Kit para Detecção de Cytomegalovirus (CMV) - Cód
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1. para a sonda CMV com o reporter FAM e o quencher none NFQ um extintor de fluoresc ncia dark quencher conforme manual do equipamento programar o detector para a sonda da beta globina com o reporter VIC e o quencher none NFQ um extintor de fluoresc ncia dark quencher conforme manual do equipamento para qualquer po o da microplaca programar o detector tipo de fluoresc ncia para medir o passive reference ROX 6 rr rr E Rev 04 Out 2013 normaliza o da fluoresc ncia medida e o tipo de rea o amostra controle de amplifica o negativo ou padr o com quantidade relativa reconhecida Complete a planilha que se encontra no final destas Instru es de Uso escrevendo manualmente estas informa es ou imprima a montagem da placa com as respectivas disposi es dos controles e localiza es das amostras A planilha deve ser seguida criteriosamente durante a aplica o da amostra e seus reagentes OBS para a determina o da quantidade de DNA alvo na amostra inicial ser necess rio preparar uma s rie de rea es usando DNA padr es com quantidades conhecidas c pias nas quantidades 10 10 10 102 para que se possa obter a curva padr o llustra se logo abaixo a titulo de exemplo como pode ser organizada a an lise de 11 amostras seqe q Yssss so s7 so Ng fn N k Aa A Aa all Tso sro IN a 1 o a2. C LCULOS E OBTEN O DOS RESULTADOS An lise qualitativa dos resultados Os valores registrados de fluoresc ncia emitidos pela sonda espec fica para CMV fluoresc ncia FAM e pela sonda especifica do Controle Interno fluoresc ncia VIC nas rea es de amplifica o devem ser analisados por software apropriado Antes de iniciar a an lise necess rio conforme descrito no manual do equipamento programar manualmente a faixa de c lculo do Baseline o n vel de fluorescencia de background do ciclo 6 ao ciclo 15 OBS No caso de uma amostra positiva com alto t tulo de CMV o aumento da fluoresc ncia FAM da sonda especifica CMV pode come ar antes do 15 Ciclo Neste caso a faixa de c lculo de Baseline precisa ser adaptada do ciclo 6 ao ciclo no qual a fluoresc ncia FAM da amostra comecea aumentar por exemplo ciclo 10 Conforme descrito no manual do equipamento programar manualmente o Limiar Thereshold para a fluoresc ncia FAM a 0 2 Conforme descrito no manual do equipamento programar manualmente o Limiar Thereshold para a fluoresc ncia VIC a 0 1 Os valores de fluoresc ncia emitidos pelas sondas espec ficas para CMV na rea o de amplifica o e o valor Threshold permite determinar o cT ciclo Threshold o ciclo em que a fluoresc ncia atinge o valor Threshold Os valores de cT das sondas espec ficas para CMV nas rea es de amplifica o dos quatro Standards permitem calcular a Curva
3. Netherlands Todas as amostras s o resultados positivos para o DNA de CMV como ilustrado na tabela seguinte C lulas positivizadas para o DNA de CMV 57 57 0 Amostras N Positivos Negativos Para as amostras n o celulares a taxa global de erro foi controlada utilizando um painel de amostras de plasma normal de doadores Painel Normal Human Plasma AcroMetrix Europe B V the Netherlands levadas a 1600 gEq mL com um plasma de refer ncia calibrado PeliSpy CMV DNA Monitor 10000 AcroMetrix Europe B V the Netherlands Todas as amostras s o resultados positivos para o DNA de CMV como ilustrado na tabela seguinte Plasma positivizado para o DNA de CMV 57 57 0 Amostras N Positivos Negativos Nota Os dados e os resultados completos dos testes realizados para a avalia o das caracter sticas de desempenho do produto est o registrados na Sec o 7 do Fasc culo T cnico do Produto Q CMV AmpliMIX e Q CMV AmpliPROBE FTP RTS015 REFER NCIAS BIBLIOGR FICAS FENNER T E et al 1991 J Clin Microbiology 29 2621 2622 IDENTIFICA O DO DISTRIBUIDOR Biometrix Diagn stica Ltda Estrada da Graciosa 1081 Curitiba PR CEP 82840 360 Tel 41 2108 5250 Fax 41 2108 5252 DDG 0800 7260504 E mail biometrixebiometrix com br WWW biometrix com br CNPJ 06 145 976 0001 39 INFORMA ES DO FABRICANTE Nanogen Advanced Diagnostics S P A C so Torino 89 d 10090 But
4. es de uma mesma amostra e analisados em uma mesma sess o permitiu determinar um Coeficiente de Varia o percentual CV m dio de 24 3 Para as amostras celulares a precis o no interior da sess o foi determinada utilizando alguns dados obtidos pelo estudo do intervalo linear de medida Os resultados s o referidos na tabela seguinte Coeficiente de varia o com amostras celulares Ea a M dia dos valor te rico ma valor te rico Desvio gEq extra o N repeti es sEq rea o resultados padr o CV gsEq rea o 316 29 16 15 48 6 28 40 54 1 000 29 50 47 54 12 81 26 95 3 160 29 158 182 57 26 07 14 28 10 000 29 500 584 44 55 83 9 55 15 E E a RB Rev 04 Out 2013 O valor de CV m dio para as amostras celulares de 22 8 Para as amostras n o celulares a precis o no interior da sess o foi determinada utilizando alguns dados obtidos pelo estudo do intervalo linear de medida Os resultados s o referidos na tabela seguinte Coeficiente de varia o com amostras n o celulares valor te rico ia valor te rico Mer dos Desvio gEq mL N repeti es sEq rea o resultados padr o CV sEq rea o 316 29 25 26 23 11 20 42 71 1 000 29 80 102 33 25 76 25 17 3 160 29 253 232 83 51 86 22 27 10 000 14 800 1099 67 173 68 15 79 31 600 14 2 528 2799 57 618 19 22 08 100 000 14 8 000 7377 90 1721 51 23 33 316 000 14 25 280 31297 15 8769 95 28 02 1
5. A emiss o de fluoresc ncia aumenta com o aumento da rea o de amplifica o do produto espec fico e medido e registrado pelo equipamento A an lise de dados torna poss vel determinar a presen a e o t tulo de DNA CMV na amostra inicial Assay Chemistry Summary mD Forward Primer Probe Sete 9 O Quencher Reporter Minor Grove Binder Q B 3 ASE MGB AmpliTaq T Gold DNA Polymerase Non Target Template Target Template A partir do momento que a probe TaqMan for ligada parte espec fica do gabarito de DNA depois da desnatura o alta temperatura e resfriamento da rea o os primers se anelam ao DNA A TaqgPolimerase ent o adiciona nucleot deos e remove a probe TaqMan do DNA gabarito Isso separa o quencher do rep rter e permite ao rep rter emitir sua energia Isso ent o SIOMETRIX wa DILA O N D 8 T CA Rev 04 Out 2013 quantificado usando um computador Quanto mais ocorrer a desnatura o e anelamento mais oportunidades a TaqMan ter de se ligar e em contra partida mais luz emitida ser detectada Tas nucleotides x y P ES from TaqMan complementary strand TTT aa template DNA 3 COMPONENTES FORNECIDOS O corante do rep rter liberado liberado da dupla fita de DNA criada pela Taq Polimerase Longe do corante quencher a luz emitida do corante rep rter dye em estado excitado pode agora ser observada A padroniza o do sistem
