QUANTA FlashTM DGP IgG
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1. 1 Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH Para informa es adicionais e resolu o de problemas com este ensaio contacte a assist ncia t cnica da INOVA Diagnostics Inc no endere o ou atrav s do n mero de telefone indicados no final deste Folheto de Instru es Para esvaziar o recipiente de res duos s lidos abra a gaveta dos res duos Remova o recipiente de res duos s lidos e elimine adequadamente as tinas usadas Substitua o recipiente de res duos s lidos feche a gaveta dos res duos e clique em Yes na janela Empty Waste Drawer Para substituir os ativadores clique no bot o Bulks Inventory F9 superior direito a No ecr Inventory Bulks clique no bot o Triggers do lado esquerdo Aparecer uma janela nova intitulada Add Triggers Remove old bottles b Abra e retire a gaveta dos res duos do instrumento BIO FLASH Elimine quaisquer tinas da gaveta de res duos secos Clique em Yes na janela Empty Waste Drawer Retire as garrafas ativadoras dos respetivos suportes e clique no bot o Next Desaperte as garrafas antigas de ativadores das tampas e substitua por ativadores novos Certifique se de que as coloca uma de cada vez com as tampas com o c digo de cores correspondente branca com branca e vermelha com vermelha c Siga as instru es na janela n2. o de DC mesmo com a coexist ncia de defici ncia de IgA Princ pios do procedimento O p ptido de gliadina desamidado sint tico est revestido por esferas paramagn ticas que est o guardadas no cartucho de reagente em condi es que conservam o antig nio no seu estado reativo Quando o cartucho do ensaio est pronto para ser utilizado pela primeira vez todo o cartucho invertido v rias vezes at completa mistura dos reagentes O cartucho de reagente ent o carregado no instrumento BIO FLASH O instrumento dilui previamente uma amostra de soro do doente 1 17 utilizando lavagem do sistema adicionada a uma tina pl stica descart vel Pequenas quantidades de soro do doente dilu do as esferas de DGP e o tamp o de ensaio s o todos combinados numa segunda tina e misturados Incuba se esta tina a 37 C As esferas s o ent o magnetizadas e lavadas v rias vezes Adiciona se ent o a tina o anticorpo conjugado de isoluminol e incuba se a 37 C Mais uma vez as esferas s o magnetizadas e lavadas repetidamente O conjugado de isoluminol produz uma rea o luminescente quando se adicionam os reagentes Ativadores tina A luz produzida a partir desta rea o medida como Unidades Relativas de Luz URL pelo sistema tico BIO FLASH As URL s o proporcionais quantidade de conjugado de isoluminol ligado que por sua vez proporcional quantidade de anticorpos anti DGP ligados ao DGP nas esferas O ensaio Q
3. o tamp o estabilizadores proteicos e conservantes 2 Calibrador 2 QUANTA Flash DGP IgG dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 3 ml de reagente pr dilu do pronto a usar Calibradores contendo anticorpos humanos IgG para DGP em solu o tamp o estabilizadores proteicos e conservantes Advert ncias 1 Os calibradores cont m um qu mico 0 02 cloranfenicol conhecido no Estado da Calif rnia por causar cancro 2 A azida de s dio utilizada como conservante A azida de s dio venenosa e pode ser t xica se for ingerida ou absorvida pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de canaliza es de chumbo ou cobre formando azidas met licas potencialmente explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a acumula o de azida a3 Todo o material de origem humana utilizado na prepara o dos calibradores deste produto foi testado e deu resultados negativos com m todos aprovados pela FDA para anticorpos de VIH HBsAg e VHC Contudo nenhum teste pode garantir com certeza absoluta a aus ncia de VIH VHB VHC ou outros agentes infecciosos Portanto devem manipular se os Calibradores QUANTA Flash DGP IgG como se fossem qualquer material potencialmente infeccioso 4 Usar equipamento de prote o individual apropriado para trabalhar com os reagentes fornecidos o Os salpicos de reagentes dev
4. Korponay Szabo IR Mearin ML Phillips A Shamir R Troncone R Giersiepen K Branski D Catassi C Lelgeman M Maki M Ribes Koninckx C Ventura A Zimmer KP ESPGHAN Working Group on Coeliac Disease Diagnosis ESPGHAN Gastroenterology Committee European Society for Pediatric Gastroenterology Hepatology and Nutrition European Society for Pediatric Gastroenterology Hepatology and Nutrition guidelines for the diagnosis of coeliac disease J Pediatr Gastroenterol Nutr 2012 54 136 60 McMillan SA Haughton Du et al Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy BMJ 1991 303 1163 1165 Sugai E Moreno ML et al Celiac disease serology in patients with different pre test probabilities Is biopsy avoidable World J Gastroenterol 2010 16 3144 52 Burgin Wolff A Gaze H et al Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease Arch Dis Child 1991 66 941 947 Osman AA et al B Cell epitopes of gliadin Clin Exp Immunol 2000 121 248 254 Aleanzi M et al Celiac disease Antibody recognition against native and selectively deamidaion gliadin peptides Clinical Chemistry 2001 47 2023 2028 Schwertz E et al Serologic assay based on gliadin related nonapeptides as a highly sensitive and specific diagnostic aid in celiac disease Clinical Chemistry 2004 50 2370 2375 Fleckenstein B Qiao S W et al Molecular characterization of
