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MANUALE DI SICUREZZA NEI LABORATORI

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1. Errori nell utilizzo Incidenti con centrifughe Esplosioni in incubatori per anaerobi Errori nel bilanciamento dei cestelli che provoca vibrazioni Uso di gas errati e formare e sorvegliare gli operatori e formare e sorvegliare gli operatori Utilizzo non adatto Esplosione di normale vetreria Esplosioni in frigoriferi di tipo domestico Trasporto improprio di azoto liquido Sostanze chimiche pericolose non stoccate in contenitori sigillati di sicurezza a prova di scintilla esplosione es dietiletere con tappi a vite non a tenuta e adoperare attrezzature progettate specificamente e stoccare solventi bassobollenti o eseguire estrazioni solo in refrigeratori a prova di esplosione o sotto cappa Mancanza di idonea manutenzione Incendi in fotometri a fiamma Riassemblaggio scorretto durante la manutenzione e formare e sorvegliare gli operatori 136 Allegato 5 Sostanze Chimiche rischi e precauzioni In questo allegato sono indicati rischi per la salute e la sicurezza e le precauzioni per minimiz zarli relativamente alle sostanze chimiche pi comunemente usate nei laboratori ospedalieri e di ricerca L elenco delle sostanze non esaustivo e l assenza in tale elenco di qualche sostanza non significa che quest ultima non sia pericolosa Tutte le sostanze usate in laboratorio dovrebbero es sere trattate con precauzione ed in modo da ridurre al minimo l esposizione ad esse 137 sel
2. Cappe di sicurezza biologica sopra i polsini del camice e non sotto Sovramaniche elasticizzate possono essere indossate per proteggere il polsi dei ricercatori Maschere e occhiali sono necessari per alcune procedure Allarmi Le BSCs possono essere dotate di uno o due tipi di allarme L allarme per l apertura del vetro si trova solo nelle cappe munite di vetro scorrevole L allarme indica che l operatore ha mosso il ve tro in una posizione scorretta L azione correttiva per questo tipo di allarme riposizionare il ve tro nella corretta posizione L allarme per il flusso d aria indica una perturbazione dello stesso al l interno della cappa Questo rappresenta un immediato danno per l operatore e per il prodotto Quando suona l allarme del flusso d aria il lavoro deve essere interrotto immediatamente e noti ficato al responsabile del laboratorio Il manuale d istruzione del fabbricante contiene ulteriori dettagli La formazione all uso corretto delle cappe dovrebbe ricoprire questi aspetti Ulteriori informazioni Scegliere il tipo adeguato di cappa di sicurezza biologica installarla usarla correttamente fare la manutenzione annuale sono processi complessi fortemente raccomandato di procedere sotto la supervisione di un professionista ben informato e con buona esperienza di Biosicurezza Il pro fessionista deve avere una buona conoscenza della letteratura a riguardo riportata in bibliogra fia e deve essere stato formato su
3. Non soffiare mai aria attraverso un liquido contenente agenti infettivi Non mescolare i materiali infettivi alternando con la pipetta suzione ed espulsione Non espellere in maniera forzata i liquidi dalle pipette Preferire le pipette volumetriche a due tacche che non richiedono l espulsione dell ultima goccia Immergere completamente le pipette contaminate nel disinfettante adatto posto in un con tenitore infrangibile Lasciarle nel disinfettante per il tempo appropriato prima di sottopor le alle procedure successive Mettere il contenitore per le pipette da eliminare all interno della cappa di sicurezza biologi ca e non fuori di essa Per aspirare non usare siringhe con aghi ipodermici Con flaconi a tappo perforabile usare adatti dispositivi di apertura per evitare l uso di aghi e siringhe e permettere l utilizzo di pipette Per evitare la dispersione di materiale infettivo che pu cadere da una pipetta coprire la su perficie di lavoro con materiale assorbente da eliminare come rifiuto infettivo dopo l uso Evitare la dispersione di materiale infettivo 1 W 5 Per evitare lo spargimento fortuito del loro carico le anse per il trasferimento di materiale mi crobiologico devono essere completamente chiuse avere un diametro di 2 3 mm e lo stelo non pi lungo di 6 cm per minimizzare le vibrazioni Evitare il rischio di proiezione di materiale infettivo connesso all uso della fiamma libera del b
4. Per una discussione dettagliata sulla valutazione del rischio relativamente ai microrganismi geneticamente modificati si rimanda al capitolo 16 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 3 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 Lo scopo di questo manuale le istruzioni e le raccomandazioni indicate come requisiti minimi per i laboratori di qualsiasi livello di Biosicurezza sono dirette alle lavorazioni con tutti i micror ganismi gruppo 1 4 Nonostante alcune precauzioni possano apparire superflue per alcuni mi crorganismi del gruppo di rischio 1 la loro applicazione comunque indicata nell addestramen to del personale al fine di promuovere la buona cio sicura e valida dal punto di vista qualita tivo e scientifico pratica microbiologica Good Microbiological Techniques GMT Tutti i laboratori devono essere predisposti al livello di Biosicurezza 2 o superiore Dal momen to che nessun laboratorio pu avere il controllo totale sui campioni che riceve il personale di la boratorio pu trovarsi esposto a microrganismi appartenenti ad un gruppo di rischio superiore a quello previsto Questa possibilit deve essere considerata quando si mettono a punto piani e politiche di sicurezza In alcuni Paesi necessario l accreditamento dei laboratori clinici In ge nerale si dovrebbero sempre adottare e mettere in pratica le Precauzioni Standard 2 Le Linee guida per i laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1
5. Cristalli o polvere bianca igroscopica Corrosivo per gli occhi pelle vie respiratorie inducendo mal di gola tosse sensazione di bruciore mancanza di respiro ustioni della pelle dolore vesciche bruciature degli occhi Linalazione pu causare edema polmonare L ingestione pu causare crampi addominali sensazione di bruciore diarrea mal di gola vomito Non combustibile ma accelera la combustione di altre sostanze Diverse reazioni possono causare fuoco o esplosione Esposto al fuoco libera fumi o gas irritanti o tossici Lavorare con la protezione di una aspirazione localizzata Indossare guanti e indumenti protettivi visiere protettive o protezione degli occhi in combinazione con protezione delle vie respiratorie La soluzione in acqua fortemente acida reagisce violentemente con le basi ed corrosivo Reagisce violentemente con acido perclorico producendo fuoco e pericolo di esplosione Reagisce violentemente con acqua formando acido fosforico Attacca in presenza di acqua diversi metalli IST Potassio Fiocchi polvere gocce Corrosivo per il sistema In caso di contatto con gli occhi Reagisce violentemente con Attacca in idrossido o bastoncini bianchi respiratorio gli occhi e sciacquare immediatamente con acidi e con nitrobenzenee vari presenza di KOH la pelle l inalazione acqua e consultare un medico in altri detergenti Sviluppa grande umidit alcuni della polvere c
6. aria provenienti dalle finestre e dall impianto di aerazione vedere capitolo 10 L aria proveniente dalle cappe di sicurezza biologica Classe I o Classe II vedere capitolo 10 dopo essere passata attraverso i filtri HEPA deve essere scaricata all esterno in modo tale da 21 Manuale di biosicurezza nei laboratori 12 13 14 evitare l interferenza con l equilibrio dell aria nella cappa o con il sistema di ventilazione del l edificio Nel laboratorio di contenimento dovrebbe essere disponibile un autoclave per la decontami nazione dei rifiuti infetti Se questi rifiuti devono essere rimossi dal laboratorio di conteni mento per la decontaminazione e lo smaltimento devono essere trasportati in contenitori si gillati infrangibili e a perfetta tenuta in mdo conforme alle normative nazionali o interna zionali a seconda dei casi La fornitura idrica deve essere dotata di sistemi che impediscono flussi di ritorno Il circuito del vuoto dovrebbe essere protetto con bottiglie per i liquidi in eccesso contenenti disinfet tante e filtri HEPA o loro equivalenti Pompe a vuoto alternative dovrebbero anch esse esse re adeguatamente protette con bottiglie per i liquidi in eccesso e filtri Le procedure operative e la progettazione delle dotazioni del laboratorio di contenimento Livello di Biosicurezza 3 dovrebbero essere documentate Nella Figura 4 illustrato un esempio di progettazione di laboratorio per il Livello di Bios
7. no indurire la gomma e dissolvere certi tipi di colla In laboratorio l accurato inventario ed il cor retto immagazzinamento dell etanolo sono molto importanti al fine di evitarne l uso per scopi di versi dalla disinfezione Le bottiglie con soluzioni contenenti alcol devono essere chiaramente etichettate per evitarne il trattamento in autoclave Iodio e iodofori L azione di questi disinfettanti simile a quella del cloro sebbene essi possano essere legger mente meno inibiti dalla sostanza organica Lo iodio pu macchiare la stoffa e le superfici ed in genere non adatto come disinfettante D altra parte iodofori e tinture di iodio sono buoni anti settici Il povidone iodio affidabile e sicuro come detergente chirurgico e come antisettico preo peratorio per la pelle Gli antisettici a base di iodio in genere non sono adatti per uso su appa recchiature mediche odontoiatriche Non usare iodio su alluminio o rame Lo iodio pu essere tossico I prodotti a base di iodio organico devono essere immagazzinati a 4 10 C per evitare la crescita in essi di batteri potenzialmente dannosi Perossido di idrogeno e peracidi Come il cloro il perossido dell idrogeno H O ed i peracidi sono ossidanti forti e possono esse re potenti germicidi a largo spettro Sono anche pi sicuri del cloro per l uomo e l ambiente Il perossido di idrogeno o fornito pronto all uso come soluzione al 3 o come soluzione ac quosa al 30 da dilui
8. La formazione Un programma di formazione continua sul posto di lavoro in materia di sicurezza essenziale per rendere il personale del laboratorio e gli addetti ai servizi di supporto manutenzione e pu lizie consapevoli dell importanza della sicurezza I responsabili del laboratorio con l aiuto del responsabile del Servizio prevenzione e protezione dei preposti alla Biosicurezza e di altri even tuali collaboratori hanno un ruolo chiave nell addestramento del personale L efficacia della for mazione in materia di Biosicurezza come del resto tutta la formazione relativa alla sicurezza ed alla salute dipende dall impegno dei dirigenti dalle motivazioni dal bagaglio culturale e pro fessionale di base dalla capacit di comunicazione ed infine dagli obiettivi e gli scopi dell orga nizzazione Di seguito vengono elencate le diverse fasi da attuare progressivamente per la realizzazione di un corso di formazione in materia di Biosicurezza 1 valutazione dei bisogni formativi Consiste nell individuazione del personale coinvolto lor dine di priorit in base alla frequenza la permanenza in aree critiche la complessit della mansione ed i livelli dei corsi necessari alla formazione 2 stabilire gli obiettivi della formazione Sono costituiti dai comportamenti adottati sul lavoro dal personale dopo la partecipazione ai corsi di formazione Nei corsi possono essere indivi duate le condizioni in cui certe attivit o atti devon
9. devono essere posizionati verso il fondo del la cappa I materiali ingombranti quali i contenitori per i rifiuti le pipette usate le fiasche devo no essere posizionate su un lato all interno della cappa Un accurata pulizia deve essere effet tuata per decontaminare il piano di lavoro Le sacche e le pipette sterilizzate in autoclave non de vono essere posizionate all esterno della cappa Il continuo movimento dentro fuori necessario per utilizzare questi contenitori altera l integrit del flusso d aria all interno della cappa e pu compromettere sia la protezione personale sia quella del prodotto Uso e manutenzione La maggior parte delle BSCs sono progettate per lavorare 24 h al giorno e le indagini hanno di mostrato che il funzionamento continuo aiuta a controllare i livelli di polvere e di particolato nel laboratorio Le BSCs di Classe IIA1 e AII2 che espellono l aria nella stanza o che sono collegate tramite un manicotto ad un condotto dedicato possono essere spente se non utilizzate Altri tipi quali le IIB1 e IIB2 che sono direttamente collegate devono essere attraversate tutto il tem po da un flusso d aria per bilanciare l aria in entrata Le cappe devono essere accese almeno 5 min prima di iniziare il lavoro e spente 5 min dopo aver completato le operazioni per permettere lo spurgo cio dare il tempo di allontanare l aria contaminata dall ambiente della cappa Tutte le riparazioni effettuate alle BSCs de
10. essere assorbito attraverso la pelle causando redness e sensazione di bruciore L ingestione causa dolori addominali diarrea vomito debolezza Esposizioni ripetute causano danni al fegato e ai reni flashpoint 20 C Limiti di esplosivit 1 8 12 4 Sviluppa nell incendio fumi o gas irritanti o tossici vapori e le miscele sono esplosivi respiratoria indossare guanti e indumenti protettivi CSI Sostanza Propriet fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Propan 2 olo Liquido incolore con Irritazione degli occhie Facilmente Conservare il contenitore ben Pu reagire vigorosamente con 70 85 propan CH CHOH odore alcolico delle vie respiratorie infiammabile chiuso conservare lontano da ossidanti to form perossidi 2 olo in acqua Isopropanolo m p 89 C Pu interessare il flashpoint 112 C sorgenti di calore Lavorare sotto instabili a seguito di prolungata usato come b p 82 C sistema nervoso limiti di infiammabilit cappa chimica Indossare guanti esposizione all aria e alla luce spray miscibile con acqua centrale causando mal 2 3 12 7 in nitrile e protezione degli occhi disinfettante di testa vertigini conserva un nausea vomito e coma pericolo di infiammabilit e non deve essere usato vicino a sorgenti di calore Rame Solido rossastro lucido Linalazione di fumi di Combustibile Operare in ambienti ventilati Con
11. tagli 62 63 74 taglienti 20 32 40 59 63 69 72 124 tallio acetato 155 161 terra guasto interruttori 40 105 122 145 tessuti 17 19 70 71 72 73 74 101 135 141 161 tetraidrofurano 155 tetrametilene ossido 155 toluene 156 transgeniche piante 95 97 transgenici animali 95 96 trasmissibili encefalopatie spongiformi TSEs 73 trasporti internazionali regolamenti 90 trasporto 10 13 20 42 59 67 72 75 90 91 107 122 tricloroacetico acido 147 tricloroetilene 157 tuta protettiva vedi anche tuta da laboratorio tuta da laboratorio 4 22 28 29 30 50 51 56 61 62 udito protezione 40 71 135 157 ultracentrifughe 135 United Nations Committee of Experts on the Trasport of Dangerous Goods UNCETDG 90 vetri 20 61 69 91 102 124 vettori 4 95 96 virali vettori 96 vuoto linee 39 World Health Organization WHO 129 133 159 xilene 157 Finito di stampare nel mese di dicembre 2005 a cura della Global Media System Roma 06 52200552 Migliorare la sicurezza sui luoghi di lavoro deve essere obiettivo centrale in qualunque paese e a maggior ragione in quelli piu industrializzati iniziava cos la prefazione del Prof Luzzatto al Manuale di sicurezza per il personale dei laboratori di ricerca biotecnologica della Comunit Europea e ci sembra il modo migliore per introdurre la versione italiana di questa Ill Edizione del Manuale di Biosicurezza nei Laboratori Un lavoro che h
12. uso di radionuclidi fino a che le tecniche non sono collaudate lavorare con i radionuclidi in modo deliberato e appropriato senza fretta assicurare che tutte le sorgenti radioattive ritornino immediatamente in luogo sicuro dopo l uso allontanare i rifiuti radioattivi dal laboratorio ad intervalli frequenti trascorrere il minor tempo possibile nell area radioattiva o nel laboratorio mettere in pratica una efficace gestione del tempo e progettare le manipolazioni che coin volgono materiale radioattivo in laboratorio Minore il tempo trascorso in una zona radioattiva minore la dose personale ricevuta co me mostrato nella equazione Dose indice di Dose x tempo 2 Distanza L indice di dose per la maggior parte delle radiazioni ye X variano con l inverso del quadrato della distanza dalla fonte Indice di Dose Costante x 1 Distanza Raddoppiando la distanza dalla sorgente di radiazione si ottiene una riduzione ad un quar to dell esposizione nello stesso periodo di tempo Per aumentare la distanza tra operatore e sorgente di radiazioni vengono utilizzati vari accorgimenti e sistemi meccanici come molle con lunghi bracci pinze morsetti e sistemi per il uso delle pipette da lontano Da tener pre sente che un piccolo incremento della distanza pu comportare una diminuzione significa tiva dell indice di dose 106 Ulteriori rischi nei laboratori Schermatura Schermi che assorbono o attenuano l energia delle
13. zioni violente possono essere esercitate se il tappo di cotone molto compresso risultando in un aspirazione di tappo aerosol e finanche liquidi infetti L ingestione di patogeni evitata me diante l utilizzo di materiale ausiliario di uso delle pipette Gli aerosol possono essere generati quando un liquido gocciola da una pipetta su una superficie di lavoro quando culture sono mi scelate dall alternarsi di aspirare e soffiare e quando l ultima goccia spinta fuori dalla pipetta L inalazione di aerosol inevitabilmente generato durante le operazioni di uso delle pipette pu essere evitata lavorando con una cappa di sicurezza biologica Il materiale ausiliario di uso delle pipette deve essere scelto accuratamente Il loro design ed uso non devono creare un rischio infettivo addizionale e dovrebbero essere facili da sterilizzare e pu lire Le pipette ad estremit tappata aerosol resistenti dovrebbero essere utilizzate per manipo lare microrganismi e colture cellulari Pipette con estremit rotta o schiacciata non dovrebbero es sere utilizzate in quanto danneggiano il sigillo del materiale ausiliario di uso delle pipette crean do cos un rischio Omogenizzatori miscelatori ultrasonicatori Gli omogeneizzatori domestici da cucina non sono sigillati e rilasciano aerosol Dovrebbe esse re utilizzato il solo equipaggiamento dedicato per l uso di laboratorio La loro costruzione mini mizza o evita il loro rilascio I miscelator
