Hoefer SE600/SE660
Contents
1. 5 S 4 9 o 2 E 5 6 7 0 10 20 30 40 50 60 configurac o da fonte de alimentac o W Exemplo Executar parametros 200 V 0 05 A 50 mA 1 Calcule W se sua fonte de alimentac o n o exibir o poder diretamente W VxA 10 W 200 V x 0 05 A 2 Interpolar o n mero de graus para subtrair a partir da temperatura de funcionamento desejado 10 W intersecta o gr fico menos cerca de 1 C Se a temperatura desejada de 23 C definir o banho a 23 1 22 C Se a temperatura desejada de 4 C definir o banhoa4 1 3 C Fig 9 Tamponar os n veis de c mara Volumes aproximados necess rio SE600 4 5 liters SE660 7 0 liters e Baixa tens o executado e Os sistemas que utilizam o mesmo tamp o em ambas as c maras superior e inferior N veis de buffer superior e inferior da c mara s o iguais Volumes aproximados necess rio SE600 4 0 liters SE660 6 0 liters e A alta tens o executado e Focaliza o isoel ctrica e Os sistemas que utilizam diferentes tamp es nas c maras superior e inferior O n vel de tamp o deve cobrir a maior parte do sandu che de gel para permitir a dissipac o de calor mas deve permitir que pelo menos 2 cm abaixo da depurac o da c mara tamp o superior n vel L superior tamp o Uy ere camara HO 1 l ov m2. buraco cam p s nivela dores 4 exc ntrico instalar cume acabar buraco cam C e pll e pl2 Os geles de acrilamida O Preparar a solu o de mon mero e derramar o gel Preparar a quantidade necess ria de solu o de mon mero Deaerate e adicionar o iniciador e catalisador imediatamente antes de verter o gel Pipetar a solu o em um canto do sandu che tomando cuidado para n o introduzir bolhas de ar Ver abaixo para o n vel da solu o apropriada de acordo com a aplica o No gel de empilhamento sistema cont nuo Encha solu o at um pouco abaixo do topo da aresta da placa superior Se as bolhas est o presos retire com uma pipeta ou seringa Introduzir um pente com uma ligeira inclina o em cada sandu che tomando cuidado para n o prender as bolhas de ar sob os dentes Sandu che de tr s andares Pipetar a solu o em ambos os sandu ches enchendo cada um para o mesmo n vel abaixo da extremidade marcada Stacking gel Encha solu o de 3 4 cm abaixo da parte superior da placa de vidro Esta altura permite 1 cm de empil hamento de gel abaixo da po os Despeje o gel e aplicar uma sobreposi o ver passo 2 Depois de o gel definida preparar o gel de empilhamento como descrito abaixo 2 D de electroforese sistema de prote na descont nuo Encha solu o de mon mero a cerca de 1 cm abaixo do topo da placa de vidro para permitir 4 5 mm para a tira de IPG ou gel tubo e um
3. lo Para melhores resultados tomar cuidado extra para alinhar todos os componentes ao montar sandu ches A Tabela 1 resume gel de fundi o de op es SE600 Ambos os g is pr moldados e auto moldadas g is podem ser utilizados Para auto cast g is v rios kits podem ser encomendados separadamente o SE615 Kit Caster m ltipla Gel comporta at 10 sandu ches o SE675 Kit Caster Gel tem capacidade para at quatro sandu ches Consulte o manual do usu rio que acompanha gel caster para obter instru es completas SE660 Os g is de 24 cm necess rios para a SE660 deve ser auto cast O Caster Gel Dual inclu do tem dois sandu ches de gel sandu che bordas superior e inferior deve estar alinhada com os sulcos guia de fixa o bar de press o Fig 2 Montagem do sandu che Inspecionar placas de vidro para nicks Use apenas placas unchipped para evitar fugas Dica Use o berco elenco para segurar o sandu che durante o alinhamento Remova a junta laminada a partir do berco e em vez de definir o sandu che de p sobre uma superf cie plana coloque o no berco de fundi o Tabela 1 Op es de fundi o Gel modelo n mero tamanho de g is dispon veis de geles gelde placa e rod zios SE600 1 4 18x 16cm Dupla Gel Caster Caster Kit Gel Kit Caster m ltipla Gel G is comercialmente dispon veis SE660 1 4 18 x 24 cm Dois acess rios placas divis rias entalhadas s o
4. Cet instrument est con u pour l usage de laboratoire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont approuv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entretenir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationalement reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre sa place avant connecter l alimentation mene une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par l exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l lexchanger de chaleur a un robinet d eau ou la source d agent de refroidissement o la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organique dans n importe quelle partie de instrument Les dissolvants organiques causeront des dommages irr parables l unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications techniques La surchauffe causera des dommages irr parables a l unit Wichtige Informationen German Wenn diese Ausr stung gewisserma en nicht angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausr stung zur Verf gung gestellte Schutz verschlechtert werden D
5. cionado a gua substituir com estoque fresco Aumentar TEMED ou concentra o APS ou ambos pH Solu es com valores extremos de pH cido especialmente n o pode polimerizar oxig nio Remover o oxig nio a partir do ambiente de gel Degas a solu o de mon mero min 5 10 antes de verter e depois sobrepor a superf cie do gel com gua saturada de n butanol temperatura Ajustar a temperatura da solu o de gel para um m nimo de 20 C especialmente para g is de baixa T e p27 problema Vazamentos de c mara superior de buffer Fonte de alimenta c o detecta vaza mento de corrente Dye curvas da frente para cima risos nas bordas Estrias prote na verticalmente Extraordinaria mente lento de execu o ou r pido causa poss vel Mis alinhados partes rem dio Verifique se as placas de vidro espa adores e grampos est o alinhadas e se encaixam perfeitamente na veda o da c mara superior Verificar que ambas as juntas s o centradas e que as cristas de posicionamento encaixar no interior das ranhuras Componentes sujos ou danificados Trajet ria el trica ao solo fora Terra Distribui o desigual de calor Verifique se a veda o n o est danificado ou comprimido Troque se necess rio Verificar que a c mara de tamp o superior n o deformado a uma exposi o anterior ao calor excessivo Adicionar mais graxa de silicone para selar grommets d
6. a forma de l quido entra na sandu che mantendo a ponta na superf cie do gel Preparar g is mais como requerido O Sobrepor cada gel com uma fina camada de gua butanol saturado gua ou tamp o de gel dilu do para evitar a exposi o ao oxig nio de gel Lentamente fornecer a solu o de sobreposi o de uma seringa de vidro equipada com uma agulha de calibre 22 Aplicar a solu o de perto o espa ador menos um lado da sandu che e permitir que ele flui atrav s da superf cie nu o Permitir gue os g is para polimerizar durante um m nimo de 1 h Ap s a polimerizac o deitar fora a sobreposic o e lavar a superf cie do gel v rias vezes com gua destilada e p15 i O Nota com Coomassie Blue possivel detectar 1 ug de proteina em uma Unica banda Com as manchas de prata mais sensiveis poss vel detectar t o pouco como 10 ng de prote na e p16 Preparar a solu o de mon mero de empilhamento de gel derrame o gel de empilhamento e introduzir um pente com uma ligeira inclinac o no sandu che tomando cuidado para n o prender o ar sob os dentes Permitir um m nimo de 1 h para o gel para polimerizar Preparac o de amostras e Carregando A amostra pode ser carregado guer enguanto a sandu che no refinado ou ap s a c mara tamp o superior est ligado Ouando colocar as amostras ao usar placas divis rias as amostras devem ser carregados sem a c mara de amortecim
7. de amortecimento superior manter pelo menos 2 cm de folga e N o encha a c mara superior ou inferior acima dos n veis recomendados ilustrados na Fig 8 Remover tamp o em contato com as mensagens de eletrodos e Despeje lentamente tamp o e longe das ranhuras na c mara de amortecimento superior para evitar a perturba o das amostras e Use apenas gua ou 50 50 glicol gua etileno como refrigerante Nunca use um anticongelante comercial ou qualquer mistura base de lcool ou dano irrepar vel para o trocador de calor ir resultar e N o ligue o permutador de calor para uma torneira de gua ou qualquer outra fonte onde a press o da gua n o regulamentada Nota Todas as unidades da s rie SE600 usa 18 cm de largura placas A espessura gel determina a sec o transversal e exig ncia atual para constantes corridas atuais O comprimento da placa determina o tempo de execuc o Tabela 3 Laemmli sistema tamp o de partida directrizes do ponto espessura gel 1 5 mm Gelo atual 25 mA corrente constante A partir de tens o 80 90 V tens o final 220 250 V G is mais grossos ou mais finos exigem proporcionalmente mais ou menos corrente Por exemplo um gel de 0 75 mm que metade da espessura de um gel de 1 5 mm requer a metade da quantidade de corrente ou 12 5 mA TA corrente deve ser multiplicada pelo n mero de geles Por exemplo se dois sandu ches s o instalados os quatr
