SeroFIA™ C. pneumoniae
Contents
1. es do Teste 1 Para o diagn stico final n o deve ser usado um teste serol gico nico Devem se ter em conta todos os dados cl nicos e laboratoriais 2 As amostras obtidas muito cedo durante a infec o prim ria podem n o conter anticorpos detect veis Se se suspeitar de infec o por Chlamydia deve se obter uma segunda amostra 2 3 semanas mais tarde e ser testada em paralelo com a amostra inicial 3 A reactividade do soro com m ltiplas esp cies de Chlamydia pode se dever exposi o a mais do que uma esp cie de Chlamydia ou a anticorpos com reactividade cruzada 4 A determina o da intensidade de fluoresc ncia geral e t tulos finais pode ser afectada pelas condi es do microsc pio fontes e tipos de luz Caracter sticas de Desempenho Estudo efectuado num centro m dico independente com doentes com suspeita de infec o C pneumoniae Resultados C pneumoniae obtidos pelo SeroFIATM IgG vs MIF de refer ncia O a Total Positivo Negativo Sensibilidade 120 120 x 100 100 Especificidade 60 62 x 100 96 7 Concord ncia 180 182 x 100 98 9 Oo 122 182 Resultados C pneumoniae obtidos pelo SeroFIA IgA vs MIF de refer ncia d o Positivo 39 0 3 Negativo 0 74 74 Sensibilidade 39 39 x 100 100 Especificidade 74 74 x 100 100 Concord ncia 113 113 x 100 100 Resultados C pneumoniae obtidos pelo SeroFIA IgM vs MIF de refer2. Este kit cont m soros humanos que foram testados e considerados negativos por t cnicas aprovadas pela FDA CE para antig nio HBV e para anticorpos HCV e VIH 1e2 Dado que nenhum m todo pode oferecer completa seguran a que os produtos derivados de sangue humano n o transmitem infec o todos os componentes de sangue humano fornecidos neste kit t m de ser manuseados como soro ou sangue potencialmente infecciosos de acordo com as recomenda es publicadas no manual CDC NIH Biosafety in Micro Biological and Biomedical Laboratories 1988 O material antig nico clamidial que reveste as l minas foi inactivado e n o cont m organismos vivos detect veis Contudo como nenhum m todo pode asseguar completamente que os produtos derivados de organismos patol gicos n o transmitem infec o as l minas devem ser manuseadas como qualquer material potencialmente infeccioso de forma id ntica ou similar s recomenda es publicadas no manual CDC NIH Biosafety in Micro biological and Biomedical Laboratories 1988 A azida s dica pode formar azidas de chumbo ou cobre explosivas nas canaliza es dos laborat rios Para evitar a acumula o destes componentes passar fluxos abundantes de gua ap s a elimina o de solu es contendo azida N o pipetar com a boca Evitar o contacto da pele com qualquer dos reagentes do kit Utilizar luvas descart veis ao manusear os soros e efectuar o teste Lavar cuidadosamente as m os ap
3. ncia D Total Positivo 8 Negativo Sensibilidade 18 19 x 100 94 7 Especificidade 123 127 x 100 96 8 Concord ncia 141 146 x 100 96 6 Bibliografia 1 Piura B Sarov l Sarov B Kleinman D Chaim W and Insler V 1985 Serum IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by the immunoperoxidase assay Eur J Epidemiol 1 110 116 2 Tsunekawa T and Kumamoto Y 1989 A study of IgA and IgG titers of C trachomatis in serum and prostatic secretion in chronic prostatitis J J A Inf Dis 63 2 130 137 990 01P 05 11 18 6 10 11 12 13 14 Kaneti J et al 1988 IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in acute epididymits Europ Urol 14 323 327 Kletter Y Caspi D Yarom M Sarov B Sarov l and Tanay A 1988 Serum IgA and IgG Antibodies Specific to Chlamydia in Patients with Rieter s Syndrome RS In Proceedings of The European Society for Chlamydia Research Societa Editrice Esculapio Bologna p 170 Stutman H R Rettig P J and Reyes S 1984 Chlamydia trachomatis as a cause of Pneumonitis and pleural effusion J Pediat 104 588 591 Paran H Heimer D and Sarov I 1986 Serological clinical and radiological findings in adults with broncho pulmonary infections caused by Chlamydia trachomatis Isr J Med Sci 22 823 827 Grayston J T Campbell L A Kuo C C Mordh
