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1. A repetibilidade foi calculada analisando os resultados da determina o de seis soros um negativo e cinco positivos com diferentes concentra es de IgG anti GBM executada individualmente em 14 sess es diferentes com um lote de reagentes A concentra o do soro anti GBM IgG negativo EBV N1 estava compreendida no intervalo de 0 5 a 2 2 UA mL Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os cinco soros positivos Concentra o Amostra m dia UA mL SD UA mL CV GBM P1 51 2 4 62 9 0 IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 11 de 11 ZENIT RA GBM REF 43735 GBM P2 205 0 15 06 7 3 GBM P3 296 3 28 84 9 7 GBM P4 91 6 7 16 7 8 GBM P5 222 8 18 68 8 4 Linearidade das Dilui es Para avaliar a linearidade das dilui es do del kit ZENIT RA GBM foram ensaiadas dilui es graduadas de 3 soros com elevada concentra o de IgG anti GBM executadas com o L quido de sistema Os resultados deste estudo est o resumidos na tabela seguinte Factor d Concentra o Concentra o Rec perac Amostra diluic o medida prevista o e e UA mL UA mL 1 100 1 2 3 33 9 28 0 121 1 De qualquer modo torna se necess rio sublinhar que nem todos os soros quando medidos em dilui es diferentes podem dar resultados n o lineares dentro do intervalo de medi o dependendo2. ZENIT RA GBM REF 43735 REF 43735 Distribu do por zENTT ZENIT RA GBM NY AMENARINI INSTRU ES nai PARRA Se NY Ce UTILIZA O as 50 APLICA O O teste ZENIT RA GBM um teste imunol gico por quimioluminesc ncia CLIA para a determina o quantitativa com instrumento espec fico analisador ZENIT RA dos anticorpos espec ficos da classe IgG dirigidos contra a Membrana Basal Glomerular Glomerular Basal Membrane ou GBM em amostras de soro ou de plasma humano EDTA Citrato de S dio Este ensaio empregue como aux lio de diagn stico para a avalia o da s ndroma de Goodpasture e para o diagn stico diferencial das vasculites ATEN O Qualquer decis o m dica n o poder basear se unicamente no resultado deste teste mas dever incluir o conjunto de todos os dados cl nicos e laboratoriais dispon veis SIGNIFICADO CL NICO Os anticorpos antimembrana basal glomerular anti GBM s o o marker serol gico de uma doen a auto imune rara caracterizada clinicamente pela presen a de uma glomerulonefrite de progress o r pida e histologicamente por uma glomerulonefrite necrotizante extra capilar com imunofluoresc ncia linear glomerulonefrite por anticorpos anti GBM Quando simultaneamente se apresenta um problema pulmonar alveolite hemorr gica toma o nome de s ndroma de Goodpasture GP E acertado o papel patogen tico dos anticorpos de facto o da
3. Evitar congelamentos e descongelamentos repetidos PROCEDIMENTO Para obter desempenhos anal ticos v lidos respeitar escrupulosamente as instru es do manual de opera o do instrumento Carregamento dos reagentes IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 6 de 6 ZENIT RA GBM REF 43735 Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar Antes de inserir o cartucho de reagentes no sistema o tubo das part culas magn ticas deve ser agitado por rota o horizontal de modo a facilitar a suspens o das part culas Executar a opera o evitando a forma o de espuma Colocar o cartucho de reagentes na rea dos reagentes do analisador utilizando as indica es para o efeito e deixar em agita o durante pelo menos 60 minutos antes de usar A coloca o do cartucho de reagentes determina simultaneamente a leitura do c digo de barras de identifica o Se o r tulo do cartucho estiver estragado ou que a leitura falte por qualquer outro motivo os dados de identifica o do cartucho de reagentes podem ser introduzidos manualmente O analisador mant m automaticamente as part culas magn ticas em agita o cont nua Se o cartucho de reagentes for retirado do analisador deve ser conservado na vertical e s escuras entre 2 e 8 C Carregamento dos calibradores Os calibradores ZENIT RA est o prontos a usar Deixar os calibradores temperatura ambiente durante 10 minuto