8. en kraft tillg ng V nder sig alla kraft tillg ng kontroller av och kopplar bort kraften blyen f re flytta s kerheten locket Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom v rmen exchanger i s utrustad fall Inte kopplar v rmen exchanger till en vatten kran eller n got kylmedel k lla d r vattnet trycket r unregulated Inf r aldrig kylv tska eller n got organiska l sningsmedel in i n gon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anv nd inte med buffert temperaturer ver det h gsta angivna tekniska specifikationerna verhettning skulle orsaka irreparabla skador p enheten e pvi Portugu s English French German Italian Spanish IM 134 D IM 1 1 Res duos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEE Este s mbolo indica que os res duos de equipamentos el ctricos e electr nicos n o devem ser eliminados como res duos urbanos indiferenciados e devem ser recolhidos separadamente Entre em contato com um representante autorizado do fabricante para obter informa es sobre o desmantelamento do seu equipamento This symbol indicates that the waste of electrical and electronic equipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning the decommissioning of your equipment Ce symbol
9. longo dos lados do sandu che Aperte um parafuso em cada pinca defina a sandu che na vertical sobre uma superf cie plana e afrouxar o parafuso para alinhar a pilha Tome muito cuidado no alinhamento para garantir uma vedac o Aperte todos os parafusos Remova o espacador Mate Sandu ches longos requerem conjuntos de dois grampos de cada lado Quando da montagem 24 sandu ches cm alinhar cada extremidade separadamente Isto alinhar uma extremidade o dedo a apertar os parafusos rode o sandu che 180 e alinhar a outra extremidade Em cada caso permitir que o grampo de deslizar para baixo e alinhar perfeitamente com a borda ou inferior topo das placas de vidro Sandu che de tr s andares A 16 ou 24 cm de comprimento placa entalhada divisor de centro comprada separadamente pares de dois sandu ches para dobrar o n mero de g is que podem ser expressos e executar Montar um sandu che da mesma maneira como um sandu che regular excepto antes de colocar a placa de vidro de topo colocar a placa divisora e um segundo conjunto de espa adores na pilha Coloque o entalhe de modo que ele ir estar no topo dos g is essencial que os espa adores e placas de alinhar perfeitamente a fim de criar um selo Para 24 cm placas longas posicionar o grampo de 8 cm ao longo do lado na parte inferior da sandu che mais afastado do entalhe o Remover o sandu che e inspeccionar o fundo para se certificar de gue as ares
10. nucleico sob comumente usado desnatura o e n o desnaturante condi es At 28 amostras podem ser comparados num gel nica laje As aplica es incluem separa es de prote nas do fraccionamento de cido nucleico ea separa o dimens o de segundo de electroforese 2 D Separa o primeira dimens o de 2 D electroforese prote na deve ser executada em g is de gradiente de pH imobilizadas As tiras s o focados facilmente transferido para o gel de dimens o segundo laje para a separa o de tamanho Todas as placas de gel s o de 18 cm de largura Tabela 1 na p gina 9 listas ambos os modelos e do comprimento da placa correspondente gel 16 ou 24 cm At quatro g is pode ser executado de uma s vez se sandu ches s o emparelhadas em sandu ches O trocador de calor permite o controle do buffer de temperatura na c mara baixa Especificac es Gel tamanho da placa SE600 18 x 16 cm SE660 18 x 24 cm Gel tamanho SE600 14 ou 16 x 16 cm 16 cm com 1 cm de largura espacadores 14 cm com 2 cm de largura espacadores Gel tamanho SE660 14 ou 16 x 24 cm 16 cm com 1 cm de largura espacadores 14 cm com 2 cm de largura espacadores Pot ncia m xima 50 W Tens o m xima 1000 V Amperagem m xima 500 mA Temperatura m xima 45 C As condic es ambientais de operac o Uso interno 4 40 C Humidade at 80 Altitude de at 2000 m Categoria Instala o II Grau de polui o II D
11. o de c mara final n o mostrado deve ser vertical de modo gue a montagem se encaixa dentro da c mara inferior tamp o e pl8 Montagem Final C mara tamp o superior O Enxaguar as duas c maras tamp o com gua e gua destilada completamente antes de cada utiliza o Nota Antes de utilizar a primeira vez desmontar a unidade e lava se com uma solu o dilu da de um detergente de laborat rio e enxaguar primeiro com gua e depois com gua destilada Limpar quaisquer gel aderir ao exterior das sandu ches de gel a Se voc estiver executando apenas um gel Bloquear o slot segunda c mara superior de buffer atrav s da instalac o da barragem tamp o de acr lico inclu do com a unidade Coloque grampos para a barragem tendo o cuidado de alinhar os fins de fixac o e as bordas da represa Instale os fict cios gel parafusos para fora no berco em segundo lugar no rod zio gel dual Anexar o sandu che de gel para a c mara de tamp o superior Vire a c mara de amortecimento superior de cabeca para baixo e cologue uma junta encaixada ambos os recessos titular sandu che Tanto o slot na junta e no slot no recesso deve alinhar Ambas as juntas de fenda deve ser usado mesmo se estiver rodando apenas sandu che de gel um Grooves ao longo de cada slot de ajudar a manter a junta no lugar Al m disso uma peguena guantidade de Seal gel pode ser aplicado em cada extremidade da junta de
12. obrigados a executar 2 g is extra Lan a at 4 g is Lan a at 10 g is Rod zio Gel Dupla Construa o sandu che de gel e inserir em rod zio Prepare o rod zio e grampos Coloque o n vel de lcool no centro de rod zio e ajuste os p s niveladores Solte todos os parafusos de fixac o e abrir espaco para o sandu che deslizando as placas de press o para os parafusos a Construir sandu ches gel Para cada sandu che escolher dois perfeitamente limpas placas de vidro unchipped e dois espacadores Lay uma placa sobre uma superf cie plana estabelecem o modelo de alinhamento Espacador Mate sobre a placa lado de largura na parte superior da placa colocar um espacador ao longo de cada aresta e colocar a placa de vidro segundo no topo Fig 3 N mero necess rio de bracadeiras tamanho 8 cm 16 cm SE600 2 SE660 2 2 o jo o o o o o o o jo o o o o ol lo o o O o o o o o o o o o o ol 16 cm 24 cm SE600 SE660 Fig 4 Montagem sandu che Club Bra adeiras laterais ir acomodar dois espa adores at 1 5 mm de espessura placas de vidro nos lados exteriores da sandu che placa espa adores central dentada Nota N o utilize graxa de silicone ou vaselina para selar o sandu che Estas subst ncias s o dif ceis de remover e finalmente causar artefactos e plo Fixe o sandu che com grampos Deslizar uma bracadeira de cada vez ao
13. organische oplosmiddelen in deel van het instrument voor Organische oplosmiddelen zullen onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische specificaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not specified by Hoefer Inc the protection provided by the equipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating maintaining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrument Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not operate with buffer temperatures above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the
