ELISA IgM HEV - MP Biomedicals
Contents
1. 48 30 6 0 72 o 90 96 60 12 0 2 SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA A SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA deve ser preparada logo antes do uso b Dilua 1 volume de CONCENTRADO PARA LAVAGEM DE PLACAS com 19 volumes de gua destilada qualidade reagente Misture bem Para lavar uma placa s o necess rios aproximadamente 400 ml de solu o tamp o para lavagem de placas PROCEDIMENTO DO TESTE IMPORTANTE Os imunoensaios desta natureza s o sens veis temperatura e dependentes do tempo necess rio seguir risca os procedimentos do teste para garantir um desempenho perfeito Altera es em rela o ao procedimento recomendado podem acarretar resultados an malos 1 10 11 Remova a microplaca da bolsa de alum nio Agite os frascos de amostras e de controle antes do uso Preencha um recipiente de reagente com DILUENTE Usando um pipetador multicanal adicione 200 ul de DILUENTE em todos os po os Os po os A1 e B1 s o BRANCOS N O ADICIONE AMOSTRAS A ESTES PO OS Acrescente 10 ul adicionais de diluente a estes po os Acrescente 10 ul de amostra ao po o designado come ando pelo po o H1 Isto resultar em uma concentra o final da amostra de 1 21 N O COLOQUE AMOSTRA EM UM PO O VAZIO Ap s adicionar a amostra a ser analisada acrescente 10 ul po o de CONTROLE N O REATIVO a cada um dos po os C1 D1 amp E1 Adicione 10 ul de CONTROLE REATIVO por po o2. Descri o dos Componentes Quantidade Fornecida MICROPLACA HEV 1 placa Doze tiras de oito po os por placa 96 po os lacradas em bolsas de alum nio com dessecante Cada po o da microplaca cont m prote nas HEV recombinantes adsorvidas Conservar entre 2 C e 8 C CONTROL CONTROLE REATIVO 1 frasco Soro humano inativado contendo 160 ul t tulo elevado de anticorpos IgM espec ficos para HEV Cont m tiomersal e azida s dica como conservantes Conservar entre gt 2 C e 8 C CONTROLE REATIVO 1 frasco N Soro humano inativado contendo 80 ul t tulo elevado de anticorpos IgM espec ficos para HEV Cont m tiomersal e azida s dica como conservantes Conservar entre 2 C e 8 C DILUENTE 1 frasco Solu o salina com Tris contendo 100 ml soro caprino normal tratado por calor soro albumina bovina e estabilizantes Cont m Bronidox como conservante Conservar entre 2 C e 8 C WASH PLATE 20X CONCENTRADO 20X PARA 1 frasco LAVAGEM DE PLACAS 120 ml Solu o tamp o fosfato com Tween 20 Cont m cloroacetamida como conservante Conservar entre 2 C e 8 C CONJUGATEJiM T CONJUGADO 1 frasco Anticorpo monoclonal de 70 ul camundongo anti lgM humana marcado com peroxidase de r bano Cont m tiomersal a 0 02 como conservante Conservar entre 2 C e 8 C SUBS TMB SUBSTRATO 1 frasco Solu o tamp o contendo 12 5 ml 3 3 5 5 tetramethylbenzidine Conservar e
3. o anterior ao HEV provoca uma resposta por IgG 8 que pode ser transit ria e desaparecer em seis meses mas que pode por vezes durar at oito anos ou mais conforme evidenciado em um estudo recente em Taiwan 9 Ficou evidenciado que a resposta por IgM ocorre apenas durante a fase aguda da infec o pelo HEV Anteriormente a detec o da resposta aguda infec o por HEV era realizada pela observa o de part culas virais nas fezes de indiv duos infectados usando imunoeletromicroscopia ou por PCR 10 11 Este m todo exige equipamento caro e compet ncias t cnicas espec ficas Al m disso a emiss o de part culas virais ocorre geralmente em pequenas quantidades e seu teor pode ser insuficiente para a detec o O ELISA IgM HEV da MP Diagnostics utiliza ant genos recombinantes da regi o estrutural do genoma do HEV para detectar a presen a de anticorpos IgM associados infec o aguda DESCRI O DE S MBOLOS USADOS Os s mbolos gr ficos usados ou encontrados nos produtos e embalagens MP Diagnostics est o indicados a seguir Estes s o os s mbolos mais comuns em dispositivos m dicos e respectivas embalagens estes s mbolos s o explicados com mais detalhes no British and European Standard BS EN 980 2008 z Usar at Dispositivo Sin nimos m dico Data de validade para diagn stico in vitro C digo do lote E Sin nimos N mero de N mero do lote cat logo N mero da remessa Aten o N Ver In