4. pela comunidade Tem sido associada com doen as respirat rias agudas pneumonia asma bronquite faringite s ndrome respirat rio agudo da anemia das c lulas falciformes doen as coron rias e s ndrome de Guillain Barre 7 9 A C psittaci infecta uma vasta gama de esp cies desde moluscos aves e mam feros e tamb m causa pneumonia grave 590 01P 05 11 18 1 Os testes serol gicos s o usados por rotina no diagn stico das infec es por Chlamydia Servem como m todos n o invasivos na identifica o de infec es clamidiais distais e cr nicas 10 11 nas quais os m todos de detec o directos s o raramente eficazes Al m disso a presen a de certos tipos de anticorpos tamb m pode indicar o estado da doen a A infec o clamidial prim ria caracterizada por uma resposta predominantemente IgM nos espa o de 2 a 4 semanas e uma resposta IgG e IgA tardia no espa o de 6 a 8 semanas Ap s uma infec o aguda por C pneumoniae os anticorpos IgM geralmente desaparecem em 2 a 6 meses 12 os t tulos de anticorpos IgG aumentam e geralmente diminuem lentamente enquanto que os anticorpos IgA tendem a desaparecer rapidamente 13 As reinfec es clamidiais s o caracterizadas pela aus ncia de resposta IgM e respostas IgG e IgA imediatas 9 Os anticorpos IgA demonstraram ser um marcador imunol gico de confian a para infec es prim rias cr nicas e recorrentes Em geral estes anticorpos descem rapidamente a
5. s retirar as luvas 7 Qualquer equipamento l quido ou outras subst ncias que entrem em contacto directo com soro humano devem ser consideradas potencialmente contaminadas Dever o ser esterilizadas ou inactivadas ap s utiliza o e antes de serem limpas A inactiva o pode ser conseguida em autoclave a 121 C durante pelo menos uma hora ou fazendo um tratamento com uma solu o de hipoclorito de s dio lix via a 5 de concentra o final durante pelo menos 30 minutos O Conjugado FITC cont m Evans Blue que carcinog nico Evitar o contacto com a pele e olhos O Meio de Montagem cont m componentes corrosivos Evitar o contacto com a pele e n o inalar Em caso de contacto com a pele e olhos lavar imediatamente com gua abundante Armazenamento e Validade dos Reagentes Procedimento para IgG Todos os materiais fornecidos devem ser armazenados a 2 8 C Se mantidos a 2 8 C os reagentes s o est veis at data de validade indicada na embalagem N o utilizar os componentes para al m das datas de validade A exposi o dos componentes do kit temperatura ambiente por poucas horas n o causar danos aos reagentes N o expor os reagentes a luz forte N o congelar os reagentes Colheita e Prepara o das Amostras Colheita do Soro Preparar o soro a partir de amostras colhidas assepticamente por t cnicas padr o standard N o deve ser usado soro inactivado pelo calor N o recomendada a
