5610 Bordetella pertussis
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1. genesox DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410946 fax 351 231 410947 e mail info genebox com 24 C digo do Produto 5610 Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 Dispositivo para utiliza o in vitro Manual de I nstru es ogo eo geneBox 000 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO Vers o1 1 Abril de 2011 Refer ncias 1 Espy M Uhl J Sloan L Buckwalter S Jones M Vetter E Yao J Wengenack Apresenta o teses tas rs pinto 4 N Rosenblatt J Cockerill F Smith F Real Time PCR in Clinical Microbiology Applications for Routine LaBPERatory Testing Clin Microbiol Rev 2006 Altera es e Melhoramento do produto 4 19 1 165 256 Controlo da Qualidade i isisssisssrsrssrrsirsaraissiseisasnassasaasasinnsanaaia 5 a so ms ed so 2 K sters K Riffelmann M Wirsing von K nig CH Evaluation of a real time Sensibilidade e Especificidade sesesesesmesmeseseeamss 5 PCR assay for detection of Bordetella pertussis and B parapertussis in clinical Componentes do Bordetella pertussis Box 1 0 Kit 6 samples J Med Microbiol 2001 May 50 5 436 40 Protocolo de amplifica o por PCR sssssssssrssessrsserssrssrrsereres 1 3 Anderson TP Beynon KA Murdoch DR Comparison of real time PCR and Pr AN N S2. 1 4 Pr an lise 1 Colheita de amostras Para garantir um teste de alta qualidade das amostras devem ser colhidas nas seguintes condi es A Plasma e soro A amostra de sangue deve ser colhida para Tubos de colheita 2 10ml BD Vacutainer Blood EDTA ou Tubos de colheita Vacutainer BD Blood Serum vidro ou pl stico Alternativamente podem ser usados tubos de colheita com marca o CE de outras marcas N O UTILIZAR AMOSTRAS HEPARINIZADO COM ESTE M TODO B Zaragatoas A amostra deve ser colhida com uma zaragatoa Dacron de pl stico Alternativamente podem ser usadas zaragatoas de pl stico com marca o CE de outras marcas N o use zaragatoas de alum nio ou madeira Ap s a colheita as amostras podem ser transportados em meio de cultura 1 2 ml como nos seguintes exemplos STM AMPLICOR meio de transporte da amostra Roche Inc Kit para colheita de zaragatoas Digene Corporation M dio de PBS a 10 Home made Precau o Todas as amostras t m de ser tratadas como material potencialmente infeccioso NOTA Os Nossos Kits tamb m podem ser usado com amostras de fezes e urina desde que se utilize um kit de extrac o adequado 2 Armazenamento da Amostra A sensibilidade do teste pode ser reduzida com o processo repetitivo de congela o descongela o ou com longos per odos de armazenamento Protocolo de amplifica o por PCR 2 4 A Plasma e soro Se o plasma ou soro for testado
3. CN gua bi destilada est ril n o fornecida Este componente apresenta alto potencial contaminante dado conter DNA de Bordetella pertussis recomenda se o m ximo cuidado no seu manuseamento Protocolo de amplifica o por PCR 4 4 Amplifica o por PCR 1 Agite brevemente todos os tubos do kit e os tubos de DNA 2 Para cada detec o pipete de acordo com a tabela Tabela Tubo BPER mix Doo su Tubo Controlo Interno CI DNA de amostra Volume final NOTA Por cada utiliza o do kit deve correr pelo menos uma reac o CP e CN 3 Para o controlo positivo proceder como em 2 substituindo o DNA de amostra por 1 ul de Tubo Controlo Positivo CP 4 Para o controlo negativo proceder como em 2 substituindo o Controlo Interno por 1 ul de gua bidestilada est ril e o DNA de amostra por 1 ul de Tubo controlo negativo CN 5 Coloque os componentes da reac o no termociclador e corra o seguinte programa de PCR Programa PCR Fim 42C Infinito 1 6 Detecte os produtos do PCR com uma electroforese em gel de agarose a 4 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 10 Avisos e precau es A amplifica o por PCR permite nos obter milh es de c pias de DNA a partir de uma pequena quantidade de amostra Infelizmente isto tamb m verdade para o DNA contaminante que pode comprometer performance da nossa reac o Consequentemente pr ticas laboratoriais esp