6. e de sangue total perif rico n o devem conter heparina A heparina um potente inibidor de Taq polimerase As amostras de plasma as suspens es de leuc citos e as suspens es de granul citos n o devem conter Ficoll dextrana ou Hemoglobina Estas subst ncias podem causar a inibi o da Taq polimerase N o h dados pertinentes a eventuais fen menos de inibi o por parte dos medicamentos antivirais como Ganciclovir o Foscamnet quimioter picos ou imunosupressores Controles de amplifica o necess rio validar cada sess o de amplifica o preparando uma rea o de controle negativo e uma rea o de controle positivo Como controle negativo usar uma amostra negativa que j foi testada ou gua est ril bi destilada Como controle positivo usar uma amostra de plasma com 1000 CMV equivalente gen mico mL gEq mL preparado de material de refer ncia DNA CMV positivo calibrado ex Pelispy CMV DNA Monitor 10000 AcroMetrix Europe B V the Netherlands fornecido com o kit controle positivo j preparado e dentro destes padr es controle positivo 5 pL de AmpliSTANDARD PROCESSO DE MEDI O a Preparo da etapa de amplifica o real time rea de p s PCR Antes de iniciar necess rio conforme manual do equipamento ligar o termociclador Real Time e seu computador iniciar o software apropriado e abrir uma sess o absolute quantitation conforme manual do equipamento programar o detector
7. etapa de amplifica o contamina o que podem ter levado a resultados incorretos e falsos positivos A sess o n o v lida e precisa ser repetida a partir da etapa de amplifica o Na rea o de amplifica o de cada amostra o valor de cT da probe espec fica para o Controle Interno usado para validar as etapas de extra o amplifica o e detec o Verificar no software do instrumento que o cT foi determinado por um r pido e regular crescimento dos valores de fluoresc ncia e n o por picos ou incremento de sinal background Este kit est em condi es de detectar uma quantidade m nima de aproximadamente 10 c pias de DNA do gene MIEA de CMV por rea o de amplifica o correspondentes aos genomas Equivalentes por rea o Os resultados das rea es de amplifica o de cada amostra s o usados para a detec o de CMV conforme tabela a seguir cT da amostra Adequa o da Resultado do DNA CMV CMV FAM Controle Interno VIC amostra teste E n o adequada n o v lido Indeterminado Indeterminado cT lt 35 adequada v lido negativo Mag E i DETECTADO cT gt 35 ou i iti DETECTAD Determinado Indeterminado adequada valido positiva GRADO cT lt 35 v lido positivo DETECTADO Se o resultado da rea o de amplifica o de uma amostra cT Indeterminado para o DNA do gene MIEA de CMV e cT gt 35 ou Indeterminado para a probe espec fica do controle interno n o foi poss vel detectar de
8. gEq extr 18 gEq extr 35 gEq extr Limite de Detec o para amostra celular gEq rea o 95 intervalo de confian a Limite menor Limite maior 95 positividade 5 3 gEq reac 17 5 gEq reac 50 positividade 8 5 gEq reac 1 3 gEq reac 0 9 gEq reac 1 8 gEq reac Para amostras n o celulares o limite de detec o foi determinado usando como material de refer ncia calibrado um painel de c lulas PeliCheck CMV DNA 99 AcroMetrix Europe B V The Netherlands tendo uma concentra o de 1000 000gEq mL a 1gEq mL Os resultados s o relatados na tabela seguinte Limite de Detec o para amostras n o celulares gEq mL 95 intervalo de confian a Limite menor Limite maior 95 positividade 164 gEq mL 105 gEq mL 348 gEq mL 50 positividade 32 gEq mL 24 gEq mL 44 gEq mL Limite de Detec o para amostras n o celulares gEq rea o 95 intervalo de confian a Limite menor Limite maior 8 4 gEq reac 27 8 gEq reac 1 9 gEq reac 3 5 gEq reac 95 positividade 50 positividade 13 1 gEq reac 2 6 gEq reac Sensibilidade Anal tica Faixa de medi o linear A sensibilidade anal tica deste teste permite determinar uma titula o de 1 000 000 a 20 mol culas de DNA branco nos 5 pL de DNA extra do e acrescentado rea o de amplifica o A sensibilidade
9. lulas negativas para o DNA de CMV 12 0 12 Para as amostras n o celulares a aus ncia de contamina o cruzada foi verificada utilizando como material de refer ncia calibrado um plasma positivo para o DNA de CMV de alta titula o PeliSpy CMV DNA Monitor 10000 AcroMetrix Europe B V the Netherlands e uma amostra de plasma normal Normal Human Plasma AcroMetrix Europe B V the Netherlands Nenhuma amostra negativa para o DNA de CMV resultou positiva para contamina o como ilustrado na tabela seguinte Amostras N Positivos Negativos Plasma positivo para o DNA de CMV 18 18 0 Plasma normal 12 0 12 Resist ncia taxa global de erros do sistema A resist ncia do teste como taxa global de erro do sistema que leva a resultados falsos negativos foi verificada interpretando as an lises de dois pain is de amostras positivas para o DNA de CMV com baixo t itulo e com resultado menor a 1 7 SIOMETRIX ww ssmmITm GB 19 DIAGNOSTICA E Cada amostra do painel foi empregada para realizar o completo procedimento das an lises extra o e amplifica o Para as amostras celulares a taxa global de erro foi controlada utilizando um painel de amostras de c lulas negativas para o DNA de CMV testadas com COBAS AMPLICOR system Roche Molecular Systems Branchburg N J USA levadas a 1200 gEq extra o com um plasma de refer ncia calibrado PeliCheck CMV DNA 99 AcroMetrix Europe B V the
