Painel MetLac 12 Piccolo
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1. o Creatinina amidohidrolase Creatinina H O gt Creatina Creatina amidinohidrolase Creatina H O ______ _ _ Sarcosina Ureia Sarcosina oxidase Sarcosina HHO O _ Glicina Formaldeido H O Peroxidase is H O TBHBA 4 AAP Corante quinoneimina vermelho H O S o utilizadas duas cuvetes para determinar a concentra o de creatinina na amostra A creatina end gena medida na cuvete de branco que subtra da da creatina end gena combinada e da creatina formada a partir das reac es enzim ticas na cuvete de teste Quando a creatina end gena for eliminada dos c lculos a concentra o de creatinina ser proporcional intensidade da cor vermelha produzida A reac o de ponto final medida como a diferen a de absorv ncia entre 550 nm e 600 nm TFGe calculada A creatinina no soro regularmente medida como indicador da fun o renal Uma vez que a creatinina influenciada pela idade pelo sexo e pela ra a a doen a renal cr nica DRC pode n o ser detectada utilizando apenas a creatinina no soro Assim o Programa Nacional de Educa o para a Doen a Renal EUA recomenda vivamente que os laborat rios comuniquem regularmente uma Taxa de Filtra o Glomerular estimada TFGe quando se medir a creatinina no soro em doentes com idades iguais ou superiores a 18 anos A comunica o regular da TFGe com todas as determina es de cre2. 3 Princ pio do procedimento Albumina ALB Os m todos iniciais utilizados para medir a albumina inclu am t cnicas de fraccionamento e o teor de triptofano das globulinas Estes m todos eram de realiza o insustent vel e n o possu am uma especificidade elevada Duas t cnicas imunoqu micas s o consideradas como m todos de refer ncia mas s o dispendiosas e morosas As t cnicas de liga o por corante s o os m todos mais frequentemente utilizados para medir a albumina O verde de bromocresol BCG o m todo de liga o por corante mais frequentemente utilizado mas pode sobrestimar a concentra o de albumina especialmente no limite inferior do intervalo normal O purpura de bromocresol BCP o corante mais espec fico utilizado P gina 1 de 20 Quando ligado albumina o purpura de bromocresol BCP muda de cor de amarelo para azul A absorv ncia maxima varia com a mudanga de cor Surfactantes BCP Albumina _ gt Complexo albumina BCP pH acido A albumina ligada proporcional concentra o de albumina na amostra Trata se de uma reac o de ponto final que medida como absorv ncia a 600 nm C lcio CA v S f A n fes hes PO 10 1112 Os primeiros m todos utilizados para analisar o c lcio envolveram a precipita o do calcio com um excesso de ani es Os m todos de precipita o s o trabalhosos e frequentemente imprecisos O m todo de refer ncia para
3. 1 1 1 84 120 71 118 Vitros 950 Creatinina mg dL 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax Glicose mg dL 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax 0 997 0 943 12 4 69 91 56 646 Beckman Lactato mmol L 0 996 1 02 0 08 0 19 126 0 30 9 88 i STAT Magn sio mg dL 0 992 0 990 0 0 0 16 44 0 8 6 8 Espectroscopia de emiss o ptica at mica com acoplamento indutivo de plasma ICP OES F sforo mg dL 0 993 1 017 0 2 0 236 90 0 8 1 7 Vitros 950 Pot ssio mmol L 0 969 0 863 0 6 0 14 58 2 0 6 8 Radiometer KNA 2 S dio mmol L 0 937 0 782 27 1 3 79 113 116 154 Radiometer KNA 2 Di xido de carbono 0 947 0 903 2 0 0 84 60 6 39 Cobas Fara total mmol L Azoto ureico no 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman sangue mg dL 13 Bibliografia 1 Howe PE The use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 07 2 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49 109 13 3 Wolfson WQ et al A rapid procedure for the estimation of total protein true albumin total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 mL of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 30 4 Saifer A Gerstenfeld S Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globulins by means of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 36 5 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan r
4. di xido de carbono total tCO e azoto ureico no sangue BUN E inclu do no P gina 5 de 20 disco para c lculo das concentra es de creatinina CRE um branco de amostra dedicado Cada disco cont m ainda um diluente composto por surfactantes e conservantes Tabela 1 Reagentes P gina 6 de 20 Componentes Quantidade Disco N acetilcisteina 60 ug Adenosina 5 difosfato 36 ug Adenosina 5 difosfato sal de l tio 40 ug Adenosina 5 trifosfato 22 ug Adenosina 5 trifosfato sal diss dico 28 ug cido a cetoglut rico 19 ug 4 aminoantipirina 27 ug Cloridrato de 4 aminoantipirina 4 ug Amilase 0 036 U Arsenazo III sal s dico 1 7 ug Ascorbato oxidase Cucurbita spp 0 3U Brij 3 ug P rpura de bromocresol sal s dico 0 2 ug Acetato de c lcio 25 ug cido c trico 735 ug cido c trico sal triss dico 567 ug 2 cloro 4 nitrofenil a maltotri sido CNPG3 53 ug Creatina amidinohidrolase Actinobacillus spp 3U Creatinina amidohidrolase Pseudomonas spp 1U Acido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenosulf nico DHBSA sal s dico 31 ug Acido etileno diamino tetrac tico EDTA 182 ug Acido etileno diamino tetrac tico EDTA sal diss dico 17 ug Acido etilenoglicol bis f aminoetil ter N N N N tetrac tico EGTA 19 ug B galactosidase 0 005 U Glicose 1 6 difosfato lug cido L glut mico 9 2 ug Glicose 6 fosfato desidrogenase 0 1 U Glutamato desidrogenase 0 1 U Glutamina sintetase 0 17 U Hexoquinase 0 1 U Imidazol 29 ug La
5. 3 DP 0 09 0 15 CV 1 3 2 0 Pot ssio mmol L N 120 Controlo 1 M dia 6 12 6 12 DP 0 32 0 32 CV 5 2 5 7 Controlo 2 M dia 4 10 4 10 DP 0 24 0 26 CV 5 9 6 3 Tabela 6 Precis o continua o Analito Tamanho da amostra Intra ensaio Total S dio mmol L N 80 Controlo 1 M dia 143 5 143 5 DP 2 28 2 28 CV 1 6 1 6 Controlo 2 M dia 120 0 120 0 DP 2 13 2 13 P gina 16 de 20 CV 1 8 1 8 Di xido de carbono total mmol L N 120 Controlo 1 M dia 21 4 21 4 DP 2 29 2 29 CV 10 7 10 7 Controlo 2 M dia 10 5 10 5 DP 0 90 0 90 CV 8 6 8 6 Azoto ureico mg dL N 80 Controlo 1 M dia 19 19 DP 0 35 0 40 CV 1 9 21 Controlo 2 M dia 65 65 DP 1 06 1 18 CV 1 6 1 8 Correla o Para o lactato as amostras de sangue total com heparina de litio foram colhidas e processadas no Analisador Qu mico Piccolo xpress e por um m todo comparativo Para todos os outros m todos foram colhidas e testadas amostras de soro As amostras foram seleccionadas de modo a cumprir os valores de distribui o da directriz CLSI anterior NCCLS EP9 A e CLSI EP09 A2 IR Tabela 7 Correla o do Analisador Qu mico Piccolo xpress com o m todo comparativo Coeficiente Declive Intercep o EPE N Intervalo M todo de correla o da amostra comparativo Albumina g dL 0 854 1 001 0 3 0 22 261 1 1 5 3 Paramax 0 896 0 877 0 1 0 21 100 1 5 5 0 Beckman C lcio mg dL 0 980 0 98 0 17 0 31 111 4 6 13 2 Beckman Cloreto mmol L 0 978 0 982