5. err neos 4 As caracter sticas de desempenho deste ensaio n o foram determinadas para outras matrizes al m do soro Valores esperados O resultado esperado na popula o normal negativo A preval ncia de DC na popula o de refer ncia que n o se encontra em risco de aproximadamente 1 por isso pode esperar se resultados positivos ocasionais quando se testam indiv duos saud veis Quando amostras de soro de 232 indiv duos aparentemente saud veis foram testadas com o QUANTA Flash DGP IgG IEQ na INOVA Diagnostics encontrou se quatro resultados positivos e um positivo fraco Compara o do m todo com dispositivo implicado As amostras para a an lise de compara o do m todo inclu ram as amostras dos estudos de valida o cl nica doentes com DC sem DC e com DH que estavam dentro do intervalo de medi o anal tica do ensaio Testaram se estas amostras no QUANTA Flash DGP IgG e no dispositivo implicado ELISA Compara o de m todos DGP IgG ELISA Concord ncia de Percentagem N 241 Intervalo de seguran a de 95 Positivo 26 104 QUANTA Elashe Positivo 78 26 104 DGP IgG IEQ Concord ncia Neg 83 6 77 0 89 0 Concord ncia Total 87 6 82 7 91 4 Treze amostras s o de doentes com DC tr s com uma dieta sem gl ten Uma amostra de um doente suspeito de ter DC que positivo a IgA anti DGP Duas amostras t m gastrite H pylori duas t m hepatite viral e uma tem artrite
6. 7 UQ Este considerado um resultado positivo O software BIO FLASH disponibiliza uma op o de Novo teste autom tico Se estiver selecionada esta op o o instrumento retestar automaticamente qualquer amostra que tenha um resultado gt 1936 7 UQ diluindo a mais por um fator de 10 colocando o valor medido dentro do IMA O resultado final ser calculado pelo software tendo em conta o fator de dilui o adicional Uma vez que o valor mais elevado que pode ser medido 1936 7 UQ o valor mais elevado que pode ser apresentado 19 367 UQ Interpreta o dos resultados Cada laborat rio aconselhado a verificar o intervalo de refer ncia fornecido pelo fabricante e pode estabelecer o seu pr prio intervalo normal baseando se nos seus pr prios controlos e na popula o de doentes de acordo com os procedimentos estabelecidos pelo mesmo Sugere se que os resultados apresentados pelo laborat rio incluam a declara o Obtiveram se os resultados seguintes com o imunoensaio quimioluminescente INOVA QUANTA Flash DGP IgG Os valores obtidos com m todos de ensaio de diferentes fabricantes n o podem ser comparados Limita es do procedimento 1 Nem todos os doentes com DC ou DH sao positivos para anticorpos IgG DGP 2 Os resultados deste ensaio devem ser utilizados em conjunto com as conclus es cl nicas e outros testes serol gicos 3 A mistura inadequada dos reagentes antes da primeira utiliza o pode levar a resultados
7. Testes Testes Reagents Calibradores Operadores Locais M dia di DP cv DP cv DP DP cv DP cv DP cv Doa oo a No 4 Ua 4 UQ UQ UQ Lane 1 434 ees 28 05 435 Amostra n 2 21 0 e fos teste tse sofas ref 2 12 9 Tamestanea reg oo as 24 so lao 26 eal 20 29 47 40 oa lar sso woe Intervalo de Medi o Anal tica De acordo com a CLSI EP17 A o limite de dete o inferior deste ensaio 469 2 URL o que est abaixo do intervalo de medi o anal tica 2 8 UQ O intervalo de medi o anal tico desde 2 8 UQ at 1936 7 UQ linear Realizou se um estudo de linearidade de acordo com a CLSI EP6 A utilizando seis amostras de soro com v rias concentra es de DGP IgG As seis amostras mostraram linearidade de dilui o individualmente e os dados combinados apresentaram os resultados seguintes com regress o linear Teste UQ 95 IS 95 IS Amostras As amostras positivas com resultados acima do intervalo de medi o anal tica n o mostram efeito de gancho at 4323 7 UQ no ensaio DGP IgG Interfer ncia reatividade cruzada N o se detetou nenhuma interfer ncia com at 200 mg dl de hemoglobina 1000 mg dl de triglic ridos 224 3 mg dl de colesterol 10 mg dl de bilirrubina e 500 Ul ml de FR IgM Testaram se cento e oitenta e cinco amostras de doentes com v rias doen as autoimunes e infeciosas para avaliar reatividade cruzada Duas das 31
