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APTIMA CT Assay Package Insert

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1. Tabela 5 Distribui o do dispositivo de amostragem cervical utilizado em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Dispositivo de amostragem cervical Local de Colheita Cl nica soi utilizado 1 2 3 4 5 6 Esp tula Cytobrush 0 124 475 287 57 364 1 307 Dispositivo tipo Escova 100 0 0 0 240 0 340 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 50 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 5a Sensibilidade e especificidade do ensaio APTIMA CT relativamente ao estado de infec o do paciente por estado sintom tico e a n vel geral em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Resultados de CT dos esp cimes Een cim cit l dicos em EN NS i J Sensibilidade Especificidade P i Shaul ds IC de 95 IC de 95 PreservCyt Positivo 29 0 1 3 E E 96 7 29 30 98 8 325 329 Sintom tico Negativo 1 3 3 319 82 8 99 9 96 9 99 7 Total 30 3 4 322 Positivo 57 0 1 13 m E 95 0 57 60 98 9 1 214 1 228 Assintom tico Negativo 3 2 11 1 201 86 1 99 0 98 1 99 4 Total 60 2 12 1 214 Positivo 86 0 2 16 95 6 86 90 98 8 1 539 1 557 Tudo Negativo 4 5 14 1 520 89 0 98 8 98 2 99 3 Total 90 5 16 1 536 FS O SS To Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado neg
2. A Reagente de amplificac o APTIMA para CT 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo 5 de agente de volume E Reagente enzim tico APTIMA para CT 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em soluc o tamponada HEPES contendo 10 de reagente de volume P Reagente de sonda APTIMA para CT 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo 5 de detergente TCR B Reagente B de captura do alvo APTIMA para CT 1x0 30 mL cidos nucleicos n o infecciosos numa solu o tamp o contendo 5 de detergente Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis Caixa de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de reconstitui o de amplifica o APTIMA para CT 1x 11 9 mL Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o enzim tica APTIMA para CT 1x6 3mL Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Soluc o de reconstituic o de sonda APTIMA para CT 1x15 2mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selecc o APTIMA para CT 1x43 0 mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante TCR Reagente de captura do alvo APTIMA para GC 1x 26 0 mL Solu o tamponada salina contendo fase s lida e olig meros de captura Colarinho de Recons
3. Para trabalhar correctamente com o software do ensaio APTIMA o controlo negativo para CT rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT tem de estar na primeira posi o da primeira TTU O controlo positivo para CT rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC tem de estar na segunda posi o da primeira TTU A coloca o na posi o errada causar a falha do teste Quaisquer controlos adicionais dever o ser digitados como esp cimes de pacientes e monitorados pelo operador para aceitabilidade O controlo positivo para GC funciona como controlo negativo para o ensaio APTIMA CT B Pipeta o de Controlos e Esp cimenes O volume de controlo ou esp cime adicionado ao tubo de reac o deve ser de 400 uL 100 uL Recomenda se a inspec o visual do volume pipetado para o tubo de reac o para assegurar uma transfer ncia adequada do volume necess rio um volume adequado de esp cime ou controlo para fornecer resultados precisos Se n o tiver sido pipetado o volume adequado volte a pipetar o wTCR CT e o controlo ou esp cime para num novo tubo de reac o C Reagentes A Solu o de Reconstitui o de Sonda pode precipitar durante o armazenamento Caso isto ocorra aque a a solu o de reconstitui o da sonda a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Reconstitui o de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Ap s a nova suspens o misture o f
4. A utiliza o do Sistema de Captura de Alvo GEN PROBE descrito no Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 11 Cubra as TTU com cart es de selagem e agite o suporte manualmente com suavidade N o coloque os esp cimes no v rtex Incube o suporte num banho de gua a 62 C 1 C durante 30 5 minutos 12 Remova o suporte do banho de gua e seque a parte inferior dos tubos com material absorvente 13 Assegure se de que os cart es de selagem est o bem colocados Caso necess rio substitua os com novos cart es de selagem e sele bem as TTU 14 Agite o suporte no misturador v rtex multitubos durante 60 segundos Consulte a sec o Notas ao procedimento Utiliza o do v rtex para mais informa es Comece a agitar nos 2 minutos que se seguem retirada do suporte do banho de gua 15 Sem retirar os cart es de selagem incube o suporte temperatura ambiente durante 30 5 minutos 16 Coloque o suporte na base magn tica da unidade TCS durante 5 a 10 minutos Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 16 502184PT Rev D Sistemas DTS 17 Prepare a linha da bomba da esta o de fornecimento bombeando a Solu o de Lavagem APTIMA atrav s do distribuidor Bombeie liquido bastante pelo sistema para que nao haja bolhas de ar na linha e que todos os dez bocais
5. Todos os c lculos do desempenho se basearam no n mero total de resultados obtidos no ensaio APTIMA CT para esfrega os endocervicais vaginais e uretrais masculinos e esp cimes de urina masculina e feminina em compara o com um algoritmo de estado de infec o do paciente para cada sexo No algoritmo a designa o de um participante como infectado ou n o infectado com CT teve como base os resultados dos esfrega os endocervicais e esp cimes de urina obtidos com o ensaio APTIMA COMBO 2 dispon vel no mercado e com o outro NAAT dispon vel no mercado Os participantes foram considerados infectados por CT se dois dos quatro esp cimes de esfrega o cervical e urina deram resultados positivos com o ensaio APTIMA COMBO 2 e com o outro NAAT de refer ncia um esp cime com teste positivo em cada NAAT Os pacientes foram considerados n o infectados se menos de dois resultados NAAT de refer ncia tiveram resultado positivo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 48 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS No total foram utilizados 8 406 resultados do ensaio APTIMA CT para calcular a sensibilidade e a especificidade A sensibilidade e a especificidade para CT por sexo tipo de esp cime e estado sintomatico sao apresentadas na Tabela 4 A Tabela 6 mostra a sensibilidade a especificidade e os valores preditivos do ensaio APTIMA CT em compara o com o estado de infec o do paciente para cada institui o cl nica e no geral
6. 120 120 para os esfrega os uretrais masculinos 99 0 97 98 para os esp cimes de urina feminina 100 115 115 para os esp cimes de urina masculina e 100 116 116 para os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Devido ao n mero relativamente mais baixo de esp cimes de participantes assintom ticos estes resultados podem n o ser generaliz veis ao teste com o ensaio APTIMA CT no Sistema TIGRIS DTS com esp cimes de participantes assintom ticos Consulte as Tabelas 4 e 5a para obter as estimativas da sensibilidade e da especificidade do ensaio APTIMA CT quando testado nos Sistemas DTS Dado os resultados para a concord ncia de esperar que a sensibilidade e a especificidade do ensaio APTIMA CT utilizando o Sistema TIGRIS DTS sejam semelhantes Tabela 12 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos concord ncias positivas negativas e globais por estado sintom tico Concor Concor Concor Symptom Esp dims Enio DTS DTS DTS DTS dancia dancia dancia ymp P TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positivos negativos global IC de 95 IC de95 IC de 95 um 98 4 98 6 98 5 Feminina duse 63 1 1 68 91 6 100 92 2 100 94 7 99 8 didi dis 100 100 100 Masculino 60 lt 42 E 9 18 91 6 100 81 5 100 94 0 100 100 95 7 98 2 Sint Feminino 56 33 0 1 22 89 4 100 78 1 99 9 90 4 100 duc 100 100 100 Masculino 604 i 0 19
7. C psittaci VR601 foi testado a 8 0 x 10 c lulas ensaio e C psittaci VR125 foi testado a 1 0 x 10 c lulas ensaio C pneumoniae foi testado a 4 x 10 c lulas ensaio e U urealyticum foi testado a 6 7 x 10 c lulas ensaio Os virus foram testados da seguinte forma a v rus herpes simplex I 2 5 x 10 TCIDso ensaio b v rus herpes simplex Il 6 0 x 10 TCIDso ensaio c papilomav rus humano 16 2 9 x 10 c pias de DNA ensaio e d citomegalovirus 4 8 x 10 c lulas ensaio A lista dos organismos testados indicada na Tabela 11 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 60 502184PT Rev D Desempenho analitico nos Sistemas DTS Tabela 11 Especificidade Analitica Organismo Organismo Organismo Achromobacter xerosis Escherichia coli Neisseria mucosa 3 Acinetobacter calcoaceticus Flavobacterium meningosepticum Neisseria sicca 3 Acinetobacter lwoffi Fusobacterium nucleatum Neisseria subflava 14 Actinomyces israelii Gardnerella vaginalis Neisseria perflava Actinomyces pyogenes Gemella haemolysans Neisseria polysaccharea Aerococcus viridans Haemophilus ducreyi Paracoccus denitrificans Aeromonas hydrophila Haemophilus influenzae Peptostreptococcus anaerobius Agrobacterium radiobacter Herpes simplex virus Peptostreptococcus productus Alcaligenes faecalis Herpes simplex virus II Plesiomonas shigelloides Bacillus subtilis Human papilloma virus 16 Propioniba
8. Consulte Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema PANTHER Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica para Chlamydia trachomatis limite de detec o foi determinada por compara o directa entre dilui es de organismos CT em cultura celular e o ensaio APTIMA CT A sensibilidade cl nica indicada para o ensaio de uma unidade formadora de inclus es Inclusion Forming Unit IFU por ensaio 7 25 IFU esfregaco 5 IFU mL urina e 9 75 IFU mL de esp cime citol gico em base l quida PreservCyt para todos os 15 serovares de CT A B Ba C D E F G H I J K L1 L2 e L3 No entanto dilui es de menos de uma IFU ensaio de todos os serovares deram resultados positivos no teste Especificidade Anal tica No total foram avaliados 154 isolados de cultura utilizando o ensaio APTIMA CT Estas culturas isoladas inclu ram 86 organismos que podem ser isolados do tracto urogenital e 68 organismos adicionais que representam uma sec o transversal filogen tica de organismos Os organismos testados inclu ram bact rias fungos leveduras parasitas e v rus Todos os organismos excepto C psittaci C pneumoniae U urealyticum e os v rus foram testados a 1 0 x 10 c lulas ensaio em meio de transporte de urina KOVA Trol e 60 organismos foram testados em meio de transporte de esfrega os Os organismos Chlamydia e Neisseria foram testados em meios de solu o PreservCyt
9. D Desempenho analitico nos Sistemas DTS Os dados que sustentam condi es de armazenamento mais prolongadas foram gerados a partir de quatro grupos de amostras de solu o PreservCyt processadas negativas testadas a temperaturas inferiores da congela o Cada grupo foi misturado com 1a 10 IFU de CT ensaio e depois testado no momento basal Cada grupo foi primeiro colocado a 30 C durante 14 dias e depois armazenado a 20 C ou 70 C durante 106 dias Todas as amostras misturadas deram resultados positivos para CT em todos os momentos e a todas as temperaturas C Estudo Adicional de Estabilidade de Esp cimes Congelado a 20 C Os dados que sustentam as condi es recomendadas de armazenamento a 20 C para esfrega os endocervicais esfrega os uretrais esfrega os vaginais urina feminina urina masculina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram gerados utilizando 90 esp cimes para cada tipo com resultados negativos em que 30 esp cimes foram misturados com CT a 1 0 IFU por reac o 30 esp cimes foram misturados com CT a 0 1 IFU por reac o e 30 esp cimes n o foram misturados Os esp cimes foram armazenados a 20 C e testados aos dias 0 200 e 400 Todos os esp cimes misturados atingiram o crit rio de aceita o de 95 de concord ncia com os resultados esperados Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 63 502184PT Rev D Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Conc
10. D Sistemas DTS Materiais necessarios mas disponiveis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Lumin metro LEADER HC 104747 01 Sistema de captura do alvo Target Capture System TCS 104555 GEN PROBE Incubadoras e v rtex 2 Misturadoras em v rtex multi tubo 102160 3 Banhos de gua com circula o 104586 62 C t1T42C L1CT 6 C 1T 3 Espacadores para banhos de agua 104627 OU 2 Banhos de calor seco Vortexes SB100 105524 Podem ser necess rios mais banhos SB100 se o volume de testes aumentar Kit de auto detecc o APTIMA 301048 2 pipetas Eppendorf Repeater Plus 105725 2 pipetas 1 000 uL RAININ PR1000 901715 Pipeta Eppendorf 20 uL a 200 uL 105726 Pontas para pipeta de repeti o 2 5 mL 21 381 329 Pontas para pipeta de repeti o 5 0 mL 21 381 330 Pontas para pipeta de repeti o 25 0 mL 21 381 115 Pontas P1000 Style 105049 ponta de di metro especial apenas dispon vel na Gen Probe Pontas de pipeta 20 uL a 200 uL 705512 Fisher Unidades de dez tubos Ten Tube Units TTU TU0022 Cassetes de dez pontas Ten Tip Cassettes TTC 104578 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfregaco Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes 301040 de urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp
11. Informa es gerais Avisos e precau es A Para fins de diagn stico in vitro B Para mais avisos precau es e procedimentos para controlo de contamina o para o TIGRIS DTS System consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS C Para mais avisos precau es e procedimentos de controlo da contamina o para o Sistema PANTHER consulte o PANTHER System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema PANTHER Relacionado com o Laborat rio D Utilize apenas artigos de laborat rio descart veis fornecidos ou especificados E Adopte precau es de laborat rio de rotina N o coma beba ou fume em reas de trabalho designadas Utilize luvas sem p descart veis culos de protec o e batas de laborat rio quando manusear esp cimes e reagentes do kit Lave bem as m os ap s manusear os esp cimes e os reagentes do kit F Aviso irritantes corrosivos Evite o contacto do Auto Detect 1 e do Auto Detect 2 com a pele olhos e membranas mucosas Lave com gua se estes fluidos entrarem em contacto com a pele ou os olhos Se estes fluidos se derramarem dilua o derrame com gua antes de secar com um pano G As superf cies de trabalho pipetas e outros equipamentos t m de ser regularmente descontaminados com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Espec ficos dos Sistemas DTS H Recomenda se vivamente a utiliza o de uma rea separada para
12. cimes de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Kit APTIMA de colheita de esfregacos vaginais 301162 Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C Padr o de calibrac o SysCheck 301078 Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 Ma 1 0M Recipientes padr o para colheita de urina sem conservantes Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 12 502184PT Rev D Sistemas DTS Ref Cat Recipiente plastico com tampa grande Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Materiais Opcionais Ref Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Fluidos do ensaio APTIMA 302002C Solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactivac o APTIMA e reagente a leo APTIMA Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Painel de compet ncia de DST 102325 Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 contendo 900932 Sistemas DTS 800 APTIMA COMBO 2 Placa do tabuleiro 105200 Reservatorio de reagentes quarto de m dulo de 40 mL 104765 Reservatorio de reagentes dividido 104763 quarto de m dulo de 19 mL x 2 Procedimento de Teste dos Sistemas DTS A Prepara o do Equipamento 1 Ajuste um banho de gua a 62 C 1 C para captura do alvo e hibrida o do iniciador um segundo banho de agua a 42 C 1 C para amplifica o e um terceiro banho de ag
13. 0 100 97 4 95 9 98 5 Tudo 1 322 217 31 1 065 9 96 0 92 6 98 2 97 2 96 0 98 1 Sintomatico 807 114 28 664 1 99 1 95 3 100 96 0 94 2 97 3 Esfregaco Assintomatico 636 59 22 553 2 96 7 88 7 99 6 96 2 94 3 97 6 Tudo 1 443 173 50 1 217 3 98 3 95 1 99 6 96 1 94 8 97 1 Feminino Sintomatico 809 107 13 682 7 93 9 87 8 97 5 98 1 96 8 99 0 Urina Assintom tico 639 58 13 565 3 95 1 86 3 99 0 97 8 96 2 98 8 Tudo 1 448 165 26 1 247 10 94 3 89 7 97 2 98 0 97 0 98 7 Colhido Esfrega o zi pelo vaginal Assintomatico 629 60 25 543 1 98 4 91 2 100 95 6 93 6 97 1 paciente Colhido e d 811 111 33 663 4 96 5 91 3 99 0 95 3 93 4 96 7 Euro vaginal Assintom tico 638 60 32 545 1 98 4 91 2 99 0 94 5 92 3 96 2 Tudo 1 449 171 65 1 208 5 97 2 93 5 99 1 94 9 93 5 96 0 eee SSS EU E UL Se PV positivo verdadeiro FP falso positivo NV negativo verdadeiro FN falso negativo Resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 para CT n resultados positivos n esp cimes testados a 9 23 b 14 20 c 23 43 d 6 14 e 6 17 f 12 31 g 14 28 h 11 22 i 25 50 j 7 13 k 5 13 12 26 m 15 25 n 17 33 o 15 32 p 32 65 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 49 502184PTRev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Estudo de esp cimes cl nicos em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Foi realizado um estudo cl nico multic ntrico prospectivo para
14. 100 para esfrega os vaginais foi de 100 95 1 100 para esp cimes de urina foi de 100 95 1 100 e para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foi de 100 95 1 100 Estudo do painel cl nico misturado com rRNA de CT O estudo do painel cl nico misturado com rRNA de CT avaliou a concord ncia entre os dois sistemas Sistema TIGRIS DTS e Sistemas DTS utilizando seis pain is cl nicos de CT preparados na Gen Probe a que se misturou 0 a 5 000 fg rRNA de CT ensaio Os pain is cl nicos de CT foram criados a partir de esfrega os endocervicais esfrega os vaginais esfrega os uretrais urina masculina urina feminina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt que tinham apresentado resultados negativos com o ensaio APTIMA CT nos Sistemas DTS quando testados na Gen Probe Os esp cimes negativos foram agrupados por tipo de esp cime misturados ou nao com rRNA de CT e alioquotados como replicados de cada membro do painel Foram combinados replicados de membros de seis pain is com diferentes concentra es de rRNA misturado para criar um painel cl nico para cada tipo de esp cime Cada painel continha um total de 132 replicados A Tabela 14 mostra as concord ncias percentuais para cada n vel de rRNA nos esfrega os endocervicais vaginais uretrais em urina masculina em urina feminina e nos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt respectivamente com os resultados de CT esperados para o Sist
15. 1997 10 Frommell G T R Rothenberg S Wang and K Mcintosh 1979 Chlamydial infection of mothers and their infants Journal of Pediatrics 95 28 32 11 Gaydos C A T C Quinn D Willis A Weissfeld E W Hook D H Martin D V Ferraro and J Schachter 2003 Performance of the APTIMA Combo 2 Assay for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in female urine and endocervical swab specimens J Clin Microbiol 41 304 309 12 Goessens W H F J W Mouton W I Van Der Meijden S Deelen T H Van Rijsoort Vos N L Toom H Verbrugh and R P Verkooyen 1997 Comparison of three commercially available amplification assays AMP CT LCx and COBAS AMPLICOR for detection of Chlamydia trachomatis in first void urine J Clin Microbiol 35 2628 2633 13 Holmes K K H H Handsfield S P Wang B B Wentworth M Turck J B Anderson and E R Alexander 1975 Etiology of nongonococcal urethritis NEJM 292 1199 1205 14 Jaschek G C A Gaydos L E Welsh and T C Quinn 1993 Direct detection of Chlamydia trachomatis in urine specimens from symptomatic and asymptomatic men by using a rapid polymerase chain reaction assay J Clin Microbiol 31 1209 1212 15 Mahony J S Chong D Jang K Luinstra M Faught D Dalby J Sellors and M Chernesky 1998 Urine specimens from pregnant and nonpregnant women inhibitory to amplification of Chlamydia trachomatis nucleic acid by PCR Ligase chain
16. 3 000 3 000 lt 4 000 4 000 lt 5 000 5 000 6 000 gt 6 000 RLU x1 000 Figura 4 Frequ ncia da distribuic o de RLU do ensaio APTIMA CT Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 46 502184PT Rev D Valores esperados dos Sistemas DTS Tabela 3 Distribuic o de RLU no ensaio APTIMA CT RLU x 1 000 0 lt 10 10 lt 20 20 lt 30 30 lt 40 40 50 50 100 100 1 000 1 000 2 000 2 000 lt 3 000 3 000 lt 4 000 4 000 lt 5 000 5 000 6 000 gt 6 000 Positivos totais Falsos positivos totais CVS PVS Negativos totais 6 293 0 50 22 1 035 o A e 10 25 126 zu co Cc1 0 oj N Ku cou S o o Falsos negativos totais e o eo CVS 1 PVS olojo oj oj o 0 0 0 0 0 O o o o o o Sy es cem SS OLN FI NM oy A NIOJ O N N E WwIoJ v aj NJO DES O O m n 2m S Sas c n P P M n nm 5 CVS esfrega o vaginal colhido pelo m dico PVS esfrega o vaginal colhido apenas por pacientes assintom ticas EF esfrega o endocervical feminino EM esfrega o uretral masculino UF urina feminina UM urina masculina A c