14. 1 0 g l di cloro libero pu essere appropriata per l igiene generale dell ambiente ma sono raccomandate soluzioni pi concentrate 5 0 g 1 in caso di situazioni ad alto rischio Per la decontaminazione ambientale le soluzioni di perossido di idrogeno H O al 3 possono sostituire validamente le soluzioni di candeggina Stanze ed attrezzature possono essere decontaminate con fumigazioni di formaldeide gassosa prodotta scaldando paraformaldeide o facendo bollire formalina Questo un metodo estrema mente pericoloso che richiede personale specificamente addestrato Tutte le aperture nella stanza finestre porte ecc devono essere sigillate con nastro adesivo o similari prima di generare il gas La fumigazione dovrebbe essere praticata ad una temperatura ambientale di almeno 21 C e con un umidit relativa del 70 vedi anche in questo capitolo la sezione sulla decontaminazione delle cappe di sicurezza biologica Dopo la fumigazione l area deve essere ventilata accurata mente prima che al personale sia permesso di entrare Chiunque debba entrare nella stanza pri ma che sia stata ventilata deve indossare adatti respiratori Per neutralizzare la formaldeide pu essere usato bicarbonato d ammonio gassoso Per spazi pi piccoli anche efficace la fumigazione con vapori di perossido di idrogeno ma pro duzione dei vapori richiede un equipaggiamento specializzato Decontaminazione delle cappe di sicurezza biologica Per decontamin
15. I portalampada all interno dell edificio sono sigillati per evitare esplosioni in caso di accen sione in presenza di vapori I liquidi infiammabili sono immagazzinati in contenitori idonei aerati prodotti con materia li incombustibili Il contenuto di tutti i contenitori correttamente indicato sulle etichette Estintori e o coperte antifiamma posti all esterno sono collocati vicino al magazzino dei li quidi infiammabili All esterno ed all interno del magazzino dei liquidi infiammabili sono visibili i cartelli di Vietato fumare 121 Manuale di biosicurezza nei laboratori 10 11 12 13 Nei locali del laboratorio sono conservati soltanto quantitativi minimi di sostanze infiamma bili Sono conservati all interno di armadi appositamente costruiti per liquidi infiammabili Questi armadi sono adeguatamente contrassegnati da cartelli con la scritta Liquidi infiam mabili pericolo di incendio Il personale stato adeguatamente addestrato all uso e alle modalit di trasporto di liquidi infiammabili Gas compressi e liquefatti 1 NW Ciascun contenitore portatile di gas stato contrassegnato in modo leggibile con il nome del contenuto e il colore di codice Le bombole di gas compresso e le loro valvole di alta pressione e riduzione vengono ispezio nate regolarmente Le valvole di riduzione sono sottoposte a periodica manutenzione Quando una bombola viene utilizzata le viene col
16. I rispettivi criteri di progettazione e funzione di progettazione del sistema dell e dificio stabiliscono tali requisiti In altre parole i laboratori designati come aventi un Livello di Biosicurezza da 1 a 4 avranno requisiti di collaudo diversi e sempre pi complessi Le condizio ni geografiche e climatiche quali faglie geologiche o situazioni di estremo calore freddo o umi dit possono influire sulla progettazione del laboratorio e quindi sui requisiti di collaudo Una volta completato il processo di collaudo le componenti strutturali e i relativi sistemi di suppor to saranno stati sottoposti alle varie condizioni operative e alle modalit di guasto che ci si pu ragionevolmente aspettare e saranno stati approvati Il processo di collaudo e i criteri di accettazione dovrebbero essere stabiliti in anticipo preferi bilmente durante la fase di programmazione del processo di costruzione o rinnovamento Pren dendo atto del processo di collaudo agli inizi del progetto gli architetti gli ingegneri il perso nale addetto alla salute e alla sicurezza e in ultima analisi gli occupanti del laboratorio defini scono i requisiti di valutazione delle prestazioni del laboratorio specifico e stabiliscono delle aspettative uniformi per le prestazioni del laboratorio e o dell installazione Il processo di col laudo offre all istituto e alla comunit circostante un maggior grado di fiducia che i sistemi strut turali elettrici meccanici e idraul
17. Italiana Responsabili Servizi Prevenzione e Protezione in Ambito Sanitario AIRESPSA in collaborazione con l Istituto Superiore per la Sicurezza e la Salute del Lavoro ISPESL Dipartimento Documentazione Informazione e Formazione Dr Dimitri Sossai Presidente AIRESPSA Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione dell A O Universitaria San Martino di Genova Ing Sergio Perticaroli Direttore Dipartimento Documentazione Informazione e Formazione ISPESL Roma Dr Pasquale Arace Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione dell A O di rilievo nazionale Santobono Pausilipon Napoli Dr ssa Assunta Cappiello Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione dell IRCCS Giannina Gaslini Genova Dr ssa Marina Doria Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione ASL n 1 Imperiese Imperia Dr ssa Mariangela Miele Universit di Genova Dr Bernardo Odone Servizio Prevenzione e Protezione dell A O Universitaria San Martino di Genova Dr Stefano Piloni Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione INRCA Ancona Dr Raffaele Polato Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione dell A O e ALSS n 16 di Padova Dr Franco Pugliese Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione AUSL Piacenza Dr Vincenzo Puro Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione Istituto Nazionale malattie infettive L Spallanzani Roma Ing Alessandro Selbmann Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione ASL Viterbo Si ringraziano inoltre per la fatti
18. Sono disponibili dei portabottiglie Esiste un responsabile per la radioprotezione o un manuale di riferimento da consultare se necessario presente personale appositamente addestrato a lavorare in sicurezza con i materiali ra dioattivi Vengono tenute registrazioni delle riserve e dell uso di sostanze radioattive Vengono forniti mezzi di radioprotezione Le esposizioni individuali alle radiazione sono controllate PARTE IX Bibliografia allegati e indice Bibliografia 10 11 12 13 14 15 Safety in health care laboratories Geneva World Health Organization 1997 http whqlibdoc who int hq 1997 WHO_LAB_97 1 pdf Garner JS Hospital Infections Control Practices Advisory Committee Guideline for isolation precautions in hospitals American Journal of Infection Control 1996 24 24 52 http www cdc gov ncidod hip isolat isolat htm Hunt GJ Tabachnick WJ Handling small arbobirus vectors safely during Biosafety level 3 containment Culicoides variipennis sonorensis Diptera Ceratopogonidae and exotic blue tongue viruses Journal of Medical Entomology 1996 33 271 277 National Research Council Occupational health and safety in the care and use of research animals Washington DC National Academy Press 1997 Richmond JY Quinby F Considerations for working safely with infectious disease agents in research animals In Zak O Sande MA eds Handbook of animal models of infection London Aca
19. ad esempio nella lavorazione di campioni clinici o epidemio logici raccolti sul campo In questi casi prudente procedere con cautela durante la manipola zione del campione 1 Quando si prelevano campioni da pazienti necessario applicare sempre le Precauzioni Standard 2 e indossare adeguati dispositivi di protezione ad effetto barriera guanti cami ci protezioni per gli occhi 2 Per la manipolazione di questi campioni il requisito minimo dovrebbe essere rappresenta to dalle misure di contenimento di base e dalle pratiche e procedure previste dal livello di Biosicurezza 2 3 Il trasporto dei campioni deve essere effettuato seguendo regole e regolamenti nazionali e o internazionali Alcune informazioni che possono essere utili per la valutazione del rischio nel manipolare questi campioni sono 1 dati clinici del paziente 2 dati epidemiologici morbidit e letalit sospetta modalit di trasmissione dati derivati da studi su epidemie 3 informazioni sulla provenienza geografica del campione Nel caso di epidemie ad eziologia sconosciuta Linee guida ad hoc per le modalit di spedizione dei campioni ed il livello di sicurezza necessario per la loro lavorazione in laboratorio possono essere definite e rese disponibili dalle autorit competenti e o dall OMS sulle reti informatiche World Wide Web come accaduto nel caso dell emergenza SARS del 2003 Valutazione del rischio e microrganismi geneticamente modificati
20. anche nei riguardi di soluzioni diluite Libera grandi quantit di calore quando mescolato con acqua Reagisce vigorosamente con miscele cloroformio metanolo e con acidi forti Conservare in contenitori ben chiusi in luogo asciutto VSL Sostanza Proprieta fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Sodio ipoclorito Soluzione incolore o Corrosivo per gli occhi e Forte ossidante Esposto In caso di contatto con gli occhi In contatto con gli acidi libera Durante la soluzione giallo pallido con odore la pelle corrosivo per al fuoco pu liberare sciacquare immediatamente con gas molto tossici Pu reagire conservazione 10 14 cloro di cloro miscibile con ingestione e per il tratto fumi tossici acqua e rivolgersi a un medico vigorosamente con combustibili perde libero acqua respiratorio l inalazione in caso di contatto con la pelle e composti riducenti Pu reagire gradualmente NaOCl pu causare edema lavare immediatamente Non con nitrogeno composti per cloro le polmonare Esposizioni inalare i vapori usare protezioni formare N chloro composti soluzioni diluite ripetute possono respiratorie Lavorare in esplosivi pu reagire usate come causare ambiente ben ventilato violentemente con metanolo disinfettanti si sensibilizzazione Indossare guanti in gomma degradano cutanea naturale o sintetica e protezione rapidamente degli occhi dagli agenti chimici
21. and Safety Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA Dr Nicoletta Previsani Biosafety programme World Health Organization Ginevra Svizzera Dr Jonathan Richmond Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA in pensione Dr Syed A Sattar Facolt di Medicina Universit di Ottawa Ottawa Ontario Canada Dr Deborah E Wilson Division of Occupational Health and Safety Office of Research Services National Institutes of Health Department of Health and Human Services Washington DC USA Dr Riccardo Wittek Institute of Animal Biology Universit di Losanna Losanna Svizzera Ringraziamo inoltre per l aiuto Ms Maureen Best Office of Laboratori Security Health Canada Ottawa Canada Dr Mike Catton Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory North Melbourne Australia Dr Shanna Nesby Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA Dr Stefan Wagener Canadian Science Centre for Human and Animal Health Winnipeg Canada Inoltre ringraziamo gli scrittori e i recensori per l originale contributo dato nella prima e seconda edizione del Laboratory Biosafety Manual e nella pubblicazione WHO del 1997 Safety in health care laboratories 1 VII Ringraziamenti edizione in lingua italiana Hanno inoltre collaborato al Manuale per la biosicurezza nei laboratori i membri del Comitato Scientifico dell Associazione
22. and sterilization in health care 2 ed Ottawa Laboratory Centre for Disease Control Health Canada 1998 Springthorpe VS Sattar SA Chemical disinfection of virus contaminated surfaces CRC Critical Reviews in Environmental Control 1990 20 169 229 Recommendations on the transport of dangerous goods 13 revised edition New York and Geneva United Nations 2003 http www unece org trans danger publi unrec rev13 13files_e html Technical instructions for the safe transport of dangerous goods by air 2003 2004 Edition Montreal International Civil Aviation Organization 2002 Economic Commission for Europe Inland Transport Committee Restructured ADR applicable as from 1 January 2003 New York and Geneva United Nations 2002 http www unece org trans danger publi adr adr2003 ContentsE html Infectious substances shipping guidelines Montreal International Air Transport Association 2003 http www iata org ads issg htm Transport of Infectious Substances Geneva World Health Organization 2004 http www who int csr resources publications WHO_CDS_CSR_LYO_2004_9 en Berg P et al Asilomar conference on recombinant DNA molecules Science 1975 188 991 994 European Council Council Directive 98 81 EC of 26 October 1998 amending Directive 90 219 EEC on the contained use of genetically modified microorganisms Official Journal 1998 L330 13 31 O Malley BW Jr et al Limitations of adenovirus med
23. boccette con tappi in gomma eliminare liquido in eccesso o le bolle d aria tenendo verticalmente la siringa con l ago avvolto e coperto in cotone imbevuto di appropriato disinfettante oppure eseguire l operazione in una boccetta contenente cotone usare una cappa di sicurezza biologica per tutte le operazioni che comportino l uso di materiale infettante contenere gli animali mentre vengono sottoposti ad inoculazione Usare aghi a punta smussa o cannule per inoculazioni orali o nasali Usare una cappa a sicurezza biologica dopo l uso i dispositivi vanno autoclavati e ci si deve assicurare del loro corretto smaltimento Non smontare aghi o siringhe usati prima di averli autoclavati 134 Attrezzatura Rischi Come eliminare o ridurre i rischi Centrifughe Produzione di aerosol e usare contenitori sigillabili provette di sicurezza Imbrattamenti o rotori sigillabili Aprire i contenitori o i rotori dopo aver Rotture di provette consentito la deposizione dell aerosol 30 minuti oppure in una cappa di sicurezza biologica Ultracentrifughe Produzione di aerosol e installare un filtro HEPA fra la centrifuga e la pompa del vuoto Imbrattamenti Rotture di provette e instituire un libretto in cui registrare le ore di attivit di ciascun rotore ed un programma di manutenzione preventiva per ridurre il rischio di guasti meccanici e caricare e scaricare i cestelli od i rotori in una cappa di sicurezza biologica Giare per incub
24. composti dell acetilene Cu malleabile privo di rame pu causare aspirazione localizzata o etilene ossidi azidi e acqua odore polvere rossa febbre febbre da fumi protezioni respiratorie guanti ed ossigenata possono formarsi che vira al verde se metallici occhiali protettivi composti sensibili agli urti esposta all aria umida Reagisce con forti ossidanti m p 1083 C come i clorati con rischio di b p 2567 C esplosione Selenio Solido inodore in varie _Irritazione della pelle e Evitare la dispersione delle Reagisce violentemente con Se forme solido amorfo da degli occhi Linalazione polveri Osservare rigorose ossidanti e acidi forti Reagisce rosso scuro marrone a della polvere pu norme igieniche Lavorare con con acqua a 50 C liberando nero bluastro o cristalli causare edema aspirazione localizzata idrogeno infiammabile e acidi trasparenti rossi o polmonare Esposizioni Indossare guanti protettivi selenosi Reagisce con cristalli da grigio ripetute possono indumenti e occhiali di incandescenza al moderato metallico a nero causare perdita delle sicurezza riscaldamento con fosforo e m p 170 217 C unghie effetti metalli quali nichel potassio b p 685 C gastrointestinali platino sodio e zinco Sodio azide Solido cristallino Molto tossico per Si decompone con In caso di contatto con la pelle Reazioni esplosive con bromo N Na incolore ingestione inalazionee esplosione quando lavare immediatamente carbonio disolfuro o chromyl
25. con il nome scientifico del contenuto la data di immagazzinamento ed il nome dell operatore che li ha immagazzi nati Il materiale non etichettato od obsoleto dovrebbe essere autoclavato ed eliminato Deve essere mantenuto un inventario del contenuto del frigorifero 4 Le soluzioni infiammabili non devono essere riposte in un frigorifero a meno che non sia a prova di esplosioni Avvertimenti in questo senso devono essere affissi sulla porta dei frigo riferi Go Apertura di ampolle contenenti materiale infetto liofilizzato Bisogna fare attenzione quando si aprono ampolle di materiale congelato disidratato perch il contenuto pu essere sottovuoto e l ingresso improvviso di aria disperde materiale nell atmosfe ra Aprire sempre le ampolle sotto cappa di sicurezza biologica Si raccomandano le procedure che seguono 1 Prima di tutto decontaminare l esterno della ampolla 2 Incidere sull ampolla all altezza della met del tappo di cotone o di cellulosa se presente 3 Per proteggere le mani avvolgere l ampolla con cotone impregnato di alcol prima di romper la a livello dell incisione praticata con la limetta 4 Rimuovere la parte di sopra con delicatezza e manipolare come se si trattasse di materiale con taminato 5 Se il tappo si trova ancora sopra il contenuto dell ampolla rimuoverlo con pinze sterili 6 Aggiungere il liquido di risospensione lentamente per evitare la formazione di schiuma 71 Manuale d