4. es dos calibradores s o indicadas em UA mL Unidades Arbitr rias e calibradas em rela o a um padr o de refer ncia interno Os valores das concentra es s o espec ficos para cada lote de produto e est o registados no DATA DISK inclu do no kit DATA DISK Mini DVD que cont m as informa es relativas a todos os produtos da Linha ZENIT RA Reagentes Calibradores Soros de controlo actualizados at ao ltimo lote de produ o excep o dos produtos expirados na data de realiza o de cada DATA DISK novo Basta conservar o DATA DISK com o n mero de lote mais elevado para manter actualizadas as informa es necess rias para o funcionamento correcto do sistema Materiais e reagentes necess rios mas n o fornecidos no kit ZENIT RA Analyzer C d n 41400 ZENIT RA Cuvette Cube C d n 41402 Embalagem de 960 cuvetes ZENIT RA System Liquid C d n 41409 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 10x ZENIT RA Wash Solution C d n 41407 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 20x ZENIT RA Trigger Set ii C d n 41403 1 frasco de 250 mL de Trigger A solu o de pr activa o 1 frasco de 250 mL de Trigger B solu o de pr activa o ZENIT RA D SORB Solution C d n 41436 Embalagem de 2 garrafas de 1 litro de solu o pronta a usar IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 4 de 4 ZENIT RA GBM REF 43735 ZENIT RA Cartridge
5. ltima fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas e a cuvete transferida para a c mara de leitura 7 A quantidade de conjugado aderido fase s lida expressa em RLU directamente proporcional concentra o de IgG anti GBM presente na amostra 8 Os resultados obtidos s o interpolados na curva de calibra o e expressos em concentra es As amostras com valores de concentra o mais elevados do limite superior do intervalo de medi o podem ser dilu das e testada novamente O novo valor obtido multiplicado pelo factor de dilui o utilizado para obter o resultado final CONTROLO DE QUALIDADE IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 8 de 8 ZENIT RA GBM REF 43735 Para assegurar a validade do ensaio devem ser testados soros de controlo com n veis diferentes de concentra o pelo menos um soro negativo e um soro positivo cada dia em que se executa o ensaio De acordo com as pr ticas de qualidade de cada laborat rio para a verifica o dos resultados do ensaio podem ser realizados mais controlos ou mais frequentemente Siga os procedimentos de qualidade locais Se forem utilizados os soros de controlo ZENIT RA os valores m dios esperados e os limites de aceitabilidade s o os indicados no DATA DISK dados tamb m presentes na embalagem dos controlos Se forem utilizados soros de controlo diferentes necess rio antes da sua utiliza
6. Checking System C d n 41401 ZENIT RA Top Cap Set C d n 41566 300 tampas externas para tapar os tubos dos calibradores ap s a primeira utiliza o O analisador ZENIT RA e os acess rios identificados pelo asterisco s o fabricados por Immunodiagnostic Systems S A Rue E Solvay 101 B 4000 Li ge B lgica e distribu dos por A Menarini Diagnostics Srl Outros Reagentes Aconselhados ZENIT RA ANCA GBM CONTROL SET C d n 41449 3 ampolas de 1 5 mL de soro humano negativo e 3 ampolas de 1 5 mL de soro humano positivo para anticorpos anti GBM ADVERT NCIAS E PRECAU ES Os reagentes fornecidos no kit ZENIT RA GBM s o exclusivamente para uso em diagn stico in vitro e n o para uso in vivo em pessoas ou animais Este produto deve ser usado por utilizadores profissionais respeitando rigorosamente as instru es deste documento A Menarini n o pode ser considerada respons vel por perdas ou danos provocados por uma utiliza o diferente da indicada nas instru es fornecidas Precau es de seguran a Este produto cont m material de origem animal e portanto deve ser manuseado como potenciais agentes infecciosos Este produto cont m componentes de origem humana Todas as unidades de soro ou plasma utilizadas para o fabrico dos componentes deste Kit foram analisadas com m todos aprovados pela FDA e resultaram n o reactivas para HBsAg anti HCV anti HIV1 e anti HIV2 Todavia como nenhum m
