alternativamente podem ser usados tubos de colheita com marca o CE de outras marcas N O UTILIZAR AMOSTRAS HEPARINIZADO COM ESTE M TODO B Zaragatoas A amostra deve ser colhida com uma zaragatoa Dacron de pl stico Alternativamente podem ser usadas zaragatoas de pl stico com marca o CE de outras marcas N o use zaragatoas de alum nio ou madeira Ap s a colheita as amostras podem ser transportados em meio de cultura 1 2 ml como nos seguintes exemplos STM AMPLI COR meio de transporte da amostra Roche Inc Kit para colheita de zaragatoas Digene Corporation M dio de PBS a 10 Home made Precau o Todas as amostras t m de ser tratadas como material potencialmente infeccioso NOTA Os Nossos Kits tamb m podem ser usado com amostras de fezes e urina desde que se utilize um kit de extrac o adequado 2 Armazenamento da Amostra A sensibilidade do teste pode ser reduzida com o processo repetitivo de congela o descongela o ou com longos per odos de armazenamento Protocolo de amplifica o por PCR 2 4 A Plasma e soro Se o plasma ou soro for testado dentro de 24 horas ap s a sua colheita as amostras podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amos
16. s falharam em diversos po os POSSI VEI S CAUSAS Concentra o da amostra de RNA baixa SUGEST ES Verifique a qualidade e concentra o do RNA Reextraia a amostra de RNA ou tente n o adicionar gua mistura de reac o Repita a reac o com um RNA de boa qualidade Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de RNA Repurifique a amostra de RNA Repita a reac o com um RNA de boa qualidade Concentra o de cDNA baixa Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de cDNA Repita a reac o de transcri o reversa Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Produtos de amplifica o secos Verifique a selagem das placas Repita a reac o utilizando um adaptador de silicone para placas de 96 e ou adicione leo mineral 13
17. tras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C B Zaragatoas Se a amostra for testada dentro de 24 horas ap s a sua colheita as zaragatoas podem ser armazenadas no frio 2 8 C Se o teste realizado dentro de uma semana ou por per odos mais longos as amostras devem ser armazenadas entre 15 30 C 3 Transporte de amostras A sensibilidade do teste pode ser comprometida se as amostras forem expostas a altas temperaturas por um longo per odo de tempo A Plasma e soro O sangue colhido deve ser armazenado a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportado em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24h B Zaragatoas A amostra colhida deve ser armazenada a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportada em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24h 1 Pureza e Concentra o do RNA Para obter bons resultados com o PRRS Qual PCR Box 1 0 recomenda se o uso de kits de extrac o de RNA e de transcri o reversa que apresentem marca o CE de modo a obter um RNA extra puro e uma transcri o reversa com bom rendimento e que garanta a qualidade do cDNA obtido 2 Tag Polimerase O PRRS
18. turas celulares infectadas com o vir s e outras amostras microbiol gicas obtendo amostras positivas e negativas A Genebox garante a qualidade e a fiabilidade do seu kit PRRS Box 1 0 Especificidade O kit PRRS Qual PCR Box 1 0 espec fico para a detec o do gene viral ORF7 de amostras biol gicas A sua especificidade foi comprovada com RNAs extra dos de culturas celulares infectadas com v rus da s ndrome respirat ria e reprodutora e outras amostras microbiol gicas obtendo amostras positivas e negativas A especificidade do kit PRRS Box 1 0 conferida por PRRS mix que apresenta 100 de homologia com as sequ ncias do v rus da s ndrome respirat ria e reprodutora registadas em bases de dados Sensibilidade A sensibilidade do kit PRRS Qual PCR Box 1 0 foi testada e a Genebox garante a detec o de n veis m nimos duma regi o do genoma do v rus designada ORF7 gene at 10x10 ng de cDNA Mistura de reac o PRRS 1 tubo PRRS mix 1 ml conservar de 15 a 302C Controlo Interno CI 1 tubo CI 100 uL conservar de 15 a 30 2C Controlo Positivo CP ltubo CP 50ul conservar de 15 a 30 2C Controlo negativo CN ltubo CN 50 l conservar de 15 a 302C Manual de instru es 1 Manual de Instru es Componentes da PCR Master Mix Nucle tidos concentra o final de cada dNTP 600 uM Tamp o da PCR concentra es finais s o 3 3x NH4 2 0 mM MgCl e 0 4 u ul Amplitaq DNA polimerase pH 8
19. var a rupturas no material e contamina o dos reagentes dos kits Os materiais pl sticos fornecidos neste kit s o resistentes gama de temperaturas de utiliza o e armazenamento recomendadas A sua utiliza o em gamas distintas de temperaturas pode causar rupturas impossibilitando a utiliza o normal do kit Verifique a concentra o e qualidade de todas as amostras de DNA antes de utilizar este kit Instru es de gerais de seguran a no laborat rio N o coma beba ou fume dentro do laborat rio Utilize sempre luvas descart veis e mude as com frequ ncia Utilize batas limpas e proteja os olhos sempre que se justifique Lave as m os antes e depois de qualquer manipula o de amostras ou reagentes Lave a rea de trabalho antes e depois de qualquer manipula o N o pipete com a boca 16 Protocolo de amplifica o por PCR 3 4 Extrac o de RNA A sensibilidade do teste pode ser reduzido se voc usar um m todo de isolamento de RNA ineficiente A detec o destes tipo de v rus requer amostras de RNA altamente puras e integras As quantidade e qualidade das amostras dependem do protocolo de isolamento de RNA usado Recomenda se a kits de isolamento seguintes tanto para plasma soro como para zaragatoas QlAamp RNesy Mini Kit from QIAGEN QlAamp RNA Viral Mini Kit from QIAGEN Alternativamente podem ser usados outros kits com a marca o CE para extrac o de RNA que garanta
Download Pdf Manuals
Related Search