26. contenimento con Livello di Biosicurezza 4 con le seguenti aggiunte 1 Contenimento primario Deve essere in funzione un sistema di contenimento primario effi ciente costituito da una o dalla combinazione delle seguenti opzioni Programma di biosicurezza Dipartimento sulla comunicazione malattie sorveglianza sanitaria e attivazione disposi zioni W H O 20 Avenue Appia 1211 Geneva 27 Switzerland http www who int csr 25 Manuale di biosicurezza nei laboratori Laboratorio con cappe di Classe III E necessario passare attraverso un minimo di due porte pri ma di entrare nei locali contenenti le cappe di sicurezza biologica di Classe III stanza delle cappe In questa configurazione di laboratorio la cappa di sicurezza biologica di Classe III provvede al contenimento primario Sono necessari uno spogliatoio filtro per l entrata ed uno diverso per l uscita con doccia Le forniture e i materiali che non vengono portati nella stanza delle cappe attraverso il fil tro di ingresso possono essere introdotte attraverso una camera di fumigazione o una au toclave a doppia porta Una volta che la porta esterna ben chiusa gli addetti all interno del laboratorio possono aprire la porta interna per ricuperare i materiali Le porte dell au toclave o della camera di fumigazione sono interbloccate in modo tale che la porta esterna non possa aprirsi a meno che l autoclave non sia stata in funzione per un intero ciclo di ste rilizz
27. d acqua Trasporto dei campioni nell ambiente di lavoro Per evitare spandimenti accidentali anche di piccola entit porre i recipienti dei campioni in contenitori rigidi chiusi attrezzati per mantenerli in posizione verticale Questi secondi contenitori possono essere di metallo o di plastica con il coperchio preferibil mente dotato di guarnizione devono essere autoclavabili o resistenti all azione dei disinfettanti chimici Devono essere decontaminati con regolarit Accettazione dei campioni I laboratori che ricevono grandi quantita di campioni dovrebbero dedicare all accettazione una particolare stanza od area Apertura dei contenitori Il personale che riceve e toglie dai contenitori i recipienti dei campioni deve essere informato dei po tenziali rischi per la salute che questo comporta ed addestrato ad adottare le precauzioni standard 2 in particolare quando manipolano recipienti che presentano rotture o perdono materiale I contenitori primari del campione devono essere aperti all interno di una cappa di sicurezza bio logica Devono essere prontamente disponibili sostanze disinfettanti 67 Manuale di biosicurezza nei laboratori Uso di pipette e pipettatori automatici SEQ CR w 11 Pipettare con la bocca deve essere proibito Usare sempre un dispositivo di aiuto Tutte le pipette devono essere dotate di tamponi di cotone per ridurre la possibilita di conta minazione dei dispositivi di uso delle pipette
28. da animali di laboratorio Il Responsabile del laboratorio e l ufficio preposto devono essere avvisati in caso di versa mento di liquido incidente esposizione definita o possibile a materiali infetti Deve essere inoltre istituito un registro degli incidenti o esposizioni accidentali in Italia previsto anche l obbligo del Registro infortuni e specificamente per il rischio biologico il registro degli esposti e degli CA r eventi accidentali Bisogna predisporre e seguire una procedura scritta per la gestione di ogni versamento acci dentale di liquidi I liquidi contaminati devono essere decontaminati chimicamente o fisicamente prima di es sere versati nelle fognature Potrebbe essere necessario un sistema di trattamento dei liquidi in uscita in base alla valutazione del rischio per gli specifici agenti manipolati Il materiale cartaceo che dovr essere portato fuori dal laboratorio deve essere protetto dalla possibile contaminazione all interno del laboratorio Aree di lavoro del laboratorio 1 Il laboratorio deve essere mantenuto in ordine pulito e libero da materiali che non sono stret tamente necessari al lavoro Le superfici di lavoro devono essere decontaminate dopo qualunque versamento di liquidi po tenzialmente pericolosi e alla fine di ogni giornata di lavoro Tutti i materiali contaminati campioni e colture devono essere decontaminati prima della lo ro eliminazione o della
29. dei contenuti _y etichetta di identificazione 40 rigido esterno contenitore secondario a tenuta stagna materiale assorbente i at marchio del contenitore etichette indicanti mittente e destinatario 92 PARTE V Introduzione alla Biotecnologia Biosicurezza e tecnologia del DNA ricombinante 16 Biosicurezza e tecnologia del DNA ricombinante La tecnologia del DNA ricombinante consiste nel combinare materiale genetico da fonti differenti creando cosi organismi geneticamente modificati OGM che non sono mai esistiti prima in na tura In un primo momento ci fu preoccupazione tra i biologi molecolari perch si temeva che questi organismi potessero avere proprieta imprevedibili e indesiderabili tali da rappresentare un rischio biologico in caso di fuoriuscita dal laboratorio Questa preoccupazione divenne l o biettivo di una conferenza tenuta a Asilomar CA USA nel 1975 45 A questo congresso furono discusse questioni di sicurezza e furono proposte le prime Linee guida per la tecnologia del DNA ricombinante I successivi 25 anni di esperienza nella ricerca hanno dimostrato che l ingegneria genetica pu essere sviluppata con sicurezza quando viene effettuata una adeguata valutazione dei rischi e vengono adottate idonee misure di sicurezza La tecnologia del DNA ricombinante o ingegneria genetica venne utilizzata in un primo mo mento per clonare porzioni di DNA in batteri ospiti al fine di sovraesprimere specifici p
30. di Bioprotezione nei laboratori 45 Parte Ill Attrezzature di laboratorio 10 Cappe di sicurezza biologica 49 Cappe di sicurezza biologica di Classe 49 Cappe di sicurezza biologica di Classe Il 51 Cappe di sicurezza biologica di Classe III 53 Condotti d aria delle cappe di sicurezza biologica 54 Come scegliere una cappa di sicurezza biologica 54 L uso delle cappe di sicurezza biologica nei laboratori 54 11 Attrezzature di sicurezza 58 Isolatori a pressione negativa con pellicole flessibili 58 Materiale ausiliario per l uso delle pipette 60 Omogenizzatori miscelatori ultrasonicatori 60 Anse di coltura monouso 61 Microinceneritori 61 Dispositivi di Protezione Individuale 61 Parte IV Buone tecniche di laboratorio 12 Tecniche di laboratorio 67 Sicurezza nella manipolazione dei campioni 67 Uso di pipette e pipettatori automatici 68 Evitare la dispersione di materiale infettivo 68 Uso di cappe di sicurezza biologica 68 Prevenzione dell ingestione di materiale infetto o di contatto con pelle ed occhi 69 Prevenzione dell inoculazione di materiale infetto 69 Separazione del siero 69 Uso delle centrifughe 70 Uso degli omogeneizzatori miscelatori agitatori ed ultrasonicatori 70 Uso di macinatori di tessuti 71 Manutenzione ed uso di frigoriferi e congelatori 71 Apertura di ampolle contenenti materiale infetto liofilizzato 71 Conservazione di ampolle contenenti materiale infetto 72 Precauzioni standard con sangue ed altri fluidi tessuti ed
31. docce e dalle toilette del perso nale pu essere scaricata direttamente nel sistema fognario senza trattamento Sterilizzazione di rifiuti e materiali Nell area del laboratorio deve essere disponibile un au toclave passante a doppia porta interbloccata Devono essere disponibili altri metodi di de contaminazione per le attrezzature e gli oggetti che non possono sopportare la sterilizzazione a vapore Porte di ingresso a camera di compensazione Per i campioni i materiali e gli animali devono essere fornite dalle porte di ingresso a camera di compensazione Alimentazione di emergenza Deve essere presente alimentazione elettrica di emergenza gruppo elettrogeno gruppi di continuit Sifoni per lo scarico di sicurezza Anche gli scarichi a pavimento devono essere conformi alle misure di contenimento A causa dell elevata complessit della progettazione e della costruzione dei locali con Livello di Biosicurezza 4 non sono state incluse delle rappresentazioni schematiche n della configurazio ne a cappe n di quella con uso di tute a tenuta e pressurizzate A causa dell elevata complessit del lavoro in un laboratorio con Livello di Biosicurezza 4 oc corre sviluppare e testare in esercitazioni di prova un manuale di lavoro dettagliato separato Inoltre deve essere ideato un programma di emergenza vedere capitolo 13 Nella preparazione del programma occorre stabilire una collaborazione attiva con le autorit sanitarie lo
32. dovrebbero rappresentare le diverse aree professiona li presenti nell organizzazione come pure le diverse competenze scientifiche La composizione di un comitato di Biosicurezza dovrebbe comprendere almeno il responsabile del Servizio Prevenzione e protezione e della Biosicurezza i rappresentanti del personale scientifico il personale medico il veterinario o i veterinari in caso di utilizzo di animali i rappresentanti del personale tecnico i rappresentanti dei dirigenti Il comitato di Biosicurezza potrebbe includere tra i suoi membri altri responsabili della sicurez za appartenenti ad altri dipartimenti specializzati ad es esperti nella radioprotezione nella si curezza industriale la prevenzione degli incendi ecc e potrebbe richiedere talvolta il parere di consulenti esterni esperti in vari campi di autorit locali e di organismi di controllo nazionali I membri del comitato possono essere utili anche per la valutazione di un protocollo particolar mente controverso DOP WN FR 112 Norme di sicurezza per il personale addetto ai servizi manutenzione pulizia 20 Norme di sicurezza per il personale addetto ai servizi manutenzione pulizia Lo svolgimento in sicurezza delle attivit di laboratorio dipende in gran parte anche dal perso nale addetto ai servizi per questo molto importante che tale personale riceva un adeguata for mazione sui rischi presenti nell ambiente di lavoro Servizi di man
33. durante la preparazio ne delle librerie del DNA genomico da microrganismi patogeni i prodotti genici presentano una potenziale attivit farmacologia 4 i prodotti genici codificano per tossine W I vettori virali per il trasferimento genico Vettori virali come ad esempio adenovirus sono usati per il trasferimento genico nelle cellule Vettori di questo tipo mancano di alcuni geni per la replicazione del virus e vengono propagate in linee cellulari che complementano tale difetto Stock di questi vettori possono per essere contaminati con virus ancora capaci di replicarsi ge nerati da rari eventi di ricombinazione spontanea nelle linee cellulari di propagazione o posso no derivare da una insufficiente purificazione Questi vettori dovrebbero quindi essere mani polati allo stesso livello di sicurezza dell adenovirus parentale dal quale essi derivano Animali transgenici e knock out Gli animali che contengono materiale genetico estraneo animali transgenici dovrebbero essere manipolati entro livelli di contenimento appropriati alle caratteristiche dei prodotti genici del DNA estraneo Animali con delezioni mirate di specifici geni animali knock out non rappre sentano generalmente un particolare rischio biologico Esempi di animali transgenici includono animali che esprimono recettori per virus normalmen te incapaci di infettare quella specie Se tali animali sfuggissero dal laboratorio e trasmettessero il transg
34. e 2 sono presentate in maniera estesa e dettagliata dato che esse rappresentano la base comune per i laboratori di qualsiasi li vello di Biosicurezza Le Linee guida per i laboratori di contenimento Livello di Biosicurezza 3 ed per i laboratori di massimo contenimento Livello di Biosicurezza 4 che saranno trattate nei capitoli 4 e 5 modifi cano e integrano quelle dei laboratori di base essendo elaborate per garantire la sicurezza nei confronti di patogeni a pi alto rischio Compendio di regole pratiche Il seguente compendio un elenco delle pi importanti pratiche e procedure di laboratorio che rap presentano la base per la buona pratica microbiologica pu essere usato per la predisposizione di protocolli scritti e procedure operative finalizzate ad effettuare le operazioni di laboratorio in sicu rezza Ogni laboratorio dovrebbe adottare un manuale operativo e di sicurezza che identifichi i ri schi noti e potenziali e specifichi le pratiche e le procedure da adottare per eliminare o minimizza re tali rischi La buona pratica microbiologica fondamentale per garantire la sicurezza nel labora torio Dotare un laboratorio di attrezzature speciali rappresenta un supplemento ma non pu so stituirsi alla osservanza di adeguate procedure I concetti pi importanti sono elencati di seguito Accesso 1 Il simbolo internazionale di rischio biologico Figura 1 deve essere esposto sulle porte delle stanze dove si manipolano i micror
35. essere individuato un preposto per la Biosicurezza con il compito di vigilare affinch tutto il personale del laboratorio attui le direttive le Linee guida ed i proto colli redatti in materia di Biosicurezza Il preposto della Biosicurezza svolge queste funzioni per conto del direttore dell istituto o del responsabile del laboratorio Nelle strutture minori il preposto della Biosicurezza pu essere un microbiologo o un membro del personale tecnico che svolge questo compito con le modalit concordate con l amministra zione di appartenenza Qualunque sia il grado di coinvolgimento nel programma di Biosicurez za la persona designata dovrebbe possedere la competenza professionale necessaria per sugge rire riesaminare ed approvare le misure specifiche finalizzate all attuazione di livelli adeguati di contenimento e di Biosicurezza Il preposto della Biosicurezza dovrebbe applicare i protocolli i regolamenti e le Linee guida riconosciuti a livello nazionale ed internazionale oltre che collabo rare con il personale del laboratorio nello sviluppare adeguate procedure operative standard La persona incaricata deve possedere adeguate conoscenze per quanto riguarda la microbiologia la biochimica e le scienze fondamentali fisiche e biologiche Sarebbe auspicabile anche una buona conoscenza delle metodiche di laboratorio delle procedure cliniche e di sicurezza inclusi i mez zi di protezione personali le apparecchiature i principi di ingegneria applic
36. fi nale di 1 0 g 1 e 5 0 g 1 Le soluzioni industriali di candeggina hanno una concentrazione di so dio ipoclorito attorno ai 120 g l e devono essere diluite di conseguenza per ottenere i livelli so pra indicati L ipoclorito di calcio Ca CIO in granuli o compresse generalmente contiene circa il 70 di clo ro libero Le soluzioni con 1 4 g l e 7 0 g l conterranno rispettivamente 1 0 g l e 5 0 g l di clo ro libero La candeggina non raccomandata come antisettico ma pu essere usata come disinfettante per uso generale e per intervenire su materiali non metallici contaminati In situazioni di emergenza la candeggina alla concentrazione finale di 1 2 mg l di cloro libero pu anche essere usata per disinfettare acqua da bere 81 Manuale di biosicurezza nei laboratori Il gas di cloro estremamente tossico percid la candeggina deve essere immagazzinata ed usata solamente in aree ben ventilate e mai miscelata con acidi per evitare la rapida liberazione di gas di cloro Molti composti del cloro possono essere dannosi per l uomo e l ambiente pertanto bi sogna evitare l uso indiscriminato di disinfettanti a base di cloro in particolare di candeggina Dicloroisocianuro di sodio Il dicloroisocianuro di sodio NaDCC in forma di polvere contiene il 60 di cloro libero Le so luzioni a 1 7 g l e 8 5 g l conterranno rispettivamente 1 0 g l o 5 0 g l di cloro libero Le com presse di NaDCC generalmente contengono 1 5 g di cloro
37. fluoro o cloro se disponibile sotto 2 5 100 facciali No fiamme libere esposto alla luce Reagisce con pressione o sciolto in scintille non fumare Operare rame argento e mercurio o loro acetone sotto aspirazione localizzata ed sali formando composti sensibili m p 81 C in presenza di impianto elettrico agli urti sublima a 84 C e di illuminazione a prova di atmosfere esplosive Acetone Liquido incolore volatile Lieve irritante per occhi Molto infiammabile Stoccare i contenitori in aree Reagisce violentemente con Collegare a CH CO CH con odore dolciastro naso e gola Flashpoint 18 C ben ventilate tenere lontano da ossidanti es acido nitrico e terra contenitori m p 95 C Linalazione pu Limiti esplosivit fonti di innesco Non respirare cromico e cloroformio in e recipienti per b p 56 C provocare vertigini 2 2 12 8 vapori Usare protezioni presenza di basi Incompatibile prevenire solubile in acqua narcosi e coma respiratorie indossare protezioni con miscele di acido solforicoe elettricit per gli occhi nitrico concentrate statica Acetonitrile Liquido incolore con Irritante per vie Altamente infiammabile No fiamme libere scintille non Reagisce con acidi e basi in CH CN odore aromatico respiratorie occhi e Flashpoint 12 8 C fumare no contatto con base acquosa producendo fumi m p 46 C cute L esposizione pu Limiti esplosivit ossidanti Usare solo in aree tossici Reagisce con forti b p 82 C provocare convulsioni 3 0 1
38. gestione dell incidente da esposizione e decontaminazione evacuazione in emergenza di uomini ed animali dalla struttura trattamento medico urgente di persone esposte o ferite sorveglianza medica di persone esposte gestione clinica di persone esposte indagini epidemiologiche proseguimento post incidente delle attivit vonau ponm Nello sviluppo di questo piano i seguenti argomenti dovrebbero essere considerati 1 Identificazione di organismi ad alto rischio 2 Localizzazione di aree ad alto rischio come laboratori aree di stoccaggio stabulari 3 Identificazione del personale e della popolazione a rischio 4 Identificazione delle persone responsabili e dei loro compiti come il responsabile della Bio sicurezza gli addetti alla sicurezza le autorit sanitarie locali i clinici i microbiologi i ve terinari gli epidemiologi i Vigili del Fuoco e la Pubblica Sicurezza 5 Identificazione dei presidi di cura ed isolamento che possono ricevere persone esposte o in fette Trasporto di persone esposte o infette Lista delle fonti di siero immune vaccini farmaci equipaggiamento speciale e scorte 8 Disponibilita di scorte di equipaggiamenti di emergenza come abbigliamento protettivo disinfettanti attrezzatura per spandimenti chimici e biologici equipaggiamenti per la de contaminazione approvvigionamenti NS 75 Manuale di biosicurezza nei laboratori Procedure di emergenza per laboratori