10. marcadores potenciais de rea o cruzada que podem interferir foi estimado pela compara o de sequ ncia com bancos de dados de nucleot dios O exame de alinhamento das regi es selecionadas para a hibrida o dos oligonucleotideos de primers do AmpliMIX e da sonda fluorescente AmpliPROBE com as sequ ncias disponibilizadas no banco de dados dos diversos organismos da CMV entre aqueles do genoma completo de HHV6 o v rus da herpes humana mais similar ao CMV demostrou a sua especificidade e a aus ncia de homologias significativas A especificidade anal tica do teste como marcadores potenciais de rea o cruzada foi verificada utilizando uma amostra testada positiva para o DNA de HHV6 Esta amostra foi empregada em 15 replicatas para realizar o completo procedimento de an lises extra o e amplifica o Para as amostras celulares a especificidade anal tica foi verificada utilizando um sobrenadante de cultura positivo para o DNA de HHV6 testado que agregado a c lulas negativas para o DNA de CMV testadas com COBAS AMPLICOR system Roche Molecular Systems Branchburg N J USA Todas as repeti es s o resultados negativos para CMV como ilustrado na tabela seguinte 18 Rev 04 Out 2013 Amostras N Positivos Negativos Sobrenadante de cultura positiva para o DNA de HHV6 C lulas negativas para o DNA de 15 0 15 CMV Para as amostras n o celulares a especificidade anal tica verificada u
11. para an lise qualitativa dos resultados poss vel realizar a an lise quantitativa dos resultados de amostras positiva Os valores de cT para sondas espec ficas CMV nas rea es de amplifica o de cada amostra e a curva padr o para a sess o de amplifica o s o usados para calcular a quantidade 10 IOMETRIX EEEF ESSES E ma Rev 04 Out 2013 Quantity do DNA alvo presente nas rea es de amplifica o das amostras Este kit est apto para quantificar entre 1 000 000 a aproximadamente 20 c pias de DNA do gene MIEA de CMV por rea o de amplifica o correspondentes aos genomas equivalentes por rea o como descrito na tabela seguinte o 3 Pra Genomas Equivalentes de CMV por rea o Quantity gt 1 x 10 SUPERIORES A 1 000 000 2x 10 lt Quantity lt 1x 10 Quantiry Quantity lt 2 x 10 INFERIORES A 20 Os resultados Quantity de cada amostra s o usados para calcular o genoma Equivalente de CMV presente na amostra extra da Nc de acordo com a f rmula Nc Ve x Quantity VcxVax Ee Onde e Vc a quantidade de amostra usada na extra o e Ee a efici ncia da extra o expressa em d cimos e Ve o volume total do produto da extra o expresso em pL e Va o volume do produto da extra o usado na rea o de amplifica o expresso em uL e Quantity o resultado da rea o de amplifica o da amostra expresso em gEq por rea o Quando o kit Extr
12. por mais de 10 vezes Ciclos sucessivos de congelamento descongelamento podem causar perda na titula o e Os tubos que cont m o AmpliMASTER n o podem ser congelados e descongelados por mais de 1 vez Ciclos sucessivos de congelamento descongelamento podem causar uma perda na efici ncia da amplifica o CUIDADOS COM A AMOSTRA BIOL GICA A amostra deve ser tratada como potencialmente infecciosa Amostras Este produto deve ser utilizado com as seguintes amostras biol gicas e plasma colhido em EDTA e sangue perif rico colhido em EDTA e suspens es de leuc citos e e suspens es de granul citos Plasma colhido em EDTA As amostras de plasma destinadas extra o do DNA devem ser colhidas em EDTA segundo as indica es do laborat rio transportadas a 2 C 8 C e conservadas a 2 C 8 C por um m ximo de quatro horas em caso contr rio devem ser congeladas e conservadas a 20 C por um m ximo de trinta dias ou ainda a 70 C por um tempo maior Para uma tima conserva o das amostras aconselha se subdividi las volume m nimo 300 uL e conserv las congeladas a 20 C por um per odo m ximo de 30 dias ou ainda a 70 C por um per odo maior Evitar submeter as amostras a ciclos de congelamento descongelamento repetidos Quando se utilizam amostras congeladas proceder ao descongelamento imediato antes do in cio da extra o para evitar fen menos de degrada o dos cidos nucleicos Acrescentar 10 uL de
13. rea o 316 29 25 26 23 3 76 1 000 29 80 102 33 27 91 3 160 29 253 232 83 7 90 10 000 14 800 1099 67 37 46 31 600 14 2 528 2799 57 10 74 100 000 14 8 000 7377 90 7 78 316 000 14 25 280 31297 15 23 80 1 000 000 14 80 000 101309 94 26 64 A inexactid o m dia para as amostras n o celulares de 18 9 Sensibilidade diagn stica efici ncia de detec o e quantifica o nos diferentes gen tipos subtipos A sensibilidade diagn stica do teste como efici ncia de detec o e quantifica o nos diversos gen tipos subtipos est avaliada pela compara o de sequ ncias com banco de dados de nucleotidicos O exame do alinhamento das regi es selecionadas para a hibrida o dos oligonucleotideos de primers AmpliMIX e da sonda fluorescente AmpliPROBE com as sequ ncias disponibilizadas no banco de dados do gene MIEA de CMV inclu ndo aqueles para os grupos AD169 e Towne demonstram sua conserva o e a aus ncia de muta es significativas Sensibilidade diagn stica amostras positivas de baixa carga viral A sensibilidade diagn stica do teste como confirma o das amostras cl nicas positivas foi verificada interpretando as an lises de um painel de amostras celulares positivas para o DNA de CMV com baixa carga viral e com resultado igual a 88 3 Cada amostra do painel foi empregada para realizar o completo procedimento das an lises extra o e amplifica o A sensibilidade diagn stica foi verificada
14. 000 000 14 80 000 101309 94 26197 48 25 86 O CV m dio para as amostras n o celulares de 25 7 Sensibilidade anal tica exatid o O estudo da exatid o do teste entendido como diferen a entre o valor te rico da concentra o de uma amostra e a m dia dos resultados obtidos com diferentes repeti es desta amostra analisados em uma mesma sess o permitiu determinar uma lInexatid o percentual m dia de 14 3 Para as amostras celulares a inexactid o no interior da sess o foi determinada utilizando alguns dados obtidos pelo estudo do intervalo linear de medida Os resultados s o referidos na tabela seguinte OMETRIX DIAGN STICA inexatid o com amostras celulares valor te rico A a valor te rico Rec er sEq extra o N repeti es sEg rea o resultados Inexatid o sEq rea o 316 29 16 15 48 2 03 1 000 29 50 47 54 4 92 3 160 29 158 182 57 15 55 10 000 29 500 584 44 16 89 A Inexatid o m dia para as amostras celulares de 9 9 Para as amostras n o celulares a inexatid o no interior da sess o foi determinada utilizando alguns dados obtidos pelo estudo do intervalo linear de medida Os resultados s o referidos na tabela seguinte Rev 04 Out 2013 Inexatid o com amostras n o celulares valor te rico 2 valor te rico MENIA AIE e N repeti es E resultados Inexatid o gEq mL gEq rea o gEq