4. da data de recep o BPER mix Cl CP e CN nunca devem ser deixados ou armazenados com a tampa aberta 2 DNA O DNA extra do por salting out ou por qualquer outro m todo deve ser armazenado a 4 C ou 20 C Ao optar pela congela o das amostras devem ser evitadas ciclos repetidos de congela o descongela o de modo a impedir a degrada o da amostra As amostras de DNA armazenadas em dH20 permanecem est veis durante pelo menos 4 semanas a 4 C ou 2 anos a 20 C As amostras de DNA armazenadas em tamp o TE permanecem est veis durante pelo menos 2 anos a 42C ou 5 anos a 20 C geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico responsabiliza se perante os seus clientes pelos defeitos no material e componentes dos seus produtos aplicados em condi es normais Os produtos da empresa que apresentam esta garantia devem ser substitu dos sem encargos para o cliente Esta garantia aplica se s para produtos que sejam manipulados e armazenados de acordo com as especifica es e recomenda es de utiliza o As reclama es devem ser enviadas por escrito directamente para a geneBOX e devem ser acompanhadas por uma c pia da guia de transporte ou factura do produto Este produto n o pode ser reformulado reembalado ou revendido em nenhuma forma sem o expresso consentimento da geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico 18 Protocolo de amplifica o por PCR
5. res duos hospitalares espec ficos 14 Informa o sobre o transporte No transporte dos Kits devem estar a seguradas as temperaturas n o devendo ultrapassar os 15 C A dura o do transporte n o deve ser superior a 3 dias de modo a garantir que todos os componentes do Kit cheguem em perfeitas condi es aos seus destinat rios 15 Contactos teis N mero Nacional de Emerg ncia 112 Centro de Informa o Anti Venenos 808 250 143 16 Outras informa es As informa es a cima dispon veis s o baseados no n vel de conhecimento actual devendo ser utilizado apenas como guia A geneBOX R amp D Diagnostic Tests n o se responsabiliza por qualquer dano causado pela manipula o inapropriada ou pelo contacto com os referidos produtos Para mais esclarecimentos por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 22 Declara o Folha de da Refer ncias de Conformidade ii iiias nanenane aia dos d seg raN a i iiie aan Apresenta o Bordetella pertussis bact ria Gram negativa coloniza as c lulas epidermais pulmonares e o agente etiol gico da tosse convulsa que uma patologia respirat ria extremamente contagiosa Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 um teste para diagn stico molecular desta bact ria com maior sensibilidade especificidade e rapidez do que os m todos tradicionais por cultura Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 detecta DNA gen mico codificante de 16S rR
6. 1 Controlo positivo qualidade invalido Os controlos internos Controlo positivo falharam em diversos Verifique a selagem invalido po os das placas En EEE Produtos de utilizando um PE inv o amplifica o secos adaptador de silicone para placas CN Controlo negativo Repe Eua leo mineral 12 13
7. NA de Bordetella pertussis em amostras biol gicas Altera es e melhoramento do Produto Este produto pode ser melhorado ao n vel do seu rendimento interpreta o especificidade de forma a incluir novas variantes que venham a ser descritas As altera es adi es ou modifica es de BPER Mix Controlo Interno Controlo Positivo ou Controlo Negativo em rela o ao lote anterior est o detalhadas na tabela abaixo Modifica o Motivo N A Folha de Dados de Seguran a 2 3 Material Safety Data Sheet MSDS 4 Informa o Toxicol gica Qu mico Toxicidade Glicerol LD50 oral 4090 mg kg ratinho LD50 oral 12600 mg kg rato LD50 oral 1480 mg kg humano 5 Estabilidade e reactividade Condi es a evitar Calor e humidade Incompatibilidades Bases e agentes oxidantes fortes 6 Protec o pessoal Protec o das m os use luvas apropriadas resistentes a qu micos Protec o dos olhos recomenda se o uso de culos de protec o qu mica 7 Manipula o e armazenamento Manipula o evite o contacto directo com a subst ncia Armazenamento armazene temperatura aconselhada proteja do contacto com a luz Danifica o da embalagem protectora rejeitar o constituinte contido na embalagem 8 Perigos Os componentes da mistura de reac o podem ser perigosos se inalados ingeridos ou absorvidos pela pele Este material pode causar irrita o da pele dos olhos e do tracto respirat rio A i
8. O EEE 7 conventional hemi nested PCR for the detection of Bordetella pertussis in nasopharyngeal samples Clin Microbiol Infect 2003 Jul 9 7 746 9 Colheita sssspasassssapsasorscosansersopesnipesesoisnapiadasizadaamaaas 7 Armazemamento esensina 7 ANS DONE eie ereire srair ana nandai 8 Extrac o de DNA 9 Reagentes 9 Amplifica o por PCR 9 Par metros do programa de PCR 10 Protocolo de electroforese em gel de agarose 11 Prepara o do gel a 4 11 Ele ctroforese ssasssssasissassisaspassssssasarsaisrapadisegia s 11 Tabela de interpreta o dos Resultados 12 Guia de resolu o de problemas iata 13 VISOS E PRECAU ES tarais kasian iiia 15 Guia T CNI C sincan aiis 17 ee E ATE T 18 Avisode Garantia ranosotsisioiorauraann ea 18 Folha de Dados de Seguran a 3 3 Material Safety Data Sheet MSDS Equipamento especial de combate ao inc ndio quando s o libertadas grandes quantidades de subst ncia trabalhe apenas com protec o adequada para olhos e pele 11 Medidas a tomar no caso de derrame acidental Precau es pessoais evite o contacto directo com a subst ncia Limpeza limpe normalmente a rea afectada n o s o necess rios cuidados adicionais Protec o da pele use uma bata de laborat rio 12 Informa o ecol gica N o existem dados dispon veis 13 Informa o sobre a elimina o Elimine o material de acordo com toda a regulamenta o aplic vel Grupo IV