17. 5 120 100 100 Positivo baixo 2 5 5 120 100 100 Positivo m dio 25 50 120 100 100 Negativo 0 0 360 100 100 Concordancia percentual geral de positivos entre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 100 98 9 100 Concordancia percentual geral de negativos entre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 100 98 9 100 Estudo de sensibilidade analitica A sensibilidade analitica do ensaio APTIMA CT foi testada utilizando tr s matrizes de amostras representativas Estas foram urina processada com meio de transporte para urina Urine Transport Medium UTM soluc o citol gica l quida PreservCyt diluida com meio de transporte para esfrega os Swab Transport Medium STM e STM Misturou se rRNA de CT a grupos destas tr s matrizes nas seguintes concentra es 0 5 fg ensaio 5 fg ensaio ou 50 fg ensaio equivalentes de rRNA de 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL ou 25 IFU mL Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Estes pain is foram testados em tr s Sistemas PANTHER utilizando dois lotes de reagentes em replicados de 96 A concord ncia positiva com o resultados esperado foi calculada A concord ncia com os resultados esperados foi de 100 IC de 95 96 2 100 para todos os pain is de urina 100 IC de 95 96 1 100 para todos os pain is de solu o citol gica l quida PreservCyt e de 100 IC de 95 96 0 100 para todos os pain is d
18. N A N A Urina 200 12 4 184 0 6 0 100 73 5 100 97 9 94 6 99 4 75 0 100 305 53 8 238 6 19 3 89 8 79 2 96 2 96 7 93 7 98 6 86 9 97 5 207 12 1 194 0 5 8 100 73 5 100 299 5 97 2 100 92 3 100 NA N A N A N A NA N A N A N A N A N A N A N A Tudo 1 322 217 31 1 065 9 17 21 96 0 92 6 98 2 97 2 96 0 98 1 87 5 992 oI NI O Aa AJ Ww bd Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 51 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 6 Sensibilidade especificidade e valores preditivos do ensaio APTIMA CT relativamente ao estado de infec o do paciente por local cl nico e a n vel geral continua Esp cime Local N PV FP NV FN us dose god a pd 1 228 36 2 190 O 158 100 90 3 100 99 0 96 3 99 9 94 7 100 2 198 52 18 128 O 263 100 932 100 87 7 81 2 92 5 743 100 3 14 9 4 101 0 79 100 664 100 96 2 90 5 99 0 692 100 4 260 19 1 220 1 77 950 751 999 954 919 977 633 99 6 pud 5 199 13 5 181 0 65 100 753 100 97 3 938 994 722 100 6 294 33 9 252 0 11 2 100 894 100 96 6 93 6 98 4 786 100 7 10 8 0 92 2 98 80 0 444 975 100 961 100 100 97 9 8 48 3 1 44 0 63 100 292 100 97 8 882 999 750 100 Tudo 1 443 173 50 1217 3 122 983 95 1 99 6 96 1 948 9741 776 998 Feminino 1 227 34 5 187 1 154 971 851 999 974 94 0 99 1 872 995 2 198 51 2 144 1 263 981 897 100 986 95 1 99 8 962
19. Passo 7 k Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 3 Passo 8 Aviso Evite formar espuma ao reconstituir os reagentes A espuma compromete o sensor de n vel no Sistema PANTHER 4 SS 3 ud o Do 9 A Figura 3 Processo de reconstituic o no Sistema PANTHER 2 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho CT Working Target Capture Reagent wTCR CT a Emparelhe os frascos apropriados de TCR CT e TCR B b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados Abra o frasco de TCR CT e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta d Abra o frasco de TCR B e verta todo o seu conte do para o frasco de TCR CT Espere que uma pequena quantidade de l quido permane a no frasco de TCR B e Coloque a tampa no frasco de TCR CT e agite suavemente a solu o para misturar os conte dos Evite formar espuma durante este passo f Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta g Elimine o frasco e a tampa de TCR B 3 Prepare o reagente de selecc o a Verifique o n mero do lote no frasco de reagente para se certificar de que corresponde ao n mero de lote na folha de c digo de barras do lote principal b Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Nota Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente
20. as em seres humanos 28 Os serovares D a K s o a principal causa de infecc es genitais por clam dia em homens e mulheres 20 A C trachomatis pode causar uretrite n o gonoc cica epididimite proctite cervicite salpingite aguda e doenca inflamat ria p lvica 3 13 22 23 As infec es por C trachomatis s o frequentemente assintomaticas tanto em homens como em mulheres As crian as que nascem de m es infectadas correm um risco significativamente superior de conjuntivite de inclus o e pneumonia associada a clam dia 1 10 21 Historicamente v rios m todos de detec o de CT foram utilizados em laborat rio cl nico incluindo cultura de c lulas teste fluorescente directo de anticorpos e ensaio imunoenzim tico As metodologias de detec o de CT mais recentes incluem ensaios directos de sondas de DNA e testes de amplifica o de cidos nucleicos nucleic acid amplification tests NAAT A cultura de c lulas j foi considerada como o m todo de ouro para detec o de CT A cultura bastante espec fica mas foi demonstrado em publica es recentes que os NAAT t m uma sensibilidade cl nica maior que a da cultura 2 8 14 24 Devido a sua sensibilidade cl nica mais baixa e desempenho vari vel entre laborat rios a cultura foi substitu da em muitos laborat rios pelo teste directo de sondas de DNA e NAATs Os NAAT de primeira gera o para CT apresentam problemas tecnol gicos que limitaram o seu desem
21. avaliar a utiliza o da solu o PreservCyt um componente do ThinPrep 2000 System como meio alternativo para esp cimes ginecol gicos destinados detec o de CT pelo ensaio APTIMA CT Foram avaliadas no estudo cl nico 1 647 participantes do sexo feminino sintom ticas e assintom ticas utentes de cl nicas de OB GINEC planeamento familiar sa de p blica sa de da mulher e de DST Destas 1 647 participantes 1 288 eram assintom ticas e 359 eram sintom ticas As participantes foram inclu das a partir de locais com uma preval ncia de CT que variou entre 2 8 e 14 0 Foram colhidos dois esp cimes por cada indiv duo eleg vel um esp cime citol gico em base l quida PreservCyt e um esfrega o endocervical Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram colhidos com a esp tula escova citol gica ou com um dispositivo de amostragem cervical semelhante a uma escova A distribui o dos dispositivos de amostragem cervical resumida na Tabela 5 por local de colheita do esp cime e a n vel geral Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram processados de acordo com o ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual do Operador do ThinPrep 2000 Processor e o Folheto da Embalagem do Kit APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes APTIMA Specimen Transfer Kit Package Insert Ap s o processamento do esp cime citol gico em base l quida PreservCyt com o ThinPrep 2000 Processor o esp cime foi transferi
22. de transporte de esfrega os misturado com rRNA A reprodutibilidade ao testar os esp cimes de esfrega os contendo o organismo alvo n o foi determinada A Tabela 9 apresenta os dados de precis o de RLU em termos de m dia desvio padr o coeficiente de varia o CV e concord ncia percentual com os resultados esperados para c lculos de variabilidade entre locais entre operadores entre lotes entre testes e intrateste Tabela 9 Dados de precis o do ensaio APTIMA CT utilizando um painel de precis o de 12 membros contendo O to 2 000 fg ensaio de rRNA de CT RLU o Intrateste Entre Locais Entre Lotes Entre Operadores Entre Testes Concentra o N m dia cond DP cv DP cv DP cv DP cv DP cv x1 000 RLU x1 000 RLUx1 000 RLUx1 000 RLUx1 000 RLUx1 000 96 Neg 0fg mL 540 0 7 100 0 7 N A 0 5 N A 0 3 N A 0 4 N A 0 N A Baixo 12 fg mL 216 7 143 4 100 2003 28 3356 47 2077 29 537 3 75 5588 7 8 Interm dio 108 7 084 9 100 1622 23 2751 39 1595 23 5463 77 5782 82 250 fg mL Interm dio 2 500 fg mL 108 6 991 1 100 1507 22 2794 4 0 11758 1 7 5323 76 5349 7 7 Alto 5 000 5 135 fg mL 324 7 133 4 100 229 2 3 2 301 0 4 2 129 0 1 8 531 7 7 5 618 3 8 7 DP desvio padr o CV coeficiente de varia o em percentagem Concd concord ncia percentual Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devida a esses factores for muit
23. dos intervalos normais esperados Os resultados de testes iniciais d bios e inv lidos devem ser testados novamente Interpreta o do Teste Total de RLU x1 000 Negativo 0 a lt 50 Equivoco 50 a lt 100 RLU fracamente positivas 100 a 5 000 Positivo 5 000 a 12 000 Inv lido 0 ou 12 000 nee E n Um resultado de zero para 0 x 1 000 RLU no relat rio do teste representa um valor entre zero e 999 RLU Valores de RLU inferiores a 160 nos Sistemas DTS ou a 690 no Sistema TIGRIS DTS ou no Sistema PANTHER constar o no relat rio como inv lidos De acordo com as orienta es dos CDC h que considerar a realiza o de exames de rotina adicionais em pessoas com resultados positivos nos testes de rastreio de CT ou GC quando as informa es acerca dos factores de risco ou pesquisas reais indicam que a preval ncia baixa resultando num menor PPV p ex lt 90 Consulte as orienta es dos CDC para obter dados acerca de exames adicionais e do controlo dos pacientes ap s a realiza o de testes de rastreio positivos 4 Consulte a Tabela 3 para a distribui o dos resultados de RLU A magnitude das RLU n o indicativa do n vel de organismos no esp cime Na gama dos positives baixos os dados sugerem que os resultados positivos devem ser interpretados com cautela tendo a no o de que a probabilidade de o positivo ser falso pode ser mais elevada do que a de o positivo ser ver
24. estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado Nao perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Nota Podem ser testadas at 3 al quotas distintas de cada tubo de esp cimes A tentativa de pipetar mais de 3 al quotas do tubo de esp cimes pode provocar erros por volume insuficiente E Prepara o do sistema Defina o sistema e a lista de trabalho de acordo com as instru es do TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS e das Notas ao procedimento Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 29 502184PT Rev D Sistema TIGRIS DTS Notas ao procedimento A Controlos 1 Para trabalhar adequadamente com o software de Ensaio APTIMA para o Sistema TIGRIS DTS sao necessarios controlos frontais e finais O controlo positivo GC controlo negativo CT tem de estar na primeira posi o e na segunda ltima posi o de uma lista de trabalho A etiqueta deste controlo azul esverdeada O texto da etiqueta CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT O controlo positivo CT controlo negativo GC tem de estar
25. foram testados quatro grupos de amostras de solu o PreservCyt ap s serem armazenados no frasco de solu o PreservCyt Cada grupo de esp cimes foi misturado com 1 a 10 IFU de CT ensaio mantido a 2 C 10 C e 30 C e depois testado no momento basal e aos dias 5 7 8 14 18 21 25 e 36 Todas as amostras misturadas deram resultados positivos para CT em todos os momentos e a todas as temperaturas Quanto s amostras processadas foram utilizados quatro grupos de amostras de solu o PreservCyt para determinar a estabilidade dos esp cimes processados entre 2 C e 30 C Cada grupo de amostras negativas foi misturado com 1 a 10 IFU de CT ensaio e depois testado no momento basal Antes do processamento as amostras em solu o PreservCyt foram conservadas a 30 C durante sete 7 dias para simular o intervalo de tempo entre a colheita das amostras o procedimento citol gico e o envio para um laborat rio de an lises microbiol gicas Ap s sete dias a 30 C foram transferidas al quotas de 1 mL de cada conjunto para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA que foram testadas no momento basal antes de as colocar a 2 C 10 C e 30 C As amostras processadas foram depois testadas aos 17 dias armazenadas a 30 C e aos 36 dias armazenadas entre 2 C e 10 C Todas as amostras misturadas deram resultados positivos para CT em todos os momentos e a todas as temperaturas Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 62 502184PT Rev
26. fornegam um fluxo constante de liquido 18 Ligue a bomba de vacuo e desconecte o distribuidor de aspira o do primeiro conector entre o distribuidor de aspira o e o frasco de apreens o Assegure se de que o man metro de v cuo cumpre as especificac es do teste de fuga Pode demorar 15 segundos a obter esta leitura Reconecte o distribuidor de aspira o e assegure se de que o man metro de v cuo cumpre as especifica es do n vel de v cuo Deixe a bomba de v cuo ligada at que os passos de captura do alvo estejam conclu dos e a tubagem de aspira o esteja seca 19 Aplique firmemente o distribuidor de aspira o ao primeiro conjunto de pontas Aspire todo o l quido baixando as pontas na primeira TTU at as pontas entrarem brevemente em contacto com as partes inferiores dos tubos N o mantenha as pontas em contacto com as partes inferiores dos tubos 20 Ap s ter terminado a aspira o ejecte as pontas na TTC original Repita os passos da aspira o para as TTU restantes usando uma ponta dedicada para cada esp cime 21 Coloque o distribuidor sobre cada TTU e utilizando a bomba da esta o de distribui o distribua 1 0 mL de solu o de lavagem APTIMA por cada tubo da TTU 22 Cubra os tubos com um cart o de selagem e retire o suporte da base magn tica TCS Coloque uma vez no misturador v rtex de multitubos Consulte a sec o Notas ao procedimento Utiliza o do v rtex para mais informa es 23 Coloque
27. frasco 2 frascos Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em soluc o tamponada com succinato contendo 5 de detergente TCR B Reagente de captura do alvo B APTIMA 1x0 30 mL 2x0 143 mL cido nucleico n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Colarinho de Reconstitui o 6 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 23 502184PT Rev D Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis Caixa de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o Quantidade Quantidade S mbolo Componente kit de 100 kit 2 x 50 testes testes AR Soluc o de reconstituic o de amplificac o APTIMA 1x11 9mL 2x6 4mL para CT Soluc o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o para reagente enzim tico 1x63mL 2x3 3mL APTIMA Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para CT 1x152mL 2x7 7mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selecc o APTIMA 1x43 0mL 2x20mL Soluc o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante TCR Reagente de captura do alvo APTIMA para GC 1 x 26 0 2x17 mL Solu o tamponada salina contendo fase s lida e olig meros de captura Colarinho de Reconstituic o 3 Pipetas de transfer ncia 2 Folha de c digo de barras do lote principal 1 folha 1 folha Kit de controlos APTIMA
28. ncia devem ser interpretados com cautela tendo a no o de que a probabilidade de o positivo ser falso pode ser mais elevada do que a de o positivo ser verdadeiro Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 41 502184PT Rev D L Para os ensaios cl nicos de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt o desempenho do ensaio APTIMA CT na detec o de CT obtido sobretudo de popula es de baixa preval ncia N o obstante resultados positivos em popula es de baixa preval ncia devem ser interpretados cuidadosamente levando em considera o que a probabilidade de um falso positivo podem ser mais alta do que um positivo verdadeiro M O desempenho do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA n o foi avaliado quanto an lise do mesmo esp cime citol gico l quido em solu o PreservCyt antes e ap s o processamento citol gico ThinPrep N Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt processados em outros instrumentos al m do ThinPrep 2000 Processor n o foram avaliados quanto utiliza o com ensaios APTIMA O Os esp cimes de esfrega os vaginais recolhidos pela paciente s o uma op o para efectuar o rastreio de mulheres quando um exame p lvico n o for indicado de outro modo P A aplica o a esfrega os vaginais colhidos pela paciente limita se a institui es de sa de que disponham de apoio aconselhamento para explicar os procedimentos e as precau es Q O ensaio APTIMA CT n o foi validado
29. nimo antes de desligar o misturador vort x multitubos e retirar o suporte As misturas de reac o n o devem nunca tocar nos cart es de selagem G Banhos de gua 1 O n vel da gua nos banhos de gua tem de ser mantido a uma profundidade de 1 5 polegadas a 2 0 polegadas 3 8 cm a 5 cm medidas desde o tabuleiro de metal de suporte no fundo do banho de gua at superf cie da gua Assim ficar assegurada uma transfer ncia de calor adequada 2 Para evitar contamina o cruzada os banhos de gua devem ser dedicados para um passo espec fico do ensaio H Descontamina o 1 Superf cies e pipetas As superf cies das bancadas do laborat rio e as pipetas t m de ser regularmente descontaminadas com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio As solu es com cloretos podem provocar corros o nos equipamentos e metais Enxag e bem o equipamento com gua para evitar a corros o 2 Distribuidor de Aspira o TCS a Coloque um TTC novo no suporte de TTC Active a bomba de v cuo Aplique o distribuidor de aspira o s pontas no TTC Aspire toda a Solu o de Lavagem restante na malga de prepara o da esta o de distribui o de Solu o de Lavagem Tire o distribuidor do caminho b Coloque
30. pelo menos 100 mL de solu o de hipoclorito s dio entre 0 5 a 0 7 0 07 Ma 0 1 M ou se preferir 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M na malga de prepara o Aspire toda a solu o com o distribuidor de aspira o c Coloque pelo menos 100 mL de gua desionizada na malga de prepara o Aspire toda a gua com o distribuidor de aspira o d Ejecte as pontas no TTC original e Deixe a bomba de v cuo ligada at que o distribuidor esteja seco para evitar o refluxo f Descontamine as superf cies do distribuidor de aspira o da forma descrita na Unidade TCS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 20 502184PT Rev D Sistemas DTS 3 Recipiente de residuos TCS Quando o frasco de residuos estiver 25 cheio ou semanalmente remova o frasco de residuos do Sistema de Captura de Alvo a Desligue a bomba de vacuo e permita que a press o do vacuo seja equalizada b Libere os encaixes de desconex o r pida entre o frasco de res duos e o frasco de recolha de l quido e o frasco de res duos e o distribuidor de aspira o Remova o frasco de res duos do compartimento de apreens o de vacuo Retire a tampa e adicione cuidadosamente 400 mL de solu o de hipoclorito de s dio 596 a 796 0 7 M a 1 0 M ao frasco ou 1 L se estiver a utilizar um frasco de res duos de 10 L Nota Isto pode ser feito numa cobertura de vapores para evitar o escape de vapores no laborat rio e Tape o frasco de res duos e agite gentil
31. potencialmente interferentes semelhantes aos tolerados pelos Sistemas DTS Foi adicionado sangue total a esfrega os cl nicos esfrega os vaginais urina e grupos de esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt tendo se depois testado a potencial interfer ncia no ensaio na aus ncia e na presen a de alvo de CT ao equivalente de rRNA estimado de um IFU de CT ensaio 5 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Os esp cimes foram testados em dois Sistemas TIGRIS DTS Todas as amostras contendo cidos nucleicos alvo foram positivas quando testadas a uma concentra o de sangue de 10 em esp cimes de esfrega os esfrega os vaginais esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e 30 de sangue em esp cimes de urina Todas as amostras que n o continham alvo deram resultados negativos para CT Estes resultados indicam que nos n veis testados improv vel que o sangue total afecte o resultado de CT no Sistema TIGRIS DTS Estudos de transmiss o com o Sistema TIGRIS DTS Para estabelecer que o Sistema TIGRIS DTS minimiza o risco de resultados positivos falsos causados por contamina o por transmiss o foi feito um estudo utilizando pain is misturados em tr s Sistemas TIGRIS DTS O estudo utilizou 20 de amostras de alvo alto contendo 1 x 10 fg rRNA de CT mL que foram aleatoriamente espa adas entre 80 de amostras negativas conte
32. reaction and transcription mediated amplification identification of urinary substances associated with inhibition and removal of inhibitory activity J Clin Microbiol 36 3122 3126 16 National Committee for Clinical Laboratory Standards 1999 NCCLS EP5 A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline Vol 19 No 2 17 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance Approved Guideline for additional Guidance on Appropriate Internal Quality Control Testing Practices 18 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 NCCLS EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods Approved Guideline 2nd edition Vol 24 No 25 19 Peterson E M V Darrow J Blanding S Aarnaes and L M de La Maza 1997 Reproducibility problems with the AMPLICOR PCR Chlamydia trachomatis test J Clin Microbiol 35 957 959 20 Schachter J 1985 Chlamydiae Psittacosis Lymphogranuloma Venereum Trachoma group p 856 862 n E H Lennette et al ed Manual of Clinical Microbiology 4 ed American Society for Microbiology Washington D C 21 Schachter J and M Grossman 1981 chlamydial infections Ann Rev Med 32 45 61 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 73 502184PT Rev D Bibliografia 22 Schachter J 1978 Medical progress chlamydial infections third of three parts N