14. para proteger qualquer sandu che de comprimento Um par adicional de 8 cm grampos s o necess rias para assegurar 24 cm sandu ches A barra de press o da bracadeira ajustado com parafusos distribui a press o uniformemente Fundic o estande O estande de fundic o tem sandu ches gel montadas na posic o vertical para a fundic o g is P s ajust veis nivelar o rod zio Uma junta de laminado no fundo de cada ber o veda es de fundi o na parte inferior da sandu che quando fixada no suporte C maras C maras s o usados duas vezes primeiro para fixar a sandu che montado no suporte de fundi o e em segundo lugar para fixar a sandu che para a c mara de tamp o superior Juntas de borracha H dois conjuntos de duas juntas As juntas de veda o s lido laminado se encaixam na parte inferior da pe a fundida de p e formar o selo para o vazamento do gel As juntas de veda o de fenda caber sob a c mara tamp o superior e formar a veda o entre as c maras superior e inferior As cristas sobre a junta de veda o superior alinhar a ranhura de veda o para manter um canal aberto entre o topo do gel e do tamp o na c mara superior Espacadores Espacadores determinar a espessura do gel e est o dispon veis em tr s espessuras 0 75 1 0 e 1 5 mm e duas larguras 1 e 2 cm Pode ser encomendado em separado Espacador Mate modelo de alinhamento Este modelo se alinha espa adores durante
15. r og deler godkjente eller forsynte ved Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og betjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent pr ver laboratorium Sikkerheten lokket m v re p plass f r forbinding kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene f r fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i s fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kj lemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk l semiddel inn i noe del av instrumentet Organiske l semiddler vil for rsake irreparabel skade p enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner overoppheting vil for rsake irreparabel skade p enheten Wazne Informacje Polish Je eli ten sprz t jest wykorzystywany w spos b nie okre lone przez Hoefer Inc do ochrony przewidzianej przez urz dzenie mo e zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do u ytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i cz ci zatwierdzone lub dostarczone przez Hoefer Inc mog by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obs ugi tego produktu korzysta jedynie z
16. soluc o de mon mero Executar um comprimento de tubagem de vinilo clara atrav s de uma bomba perist ltica Anexar uma extremidade do tubo para a porta de sa da gradiente fabricante ea outra extremidade a uma c nula de 20 cm A OD da c nula deve ser menor do que a espessura do espacador Coloque a c nula de modo que assenta na parte inferior da sandu che a meio caminho entre os espacadores Opcional Ajustar a solug o de acrilamida percentagem mais elevada para 15 w v de sacarose ou de 25 v v de glicerol para melhorar camadas Preparar a solu o de mon mero Calcular o volume de soluc o de mon mero necess rio Dividir o volume total em meia e preparar este volume de ambas as solu es de maior e menor percentagem de acrilamida o Despeje a soluc o light para a c mara de reservat rio c mara mais afastada da sa da Abrir a torneira entre as c maras tempo suficiente para deslocar o ar e feche Despeje a soluc o pesado na c mara de mistura e cologue uma barra de agitac o para essa c mara Cologue o fabricante de gradiente para um agitador magn tico e comecar a agitac o a uma taxa gue se mistura bem mas n o introduz bolhas na soluc o Misturar o gradiente e bombear a soluc o para o sandu che Enquanto a soluc o de agitac o comecar a bombear a partir da c mara de mistura e abrir a torneira de passagem para a c mara de reservat rio Elevar a c nula
17. unit T rke Tietoa Finnish Jos tata varusteita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehk isty varusteille saattaa olla avuton T m v line suunnitellaan sis laboratoriok yt lle vain Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen laboratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan k ytt j nnitteeseen Kiert kaikki k ytt j nnitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun l mm nvaihtimen piii l pi Ala yhdist limm nvaihdinta vesinapautukseen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesipaine on unregulated Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill t smennyksill Ylikuumeneminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Information Importante French Si cet quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la protection fourni par l quipement pourrait tre diminu e
18. vedac o antes de instalar para ajudar a segurar a junta de vedac o contra a c mara tamp o superior Solte os sandu ches do rod zio removendo todas as cams de fundo se houver Abaixe a c mara de amortecimento superior para os sandu ches de gel no estande casting Instale o cames cume apontando para baixo para o buffer de buracos c mara de cames Prenda o sandu che no lugar em simult neo transformando uma c mara no sentido hor rio eo outro anti hor rio a 180 Completo Nota N o force os exc ntricos Se voc encontrar resist ncia incomum desmonte e inspecione grampo e alinhamento de vidro na parte superior do sandu che Alinhe e reinstale Nota se a opc o de arrefecimento frequentemente utilizado conveniente para anexar conectores QuickFit a tubagem As v lvulas nestes acess rios evitar o derramamento do l quido refrigerante o Usar uma pipeta para encher cuidadosamente cada ranhura acima dos pocos de amostra com tamp o para minimizar perturbar as amostras Em seguida despeje 100 ml de tamp o para a c mara dirigindo o fluxo de tamp o em direc o a parede lateral Verifique se h vazamentos de tamp o em torno da junta C mara inferior tamp o Coloque um bar spin magn tico na c mara menor buffer LBC e coloque a unidade sobre um agitador magn tico Encher a c mara inferior com at 4 litros de tamp o a Abaixe o trocador de calor para a c mara baixa ajustando as po
19. Handbook 80 6013 88 Hoefer Inc 2001 N o desnaturantes sistemas de gel Reisfeld R A et al Acidic buffer system for resolution of cationic proteins Nature 195 281 1962 McLellan T Electrophoresis buffers for polyacrylamide gels at various pH values Anal Biochem 126 94 1982 Hedrick J L and Smith A J Size and charge isomer separation and estimation of molecular weights of proteins by discontinuous gel electrophoresis Arch Biochem Biophys 126 155 1968 Desnaturac o sistemas de gel Laemmli U K Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T Nature 227 680 685 1970 Matsudaira P T and Burgess D R SDS microslab linear gradient polyacrylamide gel electrophoresis Anal Biochem 87 386 396 1978 Schreier M H Erni B and Staehelin T Initiation of mammalian protein synthesis I Purification and characterization of seven initiation factors J Mol Biol Nov 116 4 727 753 1977 e p31 e p32 Shapiro A L and Maizel J V Jr Molecular weight estimation of polypeptides by SDS polyacrylamide gel electrophoresis further data concerning resolving power and general considerations Anal Biochem Jun 29 3 505 514 1969 Schaegger H and Von Jagow G Tricine sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa Anal Biochem 166 368 379 1987 Weber
20. K and Osborn M The reliability of molecular weight determinators by dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis J Biol Chem 224 4406 4412 1969 Electroforese bidimensional Adams L D and Gallagher S R Two Dimensional Gel Electrophoresis Using the O Farrell System Current Protocols in Molecular Biology Ausubel E A et al eds OSC pp 10 4 1 10 4 13 1992 Anderson N G Anderson N L and Tollaksen S L Proteins of human urine I Concentration and analysis by two dimensional electrophoresis Clin Chem Jul 25 7 1199 2210 1979 Anderson Leigh and Anderson Norman G High resolution two dimensional electrophoresis of human plasma proteins Proc Natl Acad Sci USA 74 5421 5425 1977 Anderson L Two Dimensional Electrophoresis Operation of the ISO DALT System Second Edition Large Scale Biology Press 1991 Bravo R Schafer R Willecke K MacDonald Bravo H Fey S J and Celis J E More than one third of the discernible mouse polypeptides are not expressed in a Chinese hamster mouse embryo fibroblast hybrid that retains all mouse chromosomes Proc Natl Acad Sci USA Apr 79 7 2281 2285 1982 Hurkman W J and Tanaka C K Solubilization of Plant Membrane Proteins for Analysis by Two Dimensional Gel Electrophoresis Plant Physiology 81 802 806 1986 Mets L J and Bogorad L Two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis an improved method