39. in base alla na tura delle attivit la valutazione del rischio per i lavoratori e la natura dell agente biologico con cui si opera Misure di contenimento Livelli di contenimento 2 3 4 1 La zona di lavoro deve essere separata No Raccomandato Si da qualsiasi altra attivit nello stesso edificio 2 L aria immessa nella zona di lavoro e la aria No Si sull aria estratta Si sull aria immessa estratta devono essere filtrate attraverso e quella estratta un ultrafiltro HEPA o un filtro simile 3 L accesso deve essere limitato Raccomandato Si Si attraverso una alle persone autorizzate camera di compensazione 4 Lazona di lavoro deve poter essere chiusa a No Raccomandato Si tenuta per consentire la disinfezione Specifiche procedure di disinfezione Si Si Si La zona di lavoro deve essere mantenuta ad una No Raccomandato Si pressione negativa rispetto a quella atmosferica 7 Controllo efficace dei vettori ad esempio Raccomandato Si Si roditori ed insetti 8 Superfici idrorepellenti e di facile pulitura Si perilbanco Si per il banco Si per il banco di lavoro arredo di lavoro di lavoro arredo muri e il pavimento pavimento e soffitto 9 Superfici resistenti agli acidi agli alcali Raccomandato Si Si ai solventi ai disinfettanti 10 Deposito sicuro per agenti biologici Si Si Si inaccessibile a personale non autorizzato 11 I laboratori devono contenere Raccomandato Raccomandato Si l attrezzatura a loro necessaria 12 labor
40. in modo da tutelare il personale 14 presente un gruppo di continuit in caso di interruzione dell energia elettrica 15 L accesso alle aree di laboratorio pu essere limitato al personale autorizzato 16 stata fatta una valutazione del rischio per garantire che idonee attrezzature siano disponi bili per svolgere il lavoro NEON PD Magazzini 1 Le strutture per l immagazzinamento gli scaffali ecc sono state installate in modo tale da evi tare scivolamenti rovesciamenti cadute versamenti etc 2 Le strutture sono mantenute sgombre da accumuli di rifiuti di materiale in disuso e oggetti in grado di costituire un rischio di inciampo incendio esplosione o insediamento di parassiti 3 Ilocali dove sono presentii gli impianti refrigeranti ed i magazzini possono essere chiusi a chiave Servizi igienici e locali destinati al personale 1 I locali sono mantenuti puliti ordinati e in buone condizioni igieniche 2 E disponibile acqua potabile 119 Manuale di biosicurezza nei laboratori DI DO DN Sono disponibili gabinetti WC docce lavabi puliti adeguati separati per sesso Vengono forniti acqua calda e fredda sapone e asciugamani Sono disponibili spogliatoi separati per il personale maschile e per quello femminile presente la possibilit per ciascun lavoratore di riporre in luogo separato l abbigliamento personale es armadietti E presente un locale refettorio I livelli di
41. in particolare della malattia di Creutzfeldt Jakob CJD inclusa la nuova variante della sindro me di Gerstmann Str ussler Scheinker dell insonnia familiare fatale e del kuru nella patologia umana Lo scrapie in pecore e capre l encefalopatia spongiforme bovina nel bestiame ed altre encefalopatie trasmissibili del cervo nell alce e nel visone Sebbene la CJD sia stata trasmessa ad esseri umani non risultano provati casi di infezioni con que sti agenti associate alle attivit di laboratorio Nondimeno prudente osservare sicure precauzioni nella manipolazione di materiale proveniente da uomini ed animali infetti o potenzialmente infetti La scelta del livello di Biosicurezza per lavori con materiali collegati con le TSEs dipende dalla natura dell agente e dei campioni da studiare e dovrebbe essere effettuata in accordo con le au torit nazionali Le concentrazioni pi alte di prioni sono state riscontrate nei tessuti del sistema nervoso centrale Studi sugli animali suggeriscono la probabilit che alte concentrazioni di prio ni si trovino anche nella milza nel timo nei linfonodi e nel polmone Studi recenti indicano che anche i prioni nel tessuto muscolare linguale e scheletrico possano rappresentare un rischio di infezione potenziale 20 23 Dato che la completa inattivazione di prioni difficile da ottenere importante adottare quan do possibile strumenti monouso ed usare una protezione a perdere per la superficie di lavo
42. in pres sione negativa rispetto al laboratorio circostante Per il laboratorio dove sono posizionate le cappe necessario un apposito sistema di ventilazione senza ricircolo Laboratorio con tute complete a tenuta pressurizzata Sono necessari degli appositi sistemi per l immissione dell aria alla stanza e per la sua estrazione Nel sistema di ventilazione le com ponenti di immissione ed estrazione dell aria sono bilanciati in modo da assicurare un flus so di aria dalle zone a minor rischio verso quelle a maggior rischio potenziale Vanno in Laboratorio di massimo contenimento Livello di Biosicurezza 4 stallati ulteriori estrattori di sicurezza ventilatori di estrazione in modo da assicurare in ogni situazione possibile che il laboratorio con tute a tenuta pressurizzate sia in pressione negativa rispetto all esterno La pressione differenziale all interno del laboratorio da tuta protettiva e le aree adiacenti deve essere monitorata Il flusso di aria nelle componenti di im missione e di scarico del sistema di ventilazione deve essere monitorato e deve essere in uso un adeguato sistema di controllo per prevenire la pressurizzazione del laboratorio da tuta protettiva Deve essere fornita aria filtrata attraverso i filtri HEPA alla tuta protettiva alla doccia di decontaminazione e alle camere di equilibrio o di compensazione L aria scaricata dal laboratorio e dalla tuta protettiva deve essere passata attraverso una serie di due filtr
43. incenerito ri pi efficienti e rispettosi dell ambiente Eliminazione dei rifiuti L eliminazione dei rifiuti di laboratorio e dell attivit sanitaria soggetta a varie regolamenta zioni regionali nazionali ed internazionali e le versioni pi recenti di documenti cos importan 88 Disinfezione e sterilizzazione ti devono essere consultate prima di definire e perfezionare le procedure per maneggiare tra sportare ed eliminare i rifiuti a rischio biologico In generale la cenere proveniente da inceneritori pud essere maneggiata come normale rifiuto domestico e pud essere rimossa dalle autorita locali I rifiuti trattati in autoclave possono esse re inviati all incenerimento anche lontano oppure all interramento in luogo autorizzato vedi capitolo 3 Per ulteriori informazioni vedere i riferimenti bibliografici 13 e 29 39 89 Manuale di biosicurezza nei laboratori 15 Introduzione al trasporto di sostanze infettive Il trasporto di materiali infettivi o potenzialmente infettivi soggetto a rigide norme nazionali e internazionali Le norme riguardano l uso corretto dei materiali dei contenitori cos come altre necessit per il trasporto Il personale dei laboratori deve inviare le sostanze infettive seguendo le regole di trasporto ap plicabili Il rispetto delle regole permetter di 1 ridurre la probabilit che i contenitori vengano danneggiati e di conseguenza possano far fuo riuscire il material
44. irritante per le gas irritanti o tossici 3 3 Dimetil scarsamente solubile in vie respiratorie e gli 1 1 bifenil acqua occhi un probabile 4 4 diamina carcinogeno umano Tetracloruro di Liquido incolore con Pu essere assorbito Non combustibile Se Evitare ogni contatto Operare in A contatto con superfici calde o carbonio caratteristico odore attraverso la cute per coinvolto in un incendio ambienti ventilati aspirazione fiamme si decompone formando CCI simile all etere prolungata esposizione produce gas irritanti o localizzata o protezioni fumi e gas tossici e corrosivi m p 23 C pu provocare dermatiti tossici respiratorie usare guanti in acido cloridrico cloro fosgene b p 76 5 C Irritante per gli occhi nitrile ed indumenti protettivi Reagisce con alcuni metalli Pu causare danni a maschera facciale o protezione come allumino magnesio zinco fegato e reni e disturbi a degli occhi in combinazione con carico del sistema protezione respiratoria nervoso centrale provocando cefalea nausea ittero perdita di appetito e narcosi cancerogeno per animali Toluene Liquido incolore con Sedativo del sistema Facilmente Conservare i contenitori Pu reagire con acidi forti alcali CH odore caratteristico nervoso centrale infiammabile i vapori ermeticamente chiusi o ossidanti Metilbenzene m p 95 C b p 111 C non miscibile con acqua Irritazione degli occhi membrane mucose e pelle E
45. libero per compressa Una o quattro compresse sciolte in 1 litro di acqua forniscono con buona approssimazione rispettivamente le concentrazioni richieste di 1 0 g 1 05 0 g l Il NaDCC come polvere o compresse facile e sicuro da immagazzinare Il NaDCC solido pu es sere usato su spargimenti di sangue o di altri liquidi a rischio biologico e lasciato agire per alme no 10 minuti prima di essere rimosso per procedere alla ulteriore pulizia dell area contaminata Cloramina La cloramina reperibile come polvere che contiene circa 25 cloro libero rilascia cloro pi len tamente dell ipoclorito Perci sono richieste concentrazioni iniziali pi alte per un efficacia equivalente a quella dell ipoclorito D altra parte le soluzioni di cloramina sono inattivate dal le sostanze organiche in misura minore rispetto alle soluzioni dell ipoclorito e concentrazioni di 20 g l sono raccomandate per condizioni sia di pulito che di sporco Le soluzioni di cloramina sono virtualmente inodori ma comunque gli articoli trattati devono es sere abbondantemente sciacquati per rimuovere qualsiasi residuo degli agenti aggiunti alla clo ramina T sodio tosilcloramide in polvere Diossido di Cloro Il cloro diossido CIO un forte germicida ad azione rapida un agente disinfettante ed un os sidante noto per essere attivo a concentrazioni pi basse di quelle richieste per il cloro sotto for ma di candeggina Il diossido di cloro ess
46. m p 300 C contatto con la pelle riscaldato sopra il suo Non inalare le polveri Indossare cloruro Il solido reagisce con solubile in acqua pu causare bruciature La polvere e le soluzioni sono irritanti per gli occhi e la pelle pu essere assorbito attraverso la pelle punto di fusione Quando riscaldato libera fumi tossici non usare acqua per spegnere incendi guanti in gomma naturale o sintetica e protezione degli occhi metalli pesanti incluso il rame piombo e mercurio per formare sali metallo azidi esplosivi Per contatto con acidi sviluppa gas molto tossici ed esplosivi EST Sodio biselenito NaHSe0 Incolore polvere bianca cristallina solubile in acqua Tossico per ingestione e inalazione della polvere possibile pericolo di effetti cumulativi Teratogeno sperimentale Il contatto cutaneo prolungato pu causare dermatiti Indossare indumenti protettivi Agenti ossidanti Sodio cianuro NaCN Polvere bianca cristallina con odore di mandorle m p 563 C b p 1496 C facilmente solubile in acqua Estremamente tossico per ingestione inalazione e contatto con la pelle grave irritante per gli occhi Pu essere assorbito attraverso la pelle Esposizioni ripetute possono danneggiare la tiroide Esposto al fuoco libera fumi tossici Non inalare la polvere usare protezioni respiratorie Evitare il contatto con gli occhi e la pelle in caso di contatto con la pe
47. materiale contaminato destinato a passaggio in autoclave ed eliminazione 5 materiale contaminato destinato direttamente all inceneritore Oggetti taglienti Dopo l uso gli aghi non devono essere reincappucciati tagliati o staccati dalle siringhe mo nouso Tutto l insieme va smaltito in un contenitore per oggetti taglienti senza manipolazioni Anche le siringhe monouso usate senza ago vanno smaltite nei contenitori di sicurezza I contenitori per la raccolta degli oggetti taglienti devono essere rigidi a prova di puntura e non vanno riempiti fino all orlo Quando sono pieni per i 3 4 vanno chiusi e messi nei contenitori per rifiuti infetti ed inceneriti avendoli autoclavati se richiesto dalla pratica del laboratorio I con tenitori per gli oggetti taglienti non vanno buttati in discariche Materiale contaminato potenzialmente infetto destinato al passaggio in autoclave e riutilizzo Non bisogna fare alcun tentativo di prelavaggio su materiali contaminati potenzialmente infet ti destinati ad essere autoclavati e riutilizzati Qualunque pulitura o riparazione vanno fatte so lamente dopo passaggio in autoclave o disinfezione Materiale contaminato potenzialmente infettivo destinato all eliminazione A parte gli oggetti taglienti di cui si parlato sopra tutti i materiali contaminati potenzialmen te infettivi devono essere autoclavati in recipienti a tenuta es le buste in plastica con codice co lorato autoclavabi
48. organici acetilene butadiene benzene ed altri distillati del petrolio ammoniaca idrogeno carburo di sodio trementina e polveri metalliche causando incendio e rischio di esplosione Intacca numerosi metalli in presenza di acqua Intacca plastica gomma e rivestimenti Cloroformio CHCI Liquido volatile incolore con caratteristico odore m p 63 C b p 61 C Nocivo per inalazione ingestione e contatto con la cute nei cui confronti irritante Pu causare danni a fegato reni e sistema nervoso centrale provocando cefalea nausea ittero inappetenza narcosi Prolungate o croniche esposizioni causano cancro negli animali Sospetto cancerogeno per l uomo Indossare indumenti protettivi guanti in nitrile ed occhiali protettivi Operare sotto cappa Basi forti alcuni metalli come alluminio o magnesio polvere di zinco forti ossidanti Quando scaldato produce fosgene Intacca plastiche e gomma Dietiletere C H OC H Liquido incolore molto volatile con odore dolciastro m p 116 C b p 34 C scarsamente solubile in acqua Irritazione per occhi e vie respiratorie Pu avere effetti sul sistema nervoso centrale provocando sonnolenza ed incoscienza Possono verificarsi effetti cumulativi per inalazioni ripetute Estremamente infiammabile flashpoint 45 C range infiammabilit 1 7 48 Stoccare i contenitori in zone ben ventilate tenere lontano da fonti di
49. previsti dal D Lgs 626 94 se presente personale medico e o infermieristico e sui presidi di pronto soccorso se si opera all interno di una struttura dotata per motivi isti tuzionali di Servizio di pronto soccorso 131 Allegato 2 Immunizzazione degli operatori Ogni singolo ricercatore dovrebbe esaminare sotto ogni aspetto i rischi connessi con l attivit la vorativa con particolari agenti patogeni Prima di iniziare a lavorare con tali agenti dovrebbe es sere valutata la disponibilit e l efficacia di vaccini registrati dalle autorit nazionali e o di trat tamenti farmacologici es trattamenti antibiotici post esposizione Inoltre va indagata la possi bilit che alcuni lavoratori abbiano acquisito immunit naturale antecedentemente alla possibile vaccinazione od infezione Una volta che si sia valutata la presenza di rischio di infezione dopo aver effettuato una valuta zione clinica preventiva degli operatori potenzialmente esposti appurato che sia disponibile ef ficace e registrato dalle autorit locali un vaccino od una anatossina tali mezzi di profilassi de vono essere messi a disposizione dei lavoratori a rischio Devono essere inoltre disponibili procedure per la gestione dei casi di esposizione accidentale 132 Allegato 3 OMS e Biosicurezza Centri in Collaborazione Informazioni sulla possibilit di partecipare a corsi di informazione formazione addestramen to di ottenere assistenza e di usufruir
50. q q q Attrezzature con cavi logorati o danneggiati q q q Prese o strisce elettriche sovraccariche q q q Strisce di alimentazione montate lontano dal pavimento q q q Fusibili nei tubi protettivi adatti q q q Le prese elettriche vicino alle fonti di acqua soddisfano le normative locali q q q Presenza cavo messa a terra q q q Caloriferi portatili q q q Dispositivi di protezione individuale Disponibilit di collirio nel laboratorio q q q Disponibilit di docce di sicurezza q q q Disponibilit di attrezzature protettive personali guanti camici occhiali di protezione ecc q q q Occupanti adeguatamente abbigliati q q q Camici giacche grembiuli guanti da laboratorio e altri capi di abbigliamento protettivo personali non indossati al di fuori del laboratorio q q q Disponibilita di dispositivi di protezione individuale per il rischio criogenico q q q Gestione dei rifiuti Prove di un inadeguato smaltimento dei rifiuti q q q Rifiuti separati in appositi contenitori q q q Contenitori di rifiuti chimici bollati etichettati datati e tenuti chiusi q q q Contenitori di rifiuti chimici adeguatamente maneggiati e immagazzinati q q q Contenitori di aghi e taglienti utilizzati e smaltiti in modo adeguato q q q Nessuna immondizia sul pavimento q q q Procedure di smaltimento dei rifiuti affisse nel laboratorio q q q Disponibilit di programmi per la sicurezza e la salute professionale Comunicazione del risc