9. de 2010 Grupo do produto Produtos de PCR da geneBOX Manufactura o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410 946 fax 351 231 410 947 e mail info genebox com 2 Composi o e Informa o sobre os reagentes Componente Qu mico Nome vulgar N de lote Mistura de primers Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Mistura de reac o Desoxiribonucle tidos Nucle tidos Tamp o Cloreto de Magn sio Mgci2 Vermelho de Cresol Glicerol DNA polimerase Controlo interno Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Controlo positivo Acido Desoxiribonucleico DNA Controlo negativo H20 gua bidestilada est ril 3 Propriedades f sico qu micas Componente Aspecto Cor Odor Mistura de primers l quido incolor nenhum Mistura de reac o l quido vermelho rosa nenhum Controlo Interno l quido incolor nenhum Controlo Positivo l quido incolor nenhum Controlo Negativo l quido incolor nenhum 20 Controlo de Qualidade O kit Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 foi testado com DNAs extra dos de culturas celulares das linhas DSM 5571 de Bordetella pertussis e outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A Genebox garante a qualidade e a fiabilidade do seu kit Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 Especificidade O kit Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 espec fico para a detec o de 16S rRNA ge
10. dentro de 24 horas ap s a sua colheita as amostras podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C B Zaragatoas Se a amostra for testada dentro de 24 horas ap s a sua colheita as zaragatoas podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C 3 Transporte de amostras A sensibilidade do teste pode ser reduzida se as amostras forem expostas a altas temperaturas por um longo per odo de tempo A Plasma e soro O sangue colhido deve ser armazenado a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportado em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24 48h B Zaragatoas A amostra colhida deve ser armazenada a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportada em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24 48h 1 Pureza e Concentra o do DNA Para obter bons resultados com o Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 recomenda se o uso de qualquer kit de ext
11. e material fresco Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Esfrega o de bandas Degrada o da amostra de DNA Reextraia a amostra de DNA de material fresco Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Amostra de DNA muito concentrada Verifique a qualidade e concentra o do DNA Dissolva o DNA em ddH20 de forma a obter a concentra o exacta Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Problemas com tamp o de electroforese Fora de prazo ou composi o errada Use um tamp o recomendado novo Protocolo de electroforese em gel de agarose Prepara o do gel de agarose a 4 I 2 3 4 5 6 7 Dissolver 8 gramas de p agarose em 200 ml de tamp o TAE 1X Dissolver completamente a agarose aquecendo a no microondas Arrefe a o gel at aproximadamente 502C Adicione pelo menos 20 pl de brometo de et dio 10 mg ml ou de Sybr Safe 10000x concentrado agarose Agite at estar completamente incorporado Numa superf cie nivelada monte a placa do gel com 96 po os Verta uma camada de gel com cerca de 5mm Deixe o gel arrefecer Aten o este reagente um forte agente mutag nico leia atentamente a MSDS do produto Electroforese 1 Submirja o gel na tina de electroforese com tamp o TAE 1X 2 Remova os pentes com cuidado do gel 3 Adicione 10 pl do produto de PCR em cada po o 4 Ligue a tina de electrofo