15. CPE DNA s amostras de plasma para o controle interno antes de extrair o DNA conforme descrito no Manual de Instru es do kit EXTRAgen Sangue total perif rico colhido em EDTA As amostras de sangue total perif rico destinados extra o de DNA devem ser colhidas em EDTA segundo as indica es do laborat rio transportadas a 2 C 8 C e conservadas a 2 C 8 C por um m ximo de tr s dias N o congelar as amostras de sangue total perif rico para evitar a lise das c lulas e a perda da titula o viral OMETRIX EESSESSESSESSSESSESSESSSSESSSSESSSSESSESSS ss Rev 04 Out 2013 As amostras de sangue total perif rico devem ser pr tratadas e o DNA deve ser extra do como referido nas Instru es de Uso do kit EXTRAceLLO Suspens es de leuc citos e suspens es de granul citos As amostras de leuc citos e as amostras de granul citos destinadas extra o do DNA devem ser preparadas segundo as indica es do laborat rio suspendidas em Solu o fisiol gica est ril ou PBS est ril contadas e conservadas a 2 C 8 C por um m ximo de quatro horas N o congelar as suspens es de leuc citos e as suspens es de granul citos para evitar a lise das c lulas e a perda da titula o viral O DNA deve ser extra do das suspens es de leuc citos e das suspens es de granul citos como referido no Manual de Instru es do kit EXTRAcell Subst ncias interferentes As amostras de plasma
16. Rev 04 Out 2013 RTK015 CMV Q PCR Alert Kit Instru es de Uso USO PRETENDIDO O kit pronto para uso CMV Q PCR Alert Kit um teste quantitativo de amplifica o dos cidos nucleicos para a pesquisa e dosagem do Citomegalov rus humano CMV em amostras de DNA extra das do plasma colhido em EDTA sangue total colhido em EDTA suspens es de leuc citos buffy coat e suspens es de granul citos Seu uso pretendido juntamente com dados cl nicos e outros exames de laborat rio diagnosticar e monitorar a infec o de CMV PRINC PIO DE A O E REA O O procedimento consiste na rea o de amplifica o em tempo real em microplaca com uma varia o e controle de temperatura program vel e sistema tico de detec o fluorescente simult nea rea o Termociclador em Tempo Real Uma rea o de amplifica o espec fica para uma regi o do gene CMV MIEA e para uma regi o do gene da beta globina humana com controle de inibi o interno adequado amostra realizada em cada po o come ando pelo DNA extra do das amostras Uma probe espec fica para CMV marcada com fluor foro FAM se torna ativada partir do momento que hibridizada com um produto espec fico da rea o de amplifica o do CMV Outra probe marcada pelo fluoroforo VIC espec fica para o gene da beta globina humana ativada a partir do momento que hibridizado com o produto da rea o de amplifica o do gene da beta globina humana
17. Stantard da sess o de amplifica o bem como validar a amplifica o e detec o como descrito nas tabelas a seguir cT do Standard 10 CMV FAM Resultado do teste Amplifica o Detec o cT lt 25 POSITIVO CORRETO Curva Standard CMV FAM Coeficiente de Correla o R2 0 990 lt R2 lt 1 000 CORRETO Faixa Aceit vel Amplifica o Detec o Se o resultado da rea o de amplifica o Standard 10 cT gt 25 ou indeterminado ou se o valor do Coeficiente de correla o n o est dentro dos limites aceit veis a presen a do DNA alvo n o foi corretamente detectada Isto significa que problemas podem ter ocorrido durante amplifica o ou detec o que podem ter levado a resultados incorretos A sess o n o v lida e precisa se repetida desde o passo de amplifica o Os valores de fluoresc ncia emitidos pela sonda espec fica CMV nas reac es de amplifica o do Controle negativo s o utilizados para confirmar a amplifica o e a detec o como descrito na tabela seguinte Ciclo limiar do Controle negativo CMV FAM N o determinado NEGATIVO CORRETO Resultado do teste Amplifica o Detec o Se o resultado da rea o de amplifica o do Controle negativo diferente do Indeterminado Undetermined a presen a do DNA alvo foi detectado na rea o de IOMETRIX asss rRFR s Rev 04 Out 2013 amplifica o Isso significa que ocorreram problemas durante a
18. a foi realizada nos instrumentos da Applied Biosystems ABI PRISM s rie 7000 Componente Descri o Quantidade Composi o Oligonucleot deos Ed MA Lert L A 4x110 pL TRIS base e cloridrato Glicerol Triton X 100 oe Oligonucleot deos CMV QPCR Alert Marada com FAN 4x110 pL fluorescentes TRIS base e AmpliPROBE cloridrato Glicerol Triton MGB NFQ X 100 e com VIC MGB NFQ CMV Q PCR solu o de plasmideo em Plasm deo TRIS base e AmpliSTANDARD 10 tubo com tampa 1 x 50 uL cloridrato EDTA RNA de VERMELHA levedura total Plasmideo TRIS base e CMV Q PCR solu o de plasmideo em AmpIiSTANDARD 10 tubo com tampa AZUL I SO DL cloridrato EDTA RNA de levedura total o Plasmideo TRIS base e CMV Q PCR solu o de plasmideo em E AmpIiISTANDARD 10 tubo com tampa VERDE X50HL cloridrato EDTA RNA de levedura total CMV Q PCR solu o de plasm deo em Plasm deo TRIS base e AmpliSTANDARD 102 tubo com tampa 1 x 50 uL cloridrato EDTA RNA de AMARELA levedura total solu o de plasm deo Plam deos gene beta CPE DNA para o controle interno 4x 150 uL globina dilu dos em RNA de de inibi o levedura TRIS base e cloridrato Glicerol MgCl iura de reagentes Desoriboxinucleot deos Q PCR Alert ptimizados 4x 340 uL trifosfatos ROX Uracil AmpliMASTER sis Taq DNA polimerase hot RTS000 tart Microplaca com FEE 96 pocinhos de 0 2 mL i L mina adesiva vedante 3 Pl sti