51. qualsiasi esposizione L uso proibito o sottoposto a 1 1 bifenil m p 128 C attraverso la cute Pu fumi e gas tossici nella Indossare protezione per occhie limitazioni di legge in molti stati 4 4 diamina b p 400 C provocare cancro alla combustione cute Operare sotto cappa con moderatamente solubile in acqua ma molto solubile in acidi e solventi organici vescica Da evitare qualsiasi esposizione scarico dell aspirato all esterno EI iag Sostanza Propriet fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Biossido di Gas da giallo a Grave irritazione di Non combustibile ma Operare in circuito chiuso in un forte ossidante reagisce Cloro rossastro o liquido occhi pelle vie aumenta la combustione ambienti ventilati Indossare violentemente con combustibili e CIO rosso brunastro respiratorie l inalazione di altre sostanze pu guanti e camici protettivi materiali riducenti Reagisce m p 59 C del gas pu provocare esplodere se scaldato occhiali di sicurezza ovvero violentemente con fosforo b p 10 C edema polmonare esposto alla luce solare protezione degli occhi combinata potassa caustica solfuri Sono possibili effetti se scosso 0 a contatto con protezione delle vie ammoniaca metano fosfina ed ritardati indicata con scintille respiratorie acido solfidrico l osservazione medica Bromo Liquido fumante di Corrosivo vapo
52. quando altrimenti indicato da una valutazione del rischio Tutti i sistemi le pratiche e le procedure devono essere riesaminati e nuovamente certificati an nualmente Si applicano le seguenti precauzioni di sicurezza 1 2 3 pi 10 11 12 13 30 Devono essere soddisfatti tutti i requisiti delle installazioni per animali con Livello di Biosi curezza 1 e 2 L accesso deve essere rigorosamente controllato L installazione deve essere separata da altri laboratori e dalle aree dove alloggiano gli animali mediante una zona filtro a doppia porta Si deve dotare la zona filtro di dotazioni per il lavaggio delle mani Si dovrebbe dotare la zona filtro di docce Deve esserci una ventilazione meccanica che garantisca un flusso di aria continuo attraverso tutte le stanze L aria estratta deve passare attraverso dei filtri HEPA prima di essere immes sa nell atmosfera senza ricircolo Il sistema deve essere progettato per impedire l inversione accidentale del flusso e la pressurizzazione positiva in qualsiasi parte dell alloggio per gli animali Deve essere disponibile un autoclave nello stabulario dove sia presento il contenimento del rischio biologico Il materiale infetto dovrebbe essere trattato in autoclave prima di essere spostato in altre aree dell installazione Dovrebbe essere facilmente disponibile un inceneritore sul posto o dovrebbero essere presi accordi alternativi con le autorit interessate Gli animali infetti c
53. responsabilit di garantire che siano prese le opportune azioni correttive per tutte le carenze individuate Preposto alla sicurezza e Direttore durante il processo di revisio ne La certificazione del laboratorio non dovrebbe essere completata e il laboratorio non do vrebbe essere dichiarato funzionante fino a che le carenze non saranno state adeguatamente affrontate La complessit delle operazioni dei laboratori con Livello di Biosicurezza 4 vanno oltre la por tata di questo manuale Per i dettagli e per ulteriori informazioni contattare il programma di Biosicurezza dell OMS vedere anche I Allegato 3 Tabella 5 Laboratorio di base Livello di Biosicurezza 1 indagine sulla sicurezza del laboratorio Localitai zanzara ria danni iii Data siantan Persona responsabile del laboratorio seen eeneeeennn Elemento verificato inserire la data della verifica Si No N D Commenti Laboratorio Livello di Biosicurezza Segnaletica appropriata luce ultravioletta laser allegare l apposito materiale radioattivo ecc q q q modulo per l indagine Apposite Linee guida di Biosicurezza disponibili e seguite q q q sulla sicurezza Attrezzatura di laboratorio adeguatamente etichettata per del laboratorio tipologie di rischio a rischio biologico radioattivo tossico ecc q q q Progettazione del laboratorio Progettato per essere pulito facilmente q q q Luci ultraviolette nell ambiente con interruttori
54. rischio 2 e 3 e a quelli appartenenti al gruppo di rischio 4 so lo se usata in ambiente in cui gli operatori usino tute complete a tenuta e pressurizzate Cappe di sicurezza biologica di Classe Il tipo Al La cappa di sicurezza biologica di Classe II tipo A1 illustrata nella Figura 7 Un ventilatore posto all interno aspira entrata dell aria all interno della cappa e dentro la gri glia della presa d aria un flusso d aria dall apertura frontale La velocit del flusso d aria in en trata deve essere almeno di 0 38 m s sulla superficie dell apertura frontale L aria catturata pas sa poi attraverso un filtro HEPA prima di essere immessa dall alto verso il basso nell area di la voro Siccome il flusso d aria in discesa si diffonde a circa 6 18 cm dal piano di lavoro met del flusso d aria in discesa passa attraverso la griglia frontale di recupero dell aria e l altra met pas sa attraverso la griglia posteriore di estrazione Ogni particella di aerosol che si forma sul piano di lavoro viene immediatamente catturata da questo flusso d aria discendente e passa attraverso le griglie di captazione anteriore e posteriore garantendo in tal modo il pi alto livello di prote zione del prodotto L aria viene poi espulsa attraverso il plenum posteriore nello spazio tra i filtri di entrata e di uscita collocati sopra la cappa Date le dimensioni di questi filtri circa il 70 del Varia viene riciclata attraverso il filtro di entr
55. rotori di contenimento Alcune centrifughe e altre attrezzature quali i cell sorting usati con cellu le infette possono necessitare di un venilazione aggiuntiva a scarico locale con filtraggio HEPA per un contenimento efficiente Sorveglianza sanitaria Ai laboratori di contenimento con Livello di Biosicurezza 3 si applicano gli obiettivi dei pro grammi di sorveglianza sanitaria per i laboratori di base con Livelli di Biosicurezza 1 e 2 a ec cezione delle seguenti modifiche 1 La visita medica di tutto il personale che lavora nei laboratori di contenimento con Livello di Biosicurezza 3 obbligatoria e dovrebbe includere un anamnesi dettagliata e una visita spe cifica mirata alle singole mansioni 2 Dopo una valutazione clinica soddisfacente potr essere fornita al soggetto visitato un tesse rino con un recapito medico per esempio come quello illustrato alla Figura 5 in cui sar in dicato che il soggetto impiegato presso una struttura con laboratorio di contenimento con Livello di Biosicurezza 3 Questo tesserino dovrebbe includere una fotografia del titolare del tesserino stesso poter essere conservato nel portafoglio e portato sempre con s dal titolare I nomi delle persone da contattare da inserire nel tesserino dovranno essere concordati local mente ma potrebbero includere il direttore del laboratorio un consulente medico e o un fun zionario addetto alla Biosicurezza Figura 5 Formato suggerito per il tesserino c
56. te aderenti alla protezione dai patogeni sono strumenti ragionevoli per aumentare la sicurezza nei laboratori Tali sforzi devono essere stabiliti e sostenuti da una corretta valutazione dei rischi e dei pericoli e da una regolare revisione e aggiornamento delle procedure Il controllo della con formit di queste procedure unita a chiare istruzioni sui ruoli le responsabilit e le azioni cor rettive devono costituire parte integrante dei programmi di Biosicurezza dei laboratori e degli standard nazionali per la Biosicurezza dei laboratori 46 PARTE Ill Attrezzature di laboratorio Cappe di sicurezza biologica 10 Cappe di sicurezza biologica Le cappe di sicurezza biologica BSCs sono progettate per proteggere l operatore l ambiente di laboratorio ed il materiale di lavoro dall esposizione ad aerosol e schizzi infetti che possono es sere generati durante la manipolazione di materiale contente agenti infettivi quali colture pri maria ceppi e campioni diagnostici Le particelle di aerosol si formano in qualsiasi attivit che conferisce energia a un materiale liquido o semiliquido come lo scuotimento il versamento l a gitazione o il gocciolamento su una superficie o in un altro liquido Altre attivit di laboratorio come seminare piastre di agar inoculare una fiasca per colture cellulari con una pipetta usare pi pette multicanale per frazionare sospensioni liquide di agenti infetti su piastre di microcolture omogeneizzare
57. utilizzati q q q Contenitori non riempiti in eccesso q q q Contenitori adeguatamente etichettati e chiusi q q q Ceppi di colture e altri rifiuti soggetti a regolamentazione adeguatamente decontaminati prima dello smaltimento q q q Materiali decontaminati al di fuori del laboratorio trasportati in contenitori chiusi resistenti e a prova di perdite conformemente ai regolamenti e alle normative locali q q q 40 Linee guida per la certificazione di laboratori o impianti Elemento verificato inserire la data della verifica Si No N D Commenti Protezione del personale Si rammentano al personale del laboratorio i test e le immunizzazioni adatti per gli agenti manipolati q q q Presenza di medico competente per la sorveglianza sanitaria preventiva e periodica ed in caso di esposizione accidentale q q q Guanti indossati quando si maneggia materiale infettivo o attrezzature contaminate q q q Protezione del viso fornita quando si lavora al di fuori della BSC con materiali infetti q q q Lavaggio delle mani dopo avere tolto i guanti dopo avere lavorato con agenti infettivi prima di lasciare il laboratorio q q q Agente antimicrobico disponibile per il pronto soccorso immediato q q q Conduzione del laboratorio BSC utilizzata quando esiste un potenziale rischio di creazione di aerosol spruzzi infettivi q q q Approntamento e adozione di un manuale di Biosicurezza q q q Il personale ha letto esaminato e seguito le
58. vedere Figura 1 devono essere affissi sulle por te e in altri luoghi adeguati Lo stabulario deve essere progettato cosi da poter essere facilmente pulita e tenuta in ordine Le porte devono aprirsi verso l interno e chiudersi automaticamente Il riscaldamento la ventilazione e l illuminazione devono essere adeguati Se presente una ventilazione meccanica il flusso di aria deve essere diretto verso l interno L aria scaricata viene espulsa all esterno e non deve essere fatta ricircolare in nessuna parte dell edificio L accesso deve essere limitato alle persone autorizzate Non deve essere ammesso alcun animale che non sia utilizzato con finalit sperimentali Si dovrebbe disporre di un programma per il controllo degli artropodi e dei roditori 10 Le finestre se presenti devono essere sicure antisfondamento e se apribili devono essere dotate di schermi a prova di artropodi zanzariere 11 Dopo l uso le superfici di lavoro devono essere decontaminate con disinfettanti efficaci ve dere capitolo 14 12 Si devono prevedere cappe di sicurezza biologica Classe I o II o gabbie isolatrici con appo site forniture di aria e filtri HEPA per l aria espulsa per i lavori che comportano la produzio ne di aerosol 13 Deve essere presente un autoclave sul posto o in prossimit dell installazione per animali 14 I materiali per la lettiera degli animali devono essere rimossi in modo tale da ridurre al mi nimo la produ
59. vetro immagazzinati sul pavimento Evidente rischio di inciampo Telini assorbenti puliti sulle superfici di lavoro Oggetti in vetro rotti maneggiati con strumenti meccanici spazzola e paletta molle ecc Protezione antincendio Sprinkler non ostacolati nella loro azione e non ostruiti Difetti di compartimentazione nei muri nel soffitto nel pavimento ecc Larghezza di passaggio minima di 1 m per l accesso ai laboratori Materiale depositato su impianti tubazioni e linee elettriche Eccessivo carico di incendio in laboratorio Bagni a temperatura costante riscaldata Dotati di arresto automatico per surriscaldamento e basso livello di acqua Costruiti con materiali non combustibili Q Q Q QQ Q Q a Q QQ AQA Q Q Q QA QA 49 49 4 Q Q Q Q a O QAQ QA 42 49 42 129 19 Oo QQ Q Q To Firma del verificatore per la sicurezza Data di completamento dell indagine 39 Manuale di biosicurezza nei laboratori Tabella 6 Laboratorio di base Livello di Biosicurezza 2 indagine sulla sicurezza del laboratorio Questo modulo va usato unitamente al modulo per l indagine sulla sicurezza del laboratorio con Livello di Biosicurezza 1 Localit a rese nil ae Data Persona responsabile del laboratorio L seen een seen Elemento verificato inserire la data della verifica Si No N D Commenti Cappa di sicurezza biologica BSC Data Certific
60. virus o gli organismi sugli strisci Questi devono essere maneggiati con pin ze conservati in modo appropriato e decontaminati e o autoclavati prima di eliminarli 72 Tecniche di laboratorio Attrezzature automatiche sonicatori miscelatori a vortice 1 Questi dispositivi devono essere di tipo chiuso per evitare la dispersione di aerosol e piccole gocce 2 Raccogliere i liquidi di scarico in recipienti chiusi per la successiva procedura di autoclavag gio e o di eliminazione 3 Alla fine di ciascuna sessione di lavoro i dispositivi devono essere disinfettati secondo le istru zioni del fabbricante Tessuti 1 Vanno usati fissativi alla formalina 2 Evitare di sezionare tessuti congelati Quando necessario il criostato deve essere schermato e l operatore deve proteggere il volto con uno schermo di sicurezza Per le operazioni di decon taminazione la temperatura dello strumento deve essere portata ad almeno 20 C Decontaminazione Per la decontaminazione sono raccomandati ipocloriti e disinfettanti di alto livello Le soluzioni di ipoclorito preparate di fresco dovrebbero contenere cloro libero alla concentrazione di 1 g l per uso generale e di 5 g l per spandimenti di sangue Per decontaminare le superfici pu es sere usata la glutaraldeide vedi capitolo 14 Precauzioni con materiale che potrebbe contenere prioni I prioni detti anche virus lenti sono causa delle encefalopatie spongiformi trasmissibili TSEs
61. 3 75 80 81 82 84 85 91 124 disinfezione 20 23 60 63 73 79 80 81 83 84 85 86 87 89 91 135 y dispersione di materiale infettivo precauzioni 68 donne in eta fertile 18 106 123 ebollizione 88 141 142 150 elettricita 59 77 87 122 136 138 145 emergenze 15 112 123 equipaggiamento indumenti di protezione personale 56 escherichia coli K12 96 escreti precauzioni standard 30 etanolo alcol etilico 84 141 143 147 148 158 eteri 102 etichettatura campioni 72 92 fenolo 147 ferite 59 63 69 73 76 107 fiamme libere 42 55 84 103 104 138 142 146 filtri ad alta efficienza per aria particolato HEPA 49 74 finestre 13 16 23 31 32 34 36 54 85 103 120 121 flusso d aria direzionale 16 23 24 49 51 54 55 56 57 59 61 68 69 70 allarmi 23 56 Biosicurezza livello 3 4 113 Biosicurezza livello 4 4 113 formaldeide 40 56 74 78 82 83 84 85 155 formalina 73 74 82 83 85 fornitura laboratorio 16 fumare 13 32 121 138 142 fumigazione 28 33 56 85 fuoco 16 29 75 75 77 104 121 139 140 141 147 148 149 150 153 154 155 156 fuoco estintori 77 104 105 121 gabbie 16 34 37 58 garanzia periodo laboratorio mezzi 35 gas 14 16 23 29 36 39 40 53 56 59 61 62 77 81 82 83 85 87 103 104 105 120 121 122 123 136 138 139 140 142 143 144 150 151 152 153 154 156 geni trasferimento 95 96 115 ge
62. 38 40 42 44 55 61 63 68 74 76 88 89 91 106 107 112 119 120 124 131 roditori controllo 6 14 31 41 119 rumore 56 104 105 120 sangue precauzioni standard 10 11 67 72 scarichi contaminato 23 29 41 scarpe vedi calzature 27 schermi a prova di artropodi 31 34 schermi antischizzi 102 schermi protettivi visiere 88 143 150 selenio 152 sequenze vedi trasferimento di sequenze 96 servizi di emergenza 29 77 123 servizi igienici 119 servizi di manutenzione degli edifici 113 120 siero separazione 19 29 69 75 77 123 siringhe 19 20 43 68 69 134 sistemi di espressione biologica 95 sistemi di ventilazione 28 sodio azide 135 152 sodio biselenito 153 sodio cianuro 153 sodio dicloroisocianurato NaDCC 82 sodio idrossido 153 sodio ipoclorito candeggina 74 81 85 153 154 159 soffitti 23 solforico acido 102 138 141 sonicatori 71 73 135 sorveglianza medica vedi salute e sorveglianza sanitaria 25 27 31 43 105 stabulari 12 16 30 31 32 160 Biosicurezza livello 1 31 Biosicurezza livello 2 31 Biosicurezza livello 3 32 Biosicurezza livello 4 34 livelli di contenimento 96 invertrebati 33 34 stabulari livelli di Biosicurezza ABSL 30 staff di supporto 46 68 77 159 staff vedi personale standard precauzioni 11 67 72 159 sterilizzazione 19 28 29 59 60 73 79 80 81 83 85 86 87 88 89 124 sversamenti 42 56 159
63. 6 prive di fonti di innesco ossidanti Intacca alcune perdita di coscienza avvelenamento da cianuro Stoccare in contenitori ermetici in aree separate da ossidanti Operare sotto aspirazione Evitare contatto con cute occhi mucose Usare protezioni respiratorie e guanti di gomma plastiche gomme e rivestimenti Bruciando si decompone producendo cianuro ed ossidi di azoto 6EI Acido Acetico Liquido incolore con Corrosivo causa severe Infiammabile Non respirare fumi In caso di Reazioni violente od esplosive CH CO H pungente odore ustioni vapori irritanti Flashpoint 40 C contatto con gli occhi con ossidanti m p 17 C Possibili effetti ritardati Rangeinfiammabilit sciacquare con acqua e b p 118 C 5 4 16 ricorrere al medico Indossare solubile in acqua guanti in nitrile ed occhiali protettivi Acido Liquido incolore Corrosivo per occhi Non respirare fumi usare Reagisce violentemente con basi Negli incendi cloridrico fumante con odore sistema respiratorio protezioni respiratorie In caso di solidi e soluzioni concentrate rilascia fumi 10 37 pungente cute l esposizione contatto con gli occhi esplosivo con permanganato di altamente HCI b p 121 C ripetuta ai vapori pu sciacquare con acqua potassio Produce gas tossicio tossici Cloruro di solubile in acqua comportare bronchite immediatamente e ricorrere al esplosivi a contatto con vari Idrogeno cronica medico in caso di contatto con metalli la pelle
