BIOLOGIA CELULAR – P 1 IMPORTÂNCIA DA
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1. Sua finalidade recolher a imagem aumentada vertical a direta Como a imagem que a objetiva fornece invertida a imagem final do microsc pio ser tamb m invertida As oculares s o formadas por duas lentes a superior lente ocular e a inferior lente de campo ou col tica Outros elementos s o importantes constituintes da parte ptica de um microsc pio dentre eles pode se citar c d e f Fonte Luminosa pode ser distante como a luz solar ou pr xima como a luz de uma l mpada Os microsc pios modernos mais aperfei oados possuem uma l mpada embutida Diafragma ris quando for conveniente pode se limitar parte dos raios perif ricos que chegam ao objeto Para tanto o microsc pio disp e de um diafragma iris que permite diminuir a abertura de entrada do feixe luminoso Condensador poss vel tamb m aumentar a quantidade de luz que atravessa o objeto tanto no caso da luz ser fraca como no caso em que o aumento da objetiva exige raios mais intensos Neste caso usa se um dispositivo auxiliar o condensador que condensa os raios luminosos Filtros os filtros s o discos de vidro coloridos ou recobertos com gelatina colorida que absorvem uma parte das radia es luminosas que atingem o objeto permitindo utilizar faixas estreitas de comprimento de onda proporcional para uma dada objetiva ao comprimento de onda da luz empregada O uso dos filtros pode favorecer grandemente a absor o aumentan2. e platina abaixada c Limpe a objetiva de imers o com lcool ter d Caso tenha molhado a platina enxugue a muito bem e N o se esque a de cobrir o microsc pio Nota N o arraste nem empurre o microsc pio Ele est disposto sobre a bancada de maneira adequada observa o 14 Quando desejar retirar a l mina do microsc pio girar o rev lver de modo a deixar a objetiva panor mica em posi o de observa o Abaixar a platina girando o parafuso macrom trico Remover a l mina com cuidado para que os dedos n o toquem as lentes das objetivas e para que a l mina n o toque nas mesmas 15 Ao terminar a N o esque a a l mina no Charriot b Desligar a luz e retirar o fio da tomada c Colocar a capa no microsc pio d Limpar a mesa 3 3 B PODER E LIMITE DE RESOLU O Poder de Resolu o de um sistema ptico refere se sua capacidade de formar imagens distintas separadas de dois pontos situados muito pr ximos um do outro no objeto observado Depende essencialmente da objetiva ou seja de sua abertura num rica AN e do comprimento de onda de luz utilizada Quanto maior for a abertura num rica e menor for o comprimento de onda de luz utilizada maior o poder de resolu o da objetiva A abertura num rica depende do ndice de refra o do material colocado diante da objetiva e dada pela seguinte f rmula matem tica n ndice de refra o do meio de montagem sen de a fornecido pe
3. primeira combina o de lentes fosse de 20x Justifique 4 Como se calcula o aumento final de um material observado ao microsc pio 5 Descreva o trajeto da luz do microsc pio nomeando pela ordem os objetos parte ptica que se encontram nesse trajeto durante a observa o microsc pica 6 Cite a parte do microsc pio respons vel pelo emba amento ou falta de nitidez da imagem e quando isto ocorrer como deve se proceder adequada corre o desse problema 7 Fa a um esquema mostrando o significado do que est escrito na armadura das objetivas
4. 1 fig Bio23TuatO1 011a html In cio da Observa o a b Verifique se o microsc pio est em perfeitas condi es de uso com rela o luz objetivas oculares etc Caso as oculares estejam empoeiradas ou com impress es digitais nas lentes remova as delicadamente com um pano macio ou com um len o de papel Limpe a platina com um peda o de papel higi nico caso ela esteja molhada ou empoeirada Para Colocar a Objetiva de Imers o a b c d Enfocar a prepara o nitidamente seguindo a escala de magnitude das objetivas em ordem crescente sentido hor rio Ap s o enfoque n tido com a objetiva imediatamente anterior imers o girar o rev lver de modo a formar um V invertido entre as duas objetivas 40x e 100x Colocar uma gota de leo sobre a prepara o justamente no centro da l mina onde aparece o anel luminoso Encaixar a objetiva de imers o e enfocar a imagem com nitidez Durante a Observa o a N o molhe a platina nem as objetivas b Tenha cuidado ao usar subst ncias qu micas corrosivas e ou corantes para n o danificar o aparelho Para Retirar a Objetiva a Girar o rev lver no sentido hor rio encaixando a objetiva panor mica b Retirar o leo da objetiva de imers o com um len o de papel e tamb m da prepara o Ap s a Observa o a Verifique se a l mpada est apagada b Voltar o microsc pio para posi o de descanso objetiva panor mica