8. a instru es pormenorizadas sobre como calibrar o cartucho de reagente 3 Quando a calibra o tiver sido validada o lote do cartucho de reagente onde se realizou a calibra o est pronto a ser utilizado Programa o e realiza o de testes 1 Pressione o bot o Worklist na parte superior do ecr e selecione o separador Racks no fundo 2 Selecione o rack de amostras a utilizar real ando o rack no ecr ou digitalizando o c digo de barras com o leitor de c digo de barras port til Digitalize ou escreva o nome da amostra selecione o tipo de amostra o tipo de recipiente tubo ta a e selecione DGP IgG a partir do painel do ensaio Repita estes passos para todas as amostras 3 Carregue as amostras nas posi es selecionadas no rack de amostras e carregue o rack no carrossel de amostras do instrumento 4 Se todos os materiais necess rios estiverem colocados no instrumento o cone Start F4 estar dispon vel a verde na parte superior do ecr Pressione o icone Start F4 para iniciar o ensaio Controlo de qualidade Os Controlos QUANTA Flash DGP IgG vendidos em separado INOVA N mero de Item 701172 cont m os Controlos DGP IgG Positivos e Negativos Consulte a sec o intitulada QUANTA Flash DGP IgG Controls 701172 do Folheto de Instru es relativamente a instru es pormenorizadas sobre como introduzir todas as informa es necess rias de cada controlo no software bem como sobre o funcionamento dos contr
9. amostras com hepatite viral duas das 17 com infe o da H pylori e uma das 37 com artrite reumatoide eram positivas a DGP IgG IEQ Em conjunto cinco das 185 amostras 3 eram positivas indicando a falta de reatividade cruzada QUANTA Flash DGP IgG 701171 Calibrators Para Utiliza o em Diagn stico n Vitro Utiliza o prevista Os Calibradores QUANTA Flash DGP IgG destinam se a utiliza o com o imunoensaio quimioluminescente IEQ QUANTA Flash DGP IgG Cada calibrador estabelece um ponto de refer ncia para a curva de trabalho utilizada para determinar valores de Unidades Quimioluminescentes UQ na medi o de anticorpos IgG anti DGP em soro Resumo e princ pios do procedimento O QUANTA Flash DGP IgG IEQ utiliza uma Curva Modelo espec fica do lote predefinida que est armazenada no c digo de barras do cartucho de reagente Os Calibradores QUANTA Flash DGP IgG est o concebidos para produzir uma Curva de Trabalho espec fica do instrumento a partir de par metros da Curva Modelo com um ponto de decis o baseado nas carater sticas de desempenho e na avalia o cl nica do QUANTA Flash DGP IgG IEQ Antes da atribui o do valor testam se os calibradores em v rios instrumentos com diversos lotes de reagentes Reagentes 1 Calibrador 1 QUANTA Flash DGP IgG dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 3 ml de reagente pr dilu do pronto a usar Calibradores contendo anticorpos humanos IgG para DGP em solu
10. bot o de valida o no canto inferior esquerdo do ecr Clique no bot o Validate Calibration o Quando a calibra o tiver sido validada o lote do cartucho de reagente onde se realizou a calibra o est pronto a ser utilizado Recomenda se testar os Controlos QUANTA Flash DGP IgG vendidos separadamente numero de pe a 701172 ap s a calibra o de um lote de cartucho de reagente Rastreabilidade Atualmente n o existe nenhuma norma internacional reconhecida para a medi o de anticorpos IgG de p ptido de gliadina antidesamidado Limita es Estes calibradores est o concebidos para 4 calibra es O tempo total em que os tubos calibradores podem estar destapados dentro do instrumento de 8 horas Se se deixarem os calibradores destapados dentro do instrumento durante mais tempo dever o ser eliminados Utilizar os mesmos tubos calibradores mais de 8 horas pode originar uma calibra o incorreta do ensaio que por sua vez pode fornecer resultados errados QUANTA Flash DGP IgG 701172 Controls Para Utiliza o em Diagn stico In Vitro Utiliza o prevista Utilizam se os Controlos QUANTA Flash DGP IgG para controlo da qualidade do kit de imunoensaio quimioluminescente IEQ QUANTA Flash DGP IgG Resumo e principios do procedimento Os Controlos QUANTA Flash DGP IgG s o constitu dos por um Controlo Negativo e um Controlo Positivo Cada um cont m uma quantidade diferente de anticorpos IgG anti DGP O Co
11. covalent complexes between tissue transglutaminase and gliadin peptides J Biol Chem 2004 279 17607 16 Prince HE Evaluations of the INOVA Diagnostics Enzyme Linked Immunosorbent Assay Kits for Measuring Serum Immunoglobulins G IgG and IgA to Deamidated Gliadin Peptides Clinical and Vaccine Immunology 2006 13 150 151 Sugai E et al Accuracy of Testing Antibodies to Synthetic Gliadin Related Peptides in Celiac Disease Clinical Gastroenterology and Hepatology 2006 4 1112 1117 Kurppa K Lindfors K et al Antibodies against deamidated gliadin peptides in early stage celiac disease J Clin Gastroenterol 2010 epub ahead of print Volta U Granito A et al Deamidated gliadin peptide antibodies as a routine test for celiac disease J Clin Gastroenterol 2010 44 186 90 Collin P et al Selective IgA deficiency and coeliac disease Scand Journal Gastroenterology 1992 27 367 371 Smecuol E et al Permeability Zonulin Production and Enteropathy in Dermatitis Herpetiformis Clinical Gastroenterlogy and Hepatology 2005 3 335 341 Beutner EH et al Sensitivity and Specificity of IgA class anti endomysial antibodies for dermatitis herpetiformis and findings relevant to their pathogenic significance Journal of the American Academy of Dermatology 1986 15 464 473 Jaskowski TD Donaldson MR et al Novel screening assay performance in pediatric celiac disease and adult dermatitis herpetiformis JPGN 2010 51 19 23 Fasano A Ber