7. o definir os valores esperados com os reagentes e com o sistema ZENIT RA Se o valor dos controlos n o estiver dentro do intervalo de aceitabilidade especificado os respectivos resultados do ensaio s o inv lidos e essas amostras devem ser analisadas novamente Neste caso necess rio executar uma calibra o antes da repeti o do ensaio C LCULO E INTERPRETA O DOS RESULTADOS C lculo dos resultados A concentra o dos anticorpos IgG anti GBM presentes nas amostras testadas calculada automaticamente pelo sistema Os valores podem ser visualizados no ecr ou impressos As concentra es s o expressas em UA mL O c lculo da concentra o na amostra efectuado atrav s da leitura do resultado obtido para cada amostra numa curva de calibra o elaborada com um sistema de fitting log stico de quatro par metros 4PL Y ponderado corrigida periodicamente em fun o dos resultados obtidos para os calibradores Para mais informa es sobre o sistema de c lculo dos resultados consultar o manual de instru es do sistema Interpreta o dos resultados O intervalo de medi o do ensaio ZENIT RA GBM de 0 0 a 1000 UA mL Os valores inferiores a 0 0 UA mL s o valores extrapolados aparece a mensagem OMR e ou ORA e s o expressos com valor igual a 0 0 UA mL Os valores superiores a 1000 UA mL t m a mensagem OMR e ou ORA e podem ser novamente ensaiados ap s a devida dilui o
8. Os resultados das amostras podem ser interpretados do seguinte modo UA mL Interpreta o lt 40 A amostra deve ser considerada Negativa pela presen a de IgG anti GBM 240 A amostra deve ser considerada Positiva pela presen a de IgG anti GBM IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 9 de 9 ZENIT RA GBM REF 43735 Os valores acima mencionados devem ser considerados como valores indicativos Cada laborat rio deve estabelecer os seus pr prios intervalos de refer ncia LIMITES DO ENSAIO Para efeitos de diagn stico os resultados obtidos com o kit ZENIT RA GBM e o sistema ZENIT RA Analyzer devem ser utilizados em conjunto com os outros dados cl nicos e de laborat rio disposi o do m dico A contamina o bacteriana das amostras e a inactiva o por calor podem influenciar o resultado do ensaio Os anticorpos heterofilos presentes nas amostras de soro humano podem reagir com os reagentes base de imunoglobulinas provocando interfer ncias nos ensaios imunol gicos in vitro Estas amostras podem dar origem a valores anormais se analisados com o kit ZENIT RA GBM Em alguns casos as amostras de doentes com doen as cr nicas do f gado infec es cr nicas doen as do colag nio e mieloma com hipergamaglobulinemia concentra o de IgG superior a 1800 mg dL podem apresentar resultados positivos de IgG anti GBM VALORES PREVISTOS Foram analisadas as amostras de 100 dadores
9. ara al m do prazo de validade PREPARA O DOS REAGENTES Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Conservar os reagentes fornecidos no kit entre 2 e 8 C em posi o vertical e s escuras Nestas condi es o cartucho de reagente e os calibradores que n o tiverem sido abertos estar o est veis at ao fim do prazo de validade O cartucho de reagentes depois de aberto poder ser utilizado por 60 dias se conservado no frigor fico entre 2 e 8 C ou a bordo da m quina ou a bordo da m quina Os calibradores depois de abertos poder o ser utilizados por 60 dias se conservados no frigor fico entre 2 e 8 C e se a perman ncia a bordo da m quina n o ultrapassar as 6 horas por sess o N o congelar os reagentes e os calibradores PREPARA O E CONSERVA O DAS AMOSTRAS O ensaio deve ser executado em amostras de soro e de plasma humano EDTA Citrato de S dio Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas e turvas Se o ensaio for executado mais de 8 horas depois da colheita das amostras separar o soro do co gulo ou o plasma dos gl bulos vermelhos transferir o sobrenadante do tubo prim rio para um tubo secund rio seco Antes de serem analisadas as amostras podem ser conservadas no frigor fico entre 2 e 8 C no m ximo por 7 dias Se o ensaio for executado mais de 7 dias depois conservar as amostras congeladas lt 20 C