21. Qu do su rio Portugu s Hoefer SE600 SE660 Padr o duplo Unidades Eletroforese Gel refrigerac o mu SE600 IM Portuguese Rev C0 06 12 H O e fe r Conte dos Informa es Im portantes ii Res duos de Equipamentos El ctricos e Electr nicos REEB vii Gel de eletroforese Fun o e Descri o 1 ESpeCitiCa ES zwisa A to 2 Desembalar e Invent rto 4 Instru es de opera o AA 8 Prepare o sandu che de gel 8 Os geles de acrilamida ee 12 G is de gradiente eee 14 Prepara o de amostras e Carregando 16 Montagem Final een 18 Separar a amoslira een 23 Cuidados e Manuten o ee 26 Solu o de problemas ssa aaa AAA EA AAAA 27 Bibliografiari srona ennan Ea EEEIEE 31 Informa es sobre pedidos seeererrrreeeeennen 34 O pi Informac es Importantes Portugu s Se este equipamento usado numa maneira n o especificada por Hoefer Inc que a protec o fornecida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc pode ser usada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguran a registrada por um nacionalmente reconhecido testando laborat rio A tampa de seguran a deve estar em lugar antes d
22. SE6003U Grampo assembl ias 8 cm SE6403U Placas de vidro 18 x 16cm Placas de vidro SE6102 Placas de vidro de baixa fluoresc ncia SE6102LF Placa de vidro divisor de sandu che entalhado SE6102D 18 x 24 cm Placas de vidro 2 SE6602 Placa de vidro divisor de sandu che entalhado SE6602D escolher o espagador eo comprimento da placa para a sua unidade grampo universal SE6003U rod zio b sico SE6015 exc ntrico e SE6005L e p37 Pente n mero espessura largura de pocos mm mm quantidade c digo 10 0 75 8 3 SE511 10 75 10 1 00 8 3 SE511 10 1 0 10 1 50 8 3 SE511 10 1 5 12 0 75 7 6 SE511 12 75 12 1 00 76 SE511 12 1 0 12 1 50 7 6 SE511 12 1 5 15 0 75 5 7 SE511 15 75 15 1 00 5 7 SE511 15 1 0 15 1 50 5 SE511 15 1 5 20 0 75 4 1 SE511 20 75 20 1 00 4 1 SE511 20 1 0 20 1 50 4 1 SE511 20 1 5 28 0 75 2 7 SE511 28 75 28 1 00 2 7 SE511 28 1 0 28 1 50 2 1 SE511 28 1 5 Pente profundidade de 15 mm todos os outros 25 mm Preparativa pentes Estes pentes s o de 25 mm de profundidade ajust vel a 10 ou 15 mm n mero de po os espessura largura mm prep ref mm prep ref quantidade c digo 1 1 0 75 121 6 SE511 R 75 1 1 1 00 121 6 SE511 R 1 0 1 1 1 50 121 6 SE511 R 1 5 1 2 0 75 113 6 SE511 DR 75 1 2 1 00 113 6 SE511 DR 1 0 1 2 1 50 113 6 SE511 DR 1 5 Volta pente ajust vel SE511 BKA Necess ria para conver
23. a montagem do sandu che Combs Combs est o dispon veis em tamanhos que formam 10 12 15 20 ou 28 pocos Preparativo pentes incluir um ou dois po os de refer ncia em adic o a um poco preparativa A maioria pentes est o dispon veis em todas as tr s espessuras 0 75 1 0 e 1 5 mm Pode ser encomendado em separado Todos os pentes preparativa ea 10 12 15 e 20 bem po os forma pentes isto 25 mm de profundidade Os 28 pocos bem pente formas que s o apenas 15 mm de profundidade para que os pocos n o desmoronar quando o pente removido O volume de amostra realizada por cada poco depende da espessura do gel bem profundidade e do n mero de pocos por pente A Tabela 2 lista volumes de amostras de cada poco para todos os pentes Maravilha Wedge Gel ferramenta Separac o Placa Esta ferramenta usada para desmontar sandu ches gel e verificar espa ador e pente espessuras Instruc es de operac o Procedimentos de fundic o e eletroforese em gel seguir Assembl ia de ambos os modelos id ntico Incluem se as instru es para g is de poliacrilamida usado com sistemas tamp o cont nuas ou descont nuas e g is de gradiente Consulte a p gina 31 para a Bibliografia Prepare o sandu che de gel Placas de vidro espa adores e conjuntos de fixa o s o dimensionados de modo que o sandu che montados podem ser facilmente alinhadas para criar o selo exigido primeiro a lan ar o gel e depois execut
24. asilacza e jest nosz ce oznakowanie CE lub bezpiecze stwa uwierzytelnione przez uznane na poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpiecze stwo lid musi by w miejsce przed pod czeniem zasilania prowadzi do zasilania Za wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kraza tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organicznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki pv Informaci n Importante Spanish Si este equipo es utilizado en una manera no especificado por Hoefer Inc la protecci n proporcionado por el equipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior del laboratorio s lo S lo accesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguridad certificada por un na
25. cionalmente reconocido probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar antes de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desconecta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del l quido refrigerante donde la presi n del agua est libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente org nico en cualquier parte del instrumento Los solventes org nicos causar n da o irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del m ximo especific especificaciones t cnicas Recalentar causar da o irreparable a la unidad Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillhandah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaboratorium anv ndning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller levererade vid Hoefer Inc kan anv ndas f r fungera underh lla och servicing denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen fore koppla kraften tillg ngen blyen till
26. d ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemiddelkilde hvor vandtrykket er unregulated Introducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk oplosningsmiddel ind i nogen del af instrumentet O pii Organiske opl sningsmidler vil for rsage uboelig skade til enheden Driver ikke med st dpudetemperaturer over maksimummet specificerede tekniske specifications Overheding vil for rsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleenglycol door de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar een waterkraan of koelmiddelbron niet waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of
27. de bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda ethylenglykolu prost ednictv m v m n k tepla je li to vybavena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak vody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifikacemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specificeret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan m ske svaekkes Dette instrument er designet for indend rs laboratoriumbrug bare Bare tilbehor og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan m ske bruges for drive funktionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en str mforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedl get m v re p plads for forbinding stramforsyningsblyet til en str mforsyning Drejer alle stramforsyningskontroller af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedl get Cirkulerer bare vand eller 50 50 vand ethylene glykol gennem varmeveksleren i s fald udrustet Forbin
28. e trocadores de calor Verifique se h vazamentos ou rachaduras no trocador de calor Substitua grommets desgastadas Encha a c mara baixa do buffer para o n vel apropriado para a corrida nas bordas Veja a Fig 8 p gina 20 Use agitador magn tico e barra de agita o para manter tamp o bem misturado O calor excessivo Part culas em Circular ext refrigerante Diminua a configura o da corrente ou tens o Prechill o buffer Execute o gel na sala fria Centrifugar ou amostra do filtro antes de carregar para amostra remover part culas sobrecarga Carregar menos amostra degrada o Adicionar inibidor de protease tais como PMSF Fuga de corrente em torno de gel Verifique se h vazamentos todas as placas e os espa adores devem estar alinhados e livre de gorduras e rachaduras Se utilizada a barragem de buffer deve ser seguro Amostra ou prepara o de reagentes Se o pH requerido de uma solu o ultrapassado n o volta titula Descarte e preparar uma solu o tamp o nova Verificar receitas as concentra es de gel e tamp o de dilu i o Por exemplo n o utilize Tris HCI em vez de Tris para Laemmli tanque tamp o Diminuir a concentra o de sal de amostras qualidade do reagente Descarte de solu es mais velhos de acrilamida e usar o estoque s da mais alta qualidade Utilize apenas ur ia rec m deionizada As configura es de tens o ou corren
29. e indique que les d chets relatifs l quipement lectrique et lectronique ne doivent pas tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsichtlich der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Questo simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparecchiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalit di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante Este s mbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener m s informaci n sobre la forma de desechar el equipo e pvii Gel de eletroforese Func o e Descric o Os Hoefer SE600 s rie vertical de unidades de electroforese em gel de laje s o destinados para a prote na e electroforese de cido