12. para ressuspenderem 1 Da primeira vez que utilizar o cartucho inverta suavemente o cartucho 30 vezes evitando a forma o de espuma Verifique a ressuspens o completa das micropart culas Se as microparticulas n o estiverem totalmente em suspens o continue a inverter o cartucho at que as microparticulas estejam completamente em suspens o Se as microparticulas nao ficarem em suspens o NAO UTILIZE O CARTUCHO 2 Assim que as micropart culas ficarem em suspens o coloque o cartucho de reagente numa superf cie s lida para remover a patilha vermelha Com uma m o segure o cartucho de reagente no lugar Com a outra m o segure firmemente a patilha vermelha na parte de tr s do cartucho de reagente e puxe a totalmente para fora 3 Enquanto pressiona as duas patilhas nos lados da tampa perfurada parte cinzenta exerca pressao na parte superior do cartucho de reagente at encaixar numa posi o bloqueada As patilhas dever o deixar de estar vis veis NAO VIRE O CARTUCHO ABERTO 4 Coloque cuidadosamente o cartucho de reagente em qualquer ranhura aberta no carrossel do reagente do instrumento BIO FLASH Calibra o do ensaio 1 Cada lote novo de cartucho de reagente tem de ser calibrado antes da primeira utiliza o O software n o permitir utilizar um lote novo at que seja calibrado 2 Consulte a sec o intitulada QUANTA Flash DGP IgG Calibrators 701171 deste Folheto de Instru es relativamente
13. 2
14. C Nao congele Os reagentes permanecem est veis at a data de validade indicada quando conservados e manipulados conforme descrito no protocolo Os controlos est o concebidos para 15 utiliza es com um tempo m dio de 10 minutos inserido no instrumento por utiliza o O tempo total que os tubos de controlo podem estar destapados inseridos no instrumento de 2 horas e meia Se se deixarem os controlos abertos colocados no instrumento por um per odo total superior a 2 horas e meia dever o ser eliminados Para a estabilidade ideal retire os controlos do sistema imediatamente ap s a amostragem e guarde os a 2 8 C tapados no frasco original Procedimento Para criar novos materiais de CQ para o ensaio DGP IgG 1 Antes de utilizar Controlos QUANTA Flash DGP IgG pela primeira vez no instrumento tem de introduzir no software o nome o lote a data de validade o valor ou dose e as informa es de DP alvo A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctrl M v Selecione QC Ctrl F2 Clique no bot o New QC Material Com cada conjunto de Controlos est inclu da uma ficha de dados espec fica do lote Introduza primeiro o nome o n mero do lote e a data de validade desta folha de dados no software Em seguida clique no bot o Add Assay Na nova janela certifique se de que a caixa Show All Assays est assinalada Selecione o ensaio DGP IgG da lista e clique em Add Por fim i
15. QUANTA Flash DGP IgG 701173 Reagents Para Utiliza o em Diagn stico n Vitro Utiliza o prevista O QUANTA Flash DGP IgG um imunoensaio quimioluminescente IEQ para a determina o semiquantitativa de anticorpos IgG p ptidos de gliadina antidesamidados DGP no soro humano A presen a dos anticorpos IgG anti DGP em conjuga o com descobertas cl nicas e outros testes laboratoriais pode auxiliar no diagn stico de pacientes com doen a cel aca tanto IgA suficiente como IgA deficiente assim como da dermatite herpetiforme Resumo e explica o do teste A doen a cel aca DC uma enteropatia sens vel ao gl ten caracterizada por inflama o e esmagamento histol gico caracter stico da mucosa intestinal resultando numa sindroma de ma absor o A etiologia exata da doen a permanece desconhecida exce o da gliadina fra o sol vel do lcool de gl ten do trigo que claramente o agente t xico Anteriormente era feita uma s rie de bi psias intestinais m ltiplas para diagnosticar a DC e dist rbios relacionados Mais recentemente a Sociedade Europeia de Gastrenterologia e Nutri o Pedi trica ESPGAN e v rios outros estudos publicados recomendaram a utiliza o de marcadores serol gicos como por exemplo antigliadina anti DGP e anticorpos endomisiais EMA para reduzir o n mero de bi psias intestinais necess rias para realizar um diagn stico Trabalhos recentes revelaram que os anticorpos d
16. UANTA Flash DGP IgG utiliza uma Curva Modelo espec fica do lote predefinida que carregada no instrumento atrav s do c digo de barras do cartucho de reagente Baseando se no resultado obtido com dois calibradores cria se uma Curva de Trabalho espec fica do instrumento que o software utiliza para calcular unidades quimioluminescentes UQ a partir do valor da URL obtido para cada amostra Reagentes 1 O cartucho de reagente QUANTA Flash DGP IgG cont m os reagentes seguintes para 50 determina es a Esferas paramagn ticas revestidas de DGP em tamp o contendo estabilizadores de proteina e conservante b Tampao de ensaio cor de rosa contendo tampao salino Tris Tween 20 estabilizadores proteicos e conservantes C Marcador IgG anticorpo IgG anti humano marcado a isoluminol em tamp o contendo estabilizadores proteicos e conservante Advert ncias 1 O tamp o de ensaio cont m um qu mico 0 02 cloranfenicol conhecido no Estado da Calif rnia por causar cancro 2 A azida de s dio utilizada como conservante A azida de s dio venenosa e pode ser t xica se for ingerida ou absorvida pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de canaliza es de chumbo ou cobre formando azidas met licas potencialmente explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a acumula o de azida 3 Usar equipamento de pro