19. agen usado e o resultado requerido em gEq mL a f rmula fica Vc 0 3mL Ee 0 8 significa efici ncia de 80 Ve 15uL Va 5uL Nc gEq mL 15 x Quantity 0 3x5x 0 8 Nc gEq mL 12 5 x Quantity Quando o kit Extracell usado o DNA extra do de 500 000 c lulas de acordo com as instru es de uso e resultado requerido em gEq 100 000 c lulas a f rmula fica Vc 5 500 000 c lulas s o equivalentes a 5 unidades de medi o de 100 000 c lulas Ee 1 0 significa efici ncia de 100 Ve 100 uL Va 5 uL Nc gEq 100 000 c lulas 100 x Quantity 5x5x1 0 Nc gEq 100 000 c lulas 4 x Quantity Quando o kit Extracell usado e o resultado requerido em gEq extra o omitindo o 11 IOMETRIX s Rev 04 Out 2013 termo Vc a f rmula fica Vc omitido Ee 1 0 significa efici ncia de 100 Ve 100 uL Va 5 uL Nc gEq extra o 100 x Quantity 5x1 0 Nc gEq extra o 20 x Quantity LIMITA ES DO PROCESSO Utilizar com este produto somente o DNA extra do das seguintes amostras humanas plasma colhido em EDTA sangue total perif rico colhido em EDTA suspens es de leuc citos e suspens es de granul citos N o utilizar com este produto o DNA extra do das amostras heparinizadas A heparina inibe a rea o de amplifica o dos cidos nucleicos e causa resultados inv lidos N o utilizar com este produto DNA extra d
20. agentes procedentes de kits de outros fabricantes Advert ncias e precau es para a biologia molecular Os procedimentos de biologia molecular como a extra o a transcri o reversa a amplifica o e a detec o de cidos nucleicos requerem pessoal especializado para evitar o risco de resultados incorretos em particular por causa da degrada o dos cidos nucleicos das amostras ou da contamina o das amostras por parte de produtos de amplifica o necess rio dispor de uma rea separada para a extra o prepara o das rea es de amplifica o e para a amplifica o detec o dos produtos de amplifica o reas de pr e p s PCR Nunca introduzir um produto de amplifica o na rea de extra o prepara o das rea es de amplifica o necess rio uso de EPI adequado a cada uma das reas de trabalho em laborat rio de biologia molecular As amostras devem ser destinadas exclusivamente a este tipo de an lise As amostras devem ser manipuladas em uma c mara de fluxo laminar Os tubos que cont m amostras diferentes nunca devem ser abertos ao mesmo tempo As pipetas utilizadas para manipular as amostras devem ser destinadas exclusivamente a este uso As pipetas devem ser do tipo deslocamento positivo ou usar ponteiras com barreira filtro As ponteiras utilizadas devem ser est reis sem a presen a de DNAse e RNAse sem a presen a de DNA e RNA Os reagentes devem ser manipulados em c mara de fluxo lamin
21. anal tica do teste como intervalo linear de medida foi determinada utilizando um painel de dilui es 1 log entre uma dilui o e a sucessiva de DNA plasm dico que cont m o produto de amplifica o cuja concentra o inicial foi medida espectrofotometricamente Os pontos do painel para 10 mol culas para reac es de 10 mol culas para rea o foram empregadas em 9 repeti es para realizar a amplifica o A an lise dos dados obtidos realizada com a regress o linear demonstrou que o teste apresenta uma resposta linear para todos os pontos do painel coeficiente de correla o linear superior a 0 99 A sensibilidade anal tica do teste como intervalo linear de medida foi verificada utilizando dois pain is de dilui es 0 5 log entre uma dilui o e a sucessiva de CMV Cada SIOMETRIX DIAGN STICA ESET ss e E Rev 04 Out 2013 amostra dos pain is foi empregada em 29 ou em 14 replicatas para realizar o completo procedimento de an lise extra o e amplifica o A an lise dos dados obtidos foi realizada com a regress o linear limitando a curva aos pontos que apresentam 100 de positividade e que originam um coeficiente de correla o linear superior a 0 99 Para as amostras celulares o intervalo linear de medida foi verificado como material de refer ncia calibrado um painel de plasmas PeliCheck CMV DNA 99 AcroMetrix Europe B V the Netherlands que foi acrescentado c lula negativa para
22. ando um painel de amostras de c lulas negativas para o DNA de CMV testadas com COBAS AMPLICOR System Roche Molecular Systems Branchburg N J USA Os resultados s o referidos na tabela seguinte Amostras N Positivos Negativos Painel de c lulas negativas para o DNA de CMV 60 6 54 As seis amostras celulares que resultam positivas com este produto s o provenientes de pacientes em fase inicial ou terminal de infec o de CMV e ainda podendo ser consideradas amostras positivas para o DNA de CMV com baixa carga viral As discord ncias entre os resultados obtidos com este produto e os resultados obtidos com o COBAS AMPLICOR System podem ser entendidos com a heterogeneidade das amostras celulares positivas com baixa carga viral as poucas c lulas positivas se distribuem casualmente nas diversas divis es que podem ainda resultar com uma titula o superior ou inferior ao limite de detec o do teste Para as amostras n o celulares a especificidade diagn stica foi avaliada utilizando um painel de amostras de plasma normais de doadores Painel Normal Humano Plasma AcroMetrix Europe B V the Netherlands Todas as amostras s o resultados negativos para o DNA de CMV como ilustrado na tabela seguinte Amostras N Positivos Negativos Painel de plasmas normais de doadores 58 0 58 Especificidade anal tica marcadores potencialmente com reatividade cruzada A sensibilidade anal tica do teste como
23. ar Os reagentes necess rios para a amplifica o devem ser preparados de modo a ser utilizados em uma nica vez As pipetas utilizadas para manipular os reagentes devem ser destinadas exclusivamente para aquela rea de trabalho As pipetas devem ser do tipo de deslocamento positivo ou usar ponteiras com barreira filtro As ponteiras utilizadas devem ser est reis sem a presen a de DNAse e RNAse sem a presen a de DNA e RNA Os produtos de amplifica o devem ser manipulados de modo a limitar ao m ximo a dispers o no ambiente para evitar a possibilidade de contamina es As pipetas utilizadas para manipular os produtos de amplifica o devem ser destinadas exclusivamente para sua rea de trabalho n IOMETRIX EEE SS SS ESSE Rev 04 Out 2013 Advert ncias e precau es espec ficas para os componentes A AmpliMIX AmpliPROBE AmpliSTANDARD CPE DNA AmpliMASTER apresentam as seguintes advert ncias S S 23 25 N o respirar vapores aerossol Evitar o contato com os olhos Observa es importantes e Os tubos que cont m o AmpliMIX e o AmpliPROBE s o descart veis e portanto devem ser utilizados uma nica vez na prepara o da mistura de rea o e Os tubos que cont m o AmpliSTANDARDO n o podem ser congelados e descongelados por mais de 8 vezes Ciclos sucessivos de congelamento descongelamento podem causar perda na titula o e Os tubos que cont m o CPE DNA n o podem ser congelados e descongelados