6. efeito N veis fisiol gicos normais de brometo e iodeto n o interferem com o Sistema de Testes de Cloreto Piccolo 11 Valores esperados Foram analisadas amostras de 90 140 adultos do sexo masculino e feminino no Analisador Qu mico Piccolo xpress para determinar os intervalos de refer ncia dos seguintes ensaios Estes intervalos s o fornecidos apenas como orienta o Recomenda se que o seu departamento ou a sua institui o estabele am os intervalos normais para sua popula o de doentes espec fica gt Tabela 4 Intervalos de refer ncia do Analisador Qu mico Piccolo xpress Analito Albumina C lcio Cloreto Creatinina Glicose Unidades comuns 3 3 5 5 g dL 8 0 10 3 mg dL 98 108 mmol L 0 6 1 2 mg dL 73 118 mg dL Pagina 12 de 20 Unidades SI 33 55 g L 2 0 2 58 mmol L 98 108 mmol L 53 106 imol L 4 1 6 6 mmol L Lactato Magn sio F sforo plasma F sforo soro Pot ssio S dio Di xido de carbono total Azoto ureico no sangue BUN Nos Estados Unidos as unidades SI s o utilizadas para a comunica o de lactato 4 8 18 9 mg dL 1 6 2 3 mg dL 2 2 4 1 mg dL 2 5 4 4 mg dL 3 6 5 1 mmol L 128 145 mmol L 18 33 mmol L 7 22 mg dL 0 53 2 10 mmol L 0 66 0 95 mmol L 0 71 1 32 mmol L 0 81 1 42 mmol L 3 6 5 1 mmol L 128 145 mmol L 18 33 mmol L 2 5 7 9 mmol ureia L N o se observa qualquer diferen a entre a concentra o de F sforo medida em sangue total heparinizado e em
7. mg dL 18 pmol L glicose 10 mg dL 0 56 mmol L lactato 0 07 mmol L 0 6 mg dL magn sio 0 1 mg dL 0 04 mmol L f sforo 0 2 mg dL 0 06 mmol L pot ssio 1 5 mmol L s dio 110 mmol L di xido de carbono total 5 mmol L e azoto ureico no sangue 2 0 mg dL 0 7 mmol ureia L Precis o Foram realizados estudos de precis o utilizando as directrizes CLSI anterior NCCLS EP5 A e CLSI EP5 A2 com modifica es com base na CLSI anterior NCCLS EP18 A e CLSI EP18 A2 para dispositivos de utiliza o unitaria Os resultados de precisao intra ensaio e total foram determinados testando niveis de materiais de controlo comercialmente disponiveis Os estudos utilizaram v rios instrumentos Foram realizados testes de precis o de albumina c lcio creatinina glicose s dio e azoto ureico num local foram realizados testes de pot ssio e di xido de carbono total em dois locais durante 20 dias al m disso foram realizados testes de cloreto e f sforo em dois locais durante um per odo de cinco dias A precis o do lactato foi avaliada com os controlos 1 2 e 3 em dois locais utilizando dois lotes de discos durante um per odo de cinco dias em pools de plasma na Abaxis durante um per odo de cinco dias e em sangue total em tr s locais de presta o de cuidados por dois operadores cada um testando 10 replicados em 10 analisadores Abaxis Os resultados dos estudos de precis o s o apresentados na Tabela 6 Tabela 6 Precis o Anal
8. ncia de ides de s dio e am nio minimizada com a adi o de Kryptofix e de glutamina sintetase respectivamente Na reac o enzim tica acoplada a piruvato quinase PK defosforila o fosfoenolpiruvato de modo a formar piruvato A lactato desidrogenase LDH catalisa a convers o de piruvato em lactato Concomitantemente o NADH oxidado em NAD A taxa de varia o da diferen a de absorvancia entre 340 nm e 405 nm deve se convers o de NADH em NAD e directamente proporcional quantidade de pot ssio presente na amostra K PK ADP PEP gt Piruvato ATP LDH P gina 4 de 20 Piruvato NADH H Lactato NAD S dio NA Foram desenvolvidos m todos colorim tricos e enzim ticos que permitem medir a concentra o de s dio na instrumenta o de qu mica cl nica padr o Na reac o enzim tica da Abaxis a B galactosidase activada pelo s dio na amostra A enzima activada catalisa a reac o de o nitrofenil B galactopiran sido ONPG em o nitrofenol e galactose Na ONPG o nitrofenol Galactose B galactosidase Di xido de carbono total tCO O di xido de carbono total no soro ou plasma existe sob a forma de di xido de carbono dissolvido derivados carbamino de prote nas ides de bicarbonato e carbonato e cido carb nico O di xido de carbono total pode ser medido atrav s do indicador de pH do el ctrodo de CO e m todos enzim ticos espectrofotom tri
9. Painel MetLac 12 Piccolo C Apenas para utilizac o em diagn stico in vitro e profissional Servico de Apoio ao Cliente e de Assist ncia T cnica 800 822 2947 Os clientes fora dos EUA dever o contactar o representante local da Abaxis para solicitar o servico de apoio ao cliente Fevereiro 2014 PN 400 7192 Rev B 2013 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Aplicac o O Disco de Reagente do Painel MetLac 12 Piccolo utilizado com o Analisador Qu mico Piccolo xpress destina se a ser utilizado para a determina o quantitativa in vitro de albumina calcio cloreto creatinina glicose lactato magn sio f sforo pot ssio s dio di xido de carbono total e azoto ureico no sangue BUN em sangue total com heparina de l tio ou plasma com heparina de l tio em laborat rios cl nicos ou locais de presta o de cuidados 2 Resumo e explica o dos testes O Disco de Reagente do Painel MetLac 12 Piccolo e o Analisador Qu mico Piccolo xpress cont m um sistema de diagn stico in vitro que ajuda o m dico no diagn stico das seguintes patologias Albumina Doen a hep tica e renal C lcio Doen as da paratir ide doen as sseas e doen as renais cr nicas tetania Cloreto Desidrata o diarreia prolongada e v mitos doen a tubular renal hiperparatiroidismo queimaduras doen as renais com perda de sal excesso de hidrata o e terap utica tiaz dica Creatinina Doen as renais e monitoriza o de
10. al 10 Local 3 M dia N 20 N 20 N 20 N 20 N 20 N 20 N 20 N 20 1 5 6 99 0 18 2 6 0 86 0 02 1 9 6 22 0 20 3 2 Operador 1 1 52 0 03 2 1 0 72 0 02 22 4 67 0 17 3 7 4 13 0 12 3 0 1 00 0 03 2 8 1 09 0 03 2 6 6 18 0 21 3 4 5 88 0 32 5 5 0 88 0 03 3 3 1 09 Pagina 15 de 20 Operador 2 1 50 0 02 1 7 0 70 0 02 2 5 4 59 0 10 2 3 4 17 0 17 4 1 1 02 0 02 1 7 1 12 0 03 2 3 6 38 0 25 3 9 5 90 0 17 2 9 0 88 0 04 4 3 1 06 23 6 99 0 36 5 2 0 86 0 02 1 9 6 22 0 20 332 1 51 0 03 2 0 0 71 0 02 2 7 4 63 0 15 3 1 4 15 0 15 3 5 1 01 0 03 2 5 1 10 0 03 2 7 6 28 0 24 3 9 5 89 0 25 4 2 0 88 0 03 3 8 1 08 DP 0 03 0 03 0 03 ACV 3 0 2 9 3 2 Sangue total 11 Local 3 N 20 M dia 5 93 5 86 5 89 DP 0 24 0 14 0 20 ACV 4 1 2 5 3 3 Sangue total 12 Local 3 N 20 M dia 7 76 7 76 7 76 DP 0 28 0 28 0 27 CV 3 7 3 5 3 5 Os testes de sangue total foram realizados em tr s locais de presta o de cuidados por dois operadores com 10 repeti es por operador Duas amostras normais e duas amostras elevadas foram testadas por cada operador Magn sio mg dL N 80 Controlo 1 M dia 1 9 1 9 DP 0 03 0 06 MCV 1 7 3 4 Controlo 2 M dia 3 9 3 9 DP 0 04 0 10 CV 1 0 2 6 F sforo mg dL N 80 Controlo 1 M dia 3 1 3 1 DP 0 12 0 14 CV 3 7 4 7 Controlo 2 M dia 7 3 7