17. a doen a infecciosa VIH S filis Resumo dos valores de sensibilidade e especificidade cl nicas em DC de acordo com grupos et rios Faixact ria Doro aaa Sensibilidade Especificidade Precis o e reprodutibilidade A precis o do ensaio QUANTA Flash DGP IgG foi avaliada em 8 amostras contendo v rias concentra es de anticorpos IgG DGP de acordo com o CLSI EP5 A2 Abaixo encontram se os dados resumidos Durante os Entre E eia a UQ UQ UQ UQ 0 1 25 20 45 e e ee hs So ar fan a aaa oe Ta eo 207 os 25 05 18 os 22 07 36 D wo me os 18 os 18 o4 15 07 am e est 19 22 06 oon 25 20 a2 am o eo ane 77 19 68 16 04 20 139 oem 7 vero 243 eae 162 20 s0 ore 208 30 e 6 meia ser 29 279 16 aes am 163 49 NO Ho IN O1 Para al m disso foram tamb m realizados estudos de precis o em tr s locais de teste diferentes INOVA Diagnostics Inc e dois locais de teste externos para avaliar a reprodutibilidade Dois lotes de reagentes dois lotes de calibradores e dois operadores foram inclu dos como vari veis no local de teste da INOVA A Reprodutibilidade Total foi calculada com base na precis o durante os testes entre testes entre lotes entre lotes de calibradores entre operadores e entre locais Durante Entre ies Entre Entre Total os
18. amostras s o de indiv duos aparentemente saud veis dois s o positivos a DGP IgG EIA Entre 13 doentes com dados ELISA 10 eram DGP IgG EIA negativos Sensibilidade e especificidade cl nicas do eneaig CLAMA Flash DGP IgG em DC IgA deficiente An lise N 352 DC IgA N o Nao DG Toa Intervalo de seguranga de 95 deficiente QUANTA Flash Positivo 9 9 18 Sensibilidade 56 3 29 9 80 2 DEP a Negativo 7 32 Especificidade 97 3 95 0 98 8 g Total 16 336 352 Sensibilidade e especificidade cl nicas do ensaio QUANTA Flash DGP IgG em DH np Anis E Intervalo de seguran a de 95 Positivo 16 9 25 Sensibilidade 69 6 47 1 86 8 DGP IgG E aie aie Toa 23 se oo Duas amostras t m gastrite H pylori duas t m hepatite viral e uma tem artrite reumatoide As restante amostras s o de indiv duos aparentemente saud veis dois s o positivos a DGP IgG EIA Cinco amostras eram tamb m negativas a DGP IgG EIA Distribui o da popula o de controlo da doen a utilizada no estudo de valida o Percentagem de 0 Doen a do f gado autoimune Hepatite viral Doen a inflamat ria intestinal Chron CU Infe o da H pylori 6 0 12 0 0 0 0 0 3 0 Alergia alimentar Doen a reum tica sist mica Doen a autoimune da tiroide Doentes com sintomas gastrointestinais Diabetes mellitus tipo 1 Artrite reumatoide O O O OONO DMN O Outr
19. e doentes com DC se ligam em n mero muito limitado a ep topos espec ficos da mol cula de gliadina que foram seletivamente desamidados Pensa se que a desamida o causada pela enzima associada doen a cel aca transglutaminase do tecido Com base nas observa es anteriores foram desenvolvidos ensaios que utilizam peptidos de gliadina desamidados Possuem uma maior precis o de diagn stico da DC do que os ensaios padr o antigliadina gt Uma estrat gia de rastreio sens vel para a dete o de pessoas com DC em popula es em risco inclui testes para anticorpos IgG e IgA de peptidos de gliadina desamidados uma vez que uma propor o significativa de doentes cel acos s o IgA deficientes V rios estudos mostram uma elevada utilidade cl nica desta estrat gia de teste A dermatite herpetiforme DH um problema de pele virulento e cr nico A maioria dos doentes com DH apresenta atrofia das vilosidades jejunais e sensibilidade ao gl ten id ntica encontrada nos casos de DC e uma dieta rigorosa sem gl ten melhora tanto as les es intestinais como as dermatol gicas Um estudo detetou que os anticorpos anti DGP s o mais comuns do que os anticorpos anti tTG em doentes com DH O QUANTA Flash DGP IgG um teste com desempenho melhorado para a dete o de anticorpos IgG contra um p ptido sint tico e seletivamente desamidado derivado de uma prote na do trigo a gliadina e desse modo permite a dete
20. em ser limpos imediatamente Respeitar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro 2 Os calibradores QUANTA Flash DGP IgG destinam se a utiliza o com o ensaio QUANTA Flash DGP IgG 3 Nao transfira os reagentes calibradores para tubos secundarios O instrumento utiliza os c digos de barras nos tubos para combinar os calibradores com o tipo de ensaio adequado 4 Ap s aberto um tubo calibrador mant m se bom durante um per odo de 8 horas quando deixado destapado inserido no instrumento ap s o qual o reagente tem de eliminar se 5 A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Os res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza recomendado do instrumento conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Condi es de conserva o 1 Conserve os calibradores por abrir a 2 8 C Nao congele Os reagentes permanecem estaveis ate a data de validade indicada quando conservados e manipulados conforme descrito no protocolo 2 Devem eliminar se os calibradores abertos apos 8 horas Procedimento 1 Cada lote novo de cartucho de reagente tem de ser calibrado antes da primeira utiliza o O so