30. e ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguran a Circulam s gua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instrumento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade N o opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especificac es t cnicas Superaquecer causar agress o irrepar vel unidade Dule it Informace Czech Pokud by toto za zen je pou ito zp sobem kter nen podle Hoefer Inc ochrana poskytovan na z klad za zen m e b t naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskytnut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid musi b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj nap jen vede k Turn ve ker nap jen kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie ve
31. enor T m n vel de o o buffer de o o c mara o o O o Cologue a montagem da c mara superior do buffer para a c mara inferior buffer Use uma m o firme para evitar a perturbac o das amostras Segure o conjunto no suporte de fundic o pela c mara de amortecimento superior e cuidadosamente cologue a c mara inferior o Inspecione a instalac o e verificar os n veis de buffer C mara de amortecimento superior UBC O eletrodo ao longo do cume c mara superior deve ser submersa a cerca de 1 cm Este n vel reguer 450 600 ml de tamp o apenas o suficiente para cobrir as costelas C mara Alta mas n o alto o suficiente para entrar em contato o plug banana N o encha acima UBC linha de enchimento MAX C mara inferior tamp o LBC O n vel mais baixo de tamp o depende condi es de funcionamento e do sistema tamp o tal como descrito na Fig 9 Coloque a tampa de seguranca na unidade O Ligue os fios codificados por cores para as tomadas de uma fonte de alimenta o aprovado Ligue o fio vermelho no vermelho tomada de sa da e o cabo preto na tomada de sa da de preto Na maioria dos sistemas de chumbo vermelho o qual ligado ao el ctrodo de fundo o nodo ea ponta de preto ligado ao el ctrodo de topo o c todo e p21 e p22 Notas importantes montagem e IEF Funciona O n vel de tamp o na c mara inferior tamp o nunca devem chegar a c mara
32. ento superior no lugar A quantidade de amostra carregada depende da espessura do gel a sensibilidade do m todo de detecc o utilizado ea quantidade de amostra esperado em cada banda Em um sistema tamp o cont nuo a amostra de prote na deve ser relativamente concentrado porque nenhum gel de empilhamento usado Em um sistema de tamp o descont nuo a zona em que cada esp cie molecular migra afiada pelo gel de empilhamento de modo a amostra n o necessita de ser t o concentrada O Preparar a po os Retire o pente o suavemente para que lado a lado e em seguida levantando o para evitar danificar as paredes tamb m Cuidadosamente enxaguar cada po o com gua destilada para remover acrilamida n o polimerizada e depois escoar por sandu che invertendo o gel ou rod zio Encher cada po o com tamp o de electroforese i Y Nota Uma vez que as amostras est o dentro dos pocos tome cuidado para n o ranger os sandu ches de modo que as amostras n o s o derramados ou misturado Preparar a amostra Aumentar a densidade da amostra l quida com 10 de glicerol ou sacarose Adicionar um corante de rastreio tais como vermelho de fenol azul de bromofenol ou Y pironina Para g is de SDS de prote nas usar tamp o tratamento 2X para desnaturar ambas as amostras de l quido e seco num tubo de ensaio Para solu es de prote na l quidos adicionar um volume igual de tamp o de 2X Para secar amo
33. for ribosomal proteins Anal Biochem Jan 57 1 200 210 1974 O Farrell P H High resolution two dimensional electrophoresis of proteins J Biol Chem May 25 250 10 4007 4021 1975 Bjellqvist B et al Isoelectric focusing in immobilized pH gradients principle methodology and some applications J Biochem Biophys Methods 6 317 339 1982 Gorg A et al The current state of two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients Electrophoresis 9 531 546 1988 G rg A Two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients current state Biochem Soc Trans 21 130 132 1993 Bjellqvist B et al Micropreparative two dimensional electrophoresis allowing the separation of samples containing milligram amounts of proteins Electrophoresis 14 1375 1378 1993 Blomberg A et al Interlaboratory reproducibility of yeast protein patterns analyzed by immobilized pH gradient two dimensional gel electrophoresis Electrophoresis 16 1935 1945 1995 e p33 Informa es sobre pedidos produto quantidade c digo para 18 x 16 cm de gel SE600 Unidade de refrigerac o dual Vertical de base 1 SE600 Inclui 3 conjuntos de placas de vidro quatro conjuntos de bracadeira 16 cm 6 cames gel duplo langando suporte com base de nivelamento e o n vel da barragem buffer modelo de alinhamento Spacer Mate e Wonder Wedge ferramenta separa as placas Ordem 2 pen
34. icado ou irregular Polimerizac o incompleta gel causa poss vel Componentes sujos ou danificados rem dio Placas Espacadores e da junta deve estar completamente limpa Lavar se necess rio Substituir placas fritas especialmente se endireitada perto dos espacadores Verifigue a junta rod zio de cortes ou fendas e substituir se necess rio Mis alinhados partes Verifigue o alinhamento Placa e espacador realinhar se necess rio Ao longo de aperto As bolhas de ar Ligue came apenas na medida do necess rio para criar uma veda o geralmente 90 150 mas at 180 Em cada espa ador aplicar uma fina camada de gel com posto de veda o para a parte inferior para fora canto s N o use graxa de silicone Remova as bolhas de ar antes de inserir pentes Deslize pente em solu o em ngulo Se pente deve ser removida adicione mais solu o de mon mero antes de reinserir o pente Polimeriza o incom pleta ou retardada Permitir g is de acrilamida a ser definido para um m nimo de 1h Escombros em po os Enxaguar a gel n o polimerizada com tamp o de amostra remo o comb Chemicals Remover o pente com uma ligeira inclina o e muito devagar para evitar danificar o gel G is de agarose Abaixe o pente n o mais do que 1 cm para o gel Use apenas a es recentes dos reagentes mais alta qualidade Se o persulfato de am nio seco n o crepita o quando adi
35. ieses Instrument wird f r den Innenlaborgebrauch nur daf r entworfen Nur Zus tze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer Inc kann f r das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produktes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein f hrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen f hrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers Athylens durch den W rmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder K hlmittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische L sungsmittel in jeden Teil des Instrumentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen Uber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funktionieren Die berhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Informazioni Importanti Italian Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere indeb
36. imens es SE600 LxA xP 32x 29x 14 cm SE660 32 x 37 x 14 cm Certifica es de produtos EN 61010 1 UL 61010A 1 CSA C22 2 1010 1 Certificado pela CE Esta declarac o de conformidade v lida apenas para o instrumento quando ele e utilizado em locais de laborat rio e usado como entregues a partir de Hoefer Inc exceto para altera es descritas no manual do usu rio e e ligado a outros CE rotulados instrumentos ou produtos recomendados ou aprovados por Hoefer Inc Fig 1 Componentes principais da s rie SE600 ver Fig 5 para os componentes de rod zio Inclu dos mas n o apresentados e composto Selo Gel 1 4 oz e modelo de alinhamento Spacer Mate e placas de vidro 6 e Maravilha Wedge ferramenta de separa o placa e barragem de buffer Unidade completa tamb m inclui espa adores 4 e pentes 2 Obrigat rio mas n o inclu das e Agitador magn tico e Fonte de alimenta o com uma classifica o m nima de 300 V 100 mA constante A ou V Opcional Circulador banho Nota A se o de ordena o lista todos os acess rios e pe as de reposi o codificados por cores leads 2 tampa de seguran a c mara tamp o superior com el ctrodo superior trocador de calor com eletrodo inferior c mara inferior L tamp o Nota Antes de utilizar a primeira vez desmontar a unidade e lava se com uma soluc o dilu da de um de