11. al Chemistry 1997 3 8 Kessler G M Wolfman An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V et al Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 198 Scarpa A et al Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 Ono T et al A new enzymatic assay of chloride in serum Clin Chem 1988 34 552 3 Knoll VE et al Spezifische kreatininbestimmung im serum Z Klin Chem Klin Biochem 1970 8 582 587 Haeckel R et al Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA et al Kinetic enzymatic method for determining serum creatinine Clin Chem 1975 21 1422 1426 Jaynes PK et al An enzymatic reaction rate assay for serum creatinine with a centrifugal analyzer Clin Chem 1982 28 114 117 Fossati P et al Enzymatic creatinine assay a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement Clin Chem 1983 29 1494 1496 Whelton A et al Nitrogen metabolites and renal function In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 Ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 1513 1575 National Kidney Disease Education Program NKDEP Creatinine Standardization http www nkdep nih gov labprofessionals creatinine_standardization htm Acedido em Setembro de 2010 Nationa
12. alitos A concentra o a que cada subst ncia potencialmente interferente foi testada baseou se nos n veis de teste da directriz CLSI anterior NCCLS EP7 P e CLSI EP7 A2 Efeitos de subst ncias end genas e As subst ncias interferentes fisiol gicas hem lise icter cia e lip mia provocam altera es nas concentra es apresentadas de alguns analitos Os ndices da amostra encontram se impressos na parte inferior de cada fita de resultado para informar o operador dos n veis de subst ncias interferentes presentes em cada amostra e O Analisador Qu mico Piccolo xpress suprime quaisquer resultados que sejam afectados por gt 10 de interfer ncia resultante de hem lise lip mia ou icter cia A indica o HEM LIP ou ICT respectivamente impressa no cart o de resultado em vez do resultado e N veis de amilase extremamente elevados gt 9 000 U L ter o um efeito significativo aumento gt 10 nos resultados de cloreto O sistema Piccolo n o avalia a concentra o de amilase para cada amostra e O ensaio de pot ssio no sistema Piccolo um ensaio acoplado de piruvato quinase PK lactato desidrogenase LDH Assim em casos de traumatismo muscular extremo ou de n veis altamente elevados de creatina quinase CK o Piccolo pode recuperar um valor pot ssio K falsamente elevado Nesses casos necess rio a confirma o de recupera es de n veis elevados de pot ssio inesperadas utilizando uma m
13. ards Institute CLS Blood Gas and pH Analysis and related measurements Approved Guidelines Second Edition Document C46 A2 Vol 29 No 8 February 2009 Clinical and Laboratory Standards Institute Procedures for the handling and processing of blood specimens Approved Guidelines Second Edition CLSI Document H18 A2 Wayne PA CLSI 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute Procedures for the handling and processing of blood specimens Approved Guidelines Third Edition CLSI Document H18 A3 Wayne PA CLSI 2004 Overfield CV et al Glycolysis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 4 Scott M G Electrolytes and blood gases In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia WB Saunders Company 1999 1065 6 Clinical and Laboratory Standards Institute Interference testing in clinical chemistry Proposed Guideline CLSI Publication EP7 P Wayne PA CLSI 1986 Clinical and Laboratory Standards Institute Interference testing in clinical chemistry Approved Guideline Second Edition CLSI Document EP7 A2 Wayne PA CLSI 2005 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3rd Ed Washington DC AACC Press 1990 National Committee for Clinical Laboratory Standards How to define and dete
14. atinina no soro permite que os laborat rios ajudem a identificar indiv duos com uma fun o renal reduzida e a facilitar a detec o de DRC Valores de TFGe calculados lt 60 mL min s o geralmente associados a um aumento do risco de resultados adversos de DRC O c lculo da TFGe realizado pelo Piccolo utilizando a idade o sexo e a ra a do doente O m todo Piccolo para a creatinina rastre vel ao m todo de refer ncia de IDMS para creatinina pelo que poss vel utilizar a seguinte forma da equa o MDRD para calcular a TFGe GFR mL min 1 73 m 175x Sa x Idade x 0 742 para mulheres x 1 212 para afro americanos Glicose GLU As primeiras medi es da concentra o de glicose foram realizadas utilizando m todos de redu o de cobre como o de Folin Wu e Somogyi Nelson A falta de especificidade das t cnicas de redu o de cobre conduziu ao desenvolvimento de procedimentos quantitativos que utilizam as enzimas hexoquinase e glicose oxidase O teste de glicose incorporado no Disco de Reagente do Painel Renal Piccolo consiste numa vers o modificada do m todo de hexoquinase que foi proposto como a base para o m todo de refer ncia de glicose A reac o da glicose com trifosfato de adenosina ATP catalisada por hexoquinase HK produz glicose 6 fosfato G 6 P e difosfato de adenosina ADP A glicose 6 fosfato desidrogenase G 6 PDH catalisa a reac o de G 6 P em 6 fosfogliconato e a redu o de nico
15. cloreto na amostra a amilase CNPG3 CNP G3 Cr Ca Creatinina CRE O m todo de Jaffe introduzido pela primeira vez em 1886 continua a ser um m todo frequentemente utilizado na determina o dos n veis de creatinina no sangue O m todo de refer ncia actual combina a utiliza o de terra de Fuller floridina com a t cnica de Jaffe para aumentar a especificidade da reac o Foram desenvolvidos m todos enzim ticos mais espec ficos para creatinina do que as v rias modifica es da t cnica de Jaffe Os m todos que utilizam a enzima creatinina amidohidrolase eliminam o problema da interfer ncia de i es de am nio detectada nas t cnicas que utilizam a creatinina iminohidrolase Nas reac es enzim ticas acopladas a creatinina amidohidrolase hidrolisa a creatinina em creatina Uma segunda enzima a creatina amidinohidrolase catalisa a forma o de sarcosina a partir da creatina A oxidase de sarcosina provoca a oxida o de sarcosina em glicina formalde do e per xido de hidrog nio H202 Numa reac o de Trinder a peroxidase catalisa a reac o entre per xido de hidrog nio 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxibenz ico TBHBA e 4 aminoantipirina 4 A AP num corante quinoneimina vermelho S o adicionados ferricianeto de pot ssio e ascorbato oxidase mistura da reac o para minimizar a potencial interfer ncia da bilirrubina e do cido asc rbico respectivamente P gina 2 de 20