33. reconstituic o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe a solu o de reconstitui o adequada com o reagente liofilizado As etiquetas s o codificadas por cores para serem correctamente emparelhadas b Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstituigao na abertura do frasco Figura 1 Passo 1 c Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta d Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira firmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 2 e Inverta lentamente o conjunto do frasco do reagente e do frasco de solu o Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de reagente Figura 1 Passo 3 f Agite suavemente a solu o no frasco para misturar Evite a cria o de espuma enquanto agita o frasco Figura 1 Passo 4 g Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente o conjunto de frascos inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a formagao de espuma Figura 1 Passo 5 Permita que todo o l quido escoe para o frasco h Retire o colarinho de reconstitui o do frasco Figura 1 Passo 6 i Volte a colocar a tampa no frasco Anote
34. seu conte do para o frasco de TCR CT f g Espere que uma pequena quantidade de l quido permane a no frasco de TCR B Coloque a tampa no frasco de TCR CT e agite suavemente a soluc o para misturar os conte dos Evite formar espuma durante este passo Anote as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Elimine o frasco e a tampa de TCR B 3 Prepare o TCR CT de trabalho wTCR CT para o kit de 50 testes a b 9220 Emparelhe os frascos apropriados de TCR CT e TCR B Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados Abra o frasco de TCR CT e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Abra o frasco de TCR B e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta Retire a pipeta de transfer ncia da sua embalagem Transfira aproximadamente 2 mL de TCR CT para o frasco de TCR B Nao elimine a pipeta de transfer ncia neste passo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 27 502184PT Rev D Sistema TIGRIS DTS g Volte a colocar a tampa do frasco de TCR B e misture por invers o h Transfira o wTCR CT do frasco de TCR B de volta para o frasco de TCR CT i Repita o Passo h diversas vezes at que a mistura no frasco de TCR B se transfira de volta para o frasco de TCR CT j Coloque a tampa no frasco de TCR CT e agite suavemente a solu o para misturar os conte dos Evite formar espuma du
35. 00 High 5 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 ON Muito baixo 0 5 30 100 100 Citologia em base liquida Baixa 5 30 100 100 100 97 2 100 PreservCyt M dio 50 30 100 100 High 5 000 30 100 100 Estudo de Equival ncia de Especificidade Anal tica Para um ensaio de amplifica o do cido nucleico a especificidade anal tica a respeito dos organismos individuais grandemente determinada mais pela qu mica do ensaio ex sequ ncias oligonucletideas do que pela plataforma Dado que os reagentes para o ensaio APTIMA CT s o id nticos entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS foram concebidas experi ncias de especificidade anal tica no Sistema TIGRIS DTS dedicadas aos isolados de culturas mais complicados Estes organismos inclu ram aqueles conhecidos por efectuarem reac o cruzada em outros ensaios de amplifica o Foram seleccionados 24 isolados de culturas do painel de organismos da Tabela 11 incluindo 3 organismos mais intimamente relacionados com CT Todos os organismos testados produziram resultados negativos no Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 69 502184PT Rev D Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Estudos de Equival ncia de Substancias Interferentes O sangue total uma substancia encontrada com frequ ncia em esp cimes urogenitais e que se sabe interferir com alguns ensaios de amplifica o foi utilizado para estabelecer que o Sistema TIGRIS DTS tolera n veis de subst ncias
36. 1 1 Infectado ef 4 4 4 4 Infectado Infectado 4 Infectado N o infectado 1 1 N o infectado N A N o infectado N o infectado N o infectado N o infectado N o infectado a a a n4 R4 N o infectado 1 1 1 N o infectado 1 1 1 1 N o infectado 1 1 1 1 N o infectado N o infectado M E oO WwW NI NINI gt o RB AlN alow Oo a NN N o infectado z ojl A a alo af alsa afm of w 4 of of NJ a rm v o N o infectado E E E Qa ol alm alm w oo o w 25 oOlw 2 o 2 O o o olo ole oo o o N o infectado E N o infectado E E N o infectado a N A N o infectado E O AR q eo eo A Ln a AR 0 0 N o infectado 3 N o infectado N A 2 N o infectado N A 0 0 N o infectado A 2 N eo N o infectado e E E N o infectado E z N A 0 Nao infectado 1 Nao infectado N A 0 Nao infectado N A N A 1 N o infectado N A 0 5 2 1 N o infectado N A B N o infectado E Total 812 640 1 EEE SEEUUALALLL LEU 6ZAVLLCSLULLLUU CULALLLLLUuGSAGLLU LLLUL UL L GGGG IILELULLLLIK JVLI LLIC
37. 1 3 Mg de Ensaio APTIMA NAAT 2 Ur DUNS Estado sintom tico Total infecc o do COMBO 2 ota paciente EF UF EF UF m tH UF Sint Assint 80 43 123 Infectado N Infectado o q Infectado Infectado RB 4 t N Infectado Infectado Infectado Infectado Infectado 4 4 4 Infectado N A Infectado t 4 4 4 4 ef RB x ty Infectado N o infectado e Infectado E N o infectado o Of A me rm w of hm sa ow oo A a oa 5 NM apa 4 4 4 4 4 4 4 4 1 N co N o infectado E N o infectado E 7 E N o infectado N o infectado N o infectado E 7 E re N o infectado N o infectado 5 E B N o infectado d 1 1 1 1 Oja a O BJ A oO NII N AalLN Ala N o infectado 2 N eo N o infectado 7 g E E A o NI N gt jol AlN NM OL NM MI Wa O O O N 4 W O oa q co N o infectado N o infectado 636 526 1 N o infectado N A 1 0 N o infectado N A 2 3 N o infectado 12 10 22 N o infectado 1 N o infectado N A N A 1 N o infectado N A N A 5 1 1 1 c me o N O N N
38. 3 3 23336 3 1 4647 06 18029 24 3722 5 0 85 2 100 0 23 127 0 38 207 0 52 285 13 71 15 819 urina 025 96 6978 100 27694 4 33057 47 6636 1 26473 3 8 5104 7 3 25 95 7291 100 1212 1 7 154 63 2 1 7351 1 148 13 2 2568 3 5 25 95 7 349 100 121 57 1 7 18134 2 5 6687 09 16245 22 2802 38 0 9 7 97 9 3 36 461 029 4 0 0 20 52 2814 20 8 2853 Preservcyr 025 96 6996 100 22516 32 20986 3 0 0 164 87 2 4 3492 5 25 95 7 079 100 24689 35 17255 2 4 0 0 151 67 2 1 3372 48 25 96 7 050 100 262 52 3 7 16779 24 0 0 1925 27 3662 52 Nota A variabilidade proveniente de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devido a esses factores for muito pequena Quando isto ocorre DP 0 e CV 0 Numero total de replicados para cada painel 96 Em testes seleccionados nao se voltou a testar replicados inv lidos individuais Especificidade Anal tica A especificidade anal tica nao foi testada no instrumento PANTHER Consulte a secc o Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS para obter o Estudo de Equival ncia de Especificidade Anal tica Estudos de Equival ncia de Subst ncias Interferentes Sangue comummente encontrado em esp cimes urogenitais pode interferir em alguns ensaios de amplificagao Foi utilizando sangue total para estabelecer o grau de interfer ncia do sangue no Sistema PANTHER relativamente a este potencial interferente Adicionou se sangue fresco a conjuntos cl nicos de esfrega os vaginais esp cimes cito
39. 501608 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 25 502184PT Rev D Sistema TIGRIS DTS Materiais Opcionais Ref Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superficies e equipamento Procedimento de Teste do Sistema TIGRIS DTS Nota Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para mais informa es sobre procedimentos do Sistema TIGRIS DTS A Prepara o da rea de trabalho 1 Limpe as superf cies de trabalho onde os reagentes e amostras ser o preparados Limpe as superf cies de trabalho com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os reagentes e as amostras ser o preparados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Reconstitui o dos reagentes Prepara o de um novo kit Nota A reconstitui o dos reagentes deve ser realizada antes de come ar qualquer trabalho no Sistema TIGRIS DTS 1 Para reconstituir os reagentes de amplifica o CT enzim tico e de sonda CT para os kits de 100 testes e de 50 testes combine os frascos de reagente liofilizado com a solu o de re
40. 72 02 Kit de sacos de res duos PANTHER 902731 Tampa do recipiente de res duos do PANTHER 902714 Ou kit de teste PANTHER 303096 5 000 testes cont m MTU sacos de res duos tampas de recipientes de res duos fluidos do ensaio e l quidos Auto Detect Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C para utiliza o com esp cimes em solu o PreservCyt Kit APTIMA de colheita de esfregacos vaginais 301162 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfregaco Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes 301040 de urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 Ma 1 0M Luvas descart veis Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 32 502184PT Rev D Sistema PANTHER Padr o de calibrac o SysCheck 301078 Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Tampas suplentes para os kits de 100 testes Solu es de reconstitui o para os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda CL0041 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Materiais Opcionais Ref Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza
41. 9 750 100 Tudo 1 449 171 65 1208 5 12 1 97 2 93 5 99 1 949 93 5 96 0 725 99 6 ne tl PV positivo verdadeiro FP falso positivo NV negativo verdadeiro FN falso negativo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 52 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 6a Sensibilidade especificidade e valores preditivos do ensaio APTIMA CT relativamente ao estado de infec o do paciente por local cl nico e a n vel geral em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Resultados de CT dos esp cimes citol gicos Prev Sensibilidade Especificidade o e Local en base J IC de 95 26 IC de 95 PPV NPV 96 liquida PreservCyt Positivo 14 0 1 2 100 14 14 96 5 83 86 1 Negativo 0 0 0 83 14 0 76 8 100 90 1 99 3 82 4 100 Total 14 0 1 85 Positivo 4 0 0 0 E 100 4 4 100 120 120 2 Negativo 0 0 2 118 3 2 39 8 100 97 0 100 100 100 Total 4 0 2 118 Positivo 29 0 0 6 93 5 29 31 98 6 438 444 3 Negativo 2 0 2 436 6 5 78 6 99 2 97 1 99 5 82 9 99 5 Total 31 0 2 442 Positivo 8 0 0 4 E 100 8 8 98 6 275 279 4 Negativo 0 3 1 271 2 8 63 1 100 96 4 99 6 66 7 100 Total 8 3 1 275 Positivo 13 0 0 3 92 9 13 14 98 9 280 283 5 Negativo 1 1 4 275 4 7 66 1 99 8 96 9 99 8 81 3 99 6 Total 14 1 4 278 Positivo 18 0 1 1 94 7 18 19 99 4 343 345 6 Negativo 1 1 5 337 5 2 74 0
42. 91 4 100 82 4 100 94 0 100 wt 100 100 100 PreservCyt Feminino 81 39 0 0 42 91 0 100 91 6 100 95 5 100 T 100 100 100 PRIMOS der SA 3 y 2 91 4 100 88 8 100 95 0 100 soc 100 100 100 Mss 20 23 0 1 ud 85 2 100 90 5 100 94 0 100 100 100 100 Assint Feminino 42 23 0 0 19 85 2 100 82 4 100 91 6 100 iae 100 100 100 MASCUINON SSi 20 0 g so 83 2 100 90 0 100 93 5 100 PreservCyt Feminino 35 25 0 0 10 100 100 100 86 3 100 69 2 100 90 0 100 denota um resultado positivo um resultado negativo IC intervalo de confian a Amostras de esfrega os endocervicais e vaginais combinadas Esp cime apresentou um resultado final equ voco no Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 65 502184PT Rev D Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 12 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos concord ncias positivas negativas e globais por estado sintom tico continua Concor Concor Concor S t Esp ci s DTS DTS DTS DTS d ncia d ncia d ncia ymptom specime sexo N TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positivos negativos global IC de 95 IC de 95 IC de 95 ninn 99 0 99 0 99 0 Feminino 208 104 99 94 8 100 94 6 100 96 5 99 9 pee 100 100 100 Masculino 120 65 0 0 55 94 5 100 93 5 100 97 0 100 100 97 6 99 0 ae A Tudo a Feminin
43. 99 9 97 9 99 9 90 0 99 7 Total 19 1 6 338 Positivo 86 0 2 16 95 6 86 90 98 8 1 539 1 557 Tudo Negativo 4 5 14 1 520 5 5 89 0 98 8 98 2 99 3 82 7 99 7 Total 90 5 16 1 536 AE Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 53 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7a Resultados de esfregacos uretrais masculinos e de esp cimes de urina de participantes infectados ou n o infectados com C trachomatis de acordo com o estado de infec o do paciente NAAT 1 Estadode Ensaio APTIMA NAAT 2 Ensaio APTIMA Estado sintom tico infec o do COMBO 2 CT Total paciente EM UM EM UM EM UM Sint Assint Infectado 96 68 164 Infectado 5 1 6 Infectado 11 7 18 Infectado 13 11 24 Infectado 1 0 1 I
44. 993 3 13 9 1 103 0 80 100 664 100 990 948 100 90 0 100 4 265 18 4 241 2 75 90 0 68 3 98 8 984 95 9 99 6 818 992 Urina 5 199 11 4 182 2 65 846 54 6 98 1 97 8 946 994 733 989 6 295 29 10 252 4 112 879 71 8 96 6 96 2 93 1 98 2 744 984 7 102 10 0 92 O 98 100 692 100 100 96 1 100 100 100 8 49 3 0 46 O 61 100 292 100 100 923 100 100 100 Tudo 1 448 165 26 1247 10 121 943 897 972 980 97 0 98 7 864 992 1 70 14 4 52 O 200 100 768 100 929 827 980 778 100 2 46 13 4 29 O 283 100 753 100 87 9 71 8 96 6 765 100 3 45 4 2 39 0 89 100 398 100 95 1 835 994 667 100 Colhido pstega o 4 152 6 3 12 1 46 6857 424 996 979 94 1 99 6 667 993 pelo Vaginal 5 130 7 3 120 0 54 100 590 100 976 930 995 700 100 paciente 6 73 8 5 62 O 107 100 631 100 92 5 83 4 97 5 615 100 7 68 5 2 61 0 74 100 478 100 96 8 890 996 714 100 8 43 3 2 38 0 70 100 292 100 950 831 994 60 0 100 Tudo 629 60 25 543 1 97 984 912 100 956 93 6 97 1 706 998 1 228 36 8 184 O 158 100 90 3 100 958 92 0 98 2 81 8 100 2 198 50 16 130 2 263 96 2 86 8 99 5 890 82 8 93 6 758 985 3 13 9 4 100 0 80 100 664 100 96 2 90 4 98 9 692 100 Colhido psgega o 4 263 18 14 229 2 7 6 90 0 68 3 98 8 94 2 90 5 96 8 563 99 1 pelo Vaginal 5 199 13 7 179 0 65 100 753 100 962 924 985 650 100 medico 6 29 33 15 248 O 111 100 894 100 94 3 90 8 96 8 688 100 7 1022 9 0 9 1 98 90 0 555 997 100 96 1 100 100 989 8 50 3 1 46 0 60 100 292 100 97 9 887 99
45. As Tabelas 7a 7d resumem o n mero de resultados de participantes sintom ticos e assintom ticos designados como infectados ou nao infectados com CT de acordo com o algoritmo de estado de infecc o do paciente Dos 2 787 participantes inclu dos o estado de infec o por CT era desconhecido em 13 Os pacientes foram designados com um estado de infec o do paciente desconhecido se havia falta de resultados que evitassem determina es conclusivas de status de infec o Os resultados destes participantes n o foram inclu dos em quaisquer c lculos do desempenho Dos 8 452 resultados do ensaio APTIMA CT obtidos no estudo cl nico multic ntrico verificou se uma pequena percentagem 8 0 0996 de esp cimes com resultados inicialmente inv lidos para CT Ap s repeti o do teste n o se verificaram resultados equ vocos ou inv lidos Tabela 4 Sensibilidade e especificidade do ensaio APTIMA CT relativamente ao estado de infec o do paciente por estado sintom tico e a n vel geral Esp cime sintom tico N PV FPO nv EN Ccgeos lt de 9584 Sintom tico 576 131 23 418 4 97 0 92 6 99 2 94 8 92 3 96 7 Esfregaco Assintomatico 745 90 20 634 1 98 9 94 0 100 96 9 95 3 98 1 Tudo 1 321 221 43 1 052 5 97 8 94 9 99 3 96 1 94 7 97 1 Masculino Sintomatico 576 127 14 427 8 94 1 88 7 97 4 96 8 94 7 98 3 Urina Assintomatico 746 90 17 638 1 98 9 94
46. EJM 298 540 549 23 Schachter J E C Hill E B King V R Coleman P Jones and K F Meyer 1975 Chlamydial infection in women with cervical dysplasia Am J Obstet Gynecol 123 753 757 24 Stary A E Schuh M Kerschbaumer B Gotz and H Lee 1998 Performance of transcription mediated amplification and Ligase chain reaction assays for detection of chlamydial infection in urogenital samples obtained by invasive and noninvasive methods J Clin Microbiol 36 2666 2670 25 Toye B W Woods M Bobrowska and K Ramotar 1998 Inhibition of PCR in genital and urine specimens submitted for Chlamydia trachomatis testing J Clin Microbiol 36 2356 2358 26 Verkooyen R P A Luijendijk W M Huisman W H F Goessens J A J W Kluytmans J H Rijsoort Vos and H A Verbrugh 1996 Detection of PCR inhibitors in cervical specimens by using the AMPLICOR Chlamydia trachomatis assay J Clin Microbiol 34 3072 3074 27 Vincelette J J Schirm M Bogard A Bourgault D Luijt A Bianchi P C Van Voorst Vader A Butcher and M Rosenstraus 1999 Multicenter evaluation of the fully automated COBAS AMPLICOR PCR test for detection of Chlamydia trachomatis in urogenital specimens J Clin Microbiol 3 74 80 28 Yuan Y Y X Zhang N G Watkins and H D Caldwell 1989 Nucleotide and deduced amino acid sequences for the four variable domains of the major outer membrane proteins of the 15 Chlamydia trachomatis ser
47. FCE LSLG O OD GAZOU4G GO C CLGLANHLUP LOLDLAOCCICI LU A U LLUCLDCZCGLGLLDLHI UL ea N A esp cime nao obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina CVS esfrega o vaginal colhido pelo m dico Sint sintom tico Assint assintomatico Oo w of 4 pm ol aj Nh co a 3 pl a P q Dv Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 57 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7e Resultados do estado de infecc o de pacientes ap s estudo cl nico de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt para C trachomatis Estadio de infeccno da Esfregaco ener Estado sintomatico paciente Series gn SU Sintom tico Assintom tico Infectado Positivo Positivo 30 60 N o infectado Negativo Negativo 322 1 214 N o infectado Negativo Positivo 4 12 N o infectado Positivo Negativo 3 2 Total 359 1 288 Distribui o RLU de Controlos APTIMA A distribui o de RLU para o controlo positivo APTIMA GC controlo negativo CT e o controlo positivo APTIMA CT controlo negativo GC de todos os testes do Ensaio APTIMA CT executados durante os estudos cl nicos dos esp cimes apresentada na Tabela 8 Tabela 8 Distribui o de RLU dos controlos APTIMA durante os estudos de esp cimes cl nicos que inclu ram esfreg
48. Figura 2 Passo 5 Deixe todo o l quido escoar de volta para o frasco de pl stico Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 26 502184PT Rev D i j k Sistema TIGRIS DTS Retirar o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 6 Volte a colocar a tampa no frasco No caso dos frascos de 50 testes descole e elimine a etiqueta superior Anote as iniciais do operador a data de reconstituic o e o n mero do lote do reagente liofilizado na etiqueta remanescente Figura 2 Passo 7 No caso dos frascos de 100 testes anote as iniciais do operador e a data de reconstituic o directamente na etiqueta ver Figura 3 Elimine o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 8 Aviso Evite formar espuma ao reconstituir os reagentes A espuma compromete o sensor de n vel no Sistema TIGRIS DTS 1 2 ON 3 N D NM 5 479 lt Figura 2 Processo de reconstitui o nos Sistema TIGRIS DTS CTH e CT amp a N SI J NM 2 Prepare o TCR CT de trabalho wTCR CT para o kit de 100 testes a b Emparelhe os frascos apropriados de TCR CT e TCR B Verifique os n meros do lote na ficha de c digo de barras do lote principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados Abra o frasco de TCR CT e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta d Abra o frasco de TCR B e verta todo o
49. N o infectado E E E n 4 ojoj Aj gt N o infectado E E z E 1 Total 812 640 1 452 a I E NR CN RR HR p c EE SRI UR c ERE O N ERE E o RR a N A esp cime nao obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina Sint sintom tico Assint assintomatico Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 55 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7c Resultados de esfrega os vaginais colhidos por pacientes assintom ticas de participantes infectadas ou n o infectadas com C trachomatis de acordo com o estado de infec o da paciente NAAT 1 Estado de infec o Ensaio APTIMA NAAT 2 do paciente COMBO 2 EF UF EF UF PVS Ensaio APTIMA CT Total Infectado Infectado Infectado Infectado Infectado a 4 4 4 Infectado Infectado N o infectado N o infectado 1 1 1 N o infectado N o infectado E E E N o infectado N o infectado 2 E N o infectado E E E N o infectado E E N o infectado E N o infectado A N o infectado E x alo al Mpa mfr wir sf alrm apal alo ofa N o infectado E E E E a o o N o infectado E a E E N o infectado N o
50. NA de cada organismo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 10 502184PT Rev D Sistemas DTS A caixa refrigerada cont m tamb m os seguintes artigos tabuleiro de armazenamento armazenar entre 2 Ce 30 C ap s recep o Simbolo Componente Quantidade AR Soluc o de reconstituic o de amplificac o APTIMA para CT 1x9 3mL Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de reconstitui o para reagente enzim tico APTIMA 1x3 3 mL Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para CT 1x 12 4 mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selecc o APTIMA 1x31mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante Colarinho de Reconstituic o 3 Cart o de Selagem 1 embalagem Caixa de temperatura ambiente do ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade TCR Reagente de captura do alvo APTIMA para GC 1x22mL Soluc o salina tamponada contendo fase s lida e olig meros de captura W Soluc o de Lavagem APTIMA 1x402 mL Soluc o tamponada com HEPES a 10 mM contendo 2 de detergente DF Tamp o para o fluido de desactivac o APTIMA 1x402 mL 800 mM soluc o tamponada de bicarbonato O Reagente a leo APTIMA 1 x 24 6 mL Oleo de Silicone Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 11 502184PT Rev