4. a Diagnostics ELISA IgM HEV Ce DATA DE REVIS O 05 05 Observa o altera es MBL 0011 BRA O real adas 21160 096T kit de 96 testes NOME E APLICA O O TESTE ELISA IgM HEV DA MP Diagnostics MPD uma prova imunoenzim tica para a detec o de anticorpos IgM para o v rus da hepatite E HEV no soro ou plasma humanos INTRODU O As principais epidemias de hepatite n o A n o B de transmiss o ent rica HNANB TE ocorrem em regi es em desenvolvimento como Asia antiga Uni o Sovi tica Am rica Central e Africa 1 2 Tamb m foram assinalados casos espor dicos em pa ses desenvolvidos entre eles Austr lia Reino Unido e Estados Unidos 3 4 5 As ocorr ncias em pa ses desenvolvidos geralmente est o associadas a viagens a reas end micas A evolu o da doen a geralmente aguda com cura espont nea e sem desenvolvimento de sequelas cr nicas Observa se entretanto alta incid ncia de mortalidade em gestantes no terceiro trimestre de gravidez aproximadamente 10 a 20 1 e uma taxa de mortalidade de 1 a 2 na popula o em geral o que 10 vezes superior da hepatite A VHA Gra as clonagem do agente etiol gico da NANBH TE e identifica o de ep topos comuns ao tipo viral 6 7 foram desenvolvidas ferramentas de diagn stico espec ficas para detectar anticorpos contra o v rus da hepatite E HEV Estudos em crian as eg pcias de Benha em 1986 revelaram que a exposi
5. Epidemiology and clinical characteristis pp 131 137 In A J Zuckerman ed Viral Hepatitis and Liver Disease Alan R Liss Inc New York 3 Moaven I D A J Fuller J C Doultree J A Marshall D S Bowden R A Moeckli and S A Locarnini 1993 A case of acute hepatitis E in Victoria Medical Journal of Australia 159 124 125 4 Skidmore S J PO Yarbough K A Gabor A W Tam G R Reyes A J E Flower 1991 Imported hepatitis E in UK The Lancet 337 1541 5 Dawson G J I K Mushahwar K H Chau G Gittnick 1992 Detection of long lasting antibody to hepatitis E virus in a US traveller to Pakistan The Lancet 340 426 6 Reyes G R M A Purdy J P Kim K C Luk I M Young K E Fry and D Bradley 1990 Isolation of a cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non A non B hepatitis Science 247 1335 7 Yarbough P O A W Tam K E Fry K Krawczynski K A McCaustland D W Bradley and G R Reyes 1991 Hepatitis E virus Identification of type common epitopes Journal of Virology 65 5790 8 Goldsmith R P O Yarbough K E Fry K A Gabor M Kamel S Zakaria S Amer Y Gaffar 1992 Enzyme linked immunosorbent assay for diagnosis of acute sporadic hepatitis E in Egyptian children The Lancet 339 328 331 9 Lee S D Y J Wang R H Lu C Y Chan K J Lo R A Moeckli 1993 Seroprevalence of Antibody to Hepatitis E Virus among Chinese Subjects in Taiwan Hepatology Vol 19