24. co e cola Rev 04 Out 2013 MATERIAIS NECESS RIOS E N O FORNECIDOS Equipamentos C mara de fluxo laminar Agitador tipo Vortex Microcentr fuga de mesa 12 000 14 000 RPM Micropipetas simples volume vari vel Real Time ABI PRISM 7000 completo com microcomputador Material de Consumo EPI Ponteiras com filtro gua ultrapura Tubos de microcentrifuga o 1 5 mL a 2 0 mL Amostras DNA extra do por metodologia definida pelo usu rio seguindo as normas e padr es de amostras exigidos na descri o abaixo CONDI ES DE ARMAZENAMENTO OMETRIX DIAGN STICA Componente C digo n Estocagem CMV Q PCR Alert AmpliMIX RTS015 M 4x 110 uL 20 C CMV Q PCR Alert AmpliPROBE RTK015 P 4x 110 uL 20 C CMV AmpliSTANDARD 10 1 x 50 uL 20 C CMV AmpliSTANDARD 10 STDO15 1 x 50 uL 20 C CMV AmpliSTANDARD 10 1 x 50 uL 20 C CMV AmpliSTANDARD 10 1 x 50 uL 20 C Componente C digo i ri Estocagem CPE DNA CTREXTG 4x 150 uL 20 C Q PCR Alert AmpliMASTER 4x 340 uL 2 8 C su as RTS000 3 RT amina adesiva par min as i 3 R PRECAU ES Este kit reservado para uso exclusivo em diagn stico in vitro Manuseio manusear o kit e as amostras com EPI adequado ao tipo de laborat rio onde os testes ser o realizados devido natureza da amostra material biol gico humano N o beber ou comer na rea de t
25. esultados obtidos com este produto devem ser interpretados considerando todos os dados cl nicos e os outros exames de laborat rio relativos ao paciente Como para qualquer outro dispositivo diagn stico existe um risco latente de obter resultados n o v lidos falsos positivos e falsos negativos com este produto Este risco res dual n o pode ser eliminado ou reduzido posteriormente Este risco residual em situa es particulares como os diagn sticos de urg ncia pode contribuir a decis es incorrectas com com consequ ncias graves para o paciente CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE aconselh vel confirmar o completo procedimento de an lises de cada sess o extra o e amplifica o utilizando uma amostra negativa e uma amostra positiva Como amostra negativa utilizar uma amostra negativa j testada ou ainda da gua bidestilada est ril Como amostra positiva utilizar uma amostra de plasma positiva para CMV com uma titula o de 1 000 genomas Equivalentes mL gEq mL preparado por material de refer ncia calibrado por exemplo PeliSpy CMV DNA Monitor 10000 AcroMetrix Europe B V the Netherlands VALORES DE REFER NCIA OBTIDOS EM POPULA ES SADIAS OU VALORES DEMOGR FICOS EPIDEMIOL GICOS ESTAT STICOS DESEJ VEIS TERAP UTICOS OU T XICOS N o existe este tipo de dado para a metodologia em quest o CARACTER STICAS DE DESEMPENHO Sensibilidade Anal tica Limite de Detec o A sensibilidade anal tica deste te
26. evitar incidentes com consequ ncias potencialmente graves para o utilizador ou outras pessoas Este produto requer roupa de trabalho EPI e rea de trabalho adequadas manipula o de amostras biol gicas que podem transmitir agentes infecciosos e de reagentes classificados como perigosos para evitar incidentes com consequ ncias potencialmente graves para o usu rio ou outras pessoas Este produto requer pessoal instru do para o procedimento de biologia molecular como a extra o a amplifica o e a detec o de cidos nucleicos para evitar resultados incorrectos Este produto requer uma rea separada para a extra o prepara o das rea es de amplifica o e para a amplifica o detec o dos produtos de amplifica o para evitar resultados falsos positivos reas de pr e p s PCR Este produto requer o uso de roupas de trabalho EPI e instrumentos destinados E OMETRIX p x ABB Rev 04 Out 2013 extra o prepara o das rea es de amplifica o e para a amplifica o detec o dos produtos de amplifica o para evitar resultados falsos positivos Um resultado negativo obtido com este produto indica que o DNA de CMV n o est detectado no DNA extra do da amostra mas n o poss vel descartar que o DNA de CW esteja presente a uma titula o inferior ao limite de detec o do produto neste caso o resultado ser um falso negativo Como para qualquer outro dispositivo diagn stico os r
27. modo eficiente o DNA do controle interno Neste caso problemas ocorreram na fase de amplifica o amplifica o n o eficiente ou nula ou na fase de extra o aus ncia de DNA ou presen a de inibidores que podem ter levado a resultados incorretos e falsos negativos A amostra n o adequada o teste n o v lido e deve ser repetido a partir da extra o de uma nova amostra Se o resultado da rea o de amplifica o de uma amostra cT Indeterminado para a probe especifica do CMV e cT lt 35 para a probe espec fica do controle interno o DNA de CMV n o foi detectado no DNA extra do da amostra mas n o poss vel descartar que o DNA de CMV esteja presente a uma titula o inferior ao limite de detec o do produto Neste caso o resultado ser um falso negativo Os resultados obtidos com este teste devem ser interpretados considerando todos os dados cl nicos e os outros exames de laborat rio relativos ao paciente OBS Quando na rea o de amplifica o relativa a uma amostra foi detectada a presen a de DNA de CMV a amplifica o do controle interno pode ter um cT gt 35 ou Indeterminado De fato a baixa efici ncia na rea o de amplifica o para o Controle Interno pode ser deslocada pela competi o com a alta efici ncia da rea o para o CMV Neste caso a amostra contudo adequada e o resultado positivo do teste v lido An lise quantitativa dos resultados Depois de realizar o procedimento