64. 7 50 51 52 53 54 56 57 58 60 62 66 68 Biosicurezza livello 1 4 96 Biosicurezza livello 2 4 17 Biosicurezza livello 3 4 113 Biosicurezza livello 4 4 113 bromo 144 148 149 152 BSCs vedi cappe di sicurezza biologica 49 52 53 54 55 56 57 buona tecnica microbiologica GMT 11 31 cappe di classe III per laboratorio 29 30 50 52 53 70 cappe ad estrazione totale 54 calcio ipoclorito 81 calore 86 87 88 103 122 141 151 152 153 calzatura 13 22 candeggina sodio ipoclorito 74 81 82 85 centrifughe 25 43 55 58 70 76 123 124 135 136 159 certificazione 15 38 39 41 42 43 122 123 checklist sicurezza 165 cibo 30 40 41 69 83 citocalasina 144 cloridrico acido 82 139 155 156 157 cloro 138 144 145 154 156 cloro diossido 82 cloroamine 81 cloroformio 138 145 150 153 composti di ammonio quaternario 83 84 91 composti fenolici 83 congelatori 16 40 71 72 conservazione 14 40 72 75 80 101 consumo di bevande 13 69 consumo di cibo 69 83 contenimento primario cosmetici 32 41 69 Creutzfeldt Jakob malattia CJD 73 cromico acido 102 138 139 140 143 cromo VI ossido 139 decontaminazione 4 5 15 16 19 20 23 24 28 29 30 35 36 37 38 42 44 56 73 74 75 76 79 83 84 85 86 88 107 112 123 135 dietiletere 136 141 145 dimetilbenzene 157 disastri naturali 75 77 119 disinfettanti 70 7
65. Attrezzature di laboratorio 1 2 9 PON ONO Tutte le attrezzature hanno una certificazione di sicurezza Sono previsti protocolli di decontaminazione per le attrezzature da sottoporre ad interventi di manutenzione Le cappe chimiche e di sicurezza biologiche vengono periodicamente sottoposte ad inter venti di manutenzione e controllo Le autoclavi e gli altri apparecchi a pressione vengono periodicamente revisionati Le parti interne ed i rotori delle centrifughe vengono periodicamente ispezionati I filtri HEPA vengono periodicamente cambiati Vengono usate le pipette al posto degli aghi ipodermici La vetreria incrinata o sbeccata viene sempre eliminata anzich riutilizzata 123 Manuale di biosicurezza nei laboratori 9 10 11 Sono presenti contenitori idonei per i vetri rotti Ove possibile vengono utilizzati contenitori in plastica al posto di quelli in vetro Sono disponibili e vengono utilizzati i contenitori per rifiuti taglienti Materiali infetti 1 2 3 10 11 12 13 I campioni vengono ricevuti in modo sicuro I materiali che entrano in laboratorio vengono registrati Gli imballaggi dei campioni vengono aperti con cura sotto cappa di sicurezza biologica pre stando attenzione a possibili rotture e perdite Vengono indossati guanti ed altro abbigliamento protettivo durante le operazioni di apertura Il personale stato addestrato per spedire correttamente materiale infetto secondo l attu
66. Conservare lontano dagli acidi al buio al fresco e in zona ben ventilata Solfuro di Gas senza colore con Pu causare effetti sul Estremamente Lavorare in ambienti ben Forti ossidanti e acido nitrico In ambienti con idrogeno un forte odore di uova sistema nervoso infiammabile limite di ventilati Indossare occhiali Intacca metalli e plastiche presenza del H S marce centrale determinando esplosivit 4 3 46 protettivi o schermi facciali gas si avverte b p 60 C mal di testa nausea insieme a maschere specifiche rapidamente m p 85 C tosse infiammazione per il prodotto senso di alla gola perdita di nausea e coscenza e morte stanchezza Linalazione pu determinare edema polmonare Arrossamenti dolore e profonde bruciature possono determinarsi agli occhi Soluzioni di Liquido incolore con Corrosive per gli occhi Sotto forma di gas Mantenere in contenitori con Reagiscono violentemente con ammoniaca odore pungente sistema respiratorio Limiti infiammabilit chiusura ermetica In caso di metalli pesanti come il mercurio per il gas m p 78 C b p 33 C per la soluzione al 25 m p 58 C b p 38 C solubile in acqua cute e per ingestione edema polmonare ad elevati livelli di esposizione a gas e vapori 15 28 contatto con gli occhi lavare immediatamente e ricorrere al medico Lavorare sotto cappa Indossare guanti di gomma o plastica ed occhiali resistenti agli agenti chimici o con i loro sali formando
67. Supplemento di Prevenzione Oggi numero 2 anno 2005 Poste Italiane S p A Spedizione in Abbonamento Postale 70 DCB Roma Ww MANUALE DI SICUREZZA NEI LABORATORI Edizione in lingua italiana Terza edizione AinesPsA ASSOCIAZIONE ITALIANA RESPONSABILI SERVIZI PREVENZIONE E PROTEZIONE ISTITUTO SUPERIORE PER LA PREVENZIONE IN AMBIENTE SANITARIO E LA SICUREZZA DEL LAVORO Manuale di biosicurezza nei laboratori Edizione in lingua italiana AIRESPSA 2005 L ISPESL ritenendo importante e significativa una capillare diffusione della cultura della sicurezza e salute tra il personale addetto ai laboratori ha volentieri ospitato nel presente monografico di Prevenzione Oggi il lavoro di traduzione effettuato dalla Associazione dei Responsabili del Servizio di Prevenzione e Protezione delle strutture sanitarie italiane del Manuale di biosicurezza pubblicato dall OMS AIRESPSA Manuale di biosicurezza nei laboratori edizione italiana AIRESPSA 2005 Pubblicato dall Organizzazione Mondiale della Sanit con il titolo Laboratory Biosafety Manual terza edizione 2004 Organizzazione Mondiale della Sanit Il Direttore Generale dell Organizzazione Mondiale della Sanit ha ceduto i diritti di traduzione per l edizione in lingua italiana ad AIRESPSA che l unica responsabile per l edizione in lingua italiana 2004 ISBN 88 89415 15 0 II Sommario Prefazione VII Ringraziamenti VIII Ringraziam
68. Tabella 8 mostra Cappe di Sicurezza Biologica raccomandate per ogni tipo di protezione Le sostanze chimiche tossiche o volatili non devono essere utilizzate con una cappa che ricicla l aria nell ambiente cio le BSCs di Classe I che non sono collegate al sistema di estrazione del l edificio o con quelle di Classe ITA1 o Classe ITA2 Le BSCs di Classe IIB1 sono ammesse per l u tilizzo di quantit minime di radionuclidi o sostanze chimiche volatili Per lavorare con quantit significative di radionuclidi o sostanze chimiche volatili bisogna utilizzare una BSC di Classe IIB2 detta anche ad estrazione totale L uso delle cappe di sicurezza biologica nei laboratori Installazione La velocit del flusso d aria che entra dall apertura frontale in una BSC di circa 0 45 m s A que sta velocit l integrit del flusso d aria unidirezionale fragile e pu facilmente essere interrotto da spostamenti d aria generati dal passaggio di persone vicino alla cappa dall apertura delle fi nestre dai condizionatori dall apertura e chiusura di porte La localizzazione ideale per le BSCs dovrebbe essere lontana da zone di passaggio e da potenziali correnti d aria Dove possibile bi sognerebbe lasciare 30 cm di spazio libero dietro e da ogni lato della cappa per permettere le ope razioni di manutenzione Sopra la cappa pu essere richiesto uno spazio libero di 30 35 cm per permettere accurate misurazioni della velocit dell aria all estratt
69. Tabella A5 1 Sostanze chimiche rischi e precauzioni Sostanza Propriet fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Acetaldeide Liquido incolore o gas Moderato irritante per Estremamente No fiamme libere scintille non Pu formare perossidi esplosivi CH CHO con un pungente odore occhi e vie respiratorie infiammabile miscele fumare n contatto con superfici a contatto con l aria Pu di frutta Effetti su sistema aria vapori sono calde Stoccare in contenitori polimerizzare in presenza di m p 121 C nervoso centrale esplosive ermetici in aree separate da tracce di metalli ed in presenza b p 21 C apparato respiratorio Flashpoint 39 C ossidanti immagazzinare solo se di acidi e o basi un agente reni Rangeinfiammabilit stabilizzato Usare sotto cappa o fortemente riducente che Possibile cancerogeno 4 57 buona ventilazione Indossare reagisce violentemente con guanti di gomma occhiali ossidanti varie sostanze protettivi protezione delle vie organiche alogeni acido respiratorie solforico ed ammine Acetilene Gas incolore con un Semplice asfissiante Estremamente Usare guanti isolanti per il freddo Agente fortemente riducente CH CH leggero odore simile lesioni da freddo a infiammabile per proteggere la cute ed reagisce violentemente con all etere o all aglio contatto con la cute Rangelnfiammabilita occhiali di sicurezza o schermi ossidanti e con
70. a il termine usato per descrivere norme tecnologie e pratiche di contenimento che sono realizzate per prevenire esposizioni involontarie o fuoriuscite accidentali di agenti patoge ni e tossine Bioprotezione si riferisce a misure di sicurezza istituzionali e personali elaborate per prevenire perdite furti usi scorretti fuoriuscite accidentali o intenzionali di patogeni o tossine Efficaci pratiche di Biosicurezza sono le basi fondamentali per le attivit di Bioprotezione dei la boratori Attraverso la valutazione dei rischi elaborata come parte integrante di un programma istituzio nale di Biosicurezza le informazioni sono raccolte tenendo conto del tipo di agenti biologici uti lizzati della loro localizzazione fisica del personale che a contatto con essi e dell identificazio ne di un responsabile Queste informazioni possono essere utilizzate per verificare se una istituzione possiede agenti biologici che costituiscono un attrattiva per coloro che potrebbero utilizzarli impropriamente Le normative nazionali dovrebbero essere sviluppate per riconoscere e indirizzare le responsabilit delle istituzioni alla protezione da usi impropri di campioni biologici patogeni e tossine Un programma specifico per laboratori bioprotetti deve essere preparato e sviluppato per ogni struttura organizzativa o servizio secondo i requisiti delle stesse della tipologia delle analisi che si conducono in quel laboratorio e delle caratteristiche fisi
71. a salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Osmio Cristalli giallo pallido di Molto tossico per Potente agente Conservare i contenitori tetrossido odore pungente inalazione ingestione e ossidante Non ermeticamente chiusi e in zona 050 m p 40 C contatto con la pelle combustibile ma ben ventilata Lavorare con il b p 130 C causa gravi ustioni e accelera la solido e le soluzioni sotto cappa sublima sotto il punto di irritazione vapori il combustione di altre chimica Lavorare con occhiali di ebollizione solubile in solido e le soluzioni sostanze protezione dai prodotti chimici e acqua sono corrosivi per la guanti protettivi Per preparare le pelle e le vie soluzioni aggiungere la fiala respiratorie Linalazione integra al volume d acqua pu causare edema richiesto chiudere ed agitare per polmonare rompere la fiala Ossigeno Gas compresso Ad elevate Non combustibile ma Assenza di fiamme libere Forte ossidante reagisce con 0 incolore concentrazioni accellera la scintille fumo contatto con materiali combustibili e riducenti m p 218 4 C irritazione delle vie combustione di altre sostanze infiammabili producendo fuoco e pericolo di b p 183 C respiratorie sostanze esplosione Reagisce con oli Riscaldandosi pu causare aumento nella pressione del contenitore con rischio di esplosione grassi idrogeno e liquidi solidi e gas infiammabili Pentossido di Fosforo P 0
72. a sul foro e si riduce la somministrazione di calore Pressione e temperatura aumentano fino a che la valvola di sicurezza entra in funzione sfiatando ad un valore predefinito Questo il pun to di partenza per tenere conto del tempo Alla fine del ciclo spegnere la sorgente di calore e pri ma di aprire il coperchio lasciar scendere la temperatura ad 80 C o meno WHO 02 139 Carica delle autoclavi I materiali devono essere sistemati nella camera ad una certa distanza uno dall altro in modo da facilitare la penetrazione del vapore e la rimozione dell aria I contenitori devono permettere al vapore di entrare a contatto con il contenuto Precauzioni nell uso di autoclavi Le regole seguenti possono ridurre al minimo i rischi connessi all uso di contenitori pressurizzati 1 La responsabilit delle operazioni e della manutenzione ordinaria deve essere assegnata a personale addestrato 2 Il programma della manutenzione preventiva deve includere l ispezione periodica da parte 87 Manuale di biosicurezza nei laboratori di personale qualificato della camera della guarnizione del coperchio e di tutti gli strumen ti di misura e controllo 3 Il vapore deve essere saturo e privo di agenti chimici ad esempio inibitori della corrosione che potrebbero contaminare gli oggetti nel corso della sterilizzazione 4 Tutti i materiali da autoclavare devono essere posti in contenitori che permettano la pronta rimozione dell aria ed u
73. a visto la collaborazione di alcuni tra i maggiori esperti al mondo nelle scienze della sicurezza e per la versione in lingua italiana la collaborazione dei Responsabili Servizi Prevenzione e Protezione di Aziende sanitarie e IRCS II Manuale si rivolge prevalentemente al personale dei laboratori clinici e di ricerca ma anche ai Servizi Prevenzione e Protezione ai Medici Competenti e a tutti coloro che operano nel campo della sicurezza in Ambiente di Lavoro L Organizzazione Mondiale della Sanit ha affidato mediante atto convenzionale ad AIRESPSA Associazione Italiana Responsabili Servizi Prevenzione e Protezione in Ambiente Sanitario la traduzione e i diritti d autore della versione italiana AIRESPSA nell ambito dell ormai pluriennale rapporto di collaborazione con l Istituto Superiore per la Prevenzione e la Sicurezza sul Lavoro ISPESL Dipartimento Formazione e aggiornamento ha definito una collaborazione per la supervisione scientifica la stampa e la diffusione di questo lavoro che auspichiamo possa dare un forte contributo allo sviluppo della cultura per la sicurezza nei laboratori del nostro Paese Nella versione italiana abbiamo cercato di introdurre anche alcuni concetti maggiormente legati alla nostra realt normativa ma resta evidente che quanto previsto dalle norme di sicurezza a carattere nazionale ed europeo sono il riferimento centrale Dr Dimitri Sossai Presidente AIRESPSA ISBN 88 89415 15 0
74. agisce come organo consulente del UNCETDG Le pi importanti modifiche alle rego le del trasporto delle sostanze infettive furono introdotte con la 13 edizione 2003 del Model Regulations prodotto dalle Nazioni Unite 40 Dalla OMS disponibile una guida ai fonda mentali emendamenti adottati 44 Le norme internazionali non devono intendersi come sovraordinate a quelle nazionali Co munque in situazioni ove non esistano norme nazionali possono essere seguite quelle inter nazionali importante notare che il trasporto internazionale di materiali infettivi soggetto anche alle norme nazionali che regolano le importazioni e le esportazioni 90 Introduzione al trasporto di sostanze infettive La configurazione base del triplo contenitore Il triplo contenitore per il trasporto di materiali infettivi o potenzialmente tali illustrato in Figura 11 Il sistema costituito da tre strati il contenitore primario l involucro secondario e l involucro esterno Il contenitore primario contenente il campione deve essere a tenuta stagna e dotato di etichetta descrittiva del contenuto Il contenitore primario avvolto con sufficiente materiale per assorbi re tutto il fluido in caso di rottura o perdita L involucro secondario a tenuta stagna serve a racchiudere e proteggere il contenitore primario In uno stesso involucro secondario possono essere contenuti pi contenitori primari ciascuno av volto con assorbente In alcuni testi no
75. agnesio fosforo o sulfuri consultare un medico Auramina Scaglie o polvere gialle Nocivo per inalazione Evitare il contatto della cute ed Agenti fortemente ossidanti 4 4 Carbon m p 136 C ingestione e contatto inalazione della polvere imidoilbis insolubile in acqua cutaneo Pu provocare Indossare guanti in gomma o N N dimetil irritazione degli occhi o plastica ed occhiali resistenti benzenamina della cute Possibile cancerogeno agli agenti chimici Operare sotto cappa od indossare un filtrante facciale per la polvere Benzene Liquido incolore volatile Linalazione di vapori ha Molto infiammabile Stoccare i contenitori in aree Pu reagire violentemente con CH con caratteristico odore effetto sul sistema Flashpoint 11 C ben ventilate e lontano da fonti di ossidanti compreso acido aromatico nervoso centrale Rangeinfiammabilit accensione Operare sotto cappa cromico permanganato di m p 6 C provocando vertiginie 1 3 8 o con adeguata aspirazione potassio ed ossigeno liquido b p 80 C cefalea ad elevate localizzata Indossare protezione solubile in acqua concentrazioni per gli occhi e guanti in nitrile o incoscienza e morte In PVC Prevenire scariche caso di esposizione elettrostatiche collegandosi a cronica o prolungata vi terra rischio di anemia aplastica leucemia epatotossicit Pu essere assorbito attraverso la cute Benzidina Polvere giallo brillante Pu essere assorbita Combustibile produce Da evitare
76. alcuni prodotti danno solamente una valutazione approssimativa del livello di glutaraldeide attiva disponibile nelle soluzioni di lavoro Le soluzioni di glutaraldeide vanno scartate se divengono torbide La glutaraldeide tossica ed irritante per pelle e mucose ed il contatto con essa deve essere evi tato Si deve usare all interno di dispositivi che ne contengano i vapori oppure in aree ben venti late Non se ne raccomanda l uso sotto forma di soluzione per nebulizzazione e per la deconta minazione di superfici Seguire la normativa nazionale sulla sicurezza chimica Composti fenolici I composti fenolici un vasto gruppo di agenti figurano tra i primi germicidi utilizzati ma recenti direttive di sicurezza ne limitano l uso Sono attivi contro le forme vegetative dei batteri e dei vi rus con involucro lipidico e quando specificamente indicato anche contro i micobatteri L attivi t nulla contro le spore e variabile contro i virus con involucro non lipidico Molti prodotti fe nolici sono usati per la decontaminazione di superfici ed alcuni ad esempio triclosan e clorossi lenolo figurano tra gli antisettici pi comuni La presenza di triclosan comune nei prodotti per il lavaggio delle mani principalmente atti vo contro le forme vegetative dei batteri e sicuro per pelle e le mucose Tuttavia studi di labo ratorio hanno evidenziato che ceppi batterici divenuti resistenti a basse concentrazioni di triclo san mostra