6. No 4 1994 10 Balayan M S 1991 HEV Infection Historical Perspectives Global Epidemiology and Clinical Features In F B Hollinger S M Lemon and H Margolis editor Viral Hepatitis and Liver Disease Williams amp Wilkins Baltimore 11 Uchida T etal 1991 Virulence of Hepatitis E virus with Serial Passage to Cynomolgus Monkeys and Identification of Viremia In F B Hollinger S M Lemon and H Margolis editor Viral Hepatitis and Liver Disease Williams amp Wilkins Baltimore 12 Edward T Clayson Khin Saw Aye Myint Rapin Snitban David W Vaughn Bruce I Innis Lily Chan Peter Cheung Mrigendra P Shrestha Viremia Fecal Shedding and IgM and IgG Responses in Patients with Hepatitis E Journal of Infectious Diseases 1995 172 927 33 MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive H04 01 The Cavendish Singapore Science Park Cingapura 118259 Tel N 65 6775 0008 Fax N 65 6775 4536 E mail enquiry ap Ompbio com Medical Technology Promedt EC REP Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel N 49 68 94 58 1020 Fax N 49 68 94 58 1021 E mail info mt procons com Escrit rios Regionais MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Genebra 5 Su a Tel N 4122 788 1908 Fax N 4122 788 1986 E mail mpbiosuisse mpbio com Patente EUA 5 741 490 5 770 689 5 885 768 5 686 239
7. Patente Cingapura 39445 49225 Austr lia 644878 Taiwan 63167 Cor ia do Sul 178399 180530 Outras patentes pendentes O nome e o logotipo Genelabs s o licenciados da Genelabs Technologies Inc
8. N o Reativas pelo ELISA IgM HEV MPD 2 Amostras com valores de absorb ncia iguais ou superiores ao valor LIMITE s o consideradas inicialmente reativas pelos crit rios do ELISA IgM HEV MPD e devem ser novamente analisadas em duplicata antes da interpreta o 3 Amostras reativas na segunda an lise devem ser interpretadas como repetidamente reativas para anticorpos IgM para HEV pelos crit rios do ELISA IgM HEV MPD 4 Amostras inicialmente reativas e que se comportam como N o Reativas quando analisadas pela segunda vez s o consideradas negativas pelos crit rios do ELISA IgM HEV MPD CARACTER STICAS ESPEC FICAS DE DESEMPENHO Especificidade e Sensibilidade A detec o de viremia em amostras de sangue ou de fezes durante a fase inicial da infec o tem sido usada para revelar a presen a de hepatite E Contudo a detec o de viremia s poder ter sucesso se as amostras fecais ou de soro forem coletadas com anteced ncia suficiente de prefer ncia durante os 14 primeiros dias ap s o aparecimento dos sintomas 12 Tendo como fundamento a detec o de viremia a sensibilidade do ELISA IgM HEV MPD foi determinada com base na capacidade de detectar o n mero de positivos neste conjunto bem caracterizado de soros Foram coletadas 152 amostras dentro do per odo de 14 dias e 141 delas foram reativas pelo ELISA IgM HEV MPD o que representa uma sensibilidade de 93 A soropositividade em indiv duos sadios de popu
9. a 56 C durante 30 minutos em banho maria 3 Deixe O soro esfriar antes de apertar novamente as tampas 4 O soro pode ser mantido congelado at a an lise Recomendamos que os soros dos pacientes n o sejam submetidos a v rios ciclos de congelamento e descongelamento MATERIAL ADICIONAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO Papel absorvente para forrar bancadas e toalhas de papel Tubos ou recipientes de polipropileno Pipetas graduadas 5 ml 10 ml Pipetador multicanal capaz de distribuir 50 ul 100 ul e 200 ql Pipetador capaz de distribuir 1 1000 ul Ponteiras de pipetas descart veis 7 Recipientes cubas de reagentes com capacidade para 25 ml 8 gua deionizada ou destilada qualidade reagente 9 Frascos 500 ml 1 litro 10 Uma incubadora a 37 C 11 Um leitor de microplacas de comprimento de onda duplo A so As gt 0 OU simples A350 12 Solu o de hipoclorito de s dio 5 ou gua sanit ria para uso dom stico BON D 91 PREPARA O DOS REAGENTES 1 CONJUGADO DE TRABALHO a O CONJUGADO DE TRABALHO deve ser preparado logo antes do uso b Para preparar o conjugado dilu do fa a uma dilui o a 1 200 do conjugado com o diluente fornecido no kit c Use exclusivamente recipientes ou tubos de polipropileno d Consulte o protocolo para prepara o de conjugado de trabalho PROTOCOLO DE PREPARA O DE CONJUGADO N mero de testes Vol de Conjugado ul Vol de Diluente ml