37. nana a Se refrigerante est circulando interromper o fluxo e desconectar os acess rios ou tubula es Retire o conjunto c mara superior buffer Despeje o buffer em uma pia Instale o conjunto do rod zio gel dupla e em seguida solte os sandu ches por virar e tirar os exc ntricos o Desapertar as bracadeiras dos sandu ches e remover Com cuidado solte e deslize afastado ambos espacadores Utilizar a Hoefer Maravilha Wedge Gel ferramenta de separac o da placa para separar as placas Cuidadosamente levantar a placa de vidro com o gel em anexo Lidar com o gel com cuidado para evitar danific lo Inverta a placa e posic o do gel baixo sobre a bandeja de colorac o Pry um canto do gel de dist ncia a partir do vidro e permitir gue ele caia no tabuleiro ou se o gel suficientemente espessa para manusear levant la e coloc lo dentro da bandeja Para evitar salpicos adicionar colorac o ou soluc o fixadora para a bandeja ap s o gel transferido O Limpar a unidade tal como descrito na sec o seguinte e p25 e N o autoclave ou aquecer qualquer parte acima de 45 C e N o use solventes org nicos abrasivos solu es de limpeza fortes ou cidos fortes ou bases fortes para limpar as c maras e N o molhe a junta laminada Nota Se o tubo antigo est rachado ou quebrado proteger sua m o com luvas grossas um peda o de pano ou toalhas de papel antes de re
38. nferior 4 SE6060 6 Plug Banana ouro com 2 arruelas 1 SE6067 Tubo de vidro com 2 grommets 1 SE6160 5 para trocador de calor montagem eletrodo inferior N vel de bolha 1 SER11 Gel Seal 1 4 oz tubo 1 SE6070 tampa de seguranca com cabos SE6056 c mara tamp o superior SE6054 trocador de calor SE6160 modelo reordenar SE600 SE6150 SE660 SE6650 e p35 produto quantidade c digo Rodinhas de gel Para 1 ou 2 g is Rod zio Gel Dupla basic 2 gels 18 cm wide ab SE6015 Inclui 2 juntas em branco para 1 ou 2 g is Um incluidos com cada unidade SE600 Para at 4 g is Kit Caster Gel 4 gels 18 x 16 cm 1 SE675 Inclui 8 placas de vidro 3 espaco saver chapas 5 folhas de preenchimento 100 folhas de papel de cera espa ador Mate modelo de alinhamento e tamp es de enchimento Ordem pentes e espa adores separadamente Para at 10 g is Kit Caster m ltipla Gel 10 gels 18 x 16 cm 1 SE615 Inclui 20 placas de vidro o espa o saver placa 5 folhas de preenchimento 100 folhas de papel modelo de cera de alinhamento Spacer Mate e as fichas de preenchimento Ordem pentes e espacadores separadamente e p36 produto quantidade c digo Grampos e cames Grampo e Cames Kit quatro grampos 16 cm e 8 cames negros 1 SE6003UK Parafusos de reposic o para grampos 12 SE6003U 2 C maras preto para grampos com buracos cam SE6005L Grampo assembl ias 16 cm
39. o SE600 temos executar g is de at 12 5 V cm Refrigerac o necess ria a este n vel de tens o Registre cada corrida Manter um registo da corrente ou tens o configurac o o n mero ea espessura do gel sistema tamp o e as leituras de in cio e no final de corrente ou tens o para cada percurso de modo que os resultados podem ser comparados Os resultados inconsistentes para o mesmo sistema e configura es indicam poss veis problemas como vazamento de corrente as concentra es de buffer incorretos elevadas concentra es de sal ou de qualidade qu mica inconsistente Verificar o progresso banda ap s 5 min e novamente ap s 1 h mantendo um olho sobre a taxa de migra o do corante de seguimento A execu o est completa quando o corante de rastreio atinge o fundo do gel Ver o n vel de tamp o e se necess rio reabastecer o como necess rio para manter o el ctrodo superior submersa Um pequeno volume de tamp o pode vazar passado uma placa cortado ou junta ou tamp o pode passar atrav s do gel Nota Use somente pl sticos flex veis ferramentas curiosos para evitar lascar as placas de vidro Ap s a electroforese Uma vez que o corante de rastreio atinge o fundo do gel desligar a fonte de alimentac o desligar os fios e remover a tampa de seguranca usando alavanca dedo entre a tampa ea parte superior do permutador de calor Levante se em linha reta para evitar entortar as fichas de ba
40. o g is requer quatro vezes mais do que atual A corrente pode ser aumentada para corre mais r pido se arrefecimento activo utilizado e que pode ser diminu da para mais lentas corridas durante a noite Em 25 mA por gel Separar a amostra Par metros de electroforese para g is de poliacrilamida descont nuos G is pode ser executado em ambas corrente constante ou constante configura es de tens o Um modo de corrente constante tradicionalmente utilizado com um sistema de tamp o descont nuo de modo que a taxa de migrac o electrofor tica permanece inalterado durante a execu o Sob essas condi es tens o aumenta medida que as receitas administradas A menor configura o atual recomendado para maior resolu o O n vel ptimo de corrente deve ser determinada empiricamente os factores principais que deve ser equilibrado incluem a concentra o do gel e da velocidade de migra o e do aquecimento Joule resultante e distor o da banda Tabela 2 listas de ponto de partida as orienta es e ajustes de espessura de gel o n mero de g is e taxa de migra o Atual Actos correntes sobre a rea de sec o transversal total de todos os g is porque os g is s o ligados em paralelo o circuito el ctrico Assim a configura o de corrente para um gel deve ser multiplicada pelo n mero de geles da execu o sec o transversal simultaneamente Para um mil metro de espessura 1 5 gel sugerimos
41. olita Questo strumento disegnato per l uso di laboratorio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approvato o O piv hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazionalmente riconosciuto testando il laboratorio II coperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore e disinserisce i piombi di potere prima di togliere il coperchio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cosi eguipaggiato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acgua o gualungue fonte di refrigerante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento solventi organici causeranno il danno irreparabile all unit Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causer il danno irreparabile all unit Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utstyret blir brukt i en m te ikke spesifisert ved Hoefer Inc beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innend rs laboratoriumbruk bare Bare tilbeh
42. r totalmente A prepara o das amostras Armazenar amostra em gelo antes que seja desnaturado Dialisar ou dessalinizar a amostra As amostras de calor em tamp o de amostra SDS para n o mais do que 1 2 min a 100 C para melhorar a dissocia o das subunidades Armazenar em gelo ap s o aquecimento Ajustar o volume da amostra ou concentra o Adicione mais mercaptoetanol ou ditiotreitol verificar o tratamento da amostra Adicionar os inibidores de protease tais como PMSF se necess rio para evitar a degrada o proteol tica da amostra Aumento de glicerol ou sacarose para aumentar a densidade da amostra Armazenar as amostras a serem congelados em al quotas para evitar repetidos de congelamento descongelamento Conservar a 40 a 80 C Bibliografia Geral Gallagher S R and Smith J A Electrophoretic separation of proteins In Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A eds OSC 10 2 1 10 2 21 1991 Hames B D and Rickwood D Gel Electrophoresis of Proteins A Practical Approach Second edition City IRL Press 1990 Sambrook J and Russell D W Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor NY 2001 Sasse J and Gallagher S R Staining proteins in gels Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A et al eds OSC 10 6 1 10 6 8 1991 SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Isoelectric Focusing