51. O reagente de captura do alvo de trabalho Working Target Capture Reagent wTCR CT est vel durante 60 dias quando armazenado entre 15 C e 30 C N o refrigere E Ap s a reconstitui o o reagente enzim tico o reagente de amplifica o para CT e o reagente de sonda para CT s o est veis durante 60 dias quando armazenado entre 2 Ce8 c F Elimine os reagentes reconstitu dos e wTCR CT n o utilizados ap s 60 dias ou depois de a data de validade do lote principal passar o que acontecer primeiro G Os controlos s o est veis at data indicada nos frascos H Os reagentes dos frascos de 50 testes armazenados no Sistema TIGRIS DTS t m uma estabilidade de 48 horas no instrumento I Os reagentes dos frascos de 100 testes armazenados no Sistema TIGRIS DTS t m uma estabilidade de 96 horas no instrumento J Os reagentes armazenados no Sistema PANTHER t m uma estabilidade de 72 horas no instrumento K O reagente de sonda para CT e o reagente de sonda para CT reconstitu do s o fotossens veis Armazene os reagentes ao abrigo da luz L Com o aquecimento temperatura ambiente alguns tubos de controlo podem parecer nublados ou apresentar precipita es A n voa ou precipita o associada aos controlos n o afecta o desempenho do controlo Os controlos podem ser usados mesmo que estejam nublados ou precipitados Caso se pretendam controlos l mpidos a solubiliza o pode ser agilizada incubando os no extremo super
52. OO aaa Eos Concd concord ncia Conc concentra o CV coeficiente de varia o N A n o aplic vel a amostras negativas RLU unidades relativas de luz Relative Light Units DP desvio padr o Os valores do DP e do CV est o definidos como 0 e 0 096 respectivamente de acordo com o modelo de efeitos aleat rios se a variabilidade devido a esta fonte relativamente a erros aleat rios e ou varia o de outras fontes for numericamente negativa Uma lista de trabalho incluiu 1 replicado adicional de um membro de um painel com 50 fg rRNA ensaio Numa lista de trabalho faltou 1 replicado de um membro de um painel com 500 fg rRNA ensaio Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 67 502184PT Rev D Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema PANTHER Estudo de Equival ncia de Sensibilidade Anal tica Os pain is de sensibilidade em grupos de esfregacos endocervicais grupos de esp cimes vaginais grupos de esp cimes de urina e grupos de esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt foram preparados a uma concentrac o de rRNA de CT de 1 IFU ensaio 7 25 IFU esfrega o e 5 IFU mL urina tendo sido testados 60 replicados no Sistema TIGRIS DTS A percentagem de positividade IC de 9596 no Sistema TIGRIS DTS para esfregacos endocervicais foi de 100 95 1
53. RIS DTS contendo 301191 Unidades multitubos Multi tube Units MTU 104772 02 Kit de saco de pontas usadas de MTU 900907 Deflectores do recipiente de res duos de MTU 900931 Tampas do recipiente de res duos de MTU 105528 Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C para utiliza o com esp cimes em solu o PreservCyt Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais 301162 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes 301040 de urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0M gua para o sistema TIGRIS DTS consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para obter as especifica es Luvas descart veis Padr o de calibra o SysCheck 301078 Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Tampas suplentes para os kits de 100 testes Solu es de reconstitui o para os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda CL0041 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Tampas suplentes para os kits de 2 x 50 testes Solu es de reconstitui o para os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda
54. S esfrega o vaginal colhido pelo m dico Tabela 1b Preval ncia de C trachomatis por local cl nico e global determinada a partir dos resultados do ensaio APTIMA CT utilizando esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Local 96 n positivos n testado 1 17 0 17 100 2 32 4 124 3 74 35 475 4 4 2 12 287 5 54 16 297 6 5 5 20 364 Tudo 6 3 104 1 647 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 44 502184PTRev D Valores esperados dos Sistemas DTS Valores Preditivos Positivos e Negativos para Taxas de Preval ncia Hipot ticas na Am rica do Norte Os valores preditivos positivos e negativos estimados PPV e NPV para diferentes taxas de preval ncia hipot ticas com a utiliza o do ensaio APTIMA CT s o apresentados na Tabela 2 Estes calculos baseiam se em taxas de preval ncia hipot ticas e na sensibilidade e na especificidade globais estimadas a partir do estado de infecc o do paciente em tr s investiga es cl nicas multic ntricas A sensibilidade e a especificidade globais para CT foram de 96 7 e 96 8 respectivamente Tabela 2 Os valores reais de PPV e NPV para esfrega os endocervicais esfrega os vaginais e esfrega os uretrais masculinos colhidos pelo m dico esfrega os vaginais colhidos pelas pacientes e esp cimes de urina de ambos os sexos s o indicados na Tabela 6 para cada local cl nico e a n vel global Os valores reais de PPV e NPV em esp cimes citol gicos em ba
55. a os endocervicais vaginais e uretrais masculinos esp cimes de urina masculina e feminina e esp cimes citol gicos l quidos em PreservCyt RLU x1 000 Controlo Estat stica Estudo cl nico Estudo cl nico em de esfrega os esp cimes citol gicos e esp cimes de urina l quidos em PreservCyt N 198 209 M dia 0 89 1 22 DP 2 94 2 63 M xima 26 36 Controlo Positivo GC Controlo Negativo CT Percentil 75 1 1 Mediana 0 1 Percentil 25 0 M nima 0 0 N 198 209 M dia 7 007 6 593 DP 776 709 E i M xima 8 884 10 383 Controlo Positivo CT Controlo Negativo GC Percentil 75 7 440 7 025 Mediana 7 066 6 661 Percentil 25 6 621 6 205 M nima 988 4 419 Estudo de Precis o A precis o do ensaio APTIMA CT ou seja a reprodutibilidade foi avaliada em dois centros cl nicos externos e na Gen Probe A precis o do ensaio APTIMA CT foi avaliada entre tr s lotes de kits de ensaio APTIMA CT tr s locais de estudo seis operadores e 108 testes do ensaio APTIMA CT Dois operadores em cada um dos tr s locais de ensaio realizaram um total de seis testes do ensaio APTIMA CT por lote de kit num total de 36 testes por lote de kit Cada teste foi constitu do por um painel de precis o de 12 membros contendo 0 to Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 58 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS 2 000 fg ensaio de rRNA de CT A reprodutibilidade foi estabelecida utilizando meio
56. a transfer ncia ver Estudos de Estabilidade de Esp cime C Armazenamento de esp cimes ap s o teste 1 Os esp cimes que foram testados devem ser armazenados em posi o vertical num suporte 2 Os tubos de transporte de esp cimes devem ser cobertos com uma pel cula pl stica nova e limpa ou com folha de alum nio 3 Caso as amostras testadas precisem ser congeladas ou despachadas remova a tampa perfur vel e coloque novas tampas n o perfur veis ou perfur veis nos tubos de transporte de esp cimes Caso os esp cimes precisem ser despachados para teste em outro local as temperaturas recomendadas dever o ser mantidas Antes de destapar amostras anteriormente testadas e novamente tapadas os tubos de transporte de esp cimes devem ser centrifugados por 5 minutos a 420 RCF for a centr fuga relativa para levar todo o l quido para o fundo do tubo Evite salpicos e contamina o cruzada Nota Os esp cimes t m de ser transportados de acordo com os regulamentos de transporte nacionais e internacionais em vigor Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 9 502184PT Rev D Sistemas DTS Sistemas DTS Os reagentes do ensaio APTIMA CT s o indicados abaixo para os Sistemas DTS Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m sao listados junto ao nome do reagente DTS as Reagentes e materiais fornecidos Kit de ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 100 testes 2 caixas Ref Cat 301088 Caixa refrigerada do en
57. ados fi veis dependem da colheita adequada de esp cimes Como o sistema de transporte utilizado para este ensaio n o permite a avalia o microsc pica de adequa o do esp cime o treinamento de m dicos em t cnicas adequadas de colheita de esp cimes necess rio Consulte o folheto informativo do kit de colheita de esp cimes APTIMA adequado G O fracasso ou o sucesso terap utico n o podem ser determinados com o ensaio APTIMA CT pois os cidos nucleicos podem persistir ap s uma terap utica antimicrobiana adequada H Os resultados do ensaio APTIMA CT devem ser interpretados em conjunto com outros dados laboratoriais e cl nicos de que o m dico disponha I Um resultado negativo n o impede a poss vel infec o porque os resultados dependem da colheita adequada de esp cimes Os resultados de teste podem ser afectados por colheita inadequada de esp cimes erro t cnico mistura de esp cimes ou n veis do alvo abaixo do limite de detec o do ensaio J O ensaio APTIMA CT fornece resultados qualitativos Portanto n o se pode fazer uma correla o entre a magnitude de um sinal positivo de ensaio e o n mero de organismos em um esp cime K No caso de estudos cl nicos de esp cimes de esfrega os vaginais esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina o desempenho da detec o de CT deriva de popula es de preval ncia elevada Os resultados positivos em popula es de baixa preval
58. ante o protocolo de ensaio 2 As TTU t m de ser descontaminadas com fluido de desactiva o conforme descrito em Detec o N o volte a utilizar as TTU 3 Realize regularmente uma descontamina o do equipamento e das superf cies de trabalho conforme descrito na sec o Notas ao procedimento Descontamina o 4 Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 21 502184PT Rev D Sistemas DTS J Protocolo de Monitoriza o de Contamina o Laboratorial para o Sistemas DTS Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega
59. antes de os colocar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 34 502184PTRev D Sistema PANTHER C Prepara o de reagentes para reagentes previamente reconstitu dos 1 Osreagentes de amplificac o enzim tico e de sonda previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do inicio do ensaio 2 Se o reagente de sonda para CT reconstitu do contiver um precipitado que n o volte a solubilizar se temperatura ambiente aqueca o frasco tapado a uma temperatura que nao superior a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o reagente de sonda para CT pode ser utilizado mesmo que reste algum precipitado residual Misture o reagente de sonda para CT por invers o tendo o cuidado de n o induzir a forma o de espuma antes de o carregar no sistema 3 Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes 4 N o encha demasiado os frascos de reagentes O sistema PANTHER reconhece e rejeita frascos que estejam demasiadamente cheios D Manuseamento de esp cimes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no vortex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colh
60. aradamente 12 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 25 Materiais Opcionais a 13 Materiais Opcionais 26 Procedimento de Teste dos Sistemas DTS 13 Procedimento de Teste do Sistema TIGRIS DTS 26 Notas ao procedimento 19 Notas ao procedimento 30 E nEEENEN PARISER Sistema PANTHER 1irereccnierencnernnn inen 31 Reagentes e materiais fornecidos 31 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 32 Materiais Opcionais a 33 Procedimento de teste no Sistema PANTHER 33 Notas sobre o procedimento sessususss 36 1 502184PT Rev D Informa es gerais Informa es gerais Utiliza o pretendida O ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis um teste de sonda de cido nucleico alvo amplificado que utiliza a captura do alvo para a detec o qualitativa in vitro de RNA riboss mico rRNA de Chlamydia trachomatis CT para ajudar a diagnosticar doen as urogenitais provocadas por clam dia utilizando o Sistemas TIGRIS DTS ou o Sistema PANTHER ou a instrumenta o semiautom tica dos Sistemas DTS conforme especificado O ensaio pode ser utilizado para testar os seguintes esp cimes de indiv duos sintom ticos esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina assim como esp cimes de urina de amb
61. armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o Quantidade S mbolo Componente kit de 250 testes PCT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 5x1 7mL NGC cido nucleico de CT nao infeccioso em soluc o tamponada contendo 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 5x 1 7 mL NCT Acido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo 596 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de CT 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 24 502184PTRev D Sistema TIGRIS DTS Materiais necessarios mas disponiveis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Sistema TIGRIS DTS 105118 Kit de fluidos do ensaio APTIMA 302382 solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Kit de auto detec o APTIMA 301048 Kit de conservantes dos fluidos do ensaio APTIMA 302380 Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan Kit de teste do Sistema TIG
62. as Operadores ac do PreservCyt rxn daram Concd media DP DP DP DP mame 611 000 1 000 CV C9 1 000 CY x1 000 CY 4999 CV 09 A 20 0 4 140 140 100 6 5047 7348 113 0 0 0 5469 84 916 141 B 100 0 5 140 138 986 63377 10547 16 6 0 00 9472 14 9 14176 22 4 C 1000 5 140 140 100 65219 909 139 2471 38 3939 6 1021 157 D 0 0 140 140 100 12 08 N A 0 NA 04 NA 09 NA Daum EE LLL iiL a LLL LEXCALLALCIRLILLALOLLIAL 28 amp 1icLOUKLALILLILIU O OA BIG HIE DK CDODILILLUULLILEELKESKCALULLLLULLI SCILLILLOLLULULIL LESG LELEEILL LL ZGLOOSZOOOO QSIGLESLILEICELELCEGLCLU ULLIELCUCDjILREIL OE IPEELUdE EL BOTPQ Z OSLLULST AOILLLLECCDSEOBSIGO os resultados discordantes foram um resultado negativo e um resultado equ voco Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devida a esses factores for muito pequena Quando isto ocorre a variabilidade medida com DP e CV definida como zero 16 N A nao aplic vel para membros do painel negativos Operador teste As amostras com resultados discordantes foram inclu das na an lise de variabilidade de sinal Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 59 502184PT Rev D Desempenho analitico nos Sistemas DTS Desempenho analitico nos Sistemas DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS ap s a sec o Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema TIGRIS DTS
63. as iniciais do operador e a data de reconstitui o na etiqueta Figura 1 Passo 7 j Elimine o colarinho de reconstitui o e o frasco Figura 1 Passo 8 Figura 1 Processo de reconstituic o nos Sistemas DTS 2 Os reagentes de sonda para CT amplifica o para CT e enzim tico para CT previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do inicio do ensaio Caso o Reagente de Sonda contenha precipitado que nao retorne solu o em temperatura ambiente aque a o a 62 C por 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Ap s a nova suspens o misture invertendo suavemente com cuidado para n o induzir a forma o de espuma Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 14 502184PT Rev D Sistemas DTS Nota Este passo de invers o deve ser executada a qualquer momento em que o precipitado seja levado soluc o seja aquecendo o a 62 C ou temperatura ambiente 3 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho CT Working Target Capture Reagent wTCR CT a Transfira 20 mL do TCR CT para um recipiente dedicado limpo e seco de tamanho adequado b Utilizando uma micropipeta adicione 200 uL de TCR B ao TCR CT Misture completamente a soluc o com movimentos circulares Etiquete o recipiente Registe as iniciais do operador data de prepara o e ambos n meros de lote Nota Para um n me
64. ativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio APTIMA CT Tabela 6 Sensibilidade especificidade e valores preditivos do ensaio APTIMA CT relativamente ao estado de infec o do paciente por local cl nico e a n vel geral Prev Sensibilidade Especificidade PPV NPV IC de 95 IC de 95 1 252 54 14 183 1 21 8 98 2 90 3 100 92 9 88 4 96 1 794 99 5 Esp cime Local N PV FP NV FN 2 354 83 15 252 4 24 6 95 4 88 6 98 7 94 4 90 9 96 8 84 7 98 4 3 4 1 0 3 0 25 0 100 2 5 100 100 29 2 100 100 100 4 NA N A N A N A N A NA N A N A N A N A N A N A auia 5 200 12 4 184 0 60 100 735 100 97 9 94 6 99 4 75 0 100 6 304 59 10 235 0 19 4 100 93 9 100 95 9 92 6 98 0 85 5 100 7 207 12 0 195 0 5 8 100 73 5 100 100 98 1 100 100 100 8 N A N A N A NA N A NA N A N A N A N A N A N A Tudo 1 321 221 43 1 052 5 17 1 97 8 94 9 99 3 96 1 94 7 97 1 83 7 99 4 Masculino 1 252 54 9 188 1 21 8 98 2 90 3 100 95 4 91 5 97 9 85 7 99 5 354 85 9 258 2 24 6 97 7 91 9 99 7 96 6 93 7 98 4 90 4 99 2 4 1 0 3 0 25 0 100 2 5 100 100 29 2 100 100 100 NA N A N A NA N A NA N A N A N A N A
65. constitui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com seu reagente liofilizado Certifique se de que a solu o de reconstitui o e o reagente liofilizado tenham cores de etiqueta correspondentes antes de aplicar o colarinho de reconstitui o b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados sejam emparelhados c Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 1 d Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta e Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira firmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 2 f Inverta lentamente os frascos montados Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de vidro Figura 2 Passo 3 g Agite suavemente a solu o no frasco para misturar Evite a cria o de espuma enquanto agita o frasco Figura 2 Passo 4 h Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente os frascos montados inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma
66. cterium acnes Bacteriodes fragilis Kingella dentrificans Proteus mirabilis Bacteriodes ureolyticus Kingella kingae Proteus vulgaris Bifidobacterium adolescentis Klebsiella oxytoca Providencia stuartii Bifidobacterium brevi Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Branhamella catarrhalis Lactobacillus acidophilus Pseudomonas fluorescens Brevibacterium linens Lactobacillus brevis Pseudomonas putida Campylobacter jejuni Lactobacillus jensonii Rahnella aquatilis Candida albicans Lactobacillus lactis Rhodospirillum rubrum Candida glabrata Legionella pneumophila 2 Saccharomyces cerevisiae Candida parapsilosis Leuconostoc paramensenteroides Salmonella minnesota Candida tropicalis Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium Chlamydia pneumoniae Micrococcus luteus Serratia marcescens Chlamydia psittaci 2 Moraxella lacunata Staphylococcus saprophyticus Chromobacterium violaceum Moraxella osloensis Staphylococcus aureus Citrobacter freundii Morganella morganii Staphylococcus epidermidis Clostridium perfringens Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae Corynebacterium genitalium Mycoplasma genitalium Streptococcus bovis Corynebacterium xerosis Mycoplasma hominis Streptococcus mitis Cryptococcus neoformans N meningitidis Serogroup A Streptococcus mutans Cytomegal
67. dade ao testar os esp cimes de esfrega os contendo o organismo alvo n o foi determinada AC Os cart es de selagem devem ser eliminados em recipientes para res duos imediatamente ap s remov los dos tubos de reac o Devem sempre utilizar se cart es de selagem novos estes nunca dever o ser reutilizados de passos anteriores Os cart es de selagem devem ser fixados firmemente ao topo de todos os tubos de reac o Requisitos de armazenamento e manuseamento dos reagentes A Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 2 C e 8 C refrigerados Reagente de amplifica o APTIMA para CT Reagente enzim tico APTIMA Reagente de sonda APTIMA para CT Reagente de captura do alvo B APTIMA Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT B Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 2 C e 30 C Solu o de reconstitui o de amplifica o APTIMA para CT Solu o de reconstitui o para reagente enzim tico APTIMA Solu o de reconstitui o de sonda APTIMA para CT Reagente de selec o APTIMA Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 6 502184PT Rev D Informa es gerais C Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 15 C e 30 C temperatura ambiente Reagente de captura do alvo APTIMA para GC Solu o de Lavagem APTIMA Tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA Reagente a leo APTIMA D
68. dadeiro B Resultados de Controlo de Qualidade e Aceitabilidade O controlo negativo APTIMA para CT rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT e o controlo positivo APTIMA para CT rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC actuam como controlos para os passos de captura do alvo amplifica o e detec o do ensaio De acordo com directrizes ou exig ncias de regulamentos locais estaduais e ou federais ou organiza es de acredita o controlos adicionais para lise celular e estabiliza o de RNA podem ser inclu dos O controlo negativo para CT rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT cont m rRNA n o infeccioso de GC Caso o pretenda pode encomendar mais controlos em kit A prepara o correcta dos esp cimes confirmada visualmente pela presen a de uma nica zaragatoa de colheita APTIMA num tubo de transporte de esfrega os um volume final de urina situado entre as linhas pretas de enchimento num tubo de transporte de esp cimes de urina ou a aus ncia de qualquer zaragatoa num tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos l quidos Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 38 502184PT Rev D Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Os Controlos Positivos devem produzir os seguintes resultados de testes Resultado Controlo Total de RLU x1 000 da CT Controlo positivo GC controlo negativo CT i Negativo Controlo pos