12. ec ficas podem evitar a presen a de amplifica es inespec ficas Em baixo encontram se descriminadas as recomenda es da Genebox Separe fisicamente as reas de pr PCR e de p s PCR O fluxo Laboratorial deve ser sempre unidireccional da rea pr PCR para a rea p s PCR Deve sempre utilizar se equipamentos espec ficos para cada area de trabalho prepara o de amostras pr amplifica o amplifica o e p s amplifica o Todos os equipamentos utilizados na rea de p s PCR n o devem sais desta zona Utilize micropipetas luvas e batas espec ficas para cada rea Utilize preferencialmente luvas sem talco uma vez que o talco pode inibir a reac o de PCR Utilize pontas de filtro de forma a minimizar contamina es cruzadas Verifique periodicamente as micropipetas de forma a assegurar a varia o de pipetagem inferior a 5 Utilize micropipetas adaptadas a cada volume de pipetagem Verifique periodicamente os termocicladores de forma a assegurar a varia o de temperaturas inferiores a 1 Abra e feche os reagentes com cuidado Depois de utilizar armazene os restantes componentes do kit s temperaturas recomendadas devidamente fechados N o utilize o kit com a validade expirada 15 PROBLEMAS Falsos negativos de uma banda espec fica com o controlo interno normal POSSIVEIS CAUSAS Degrada o da amostra de DNA SUGEST ES Reextraia a amostra de DNA d
13. geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 cantanhede portugal N s geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico indubitavelmente declaramos que este produto ao qual se relaciona esta declara o de conformidade est em conformidade com os seguintes documentos normativos ISO 9001 2008 e ISO 13485 2004 Seguindo ainda as indica es da Directiva Europeia 98 79 CE sobre dispositivos m dicos de diagn stico in vitro conformidade de acordo com o Anexo IV transposto para as leis nacionais dos estados membros da Uni o Europeia Europeia A ficha e os documentos t cnicos deste produto s o mantidos na geneBOX biocant centro de inova o em biotecnologia 3060 197 Cantanhede Portugal Sandra Balseiro Directora T cnica 19 geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico garante que os primers presentes no Bordetella pertussis Qual PCR Box apresentam as especificidades dadas nas folhas e tabelas de interpreta o de resultados do produto 1 BPER mix CI CP e CN Armazenamento a 20 C BPER mix CI CP e CN permanecem est veis durante 12 meses a partir da data de produ o ver validade do lote na embalagem Armazenamento a 42C de BPER mix CI CP e CN permanecem est veis durante 15 dias a partir da data de recep o temperatura ambiente BPER mix CI CP e CN permanecem est veis durante 3 dias a partir
14. n mico de Bordetella pertussis em DNA de amostras biol gicas A sua especificidade foi comprovada com DNAs extra dos de culturas celulares das linhas DSM 5571 de Bordetella pertussis e DNAs de outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A especificidade do kit Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 conferida por BPER mix que apresenta 100 de homologia com todas as sequ ncias de Bordetella pertussis registadas em bases de dados Sensibilidade A sensibilidade do kit Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 foi testada e a Genebox garante a detec o de n veis m nimos de 16S rRNA do genoma de Bordetella pertussis at 0 1 ng de DNA Mistura de reac o BPER 1 tubo BPER mix 1 ml conservar de 30 a 15 C Controlo Interno CI 1 tubo CI 100 ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Positivo CP ltubo CP 50ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Negativo CN 1tubo CN 50 l conservar de 30 a 152C Manual de instru es 1 Manual de Instru es Componentes da PCR Master Mix Nucle tidos concentra o final de cada dNTP 600 uM Tamp o da PCR concentra es finais s o 3 3x NH4 2 0 mM MgCl e 0 4 u ul Taq DNA polimerase pH 8 3 Glicerol concentra o final 16 6 Vermelho de cresol concentra o final de 300ug ml Nome do Produto Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 Numero do Produto GB 5610 Utiliza o Detec o de Bordetella pertussis Produ o
15. ngest o de grandes quantidades desta mistura pode causar dores de est mago v mitos ou diarreia 9 Medidas de Primeiros Socorros No caso de contacto com os olhos deve lavar imediatamente os olhos com gua abundante por cerca de 15 minutos Deve consultar o seu m dico No caso de contacto com a pele deve lavar imediatamente a zona afectada com gua corrente e sab o Lave a roupa contaminada antes da sua utiliza o No caso de ingest o lave a boca com gua abundante Deve contactar o seu m dico se necess rio No caso de inala o mudar a v tima para um local arejado Se encontrar inanimado aplique respira o artificial Se apresentar dificuldades respirat rias aplique oxig nio Deve consultar o seu m dico 10 Medidas a tomar em caso de inc ndio Meios de extin o gua di xido de carbono p qu mico seco ou espuma apropriada Meios de extin o n o aconselhados n o existem restri es conhecidas Perigos espec ficos de exposi o em caso de inc ndio podem emitir fumos t xicos de di xido e mon xido de carbono nitrog nio f sforo cloreto de hidrog nio e g s hidrog nio 21 Folha de Dados de Seguran a 1 3 Material Safety Data Sheet MSDS geneBOX R amp D Diagnostic Tests PCR Kits Produtos PCR da geneBOX Esta folha de dados de seguran a aplic vel a todos os produtos de PCR da geneBoX M 1 Produtos Qu micos e Identifica o da Companhia Data de realiza o Dezembro