5. 5x b Fechar o diafragma da lente coletora Excursionar o parafuso do condensador para cima e para baixo at que se observem as bordas do diafragma em foco Observar a imagem formada c Se a imagem estiver deslocada do centro Figura 5A ajustar os dois parafusos de centraliza o do condensador da frente at que a imagem do diafragma fique bem no centro do campo Figura 5B d Abrir o diafragma da lente coletora at que encha o campo Figura 5C e Fechar gradualmente o diafragma da lente coletora at que a intensidade luminosa comece a diminuir Observa o Se o microsc pio for dotado de campo luminoso ou iluminador na base este deve ser utilizado no lugar do diafragma ris da lente coletora nos itens b e d A B C Figura 5 Passos para se obter a Ilumina o de K ehler A bordas do diafragma em foco B imagem do diafragma no centro do campo C Abrir o diafragma da lente coletora at que encha o campo Atividade 2 Forma o da Imagem no Microsc pio Verifique a imagem formada pelo microsc pio utilizando uma l mina com uma letra colada jornal ou digitada Como voc explica a diferen a entre a imagem observada a olho nu e ao microsc pio Passando para as objetivas seguintes o que voc pode dizer quanto ao tamanho da imagem tamanho do campo de vis o e a textura do papel Fa a um desenho do que observou com cada objetiva Anote o aumento total em cada campo Objetiva 4X Aumento Objetiva 10X Aum
6. BIOLOGIA CELULAR PROFA DRA MARILANDA F BELLINI 1 IMPORTANCIA DA BIOLOGIA CELULAR O estudo do mundo vivo mostra que a evolu o produziu uma imensa variedade de formas Existem em torno de quatro milh es de esp cies diferentes de bact rias protozo rios vegetais e animais que diferem em sua morfologia fun o e comportamento Entretanto sabe se agora que quando os organismos vivos s o estudados a n vel celular e molecular observa se um plano nico principal de organiza o O objetivo da biologia celular a an lise das c lulas que constituem as unidades estruturais de todas as formas de vida H muito tempo atr s se observou que uma nica c lula poderia constituir um organismo inteiro como no caso dos protozo rios Figura 1 ou ser uma das muitas agrupadas e diferenciadas em tecidos e rg os para formar um organismo multicelular Assim sendo a c lula a unidade estrutural e funcional b sica dos organismos vivos Legenda F Flagelo N N cleo K Cinetoplasto B Figura 1 Tipos celulares A Trypanosoma cruzi protozo rio uma nica c lula constitui um organismo B c lulas agrupadas e diferenciadas em tecido muscular liso 2 INSTRUCOES GERAIS AO ALUNO 1 Use o tempo de laborat rio para realizar todos os exerc cios da aula pr tica Leia antes da aula as instru es de cada exerc cio 2 Arrume em ordem o material necess rio para a aula pr tica Isso evita confus o N o de
7. artes uma parte mec nica e uma parte ptica Cada parte engloba uma s rie de componentes constituintes do microsc pio 3 2 4 PARTES MEC NICAS A parte mec nica serve para dar estabilidade e suportar a parte ptica Esta parte constitu da por a b c d f g h Base ou p o p sustenta todo o conjunto do MO podendo ser triangular redondo oval ou de outra forma qualquer desde que seja amplo s lido e pesado a fim de suportar essa sustenta o Bra o Coluna ou Estativa esta se articula com o p sustentando o tubo do microsc pio onde se encontram as lentes Platina uma mesa em miniatura perpendicular ao grande eixo do microsc pio que sustenta a l mina e tem orif cio no centro dando passagem para a luz A l mina presa por meio de pin as ou garras e desloca se por meio de um mecanismo de deslizamento provido de bot es que se movimentam chamados charriot Na platina h tamb m um sistema de escalas para a marca o de pontos Canh o ou tubo faz a comunica o entre as partes pticas de resolu o e amplia o ou seja entre a objetiva e a ocular Rev lver pe a girat ria do tubo que proporciona a fixa o e troca de objetivas Parafuso Macrom trico permite movimentos mais grosseiros da platina em dire o as objetivas ou vice versa Parafuso Microm trico permite movimentos menores mais delicados da platina em dire o s objetivas ou vice versa para focaliza o