16. cos os quais produzem todos resultados exactos e precisos O m todo enzim tico bastante adequado para utiliza o num analisador qu mico de sangue de rotina sem adicionar complexidade No m todo enzim tico a amostra primeiramente alcalinizada para converter todas as formas de di xido de carbono CO em bicarbonato HCO Em seguida o fosfoenolpiruvato PEP e HCO reagem para formar oxaloacetato e fosfato na presen a de fosfoenolpiruvato carboxilase PEPC A malato desidrogenase MDH catalisa a reac o de oxaloacetato e nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido em NAD e malato A taxa de varia o da absorv ncia devido convers o de NADH em NAD directamente proporcional quantidade de tCO na amostra PEPC PEP HCO y Oxaloacetato Fosfato MDH Oxaloacetato NADH H NAD Malato Azoto ureico no sangue BUN A ureia pode ser medida directa e indirectamente A reac o da diacetilmonoxima o nico m todo directo para medir a ureia frequentemente utilizada embora empregue reagentes perigosos Os m todos indirectos medem a am nia criada a partir da ureia a utiliza o da enzima urease aumentou a especificidade destes testes A am nia quantificada por uma variedade de m todos incluindo a nessleriza o titula o de cido a t cnica de Berthelot e reac es enzim ticas acopladas 7 No entanto os procedimentos de Berthelot catalisado
17. ctato desidrogenase cora o de galinha 0 13 U Lactato oxidase 0 002 U Hidr xido de l tio monohidratado 23 ug Acetato de magn sio tetrahidratado 67 ug Cloreto de magn sio hexahidratado 2 ug Sulfato de magn sio 33 ug Malato desidrogenase 0 1 U Cloreto de mangan s 10 ug D manitol 1 051 ug Tabela 1 Reagentes Componentes Quantidade Disco Ciclodextrina metilada 314 ug Cloridrato de 2 metil 4 isotizolina 3 ona MIT 4 2 ug p nicotinamida adenina dinucle tido NAD 83 ug p nicotinamida adenina dinucle tido NADP sal s dico 30 ug P nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido 36 ug o nitrofenil B D galactopiran sido ONPG 22 ug n octil glicosideo 31 ug 4 7 13 16 21 pentaoxa 1 10 diazabiciclo 8 8 5 tricosano Kryptofix 221 86 ug Peroxidase r bano silvestre 1U Fosfoenol piruvato 57 ug Fosfoenol piruvato carboxilase 0 001 U Fosfoglucomutase 0 035 U Pluronic F68 1 pg Polietilenoglicol 8000 4 ug Ferricianeto de potassio 0 7 ug Piruvato quinase 0 01 U Sarcosina oxidase microrganismo 1U Sacarose 74 ug Sacarose fosforilase 0 07 U Cloreto de s dio 69 ug 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxibenz ico TBHBA 188 ug Cloridrato de trietanolamina 214 ug Triton X 100 26 ug Urease ervilha sabre 0 05 U Tamp es surfactantes excipientes e conservantes Advert ncias e precauc es e Para utiliza o em diagn stico in vitro e O recipiente de diluente no disco de reagente automaticamente aberto ao fechar a gaveta do a
18. desvio no resultado superior a 10 para uma amostra de intervalo normal continuac o Concentrac o que de interfer ncia produz interfer ncia observada gt 10 Creatinina Acido asc rbico 20 dim 11 Pagina 11 de 20 Dopamina L dopa Epinefrina Glutationa Glicose Oxaloacetato Piruvato Lactato Dopamina L dopa Magn sio F sforo Nitrofurantoina Oxaloacetato Potassio Penicilina G Sulfadiazina Sodio Cefalotina Metotrexato Penicilina G Di xido de carbono total Acetaminofeno Acido asc rbico Cefalotina Cimetidina Eritromicina Lidocaina Metotrexato Nitrofurantoina Acido salicilico Sulfadiazina 132 44 13 0 52 0 50 Nenhum 20 132 100 150 400 0 5 100 100 20 400 16 10 1 0 5 20 50 150 dim 80 dim 71 dim 45 dim 13 dim 11 dim 13 dim 85 Insignificante dim 49 Insignificante Nenhum aum 19 dim 14 aum 17 dim 12 aum 12 aum 11 aum 10 aum 11 dim 12 aum 13 dim 19 dim 21 aum 23 dim 80 aum 13 dim 17 dim 25 ACH eso y E z 3 dim diminui o na concentra o do analito especificado aum aumento na concentra o do analito especificado e Para o ensaio de cloreto o brometo em n veis t xicos 215 mmol L pode originar um efeito significativo aumento 71094 no resultado de cloreto O iodeto em concentrag es muito elevadas 30 mmol L nivel mais elevado testado n o tem qualquer
19. di lise renal Glicose Dist rbios do metabolismo dos hidratos de carbono incluindo diabetes mellitus e hipoglicemia em jovens e adultos Lactato As medi es de lactato s o utilizadas no diagn stico e tratamento de acidose l ctica na monitoriza o de hipoxia tecidual e no diagn stico de hiperlactatemia Magn sio Hipomagnesemia e hipermagnesemia F sforo Desidrata o diabetes paratiroidismo e doen a renal Pot ssio Doen a renal glomerular ou tubular insufici ncia adrenocortical cetoacidose diab tica terap utica com pot ssio administrado por via intravenosa em excesso s psis panhipopituitarismo hem lise in vitro hiperaldosteronismo desnutri o hiperinsulinismo alcalose metab lica e perda gastrointestinal S dio Desidrata o diabetes insipidus perda de fluidos gastrointestinais hipot nicos intoxica o por sal diminui o selectiva da sensa o de sede perda cut nea queimaduras suda o hiperaldosteronismo dist rbios do SNC hiponatremia de dilui o deple o e del rio e sindrome de secre o de ADH Di xido de carbono total Alcalose e acidose metab licas prim rias e alcalose e acidose respirat rias prim rias Azoto ureico no sangue BUN Doen as renais e metab licas Tal como acontece com qualquer procedimento de teste de diagn stico todos os outros procedimentos de teste incluindo o estado cl nico do doente devem ser considerados antes do diagn stico final
20. diminui o no valor de di xido de carbono at 6 mmol L no decorrer de 1 hora e Inicieo teste no prazo de 10 minutos ap s a transfer ncia da amostra para o disco de reagente P gina 8 de 20 8 Procedimento Materiais fornecidos e Um Disco de Reagente do Painel MetLac 12 Piccolo PN 400 1037 uma caixa de discos PN 400 0037 Materiais necess rios mas n o fornecidos e Analisador Qu mico Piccolo xpress e As pipetas de transfer ncia de amostras volume fixo de aproximadamente 100 uL e as pontas s o fornecidas com cada Analisador Qu mico Piccolo xpress e podem ser encomendadas novamente junto da Abaxis e Reagentes de controlo dispon veis no mercado recomendados pela Abaxis contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis para obter mais informa es sobre os materiais de controlo e os valores esperados e Temporizador Par metros de teste O Analisador Qu mico Piccolo xpress funciona a temperaturas ambiente entre os 15 C e os 32 C O tempo de an lise de cada Disco de Reagente do Painel MetLac 12 Piccolo inferior a 14 minutos O analisador mant m o disco de reagente temperatura de 37 C durante o intervalo de medi o Procedimento de teste Os procedimentos completos de colheita de amostras e funcionamento passo a passo s o descritos em pormenor no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress Calibra o O Analisador Qu mico Piccolo xpress calibrado pelo fabricante antes do seu envio O c d
21. eaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 17 6 Gendler SM Albumin Jn Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 Ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1029 33 Pagina 17 de 20 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 3l 32 13 33 34 39 36 37 38 39 Webster D Bignell AHC Attwood EC An assessment of the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 8 Louderback A Mealey EH Taylor NA A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 Kramer B et al A simple technique for the determination of calcium and magnesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP et al A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E et al The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Cali JP et al A reference method for the determination of total calcium in serum n Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 8 GR Cooper ed Washington DC American Association for Clinic
22. enha i es de am nio interferem com pelo menos um dos qu micos contidos no Disco de Reagente do Painel MetLac 12 Piccolo e As amostras com hemat critos com um excesso de volume de concentrado de eritr citos de 62 65 uma frac o de volume de 0 62 0 65 podem apresentar resultados inexactos As amostras com um n vel elevado de hemat critos podem ser inclu das nos relat rios como hemolisadas Estas amostras podem ser centrifugadas de forma a obter plasma O plasma pode ent o ser reprocessado num novo disco de reagente e Qualquer resultado de um determinado teste que exceda o intervalo de ensaio dever ser analisado atrav s de outro m todo de teste aprovado ou enviado para um laborat rio de refer ncia N o dilua a amostra e processe novamente no Analisador Qu mico Piccolo xpress Advert ncia Testes extensivos com o Analisador Qu mico Piccolo xpress demonstraram que em casos muito raros a amostra distribu da no disco de reagente pode n o fluir devidamente para a c mara da amostra Devido ao fluxo n o uniforme poss vel que seja analisada uma quantidade de amostra inadequada e v rios resultados poder o P gina 9 de 20 encontrar se fora dos intervalos de refer ncia A amostra pode ser reprocessada utilizando um novo disco de reagente Interfer ncia Foram testadas substancias como interferentes com os analitos Foram preparados pools de plasma humano de lactato para todos os outros pools de soro humanos de an
23. etodologia diferente e Para obter mais informa es sobre os n veis m ximos de subst ncias end genas contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis Efeitos de subst ncias ex genas e terap uticas Para o lactato foram seleccionadas 41 subst ncias ex genas e terap uticas como potencialmente interferentes para os m todos de teste da Abaxis com base em recomenda es de Young Para todos os outros m todos foram seleccionadas e testadas 35 subst ncias ex genas e terap uticas A interfer ncia significativa define se como um desvio no resultado superior a 10 para uma amostra de intervalo normal Para o lactato os pools de soro humano foram suplementados com concentra es conhecidas dos f rmacos ou qu micos e posteriormente analisados Para todos os outros m todos foram utilizados pools de soro humano Consulte a Tabela 2 para obter uma lista de subst ncias ex genas e terap uticas avaliadas Consulte a Tabela 3 para obter uma lista de analitos nos quais foi observada interfer ncia Tabela 2 Subst ncias ex genas e terap uticas avaliadas Subst ncia potencialmente Concentra o mais elevada testada interferente mg dL a menos que especificado de outro modo Acetaminofeno 100 Acetoacetato 102 cido acetilsalic lico 50 cido rico 30 Ampicilina 30 cido asc rbico 3 Brometo 30 Cafeina 10 Cefalotina Keflin 400 Cloranfenicol 100 Cimetidina 16 Digoxina 5 D lactato 45 Dopamina 13 Epinefr
24. igo de barras impresso no anel de c digo de barras do disco de reagente indica ao analisador os dados de calibra o espec ficos do disco Consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress Controlo de qualidade Consulte no Manual do Operador do Analisador Piccolo xpress uma descri o detalhada sobre o processamento registo interpreta o e representa o gr fica dos resultados de controlo A Abaxis recomenda que os testes de controlo sigam as directrizes federais estatais e locais 9 Resultados O Analisador Qu mico Piccolo xpress calcula e imprime automaticamente as concentra es de analito na amostra Os detalhes dos c lculos de reac o de ponto final e cin tica encontram se no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress A interpreta o dos resultados descrita no Manual do Operador do Analisador Os resultados s o impressos em fitas de resultados fornecidas pela Abaxis As fitas de resultados t m um verso autocolante para facilitar a coloca o nos ficheiros dos doentes 10 Limita es do procedimento As limita es gerais sobre o procedimento s o descritas no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress e O nico anticoagulante recomendado para utiliza o com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress a heparina de l tio A Abaxis realizou estudos que demonstram que o EDTA fluoreto oxalato e qualquer anticoagulante que cont