28. ndo de cada po o na placa de rea o de amplifica o conforme pr elaborado na planilha OBS Caso n o seja utilizada toda a mistura de reagentes elaborada este tubo identificado como CMV poder ser armazenado no escuro a 20 C por no m ximo um m s contanto que esta mistura seja congelada e descongelada somente uma vez 6 Transferir depositando os cuidadosamente no fundo de seu respectivo po o 5 yL de DNA extra do conforme posi o definida na planilha elaborada 7 Transferir depositando cuidadosamente no fundo do po o de controle negativo 5 uL de gua ultrapura 8 Transferir depositando os cuidadosamente no fundo de seu respectivo po o 5 pL AmpliSTANDARD 10 c pias conforme posi o definida na planilha elaborada na mistura de rea o Proceder de igual modo tomando se o cuidado de dispensar cada qual em seu po o 5 pL de AmpliSTANDARD com 10 10 10 c pias 9 Fechar a Microplaca de amplifica o com a L mina adesiva de amplifica o precavendo se de que a placa fique bem selada fazendo uso de acess rio adequado para tal procedimento 10 Transferir a placa de amplifica o para o termociclador Real Time que deve estar em rea es c fica e destinada para produtos amplificados p s PCR CALIBRA O DO PROCESSO DE MEDI O Para este tipo de ensaio e metodologia n o existe procedimento de calibra o para o processo de medi o IOMETRIX MMO A Rev 04 Out 2013
29. o para que os reagentes que estejam na parede ap s o descongelamento des am para o fundo do tubo e mant lo em gelo retirar e descongelar um n mero de tubos de AmpliPROBE iguais aos dos tubos de AmpliMIX Repetir o pulso nesses tubos para que seu conte do des a para o fundo do tubo Mant los em gelo retirar tantos tubos de AmpliMASTER quantos os tubos de AmpliMIX Escrever CMV e a data no tubo com caneta com tinta permanente Dar um pulso nos tubos para que os reagentes ap s descongelados des am para o fundo do tubo Mant los em gelo retirar e descongelar os tubos de AmpliSTANDARD necess rios Dar um pulso nos tubos para que os reagentes ap s descongelados des am para o fundo do tubo Mant los em gelo se necess rio cortar a placa de amplifica o para separar a parte que ser utilizada no ensaio tomando o devido cuidado de manipul la com luvas sem p e de n o causar danos aos po os durante o corte separa o 1 Transferir 100 uL de AmpliMIX no tubo de AmpliMASTER Misturar bem pipetando por tr s vezes o volume de 100 uL na mistura 2 Transferir 100 uL de AmpliPROBE no tubo de AmpliMASTER Misturar bem pipetando por tr s vezes o volume de 100 uL na mistura 3 Misturar por 5 segundos em Vortex a baixa velocidade evitando produ o de espuma 4 Centrifugar os tubos por 5 segundos pulso para que todo l quido escorra para o fundo do tubo 5 Transferir 20 uL da mistura de rea o obtida para o fu
30. o DNA de CMV testadas com COBAS AMPLICOR system Roche Molecular Systems Branchburg N J USA no sentido de obter uma carga viral para 10 000 gEq extra o a 1gEq extra o Os resultados s o referidos na tabela seguinte Intervalo linear de medida com amostras celulares Limite inferior Limite superior gEq extra o 316 20 000 000 sEq rea o 15 8 1 000 000 Para as amostras n o celulares o intervalo linear de medida foi verificado utilizando como material de refer ncia calibrado um painel de plasmas PeliCheck CMV DNA 99 AcroMetrix Europe B V the Netherlands com uma concentra o para 100 000 gEq mL a 1 sEq mL Os resultados s o referidos na tabela seguinte Intervalo linear de medida com amostras n o celulares Limite inferior Limite superior sEq mL 316 12 500 000 sEq rea o 25 3 1 000 000 O limite superior do intervalo linear de medida como gEq rea o foi fixado a 10 mol culas rea o dentro de um logaritmo do valor do standard de amplifica o AmpliSTANDARD de concentra o mais alta 10 mol culas rea o O limite superior do intervalo linear de medida como gEq extra o e sEq mL foi calculado do limite superior do intervalo linear de medida como gEq rea o conforme mostrado anteriormente Sensibilidade anal tica precis o O estudo da precis o do teste entendida como variabilidade dos resultados obtidos com diferentes repeti
31. o contaminado com Ficoll dextrana e hemoglobina Estas subst ncias inibem a rea o de amplifica o dos cidos nucleicos podendo causar resultados inv lidos N o est o dispon veis dados pertinentes a eventuais fenomenos de inibi o por parte dos medicamentos antivirais como o Ganciclovir ou o Foscarnet quimioter picos ou imunossupressores Os resultados obtidos com este produto dependem da correta coleta transporte conserva o e prepara o das amostras para evitar resultados incorretos necess rio portanto ter particular aten o durante estas fases e seguir atentamente as instru es fornecidas com os produtos para a extra o dos cidos nucleicos O m todo de amplifica o Real Time dos cidos nucleicos utilizados neste produto por causa da sua elevada sensibilidade anal tica est sujeito a contamina o por parte das amostras cl nicas positivas para o DNA de CMV dos controles positivos e dos mesmos produtos da rea o de amplifica o As contamina es levam a resultados falsos positivos A modalidade de realiza o do produto pode limitar as contamina es mas estes fen menos podem ser evitados somente com uma boa pr tica das t cnicas de laborat rio e seguindo atentamente as instru es fornecidas nestas Instru es de Uso Este produto requer pessoal instru do para as manipula es de amostras biol gicas que podem transmitir agentes infecciosos e de reagentes classificados como perigosos para
32. os S I L l I k Jj j jk j I O C CO j j j AA j G a 2 KAY vyr NV N K UK N D INNAN DD IN G v Ds WWW a k RS RS RR NR NR NA XXX ZN 2 G id a id Res a OS IN PN IN PINA UOK AN AIN IN A PINA PV VW a a 4 XAY b s N N ZK X IN IN ANNANLA SNS NONO 000 Wa j N D PN IN A A Significado S1 S11 Amostras para analisar NC Controle negativo de amplifica o 102 Padr o 10 c pias 10 Padr o 10 c pias 10 Padr o 10 c pias 10 Padr o 10 c pias q Consultando o Manual do equipamento programar no termociclador os par metros do ciclo t rmico e um volume de rea o de 25 uL Para equipamentos Applied Biosystems ABI PRISMTM da s rie 7000 escolher a op o 9600 emulation Ciclo t rmico para amplifica o Desnatura o inicial 95 C 10 min 95 C 15 seg 45 ciclos 60 C 1 min b Prepara o da amplifica o Antes de iniciar necess rio retirar e descongelar os tubos com as amostras para analisar Centrifugar os tubos para que o material ap s descongelamento des a para o fundo do tubo e mant lo em gelo retirar e descongelar os tubos de AmpliMIX necess rios para o processo lembrando que o conte do de cada tubo suficiente para preparar 24 rea es Centrifugar os SR SRAMtfMfMfMfP PNQR lt R lt RDRARASRA QP P O R CIR lt zT BP jTTTH fjfjHYKS s tubos por 5 segundos puls