69. de rotina de superf cies e equipamento Procedimento de teste no Sistema PANTHER Nota Consulte o PANTHER System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema PANTHER para mais informa es sobre procedimentos do Sistema PANTHER A Prepara o da rea de trabalho 1 Limpe as superf cies de trabalho onde os reagentes e amostras ser o preparados Limpe as superf cies de trabalho com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os reagentes e as amostras ser o preparados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Reconstitui o dos reagentes Prepara o de um novo kit Nota A reconstitui o do reagente deve ser realizada antes de come ar qualquer trabalho no Sistema PANTHER 1 Para reconstituir os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda para CT combine os frascos de reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe que as solu es de reconstitui o atinjam a temperatura ambiente antes de utiliz las a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com seu reagente liofilizado Certifique se de que a a solu o de reconstitui o e o reagente t m cores de etiqueta correspondentes ante
70. do para o kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para an lise com o ensaio APTIMA CT A sensibilidade e a especificidade do ensaio APTIMA CT em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram calculadas comparando os resultados com um algoritmo do estado de infec o do paciente O algoritmo incluiu os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 e do ensaio APTIMA CT em esfrega os endocervicais Para estabelecer um estado de infec o do paciente positivo exigia se que ambos os NAAT de refer ncia dessem resultados positivos Para estabelecer um estado de infec o do paciente negativo exigia se que pelo menos um NAAT de refer ncia desse resultado negativo A Tabela 7e apresenta a frequ ncia de resultados do teste para os dois NAAT de refer ncia A Tabela 5a mostra as sensibilidades e as especificidades do ensaio APTIMA CT por estado sintom tico e a n vel geral A sensibilidade global foi de 95 6 86 90 Nos participantes sintom ticos e assintom ticos as sensibilidades foram de 96 7 29 30 e 95 0 57 60 respectivamente A especificidade global foi de 98 8 1 539 1 557 Nos participantes sintom ticos e assintom ticos as especificidades foram de 98 8 325 329 e 98 9 1 214 1 228 respectivamente A Tabela 6a mostra as sensibilidades e as especificidades do ensaio APTIMA CT por local de colheita dos esp cimes e a n vel geral As sensibilidades variaram entre 92 9 e 100 As especificidades variaram entre 96 5 e 100
71. e 60 dias ap s a colheita Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s a colheita ver Estudos de Estabilidade de Esp cime 2 Esp cimes de urina a As amostras de urina que permanecem no recipiente de colheita principal devem ser transportadas ao laborat rio entre 2 C a 30 C Transfira a amostra de urina ao tubo de transporte de esp cimes de urina APTIMA em at 24 horas ap s a colheita Armazene entre 2 C e 30 C e teste nos 30 dias que se seguem colheita b Ap s a colheita transporte os esp cimes de urina processada no tubo de transporte APTIMA de esp cimes de urina a uma temperatura entre 2 C e 30 C e armazene a 2 C e 30 C at an lise Os esp cimes de urina processados devem ser analisados com o ensaio APTIMA CT no espa o de 30 dias ap s a colheita Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s a colheita ver Estudos de Estabilidade de Esp cime 3 Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt a Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt destinados a an lise de CT t m de ser processados para citologia e ou transferidos para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA no espa o de 30 dias ap s a colheita quando armazenados entre 2 C e 30 C ver Estudos de Estabilidade de Esp cime b Caso se ut
72. e STM A sensibilidade anal tica para o ensaio de 2 5 IFU mL Estudo de reprodutibilidade A precis o do ensaio APTIMA CT foi avaliada entre tr s Sistemas PANTHER e dois lotes de kits de ensaio APTIMA CT durante um per odo de 24 dias Os pain is foram efectuados misturando rRNA de CT em STM nas concentra es indicadas na Tabela 17 Os operadores realizaram dois testes por dia analisando cada membro do painel em duplicado por teste Foi calculada a concord ncia com o resultado esperado e a precis o foi estimada de acordo com as Orienta es EP5 A2 do NCCLS 18 O n mero de replicados de cada painel foi de 93 96 A Tabela 17 apresenta os dados de precis o de RLU em termos de m dia desvio padr o coeficiente de varia o CV concord ncia percentual com os resultados esperados e c lculos de variabilidade entre instrumentos entre lotes entre testes e intrateste Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 71 502184PT Rev D Desempenho analitico no Sistema PANTHER Tabela 17 Precisao do Sistema PANTHER para o ensaio APTIMA CT ntre M dia de instrument s Entre lotes Entre testes Intrateste Total Matre T Ne REY TOM DP DP DP DP DP 11 000 1 000 C9 4 999 CV 44 999 CV C9 499g CV CS 4 9ggy CV 9 2 100 0 38 21 3 064 358 0 0 1 86 104 6 2 123 0 5 93 7 390 100 22174 3 26435 3 6 0 0 180 07 24 3892 5 3 SIM 25 96 7478 100 22445 3 24988 33 531 0 16457 22 3778 51 25 96 7482 100 2222
73. e a data de validade no tubo de colheita tenha passado Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 4 502184PT Rev D Informa es gerais L A solu o PreservCyt foi validada como meio alternativo para o teste com o ensaio APTIMA CT Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt processados com o ThinPrep 3000 Processor ou outros instrumentos n o foram avaliados para teste da Chlamydia trachomatis utilizando o ensaio APTIMA CT M Ap s adicionar a urina ao tubo de transporte de urina o n vel de l quido tem de situar se entre as duas linhas pretas indicadoras no r tulo do tubo Caso contr rio o esp cime deve ser rejeitado N Mantenha condi es de armazenamento adequadas durante o envio do esp cime para garantir a integridade do mesmo A estabilidade do esp cime sob condi es de envio diferentes das recomendadas n o foi avaliada O Os esp cimes podem ser infecciosos Utilize Precau es Universais ao executar este ensaio M todos apropriados para manuseamento e descarte devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Apenas membros de equipa devidamente treinados no manuseamento de materiais infecciosos devem ter permiss o para realizar este procedimento diagn stico P Evite a contamina o cruzada durante os passos de manuseamento dos esp cimes Os esp cimes podem conter n veis extremamente altos de organismos Certifique se de que os recipientes de esp cimes n o contactam uns com os outros e elimi
74. e limita ao pessoal que foi treinado no procedimento Nao seguir as instru es dadas no folheto desta embalagem pode levar a resultados errados B Os efeitos do uso de tamp es irriga o vaginal e vari veis relativas colheita de esp cimes n o foram avaliados quanto ao seu impacto sobre a detec o de CT C A presen a de muco nos esp cimes endocervicais n o interfere na detec o de CT pelo ensaio APTIMA CT No entanto para garantir a colheita de c lulas infectadas com CT devem ser amostradas as c lulas epiteliais que revestem o endoc rvix Se o muco excessivo n o for removido a amostragem destas c lulas n o ser garantida D A amostragem de esp cimes de urina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi concebida para substituir os exames ao colo do tero e a colheita de esp cimes endocervicais para o diagn stico de infec es urogenitais femininas Os pacientes podem ter cervicite uretrite infec es do tracto urin rio ou infec es vaginais devido a outras causas ou infec es simult neas com outros agentes E O ensaio APTIMA CT n o tem por finalidade a avalia o de suspeita de abuso sexual ou para outras indica es m dico legais Para os pacientes que possam vir a sofrer um impacto psicossocial adverso por causa de um resultado falso positivo os CDC recomendam a realiza o de novos testes por um m todo que utilize uma tecnologia alternativa 4 F Result
75. eee OS 9 GEN PROBE APT MA Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis Para fins de diagn stico in vitro Exclusivamente para exporta o dos EUA Informa es gerais llsleeseeess 2 Utiliza o pretendida ccccccccc 2 Resumo e explica o do teste liliis 2 Princ pios do procedimento 000 cece eee tees 3 Avisos e preCaUuGOeS 2 eee 4 Requisitos de armazenamento e manuseamento dos reagentes 6 Colheita e armazenamento de esp cimes 0 0 ee 8 Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente 38 Limita es cassar sei Fea pps eee decals eels a eee os 41 Resultados de Estudos ClinicoS 00 cece eee eee eee eee 43 Valores esperados dos Sistemas DTS 44 Desempenho cl nico nos Sistemas DTS 48 Desempenho anal tico nos Sistemas DTS 60 Concordancia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS 64 Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS 68 Desempenho anal tico no Sistema PANTHER 71 Bibliografia leseeeeeeeeeee III IH 73 DTS sens TIGRIS da Sistemas DTS eese seinen 10 Sistema TIGRIS DTS ee 23 Reagentes e materiais fornecidos 10 Reagentes e materiais fornecidos 23 Materiais necess rios mas dispon veis sep
76. eita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os carregar no suporte a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Nota Podem ser tes
77. ema TIGRIS DTS e para os Sistemas DTS A concentra o variou entre 1 ordem de grandeza abaixo e 3 ordens de grandeza acima de 5 fg de rRNA de CT ensaio A Tabela 14 indica tamb m as concord ncias percentuais globais do estudo do painel cl nico entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 68 502184PT Rev D Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Tabela 14 Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado com rRNA de CT Membra de Concentrac o m 96 Concord ncia Esp cime Painel fg rRNA R plicas Concord ncia Concord ncia global entre TIGRIS ensaio TIGRIS DTS e DTS IC de 95 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 0 5 30 100 100 Endocervical Baixa 5 30 100 100 100 97 2 100 M dio 50 30 100 100 High 5 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 0 5 30 100 100 Esfregaco Vaginal Baixa 5 30 100 100 100 97 2 100 M dio 50 30 100 100 High 5 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 0 5 30 100 100 Uretral Baixa 5 30 100 100 100 97 2 100 M dio 50 30 100 100 High 5 000 30 100 100 Sem alvo 0 12 91 7 11 12 100 Muito baixo 0 5 30 100 100 Masculino Baixa 5 30 100 100 99 2 95 9 100 M dio 50 30 100 100 High 5 000 30 100 100 Urina Sem alvo 0 12 100 100 Muito baixo 0 5 30 100 100 Feminino Baixa 5 30 100 100 100 97 2 100 M dio 50 30 100 1
78. epende de factores de risco como a idade o sexo a presenca de sintomas o tipo de cl nica e o m todo de teste As Tabelas 1a e 1b apresentam um resumo da preval ncia de CT por tipo de esp cime segundo o ensaio APTIMA CT provenientes de duas investigac es cl nicas multic ntricas os dados s o apresentados por local cl nico e no total Tabela 1a Preval ncia de C trachomatis por local cl nico e global determinada a partir dos resultados do ensaio APTIMA CT 96 n positivos n testado Local EM UM EF UF PVS CVS 1 27 0 68 252 25 0 63 252 16 5 38 230 17 0 39 229 19 2 42 219 19 1 44 230 2 27 7 908 354 26 6 94 354 35 0 70 200 26 5 53 200 30 8 61 198 33 0 66 200 3 250 1 4 25 0 1 4 114 13 114 8 8 10 113 108 12 111 11 5 13 113 4 N A N A N A N A 11 6 31 267 8 1 22 271 9 3 25 268 12 2 33 270 5 80 16 200 8 0 16 200 9 0 18 199 7 5 15 199 80 16 199 10 41 20 199 6 22 7 69 304 20 0 61 305 143 42 294 13 2 39 295 152 44 290 16 22 48 296 7 58 12 207 63 13 207 7 8 8 102 9 8 10 102 12 13 102 8 8 X 9 102 8 NA N A N A N A 82 4 49 6 1 3 49 12 5 6 48 7 8 4 51 Tudo 20 0 264 1 321 18 8 248 1 322 15 4 224 1 455 13 1 191 1 458 15 3 219 1 435 16 2 237 1 461 EM esfrega o uretral masculino UM urina masculina EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina PVS esfrega o vaginal colhido por paciente CV
79. es 4 N o encha demasiado os frascos de reagentes O Sistema TIGRIS DTS reconhece e rejeita frascos que estejam demasiadamente cheios D Manuseamento de esp cimes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no v rtex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 28 502184PT Rev D Sistema TIGRIS DTS 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os carregar no suporte a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos a 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instruc es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos a 420 RCF para garantir que o l quido nao fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina nao
80. esp cime deve ser recolhido Os resultados de esp cimes com valores de RLU positivos baixos est o inclu dos nesta categoria Consulte a sec o Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente acima Notas O primeiro resultado v lido e n o equ voco para cada analito o resultado que deve ser relatado Recomenda se que sejam cuidadosamente ponderados os dados de desempenho aquando da interpreta o dos resultados do ensaio APTIMA CT em participantes assintom ticos ou em quaisquer participantes de popula es de preval ncia baixa Um resultado negativo n o exclui a presen a de infec o por CT pois os resultados dependem de uma correcta colheita dos esp cimes da aus ncia de inibidores e da detec o de rRNA suficiente Os resultados do teste podem ser afectados por uma colheita incorrecta dos esp cimes armazenamento inadequado dos esp cimes erro t cnico mistura de esp cimes ou valores alvo abaixo do limite de detec o do ensaio Recomendam se os testes de esp cimes endocervicais para pacientes femininas sobre as quais h suspeitas cl nicas de haver infec es por clam dia ou gonoc cicas Se forem recolhidos esfrega os citol gicos e endocervicais o esp cime citol gico l quido em solu o PreservCyt tem de ser recolhido antes do esp cime do esfrega o endocervical Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 40 502184PT Rev D Limitacoes A A utilizagao deste ensaio s
81. ess o cl nica um novo esp cime pode ser necess rio W Clientes devem validar um processo de transfer ncia LIS independentemente Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 42 502184PT Rev D Resultados de Estudos Clinicos Resultados de Estudos Clinicos O desempenho do ensaio APTIMA CT foi estabelecido em duas investiga es cl nicas multic ntricas realizadas na Am rica do Norte Na primeira investigac o cl nica foram realizados dois estudos Em primeiro o estudo de esp cimes cl nicos estabeleceu a sensibilidade a especificidade e os valores preditivos do ensaio APTIMA CT utilizando esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina esfrega os vaginais colhidos pela paciente e esp cimes de urina de ambos os sexos O segundo estudo da primeira investiga o avaliou tamb m a precis o do ensaio APTIMA CT quando realizado de acordo com as Orienta es do NCCLS 16 A segunda investiga o cl nica estabeleceu a sensibilidade especificidade e os valores preditivos do ensaio APTIMA CT utilizando a solu o PreservCyt componente do ThinPrep 2000 System Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram tamb m avaliados quanto precis o intralaboratorial com o ensaio APTIMA CT Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 43 502184PT Rev D Valores esperados dos Sistemas DTS Valores esperados dos Sistemas DTS Preval ncia A preval ncia de CT nas populag es de pacientes d
82. esultados positivos falsos para CT directamente ap s um positivo de alvo elevado c O Sistema TIGRIS DTS 3 n o apresentou resultados positivos falsos para CT directamente ap s um positivo de alvo elevado Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 70 502184PT Rev D Desempenho analitico no Sistema PANTHER Desempenho analitico no Sistema PANTHER Estudo de concordancia do painel clinico misturado Esp cimes de urina negativos individuais foram misturados com CT para criar um painel de 120 positivos para CT Os membros do painel positivos para CT foram misturados com organismos a 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL ou 25 IFU mL 0 5 fg ensaio 5 fg ensaio ou 50 fg ensaio Al m disso foram colhidos 120 esp cimes de urina negativos para CT Os pain is positivos e negativos foram testados em tr s Sistemas PANTHER e em tr s Sistemas TIGRIS DTS A concord ncia percentual positiva entre o Sistema PANTHER e o Sistema TIGRIS DTS foi de 100 com um intervalo de confian a inferior a 95 de 98 9 para CT A concord ncia percentual negativa entre o Sistema PANTHER e os Sistemas TIGRIS DTS foi de 10096 com um intervalo de confian a inferior a 95 de 98 9 Os resultados do estudo sao apresentados na Tabela 16 Tabela 16 Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado Concord ncia com os resultados esperados para CT Membro do Painel Concentra o R plicas TIGRIS PANTHER IFU mL fg ensaio Concd Concd Positivo muito baixo 0 25 0
83. ilize o procedimento de remo o de al quotas de ThinPrep consulte o ThinPrep 2000 ou ThinPrep 3000 Processor Operator s Manual Addendum Adenda do Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor ou do ThinPrep 3000 Processor Transfira 1 mL da al quota retirada para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA de acordo com as instru es do folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 8 502184PT Rev D Informa es gerais c Caso analise o esp cime ap s o processamento no ThinPrep 2000 Processor processe o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt de acordo com o ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor e o folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA Transfira 1 mL do fluido restante no frasco de solu o PreservCyt para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA de acordo com as instru es do folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA d Depois de o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt ser transferido para o tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA o esp cime tem de ser ensaiado com o ensaio APTIMA CT no espa o de 30 dias quando armazenado entre 2 C e 8 C ou de 14 dias quando armazenado entre 15 C e 30 C Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s
84. infectado E E N A N o infectado N A N o infectado N A E N o infectado E N A N A N o infectado E N o infectado z E N o infectado E Nao infectado z L E N o infectado N A E s N o infectado N A s N o infectado N A Total 640 e SE E EEE SEE EEE SEM N A esp cime n o obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EF esfrega o endocervical feminino UF urina feminina CVS esfrega o vaginal colhido pelo m dico PVS esfrega o vaginal colhido por paciente assintom tica wlalalalalo alaln o la a Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 56 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7d Resultados de esfrega os vaginais colhidos pelo m dico de participantes infectadas ou n o infectadas com C trachomatis de acordo com o estado de infec o da paciente Estado de NAAT 1 Ensaio ut infec o do Ensaio APTIMA COMBO 2 NAAT 2 APTIMA CT Fstado sintomiatico Total paciente EF UF cvs Sint Assint Infectado 76 m m c Tm 120 Infectado Infectado Infectado Infectado Infectado Infectado 4 4 4 4 Infectado 4 4 4 4 4 N Infectado Infectado a 4 4 4 Infectado
85. io e os resultados esperados para cada membro do painel A reprodutibilidade foi tamb m avaliada calculando o DP e o coeficiente de varia o CV do sinal relativamente a locais operadores lotes e listas de trabalho N o se calcularam os CV para membros do painel negativos para CT devido exist ncia de valores baixos do sinal que poderiam em teoria ser iguais a zero A Tabela 13 mostra os resultados da reprodutibilidade Todos os resultados do ensaio APTIMA CT no Sistema TIGRIS DTS concordaram com os resultados esperados Os valores de CV foram iguais ou inferiores a 3 4 Estes dados indicam uma excelente reprodutibilidade do ensaio APTIMA CT com o Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 66 502184PT Rev D Concordancia dos esp cimes clinicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 13 Dados de Precisao do Sistema TIGRIS DTS Conc p Entre Entre listas de Intra lista de ig rRNA Media entre togas Operadores Entre Lotes trabalho trabalho n RLU por x1 000 Concd pP cv DP Cv DP cv DP CV DP CV ensaio x1 000 96 x1 000 96 x1 000 29 x1 000 96 x1 000 0 863 2 9 100 1 4 N A 0 3 N A 0 0 N A 0 2 N A 2 2 N A 5 432 7 041 100 32 0 0 5 217 3 1 63 7 0 9 174 2 5 206 2 9 50 433 7 090 100 0 0 0 0 224 3 2 93 1 1 3 168 2 4 189 2 7 500 431 7 130 100 0 0 0 0 240 3 4 96 9 1 4 164 2 3 217 3 0 5 000 432 7 152 100 0 0 0 0 208 2 9 85 7 1 2 179 2 5 211 3 0 Co E IO DAAIUXLIKCO L a