43. requer um gradi ente de concentra o de acrilamida para resolver a gama de tamanhos de prote na Despeje um alto gel de empilhamento Para melhores resultados permitir uma altura de empilhamento de gel de 2 5 vezes a altura da amostra no po o qualidade do reagente Descarte de solu es de acrilamida desatualizados e utilizar apenas o mais alto grau de acrilamida A prepara o das amostras Ao preparar as amostras evitar o uso de solu es com altas concentra es de sal e p29 problema Resoluc o banda pobre Poor band resolution e p30 causa poss vel condi es de funcionamento rem dio Comece electroforese logo que a amostra carregada para evitar esp cies de baixo peso molecular a partir de difus o Realizar a separac o em uma configurac o mais baixa de corrente ou tens o para reduzir o aquecimento Joule qualidade do Utilize apenas os reagentes mais alta qualidade reagente pobre de Use g is apenas que foram recentemente preparado empilhamento Adicionar um gel de empilhamento ou aumentar a altura do gel de empilhamento Preparar a superf cie Resolving gel por primeira lavagem com empilhamento de gel de mon mero antes de vazar o gel de empilhamento para assegurar a con tinuidade entre os g is Verificar valores de pH das resolver e empilhamento de gel de solu es N o titular back buffers Polimeriza o incompleta gel Permitir gel para polimeriza
44. rt vel ou Pasteur a um n vel de cerca de 2 mm a partir do topo da placa o Introduzir um pente com uma ligeira inclinac o no sandu che tomando cuidado para n o prender o ar sob os dentes Permitir um m nimo de 1 h para o gel para polimerizar e pl3 Fig 6 Derramando um gel de gradiente Uma ponta de pipeta pode ser utilizado em vez de uma c nula se a soluc o de gel entregue a uma taxa que mant m um fluxo cont nuo sobre a superf cie do vidro Nota g is de gradiente vertida na Caster Gel SE615 ou SE675 m ltipla s o introduzidos atrav s do fundo Nota Quando vertendo uma exponencial em gel com gradiente de posic o um mbolo ou buj o de vedac o acima do l quido na c mara de mistura para manter o volume constante e pl4 G is de gradiente Ambos g is de gradiente linear e exponencial pode ser vertido no refinado dual gel Recomendamos usar um Hoefer SG Criador Gradiente Series G is de gradiente s o derramadas a partir do topo do rod zio com uma c nula de se utilizar o rod zio desde dual gel ou a partir do fundo se usando um Hoefer Caster Gel m ltipla ver instru es que acompanham o rod zio Um gel de empilhamento ent o vertida sobre o gel de gradiente O O o o oO O Verter um gel de gradiente linear O Montar sandu che es para os rod zios dual gel como descrito na p gina 9 e Configure o caminho do fluxo da
45. rtas para os entalhes na borda O trocador de calor deve estar no local para todas as corridas porque o eletrodo inferior integrado ao trocador de calor Se n o houver refrigerac o necess ria pule para o passo 3 Opcional Ligue o permutador de calor para um circulador termost tica Deslizantes bracadeiras de mangueira quatro total em cada extremidade de dois comprimentos de 10 12 mm ID Tubo de vinil ou de silicone Anexar uma extremidade de cada extens o de tubagem a uma porta permutador de calor Anexar as extremidades livres de cada comprimento de tubagem para as portas de banho circulador uma para a entrada ea outro para a sa da Fixe as conex es com as abra adeiras Use o gr fico Fig 8 na p gina 20 para estimar um ponto de partida para o ajuste de temperatura de circula o de banho Ajustar conforme necess rio para as vari veis tais como a temperatura ambiente as mudan as na sa da de pot ncia e efici ncia banho circulador Se o controlo preciso da temperatura cr tica medir a temperatura e ajustar conforme necess rio Opcional buffer do Prechill e pl9 Fig 8 Aproximado circulador de ajuste de temperatura do banho Definir a temperatura do banho de circulac o de fixac o inferior a temperatura de funcionamento desejada pelo valor indicado no gr fico Isto deve ser verificado em tr s pontos e p20 0 1 gt s 2 8 o g 3
46. selo de agarose Um gel de empilhamento ir requerer espa o extra Selar a tira IPG ou gel tubo no lugar com agarose dissolvida em tamp o de corrida Tome cuidado para evitar prender as bolhas de ar entre os g is de primeira e segunda dimens o i Y Sobrepor cada gel com uma fina camada de gua butanol saturado gua ou tamp o de gel dilu do para evitar a exposi o ao oxig nio de gel Lentamente fornecer a soluc o de sobreposic o de uma seringa de vidro equipada com uma agulha de calibre 22 Aplicar a soluc o de perto o espacador menos um lado da sandu che e permitir que ele flui atrav s da superf cie nu Permitir gue o gel para polimerizar durante um m nimo de 1 h Empilhamento preparac o de gel Verter o gel de empilhamento enguanto a sandu che ainda no rod zio de gel Stacking gel resoluc o tima quando derramou um pouco antes de eletroforese o Remover a sobreposic o por lavagem da superf cie do gel por v rias vezes com gua destilada Inverter o rod zio para drenar Para garantir um contato cont nuo entre a resolver e empilhamento g is remover o l guido residual borrando um canto com um laborat rio de limpar Calcular o empilhamento de gel de volume de soluc o de mon mero O Preparar a solu o de mon mero de empilhamento gel deaerate lo e adicionar catalisador e iniciador Verter o gel de empilhamento sobre o gel de resolu o com uma pipeta desca
47. so pois abriga o eletrodo inferior nodo que corre ao longo da parte inferior da moldura Quando ligado a um banho de circulador o permutador de calor regula a temperatura de tamp o na c mara inferior Refrigerante passa atrav s dos tubos de vidro que s o protegidos com ilh s de borracha de silicone Os trocadores de calor portas de conex o s o 13 mm de di metro externo O permutador de calor avaliado para um m ximo de 0 8 atmosferas acima da temperatura ambiente 12 psig Ligue apenas a fontes de refrigera o com press o regulada N o ligue torneira de gua Tampa de seguran a O plug banana no trocador de calor se conecta o fio vermelho ea ficha na c mara de amortecimento superior se conecta o cabo preto A 4 mm envolta com c digo de cores ficha leva em c digo de cores tomadas no fornecimento de energia Envolver se pinos de travamento antes de baixar conex es de eletrodos para plugues banana Sempre instale a tampa de seguran a antes de usar Placas de vidro Todas as placas s o de 18 cm de largura mas cada modelo acomoda um comprimento da placa espec fica O SE600 leva 16 cm placas e leva o SE660 24 cm placas Tr s conjuntos de placas de vidro s o inclu das com cada unidade Placas entalhadas divisor encomendados separadamente sandu ches par duas gel para formar um sandu che para que at quatro g is pode ser executado de uma s vez Grampos Dois 16 cm pincas s o usadas
48. stras de prote na adicionar volumes iguais de tamp o de amostra 2X e elevado grau de pureza de gua para atingir a concentrac o desejada Aguecer o tubo em gua a ferver durante 90 segundos em seguida deixa se arrefecer at temperatura ambiente As amostras tratadas podem ser armazenadas a 40 a 80 C para execu es futuras Prote nas de membrana de calor a 60 C durante 20 minutos Armazenar amostra utilizada a 4 C o Subjacente amostra nas cavidades utilizando uma micro seringa de ponta fina ou gel carregamento ponta da pipeta Tabela 2 Volume de amostra para tamanhos padr o pente volume da amostra ul por 1 mm de profundidade n mero de espessura pente mm pogos 0 75 1 0 15 10 6 2 8 3 12 4 12 5 8 7 7 11 5 15 4 3 5 7 8 6 20 3 1 4 1 6 2 28 21 2 7 41 1 1 ref prep 4 90 6 121 9183 1 2 ref prep 4 85 6 112 9171 e p17 Fig 7 Colocar sandu ches de gel para a c mara de tamp o superior Se os vazamentos de montagem lev lo para uma pia e parcialmente liberar as c maras para permitir tamp o a escorrer para fora da c mara superior Desmontar verificar o alinhamento de todos os componentes do sandu che e ajustar se necess rio A Remova cames pelos buracos inferiores cam Coloque a c mara superior para os sandu ches e depois inserir os exc ntricos nos orif cios exc ntricos superiores cume ponta curta apontando para baixo B A posic
49. tas s o alinhados descarga a fim de assegurar uma vedac o completa Ajuste se necess rio Opcional Aplique uma fina camada de gel composto Seal apenas nas superf cies canto inferior criadas pelos espacadores e placas se seus sandu ches continuam a vazar depois de v rias tentativas de alinhamento a y Coloque a junta laminado para dentro do suporte de fundic o Ver Fig 5 com o lado de espuma para baixo Coloque o conjunto de grampo no berco de fundic o o parafuso do lado voltado para fora Para 24 cm placas coloque o sandu che de modo que o grampo mais no topo O Nota Quando ligar as c maras mais f cil manter o rod zio Inserir uma c mara dentro do furo em cada lado do equilibrada se voc ligar tanto tabuleiro de fundi o com o rebordo extremidade em dire o ao centro da roda curta a apontar para cima Selar a sandu che de gel contra a junta de fundi o rodando ambos os exc ntricos como medida do necess rio geralmente 90 a 150 at 180 A ac o de c mara pressionam as placas para baixo para a junta e para selar a parte inferior da sandu che O selo completar uma vez que a borda de vidro parece mais escuro e quase transparente contra a junta N o desligue a c mara para al m deste ponto Fig 5 Caster componentes e montagem placa de vidro espa ador buraco cam gaxeta lado espuma bra adeira para baixo E 5 buraco cam bercos de fundic o 2