21. ftware n o permitir utilizar um lote novo at que seja calibrado 2 Antes da utiliza o tem de misturar se suavemente cada calibrador para garantir a homogeneidade Evite a forma o de espuma uma vez que as bolhas podem interferir com a dete o do n vel do l quido dos instrumentos Destape cada tubo calibrador e coloque ambos num rack de amostras com os c digos de barras virados para a frente atrav s dos espa os no rack Coloque o rack de amostras no carrossel de amostras do instrumento BIO FLASH e feche a porta O instrumento ler os c digos de barras nos tubos calibradores e identificar o cartucho de reagente necess rio Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH 3 O instrumento testara entao cada calibrador em triplicado Apos os Calibradores terem sido testados o software exigir a valida o da calibra o A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctrl M V Selecione Calibration Ctrl F3 Na janela Calibra o realce o ensaio pretendido e clique em Details 4 Na nova janela Calibration Details selecione a calibra o que acabou de ser executada A Curva Modelo aparece como uma linha tracejada ao passo que a Curva de Trabalho aparece como uma linha cont nua Se os resultados da calibra o forem v lidos aparecer um
22. neidade Evite a forma o de espuma uma vez que as bolhas podem interferir com a dete o do n vel do l quido dos instrumentos Destape cada tubo de controlo e coloque ambos num rack de amostras com os c digos de barras virados para a frente atrav s dos espa os no rack Coloque o rack de amostras no carrossel de amostras do instrumento BIO FLASH e feche a porta O instrumento ler os c digos de barras nos tubos de controlo e identificar o cartucho de reagente necess rio Consulte o manual do operador fornecido com o sistema BIO FLASH relativamente a instru es de funcionamento pormenorizadas do analisador quimioluminescente BIO FLASH e do software BIO FLASH Rastreabilidade Atualmente n o existe nenhuma norma internacional reconhecida para a medi o de anticorpos IgG de p ptido de gliadina antidesamidado Limita es Estes controlos est o concebidos para 15 utiliza es A etiqueta de cada tubo de controlo tem uma fila de 15 caixas que podem marcar se para verificar o n mero de utiliza es O tempo total que os tubos de controlo podem estar destapados inseridos no instrumento de 2 horas e meia Se se deixarem os controlos abertos colocados no instrumento durante mais tempo dever o ser eliminados Refer ncias Trier JS Celiac Sprue New England Journal of Medicine 1991 325 1709 1719 Troncone R and Ferguson A Antigliadin antibodies J Pediatr Gastroenterol Nutr 1991 12 150 158 Husby S Koletzko S
23. ntroduza a dose alvo e o DP alvo Clique em Save Execute este processo para ambos os controlos Para criar um novo lote para materiais de CQ existentes 1 Antes de utilizar um lote novo de Controlos QUANTA Flash DGP IgG pela primeira vez tem de introduzir no software o lote a data de validade o valor ou dose e as informa es de DP alvo A partir do ecr Instrument Summary clique no bot o de seta Choose more options Ctri M vw Selecione QC Ctrl F2 Realce o ensaio DGP IgG na coluna do lado esquerdo Em seguida realce o material do controlo adequado direita DGPGN para o Controlo Negativo ou DGPGP para o Controlo Positivo Clique no bot o New QC Lot Com cada conjunto de Controlos est inclu da uma ficha de dados espec fica do lote Introduza as informa es desta ficha de dados no software Estas dever o incluir o n mero do lote a data de validade a dose alvo e o DP alvo Se necess rio clique no bot o Add Assay Na nova janela certifique se de que a caixa Show All Assays est assinalada Selecione o ensaio DGP IgG da lista e clique em Add Clique em Save Execute este processo para ambos os controlos Recomenda se a utiliza o dos Controlos QUANTA Flash DGP IgG uma vez por cada dia que se utilize o ensaio no entanto os utilizadores tamb m dever o considerar os requisitos regulamentares locais nacionais Antes da utiliza o tem de misturar se suavemente cada controlo para garantir a homoge