86. ior do intervalo de temperatura ambiente 15 C a 30 C M Nao congele os reagentes Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 7 502184PT Rev D Informa es gerais Colheita e armazenamento de esp cimes O ensaio APTIMA CT foi concebido para detectar a presen a de CT em esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina esfrega os vaginais colhidos pela paciente esp cimes de urina de ambos os sexos e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt N o foi avaliado o desempenho com outros esp cimes que n o os colhidos com os seguintes kits de colheita Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de Colheita de Esp cimes de Urina para Esp cimes de Urina Masculina e Feminina Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para utiliza o com amostras ginecol gicas colhidas em solu o PreservCyt A Instru es de colheita Consulte o folheto da embalagem do respectivo kit de colheita de esp cimes para instru es de colheita B Transporte e armazenamento de esp cimes antes do teste 1 Esp cimes de esfrega o a Ap s a colheita transporte e armazene o esfrega o no tubo de transporte de esp cimes de esfrega o entre 2 C a 30 C at que seja testado Os esp cimes t m de ser analisados com o ensaio APTIMA CT no espa o d
87. ispersas entre amostras negativas Os testes inclu ram agregados de amostras fortemente positivas com Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 72 502184PT Rev D Bibliografia agregados de amostras negativas assim como positivos fortes Unicos dispersos segundo um padrao especifico pelo teste As amostras de titulo elevado foram preparadas utilizando rRNA de CT misturado em STM de forma a obter uma concentra o final de 5 x 10 fg rRNA reac o equivalente em rRNA de 2 5 x 10 IFU mL As an lises foram realizadas utilizando 5 testes em tr s Sistemas PANTHER num total de 2 933 amostras negativas A taxa de transmiss o global foi de 0 com um intervalo de confian a de 95 de 0 0 1 No total 7 amostras negativas foram declaradas inv lidas nos testes de transmiss o em amostras com t tulo elevado e exclu das dos c lculos Bibliografia 1 Beem M O and E M Saxon 1977 Respiratory tract colonization and a distinctive pneumonia syndrome in infants infected with Chlamydia trachomatis NEJM 296 306 310 2 Buimer M G J J Van Doornum S Ching P G H Peerbooms P K Plier D Ram and H H Lee 1996 Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae by Ligase chain reaction based assays with clinical specimens from various sites implications for diagnostic testing and screening J Clin Microbiol 34 2395 2400 3 Cates Jr W and J N Wasserheit 1991 Genital chlamydia infections epidemiology and
88. itivo CT 100 e 12 000 Positivo controlo negativo GC Um resultado de zero para 0 x 1 000 RLU no relat rio do teste representa um valor entre zero e 999 RLU Valores de RLU inferiores a 160 nos Sistemas DTS ou a 690 no Sistema TIGRIS DTS ou no Sistema PANTHER constar o no relat rio como inv lidos 1 O Software de Ensaio APTIMA avalia os controlos de acordo com os crit rios acima e relatar o Status de Execu o como APROVADO PASS se os crit rios do controlo de execu o forem atendidos e REPROVADO FAIL se os crit rios do controlo de execu o n o forem atendidos 2 Seo Status de Execu o for REPROVADO FAIL todos os resultados de testes da mesma execu o ser o inv lidos e n o dever o ser relatados 3 Cada laborat rio deve implementar procedimentos de controlo adequados para atender aos requisitos dos regulamentos CLIA sec o 493 1256 Nota Consulte a sec o Resolu o de Problemas ou contacte a assist ncia t cnica da Gen Probe para aux lio com controlos fora dos intervalos nos Sistemas DTS 4 Um par metro do Sistema TIGRIS DTS permite que cada local especifique uma frequ ncia de suporte de controlo pela qual conjuntos adicionais de controlos podem ser colocados em intervalos definidos dentro da lista de trabalho Caso este par metro seja especificado o Sistema TIGRIS DTS exigir que um conjunto de controlos seja aplicado ap s o n mero definido de esp cimes no suporte de cont
89. l gicos em base l quida PreservCyt p s processados ou esp cimes de urina que depois foram testados para detectar uma potencial interfer ncia com o ensaio na presen a e na aus ncia de alvo de CT Foi utilizado como concentra o alvo o equivalente em rRNA de uma IFU de CT ensaio 5 fg ensaio pois isto representa a sensibilidade anal tica do ensaio Os esp cimes foram testados no Sistema PANTHER Todas as amostras contendo cidos nucleicos alvo foram positivas quando testadas a uma concentra o de sangue de 10 v v em esfrega os ou em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt ou de 3096 v v em esp cimes de urina Todas as amostras que nao continham alvo foram correctamente identificadas como negativas Estes resultados s o id nticos aos demonstrados para o Sistema TIGRIS DTS quando misturados com quantidades de sangue semelhantes O sangue adicionado a esfrega os PreservCyt e esp cimes de urina a concentra es muito superiores s que ser o de esperar numa colheita normal de esp cimes n o interferiu com os resultados no Sistema PANTHER Estudos de transmissao com o Sistema PANTHER Para estabelecer que o Sistema PANTHER minimiza o risco de resultados positivos falsos causados por contamina o por transmiss o foi feito um estudo anal tico de m ltiplos testes utilizando pain is misturados em tr s Sistemas PANTHER A transmiss o foi avaliada utilizando aproximadamente 20 de amostras de CT de t tulo elevado d
90. m ocorrer se o tempo de selec o no passo de selec o for abreviado a temperatura de selec o n o estiver correcta ou ocorrer mistura insuficiente ap s adicionar o Reagente de selec o 3 Seo controlo positivo para GC APTIMA rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT for positivo ou equ voco para CT consulte Notas ao procedimento Contamina o do Ensaio para mais informa es Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 22 502184PT Rev D Sistema TIGRIS DTS TIGRIS Os reagentes do ensaio APTIMA CT sao indicados abaixo para os C DTS Sistema TIGRIS DTS Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Kit do ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 100 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 303091 2 x 50 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 302224 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis Caixa refrigerada Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o Quantidade Quantidade S mbolo Componente kit de 100 kit 2 x 50 testes testes A Reagente de amplificac o APTIMA para CT 1 frasco 2 frascos cidos nucleicos n o infecciosos secos em soluc o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente enzim tico APTIMA 1 frasco 2 frascos Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em soluc o tamponada HEPES contendo 1096 de reagente de volume P Reagente de sonda APTIMA para CT 1
91. mente o conte do at que se misturem completamente f Deixe o frasco de res duos repousar por 15 minutos e ent o elimine o conte do res duos g Enxag e o frasco de res duos com gua para remover qualquer res duo restante h Tape o frasco de res duos vazio e coloque o no compartimento de apreens o de v cuo Aplique os encaixes de desconex o r pida unidade TCS Elimine cuidadosamente ambas as luvas 4 Unidade TCS Limpe as superf cies da unidade TCR do distribuidor de aspira o e das pontas do ejector do tamp o de lavagem com toalhetes de papel humedecidos em solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Ap s o passo de limpeza com hipoclorito de s dio enxague com gua e em seguida seque totalmente as superf cies com toalhetes de papel 5 Suportes Mergulhe os suportes em solu o de hipoclorito de s dio 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M assegurando que ficam cobertos pela solu o de hipoclorito de s dio Mantenha os suportes mergulhados por 10 minutos Uma exposi o mais prolongada danificar os suportes Lave bem os suportes com gua coloque os sobre uma superf cie absorvente limpa e permita que os suportes sequem ao ar completamente Para prolongar a vida til dos suportes permita que eles sequem em posi o erecta e n o de cabe a para baixo l Contamina o do Ensaio 1 A introdu o de materiais contaminantes pode ocorrer se n o for tido o cuidado suficiente dur
92. na segunda posi o e na ltima posi o de uma lista de trabalho A etiqueta deste controlo cor de rosa O texto da etiqueta CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC 2 Cada tubo de controlo APTIMA pode ser testado uma vez A tentativa de pipetar mais de uma vez do tubo de esp cimes pode provocar erros por volume insuficiente B Temperatura Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C C P das Luvas Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p D Protocolo de Monitoriza o de Contamina o Laboratorial para o Sistema TIGRIS DTS Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros corres
93. ndo meio de transporte de esfrega o No estudo 576 amostras de alvo elevado e 2 376 amostras negativas foram testadas com os tr s Sistemas TIGRIS DTS A Tabela 15 mostra que a m dia da taxa global de transmiss o foi de 0 21 5 2 364 Um total de 12 amostras negativas foi verificado como inv lido e exclu do do c lculo Uma an lise separada foi executada numa divis o da popula o do estudo composta das amostras negativas que imediatamente seguiram um alvo alto positivo A taxa de transmiss o para este subgrupo da popula o foi em m dia de 0 47 2 424 Relativamente aos falsos positivos neste subgrupo a taxa de transmiss o variou entre 0 e 1 43 entre os tr s Sistemas TIGRIS DTS Estes resultados demonstram que a contamina o de transmiss es minimizada no Sistema TIGRIS DTS Tabela 15 Resumo da transmiss o global no Sistema TIGRIS DTS n testes Q 9 Instrumento negativos de tot a de resultados Resultados Intervalos de confian a IC de 95 xm positivos falsos CT positivos falsos CT v lidos TIGRIS 1 789 2 0 25 0 03 0 91 TIGRIS 2 783 3 0 38 0 08 1 12 TIGRIS 3 792 0 0 00 0 00 0 38 Todos os 2 364 5 0 21 0 07 0 49 instrumentos EEE E E EFE EEE E EEE E EEE E ES E TE E E MPE wc I I0 MEC NCC EE EE ESSES SEER a O Sistema TIGRIS DTS 1 n o apresentou resultados positivos falsos para CT directamente ap s um positivo de alvo elevado b O Sistema TIGRIS DTS 2 apresentou dois r
94. ne os materiais usados sem os passar por cima de recipientes abertos Troque de luvas se elas entrarem em contacto com o esp cime Q Caso o laborat rio receba um tubo de transporte de esfrega os que n o contenha o esfrega o contenha dois esfrega os um esfrega o de limpeza ou um esfrega o que n o tenha sido fornecido pela Gen Probe o esp cime dever ser rejeitado Antes de rejeitar um tubo de transporte de esfrega os sem o esfrega o verifique se n o um Tubo APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes pois este n o deve conter qualquer esfrega o R Para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt fa a a colheita de acordo com as instru es do fabricante As al quotas subsequentemente retiradas do frasco PreservCyt para teste com o ensaio APTIMA CT devem ser processadas utilizando apenas o kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA S Ap s a perfura o o l quido pode vazar das tampas dos tubos de transporte APTIMA sob certas condi es Siga as instru es do Procedimento de teste adequado para impedir que isto aconte a Relacionados com o ensaio T O desempenho dos esfrega os vaginais n o foi avaliado em gr vidas U O desempenho dos esp cimes de esfrega os endocervicais vaginais uretrais masculinos e dos esp cimes de urina feminina e masculina assim como dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi avaliado em adolescentes com menos de 16 anos de idade V N o utilize es
95. nfectado 1 0 1 Infectado 2 0 2 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 0 2 2 Infectado 3 1 4 Infectado 0 1 1 Nao infectado 4 4 8 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 1 4 5 Nao infectado 4 6 10 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 3 0 3 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 0 2 2 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 2 2 4 Nao infectado 1 1 2 Nao infectado 11 5 16 Nao infectado 4 4 8 Nao infectado 403 618 1 021 Nao infectado N A 0 2 2 Nao infectado N A 1 2 3 Nao infectado 0 4 4 Nao infectado 2 0 2 Nao infectado N A N A 0 1 1 Total 576 746 1 322 eee TUE a ER E AR E EAR RE EE EEE N A esp cime n o obtido ou dispon vel para an lise O s mbolo de igual representa resultados equ vocos ou indeterminados ap s repeti o do teste EM esfrega o uretral masculino UM urina masculina Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 54 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7b Resultados de esfregacos endocervicais femininos e de esp cimes de urina de participantes infectadas ou n o infectadas com C trachomatis de acordo com o estado de infecc o da paciente NAAT
96. o 98 56 0 1 41 93 6 100 87 4 99 9 94 4 100 rina 100 100 100 Masculino 115 61 0 0 54 94 1 100 93 4 100 96 8 100 PreservCyt Feminino 116 64 0 0 52 94 42400 93 2 5 96 ott denota um resultado positivo um resultado negativo IC intervalo de confianga Amostras de esfrega os endocervicais e vaginais combinadas Esp cime apresentou um resultado final equ voco no Sistema TIGRIS DTS Estudo de Precisao O efeito de diversos factores sobre a variabilidade do desempenho do ensaio APTIMA CT no Sistema TIGRIS DTS foi avaliado utilizando pain is de reprodutibilidade de DST de 12 membros Os membros do painel continham O a 5 000 fg de rRNA de CT ensaio O painel incluiu membros do painel com concentra es de CT pr ximas da sensibilidade anal tica indicada de 5 fg de rRNA de CT ensaio Os pain is foram testados num local de teste externo e na Gen Probe utilizando dois lotes de reagentes do ensaio APTIMA CT Na Gen Probe dois operadores realizaram cada um tr s listas de trabalho v lidas por lote de reagentes em cada um de dois instrumentos do Sistema TIGRIS DTS No local de teste externo dois operadores realizaram cada um tr s listas de trabalho v lidas por lote de reagentes num instrumento do Sistema TIGRIS DTS Uma lista de trabalho consistiu em controlos do teste e seis pain is de 12 membros A reprodutibilidade foi determinada calculando a concord ncia entre os resultados finais do ensa
97. o HPA para minimizar a contamina o dos produtos de amplifica o no ensaio Esta rea dedicada deve estar afastada das reas de prepara o de reagentes captura de alvo e de amplifica o Para ajudar a evitar a contamina o das reas laboratoriais com produtos da amplifica o a rea laboratorial deve ser disposta de forma a ter um fluxo de trabalho unidireccional da prepara o dos reagentes at ao HPA Esp cimes equipamentos e reagentes n o devem ser devolvidos rea onde um passo anterior tenha sido executado Al m disso o pessoal n o deve voltar para reas de trabalho anteriores sem cumprir as devidas medidas de protec o contra contamina o Relacionado com os esp cimes J Para a colheita de esfrega os endocervicais e uretrais masculinos utilize apenas o kit APTIMA de colheita de esfrega os endocervicais e uretrais masculinos Para a colheita de esp cimes de urina utilize apenas o kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes de urina masculinos e femininos Para esfrega os vaginais colhidos pela paciente e pelo m dico utilize apenas o kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais K As datas de validade listadas nos kits de colheita referem se ao local de colheita e n o instala o de testes As amostras colhidas em qualquer momento antes da data de validade do kit de colheita e transportadas e armazenadas de acordo com o folheto da embalagem s o v lidas para testes mesmo qu
98. o de colheita de esp cimesnes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Introduza imediatamente a zaragatoa num tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa 7 Teste o esfrega o utilizando o ensaio APTIMA CT de acordo com o Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Se os resultados forem positivos ou equ vocos para CT consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente a superf cie pode estar contaminada e deve ser descontaminada tratando a com uma solu o de hipoclorito de s dio tal como recomendado no Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Prepara o do Equipamento D Nota Caso se suspeite de contamina o do banho de gua este pode ser testado utilizando o procedimento de teste para esp cimes de urina adicionando 2 0 mL de gua a um tubo de transporte de esp cimes de urina K Resolu o de Problemas 1 Valores de controlo positivo baixos podem ser causados por temperaturas incorrectas durante v rios passos no ensaio ou ao permitir que o tempo de selec o no passo de selec o dure mais do que o recomendado 2 Antecedentes altos pode
99. o pequena Quando isto ocorre a variabilidade medida com DP e CV definida como zero 16 N A n o aplic vel para analitos negativos A precis o intralaboratorial dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt com o ensaio APTIMA CT foi determinada misturando aos frascos de PreservCyt 20 IFU de CT por frasco 0 1 IFU por reac o e 100 IFU de CT por frasco 0 5 IFU por reac o Os frascos contendo 1 000 IFU de CT por frasco 5 IFU por reac o e os frascos de PreservCyt n o misturados foram testados como controlos positivos e negativos Dez frascos misturados com cada nivel de IFU e dez frascos nao misturados foram divididos entre dois operadores Os operadores agitaram os frascos no v rtex e depois transferiram 14 al quotas 1 0 mL cada por frasco para 14 tubos de transfer ncia APTIMA conforme indica o folheto informativo do kit de transfer ncia de amostras APTIMA Os operadores desconheciam os t tulos das amostras Cada uma das amostras citol gicas em STM foi testada uma vez no ensaio APTIMA CT Realizou se um total de cinco testes ao longo de um per odo de cinco dias para 140 resultados em cada n vel de IFU Os resultados s o apresentados na Tabela 10 Tabela 10 Dados de precis o intralaboratorial do APTIMA CT Assay para PreservCyt utilizando um painel de precis o de 4 membros contendo 0 to 1 000 IFU 20 mL de c lulas de CT Entre Membro Fy 20mL IFU Concor RLU ntraoperador Entredi
100. o suporte na base magn tica da unidade TCS durante 5 a 10 minutos 24 Aspire todo o l quido como nos Passos 19 e 20 25 Ap s a aspira o final retire o suporte da base magn tica TCS e inspeccione visualmente os tubos para se assegurar de que todo o l quido foi aspirado e todos os tubos cont m gr nulos de part culas magn ticas Caso seja vis vel algum l quido volte a colocar o suporte na base magn tica da unidade TCS durante 2 minutos e repita a aspira o nessa TTU utilizando as mesmas pontas que utilizou anteriormente para cada esp cime Nota Se for vis vel qualquer gr nulo de part cula magn tica ap s ter terminado a aspira o o tubo pode ser aceite Se n o for vis vel qualquer gr nulo o esp cime deve ser testado novamente Se o mesmo esp cime n o contiver um gr nulo de part cula magn tica neste passo num teste posterior isto poder ser indica o de que existe um problema espec fico do esp cime Nesta situa o recomenda se uma nova colheita de esp cimes D Amplifica o Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 1 Utilizando a pipeta de repeti o adicione 75 pL do reagente de amplifica o CT reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as misturas de reac o no suporte dever o estar de cor vermelha 2 Utilizando a pipeta de repeti o adicione 200 uL do reagente a leo a cada tubo de reac o 3 Cubra o
101. oluna sombreada designa a zona equivoca Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 502184PT Rev D Desempenho clinico nos Sistemas DTS Desempenho clinico nos Sistemas DTS Consulte a Concord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS ap s a sec o Desempenho anal tico nos Sistemas DTS para obter o desempenho cl nico espec fico do Sistema TIGRIS DTS Estudo de esp cimes cl nicos em esfregacos endocervicais esfregacos uretrais masculinos esfrega os vaginais e esp cimes de urina Foram colhidos esfrega os endocervicais esfrega os vaginais e esfrega os uretrais masculinos pelo m dico esfrega os vaginais colhidos pela paciente assim como esp cimes de urina de ambos os sexos colhidos pelos pacientes a 2 787 participantes sintomaticos e assintom ticos do sexo masculino e do sexo feminino utentes de cl nicas de OB GINEC doen as sexualmente transmiss veis DST adolescentes e planeamento familiar de oito locais cl nicos geograficamente distintos da Am rica do Norte Os participantes foram classificados como sintom ticos quando houve relato pelo participante de sintomas como corrimento dis ria e dor p lvica Os pacientes foram classificados como assintom ticos se n o relataram sintomas Dos 1 392 participantes assintom ticos inclu dos no estudo 2 tinham menos de 16 anos 237 tinham idades entre 16 e 20 423 tinham idades entre 21 e 25 e 730 tinham idade superior a 25 anos Dos 1 395 participantes sintom tic