10. controlo Os valores de concentra o obtidos com os controlos permitem validar a nova calibra o Assim que a calibra o da master curve tiver sido aceite e memorizada todas as amostras seguintes poder o ser analisadas sem outra calibra o excepto nos seguintes casos quando estiver carregado a bordo do analisador um cartucho de reagentes com um lote novo quando os valores dos controlos n o estiverem dentro do intervalo de aceitabilidade quando for executada a opera o de manuten o do analisador quando tiver expirado a validade da master curve calibrada O prazo de validade da master curve calibrada para o kit ZENIT RA GBM de 21 dias A gest o da calibra o accionada automaticamente pelo analisador Ensaio Premir o bot o de in cio 1 O sistema aspira 80 uL de Diluente de amostras 40 uL de Part culas magn ticas 100 uL de Diluente de amostras e 10 uL de amostra ou de controlo para os calibradores o soro positivo fornecido j dilu do com o Diluente de amostras e o volume recolhido de 110 uL As solu es e as suspens es aspiradas s o distribu das na cuvete de reac o A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos Depois desta fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas S o distribu dos 200 uL de conjugado na cuvete A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 C durante 10 minutos DP OM Depois desta
11. dem ser inseridos manualmente No caso em que sejam utilizados os Controlos Zenit RA consultar as respectivas instru es Os valores da concentra o de anticorpos IgG anti GBM presente nos calibradores est o registados no DATA DISK e s o transferidos automaticamente para o analisador Seleccionar os par metros requeridos para cada controlo Carregamento das amostras Introduzir as amostras no analisador na respectiva rea para a sua identifica o no analisador consultar o manual de instru es do mesmo Em caso de falta do c digo de barras na amostra ou em caso de falha de leitura os dados de identifica o da amostra podem ser introduzidos manualmente IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 7 de 7 ZENIT RA GBM REF 43735 Seleccionar os par metros requeridos para cada amostra Calibra o O Analisador ZENIT RA utiliza uma curva de calibra o memorizada master curve criada pelo fabricante para cada lote de cartuchos de reagentes Os par metros das master curve juntamente com os valores das concentra es dos calibradores est o memorizados no DATA DISK e s o transferidos para a base de dados do analisador Os calibradores A e B s o utilizados para calibrar a master curve quer em fun o do analisador utilizado quer dos reagentes a bordo Para executar a calibra o analisar os dois calibradores A e B em triplicado e realizar uma r plica por cada
12. dies in sera with or without ANCA J Am Soc Nephrol 1997 8 376 85 IFU031ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 14 de 14 ZENIT RA GBM REF 43735 10 Levy JB Hammad T Coulthart A Dougan T Pusey CD Clinical feature and outcome of patients with both ANCA and anti GBM antibodies Kidney Int 2004 66 1535 40 TECHNOGENETICS S r l Viale Casiraghi 471 20099 Sesto San Giovanni MI It lia PORTUGAL Distribu do por A Menarini Diagn sticos Lda Quinta da Fonte Edif cio D Manuel 2 B 2770 203 Pa o de Arcos Tel 351 210 93 00 00 Fax 351 210 93 00 01 www menarinidiag pt IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 15 de 15
13. e A negatividade persistente para anti GBM uma condi o indispens vel para os pacientes a aguardar uma transplanta o renal para reduzir ao m nimo a possibilidade que a doen a se possa reapresentar no rg o transplantado Como tamb m as vasculites sist micas associadas a ANCA podem apresentar se com um quadro cl nico de GN rapidamente progressiva til executar simultaneamente pesquisa de anti GBM a pesquisa dos ANCA Tamb m til recordar que numa percentagem significativa de pacientes com anti GBM 10 a 38 est o tamb m presentes ANCA geralmente com especificidade para a mieloperoxidase ANCA MPO cujo significado cl nico n o claro Por vezes um quadro de GNRP pode ser secund rio de patologias sist micas do tecido conectivo ou de infec es No que respeita utilidade diagn stica do dado laboratorial til recordar que os valores preditivos positivo e negativo VPP VPN dependem para al m da sensibilidade e especificidade do teste da preval ncia da doen a na popula o averiguada Um pedido apropriado elevada probabilidade pr teste consente obter um resultado realmente clinicamente til e reduz significativamente a possibilidade de resultados falsos positivos PRINC PIO DO M TODO O kit ZENIT RA GBM para a determina o quantitativa das IgG espec ficas antimembrana basal glomerular utiliza um m todo imunol gico indirecto em dois passos baseado no princ pio da quimiolum