10. aos po os F1 e G1 Misture bem batendo levemente em todos os lados da microplaca tendo o cuidado de manter a placa plana sobre a bancada Para evitar evapora o durante a incuba o cubra cuidadosamente a microplaca com uma tampa de placa fornecida Incube durante 30 minutos a 37 C n o utilize banho maria a 37 C para a incuba o Antes de lavar a microplaca prepare o CONJUGADO DE TRABALHO conforme descrito em PREPARA O DE REAGENTES Remova e descarte a tampa da placa lave ent o a microplaca com SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA usando um dos dois m todos recomendados A Lavadora Autom tica ou Semi Autom tica de Microplacas Lave seis 6 vezes com pelo menos 300 ul por po o e por lavagem 200 ul 10 ul 10 ul 10 ul 10 ul 30 minutos 300 ul por po o x 6 12 18 14 15 16 17 18 19 20 B Lavadora Manual de Microplacas Aspire completamente o conte do de todos os po os levando suavemente a ponta do aspirador at o fundo de cada po o CUIDADO PARA N O ARRANHAR A SUPERF CIE INTERNA DO PO O Preencha toda a placa com pelo menos 300 ul po o e depois aspire imediatamente na mesma ordem Execute este ciclo seis 6 vezes Seque completamente invertendo a microplaca sobre papel absorvente e dando batidas firmes na placa Toda a solu o tamp o de lavagem residual da placa deve ser completamente eliminada Se houver res duos de solu o
11. bolsas de alum nio at imediatamente antes do uso As tiras abertas n o usadas devem ser conservadas entre 2 C e 8 C em suas bolsas de armazenamento com o dessecante fornecido Em cada processamento de amostras de pacientes deve se testar os controles do kit em paralelo Deve tomar se o cuidado de n o tocar ou respingar a borda do po o com conjugado N o sopre na micropipeta Recomenda se usar pipetagem reversa sempre que poss vel A utiliza o de amostras muito hemolisadas soros com coagula o incompleta amostras de plasma que contenham fibrina ou amostras com contamina o microbiana pode fornecer resultados err neos N O USE BANHO MARIA PARA INCUBAR AS PLACAS N o use incubadoras de CO Durante a incuba o a 37 C deve se evitar a evapora o Cubra as placas com as tampas adesivas fornecidas Evite abrir e fechar repetidamente a porta da incubadora durante as etapas de incuba o N o mantenha a solu o de interrup o em recipiente raso nem a retorne ao frasco ap s o uso Verifique se o fundo da placa est limpo e seco e se n o h bolhas na superf cie do l quido antes de iniciar a leitura da placa Remova todas as bolhas da placa e g por pancadas leves Se usar equipamento autom tico confira se est aferido antes do uso altamente recomend vel fazer a manuten o de rotina do sistema de aspira o e lavagem para evitar contamina o por passagem de amostras muito reativ
12. com volumes relativamente grandes de gua de forma a evitar a forma o de azida met lica no sistema de canaliza o 1 Evite a contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais 2 N o pipete com a boca 3 Manuseie as amostras as microplacas os controles reativos e os controles n o reativos como agentes potencialmente infecciosos 4 Use vestu rio de laborat rio e luvas descart veis durante a realiza o do teste Descarte as luvas em sacos pl sticos para descarte de lixo biol gico perigoso A seguir lave bem as m os 5 altamente recomend vel que este teste seja realizado em uma c mara adequada para material biol gico perigoso 6 