102. ord ncia dos esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Concord ncia do Sistema TIGRIS DTS A concord ncia entre os resultados do ensaio APTIMA CT gerados no Sistema TIGRIS DTS totalmente automatizado e nos Sistemas DTS semi automatizados foi avaliada testando esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos urina feminina e masculina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Todos os esp cimes cl nicos foram testados individualmente com o ensaio APTIMA CT no Sistema TIGRIS DTS e nos Sistemas DTS na Gen Probe A ordem de an lise n o foi aleat ria Os esp cimes identificados para inclus o foram testados no Sistema TIGRIS DTS e depois nos Sistemas DTS Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos urina feminina e masculina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Participantes do sexo feminino e masculino utentes de cl nicas de DST planeamento familiar e OB GINEC de oito locais geograficamente distintos com preval ncia baixa a elevada de CT contribu ram com esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos urina feminina e masculina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Os esp cimes foram transferidos directamente para a Gen Probe para a realiza o de testes ao passo que os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram p
103. os inclu dos no estudo 211 tinham idades entre 16 e 20 494 tinham idades entre 21 e 25 e 690 tinham idade superior a 25 anos Foram colhidos tr s esp cimes de cada um dos 1 322 participantes eleg veis do sexo masculino Foram colhidos cinco esp cimes de cada um dos 1 465 participantes eleg veis do sexo feminino No caso dos sujeitos masculinos foram colhidos aleatoriamente dois esfrega os uretrais seguidos de um esp cime de urina No caso dos participantes do sexo feminino foi colhido um esp cime de urina seguido por um esfrega o vaginal colhido pela paciente um esfrega o vaginal colhido pelo m dico e dois esfrega os endocervicais aleat rios Foram gerados resultados relativos a CT pelo ensaio APTIMA CT e pelo ensaio APTIMA COMBO 2 para os dois esfrega os vaginais um esfrega o endocervical um esfrega o uretral masculino e uma al quota de urina masculina e outra feminina Os restantes esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e uma al quota de urina masculina e outra feminina foram testados com outros NAAT dispon veis no mercado Os esp cimes de esfrega o endocervical esfrega o uretral masculino e urina masculina e feminina testados com o ensaio APTIMA COMBO 2 e com o outro NAAT dispon vel no mercado foram utilizados como NAAT de refer ncia para determinar o estado de infec o de cada participante O teste de esp cimes foi conduzido ou no local do registo do paciente ou em um local de teste externo
104. os os sexos O ensaio pode ser utilizado para testar os seguintes esp cimes de indiv duos assintom ticos esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina esfrega os vaginais colhidos pela paciente e esp cimes de urina de ambos os sexos Este ensaio destina se tamb m a ser utilizado na an lise de esp cimes ginecol gicos de pacientes sintom ticas e assintom ticas Estes esp cimes cervicais colhidos nos frascos de solu o PreservCyt podem ser testados antes ou depois do processamento citol gico O teste de esp cimes j submetidos a processamento citol gico est limitado a esp cimes processados apenas com o ThinPrep 2000 System Os esfrega os vaginais colhidos pelas pacientes constituem uma op o para o rastreio de mulheres quando n o existem outras indica es para exame p lvico O kit de colheita de esp cimes de esfrega o vaginal n o para utiliza o domiciliar Resumo e explica o do teste A infec o por Chlamydia trachomatis uma das mais comuns infec es sexualmente transmiss veis em todo o mundo S nos Estados Unidos em 2010 estima se que tenham sido notificadas aos Centers for Disease Control 1 307 893 426 0 por 100 000 habitantes novos casos de CT 5 Chlamydia uma bact ria intracelular n o m vel gram negativa e obrigat ria A esp cie CT constitu da por quinze serovares A B Ba C D E F G H J K L1 L2 e L3 que podem provocar doen
105. ovars Infect Immun 57 1040 1049 Gen Probe Incorporated San Diego CA 92121 EMERGO EUROPE Informa es para contacto nos EUA e a nivel internacional Molenstraat 15 Assist ncia ao cliente 1 858 410 8002 2513 BH Hai customerservice gen probe com ala Assist ncia t cnica 1 858 410 8511 alee Bales technicalsupport gen probe com Numero de telefone gratuito nos EUA e Canada Assist ncia ao cliente 1 800 523 5001 Assist ncia t cnica 1 888 484 4747 www gen probe com aia C 4 0843 GEN PROBE GEN PROBE e desenho APTIMA APTIMA e desenho APTIMA COMBO 2 DTS LEADER PANTHER SB100 e TIGRIS s o marcas comerciais da Gen Probe Incorporated eppendorf estilizado e REPEATER s o marcas comerciais da Eppendorf AG PRESERVCYT e THINPREP s o marcas comerciais da Hologic Inc KOVA TROL uma marca registada da Hycor Biomedical Inc RAININ uma marca registada da Rainin Instrument LLC TECAN e FREEDOM EVO s o marcas comerciais da Tecan Group AG Qualquer outra marca que apare a neste documento pertence a seu respectivo propriet rio 2000 2013 Gen Probe Incorporated 502184PT Rev D 2013 05 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 74 502184PT Rev D
106. ovirus N meningitidis Serogroup B Streptococcus pneumoniae Deinococcus radiodurans N meningitidis Serogroup C 4 Streptococcus pyogenes Derxia gummosa N meningitidis Serogroup D Streptococcus salivarius Eikenella corrodens N meningitidis Serogroup Y Streptococcus sanguis Enterobacter aerogenes N meningitidis Serogroup W135 Streptomyces griseinus Enterobacter cloacae Neisseria cinerea 4 Trichomonas vaginalis Entercoccus avium Neisseria dentrificans Ureaplasma urealyticum Entercoccus faecalis Neisseria elongata 3 Vibrio parahaemolyticus Entercoccus faecium Neisseria flava Yersinia enterocolitica Erwinia herbicola Neisseria flavescens 2 Erysipelothrix rhusiopathiae Neisseria lactamica 9 n numero de estirpes testadas Todos os organismos testados deram resultados negativos no ensaio APTIMA CT Subst ncias Interferentes Foram introduzidas em esfrega os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e ou esp cimes de urina as seguintes subst ncias interferentes 1096 sangue geleia contraceptiva espermicida hidratante anest sico hemorroidal leo de corpo p creme antif ngico lubrificantes vaginais spray feminino e leuc citos 1 x 10 c lulas mL Foram introduzidas em esp cimes de urina as seguintes substancias interferentes 30 de sangue analitos de urina prote nas glucose cetonas bilirrubina ni
107. para utiliza o em esfrega os vaginais colhidos em casa pelas pacientes R O desempenho dos esfrega os vaginais n o foi avaliado em gr vidas S O desempenho dos esp cimes de esfrega os endocervicais vaginais uretrais masculinos e dos esp cimes de urina feminina e masculina assim como dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi avaliado em adolescentes com menos de 16 anos de idade T O desempenho do Sistema TIGRIS DTS n o foi determinado a altitudes acima dos 2240 m 7355 p s Realizar se o verifica es volum tricas adicionais e estudos espec ficos para os ensaios antes ou como parte do processo de instala o e aceita o em laborat rios acima dos 2240 m 7355 p s de altitude U O desempenho do Sistema PANTHER n o foi determinado a altitudes acima dos 2000 m 6561 p s V N o h evid ncias de degrada o de cidos nucl icos em Solu o PreservCyt Se um esp cime citol gico em base l quida PreservCyt apresentar um n mero baixo de material celular de CT pode ocorrer uma distribui o n o homog nea deste material celular Al m disso quando comparado com amostras directas de Meio de Transporte de Esfrega os APTIMA o volume adicional de solu o PreservCyt resulta em maior dilui o do material de amostra Esses factores podem afectar a habilidade de detectar pequena quantidade de organismos no material colhido Se resultados negativos dos esp cimes n o se encaixarem na impr
108. penho Estes problemas incluem um processamento de esp cimes inc modo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 2 502184PT Rev D Informa es gerais e a inibi o de esp cimes que podem originar resultados negativos falsos 6 12 15 19 25 27 O ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis ensaio APTIMA CT um NAAT de segunda gera o que utiliza tecnologias de captura de alvo amplifica o mediada por transcri o Transcription Mediated Amplification TMA e um ensaio de protec o da hibrida o Hybridization Protection Assay HPA para aperfei oar o processamento do esp cime ampliar o rRNA alvo e detectar produtos da amplifica o respectivamente Os estudos que compararam o desempenho e inibi o de esp cimes de v rios sistemas de amplifica o demonstraram os benef cios da captura de alvo da TMA e do HPA 7 11 De acordo com as Orienta es para o Rastreio de Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae de 2002 os CDC recomendam diversas op es para o seguimento de testes de rastreio positivos se for de esperar um valor preditivo positivo baixo ou se um resultado positivo falso acarretar consequ ncias psicossociais ou legais graves 4 Uma destas op es de an lise adicional pode consistir num teste de amplifica o de cidos nucleicos diferente aprovado pela FDA que vise um alvo distinto do alvo do teste inicial O ensaio APTIMA CT tem como alvos sequ ncias de cidos nucleicos diferentes das visadas
109. pondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimesnes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Introduza imediatamente a zaragatoa num tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa Caso os resultados de CT sejam positivos ou inconclusivos consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para obter mais informa es sobre monitoriza o de contamina es espec ficas do Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 30 502184PT Rev D Sistema PANTHER PA ER Os reagentes do ensaio APTIMA CT s o indicados abaixo para os Sistema PANTHER Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Kit do ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 100 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 302925 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis Caixa refrigerada Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade
110. por outros NAAT de C trachomatis incluindo o ensaio APTIMA COMBO 2 Princ pios do procedimento O ensaio APTIMA CT combina as tecnologias de captura de alvo TMA e HPA Os esp cimes s o colhidos e transferidos em seus respectivos tubos de transporte de esp cimes A solu o de transporte contida nestes tubos liberta o rRNA alvo e protege o da degrada o durante o armazenamento Quando o ensaio APTIMA CT realizado em laborat rio as mol culas de rRNA alvo s o isoladas dos esp cimes utilizando olig meros de captura atrav s de uma captura de alvos que utiliza micropart culas magn ticas O olig mero de captura cont m uma sequ ncia complementar a uma regi o espec fica da mol cula alvo assim como uma cadeia de res duos de desoxiadenosina Durante o passo de hibrida o a regi o espec fica para a sequ ncia do olig mero de captura liga se a uma regi o espec fica da mol cula alvo O olig mero de captura o complexo alvo ent o capturado da solu o ao reduzir a temperatura da sala de reac o para temperatura ambiente Esta redu o de temperatura permite que a hibridiza o ocorra entre a regi o de desoxiadenosina no olig mero de captura e as mol culas de poli desoxitimidina que s o ligadas de forma covalente s part culas magn ticas As micropart culas incluindo as mol culas alvo capturadas a elas ligadas s o arrastadas por imans para o lado do recipiente de reac o sendo o sobrenadante aspirado As pa
111. que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 15 502184PT Rev D Sistemas DTS 5 Caso pretenda testar esp cimes com tampas convencionais tampas nao penetraveis necess rio centrifug los por 5 minutos a 420 RCF for a centrifuga relativa para levar todo o l quido para o fundo do tubo antes de o destapar Evite salpicos e contamina o cruzada 6 Nos suportes TTU coloque TTU suficientes para acomodar os calibradores controlos e esp cimes 7 Caso uma lista de trabalho seja desejada crie a neste ponto Para instru es sobre a cria o de uma lista de trabalho consulte o APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual do Operador do Software de Ensaio APTIMA 8 Misture bem o wTCR CT Utilizando a pipe
112. ra completar os testes d Prepare o LEADER HC Lumin metro colocando uma TTU vazia na posi o 1 da cassete e execute o protocolo Wash lavagem e Carregue as TTU no lumin metro Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 18 502184PT Rev D Sistemas DTS f Inicie sessao no computador Clique em New Run Novo teste escolha APTIMA CT Assay Protocol Protocolo do ensaio APTIMA CT e introduza o n mero de tubos controlos e esp cimes Clique em Next Seguinte para iniciar o teste Nota O teste deve ser terminado num per odo de 2 horas a partir do final da incuba o do passo de selec o g Prepare o fluido de desactiva o misturando volumes iguais de solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0 M e tamp o para fluido de desactiva o APTIMA num recipiente de pl stico com tampa grande Coloque a etiqueta e escreva a data de validade no recipiente de pl stico O Fluido de Desactiva o fica est vel durante 4 semanas temperatura ambiente Elimine o Fluido de Desactiva o ap s 4 semanas ou ap s 100 amostras processadas terem sido desactivadas o que vier primeiro h Ap s remover as TTU usadas do lumin metro coloque as no recipiente de Fluido de Desactiva o Deixe que as TTU estabilizem no recipiente durante pelo menos 15 minutos antes de serem eliminadas M todos apropriados para manuseamento e descarte devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Notas ao procedimento A Controlos
113. rante este passo k Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Registe o n mero de lote de TCR B l Elimine o frasco e a tampa de TCR B Elimine a pipeta de transfer ncia 4 Prepare o reagente de selecc o a Verifique o n mero do lote no frasco de reagente para se certificar de que corresponde ao n mero de lote na folha de c digo de barras do lote principal b Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Nota Misture bem invertendo todos os reagentes antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes C Prepara o de reagentes para reagentes previamente reconstitu dos 1 Os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda para CT previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do inicio do ensaio 2 Se o reagente de sonda para CT reconstitu do contiver um precipitado que n o volte a solubilizar se temperatura ambiente aqueca o frasco tapado a uma temperatura que nao superior a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o reagente de sonda para CT pode ser utilizado mesmo que reste algum precipitado residual Misture o reagente de sonda para CT por invers o tendo o cuidado de n o induzir a formac o de espuma antes de o carregar no sistema 3 Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagent
114. rasco invertendo suavemente com cuidado para n o induzir a forma o de espuma D Temperatura 1 Os passos de captura de alvo amplifica o hibridiza o e selec o dependem da temperatura Assim torna se imperativo que os banhos de gua sejam mantidos nos intervalos de temperatura especificados 2 Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C 3 Os passos de detec o do ensaio t m de ser realizados a uma temperatura entre 18 C e 28 C Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 19 502184PT Rev D Sistemas DTS E Tempo Os passos de captura de alvo amplifica o hibridiza o e selec o dependem do tempo Cumpra os tempos especificados no Procedimento de Teste dos Sistemas DTS F Utiliza o do vortex importante que a mistura no v rtex seja bem feita para que o ensaio APTIMA CT seja bem sucedido Quando se atinge um movimento de v rtex adequado a suspens o gira a uma velocidade que eleva a solu o para a parte superior do tubo Esta manipula o vortex mantida por per odos de tempo espec ficos Para fazer o v rtex de reac es defina a velocidade de misturador do v rtex multitubos para a posi o mais baixa fixe o suporte e ligue a corrente el ctrica Aumente a velocidade lentamente at que o l quido suba at metade do tubo Sujeite ao v rtex durante 10 segundos durante o tempo indicado ou at a cor ficar uniforme De seguida rode a velocidade para o m
115. re o suporte do banho de gua e transfira o para a rea de HPA Utilizando a pipeta de repeti o adicione 100 pL do reagente de sonda CT reconstituido a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor amarela b Cubra os tubos com um cart o de selagem e leve ao misturador v rtex multitubos Incube o suporte num banho de gua a 62 C 1 C durante 20 5 minutos Retire o suporte do banho de gua e incube o temperatura ambiente durante 5 1 minutos 2 Selec o a Utilizando a pipeta de repeti o adicione 250 uL do reagente de selec o a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor vermelha b Cubra os tubos com um cart o de selagem misture o suporte no v rtex durante 10 segundos ou at a cor ser uniforme e incube o suporte em banho de gua a62 C 1 C durante 10 1 minutos c Retire o suporte do banho de gua 3 Detec o A detec o tem de ser realizada entre 18 C e 28 C a Incube o suporte entre 18 C e 28 C durante 15 3 minutos Nota Este intervalo de temperatura cr tico para o desempenho do ensaio b Para utiliza o do LEADER HC Lumin metro e o software de ensaio APTIMA consulte o LEADER HC Luminometer Operator s Manual Manual do Operador LEADER HC Lumin metro e o APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual do Operador do Software de Ensaio APTIMA c Assegure se de que existem volumes suficientes de Auto Detect 1 e 2 pa
116. reagente do ensaio associado for retirado do sistema c O kit de reagente do ensaio associado tiver excedido os limites de estabilidade 3 Cada tubo de controlo APTIMA pode ser testado uma vez A tentativa de pipetar mais de uma vez do tubo pode provocar erros de processamento B Temperatura Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C C P das Luvas Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 36 502184PT Rev D Sistema PANTHER D Protocolo de monitorizac o de contaminagao laboratorial para o Sistema PANTHER Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contaminagao incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doencas e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n mero
117. reproductive sequelae Am J Obstet Gynecol 164 1771 1781 4 Centers for Disease Control and Prevention 2002 Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections United States Morbid and Mortal Weekly Rep 51 RR 15 5 Centers for Disease Control and Prevention 2011 Sexually Transmitted Disease Surveillance 2010 Atlanta GA U S Department of Health and Human Services November 6 Chernesky M A D Jang J Sellors K Luinstra S Chong S Castriciano and J B Mahony 1996 Urinary inhibitors of polymerase chain reaction and Ligase chain reaction and testing of multiple specimens may contribute to lower assay sensitivities for diagnosing Chlamydia trachomatis infected women Mol Cell Probes 11 243 249 7 Chong S D Jang X Song J Mahony A Petrich P Barriga and M Chernesky 2003 Specimen processing and concentration of Chlamydia trachomatis added can influence false negative rates in the LCx assay but not in the APTIMA Combo 2 Assay when testing for inhibitors J Clin Microbiol 41 778 782 8 Crotchfelt K A B Pare C Gaydos and T C Quinn 1998 Detection of Chlamydia trachomatis by the Gen Probe AMPLIFIED Chlamydia Trachomatis assay AMP CT in urine specimens from men and women and endocervical specimens from women J Clin Microbiol 36 391 394 9 CUMITECH 31 Verification and Validation of Procedures in the Clinical Microbiology Laboratory ASM PRESS FEBRUARY
118. rio Esp cimes positivos conhecidos podem servir como controlos sendo preparados e testados em conjunto com esp cimes desconhecidos Os esp cimes usados como controlos de prepara o devem ser armazenados manipulados e testados de acordo com o folheto da embalagem Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 39 502184PT Rev D Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Os controlos de prepara o de esp cimes devem ser interpretados da mesma forma descrita para esp cimes de testes de pacientes Consulte a sec o Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Resultados de Testes de Pacientes D Resultados de Testes de Pacientes 1 Se os controlos em qualquer execu o n o gerarem os resultados esperados os resultados de testes em esp cimes de pacientes na mesma execu o n o devem ser reportados 2 Resultados de esfrega os esp cimes de urina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Ver Notas abaixo a Resultados iniciais Pos para CT Positivo para CT rRNA Neg para CT Presumidamente positivo para CT rRNA Equiv para CT A amostra deve ser testada novamente Inv lido A amostra deve ser testada novamente b Resultados do Novo Teste Pos para CT Positivo para CT rRNA Neg para CT Presumidamente positivo para CT rRNA Equiv para CT Indeterminado um novo esp cime deve ser recolhido Inv lido Indeterminado um novo