8. aumento deve se prosseguir da seguinte forma a Colocar a prepara o corretamente para a observa o com uma objetiva de amplitude m dia b Ajustar a dist ncia interpupilar c Enfocar nitidamente o objeto com o olho direito fecha se o esquerdo mediante a roda de enfoque d Corrigir a nitidez da imagem para o olho esquerdo por meio do anel de dioptrias Nota este ajuste necess rio ser retomado sempre que mudar de observador 10 Olhar pela ocular ao mesmo tempo em que se eleva lentamente a platina girando o parafuso macrom trico at que a prepara o apare a focalizada Os ajustes finais de focaliza o devem ser efetuados com o parafuso microm trico 11 Se houver necessidade de efetuar observa es com outras objetivas exceto a objetiva de 100x imers o girar o rev lver e encaixar a objetiva adequada Se a focaliza o n o for autom tica fa a uso do parafuso microm trico 12 Deslocar a lamina sobre a platina utilizando o charriot a fim de efetuar observa es em toda sua extens o 13 Ao efetuar a mudan a de objetiva certificar se de que a ilumina o de Kdehler continua sendo mantida As objetivas de imers o s o utilizadas menor dist ncia do material a ser analisado o que contribui para captarem maior quantidade de luz dele proveniente Figura 4 Diferentes dist ncias entre objetivas e material a ser analisado Fonte http www nzetc org tm scholarly Bio23Tuat0
9. complementar Localiza se pr ximo ao parafuso microm trico ou adaptado sobre ele Em certos microsc pios s existe um parafuso em lugar do macro e do microm trico roda de enfoque Parafuso condensador tamb m se situa na por o inferior da coluna destinando se a elevar e abaixar o condensador 3 2 B PARTES PTICAS A parte ptica composta por um conjunto de meios transparentes que conduzem o objetivas feixe luminoso usado na microscopia As lentes biconvexas s o reunidas em dois sistemas situadas pr ximas ao objeto que se observa e oculares pr ximas ao olho do observador a Objetivas as objetivas situadas sempre pr ximas do objeto que observado no microsc pio constituem se em sistemas centrados de lentes convergentes que Z formam a imagem real e invertida do objeto Essa imagem que b acompanhada pela ocular e tornada definitiva Chamam se objetivas a seco quando s o empregadas usando ar entre a objetiva e o objeto examinando e chamam se de imers o quando se coloca um leo transparente de ndice de refra o o mais pr xima poss vel da lente entre esta e o objeto O leo usado leo de cedro ou suced neo sint tico com a finalidade de tornar mais claro o campo do microsc pio o que acontece quando o leo homogeneiza o meio de luz entre esses dois elementos Oculares as oculares s o formadas por sistemas de lentes cuja posi o est sempre pr xima ao olho do observador
10. do o poder de resolu o Al m do mais usando filtros de cores 8 complementares poss vel aumentar o contraste entre estruturas de formas pouco diferenciadas Y EMO a ce 4 Revolver Platina Parafuso do Condensador Diafragma da Iris Suporte do Filtro Lente Coletora Parafuso para a L mpada Ajuste da Intensidade de Luz SN a ee 9 Entrada de Alimenta o 10 Base 11 Corpo 12 Limitador de Foco 13 Objetivas 14 Cabe a Binocular 15 Oculares Figura 3 Partes Mec nicas e pticas de um microsc pio de luz Fonte Manual de Instru es Microsc pios Bioval modelo L1000 3 3 COMO UTILIZAR O MICROSCOPIO 3 3 A SEQU NCIA DE PASSOS PARA SE EFETUAR OBSERVA ES AO MICROSC PIO DE LUZ Retirar a capa do microsc pio Identificar as diferentes partes do microsc pio Ligar o microsc pio no bot o lateral Limpar a l mina a ser examinada Ajustar o Charriot de modo a centrar o orif cio da platina Dn a A U NY Be Colocar a l mina sobre a platina com a lam nula voltada para cima e sobre a lente frontal do condensador 7 Come ar as observa es utilizando se a objetiva de menor aumento panor mica Identificar o sinal de que a objetiva est em posi o correta 8 Ajustar o condensador obtendo se ilumina o de K hler Atividade 1 9 Ajustar as oculares para a obten o de uma nica imagem Para se obter uma imagem n tida com qualquer