6. em pelo menos quarto vezes indica a esp cie de Chlamydia respons vel pela infec o Recomenda se a seguinte interpreta o dos resultados Chlamydia pneumoniae IgG gt 1 64 and lt 1 512 Infec o em tempo indeterminado Deve ser testada uma segunda amostra colhida 2 3 semanas mais tarde Se a segunda amostra apresentar um t tulo de IgG gt 1 512 ou um aumento de quatro vezes sobre a amostra inicial uma infec o corrente T tulos n o alterados podem sugerir infec o passada Indica o de infec o corrente Nota Em casos raros pode se observar uma marca o clara e densa de part culas muito pequenas menores que os EBs em um ou mais dos antig nios Esta marca o pode representar reactividades devidas ao LPS Devem ser feitos testes para anticorpos IgA e IgM ou testar uma segunda amostra de soro colhida 2 3 semanas depois Se os IgM e IgA forem negativos e os resultados IgG se repetirem a amostra deve ser considerada negativa 590 01P 0511 18 4 Procedimento para IgA Prepara o da Amostra Para o despiste inicial screening diluir o soro 1 32 em Diluente de Soro adicionando 10ul de soro a 310ul de Diluente de Soro Para determinar os t tulos finais fazer dilui es seriadas a come ar de 1 32 Nota Para cada ensaio recomenda se testar um po o com Controlo Negativo e um po o com Controlo Positivo IgA Controlo positivo pode ser utilizado como controlo end point da reac o quando
7. n veis base ap s o tratamento e erradica o da infec o clamidial 1 6 10 11 A persist ncia de t tulos de anticorpos IgA elevados geralmente considerada como um sinal de infec o cr nica 13 Num estudo efectuado em indiv duos de certa idade com infec es respirat rias estimou se que um quinto dos casos de C pneumoniae n o seria detectado sem a determina o de antocorpos IgA 14 Os anticorpos IgG persistem por longos per odos e diminuem muito lentamente Assim a presen a de anticorpos IgG basicamente indicativa de uma infec o clamidial numa altura indeterminada Contudo um aumento de quatro vezes dos anticorpos IgG ou n veis elevados de anticorpos IgG podem indicar uma infec o cr nica ou sist mica em curso O teste SeroFIATM C pneumoniae um ensaio micro lF baseado nos princ pios da MIF O SeroFIATM C pneumoniae utiliza como antig nio corpos elementares purificados de C pneumoniae TW 183 Princ pio do teste Corpos elementares purificados Ebs de C pneumoniae s o fixados nos po os das l minas SeroFIATM cada um em sua fila da l mina As amostras dilu das s o incubadas 30 minutos a 37 C com os respectivos antig nios Os componentes s ricos n o ligados s o eliminados por lavagem Adiciona se um conjugado anti IgG IgM ou IgA humana marcado com Fluoresce na e incuba 30 minutos a 37 C O conjugado n o ligado eliminado por lavagem As l minas s o secas e adic
8. no escuro a 2 8 C at 3 dias 590 01P 0511 18 5 Aspecto da Fluoresc ncia no t tulo Interpreta o Presen a de anticorpos IgM espec ficos para C pneumoniae Um t tulo de gt 1 20 considerado como poss vel evid ncia de infec o Indica o de poss vel exposi o a C pneumoniae E requerida uma segunda amostra para teste ap s 2 4 semanas Negativo N veis de anticorpos IgM para C pneumoniae n o detect veis Quando se testar uma segunda amostra colhida 2 4 semanas depois devem ser testadas em simult neo a primeira e a segunda amostras Se um resultado indeterminado obtido novamente a amostra deve ser considerada negativa Significado dos T tulos de IgM Finais Se forem necess rios resultados semi quantitativos devem ser efectuadas titula es para determinar o t tulo final Para obter um perfil de anticorpos mais abrangente laM IgG e IgA devem ser tamb m testados Interpreta o de resultados baseada nas combina es de anticorpos IgG IgA e IgM N veis de anticorpos Interpreta o dos C pneumoniae Resultados Nenhuma indica o de Negativo Negativo infec o por C pneumoniae Negativo Negativo Positivo OU ou Positivo Positivo Negativo Indica o de infec o corrente Indica o de infec o Positivo Negativo passada ou corrente Negativo Positivo Negativo ou Negativo Indica o de infec o Positivo corrente ou cr nica Limita