14. e Novembro de 2012 P gina TO de TO ZENIT RA GBM REF 43735 Na popula o presumivelmente positiva 30 amostras de pacientes afectados por s ndroma de Goodpasture GP e 2 amostras de pacientes afectados por glomerulonefrite de progress o r pida GNRP estudada todas as amostras deram resultados positivos Sensibilidade do diagn stico 100 intervalo de confian a a 95 86 7 a 99 7 32 32 amostras Com base nos resultados da especificidade e da sensibilidade do diagn stico o acordo diagn stico de 100 intervalo de confian a a 95 96 7 a 99 9 156 156 amostras DESEMPENHO Advert ncia os dados apresentados n o representam as especifica es de funcionamento do kit mas constituem a evid ncia experimental em como o kit funciona dentro dessas especifica es no modo previsto pelo fabricante Precis o e Reprodutibilidade A precis o foi calculada analisando os resultados quatro soros com 20 repeti es um negativo e tr s positivos com diferentes concentra es de anti Sm GBM executados com dois lotes de reagentes diferentes na mesma sess o experimental A concentra o do soro anti GBM IgG negativo N4 estava compreendidas no intervalo de 0 0 a 0 4 UA mL com o Lote de reagentes n 2 e 0 0 UA mL com o Lote de reagentes n 3 Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 3 soros positivos Amostra pres s m d URAD SD UA mL CV P1 P2 P3
15. g dL Bilirrubina conjugada 20 mg dL Hemoglobina 1000 mg dL Triglic ridos 3000 mg dL Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas ou turvas Especificidade anal tica Reac es cruzadas Para avaliar as potenciais reac es cruzadas do antig nio utilizado para sensibilizar as part culas magn ticas foi conduzido um estudo com 49 amostras todas com n veis altos de outros auto anticorpos e negativos para anti GBM IgG As amostras utilizadas estava assim divididas CCP e ou FR 15 Gliadina A e ou G e ou tTG A 4 positivos a ANCA 12 e ANA e ou ENA 18 O estudo n o demonstrou nenhuma reac o cruzada significativa do antig nio em fase s lida com os outros auto anticorpos Efeito de satura o em doses elevadas Alguns m todos imunol gicos empregues para a determina o de amostras que cont m o analito em concentra es extremamente elevadas podem fornecer n veis aparentes de analito que est o subestimados em rela o ao conte do real Efeito hook O m todo utilizado no kit ZENIT RA GBM sendo um m todo com duas incuba es n o sofre esse efeito Uma amostra com concentra o extremamente elevada acima do intervalo de medi o de IgG anti GBM confirmou a aus ncia de efeito hook at concentra o de 1552 UA mL Sensibilidade e Especificidade Relativas A presen a de anticorpos IgG anti GBM foi determinada utilizando o kit ZENIT RA GBM e um m todo de ensaio ELISA dis
16. ightstone Pusey CD Goodpasture s disease Lancet 2001 358 917 20 2 Lerner RA Glassock RJ Dixon FJ The role of anti glomerular basement membrane antibody in the pathogenesis of human glomerulonephritis J Exp Med 1967 126 989 1004 3 Hudson BG Tryggvason K Sundaramoorthy M Neilson EG Alports syndrome Goodpasture s syndrome and type IV collagen N Engl J Med 2003 348 2543 56 4 Levy JB Tumer AN Rees AJ Pusey CD Long term outcome of anti glomerular basement membrane antibody disease treated with plasma exchange and immunosuppression Ann Int Med 2001 134 1033 42 5 Wilson CB Dixon FJ Diagnosis of immunopathologic renal disease Kidney Int 1974 5 389 401 6 Sinico RA Radice A Corace C Sabadini E Anti glomerular basement membrane antibodies in the diagnosis of Goodpasture syndrome a comparison of different assays Nephrol Dial Transplant 2006 21 397 401 7 Mahler M Radice A Sinico RA Damoiseaux J Seaman A Buckmelter K et al Performance evaluation of a novel chemiluminescence assay for detection of anti GBM antibodies an International multicenter study Nephrol Dial Transplant 2012 27 1 243 52 8 Segelmark M Hellmark T Wieslander J The prognostic significance in Goodpasture s disease of specificity titre and affinity of anti glomerular basement membrane antibodies Nephron Clin Pract 2003 94 59 68 9 Hellmark T Niles JL Collins AB McCluskey RT Brunmark C Comparison of anti GBM antibo