25. ina 1 Tabela 2 Subst ncias ex genas e terap uticas avaliadas continua o Subst ncia potencialmente Concentra o mais elevada testada interferente mg dL a menos que especificado de outro modo Eritromicina 10 P gina 10 de 20 Glicose 700 Glutationa 30 cido glic lico 7 6 Hidroclorotiazida TS Hidroxiureia 0 7 Ibuprofeno 50 Isoniazida 4 Cetoprofeno 50 L dopa 5 Lidocaina 1 Lactato de litio 84 Metformina 500 Meticilina 100 Metotrexato 0 5 Metronidazol 5 Nafcilina 1 Nitrofurantoina 20 Oxacilina 1 Oxaloacetato 132 Penicilina G 100 Fenitoina 5 5 difenilhidantoina 3 Prolina 4 Piruvato 44 Rifampicina 0 5 Acido salicilico 50 Sulfadiazina 150 Sulfanilamida 50 Teofilina 20 Testado apenas para lactato Omitido apenas para lactato Consulte a Tabela 3 para obter uma lista de analitos nos quais foi observada interfer ncia Tabela 3 As substancias seguintes apresentaram um desvio no resultado superior a 10 para uma amostra de intervalo normal Concentra o que de interfer ncia produz interfer ncia observada gt 10 Albumina Acetoacetato 102 dim 18 Ampicilina 30 dim 12 Cafeina 10 dim 14 Cloreto de calcio 20 dim 17 Cefalotina Keflin 400 aum 13 Ibuprofeno 50 aum 28 cetoglutarato 5 dim 11 Nitrofuranto na 20 dim 13 Prolina 4 aum 1296 Sulfadiazina 10 dim 14 Sulfanilamida 50 dim 12 Teofilina 20 dim 11 Tabela 3 As substancias seguintes apresentaram um
26. ito Tamanho da amostra P gina 13 de 20 Total Albumina g dL N 80 Controlo 1 M dia 5 6 5 6 DP 0 09 0 11 CV 1 7 2 1 Controlo 2 M dia 3 7 3 7 DP 0 07 0 11 MCV 2 0 2 9 C lcio mg dL N 80 Controlo 1 M dia 8 6 8 6 DP 0 21 0 25 CV 2 4 2 9 Controlo 2 M dia 11 8 11 8 DP 0 39 0 40 CV 3 3 3 4 Cloreto mmol L N 160 Controlo 1 M dia 97 8 97 8 DP 1 63 1 74 CV 1 7 1 7 Controlo 2 M dia 113 6 113 6 DP 1 97 2 22 CV 1 7 2 0 Creatinina mg dL N 80 Controlo 1 M dia 1 1 1 1 DP 0 14 0 14 MCV 12 5 13 1 Controlo 2 M dia 5 2 5 2 DP 0 23 0 27 MCV 4 4 5 2 Glicose mg dL N 80 Controlo 1 M dia 66 66 DP 0 76 1 03 CV 1 1 1 6 Controlo 2 M dia 278 278 DP 2 47 3 84 CV 0 9 1 4 Tabela 6 Precis o continua o Analito Tamanho da amostra Intra ensaio Total Lactato mmol L N 80 Controlo 1 M dia 1 62 1 62 DP 0 03 0 04 CV 1 8 2 2 Controlo 2 M dia 3 63 3 63 DP 0 05 0 08 Pagina 14 de 20 CV Controlo 3 M dia DP CV Pool de plasma 1 M dia DP CV Pool de plasma 2 M dia DP CV Sangue total 1 Local 1 M dia DP CV Sangue total 2 Local 1 M dia DP CV Sangue total 3 Local 1 M dia DP CV Sangue total 4 Local 1 M dia DP CV Sangue total 5 Local 2 M dia DP CV Sangue total 6 Local 2 M dia DP CV Lactato mmol L Sangue total 7 Local 2 M dia DP CV Sangue total 8 Local 2 M dia DP CV Sangue total 9 Local 3 M dia DP CV Sangue tot
27. izado ou material de controlo A c mara da amostra do disco de reagente pode conter at 120 uL de amostra e As amostras de sangue total obtidas por pun o venosa devem apresentar se homog neas antes de serem transferidas para o disco de reagente Inverta suavemente o tubo de colheita v rias vezes imediatamente antes de transferir a amostra N o agite o tubo de colheita a agita o pode provocar hem lise e A hem lise pode provocar resultados incorrectamente elevados em ensaios de pot ssio Este problema pode n o ser detectado ao analisar sangue total basta uma liberta o de pot ssio t o baixa como 0 5 dos eritr citos para pode aumentar o n vel s rico de pot ssio em 0 5 mmol L Adicionalmente mesmo amostras n o hemolisadas que n o sejam imediatamente processadas podem ter aumentado os n veis de pot ssio devido a fuga intracelular e As amostras de sangue total por pun o venosa para determina o de lactato requerem que o doente esteja pelo menos 2 horas em repouso que evite qualquer exerc cio com o antebra o e que o sangue seja obtido sem a utiliza o de torniquete ou imediatamente ap s a aplica o de torniquete O lactato deve ser analisado ou as c lulas sangu neas separadas do plasma logo que poss vel ap s a colheita O lactato no sangue total aumenta rapidamente devido glic lise O lactato no sangue aumenta em 0 01 a 0 02 mmol L minuto temperatura ambiente na aus ncia de agentes anti glicol tico
28. l Kidney Disease Education Program NKDEP Creatinine Standardization Recommendations IVD Manufacturers http www nkdep nih gov labprofessionals IVD Manufacturers htm Acedido em Setembro de 2010 National Kidney Foundation GFR Calculator http www kidney org professionals kls gfr_calculator cfm Acedido em Setembro de 2010 Folin O et al A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N et al A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol Chem 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 Ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Tabata M et al Direct Spectrophotometry of magnesium in serum after reaction with hexokinase and glucose 6 phophate dehydrogenase Clin Chem 1985 31 703 705 Schultz DW Passonneau JV Lowry OH An enzymic method for the measurement of inorganic phosphate determination Anal BioChem 1967 19 300 314 Bibliografia continua o Tedokon M et al Enzymatic assay of inorganic phosphate with use of sucrose phosphorylase and phosphoglucomutase Clin Chem 1992 38 512 515 Berry MN et al Enzymatic determination of potassium in serum Clin Chem 1989 35 817 820 Van Pelt J Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in serum compa
29. nalisador N o poss vel reutilizar um disco com um recipiente de diluente aberto Certifique se de que a amostra ou o controlo foi colocada o no disco antes de fechar a gaveta e Os discos de reagente usados cont m fluidos corporais humanos Siga as boas pr ticas de seguran a laboratorial quando pets 50 m i 3 manusear e eliminar discos usados Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress as instru es de limpeza de derrames biologicamente perigosos e Os discos de reagente s o de pl stico e podem rachar ou partir se se ca rem Nunca utilize um disco que tenha ca do uma vez que pode espalhar materiais biologicamente perigosos no interior do analisador e As esferas de reagente podem conter cidos ou subst ncias c usticas O operador n o entra em contacto com as esferas de reagente se os procedimentos recomendados forem seguidos Na eventualidade de manuseamento das esferas por exemplo durante a limpeza depois de um disco cair e se partir evite a ingest o o contacto com a pele ou a inala o das esferas de reagente Instru es para o manuseamento de reagentes poss vel utilizar os discos de reagente directamente a partir do frigor fico sem aquecer N o permita que os discos permane am temperatura ambiente durante mais de 48 horas antes da utiliza o Abra a bolsa de alum nio selada e retire o disco tendo o cuidado de n o tocar no anel de c digo de barras localizado na parte supe