9. utiliza o de soro lip mico turvo ou contaminado Soros com part culas e precipitados podem conduzir a falsos resultados Tais amostras devem ser limpas por centrifuga o ou filtra o antes de serem testadas Armazenamento As amostras devem ser armazenadas a 2 8 C e testadas em 7 dias recomenda se a adi o de azida s dica 0 1 Se se prever um per odo de armazenamento maior aliquotar e armazenar as amostras a menos de 20 C Evitar ciclos de congelamento descongelamento Valida o do teste Para que o teste seja v lido devem ser reunidos os seguintes crit rios Caso isso n o aconte a o teste deve ser considerado inv lido e deve ser repetido 1 O Controlo Positivo apresenta uma fluoresc ncia verde ma moderada a intensa das part culas Eb da Chlamydia pneumoniae 2 O Controlo Negativo apresenta reactividade negligenci vel com Chlamydia pneumoniae Interpreta o e Significado dos Resultados Recomenda se fazer primeiro a leitura dos po os controlo para assegurar a correcta interpreta o dos resultados do teste Ler a fluoresc ncia das amostras cl nicas e classificar da seguinte forma Moderada a intensa distinta ou difusa fluoresc ncia verde ma dos corpos elementares Fluoresc ncia definida mas esbatida dos corpos elementares Deve ser considerada como o t tulo final do Soro O t tulo final de um soro definido como a ltima dilui o que ainda apresenta marca o v
10. CE oro SeroFIATM C pneumoniae Ensaio de Imunofluoresc ncia para a detec o de anticorpos IgG IgA e IgM espec ficos para C pneumoniae em soro humano Manual de Instru es Kit para 105 determina es Ref 590 01 Para uso em Diagn stico In Vitro Armazenar a 2 8C N o congelar Apenas para uso profissional Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com Utiliza o SeroFIA C pneumoniae um ensaio de imunofluoresc ncia semi quantitativo para a determina o diferencial de anticorpos IgG IgA e IgM espec ficos para C pneumoniae numa amostra de soro humano nica Para uso em Diagn stico In Vitro Introdu o A Chlamydia uma bact ria Gram negativa altamente especializada composta por quatro esp cies C trachomatis C pneumoniae TWAR C psittaci e C pecorum A C trachomatis inclui 15 serotipos que partilham epitopos imunog nicos em v rios graus A C trachomatis a principal doen a sexualmente transmiss vel e est associada com a uretrite n o gonorreica NGU e epididimite nos homens cervicite uretrite e doen a inflamat ria p lvica nas mulheres s ndrome de Reiter em indiv duos com haplotipo HLA B27 e conjuntivite n onatal e pneumonia em rec m nascidos 2 6 A C pneumoniae um importante patog nio respirat rio no Homem e causa at 10 dos casos de pneumonia adquirida
11. Repetir o enxaguamento e lavagem das l minas como no passo 5 9 Colocar 3 gotas de Meio de Montagem no centro de cada l mina Cobrir com a lamela fornecida Remover as bolhas de ar pressionando suavemente a lamela 10 Ler os resultados num microsc pio de fluoresc ncia a uma magnitude de 400x ou 1000x Para obter melhores resultados ler as l minas no mesmo dia em que o ensaio efectuado Se tal n o for poss vel as l minas podem ser armazenadas no escuro a 2 8 C at 3 dias Soria Aspecto da Fluoresc ncia no t tulo 1 64 Interpreta o Presen a de anticorpos IgG espec ficos para C pneumoniae necess rio o t tulo final para determinar se uma infec o corrente recente ou passada Indica