33. rabalho A rea de trabalho deve ser um ambiente limpo e com ventila o adequada Trabalhar dentro de capela de exaust o fluxo laminar N o manuseiar o kit sem luvas 3 n IOMETRIX EF Rev 04 Out 2013 Advert ncias e precau es gerais Manipular e eliminar todas as amostras biol gicas reagentes e materiais usados como se fossem agentes infecciosos Evitar o contato direto com as amostras biol gicas Evitar a forma o de aerossol durante o procedimento evitar respingar material ao redor da rea de trabalho ou fora dela O material que est em contato com as amostras biol gicas deve ser tratado com Hipoclorito de s dio a 3 pelo menos por 30 minutos ou ainda tratado em autoclave a 121 C durante uma hora antes de ser eliminado O material descart vel se combust vel deve ser incinerado Os res duos l quidos que cont m cidos ou bases devem ser neutralizados antes da elimina o N o pipetar nenhuma solu o com a boca Lavar bem as m os depois de haver manipulado as amostras e os reagentes Eliminar reagentes e res duos conforme as normas vigentes Ler todas as instru es fornecidas no kit antes de realizar o teste Respeitar as instru es fornecidas no kit durante a execu o do teste Respeitar a data de validade do kit Utilizar somente os reagentes presentes no kit e aqueles aconselhados pelo fabricante N o intercambiar reagentes procedentes de diferentes lotes N o utilizar re
34. ste permite determinar uma titula o de 1 000 000 a 20 mol culas de DNA branco nos 5 uL de DNA extra do e acrescentado rea o de amplifica o O ensaio de sensibilidade anal tica como limite de detec o foi determinado pelo uso de dois pain is de CMV cepa AD169 com dilui es dentro de concentra es limites Cada amostra de painel foi empregada 29 ou 14 replicatas para executar o completo procedimento de an lise extra o e amplifica o referir se ao tem 9 a kits acess rios A an lise estat stica do dado obtido foi acompanhado pela regress o Probit Os limites de detec o foram calculados pelas concentra es na qual a probabilidade de se obter resultados positivos 95 e 50 Para amostras celulares o limite de detec o foi determinado pelo usando como material de refer ncia calibrado um painel de plasma PeliCheck CMV DNA 99 AcroMetrix Europe B V The Netherlands que foi inoculado em c lulas negativas com DNA CMV testado 13 T Rev 04 Out 2013 em sistema COBAS AMPLICOR Roche Molecular Systems Branchburg N J USA para que fosse obtido uma carga viral de 10 000gEq extra o a 1gEq extra o Os resultados s o reportados conforme tabela a seguir Limite de Detec o para amostras celulares gEq extra o 95 intervalo de confian a Limite menor Limite maior 95 positividade 105 gEq extr 349 gEq extr 50 positividade 169 gEq extr 25
35. tigliera Alta TO It lia m r r r r rr rr sssi aa Rev 04 Out 2013 REGISTRO ANVISA 80298490047 RESPONS VEL T CNICA Edna Cristina Kurokawa Guimaraes Ferreira CRQ PR 09302336 Aprova o 20 12 2013 x YO Maur cio Cichon Laborat rio Assinado por Maur cio Cichon WORKSHEET 12 11 10 ATTACHMENT
36. tilizando um sobrenadante de cultura positiva para o DNA de HHV6 testado dilu do em uma amostra de plasma normal Normal Human Plasma AcroMetrix Europe B V the Netherlands Todas as repeti es s o resultados negativos para o DNA de CMV como ilustrado na tabela seguinte Amostras N Positivos Negativos Sobrenadante de cultura positivo para o DNA de HHV6 Plasma normal 15 0 15 Resist ncia Contamina o cruzada A resist ncia do teste como aus ncia de contamina o cruzada foi verificada analisando os resultados das seis sess es em que amostras negativas para o DNA de CMV s o alternadas a amostras fortemente positivas para o DNA de CMV Seis s ries de amostras alternando tr s amostras positivas com duas amostras negativas foram empregadas para realizar o completo procedimento de an lises extra o e amplifica o Para as amostras celulares a aus ncia de contamina o cruzada foi verificada utilizando algumas amostras de c lulas positivas para o DNA de CMW e elevada titula o testadas com COBAS AMPLICOR System Roche Molecular Systems Branchburg N J USA e uma amostra de c lulas negativas para o DNA de CMV testado com COBAS AMPLICOR system Roche Molecular Systems Branchburg N J USA Nenhuma amostra negativa para o DNA de CMV resultou positiva para contamina o como ilustrado na tabela seguinte Amostras N Positivos Negativos C lulas positivas para o DNA de CMV 18 18 0 C
37. utilizando um painel de amostras de c lulas positivas para o DNA de CMV testadas com COBAS AMPLICOR system Roche Molecular Systems Branchburg N J USA com um intervalo de cargas virais para 120 gEq milh o de c lulas para 4 410gEq milh o de c lulas Os resultados s o referidos na tabela seguinte Amostras N Positivos Negativos Painel de c lulas positivas para o DNA de CMV 60 53 7 As discord ncias entre os resultados obtidos com este produto e os resultados obtidos com o COBAS AMPLICOR System podem ser entendidos com a heterogeneidade das amostras celulares positivas com baixa carga viral As poucas c lulas positivas se distribuem casualmente nas diversas divis es que podem ainda resultar com uma titula o superior ou inferior ao limite de detec o do teste Especificidade diagn stica amostras negativas A especificidade diagn stica do teste como confirma o das amostras cl nicas negativas foi verificada interpretando as an lises de dois pain is de amostras negativas para SIOMETRIX EEE SE GEE E ESSE ai DIAGNOSTICA n IOMETRIX E Rev 04 Out 2013 o DNA de CMV e com resultado igual a 90 para as amostras celulares e maior ou iguais a 98 3 para as amostras n o celulares Cada amostra dos dois pain is foi empregada para realizar o completo procedimento de an lises extra o e amplifica o Para as amostras celulares a especificidade diagn stica foi avaliada utiliz
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