17. inesc ncia O antig nio altamente purificado NC1a3 IV utilizado para revestir as part culas magn ticas fase s lida e um anticorpo anti lgG humanas marcado com um derivado do ster de acrid nio conjugado Durante a primeira incuba o os anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores ou nos controlos ligam se fase s lida Durante a segunda incuba o o conjugado reage com os anticorpos anti GBM capturados pela fase s lida IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 2 de 2 ZENIT RA GBM REF 43735 Depois de cada incuba o o material n o aderido fase s lida removido por aspira o e subsequente lavagem A quantidade de conjugado marcado que ficou aderido fase s lida avaliada atrav s da reac o de quimioluminesc ncia e da medi o do sinal luminoso O sinal gerado expresso em unidades relativas de luz RLU Relative Light Unit indicativo da concentra o de anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores e nos controlos AUTOMATIZA O O Analisador ZENIT RA executa automaticamente todas as opera es previstas pelo protocolo do ensaio adi o na cuvete de reac o as amostras calibradores controlos part culas magn ticas conjugado e solu es de activa o de quimioluminesc ncia separa o magn tica e lavagem das part culas medi o da luz emitida O sistema calcula os resultados do ensaio para a
18. no tecidual induzidos pela liga o dos anticorpos anti GBM membrana basal glomerular e alveolar O auto antig nio alvo foi identificado no dom nio extra colagen sico NC1 na cadeia a3 do colag nio de tipo IV presente exclusivamente nas membranas basais dos rins pulm es c clea e olhos A s ndroma de Goodpasture uma doen a muito grave que na falta de um tratamento adequado e r pido tem um desenvolvimento frequentemente fulminante Apesar dos progressos terap uticos a sobreviv ncia do paciente e do rg o em quest o ainda est ligada ao grau de insufici ncia renal quando essa se apresenta portanto essencial o diagn stico precoce para a sobreviv ncia do paciente e para a recupera o da fun o renal O diagn stico da doen a por anticorpos anti GBM ou GP baseia se na demonstra o atrav s de um m todo de imunofluoresc ncia directa em biopsia renal de dep sitos lineares de imunoglobulinas na membrana basal glomerular Todavia em muitas situa es a biopsia renal n o pode ser executada ou deve ser adiada portanto fundamental o diagn stico serol gico Os Anti GBM circulantes podem ser detectados por imunofluoresc ncia indirecta nos rins dos primatas o m todo caracteriza se por uma elevada especificidade IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 1 de 1 ZENIT RA GBM REF 43735 mas tem uma sensibilidade inadequada Actualmente encontram se di
19. o resultado n o s da concentra o mas tamb m da afinidade dos anticorpos presentes na amostra Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica do kit ZENIT RA GBM expressa como limite de detec o Limit of Detection LoD ou seja a menor quantidade de analisado que o m todo capaz de medir foi avaliada utilizando a f rmula para o c lculo LoD LoB Cg SD onde LoB representa o valor do Limit of Blank SD o desvio padr o previsto da distribui o da amostra em baixa concentra o e Cg derivado do 95 percentil da distribui o padr o gaussiana Foram utilizadas 5 amostras de baixa concentra o de analisado determinadas individualmente com um Lote de reagentes em 14 ensaios diferentes O Limite de detec o do kit ZENIT RA GBM foi igual a 13 5 UA mL Os valores do limite de detec o juntamente com as considera es de car cter cl nico e com os resultados de compara o com m todos de refer ncia contribu ram para a defini o do valor de cut off IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 12 de 12 ZENIT RA GBM REF 43735 Especificidade Anal tica Interfer ncias O desempenho do ensaio n o foi influenciado pela presen a na amostra de subst ncias potencialmente interferentes indicadas na tabela seguinte at concentra o ensaiada Subst ncias Potencialmente gui Concentra o m xima testada Interferentes Bilirrubina livre 20 m