30. o calcio a espectroscopia por A r r nl 13 r ns e absor o at mica contudo este m todo n o adequado utiliza o de rotina Os m todos espectrofotom tricos que utilizam SM NE i q Annis 14 15 16 complexona de o cresolftale na ou arsenazo III como indicadores metalocr micos s o utilizados com maior frequ ncia O arsenazo III tem uma grande afinidade relativamente ao c lcio e n o depende da temperatura como a CPC O c lcio na amostra do doente liga se ao arsenazo III para formar um complexo de c lcio corante Ca Arsenazo III gt Complexo de Ca Arsenazo III p A reac o de ponto final monitorizada a 405 nm 467 nm e 600 nm A quantidade de c lcio total na amostra proporcional absorv ncia Cloreto CL O m todo de cloreto da Abaxis baseia se na determina o da activa o dependente de cloreto da actividade de a amilase A a amilase desactivada reactivada pela adi o do i o de cloreto permitindo ao c lcio reassociar se enzima A reactiva o da actividade da a amilase proporcional concentra o de i es de cloreto na amostra A a amilase reactivada converte o substrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotri sido CNPG3 em 2 cloro p nitrofenil CNP produzindo cor e a maltotriose G3 A reac o medida bicromaticamente e o aumento da absorv ncia directamente proporcional actividade da a amilase reactivada e concentra o de
31. plasma heparinizado No entanto observou se um ligeiro aumento 0 3 mg dL no soro quando comparado com o sangue total heparinizado e o plasma heparinizado Este aumento consistente com a diferen a entre F sforo no soro e no plasma conforme descrita na 64 65 66 67 literatura 12 Caracter sticas de desempenho Linearidade A qu mica de cada analito linear no intervalo din mico abaixo indicado quando o Analisador Qu mico Piccolo xpress utilizado de acordo com o procedimento recomendado consulte o Manual do Operador do Analisador Quimico Piccolo xpress Tabela 5 Intervalos din micos do Analisador Qu mico Piccolo xpress Analito Albumina C lcio Cloreto Creatinina Glicose Lactato Magn sio F sforo Pot ssio S dio Di xido de carbono total Azoto ureico no sangue BUN Sensibilidade limites de detec o Unidades comuns 1 6 5 g dL 4 0 16 0 mg dL 80 135 mmol L 0 2 20 mg dL 10 700 mg dL 2 1 90 0 mg dL 0 1 8 0 mg dL 0 2 20 mg dL 1 5 8 5 mmol L 110 170 mmol L 5 40 mmol L 2 180 mg dL Unidades SI 10 65 g L 1 0 4 0 mmol L 80 135 mmol L 18 1768 umol L 0 6 38 9 mmol L 0 30 9 99 mmol L 0 04 3 3 mmol L 0 06 6 5 mmol L 1 5 8 5 mmol L 110 170 mmol L 5 40 mmol L 0 7 64 3 mmol ureia L O limite inferior de detec o do intervalo report vel din mico para cada analito de albumina 1 g dL 10 g L c lcio 4 0 mg dL 1 0 mmol L cloreto 80 mmol L creatinina 0 2
32. red with determination by flame photometry coulometry and ion selective electrodes Clin Chem 1994 40 846 847 Hubl W et al Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in abnormal hemolyzed icteric lipemic paraproteinemic or uremic serum samples compared with indirect determination with ion selective electrodes Clin Chem 1994 40 1528 1531 Helgerson RC et al Host guest complexation 50 Potassium and sodium ion selective chromogenic ionophores J Amer Chem Soc 1989 111 6339 6350 Kumar A et al Chromogenic ionophere based methods for spectrophotometric assay of sodium and potassium in serum and plasma Clin Chem 1988 34 1709 1712 Berry MN et al Enzymatic determination of sodium in serum Clin Chem 1988 34 2295 2298 P gina 18 de 20 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 13 65 66 67 68 69 70 71 72 Skeggs LT Jr An automatic method for the determination of carbon dioxide in blood plasma Am J Clin Pathol 1960 33 181 185 Korzun WJ Miller WG Carbon dioxide n Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 869 872 Fales FW Urea in serum direct diacetyl monoxime method Jn Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 9 Faulkner WR and Meites S eds Washington DC AACC Press 1982 365 373 Van Slyke e
33. rior do disco Utilize de acordo com as instru es fornecidas no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress Um disco que n o seja utilizado dentro de 20 minutos ap s a abertura da bolsa dever ser eliminado Armazenamento Armazene os discos de reagente nas respectivas bolsas seladas a 2 8 C N o exponha os discos abertos ou fechados a luz solar directa ou a temperaturas superiores a 32 C Pode utilizar os discos de reagente at ao prazo de validade inclu do na embalagem O prazo de validade tamb m est codificado no c digo de barras impresso no anel de c digo de barras Ser apresentada uma mensagem de erro no visor do Analisador Qu mico Piccolo xpress se os reagentes estiverem fora do prazo Indica es de instabilidade deteriora o do disco de reagente Uma bolsa rasgada ou que apresente qualquer tipo de danos pode permitir a entrada de humidade no disco n o utilizado e afectar adversamente o desempenho do reagente N o utilize um disco de uma bolsa danificada 6 Instrumento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress informa es completas sobre a utiliza o do analisador P gina 7 de 20 7 Colheita e prepara o das amostras As t cnicas de colheita das amostras s o descritas na sec o Colheita de amostras do Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress e O volume m nimo da amostra necess rio 100 uL de sangue total heparinizado plasma heparin
34. rmine reference intervals in the clinical laboratory Approved Guidelines Second Edition NCCLS Document C28 A2 Wayne PA NCCLS 2000 Clinical and Laboratory Standards Institute How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory Approved Guidelines Third Edition CLSI Document C28 A3c Wayne PA CLSI 2010 Lum G Gambino S Serum vs plasma determinations in routine chemistry Clin Chem 1972 18 7 Abstr 134 710 Bibliografia continua o Lum G Gambino S A comparison of serum vs hepirinized plasma for routine chemistry tests Am J Clin Pathol 1974 61 1 108 13 Carothers J Kurtz N Lehmann J Jr Error introduced by specimen handling before determination of inorganic phosphate concentrations in plasma and serum Clin Chem 1976 22 11 1909 12 Ladenson J et al Serum vs heparinized plasma for routine chemistry tests Am J Clin Path 1974 62 4 545 52 Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices Approved Guideline CLSI Document EP5 A Wayne PA CLSI 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices Approved Guideline Second Edition CLSI Document EP5 A2 Wayne PA CLSI 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Quality management for unit use testing Proposed Guideline CLSI Document EP18 A Wayne PA CLSI 2002 Clinical and Laboratory Standards Institu