119. ro menor de reacc es esp cimes e controlos utilize os seguintes dados para calcular os volumes de TCR CT e TCR B Volume de TCR mL n mero de reac es 5 reac es extra x 0 1 mL Volume de TCR B mL Volume de TCR mL 100 C Captura de Alvo Target Capture A pipeta de repeti o usada na captura de alvo e amplifica o deve ser dedicada para utiliza o somente nestes passos Consulte a sec o Avisos e precau es para mais informa es Prepara o dos Suportes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no vortex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os perfurar a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do
120. rocessados em dois laborat rios de citopatologia antes de serem transferidos Na Gen Probe os esfrega os endocervicais os esfrega os uretrais masculinos e os esp cimes de urina feminina e masculina foram primeiro rastreados com o ensaio APTIMA COMBO 2 no Sistema TIGRIS DTS e o esfrega o vaginal e os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram rastreados com o ensaio APTIMA COMBO 2 no Sistemas DTS Os esp cimes com resultados finais inv lidos ou equ vocos n o foram seleccionados no estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos em APTIMA CT Duzentos e cinco esfrega os femininos 87 endocervicais e 118 vaginais 120 esfrega os uretrais masculinos 98 esp cimes de urina feminina 115 de urina masculina e 116 esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt com resultados positivos e negativos para CT no ensaio APTIMA COMBO 2 foram seleccionados para an lises de compara o entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS para o ensaio APTIMA CT Os esp cimes com resultados iniciais inv lidos ou equ vocos foram depois testados utilizando o mesmo sistema que tinha gerado o resultado Um esp cime de urina feminina apresentou um resultado inicial equ voco nos Sistemas DTS quando o teste foi repetido o resultado final foi v lido Um esp cime de urina masculina apresentou um resultado inicial inv lido no Sistema TIGRIS DTS quando o teste foi repetido o resultado final foi v lido Um esp cime de urina feminina apresento
121. rolo O Sistema TIGRIS DTS avalia automaticamente cada controlo na lista de trabalho de acordo com os crit rios acima e invalidar todos os esp cimes no s suporte s de controlo s afectados caso os crit rios de controlos n o seja atendido Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para obter mais detalhes 5 Controlos negativos podem n o ser efectivos na monitoriza o de transmiss o aleat ria Consulte as Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS para obter os resultados de um estudo de transmiss o anal tica de alto alvo que se realizou para demonstrar o controlo da transmiss o no Sistema TIGRIS DTS Consulte as Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter os resultados de um estudo de transmiss o anal tica de alto alvo que se realizou para demonstrar o controlo da transmiss o no Sistema PANTHER C Controlo da prepara o de esp cimes opcional O controlo negativo APTIMA para CT rotulado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT e o controlo positivo APTIMA para CT rotulado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC actuam como controlos para os passos de captura do alvo amplifica o e detec o do ensaio e t m de ser inclu dos em cada teste realizado Se assim o pretender os controlos para a lise celular e estabiliza o de RNA podem ser testados de acordo com as exig ncias das ag ncias de acredita o adequadas ou com os procedimentos de cada laborat
122. rt culas s o lavadas para remover matrizes de esp cimes residuais que podem conter inibidores da reac o de amplifica o Ap s a conclus o dos passos da captura de alvo os esp cimes est o prontos para a amplifica o Os ensaios de amplifica o de alvo s o baseados na capacidade que os iniciadores oligonucle tidos complementares t m de efectuar hibrida o espec fica e permitem a amplifica o enzim tica das cadeias do cido nucleico alvo A reac o TMA da Gen Probe replica uma regi o espec fica do rRNA da subunidade 16S de CT atrav s de intermedi rios de DNA utilizado um conjunto exclusivo de iniciadores para a mol cula alvo A detec o das sequ ncias de produto da amplifica o de rRNA amplicon alcan ada com a utiliza o da hibridiza o do cido nucleico Uma sonda de DNA quimioluminescente de cadeia nica que complementar a uma regi o do produto de amplifica o alvo marcada com uma mol cula de ster de acrid nio A sonda de DNA marcada combina se com o produto de amplifica o para formar h bridos RNA DNA est veis O Reagente de selec o diferencia a sonda hibridizada da n o hibridizada eliminando a gera o de sinal da sonda n o hibridizada Durante o passo de detec o a luz emitida dos h bridos rotulados como RNA DNA medida como sinais de fot es num lumin metro e s o relatadas Unidades de luz relativa RLU Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 3 502184PT Rev D
123. s correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimesnes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Insira imediatamente o esfrega o no tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa Caso os resultados de CT sejam positivos ou inconclusivos consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Para mais informa es sobre a monitoriza o de contamina es espec ficas do Sistema PANTHER contacte a assist ncia t cnica da Gen Probe Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 37 502184PT Rev D Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente A Interpreta o do Teste Os resultados dos ensaios s o automaticamente interpretados pelo software do ensaio APTIMA utilizando o protocolo para CT O resultado de um teste pode ser negativo equ voco positivo ou inv lido de acordo com a determina o a partir das RLU totais no passo de detec o ver abaixo O resultado de um teste pode ser inv lido por os valores de RLU estarem fora
124. s de aplicar o colarinho de reconstitui o b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados sejam emparelhados c Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 3 Passo 1 d Abra a solu o de reconstitui o correspondente e coloque a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta e Segurando o frasco de solu o na bancada insira com firmeza a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 3 Passo 2 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 33 502184PT Rev D Sistema PANTHER f Inverta lentamente os frascos montados Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de vidro Figura 3 Passo 3 g Agite suavemente a solu o no frasco para a misturar Evite a cria o de espuma durante a agita o do frasco Figura 3 Passo 4 h Aguarde que o reagente liofilizado entre em soluc o e depois inverta novamente os frascos montados inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a formagao de espuma Figura 3 Passo 5 Deixe todo o l quido escoar de volta para o frasco de pl stico i Retire o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 3 Passo 6 j Coloque a tampa no frasco de pl stico Registe as iniciais do operador e a data de reconstitui o no r tulo Figura 3
125. s tubos com um cart o de selagem e leve ao misturador v rtex multitubos 4 Incube o suporte num banho de gua a 62 C 1 C durante 10 5 minutos 1 Consulte a Ficha de Especifica es de V cuo do Sistema de Captura de Alvo localizada na parte posterior do Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo ou contacte o Suporte T cnico Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 17 502184PT Rev D Sistemas DTS 5 Transfira o suporte para um banho de agua a 42 C 1 C e incube durante 5 2 minutos 6 Com o suporte no banho de gua remova cuidadosamente o cart o de selagem e utilizando a pipeta de repeti o adicione 25 uL do reagente enzim tico reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor laranja 7 Cubra imediatamente os tubos com um cart o de selagem novo retire o suporte do banho de gua e misture os tubos de reac o agitando suavemente o suporte manualmente 8 Incube o suporte num banho de agua a 42 C 1 C durante 60 15 minutos E Ensaio de protec o da hibrida o Hybridization Protection Assay HPA Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 A pipeta de repeti o usada nos passos de hibridiza o e selec o deve ser dedicada para utiliza o somente nestes passos Consulte a sec o Avisos e precau es 1 Hibrida o a Reti
126. saio APTIMA Chlamydia trachomatis Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de amplificac o APTIMA para CT 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente enzim tico APTIMA 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de sonda APTIMA para CT 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente de captura do alvo B APTIMA 1x0 35 mL cido nucleico nao infeccioso em soluc o tamponada contendo 596 de detergente PCT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 3x17mL NGC cido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 3x1 7 mL NCT cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de GC 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA R
127. se l quida PreservCyt s o indicados na Tabela 6a Tabela 2 Valores preditivos positivos e negativos para taxas de preval ncia hipot ticas Taxa de preval ncia hipot tica Sensibilidade Especificidade PPV NPV 1 96 7 96 8 23 5 100 0 2 96 7 96 8 38 3 99 9 5 96 7 96 8 61 6 99 8 10 96 7 96 8 77 2 99 6 15 96 7 96 8 84 3 99 4 20 96 7 96 8 88 4 99 2 25 96 7 96 8 91 0 98 9 30 96 7 96 8 92 9 98 6 Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 45 502184PT Rev D Valores esperados dos Sistemas DTS Distribui o de RLU no ensaio APTIMA CT A Figura 4 mostra a distribuic o de RLU para o ensaio APTIMA CT para todos os tipos de esp cimes excepto para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt A Tabela 3 indica a distribuic o de RLU para os resultados positivos totais e negativos totais bem como os resultados positivos falsos e negativos falsos para cada tipo de esp cimes excepto esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt relativamente ao estado de infecc o do paciente Entre certos tipos de esp cimes verifica se uma tend ncia para o aumento da propor o de positivos verdadeiros quando os valores de RLU aumentam 7 000 1 6 000 4 5 000 4 4 000 4 Negativo Equivoco Positivo baixo de RLU Positivo 3 000 4 N mero de ocorr ncias 2 000 4 1 000 4 0 10 10 lt 20 20 lt 30 30 lt 40 40 lt 50 50 lt 100 100 1 000 1 000 lt 2 000 2 000 lt
128. ta de repeti o adicione 100 uL a cada tubo de reac o 9 O primeiro tubo de reac o do ensaio tem de conter o controlo negativo e o segundo tubo de reac o tem de conter o controlo positivo a O r tulo do controlo negativo para o ensaio APTIMA CT azul esverdeado O texto do r tulo identifica o controlo negativo como CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT O r tulo do controlo positivo para o ensaio APTIMA CT cor de rosa O texto do r tulo identifica o controlo positivo como CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC b Segure o tubo de controlo negativo tubo rotulado a azul esverdeado na m o ou mantenha o num suporte Com a utiliza o de uma micropipeta perfure a tampa tomando cuidado para n o chegar com a ponta ao fundo do tubo Adicione 400 uL do controlo negativo tubo rotulado a azul esverdeado ao primeiro tubo de reac o Da mesma forma e utilizando uma nova ponta de pipeta adicione 400 uL de controlo positivo tubo rotulado a cor de rosa ao segundo tubo de reac o 10 Continue o procedimento de prepara o do suporte adicionando 400 uL de cada esp cime aos tubos de reac o restantes Utilize uma nova ponta de pipeta para cada esp cime e controlo O volume de esp cime ou controlo aceit vel para adi o a um tubo de reac o de 400 uL 100 pL Consulte as sec es Notas ao procedimento e Pipetac o de Controlos e Esp cimenes para mais informa es Captura de Alvo Target Capture
129. tadas at 3 al quotas distintas de cada tubo de esp cimes A tentativa de pipetar mais de 3 al quotas do tubo de esp cimes pode provocar erros de processamento Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 35 502184PT Rev D Sistema PANTHER E Prepara o do sistema 1 Defina o sistema de acordo com as instru es do PANTHER System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema PANTHER e das Notas sobre o procedimento Certifique se de que s o utilizados suportes de reagente e adaptadores de TCR de dimens o adequada 2 Carregue as amostras Notas sobre o procedimento A Controlos 1 Para funcionar correctamente com o software do ensaio APTIMA no sistema PANTHER necess rio um par de controlos Os tubos de controlo positivo CT controlo negativo GC e de controlo positivo GC controlo negativo CT podem ser carregados em qualquer posi o do suporte ou em qualquer calha da zona de amostras do Sistema PANTHER A pipetagem de esp cimes do paciente come a quando se cumpre uma das duas condi es seguintes a Est a ser actualmente processado pelo sistema um par de controlos b S o registados no sistema resultados v lidos para os controlos 2 Depois de os tubos de controlo terem sido pipetados e estarem a ser processados para um kit de reagente espec fico os esp cimes dos pacientes podem ser testados com o kit de reagentes associado durante at 24 horas excepto se a Os controlos forem inv lidos b O kit de
130. te kit ap s a data de validade W N o troque misture ou combine reagentes de ensaio provenientes de kits com n meros de lote diferentes Os controlos e fluidos do ensaio APTIMA podem apresentar n meros de lote diferentes Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 5 502184PT Rev D Informa es gerais Espec ficos dos Sistemas DTS X Pontas com encaixes hidrof bicos devem ser usadas No m nimo necess rio dedicar duas pipetas de repeti o ao uso com este ensaio uma para utilizar nos passos de captura do alvo e amplifica o e outra para utilizar nos passos de HPA necess rio dedicar duas micropipetas ao uso com este ensaio uma para utilizar na transfer ncia de esp cimes e outra para utilizar na prepara o de reagentes Todas as pipetas t m de ser limpas regularmente da forma descrita em Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Notas ao procedimento Y Ao utilizar pipetas de repeti o para adi o de reagentes n o toque o tubo com a ponta da pipeta para evitar a passagem de um tubo para outro Z A mistura adequada necess ria para alcan ar resultados acurados nos ensaios Para obter todos os dados consulte o Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Notas ao procedimento AA necess rio dedicar banhos de gua separados para os passos de captura do alvo amplifica o e HPA do ensaio AB A reprodutibilidade foi estabelecida utilizando meio de transporte de esfrega os misturado com rRNA A reprodutibili
131. titui o 3 Folha de c digo de barras do lote principal 1 folha Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 31 502184PT Rev D Sistema PANTHER Kit de controlos APTIMA armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade PCT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 5x 1 7 mL NGC cido nucleico de CT nao infeccioso em soluc o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 5x1 7mL NCT cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de CT 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Sistema PANTHER 303095 Kit de fluidos do ensaio APTIMA 303014 1 000 testes solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Kit de auto detec o APTIMA 303013 1 000 testes Unidades multitubos Multi tube Units MTU 1047
132. tras misturadas foram mantidas a 70 C 20 C 4 C e 30 C As amostras foram testadas em duplicado nos dias 0 20 77 e 117 Todas as condi es de teste deram resultados positivos para CT em todos os momentos e a todas as temperaturas Os dados que sustentam as condi es recomendadas de envio e armazenamento de esfrega os endocervicais uretrais e vaginais foram gerados a partir de amostras negativas de urina de ambos os sexos As amostras de urina foram misturadas com CT a uma concentra o final de aproximadamente 10 IFU por reac o Dois conjuntos de amostras de urina misturadas foram mantidos a 30 C durante 24 horas antes de serem adicionados ao meio de transporte de urina Urine Transport Medium UTM Os dois conjuntos de amostras em UTM foram depois mantidos a 4 C e a 30 C e testados em triplicado aos dias 0 1 5 20 e 35 Todas as amostras deram resultados positivos para CT em todos os momentos Os dois conjuntos de amostras em UTM foram tamb m testados ap s 116 dias de armazenamento a 20 C e a 70 C Todas as amostras deram resultados positivos para CT em ambas as condi es de armazenamento B Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Os dados que sustentam as condi es recomendadas de envio e armazenamento de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram gerados a partir de amostras negativas processadas e n o processadas de l quido citol gico Quanto s amostras n o processadas
133. trato urobilinog nio pH 4 cido pH 9 alcalino leuc citos 1 x 10 c lulas mL restos celulares vitaminas minerais paracetamol cido acetilsalic lico e ibuprofeno Todos foram testados quanto a uma potencial interfer ncia no ensaio na aus ncia e na presenca de CT a um equivalente de rRNA estimado em a 1 c lula ensaio 5 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Nenhuma interfer ncia foi observada com nenhuma das subst ncias testadas Nao foram observados inibidores da amplificac o no ensaio APTIMA CT Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 502184PT Rev D Desempenho analitico nos Sistemas DTS Recuperacao Adicionou se Escherichia coli Gardnerella vaginalis Lactobacillus acidophilus Bacteroides ureolyticus e Staphylococcus epidermidis 1 x 10 c lulas ensaio a amostras contendo rRNA equivalente a aproximadamente uma IFU de CT 5 fg Estas adi es n o interferiram na amplifica o e detec o de rRNA de CT pelo ensaio APTIMA CT Estudos de Estabilidade de Esp cime A Esfrega os e esp cimes de urina Os dados que sustentam as condi es recomendadas de envio e armazenamento de esfregacos endocervicais uretrais e vaginais foram gerados a partir de amostras de esfregacos negativos agrupados As amostras agrupadas foram misturadas com CT a uma concentra o final de aproximadamente 1 IFU por reac o As amos
134. u um resultado inicial equ voco no Sistema TIGRIS DTS este esp cime voltou a ser testado mas como o esp cime tinha ultrapassado o prazo de validade o resultado final foi equ voco A Tabela 12 mostra as concord ncias positivas negativas e globais para todos os resultados emparelhados para cada tipo de esp cime por estado sintom tico Os esp cimes s o relativamente desequilibrados quanto ao estado sintom tico e assintom tico mas as concord ncias globais para os participantes sintom ticos foram de 98 5 131 133 para os esfrega os femininos esfrega os endocervicais e vaginais combinados 100 60 60 para os esfrega os uretrais masculinos 98 2 55 56 para os esp cimes de urina feminina 100 60 60 para os esp cimes de urina masculina e 100 81 81 para os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Relativamente aos participantes assintomaticos Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 64 502184PT Rev D Concordancia dos esp cimes clinicos no Sistema TIGRIS DTS as concord ncias globais foram de 100 para 72 esfrega os femininos 60 esfrega os uretrais masculinos 42 esp cimes de urina feminina 55 esp cimes de urina masculina e 35 esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt respectivamente Quanto a Todos os participantes sintom ticos e assintom ticos combinados a concord ncia global foi de 99 0 203 205 para os esfrega os femininos esfrega os endocervicais e vaginais combinados 100
135. ua a 62 C 1 C para HPA Se o banho de calor seco v rtex SB100 estiver a ser utilizado consulte a SB100 Dry Heat Bath Vortexer Application Sheet Ficha de aplicac o do Banho de calor seco v rtex SB100 SB100 Application Sheet Ficha de aplica o do SB 100 2 Antes do in cio do ensaio limpe as superf cies de trabalho e pipetas com soluc o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies e pipetas durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os testes ser o realizados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico 3 Coloque um n mero suficiente de Dez Cassetes de Pontas no Sistema de Captura de Alvo TCS Assegure se de que o frasco de lavagem do TCS esteja cheio com a Solu o de Lavagem APTIMA e que o distribuidor de aspirado esteja conectado bomba de v cuo Consulte o Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo Ensaio APTIMA Chlamydia trachomatis 13 502184PT Rev D Sistemas DTS B Reconstituic o de Reagentes Nota A reconstituic o dos reagentes deve ser feita antes de se iniciar a transfer ncia de esp cimes 1 Para reconstituir os reagentes de amplificagao CT enzimatico e de sonda CT combine os frascos do reagente liofilizado com a solugao de

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