24. ntrolo Negativo e o Controlo Positivo s o utilizados para monitorizar o desempenho anal tico do imunoensaio quimioluminescente QUANTA Flash DGP Screen Reagentes 1 Controlo negativo QUANTA Flash DGP IgG dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 5 ml de reagente pronto a usar Controlos contendo anticorpos humanos IgG para DGP em solu o tamp o estabilizadores proteicos e conservantes Controlo positivo QUANTA Flash DGP IgG dois 2 tubos marcados com c digo de barras contendo 0 5 ml de reagente pronto a usar Controlos contendo anticorpos humanos IgG para DGP em solu o tamp o estabilizadores proteicos e conservantes Advert ncias 1 Os controlos cont m um qu mico 0 02 cloranfenicol conhecido no Estado da California por causar cancro A azida de s dio utilizada como conservante A azida de s dio venenosa e pode ser t xica se for ingerida ou absorvida pela pele ou pelos olhos A azida de s dio pode reagir com componentes de canaliza es de chumbo ou cobre formando azidas met licas potencialmente explosivas Por esta raz o ao deitar fora os restos de reagentes necess rio deixar correr gua em quantidade abundante para evitar a acumula o de azida Todo o material de origem humana utilizado na prepara o dos controlos deste produto foi testado e deu resultados negativos com m todos aprovados pela FDA para anticorpos de VIH HBsAg e VHC Contudo nenhum teste pode garantir com ce
25. olos Recomenda se que se testem os controlos pelo menos uma vez nos dias em que se utiliza o ensaio no entanto os utilizadores tamb m dever o considerar os requisitos regulamentares locais nacionais C lculo dos resultados Para cada lote novo de QUANTA Flash DGP IgG cria se uma Curva Modelo de seis pontas Os par metros da curva est o codificados no c digo de barras de cada cartucho de reagente Durante a calibra o ser utilizada uma curva de trabalho espec fica para o instrumento para converter valores URL em UQ Pode ent o classificar se a reatividade do anticorpo IgG para DGP de acordo com a tabela abaixo Reatividade UQ Negativa lt 20 Positivo Fraco 20 30 Positiva gt 30 A reatividade em UQ est diretamente relacionada com o titulo do anticorpo na amostra do doente Os aumentos e as diminui es nas concentra es do anticorpo no doente refletir se o numa subida ou descida correspondente em UQ proporcionalmente quantidade de anticorpo O intervalo de medi o anal tica IMA do ensaio determinado pelos pontos superiores e inferiores da Curva Modelo situa se entre 2 8 UQ e 1936 7 UQ o que corresponde ao intervalo linear do ensaio Se o resultado de um doente for inferior a 2 8 UQ ent o o sistema BIO FLASH indic lo como lt 2 8 UQ Visto ser inferior a 20 UQ considera se um resultado negativo Se o resultado de um doente for superior a 1936 7 UQ ent o o sistema BIO FLASH indica lo a como gt 1936
26. ova Add Triggers Add Trigger 2 bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite coloque o Ativador 2 no suporte com o c digo de cores branco Clique em Next d Siga as instru es da janela Add Triggers Add Trigger 1 bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite coloque o Ativador 1 no suporte com o c digo de cores vermelho Clique em Finish Volte a colocar a gaveta dos res duos e feche a Para substituir o recipiente da lavagem do sistema clique no bot o Bulks Inventory F9 canto superior direito No ecr Inventory Bulks clique no bot o Sys Rinse Na nova janela Add System Rinse Remove bottles clique em Next Siga as instru es na janela nova Add System Rinse Add bottle Quando o c digo de barras tiver sido aceite se necess rio clique em Finish Para esvaziar o recipiente de res duos de fluido a partir do ecr Inventory Bulks clique no bot o Fluid Waste Retire e elimine os res duos de fluido Clique em Next Quando tiver substitu do a garrafa vazia clique em Finish M todo Prepara o do cartucho de reagente Da primeira vez que utilizar o cartucho de reagente tem de seguir os passos seguintes para instalar corretamente o cartucho no instrumento BIO FLASH Nota n o utilize o cartucho de reagente se observar quaisquer sinais de danos Cartucho de reagente QUANTA Flash DGP IgG as micropart culas ficam depositadas durante o transporte e a conserva o e devem ser misturadas
27. reumatoide Um doente com um hemograma baixo positivo a IgG anti h tTG As restantes 6 amostras s o de indiv duos aparentemente saud veis um tinha sintomas gastrointestinais na altura da colheita da amostra dois s o positivos a IgA anti h tTG Tr s amostras s o de doentes com DC e uma de um doente com DH Sensibilidade e especificidade cl nicas O estudo de valida o cl nica incluiu 62 amostras de doentes com DC da biblioteca de soros da INOVA incluindo 7 com defici ncia IgA seletiva 87 controlos de doen a n o cel aca e 23 amostras de doentes com DH Um estudo externo independente incluiu 102 amostras de DC incluindo 9 com defici ncia IgA seletiva 151 amostras de indiv duos sintom ticos procura de ajuda m dica a quem se exclui DC ap s um exame f sico e testes de diagn stico e 98 controlos de doen a Todas as amostras foram testadas com o QUANTA Flash DGP IgG Os resultados foram analisados para calcular a sensibilidade e especificidade para DC n 148 DC com defici ncia IgA seletiva n 16 e DH n 23 em separado Sensibilidade e especificidade cl nicas do ensaio QUANTA Flash DGP IgG em DC 7 Analise E Intervalo de seguran a de 95 Positivo 132 32 9 144 41 Sensibilidade 89 2 83 0 93 7 QUANTA Flash egare 16 527 343 Eopecedade lt 07 65 0985 DGP IgG P i Toa Ms ase a Dois doentes t m gastrite H pylori dois t m hepatite viral e um tem artrite reumatoide As restantes