35. s e Para todos os outros m todos as amostras de sangue total por pun o venosa devem ser processadas no prazo de 60 minutos ap s a colheita As concentra es de glicose s o afectadas pelo tempo decorrido desde a ltima refei o do doente e pelo tipo de amostra colhida Para determinar os resultados de glicose com precis o as amostras devem ser colhidas de um doente que tenha estado em jejum durante pelo menos 12 horas A concentra o de glicose diminui aproximadamente 5 12 mg dL no espa o de 1 hora em amostras n o centrifugadas armazenadas temperatura ambiente a AD 57 e A refrigera o de amostras de sangue total pode provocar altera es significativas nas concentra es de creatinina e glicose A amostra pode ser separada em plasma ou soro e armazenada em tubos de amostra com tampa a 2 8 C caso n o seja poss vel processar a amostra no prazo de 60 minutos e Para as amostras de sangue total ou de plasma utilize apenas tubos de colheita de amostras evacuados com heparina de l tio tampa verde e A concentra o de di xido de carbono total determinada com maior exactid o quando o ensaio processado imediatamente ap s a abertura do tubo e o mais rapidamente poss vel ap s a colheita e processamento do sangue no tubo fechado O ar ambiente cont m muito menos di xido de carbono do que o plasma e o di xido de carbono dissolvido gasoso escapa da amostra para o ar com uma consequente
36. s s o inconstantes para a medi o de am nia As reac es enzim ticas acopladas s o r pidas apresentam uma elevada especificidade para a am nia e s o frequentemente utilizadas Uma destas reac es foi proposta como candidato a m todo de refer ncia Na reac o enzim tica acoplada a urease hidrolisa a ureia em am nia e di xido de carbono Ao combinar am nia com a cetoglutarato e nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido a enzima glutamato desidrogenase GLDH oxida NADH em NAD Urease Ureia H O 2NH CO GLDH NH a cetoglutarato NADH gt gt gt L glutamato H O NAD A taxa de varia o da diferen a de absorv ncia entre 340 nm e 405 nm deve se convers o de NADH em NAD e directamente proporcional quantidade de ureia presente na amostra 4 Princ pio de funcionamento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress os princ pios e limita es do procedimento 5 Descric o dos reagentes Reagentes Cada Disco de Reagente do Painel MetLac 12 Piccolo cont m esferas de reagente secas espec ficas do teste descritas abaixo E inclu do em cada disco um reagente de branco de amostra seca composto por tamp o surfactantes excipientes e conservantes para utiliza o no c lculo de concentra es de albumina ALB cloreto CL calcio CA glicose GLU lactato LAC magn sio MG f sforo PHOS pot ssio K s dio NA
37. sua vez catalisa a decomposi o de glicose para formar glicose 6 fosfato G 6 P e ADP O G 6 P reage com o fosfato de nicotinamida adenina dinucle tido NADP para formar fosfato de nicotinamida adenina dinucle tido NADPH reduzido e 6 fosfogliconato na presen a de glicose 6 fosfato dehidrogenase G 6 PDH Trata se de uma reac o cin tica de primeira ordem A taxa produ o de NADPH directamente proporcional quantidade de magn sio presente na amostra A absorv ncia medida bicromaticamente a 340 nm e 405 nm F sforo PHOS O m todo enzim tico mais aplic vel para o sistema Abaxis utiliza a sacarose fosforilase SP acoplada atrav s de fosfoglucomutase PGM e glicose 6 fosfato desidrogenase G6PDH 2 Utilizando o sistema enzim tico para cada mole de f sforo presente na amostra formada uma mole de NADH A quantidade de NADH formada pode ser medida como um ponto final a 340 nm SP Sacarose P Glicose 1 Fosfato G 1 P Frutose PGM Mg GIP gt gt gt G 6P G 6 PDH G 6 P NAD NADH 6 fosfogliconato H Pot ssio K Foram desenvolvidos m todos espectrofotom tricos que permitem a medi o da concentra o de pot ssio na instrumenta o de qu mica cl nica padr o O m todo enzim tico da Abaxis baseia se na activa o de piruvato quinase com pot ssio e apresenta uma excelente linearidade e susceptibilidade insignificante a subst ncias end genas A interfer
38. t al A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 211 228 Fawcett JK et al A rapid and precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Chaney et al Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 Talke H et al Enzymatische harnstoffbestimmung in blut and serum im optischen test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett et al Reduced nicotinamide adenine dinucleotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton et al Spectrophotometric and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ et al A coupled enzyme equilibrium method for the measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on urea candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI formerly NCCLS Physician s office laboratory guidelines Tentative Guideline Second Edition NCCLS Document POL1 T2 Wayne PA NCCLS 1992 Scott M G Electrolytes and blood gases In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 Ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia WB Saunders Company 1999 1058 1059 D B Sacks Carbohydrates in Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 Ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia WB Saunders Company 1999 Clinical and Laboratory Stand
39. te Quality management for unit use testing Approved Guideline Second Edition CLSI Document EP18 A2 Wayne PA CLSI 2009 Clinical and Laboratory Standards Institute Method comparison and bias estimation using patient samples Approved Guideline CLSI Document EP9 A Wayne PA CLSI 1995 P gina 19 de 20 73 Clinical and Laboratory Standards Institute Method comparison and bias estimation using patient samples Approved Guideline Second Edition CLSI Document EP09 A2 IR Wayne PA CLSI 2010 Pagina 20 de 20
40. tinamida adenina dinucle tido NAD em NADH HK Glicose ATP G 6 P ADP G 6 PDH G 6 P NAD 6 fosfogliconato NADH H A absorv ncia medida bicromaticamente a 340 nm e 850 nm A produ o de NADH directamente proporcional quantidade de glicose presente na amostra P gina 3 de 20 Lactato LAC No m todo Abaxis o lactato LAC oxidado por lactato oxidase LOX em piruvato e per xido de hidrog nio H202 A peroxidase catalisa a reac o de H O 4 aminoantipirina 4 A AP e cido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenesulf nico DHBSA para formar corante quinoneimina vermelho LOX Lactato O 9 Piruvato HO P id D H O 4 AAP DHBSA et gt Corante quinoneimina vermelho H O A taxa de forma o de corante vermelho proporcional concentra o de LAC na amostra A reac o medida bicromaticamente a 515 nm e 600 nm Magn sio MG O m todo de activa o de hexoquinase HK para magn sio o m todo mais adequado para o sistema Piccolo em termos de sensibilidade precis o e exactid o O m todo enzim tico pode ser descrito da seguinte forma HK Glicose ATP G 6 P ADP Mg G 6 PDH G 6 P NADP 6 fosfogliconato NADPH H A reac o de limita o cin tica a reac o de HK O magn sio da amostra activa a HK que por
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