Mantenha todo o material longe de alimentos e bebidas 7 Em caso de acidente ou contato com os olhos lave imediatamente com gua em abund ncia e procure ajuda m dica 8 Consulte imediatamente um m dico caso sejam ingeridos materiais contaminados ou haja contato destes com feridas abertas ou outras solu es de continuidade da pele 9 Nunca adicione gua Solu o de Interrup o 10 11 12 Limpe imediatamente derramamentos de materiais infecciosos com papel absorvente e esfregue imediatamente a rea contaminada com solu o de hipoclorito de s dio a 1 antes de continuar o trabalho O hipoclorito de s dio n o deve ser usado em derramamentos que contenham cidos a menos que a rea seja primeiro enxu
13. e fornece resultados err neos Use t cnicas ass pticas entre elas pipetas ou ponteiras de pipetas descart veis para retirar al quotas dos frascos Para evitar a contamina o cruzada use uma ponteira de pipeta nova para cada amostra aliquotada n o toque no topo ou no fundo das tiras na borda dos po os ou no l quido dos po os com os dedos ou com as ponteiras das pipetas Recomenda se que a vidraria a ser usada com os reagentes seja lavada com cido clor drico 2M e enxaguada abundantemente com gua destilada ou deionizada antes do uso Para obter os melhores resultados deixe que todos os reagentes e amostras atinjam a temperatura ambiente 25 C 3 C antes do uso Imediatamente ap s o uso volte a armazenar entre 2 C e 8 C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 28 Use somente gua de qualidade reagente deionizada ou destilada para diluir os reagentes Todos os reagentes devem ser bem misturados antes do Uso A solu o de Conjugado de Trabalho e a Solu o Tamp o de Lavagem Dilu da devem ser preparadas logo antes do uso N o exponha os reagentes nem realize testes em reas que cont m altos n veis de vapores de desinfetantes qu micos e g vapores de hipoclorito durante as etapas de armazenamento ou de incuba o O contato inibe a rea o colorida Da mesma forma n o exponha os reagentes luz intensa N o retire as microplacas das
14. tamp o de lavagem na placa poder ocorrer inibi o de desenvolvimento de cor durante a incuba o do substrato Preencha um recipiente de reagente com CONJUGADO DE TRABALHO Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de CONJUGADO DE TRABALHO a cada po o Coloque outra tampa de placa Incube a microplaca durante 30 minutos a 37 C n o utilize banho maria a 37 C para a incuba o Remova e descarte a tampa da placa Repita o procedimento de lavagem como nas etapas 11 e 12 Preencha um recipiente de reagente com SOLU O DE SUBSTRATO Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de SOLU O DE SUBSTRATO a cada po o Coloque uma tampa de placa Incube durante 15 minutos em local escuro e temperatura ambiente 25 3 C Remova e descarte a tampa da placa Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de SOLU O DE INTERRUP O a cada po o Misture suavemente batendo na placa Determine a absorb ncia de cada po o a 450 nm Caso seja usado um instrumento de filtro duplo o comprimento de onda de refer ncia deve ser de 620 nm 100 ul 30 minutos 300 ul por po o x6 100 ul 15 minutos 100 ul NOTA A absorb ncia deve ser lida no prazo de 10 minutos ap s a adi o da SOLU O DE INTERRUP O CONTROLE DE QUALIDADE 1 Em todas as placas de todos os processamentos de amostras deve se testar o BRANCO e o CONTROLE REATIVO em duplicata eo CONTROLE N O REATIVO em