11. ento Objetiva 40X Aumento Considera es Atividade 3 Componentes do Microsc pio X Fun es PALAVRAS CRUZADAS BB U N e e Horizontal Pe a que est localizada na mesa do microsc pio e serve para prender a l mina Parte do microsc pio respons vel pelo foco da imagem Sustenta as objetivas Parte do microsc pio que o sustenta Controla a intensidade da luz e Vertical Pe a do microsc pio que movimenta a l mina Parte do microsc pio que movimenta a mesa no sentido vertical Diz se de 10x 40x ou 100x Respons vel pelo aumento da imagem Parte do microsc pio que est diretamente ligado ao observador PLATINA parte do microsc pio que acomoda a l mina Atividade 4 Fixa o de Conte dos 1 Como se distingue a objetiva utilizada para imers o em leo das demais objetivas Como se deve proceder para focalizar uma prepara o com a objetiva de imers o em leo 2 O que Poder de Resolu o 3 Calcule o Limite de Resolu o do quadro abaixo Ocular Objetiva AN da objetiva Aumento Total Limite de Resolu o um 10x 4x 0 10 10x 10x 0 25 10x 40x 0 65 10x 100x 1 25 oil Dados K 0 61 da luz branca 0 55 um valor m dio para a faixa vis vel a Que combina o de lentes fornece o maior aumento b Que combina o de lentes fornece uma imagem com mais detalhes c O que ocorreria com o nivel de detalhamento da imagem se a ocular da
12. ixe bolsas ou outros objetos desnecess rios pr ximos ao local de trabalho 3 Siga todas as instru es cuidadosamente Caso n o consiga bons resultados seja persistente e repita o exerc cio Lembre se Ci ncia Repeti o Somente com um trabalho exato voc pode obter resultados precisos 4 Ao final de cada exerc cio elabore os desenhos das observa es e responda s quest es N o se esque a de colocar as legendas e o aumento obtido com o uso do microsc pio 5 N o jogue o material usado no ch o ou nos balc es Deixe o seu lugar t o limpo como gostaria de encontrar 6 Desligue o microsc pio tire o fio da tomada verifique se as objetivas est o limpas e coloque a de menor aumento na posi o correta N o se esque a de tirar a l mina utilizada no ltimo exerc cio 7 Coloque a capa no microsc pio MATERIAIS NECESS RIOS e 1 avental branco de uso obrigat rio para todas as aulas pr ticas e 1 l pis preto e 1 borracha e 1 caixa ou estojo para colocar o material 3 CONHECENDO O MICROSCOPIO DE LUZ 3 1 DEFINICAO O microsc pio de luz ML um instrumento que permite observar objetos de pequenas dimens es ou invis veis a olho nu Fornece uma imagem consideravelmente aumentada geralmente invertida da esquerda para a direta devido associa o de lentes Figura 2 Microsc pio de luz ML 3 2 PARTES DO MICROSC PIO DE LUZ O microsc pio de luz constitu do por duas p
13. lo fabricante da lente em quest o Logo aumentando se o valor de n aumentamos tamb m o valor de AN Isso significa que maior quantidade de luz penetrar na lente objetiva perdendo se menos luz por refra o e reflex o O olho humano desarmado tem um poder de resolu o de aproximadamente 0 2 mm e o microsc pio ptico em torno de 0 2 um Observa o Nseo 1 52 NaF 1 00 Limite de Resolu o LR refere se menor dist ncia que deve existir entre os dois pontos mencionados de modo que ainda apare am individualizados na imagem formada pelo sistema ptico utilizado LR depende do comprimento da onda de luz utilizada A e da abertura num rica da objetiva AN Portanto K constante 0 61 0 55 para a luz branca comprimento de onda da faixa verde amarelo Portanto o limite de resolu o o inverso do poder resolutivo de modo que quanto maior for o poder de resolu o menor ser o seu limite O aumento total conferido pelo MO o produto do aumento conferido pela lente objetiva e pela lente ocular objetiva x ocular Atividade 1 Ilumina o de Koehler Esse m todo de ilumina o foi idealizado por A K ehler e proporciona um melhor rendimento do sistema ptico sendo portanto imprescind vel para um microsc pio ou fotomicrosc pio de qualidade Para a obten o deste tipo de ilumina o as seguintes manobras devem ser realizadas a Focalizar a luz do microsc pio com a objetiva 4x ou
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