o de poss vel exposi o a C pneumoniae E requerida uma segunda amostra para teste ap s 2 4 semanas Negativo N veis de Anticorpos IgG para C pneumoniae n o detect veis Quando se testar uma segunda amostra devem ser testadas em simult neo a primeira e a segunda amostras Se um resultado indeterminado novamente obtido a amostra deve ser considerada negativa Significado dos T tulos IgG Finais O t tulo final necess rio para a determina o de uma infec o corrente recente ou passada especialmente em casos de infec es por C pneumoniae Se for detectada reactividade marca o fluorescente com mais de uma esp cie de Chlamydia o antig nio que demonstrar o t tulo final mais elevado
12. a usar 1 frasco 0 2ml IgG Conjugado FITC AntilgG humana de Coelho conjugada a Fluoresce na espec fica da cadeia y Pronto a usar 1 frasco 3 3ml IgA Conjugado FITC Anti lgA humana de Coelho conjugada a Fluoresce na espec fica da cadeia a Pronto a usar 1 frasco 3 3ml IgM Conjugado FITC AntilgM humana de Coelho conjugada a Fluoresce na espec fica da cadeia u Pronto a usar 1 frasco 3 3ml Reagente de Inactiva o IgG Anti lgG humana com lt 0 1 azida s dica S para IgM 1 frasco 4ml Meio de Montagem Cont m lt 0 1 azida s dica 1 frasco conta gotas 1 5ml Lamelas 1 unidade Manual de Instru es 1 Material Necess rio mas N o Fornecido 1 2 3 Placas de microtitula o limpas ou tubos para a dilui o do soro dos doentes Centr fuga Micropipetas ajust veis 5 50 microlitros e pontas descart veis 50 200 200 1000 590 01P 05 11 18 2 D p Bal o volum trico 1 litro Vortex Banho a 37 C com tampa ou c mara humida colocada numa incubadora a 37 C Tabuleiro de pl stico para a incuba o das l minas Agua destilada ou Bi desionizada para a dilui o do Tamp o de Lavagem Concentrado Esguichos de pl stico Suporte de l minas e de colora o Cron metro Microsc pio de fluoresc ncia com filtros adequados a leituras de fluoresc ncia FITC e com magnitudes de 400x e 1000x Avisos e Precau es Para uso em Diagn stico In Vitro 1 A
13. corpos IgA espec ficos para C pneumoniae Um t tulo de 1 32 considerado como poss vel evid ncia de infec o Indica o de poss vel exposi o a C pneumoniae E requerida uma segunda amostra para teste ap s 2 4 semanas Negativo N veis de anticorpos IgA para C pneumoniae n o detect veis Quando se testar uma segunda amostra devem ser testadas em simult neo a primeira e a segunda amostras Pacientes com infec o corrente a C pneumoniae mostram um aumento do t tulo de anticorpos Se um resultado indeterminado novamente obtido a amostra deve ser considerada negativa Nota Em casos raros pode se observar uma marca o clara e densa de part culas muito pequenas menores que os EBs em um ou mais dos antig nios Esta marca o pode representar reactividades devidas ao LPS Devem ser feitos testes para anticorpos IgG e IgM ou testar uma segunda amostra de soro colhida 2 3 semanas depois Se os IgM e IgG forem negativos e os resultados IgA se repetirem a amostra deve ser considerada negativa Procedimento para IgM Prepara o da Amostra 1 Adicionar 5ul de cada amostra a 45ul de Reagente de Inactiva o IgG Vortex suavemente 2 A cada um dos 50ul de soro tratados adicionar 50ul de Diluente de Soro A dilui o final obtida neste passo 1 20 Para determinar os t tulos finais fazer dilui es seriadas a come ar de 1 20 Nota Para cada ensaio recomenda se testar um po o com Controlo Negati