15. X Os valores de Controle N o Reativo devem ser inferiores ou iguais a 0 100 unidades Caso algum valor do Controle N o Reativo n o satisfa a qualquer um dos crit rios anteriores deve ser exclu do como anormal A m dia do Controle N o Reativo RCX deve ser ent o recalculada usando se os valores restantes de Controle N o Reativo Todos os restantes valores de Controle N o Reativo devem satisfazer os crit rios anteriores ou o teste ser considerado inv lido e dever ser repetido 2 C lculo da Absorb ncia M dia do Controle Reativo RCX Exemplo Po o N Absorb ncia F1 0 758 G1 0 732 Total 1 490 M dia 1 490 2 0 745 RCX Os valores de Controle Reativo devem ser mas maiores ou iguais a 0 500 unidades Caso um valor do Controle N o Reativo n o satisfa a ambos os crit rios anteriores o teste inv lido e deve ser repetido 3 C lculo da diferen a entre RCX e NRCX Exemplo NRCx 0 010 RCX 0 745 RCx NRCx 0 745 0 010 0 735 Para que o teste seja v lido o valor de RCx NRCxdeve ser igual ou superior a 0 400 Caso contr rio deve se suspeitar que a t cnica tenha sido incorreta ou que houve deteriora o de reagentes e o teste dever ser repetido 4 C lculo do valor LIMITE Valor LIMITE 0 400 NRCx Exemplo NRCx 0 010 Valor LIMITE 0 400 0 010 0 410 INTERPRETA O DOS RESULTADOS 1 Amostras com valores de absorb ncia inferiores ao valor LIMITE s o consideradas
16. agn stico in vitro dentro das especifica es e limita es descritas no Manual de Instru es do produto quando usado em conformidade com as instru es nele contidas O fabricante isenta se de qualquer responsabilidade expressa ou impl cita incluindo as garantias expressas ou impl citas em rela o capacidade de comercializa o de utiliza o ou utilidade impl cita para quaisquer outros fins A responsabilidade do fabricante limita se substitui o do produto ou ao reembolso do pre o de compra do produto O fabricante n o ser considerado respons vel pelo comprador ou por terceiros por quaisquer danos preju zos ou perdas de car ter econ mico causados pelo uso ou aplica o do produto O fabricante n o faz nenhuma declara o expressa ou impl cita que este produto n o infringir os direitos de propriedade intelectual de terceiros PROBLEMAS T CNICOS E QUEIXAS Caso haja algum problema t cnico ou queixa solicitamos proceder da seguinte forma 1 Anote o n mero de lote do kit e a data de validade 2 Conserve o kite os resultados obtidos 3 ontate o escrit rio MP Biomedicals mais pr ximo ou o seu distribuidor local REFER NCIAS 1 Bradley D W 1990 Enterically transmitted non A non B hepatitis pp 442 461 In A J Zuckerman ed British Medical Bulletin 46 2 Churchill Livingstone New York 2 Purcell R H and J R Ticehurst 1988 Enterically transmitted non A non B hepatitis
17. as para amostras n o reativas INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO 1 Conserve o kit ELISA IgM HEV MPD e seus componentes entre 2 C e 8 C quando n o estiver sendo usado 2 Todos os reagentes e microplacas do teste permanecem est veis at a data de validade fornecida no kit se conservados entre 2 C e 8 C N o congele os reagentes 3 Quando o Concentrado 20x para lavagem de placas 20x mantido entre 2 C e 8 C pode ocorrer forma o de cristais Estes dever o ser dissolvidos por aquecimento a 37 C antes do uso 4 Pode ocorrer forma o de precipitado quando o Diluente conservado entre 2 C e 8 C Isto n o afetar o desempenho do kit 5 As tiras de microplacas abertas e n o usadas devem ser mantidas em bolsa fechada com o dessecante fornecido entre 2 C e 8 C COLETA TRANSPORTE E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS As amostras devem ser conservadas entre 2 C e 8 C se o teste for realizado dentro de sete dias ap s a coleta ou congelados a 20 C se for previsto que o teste ser realizado em mais de sete dias ap s coleta As amostras l mpidas n o hemolisadas s o prefer veis Amostras lip micas ict ricas ou contaminadas part culas devem ser filtradas 0 45um ou centrifugadas antes do teste Os soros dos pacientes podem ser inativados mas esta n o uma exig ncia para o perfeito desempenho do teste Inative da seguinte forma 1 Afrouxe as tampas dos recipientes de soro 2 Aque a o soro