20. pon vel no mercado em 156 amostras 30 amostras de pacientes afectados pela s ndroma de Goodpasture GP 2 amostras de pacientes afectados por glomerulonefrite de progress o r pida GNRP 95 amostras de afectados por patologias diferentes 18 conectivites sist micas 12 vasculites associadas a ANCA 15 artrites reumat ides 4 celiaquias 38 patologias infecciosas 8 patologias diversas 29 amostras de indiv duos normais 5 amostras deram origem a resultados divergentes entre o ensaio ZENIT RA e o m todo ELISA dispon vel no mercado IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 13 de 13 ZENIT RA GBM REF 43735 A concord ncia relativa foi assim igual a 96 8 intervalo de confian a a 95 92 3 a 98 8 151 156 amostras A sensibilidade relativa foi igual a 90 9 intervalo de confian a a 95 74 5 a 97 6 30 33 amostras A especificidade relativa foi igual a 98 4 intervalo de confian a a 95 93 7 a 98 7 121 123 amostras As tr s amostras com resultados negativos com o kit ZENIT RA GBM e positivos com o kit ELISA pertenciam 1 ao grupo das amostras com patologias infecciosas 1 ao grupo das amostras com patologias diversas e 1 ao grupo das amostras de indiv duos normais As duas amostras com resultados positivos com o kit ZENIT RA GBM e negativos com o kit ELISA pertenciam ambas ao grupo das amostras com a s ndroma de Goodpasture BIBLIOGRAFIA 1 Salama AD Levy JB L
21. s amostras e para os controlos atrav s da curva de calibra o memorizada e imprime um relat rio que inclui todas as informa es relativas ao ensaio e ao doente MATERIAIS E REAGENTES Materiais e reagentes fornecidos Part culas magn ticas revestidas com o antig nio altamente purificado NC1a3 IV em Tamp o Fosfato contendo prote nas estabilizantes um tensioactivo Pro Clin 300 e azida de s dio lt 0 1 como conservantes Anticorpo monoclonal de rato anti lgG humana marcado com um derivado do ster de acridina conjugado em tamp o fosfato com prote nas estabilizantes e azida de s dio lt 0 1 como conservante Solu o diluente de amostras Tamp o Fosfato contendo soroalbumina bovina tensioactivo corante azul e azida de s dio lt 0 1 como conservante IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 3 de 3 ZENIT RA GBM REF 43735 Soro humano com baixa concentra o de anticorpos anti GBM IgG em tamp o fosfato com soroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Soro humano com elevada concentra o de anticorpos anti GBM IgG em tamp o fosfato com soroalbumina bovina tensioactivo corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Todos os reagentes est o prontos a usar Os reagentes 1 2 e 3 s o embalados em conjunto constituindo um cartucho de reagentes As concentra
22. s e agitar delicadamente o conte do manualmente ou por v rtex evitando a forma o de espuma Se o calibradores estiverem a ser utilizados pela primeira vez eliminar o selo de garantia e a tampa branca de fecho antes da sua introdu o no analisador Se os calibradores j tiverem sido utilizados antes o recipiente ter a tampa superior tampa vermelha sem o selo de garantia Eliminar a tampa vermelha antes da introdu o no analisador Introduzir os calibradores no analisador na rea das amostras para a sua identifica o no analisador consultar o manual de instru es do analisador Os dados do c digo de barras devem ser inseridos manualmente se o r tulo estiver estragado ou se n o for poss vel efectuar a sua leitura Os valores da concentra o de anticorpos IgG anti GBM presente nos calibradores est o registados no DATA DISK e s o transferidos automaticamente para o analisador No final da sess o os recipientes dos calibradores devem ser tapados com as respectivas tampas superiores tampas vermelhas e conservados entre 2 e 8 C at sua pr xima utiliza o Os calibradores s podem ser utilizados ao m ximo quatro vezes Carregamento dos controlos Introduzir os controlos na rea das amostras do analisador Para a sua identifica o no analisador consultar o manual de instru es do mesmo Em caso de aus ncia do c digo de barras no controlo ou em caso de falta de leitura os seus dados de identifica o po