77. ale normativa nazionale e internazionale in materia I piani di lavoro vengono mantenuti puliti ed ordinati I rifiuti infetti vengono asportati quotidianamente o ancora pi frequentemente ed eliminati in modo sicuro Tutti i membri del personale conoscono le procedure da attuare in caso di rottura e di versa mento di materiali infetti L efficienza delle attrezzature usate per la sterilizzazione viene verificata con indicatori chi mici fisici e biologici Le centrifughe vengono decontaminate quotidianamente Sono disponibili contenitori di sicurezza per le centrifughe Vengono usati idonei disinfettanti Sono correttamente usati stato fatto un addestramento specifico per il personale che lavora nei laboratori livello di Biosicurezza 3 e laboratori livello di Biosicurezza 4 Prodotti chimici e sostanze radioattive 1 DPEN N 9 10 11 12 124 I prodotti chimici incompatibili sono mantenuti separati all interno del magazzino e quando vengono manipolati Tutti i prodotti chimici sono correttamente etichettati con nome e precauzioni d uso I cartelli indicanti pericolo chimico sono esposti in maniera visibile Sono disponibili kit assorbenti da utilizzare in caso di versamenti accidentali Il personale stato addestrato per intervenire in caso di perdite Le sostanze infiammabili vengono immagazzinate in modo corretto e sicuro in quantitativi minimi e all interno di appositi armadi per infiammabili
78. amera di compensazione Guarnizioni alle porte a tenuta d acqua Guarnizioni e sigilli sui pannelli per visione e finestre Tenuta delle barriere e dei passaggi interbloccati Verifica integrit strutturale pavimenti muri e soffitto in calcestruzzo Verifica rivestimento barriera pavimenti muri e soffitto Funzioni di isolamento e pressurizzazione involucro di contenimento Livello di Biosicurezza 4 Cappe di sicurezza biologica Autoclavi 38 39 40 41 42 Linee guida per il collaudo di un laboratorio o di un installazione Allarmi e sistema ad azoto liquido Sistemi di rilevamento acqua per esempio in caso di allagamento all interno della zona di contenimento Doccia di decontaminazione e sistemi ad additivi chimici Sistemi di neutralizzazione e lavaggio gabbie Gestione dei rifiuti 35 Manuale di biosicurezza nei laboratori 8 Linee guida per la certificazione di laboratori o impianti I laboratori sono ambienti complessi e dinamici Gli odierni laboratori clinici e di ricerca bio medica devono essere in grado di adattarsi rapidamente alle pressioni e alle esigenze della sa lute pubblica in continua crescita Un esempio la necessit che i laboratori hanno di adegua re le priorit per raccogliere le sfide di patologie infettive emergenti o riemergenti Al fine di garantire che l adattamento e la manutenzione siano intrapresi prontamente e in un modo si curo e adeguato tutti i laboratori clinici
79. appa Questa piccola apertura rende anche possibile il fatto che l aria interna sia aspirata nel sistema di estrazione dell edificio La capacit di espul sione del sistema di captazione dell edificio deve essere sufficiente per catturare sia l aria in en trata che in uscita dalla cappa Il dispositivo deve essere rimovibile o progettato in modo tale da consentire le operazioni di controllo della cappa Generalmente l efficacia del dispositivo colle gato alla BSC non risente delle correnti d aria interne all edificio Le BSCs di Classe IIB1 e IIB2 sono direttamente collegate cio senza alcuna apertura o al siste ma di estrazione dell edificio o preferibilmente con un canale dedicato Le caratteristiche del si stema di presa dell aria dell edificio devono essere strettamente compatibili con i requisiti di fab bricazione della cappa sia per quanto riguarda il volume che la pressione statica Le BSCs diret tamente collegate all esterno risentono maggiormente dell usura del tempo rispetto alle BSCs che riciclano l aria nell ambiente o sono collegate ad un manicotto Come scegliere una cappa di sicurezza biologica Una BSC dovrebbe essere innanzitutto scelta tenendo conto del tipo di protezione necessaria protezione del prodotto protezione degli operatori da microrganismi appartenenti ai gruppi di rischio 1 4 protezione personale dall esposizione a radionuclidi e sostanze chimiche volatili o la combinazione di queste La
80. apparecchiature elettriche che producono scintille o all esposizione diretta dei raggi solari Piccoli recipienti monouso per gas non devono essere inceneriti a b mento sulle porte di ingresso La valvola principale di alta pressione deve essere chiusa quando il recipiente non in uso e quando il locale non occupato locali dove vengono usati e o mantenuti recipienti cilindrici di gas infiammabili devono essere identificati con segnali di avverti Per ulteriori informazioni consultare i riferimenti bibliografici 1 e 49 51 e l allegato 5 103 Manuale di biosicurezza nei laboratori 18 Ulteriori rischi nei laboratori Il personale dei laboratori pu essere esposto ad altri rischi dovuti a forme di energia come il fuo co l elettricit le radiazioni e il rumore Nel presente capitolo vengono date informazioni gene rali su ciascuna di esse Rischio incendio essenziale una stretta collaborazione tra gli addetti interni alla sicurezza e i servizi locali di prevenzione incendi Oltre al rischio chimico deve essere preso in considerazione l effetto del fuoco sulla possibile diffusione di materiali infettivi Ci pu essere decisivo nella scelta di estinguere o contenere l incendio consigliabile l assistenza dei servizi locali di prevenzione incendi nell addestramento del personale dei laboratori addetto alla prevenzione incendi all intervento immediato in caso di incendio e nell uso di attrezz
81. are le cappe di Classe I e Classe II reperibile un apparecchio che autonoma mente genera diffonde e neutralizza la formaldeide gassosa In alternativa occorre mettere nel la cappa un adatta quantita di paraformaldeide per una concentrazione finale nell aria dello 0 8 in un padella sopra una piastra elettrica calda e bicarbonato d ammonio in una quantit 10 maggiore rispetto alla paraformaldeide in un altra padella sopra una seconda piastra calda Collegare i comandi dei fornelli fuori della cappa cos che l operazione possa essere controllata dall esterno Se l umidit relativa sotto il 70 mettere nella cappa anche un contenitore aperto di acqua calda prima che la chiusura anteriore sia sigillata Assicurare con robusto nastro adesi vo uno spesso telo di plastica sull apertura anteriore e sul portello di scarico per essere sicuri che il gas non possa infiltrarsi nella stanza Sigillare con nastro anche l entrata dei comandi elettrici che passano attraverso la chiusura anteriore Accendere la piastra per la pentola della paraformaldeide e spegnerla quando tutta la sostanza vaporizzata Lasciare la cappa indisturbata per almeno 6 h Accendere poi il fornello per la se conda pentola e lasciar vaporizzare il bicarbonato d ammonio Questa piastra viene quindi spen ta e viene messo in funzione il ventilatore della cappa per due intervalli di circa 2 secondi ognu no per far circolare i vapori di bicarbonato d ammonio Lascia
82. aria potenzialmente contaminata LU aria filtrata da filtro assoluto HEPA WHO 02 135 vista laterale Le cappe di protezione biologica di Classe I sono state le prime BSC riconosciute e grazie alla lo ro facile progettazione sono ancora ampiamente utilizzate in tutto il mondo Hanno il vantaggio di proteggere gli operatori e l ambiente e possono essere anche utilizzate per lavori con radio nuclidi e prodotti chimici volatili tossici Poich l aria che penetra sul piano di lavoro attraverso l apertura frontale non sterile non si ritiene che questo tipo di cappa sia consistentemente affi dabile per la protezione del prodotto 50 Cappe di sicurezza biologica Cappe di sicurezza biologica di Classe Il Poich aumentato l uso di colture cellulari e tissutali per la moltiplicazione di virus e per altri scopi non stato pi considerato soddisfacente il passaggio di aria non sterile nell area di lavo ro Le BSC di Classe II furono progettate non solo per proteggere il personale ma anche per pro teggere i materiali sul piano di lavoro dalla contaminazione dell aria in entrata Le cappe di si curezza biologiche di Classe II di cui esistono quattro tipi A1 A2 B1 e B2 si differenziano da quelle di Classe I poich permettono che l area di lavoro sia attraversata solo da aria filtrata con un filtro HEPA e quindi resa sterile La BSC di Classe II pu essere usata per lavorare con agenti infettivi appartenenti al Gruppo di
83. ata nell area di lavoro il restante 30 passa attra verso il filtro in uscita nel laboratorio o all esterno Figura 7 Rappresentazione schematica di una cappa di Biosicurezza Classe IIA1 A apertura frontale B vetro per visione all interno C filtro dell aria esausta HEPA D condotta dell aria po steriore E filtro HEPA supplementare F pompa VI aria in entrata E aria potenzialmente filtrata L aria filtrata da filtro assoluto HEPA WHO 02 137 vista frontale vista laterale 51 Manuale di biosicurezza nei laboratori L aria espulsa dalla cappa di sicurezza biologica di Classe IIA1 pu essere riciclata nell ambien te o essere espulsa all esterno dell edificio attraverso un manicotto collegato ad uno condotto de dicato o attraverso il sistema di estrazione dell edificio Il riciclo dell aria all interno della stanza ha il vantaggio di abbassare i costi energetici poich l aria riscaldata e o raffreddata non viene espulsa nell ambiente circostante Il collegamento ad un siste ma di dotti di estrazione permette anche che alcune cappe di sicurezza biologica siano utilizzate per lavorare con minime quantit di radionuclidi o sostanze chimiche tossiche volatili Tavola 8 Classe II tipo A2 collegata all esterno cappe di sicurezza biologica B1 e B2 Le cappe di sicurezza di Classe IIA2 collegate all esterno quelle di Classe IIB1 Figura 8 e di Classe IIB2 si differenziano rispetto alle cappe di tipo IIA1 L
84. ati alla progettazio ne all uso e al mantenimento in buone condizioni delle attrezzature Il preposto della Biosicu rezza dovrebbe essere in grado di rapportarsi efficacemente anche con il personale amministra tivo tecnico ed ausiliario Inoltre fondamentale sar un rapporto di collaborazione con il Servi zio Prevenzione e Protezione con il quale il preposto della Biosicurezza dovrebbe anche 1 fornire consulenze in materia di Biosicurezza 2 effettuare verifiche periodiche interne sulle metodologie tecniche sulle procedure sui proto colli sugli agenti biologici sui materiali e sulle attrezzature 111 Manuale di biosicurezza nei laboratori 3 effettuare consultazioni ed incontri con le persone appropriate in merito alla mancata attua zione di quanto prescritto dal manuale di Biosicurezza 4 verificare che tutto il personale abbia ricevuto adeguate istruzioni in materia di Biosicurezza fornire una formazione continua in materia di Biosicurezza 6 svolgere indagini sugli incidenti nei quali potrebbe essersi verificata una propagazione acci dentale di materiale potenzialmente infetto oppure tossico relazionando sugli esiti di tali in dagini e sui provvedimenti adottati al responsabile del laboratorio e al comitato per la Biosi curezza 7 collaborare con il personale medico in merito all insorgenza di patologie attribuibili ad even tuali contaminazioni avvenute in laboratorio 8 assicurare una idonea decontaminazione in ca
85. atori devono contenere No Raccomandato Si l attrezzatura a loro necessaria 13 materiali infetti compresi gli animali Ove opportuno Si quando Si devono essere manipolati in cappe di sicurezza l infezione isolatori o altri adeguati contenitori veicolata dall aria 14 Inceneritori per l eliminazione delle Raccomandato Si disponibile Si sul posto carcasse di animali 15 Mezzi e procedure per il trattamento Si Si Si con sterilizzazione dei rifiuti 16 Trattamento delle acque reflue No Facoltativo Si PARTE Linee guida per la Biosicurezza Valutazione del rischio microbiologico 2 Valutazione del rischio microbiologico Alla base della Biosicurezza c la valutazione del rischio Sebbene esistano molti strumenti che possono essere di aiuto per la valutazione del rischio legato ad una data procedura o ad un espe rimento la componente pi importante rimane il giudizio professionale La valutazione del ri schio dovrebbe essere fatta da persone esperte e informate sulle caratteristiche specifiche dei mi crorganismi da usare le strumentazioni e le procedure necessarie i modelli animali che possono essere impiegati le strutture e le attrezzature disponibili per il contenimento Il Direttore del laboratorio o il ricercatore responsabile del laboratorio hanno la responsabilit di assicurare un adeguata valutazione del rischio da effettuare in collaborazione con il Comitato e con il personale dedicato alla Biosicurezza dell Istitu
86. attuate le seguenti procedure 1 avvertire il competente addetto alla sicurezza 2 allontanare dall area il personale non interessato NOT RONP 102 W Prodotti chimici pericolosi occuparsi delle persone che possono essere state contaminate 4 se si tratta di spandimenti di prodotti infiammabili estinguere le fiamme libere intercettare i gas nel locale e in locali adiacenti se possibile aprire le finestre e disconnettere apparecchi elet trici che possono produrre scintille O DI evitare di inalare vapori prodotti dallo spandimento ventilare l area se ci favorevole alla sicurezza 7 procurarsi le attrezzature necessarie per pulire l are dello spandimento Gas compressi e liquefatti In tabella 14 sono elencate le informazioni sull immagazzinamento di gas compressi e liquefatti Tabella 14 Immagazzinamento di gas compressi e liquefatti Contenitore Informazioni per l immagazzinamento Contenitori cilindrici per gas compressi e recipienti per gas liquefatti devono essere fissati saldamente es con catene al muro o ad una panchina solida cos da evitare che possano essere inavvertitamente mossi devono essere trasportati tramite carrelli e con i tappi al loro posto devono essere immagazzinati in siti opportuni ad idonea distanza dal laboratorio L area deve essere chiusa a chiave e segnalata opportunamente non devono essere posizionati vicino a fonti di calore fiamme libere
87. ature per la lotta antincendi In ciascun locale nei corridoi e negli atri devono essere esposti avvisi istruzioni e indicazio ni per percorsi di esodo in caso di incendio Le cause pi comuni di incendio nei laboratori sono sovraccarico dei circuiti elettrici carenza di manutenzione elettrica es diminuzione di isolamento nei cavi tubazioni di gas eccessivamente lunghe o prolunghe elettriche apparecchiature lasciate inutilmente accese apparecchiature non idonee all ambiente laboratorio fiamme libere tubazioni del gas deteriorate manipolazione o conservazione impropria di materiali infiammabili o esplosivi conservazione impropria di prodotti chimici incompatibili 0 apparecchiature che producono scintille posizionate vicino a sostanze e vapori infiam mabili 11 ventilazione impropria o inadeguata Attrezzature antincendio devono essere posizionate vicino alle porte di ingresso e in posti strategici nei corridoi e negli atri Possono includere naspi secchi d acqua o di sabbia ed estin tori Gli estintori devono essere ispezionati in Italia ogni sei mesi e ricaricati periodicamen te e la loro scadenza deve essere tenuta costantemente aggiornata Nella tabella 15 sono elen cati i tipi e l uso degli estintori SON Se SN 104 Ulteriori rischi nei laboratori Tabella 15 Tipi e uso degli estintori Tipo Usare con Non usare con Acqua Carta legno stoffa Impianti e apparecchiature elet
88. ausa caso di contatto con la pelle quantit di calore quando metalli edema polmonare lavare immediatamente mescolato con acqua alluminio rimuovere i vestiti contaminati conservare in un contenitore ben zinco stagno Indossare guanti in gomma chiuso naturale o sintetica e protezione degli occhi anche per soluzioni diluite Potassio Cristalli viola Corrosivo se ingerito o Potente agente Indossare indumenti protettivi Reagisce violentemente o in permanganato m p 240 C se la polvere inalata ossidante pu protezione degli occhi e modo esplosivo se mescolato KMn0 con decomposizione Irritazione severa degli provocare l accensione respiratori antipolvere se viene con un ampia variet di composti facilmente solubile in occhi e del tratto di materiali combustibili prodotta polvere inorganici o organici o metalli in acqua respiratorio l inalazione polvere della polvere pu causare edema polmonare Potassio Cristalli bianchi Tossico per ingestione e Indossare indumenti protettivi tellurito deliquescenti molto inalazione della polvere K TeO solubile in acqua Irritazione della pelle e degli occhi Piridina Liquido incolore di Colpisce il sistema Facilmente Lavorare con ventilazione Reagisce violentemente con forti C H N odore caratteristico nervoso centrale infiammabile aspirazione locale o protezione ossidanti e acidi forti m p 42 C b p 115 C causando vertigini mal di testa nausea respiro corto perdita di coscienza Pu