14. dilu do de 1 128 1 Colocar todos os componentes e amostras cl nicas a serem testados temperatura ambiente 2 Diluiro Tamp o de Lavagem Concentrado 1 20 adicionando 50ml de Tamp o de Lavagem Concentrado a 950ml de gua destilada ou Bi desionizada O tamp o dilu do pode ser armazenado a 2 8 C at 2 semanas 3 Pipetar 10ul de controlos e soros dilu dos nos po os apropriados 4 Incubar as l minas em c mara h mida a 37 C durante 30 minutos 5 Remover as l minas da c mara h mida e enxaguar cuidadosamente cada l mina com um esguicho de Tamp o de Lavagem dilu do Lavar as l minas num copo de colora o submergindo as em Tamp o de Lavagem dilu do Deixar durante 10 minutos Mergulhar as l minas lavadas em gua Bi destilada Remover e secar ao ar Pipetar 10ul de Conjugado FITC em cada po o Incubar a 37 C durante 30 minutos Repetir o enxaguamento e lavagem das l minas como no passo 5 9 Colocar 3 gotas de Meio de Montagem no centro de cada l mina Cobrir com a lamela fornecida Remover as bolhas de ar pressionando suavemente a lamela 10 Ler os resultados num microsc pio de fluoresc ncia a uma magnitude de 400x ou 1000x Para obter melhores resultados ler as l minas no mesmo dia em que o ensaio efectuado Se tal n o for poss vel as l minas podem ser armazenadas no escuro a 2 8 C at 3 dias Pora Aspecto da Fluoresc ncia no t tulo 1 32 Interpreta o Presen a de anti
15. ionam se 3 gotas de Meio de Montagem Flu do As l minas s o examinadas num microsc pio de fluoresc ncia As reac es positivas aparecem com uma fluoresc ncia verde ma dos Ebs contra um fundo escuro A determina o qualitativa consegue se com uma nica dilui o do soro Os resultados semi quantitativos resultam de t tula es seriadas Conte do do Kit 1 10 11 12 13 14 L minas 3x7 po os unidade L minas revestidas com antig nios C pneumoniae Cada l mina est embalada numa saqueta de alum nio com um pacote de gel de silica 5 unidades Tamp o de Lavagem Concentrado x20 Tamp o PBS Tween pH 7 4 7 6 que cont m NaCl Na gt zHPO4 KH2PO e Tween 20 1 frasco 100ml Diluente de Soro Tamp o PBS Cont m gelatina albumina bovina s rica MgCl gt e lt 0 1 azida s dica 1 frasco 80ml Controlo Negativo Soro humano negativo para anticorpos IgG IgA e IgM para C pneumoniae C trachomatis C psittaci Cont m lt 0 1 azida s dica Pronto a usar 1 frasco 0 5 ml Controlo Positivo IgG Soro humano positivo para anticorpos IgG para C pneumoniae Cont m lt 0 1 azida s dica Pronto a usar 1 frasco 0 2ml Controlo Positivo IgA Soro humano positivo para anticorpos IgA para C pneumoniae Cont m lt 0 1 azida s dica Pronto a usar 1 frasco 0 2m l Controlo Positivo IgM Soro humano positivo para anticorpos IgM para C pneumoniae Cont m lt 0 1 azida s dica Pronto
16. is vel A dilui o seguinte apresentar se como um soro negativo Fluoresc ncia de fundo fraca ou ausente sem morfologia 590 01P 0511 18 3 Prepara o da Amostra Para o despiste inicial screening diluir o soro 1 64 em Diluente de Soro adicionando 10ul de soro a 630ul de Diluente de Soro Para determinar os t tulos finais fazer dilui es seriadas a come ar de 1 64 Nota Para cada ensaio recomenda se testar um po o com Controlo Negativo e um po o com Controlo Positivo IgG Controlo positivo pode ser utilizado como controlo end point da reac o quando dilu do de 1 64 1 Colocar todos os componentes e amostras cl nicas a serem testados temperatura ambiente 2 Diluiro Tamp o de Lavagem Concentrado 1 20 adicionando 50ml de Tamp o de Lavagem Concentrado a 950ml de gua destilada ou Bi desionizada O tamp o dilu do pode ser armazenado a 2 8 C at 2 semanas 3 Pipetar 10ul de controlos e soros dilu dos nos po os apropriados 4 Incubar as l minas em c mara h mida a 37 C durante 30 minutos 5 Remover as l minas da c mara h mida e enxaguar cuidadosamente cada l mina com um esguicho de Tamp o de Lavagem dilu do Lavar as l minas num copo de colora o submergindo as em Tamp o de Lavagem dilu do Deixar durante 10 minutos Mergulhar as l minas lavadas em gua Bi destilada Remover e secar ao ar Pipetar 10ul de Conjugado FITC em cada po o Incubar a 37 C durante 30 minutos