16. ode causar rupturas impossibilitando a utiliza o normal do kit Verifique a concentra o e qualidade de todas as amostras de DNA antes de utilizar este kit Instru es de gerais de seguran a no laborat rio N o coma beba ou fume dentro do laborat rio Utilize sempre luvas descart veis e mude as com frequ ncia Utilize batas limpas e proteja os olhos sempre que se justifique Lave as m os antes e depois de qualquer manipula o de amostras ou reagentes Lave a rea de trabalho antes e depois de qualquer manipula o N o pipete com a boca 16 Protocolo de amplifica o por PCR 3 4 Extrac o de DNA A sensibilidade do teste pode ser reduzido se voc usar um m todo de isolamento de DNA ineficiente A detec o destes tipo de bact ria requer amostras de DNA altamente puras e concentradas As quantidade e qualidade das amostras dependem do protocolo de isolamento de DNA usado Recomenda se a kits de isolamento seguintes tanto para plasma soro como para zaragatoas QlAamp DNA Mini Kit from QIAGEN QlAamp DNeasy Kit from QIAGEN QlAamp DNA Blood Mini Kit from QIAGEN Alternativamente podem ser usados outros kits com a marca o CE para extrac o de DNA que garantam DNA com r cio DO260 280 superior a 1 6 e concentra es entre 1ng 200 ng ul Reagentes Amostra de DNA Mistura de reac o BPER mix Controlo interno CI Controlo positivo CP Controlo negativo
17. rac o de DNA que apresente marca o CE de modo a obter um DNA extra puro 2 DNA Polimerase O Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 foi intensivamente testado utilizando a DNA polimerase da Reagente 5 Reagente 5 Lisboa Portugal 3 BPER mix Para uma boa performance detec o de Bordetella pertussis com o Bordetella pertussis Qual PCR Box 1 0 obrigat ria a utiliza o da BPER Mix fornecida com o Kit 4 Procedimentos de amplifica o Para uma correcta utiliza o do kit aconselha se a seguir o programa de PCR apresentado neste Manual de Instru es 5 Termociclador Recomenda se utiliza o de qualquer Termociclador que apresente as seguintes caracter sticas heating rate superior a 2 5 C sec cooling rate superior a 1 5 C sec gama de temperaturas 4 1002C uniformidade de temperaturas 0 52C heated lid superior a 100 C 6 Validade Como especificado na embalagem Se os problemas persistirem por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 17 Avisos e precau es Os componentes dos kits s o resistentes s temperaturas de armazenamento indicadas O armazenamento dos kits a temperaturas n o recomendadas podem levar a rupturas no material e contamina o dos reagentes dos kits Os materiais pl sticos fornecidos neste kit s o resistentes gama de temperaturas de utiliza o e armazenamento recomendadas A sua utiliza o em gamas distintas de temperaturas p
18. rese corrente com uma voltagem m dia 115V 5 Deixe a electroforese correr por cerca de 20 minutos ou at o corante estar a 2 3 da linha 6 Ponha o gel no transiluminador 7 Fotografe o gel e identifique o 8 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 11 Tabela de Interpreta o de resultados Guia de resolu o de problemas Tabela I Interpreta o de an lises v lidas Po o Bordetella Contos PROBLEMAS POSSIVEIS CAUSAS SUGEST ES pertussis 103pb Interno Interpreta o Valida o Verifique a qualidade e Amostra ella Validado concentra o do ssis DNA itivo a Reextraia a amostra Amostra ella Validado Concentra o da de DNA ou tente ssis amostra de DNA baixa x A A N vo n o adicionar gua mistura de reac o CP a a O Bandas controlo e Repita a reac o N c Controlo especificas tracas com um DNA de boa Ea Negativo qualidade Tamanho da banda espec fica Tamanho da banda de Controlo Interno Repurifique a Tabela Il Interpreta o de an lises n o v lidas Presen a de inibidores amostra de DNA Po o Bordetella CoRGoIS da Taq polimerase nas Repita a reac o pertussis Interno Interpreta o Valida o amostras de DNA com um DNA de boa 103pb 245pb qualidade Positivo 2 Er Repurifique a TP Controlo positivo da Taq polimerase nas Repita a reac o LR am invalido amostras de DNA com um DNA de boa 0
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