18. gada com papel absorvente O material usado tamb m as luvas descart veis deve ser descartado como material biol gico potencialmente perigoso N o esterilize em autoclave material que contenha hipoclorito de s dio Antes do descarte esterilize em autoclave todo o material usado e contaminado a 121 C 15 psi durante 30 minutos Alternativamente descontamine o material em solu o de hipoclorito de s dio a 5 durante 30 60 minutos antes de descartar em sacos para lixo biol gico perigoso Descontamine todos os produtos qu micos e reagentes usados adicionando um volume suficiente de hipoclorito de s dio de forma a obter uma concentra o final de pelo menos 1 Deixe agir durante 30 minutos para garantir uma descontamina o eficiente PRECAU ES ANAL TICAS 1 Para garantir um desempenho perfeito do teste necess rio SEGUIR RISCA os procedimentos descritos neste Manual de Instru es A inobserv ncia destes procedimentos pode acarretar resultados an malos N O MODIFIQUE NEM SUBSTITUA REAGENTES DE UM LOTE DO KIT POR OUTRO Os controles o conjugado e as microplacas s o combinados entre si para oferecer um desempenho perfeito Use somente reagentes fornecidos com o kit N o use componentes do kit ap s a data de validade impressa na caixa do kit Evite a contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais A contamina o reduz prematuramente a vida til dos kits
19. la es de baixo risco tende a ser bastante baixa aproximadamente lt 1 ao passo que a soropositividade em indiv duos saud veis dentro de reas end micas tende a ser um pouco mais elevada A soropositividade indica uma exposi o recente ao v rus da hepatite E LIMITA O DO METODO Resultados repetidamente reativos do ELISA IgM HEV MPD constituem indica es da presen a de anticorpos IgM para HEV na amostra Um resultado N O REATIVO do ELISA IgM HEV MPD indica prov vel aus ncia de IgM detect veis para HEV na amostra Um resultado NEGATIVO n o exclui a possibilidade de exposi o a ou de infec o pelo HEV Pode se suspeitar de resultados falsos reativos com um kit para testes desta natureza A propor o de falsos reativos depender da sensibilidade e da especificidade do kit de teste Para a maioria dos testes para diagn stico quanto mais elevada a preval ncia de anticorpos na popula o menor ser a propor o de amostras falsas reativas Estudos realizados internamente mostraram que a presen a do fator reumat ide FR ou t tulos elevados de IgG n o afetam o desempenho do ELISA IgM HEV MPD O uso de m todos para remo o de IgG e g RFRR que exigem dilui o da amostra pode afetar a sensibilidade do ELISA IgM HEV MPD ISEN O DE RESPONSABILIDADE EXPL CITA E LIMITADA O fabricante n o oferece nenhuma outra garantia expressa sen o a de que o kit de teste funcionar como um ensaio de di