50. te Para aumentar ou diminuir a taxa de migra o ajustar o Tens o ou corrente por 25 50 e p28 problema Bandas s o enviesadas ou distorcidas Corada coleta Perto da frente tamp o causa poss vel Preparac o de gel incompleta e polimerizac o rem dio Desgaseificar a soluc o de empilhamento gel e evitar bolhas de sob os dentes do pente Interface irregular entre o empilhamento e executando os g is Sobrepor o gel rodando com gua saturada de butanol antes da polimerizac o comeca para evitar a formac o de uma superf cie do gel desigual A preparac o das amostras concentrac o do gel degrada o Dialisar ou dessalinizar a amostra Mol culas n o s o suficientemente limitada pelo tamanho resolver gel de poro aumentar a T As prote nas podem ser degradados por proteases end genas usar os inibidores da protease durante o passo de isolamento Perto do topo do gel quando a frente de tamp o atingiu o fundo concentra o do gel precipita o O tamanho de poro de gel muito pequeno diminuir o T do gel Resolving ou empilhamento A prote na precipitada Aquecer a amostra a uma tempera tura inferior 70 C ou menos para 1 2 min Tanto a parte superior e inferior do gel Controlar corante n o afiar para uma zona concentrada no gel de empilhamento concentra o do gel pobre de empilhamento O intervalo de peso molecular da amostra
51. ter qualquer pente 25 mm de profundidade para 10 ou 15 mm de profundidade e p38 Espacadores espessura mm comprimento cm largura cm quantidade c digo 1 00 16 1 2 SE6118 2 1 0 1 50 16 1 2 SE6118 2 1 5 0 75 16 2 2 SE6119 2 75 1 00 16 2 2 SE6119 2 1 0 1 50 16 2 2 SE6119 2 1 5 0 75 24 2 2 SE6619 2 75 1 00 24 2 2 SE6619 2 1 0 1 50 24 2 2 SE6619 2 1 5 Produtos associados Hoefer SE 100 lavagem mate Plate e unidade de armazenamento 1 SE100 QuickFit conectores f mea 3 8 2 QF3 8 QuickFit conectores macho 3 8 2 QFX3 8 e p39 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Toll Free 1 800 227 4750 Telefone 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail support hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer uma marca registrada da Hoefer Inc Coomassie uma marca comercial da ICI plc O 2012 Hoefer Inc Todos os direitos reservados Impresso nos EUA Hoefer
52. tergente de laborat rio e enxaguar primeiro com gua e depois com gua destilada Desembalar e Invent rio Desembrulhe com cuidado todos os pacotes e comparar o conte do com a lista de embalagem certificando se todos os itens chegaram Se qualquer parte estiver faltando entre em contato com seu escrit rio de vendas local Inspecione todos os componentes de danos que possam ter ocorrido quando o aparelho estava em tr nsito Se qualquer parte estiver danificado contate imediatamente a transportadora Certifique se de manter todo o material de embalagem para pedidos de indemnizac o ou de usar caso seja necess rio para devolver a unidade C mara inferior tamp o A c mara inferior tamp o transparente o que permite um controle visual de processo electroforese A c mara quimicamente resistente comuns buffers electrofor ticos mas n o a solventes org nicos ou de cidos fortes ou alcalinos Temperaturas acima de 45 C pode causar a c mara a entortar C mara tamp o superior A c mara de tamp o superior quimicamente resistente a buffers de electroforese comuns mas n o a solventes org nicos ou de cidos fortes ou alcalinos O eletrodo superior c todo corre ao longo da crista centro e termina na ficha banana A c mara superior requer 0 5 0 8 litros de tamp o encher n o acima da parte superior das nervuras de pl stico Trocador de calor O trocador de calor deve ser instalado para cada u
53. tes e 2 s ries de 16 cm espacadores separadamente SE600 Unidade de refrigerac o dual Vertical completa 1 SE600 15 1 5 Inclui unidade b sica mais dois 15 bem pentes e 2 espacadores de 1 5 mm de espessura para 18 x 24 cm de gel SE660 Unidade de refrigerac o dual Vertical de base 1 SE660 Inclui 3 conjuntos de placas de vidro quatro 16 cm e quatro conjuntos de 8 cm de fixac o 6 cames gel duplo lancando suporte com base de nivelamento e o n vel da barragem buffer modelo de alinhamento Spacer Mate e Wonder Wedge ferramenta separa as placas Ordem 2 pentes e 2 s ries de 24 cm espa adores separadamente SE660 Unidade de refrigerac o dual Vertical completa 1 SE660 15 1 5 Inclui unidade b sica mais dois 15 bem pentes e 2 espacadores de 1 5 mm de espessura As pecas de reposic o Gel Wonder Wedge ferramenta de separac o placa 1 SE1514 Juntas de silicone de borracha de fenda para c mara de amortecimento superior 2 SE6008B Juntas de silicone de borracha laminada para fundi o estande 2 SE6009 Barragem tamp o 1 SE6032 C mara de amortecimento superior para SE600 SE660 1 SE6054 Tampa com alta tens o leva para SE600 SE660 1 SE6056 De alta tens o conjunto de chumbo seguranca 1 SE6056 HV C mara inferior buffer para SE600 1 SE6150 Permutador de calor para SE600 SE660 1 SE6160 e p34 produto quantidade c digo C mara inferior buffer para SE660 1 SE6650 Grommets para trocador de calor montagem eletrodo i
54. tirar o tubo p26 Cuidados e Manuten o Limpeza Imediatamente depois de cada utiliza o lavar as c maras tamp o superior e inferior com gua e em seguida enxaguar com gua destilada Lidar com a c mara de amortecimento superior com cuidado para evitar danificar o plug banana Limpe as juntas com detergente neutro e enxaguar com gua destilada Deixa se secar ao ar Limpar placas de vidro e espa adores com uma solu o dilu da de um limpador de laborat rio tais como o RBS 35 em seguida enxaguar com torneira e gua destilada Placas de vidro tamb m pode ser tratada com mas n o s o armazenados em solu es de limpeza cidas Substitui o de um trocador de calor tubo de vidro o Remover o tubo por simultaneamente torc o e deslizando a para baixo tanto quanto poss vel at que a extremidade superior est livre da anilha superior Passe cuidadosamente o tubo de modo que ele ir limpar a montagem em seguida levante o tubo para fora da parte inferior do anel a Unte o exterior de ambas as extremidades do tubo novo com gordura de silicone Torcer e corredica uma extremidade do tubo para o mais baixo ilh Em seguida deslize a outra extremidade o anel superior gentilmente empurrando a com uma leve tor o at que ele pare Verifigue se o anel n o beliscado Soluc o de problemas problema Gel vazamen tos sandu che enquanto fundic o Exemplo pocos danif
55. uma defini o corrente de partida de 25 ma Dois 1 5 g is mm 50 mA Nota O arrefecimento pode ser necess rio para controlar o aquecimento Joule Tens o A tens o de partida para um gel de 1 5 mil metros laje ligado a uma fonte de alimenta o definido como 25 mA geralmente de 80 a 90 V usando o SE600 com um sistema tamp o Laemmli descont nuo para SDS g is A tens o final tipicamente 250 400 V dependendo do comprimento do gel Ver Tabela 3 e p23 Cuidado Ap s monitorizac o inicial n o deixe o aparelho sem vigil ncia por mais de 1 h antes de verificar o andamento das bandas e do n vel de buffer e p24 Tempo Uma execu o est completa quando o corante de rastreio atinge o fundo do gel Em um 16 cm gel SE600 um 1 5 mm de espessura Laemmli SDS em gel executar a 25 mA gel sem arrefecimento geralmente requer 5 horas G is mais longas exigem tempo proporcionalmente mais separa es em 24 cm g is SE660 exigem 8 horas Par metros de electroforese para o DNA acrilamida g is G is de DNA s o geralmente executados em um ambiente de tens o constante e desde sistemas tamp o s o cont nuas ambas as leituras de corrente e tens o permanece constante durante toda a execu o Condi es de funcionamento s o expressos em unidades de V cm Publicado condi es de funcionamento variar amplamente mas tens es na gama de 1 a 3 V cm s o comuns para corridas durante a noite N
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