23. saud veis para verificar a presen a de anticorpos IgG anti GBM Todas as amostras analisadas deram resultados negativos com um valor m dio de 1 1 UA mL e um desvio padr o de 3 2 UA mL Com os resultados obtidos foi calculado o Limit of Blank LoB o valor mais elevado que podemos esperar numa s rie de amostras que n o contenham o analito O Limit of Blank determinado como 95 da percentagem de popula o negativa resultou igual a 6 3 UA mL com o Lote de reagentes n 2 SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE CL NICA Com o kit ZENIT RA GBM foi ensaiado um total de 156 amostras 30 das quais de pacientes que sofrem da s ndroma de Goodpasture GP 2 amostras de pacientes que sofrem de glomerulonefrite de progress o r pida GNRP 95 amostras de pacientes com patologias diferentes 18 conectivites sist micas 12 vasculites associadas a ANCA 15 artrites reumat ides 4 de celiaquia 38 patologias infecciosas 8 patologias diversas 29 amostras de indiv duos normais Na popula o presumivelmente negativa 18 conectivites sist micas 12 vasculites associadas a ANCA 15 artrites reumat ides 4 celiaquias 38 patologias infecciosas 8 patologias diversas e 29 amostras de indiv duos normais estudada nenhuma amostra deu resultado positivo Especificidade do diagn stico 100 intervalo de confian a a 95 96 3 a 99 9 em 124 amostras 124 deram resultados negativos TFUU3TZENIT RA Vers o 0T 27 d
24. sposi o m todos de determina o imunom tricos quantitativos e espec ficos para o antig nio baseados em m todos ELISA fluoroimunoenzim ticos e de quimioluminesc ncia que utilizam a GBM inteira solubilizada a cadeia a3 IV do colag nio e mais recentemente o antig nio de GP em forma recombinante humana A sensibilidade de diagn stico dos testes espec ficos do antig nio muito elevada situando se entre os 94 7 e os 100 enquanto a especificidade para os controlos patol gicos varia entre 90 9 e 100 Dados muito recentes confirmam que apesar dos ptimos desempenhos de diagn stico dos m todos em cerca de 5 dos pacientes afectados pela doen a de anticorpos anti GBM s ndroma de Goodpasture n o se detectam auto anticorpos circulantes Pelo seu importante significado cl nico e pelos valores elevados previstos a pesquisa de anticorpos anti GBM indicada no enquadramento diagn stico de pacientes com quadros cl nicos de insufici ncia renal de origem desconhecida com microemat ria de modo especial nos casos de progress o r pida A titula o dos anticorpos anti GBM circulantes tem utilidade progn stica Em presen a de uma s ndroma renal pulmonar os anticorpos anti GBM podem ser detectados em cerca de um ter o dos pacientes Os anticorpos anti GBM s o directamente respons veis pelo dano no rg o portanto o seu controlo considerado muito til para conduzir o tratamento em especial de plasmaf res
25. todo de an lise capaz de garantir a aus ncia de agentes patog nicos todo o material de origem humana deve ser considerado potencialmente infeccioso e manuseado como tal Se a embalagem estiver estragada com derramamento dos reagentes descontaminar a rea afectada com uma solu o dilu da de Hipoclorito de S dio utilizando dispositivos de protec o individual adequados bata luvas culos Eliminar o material utilizado e os res duos da embalagem afectada pelo derramamento de acordo com as normas nacionais para a elimina o de lixos potencialmente infecciosos Alguns reagentes cont m azida de s dio como conservante Como a azida de s dio pode reagir com o chumbo cobre e lat o revestido de chumbo formando azidas explosivas nos canos aconselha se a n o deitar reagentes ou res duos no esgoto mas respeitar as normas nacionais em mat ria de elimina o de lixos potencialmente perigosos IFUO31ZENIT RA Vers o 01 27 de Novembro de 2012 P gina 5 de 5 ZENIT RA GBM REF 43735 Precau es de utiliza o Para assegurar a obten o de resultados v lidos devem ser rigorosamente respeitadas estas instru es de utiliza o e as indica es do manual de opera o do instrumento Os reagentes fornecidos no kit devem ser utilizados exclusivamente com o sistema ZENIT RA Analyzer Os componentes do cartucho de reagentes n o podem ser retirados do cartucho e reagrupados novamente N o usar o kit p
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