20. m local escuro entre 2 C e 8 C soin stroho SOLU O DE INTERRUP O 1 frasco AN Solu o de cido cloridrico 1N 30 ml Conservar em local escuro entre 2 C e 8 C TAMPAS DAS PLACAS 4 unidades Tampas adesivas para uso durante a incuba o das microplacas MANUAL DE INSTRU ES 1 c pia Bronidox marca registrada da Henkel Chemical Co AVISOS E PRECAU ES h Para uso exclusivo em diagn stico in vitro 2 Exclusivamente para uso profissional 3 Solicitamos consultar a documenta o dos produtos para informa es sobre componentes potencialmente perigosos INFORMA ES DE SAUDE E SEGURAN A CUIDADO Este kit cont m material de origem AN humana Nenhum m todo de teste pode oferecer garantia total que os produtos de sangue humano n o transmitam infec es MANUSEIE AS AMOSTRAS E OS CONTROLES REATIVOS E N O REATIVOS COMO AGENTES POTENCIALMENTE INFECCIOSOS Recomenda se que os componentes e as amostras do teste sejam manuseados de acordo com as boas pr ticas de laborat rio O descarte dever ser realizado de acordo com os procedimentos de seguran a vigentes O Controle Reativo e o Controle N o Reativo cont m tiomersal e azida s dica A azida s dica pode reagir com o cobre e o chumbo usados em alguns sistemas de canaliza o formando sais explosivos Embora as quantidades usadas neste kit sejam pequenas o descarte de materiais contendo azida deve ser feito por lavagem
21. stru es Limites de temperatura de Uso rm Representante Fabricante Autorizado na EC REP Comunidade Europ ia Cont m o suficiente para lt n gt testes Consulte as instru es de uso N o reutilize Y naal Y PRINC PIOS QU MICOS E BIOL GICOS DO PROCEDIMENTO Os po os das tiras de poliestireno da microplaca s o revestidos com tr s ant genos recombinantes do HEV que correspondem s regi es estruturais do v rus da hepatite E As amostras de soro ou plasma humano dilu das na solu o tamp o de dilui o s o incubadas nesses po os revestidos Os anticorpos anti HEV caso presentes unem se aos ant genos HEV da fase s lida Ap s cuidadosa lavagem dos po os para retirar o material n o ligado adiciona se anticorpo monoclonal de camundongo anti lgM humana marcado com peroxidase do r bano Este anticorpo marcado liga se a todos os complexos ant geno anticorpo anteriormente formados e o excesso de anticorpos marcados n o ligados removido por lavagem Uma solu o de substrato contendo 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB ent o adicionada a cada po o A presen a de anticorpos espec ficos indicada pelo desenvolvimento de colora o azul ap s a adi o do substrato A rea o interrompida pela adi o de cido cloridrico A intensidade da cor medida em espectrofot metro a 450 nm e proporcional a quantidade de anticorpos presentes na amostra COMPONENTES DO KIT
22. triplicata 2 Os valores de absorb ncia do Branco devem ser lt 0 100 3 Os valores de absorb ncia do Controle N o Reativo devem ser lt 0 100 depois de subtra do o Branco 4 Cada um dos 2 valores do Controle Reativo deve ser gt 0 500 depois de subtra do o branco 5 Para que o teste seja v lido a diferen a entre as absorb ncias m dias do Controle Reativo e do Controle N o Reativo RCx NRCx deve ser igual ou maior que 0 400 Caso contr rio a t cnica pode ser colocada sob suspeita e o teste dever ser repetido Caso a RCX NRCX seja sempre baixa pode ter ocorrido deteriora o dos reagentes RESULTADOS Cada microplaca deve ser considerada em separado para o c lculo e a interpreta o dos resultados do teste independentemente do n mero de placas processadas OS VALORES M DIOS DE ABSORB NCIA DO BRANCO DEVEM SER SUBTRA DOS DOS VALORES DE ABSORB NCIA DOS CONTROLES E DAS AMOSTRAS ANTES DA INTERPRETA O DOS RESULTADOS A presen a ou aus ncia de anticorpos IgM espec ficos para HEV determinada comparando a absorb ncia das amostras com o VALOR LIMITE da placa O VALOR LIMITE para o ELISA IgM HEV MPD calculado como sendo 0 400 a absorb ncia m dia do Controle N o Reativo C LCULO DOS RESULTADOS 1 C lculo da Absorb ncia M dia do Controle N o Reativo NRCx Exemplo Po o N Absorb ncia C1 0 010 D1 0 012 E1 0 008 Total 0 030 M dia 0 030 3 0 010 NRC
Download Pdf Manuals
Related Search