17. onen M H Sryjala P Kujala and P Saikku 1991 Serological diagnosis of Chlamydiae pneumoniae Cpn pneumoniae in adults In Abstracts of 31st ICAAC Chicago Illinois Sept 29 Oct 2 1991 Washington D C Aner Soc Microbiol p 209 CE oro European Authorized Representative Obelis s a Boulevard G n ral Wahis 53 1030 Brussels BELGIUM Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 32 60 03 E Mail mailDobelis net
18. orst C H Saikku P Thom D H and Wang S P 1990 A new respiratory tract pathogen Chlamydia pneumoniae strain TWAR J Infect Dis 161 618 625 Hahn D L Dodge R W and Golubjatnikow R 1991 Association of Chlamydia pneumoniae strain TWAR infection with wheezing asthmatic bronchitis and adult onset asthma JAMA 266 225 230 Saikku P Mattila K Nieminen M S Huttunen J K Leinonen M Ekman M R Makela P H and Valtonen V 1988 Serological evidence of an association of a novel Chlamydia TWAR with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection Lancet Il 983 986 Sarov l Kleinman D Cevenini R Holcberg G Potashnik G Sarov B and Insler V 1986 Specific IgG and IgA antibodies to Chlamydia trachomatis in infertile women Int J Fertil 31 3 193 197 Puolakkainen M Saikku P Leinonen M Nurminen M Vaananen P and Makela P H 1984 Chlamydia pneumonitis and its serodiagnosis in infants J Infect Dis 149 598 604 Grayston J T L A Campbell C H Mordhorst P Saikku D Thom and S P Wang 1989 A New Respiratory Pathogen Chlamydia pneumoniae Strain TWAR J Inf Dis 161 618 25 Saikku P M Leinonen L Tenkanen E Linnanmaki M R Ekman V Manninen M Manttari M H Frick J K Huttunen 1992 Chronic Chlamydiae pneumoniae Infection as a Risk Factor for Coronary Heart Disease in the Helsinki Heart Study Ann of Int Med 116 273 278 Lein
19. vo e um po o com Controlo Positivo IgM Controlo positivo pode ser utilizado como controlo end point da reac o quando dilu do de 1 64 1 Colocar todos os componentes e amostras cl nicas a serem testados temperatura ambiente 2 Diluiro Tamp o de Lavagem Concentrado 1 20 adicionando 50ml de Tamp o de Lavagem Concentrado a 950ml de gua destilada ou Bi desionizada O tamp o dilu do pode ser armazenado a 2 8 C at 2 semanas 3 Pipetar 10ul de controlos e soros dilu dos nos po os apropriados 4 Incubar as l minas em c mara h mida a 37 C durante 90 minutos 5 Remover as l minas da c mara h mida e enxaguar cuidadosamente cada l mina com um esguicho de Tamp o de Lavagem dilu do Lavar as l minas num copo de colora o submergindo as em Tamp o de Lavagem dilu do Deixar durante 10 minutos Mergulhar as l minas lavadas em gua Bi destilada Remover e secar ao ar 6 Pipetar 10ul de Conjugado FITC em cada po o 7 Incubar a 37 C durante 30 minutos 8 Repetir o enxaguamento e lavagem das l minas como no passo 5 9 Colocar 3 gotas de Meio de Montagem no centro de cada l mina Cobrir com a lamela fornecida Remover as bolhas de ar pressionando suavemente a lamela 10 Ler os resultados num microsc pio de fluoresc ncia a uma magnitude de 400x ou 1000x Para obter melhores resultados ler as l minas no mesmo dia em que o ensaio efectuado Se tal n o for poss vel as l minas podem ser armazenadas
Download Pdf Manuals
Related Search