28. rteza absoluta a aus ncia de VIH VHB VHC ou outros agentes infecciosos Portanto devem manipular se os Controlos QUANTA Flash DGP IgG como se fossem qualquer material potencialmente infeccioso Usar equipamento de prote o individual apropriado para trabalhar com os reagentes fornecidos Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Respeitar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 2 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro Os Controlos QUANTA Flash DGP IgG destinam se a ser utilizados com o ensaio QUANTA Flash DGP IgG N o transfira os reagentes do controlo para tubos secund rios O instrumento utiliza os c digos de barras nos tubos para identificar o controlo Uma vez aberto cada tubo de controlo est em condi es de ser utilizado at 15 vezes com um tempo m dio de 10 minutos inserido no instrumento por utiliza o durante um total de duas horas e meia A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Os res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza recomendado do instrumento conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Condi es de conserva o 1 Conserve os controlos por abrir a 2 8
29. te o individual apropriado para trabalhar com os reagentes fornecidos 4 Os salpicos de reagentes devem ser limpos imediatamente Respeitar todas as regulamenta es ambientais nacionais e locais relativas elimina o de res duos Precau es 1 Este produto destina se a utiliza o para diagn stico In Vitro 2 Este ensaio destina se apenas a utiliza o com o instrumento BIO FLASH 9 Uma vez aberto este cartucho de reagente deve guardar se no carrossel do reagente do instrumento Deve ter se cuidado para evitar entornar os reagentes quando se coloca pela primeira vez o cartucho de reagente no instrumento 4 A contamina o qu mica dos reagentes pode surgir devido a limpeza ou lavagem inadequada do instrumento Os res duos de qu micos laboratoriais comuns como formalina lix via etanol ou detergente podem causar interfer ncia no ensaio Certifique se de que segue o procedimento de limpeza recomendado do instrumento conforme definido no manual do operador do BIO FLASH Condi es de conserva o 1 Conserve os cartuchos de reagente por abrir a 2 8 C Nao congele Os reagentes permanecem estaveis at a data de validade indicada quando conservados e manipulados conforme descrito no protocolo Devem guardar se no instrumento os cartuchos de reagentes abertos O software BIO FLASH monitoriza as datas de validade durante a utiliza o bem como a data de validade do lote do reagente per odo de armazenamen
30. ti et al Prevalence of celiac disease in at risk and not at risk groups in the United States a large multicenter study Arch Intern Med 2008 163 286 92 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 2009 Fifth Edition U imbolos utilizados Dispositivo m dico para diagn stico n Vitro Consultar as instru es de utiliza o Limite de temperatura 09 E N o reutilizar E Riscos biol gicos O C digo do lote N mero de cat logo Utilizar at Eros Fabricante m 8 Representante autorizado Cont m o suficiente para lt n gt testes q ONTR Controlo Positivo CONTROL Controlo Negativo CAL 1 Calibrador 1 Calibrador 2 Reciclar a caixa de papel Re E Este lado para cima QUANTA Flash uma marca comercial registada da INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH uma marca comercial registada da Biokit S A 2013 18 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos da Am rica Assist ncia T cnica apenas EUA e Canada 877 829 4745 Assist ncia T cnica Fora dos EUA 1 858 805 7950 support inovadx com Representante Autorizado na UE Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621170PRT Dezembro de 2013 Revisao
31. to do cartucho do reagente O sistema nao permite a utiliza o de um cartucho que tenha expirado Colheita prepara o e manuseamento de amostras Este procedimento deve ser efetuado com uma amostra de soro As amostras de soro com contamina o microbiana que sofreram tratamento t rmico ou contendo part culas vis veis n o devem ser utilizadas N o deve utilizar se soro muito hemolizado ou it rico Ap s a colheita o soro deve ser separado do co gulo O documento H18 A4 da CLSI recomenda as seguintes condi es de conserva o para as amostras 1 Nao conservar as amostras a temperatura ambiente durante mais de 8 horas 2 Se o teste n o for conclu do num prazo de 8 horas guardar a amostra a 2 8 C 3 Se o ensaio nao for conclu do num prazo de 48 horas ou para transporte da amostra congelar a 20 C ou a uma temperatura inferior As amostras congeladas devem ser bem agitadas depois de descongelarem e antes de serem testadas Procedimento Materiais fornecidos Cartucho de reagente QUANTA Flash DGP IgG Material adicional necessario mas nao fornecido Instrumento BIO FLASH com computador Lavagem do Sistema BIO FLASH Numero de Pega 3000 8205 Ativadores BIO FLASH Numero de Pega 3000 8204 Tinas BIO FLASH N mero de Pe a 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash DGP IgG N mero de Pe a 701171 Controlos QUANTA Flash DGP IgG N mero de Pe a 701172 Utilizar o analisador quimioluminescente BIO FLASH
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