89. avarsi le mani anche dopo aver manipolato animali o materiale infetto e pri ma di lasciare le aree di lavoro del laboratorio Occhiali di sicurezza schermi facciali o altri dispositivi di protezione devono essere indossati quando valutato necessario proteggere occhi e faccia da spruzzi urti e sorgenti di radiazio ne ultravioletta artificiale proibito indossare gli indumenti protettivi di laboratorio al di fuori del laboratorio ad es nelle mense bar uffici biblioteche ambienti comuni al personale bagni Nei laboratori non si devono indossare calzature aperte E vietato mangiare bere fumare truccarsi e maneggiare le lenti a contatto nelle aree di lavo ro del laboratorio vietato conservare cibi o bevande in qualunque zona delle aree di lavoro del laboratorio Gli indumenti protettivi che sono stati usati nel laboratorio non devono essere conservati ne gli stessi armadietti o mobiletti usati per gli indumenti personali Procedure severamente vietato pipettare a bocca Non si deve portare nessun materiale alla bocca Le etichette non devono essere leccate Tutte le procedure devono essere effettuate in modo da minimizzare la formazione di aerosol o goccioline L uso di aghi ipodermici e siringhe deve essere limitato Non devono essere usati in sostitu zione di altri strumenti per aspirare o per qualunque altro scopo che non siano iniezioni pa renterali o per l aspirazione di liquidi
90. azione o la camera di fumigazione non sia stata decontaminata vedere capitolo 10 Laboratorio con tute complete a tenuta pressurizzata Un laboratorio che preveda l uso di tute complete a tenuta pressurizzata differisce in misura significativa per quanto concerne i re quisiti di progettazione e di dotazione da un laboratorio con Livello di Biosicurezza 4 con cappe di sicurezza biologica di Classe III Nei laboratori con uso di tute a tenuta pressuriz zate i percorsi prevedono che si passi in aree di vestizione e decontaminazione doccia pri ma di entrare nelle zone in cui vengono manipolati i materiali infettivi Nel percorso di usci ta dal laboratorio di contenimento deve essere presente una doccia per la decontaminazio ne della tuta a tenuta pressurizzata Sempre nel percorso di uscita deve essere presente una ulteriore doccia separata dalla prima per l operatore che ha dismesso la tuta a tenuta pres surizzata Il personale che in questi laboratori entra nell area in cui vengono manipolati i materiali infettivi deve indossare una tuta a tenuta in un solo pezzo mantenuta in pressio ne positiva dotata di filtri HEPA e con fornitura di aria L aria alla tuta deve essere fornita da un sistema che abbia una capacit ridondante del 100 con una fonte di aria indipen dente da utilizzarsi nell eventualit di un emergenza L ingresso nel laboratorio deve av venire attraverso un filtro con porte interbloccate a tenuta d aria Deve essere pre
91. azione verifica filtri e flussi almeno annuale q q q Localit Superficie della BSC strofinata con un disinfettante adeguato all inizio e alla fine di ogni procedura q q q Marchio Griglia frontale e filtro di scarico non ostruiti q q q Tipo Uso di fiamme libere all interno della cappa q q q N di serie Il circuito del vuoto ha filtri interni e bottiglie con disinfettante in uso q q q BSC posizionata in modo da non subire influenze negative nei suoi flussi d aria a causa dell apertura di porte o suo posizionamento nell ambiente q q q BSC utilizzata dove c il potenziale rischio di creare delle aerosol q q q Laboratorio Accesso limitato e consentito solo al personale autorizzato q q q Ingresso limitato al personale informato di tutti i potenziali rischi q q q Cartello di rischio biologico affisso sulla porta del laboratorio a seconda dei casi q q q e Informazioni sul cartello precise e aggiornate q q q Cartello leggibile e non deturpato q q q Tutte le porte sono chiuse q q q Decontaminazione Decontaminante specifico per gli organismi in uso q q q Tutti i versamenti e gli incidenti che coinvolgono materiali infetti riferiti al direttore del laboratorio q q q Decontaminante adeguato utilizzato durante la pulizia dei versamenti q q q Superfici di lavoro decontaminate prima e dopo ogni procedura giornalmente o dopo i sversamenti q q q Manipolazione dei rifiuti contaminati Contenitori di rifiuti infetti adeguatamente
92. azioni anaerobiche Esplosione Dispersione di materiale infettivo e assicurarsi dell integrit delle clips metalliche di chiusura della capsula del catalizzatore Essiccatori Implosione Dispersone di frammenti di vetro e di materiale infettante e posizionare in solido contenitore rinforzato metallico Omogenizzatori Trituratori frullatori di tessuti Aerosol Percolamenti Rottura di contenitori e operare ed aprire le attrezzature in cappa di sicurezza biologica e usare attrezzatura progettata specificatamente per prevenire perdite dal supporto del rotore o dalla guarnizione a tenuta oppure usare uno stomacher e aprire la tazza del frullatore dopo aver consentito la deposizione dell aerosol 30 minuti Refrigerare per favorire la condensazione dell aerosol e se si usano trituratori di tessuti manuali avvolgere il tubo in materiale assorbente di cotone Sonicatori Lavaggio ad ultrasuoni Aerosol Danni all udito Dermatiti e operare ed aprire le attrezzature in cappa di sicurezza biologica o in ambiente a tenuta e isolare acusticamente le lavatrici prevenire l emissione di subarmoniche e indossare guanti per proteggere la cute dagli effetti chimici dei detergenti Agitatori di colture Scuotitori Produzione di aerosol Spruzzi Spandimenti e operare in cappa di sicurezza biologica od usando specifici mezzi di contenimento primario e usare palloni piastre di coltura con chiusura a vite ed as
93. biologica Per tutte le operazioni successive vanno indossati guanti resistenti di gomma dura se necessario rivestiti di guanti monouso adeguati Pinze o cotone dovrebbero essere usati per rimuovere i frammenti di vetro Tutte le provette rotte frammenti di vetro materiale di sostegno ed il rotore 76 Piani e procedure di emergenza vanno immessi in un disinfettante non corrosivo che sia sicuramente efficace contro il microrga nismo rilasciato vedi capitolo 14 Le provette integre ancora sigillate possono essere poste nel disinfettante in un contenitore separato e recuperate Il vano della centrifuga dovrebbe essere pulito con lo stesso disinfettante alla diluizione appro priata quindi pulito ancora con acqua ed asciugato Tutto il materiale utilizzato nella pulitura dovrebbe essere trattato come materiale infetto Rottura di provette all interno di contenitori sigillati contenitori di sicurezza Caricare e scaricare i cestelli sigillabili da centrifuga sotto cappa di sicurezza biologica In ca so di sospetta rottura all interno del cestello di sicurezza allentare il coperchio ed autoclava re il cestello In alternativa l interno del cestello di sicurezza pu essere disinfettato chimica mente Incendio e disastri naturali Coinvolgere nella preparazione dei piani di emergenza i Vigili del Fuoco e gli altri servizi com petenti Ad essi dovrebbe essere stato comunicato in anticipo quali ambienti contengono mate riali potenzia
94. cali e na zionali Devono essere coinvolti anche altri servizi di emergenza per esempio i vigili del fuoco la polizia e gli ospedali designati per il ricevimento 27 Manuale di biosicurezza nei laboratori 6 Stabulari Coloro che utilizzano animali per finalit sperimentali e diagnostiche hanno l obbligo morale di prendere ogni precauzione per evitare di causare loro dolore o sofferenza non necessari Gli ani mali devono essere provvisti di alloggi igienici e confortevoli e di una quantit adeguata di ac qua e di cibo sano Alla fine dell esperimento devono essere trattati con rispetto Per ragioni di sicurezza l alloggio degli animali dovrebbe essere un unit distaccata e indipen dente Qualora sia contiguo al laboratorio dovrebbe essere progettato in modo tale da garantir ne l isolamento dalle parti pubbliche del laboratorio se ve ne fosse la necessit oltre alla decon taminazione e alla disinfestazione Tabella 4 Livelli di contenimento delle installazioni per animali riassunto delle pratiche e delle attrez zature di sicurezza Gruppo di rischio Livello di contenimento Pratiche di laboratorio e attrezzature di sicurezza 1 ABSL 1 Accesso limitato abbigliamento protettivo e guanti 2 ABSL 2 Pratiche ABSL 1 pi segnali di avvertimento di rischio BSC Classe o Il per attivit che producono aerosol Decontaminazione dei rifiuti e delle gabbie prima del lavaggio 3 ABSL 3 Pratiche ABSL 2 pi accesso con
95. capitolo 3 Le Linee guida contenute in questo capitolo sono presentate sotto forma di aggiunte a quelle per i laboratori di base ossia i Livelli di Biosicurezza 1 e 2 che devono quindi essere applicati prima di quelli specifici per il laboratorio di contenimento di Livello di Biosicurezza 3 Le aggiunte e i cambiamenti principali riguardano 1 norme di comportamento 2 progettazione e dotazioni del laboratorio 3 sorveglianza sanitaria e medica I laboratori che rientrano in questa categoria dovrebbero essere registrati o elencati presso l au torit sanitaria nazionale o altre autorit sanitarie competenti Norme di comportamento Si applica il codice di comportamento per i laboratori di base ossia i Livelli di Biosicurezza 1 e 2 a eccezione delle seguenti modifiche 1 Il segnale e il simbolo di avvertimento di rischio biologico internazionale vedere Figura 1 esposti sulle porte di accesso al laboratorio devono identificare il livello di Biosicurezza e il no me del supervisore del laboratorio che controlla l accesso oltre a indicare eventuali condizio ni speciali per l ingresso nell area per esempio l immunizzazione 2 Gli indumenti protettivi da laboratorio devono comprendere camice con maniche lunghe sen za aperture sul davanti o con allacciatura incrociata sul davanti o tute complete copricapo e se necessario copricalzari o apposite calzature I camici da laboratorio standard abbottonati sul davanti non sono ada
96. che dello stesso Ne consegue che le at tivit dei laboratori di Bioprotezione dovrebbero essere rappresentative dei vari bisogni dell isti tuzione e dovrebbero riportare le indicazioni dei direttori scientifici dei responsabili di ricerca dei responsabili della sicurezza dello staff dei laboratori scientifici dello staff di manutenzione degli amministratori del personale con conoscenze tecnologiche delle forze dell ordine e di si curezza se competente Le misure di Bioprotezione per patogeni e tossine dovrebbero basarsi su un programma globale che includa un inventario aggiornato delle scorte l identificazione del personale che vi ha acces so la descrizione dell uso la documentazione dei trasferimenti interni e esterni e di quelli all in terno e fra le apparecchiature e o qualunque sistema di inattivazione degli agenti biologici Ana 45 Manuale di biosicurezza nei laboratori logamente dovrebbe essere stabilito un protocollo istituzionale per laboratori in Bioprotezione per identificare registrare indagare e rimediare le non conformita incluse le discrepanze rispet to all inventario che potrebbero verificarsi nei laboratori biosicuri In caso di infrazioni alla si curezza il coinvolgimento i ruoli e le responsabilit delle autorit di salute e sicurezza pubblica devono essere chiaramente definiti La formazione per la Bioprotezione nei laboratori deve essere distinta dalla formazione per la Biosicurezza nei laborator
97. chi impliciti nel proprio lavoro e con le necessarie pre cauzioni 5 Le aree dove alloggiano gli animali infetti con agenti del Gruppo di Rischio 4 devono rispet tare i criteri per il contenimento descritti e applicati per i laboratori di massimo contenimen to con Livello di Biosicurezza 4 6 L ingresso all installazione deve avvenire attraverso stanze filtro a porte interbloccate a te nuta d aria il cui lato pulito deve essere separato dal lato a rischio e dotato di attrezzature al fine di consentire il cambio di abiti e le docce 7 Quando entra il personale addetto deve togliere gli abiti che indossa all esterno e indossare un abbigliamento protettivo speciale Dopo il lavoro deve togliere l abbigliamento protetti vo per il trattamento in autoclave e farsi una doccia prima di lasciare l installazione 8 L installazione deve essere ventilata tramite un sistema di scarico dotato di filtri HEPA pro gettato per garantire una pressione negativa flusso di aria direzionale verso l interno 9 Il sistema di ventilazione deve essere progettato per impedire un inversione del flusso e la pressurizzazione positiva 10 Deve essere fornita un autoclave passante con estremit pulita in una stanza al di fuori del le stanze di contenimento per lo scambio di materiale 11 Deve essere fornita una camera di compensazione di passaggio con l estremit pulita in una stanza al di fuori delle stanze di contenimento per lo scambio dei mater
98. ci esplosivi 102 Spandimenti di prodotti chimici 102 Gas compressi e liquefatti 103 18 Ulteriori rischi nei laboratori 104 Rischio incendio 104 Rischio elettrico 105 Il rumore 105 Radiazioni ionizzanti 105 PARTE VII Organizzazione della sicurezza e formazione 19 Il responsabile della Biosicurezza ed il comitato per la sicurezza 111 Il preposto della Biosicurezza 111 Il comitato per la Biosicurezza 112 20 Norme di sicurezza per il personale addetto ai servizi manutenzione pulizia 113 Servizi di manutenzione degli edifici e degli impianti 113 Servizi di pulizia 113 21 La formazione 114 Parte VIII Elenco delle verifiche di sicurezza 22 Elenco delle verifiche di sicurezza 119 Strutture del laboratorio 119 Magazzini 119 Servizi igenici e locali destinati al personale 119 Riscaldamento ed aerazione 120 Illuminazione 120 Servizi 120 Sicurezza 120 Prevenzione degli incendi 121 Conservazione dei liquidi infiammabili 121 Gas compressi e liquefatti 122 Rischio elettrico 122 Protezione personale 122 Salute e sicurezza del personale 123 Attrezzature di laboratorio 123 Materiali infetti 124 Prodotti chimici e sostanze radioattive 124 Parte IX Bibliografia allegati e indice Bibliografia 127 Allegato 1 Primo soccorso 130 Allegato 2 Immunizzazione degli operatori 132 Allegato 3 OMS e Biosicurezza Centri in Collaborazione 133 Allegato 4 Sicurezza ed attrezzature 134 Allegato 5 Sostanze Chimiche rischi e precauzioni 137 In
99. come attrezzature per il contenimento di animali posso no produrre livelli notevoli di esposizione a rumore per i lavoratori Possono essere misurati i li velli di esposizione per determinare il rischio di esposizione Ove se ne riconosca il beneficio possono essere presi in considerazione interventi tecnici come racchiudere o separare apparec chiature rumorose o separare aree rumorose da altre aree di lavoro Dove non possibile abbat tere i livelli di rumorosit e dove il personale del laboratorio esposto con continuit a livelli ec cessivi di rumore deve essere attuato un piano di prevenzione che includa l uso di protezioni personali durante i lavori che espongono a livelli eccessivi e un programma di sorveglianza sa nitaria per determinare gli effetti del rumore sui lavoratori In Italia la normativa di riferimento il D Lgs 277 91 che definisce i limiti di esposizione per i lavoratori e le conseguenti misure preventive Radiazioni ionizzanti La protezione dalle radiazioni che consiste nel proteggere l uomo dagli effetti dannosi delle ra diazioni ionizzanti include 1 effetti somatici come sintomi clinici osservabili nei soggetti esposti Gli effetti somatici inclu dono i tumori generati dalle radiazioni come leucemia e cancro alle ossa al polmone e della 105 Manuale di biosicurezza nei laboratori pelle l insorgenza dei quali pu avvenire molti anni dopo l esposizione alle radiazioni Effet ti somatic
100. composti esplosivi SST Soluzione di Liquido incolore con Fortemente irritante per Flashpoint 50 C Indossare indumenti protettivi Pu reagire energicamente con Soluzioni formaldeide odore pungente occhi e cute irritazione come grembiuli ossidanti con nitrometano concentrate di 37 41 b p 96 C delle vie respiratorie impermeabili guantiin gomma o producendo composti esplosivi formaldeide formaldeide solubile in acqua Prolungata esposizione ai plastica ed occhiali di protezione con acido cloridrico producendo diventano con 11 14 vapori pu causare dal rischio chimico Operare il bis cromometil etere che un torbide se metanolo sindrome asmatiforme sotto cappa o spazi ben ventilati potente cancerogeno conservate HCHCO congiuntivite laringite sotto ai 21 C e bronchite o broncopol devono essere monite Pu provocare conservate a 21 sensibilizzazione da 25 C Soluzioni contatto della cute diluite 1 5 o Possibili effetti di media irreversibili Possibile concentrazione cancerogeno mantengono molti dei rischi delle soluzioni pi concentrate Tetraidrofurano Liquido incolore con Sedativo del sistema Facilmente Lavorare in ambiente ventilato Reagisce violentemente con forti C H 0 odore caratteristico Di etilene m p 108 5 C ossido b p 66 C Tetrametilene ossido nervoso centrale producente narcosi infiammabile pud formare perossidi esplosivi flashpoint 14 C L acqua pu essere inefficace a spe
101. contatto tra l operatore ed il materiale infetto 2 fabbricate con materiali impermeabili ai liquidi resistenti alla corrosione e rispondenti a re quisiti di resistenza strutturali prive di spigoli vivi parti sporgenti o taglienti o parti mobili non bloccabili 4 progettate costruite ed installate per facilitare un impiego agevole consentire facilit di ma nutenzione pulizia decontaminazione e controlli di qualit e idoneit Materiali in vetro o frangibili vanno per quanto possibile evitati Potrebbe essere necessario richiedere le specifiche di funzionamento e costruzione per assicurarsi che le attrezzature posseggano le necessarie caratteristiche di sicurezza vedi anche capitoli 10 e 11 Le procedure per le quali probabile la generazione di aerosol vanno condotte in una cappa di Biosicurezza Le porte del laboratorio vengono mantenute chiuse e su di esse vengono apposti i cartelli di rischio adeguati I rifiuti potenzialmente contaminati vanno tenuti separati e seguono un percorso dedicato W 14 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 Figura 3 Un laboratorio di Biosicurezza di livello 2 figure gentilmente fornite da CUH2A Princeton NJ USA Le procedure che comportano aerosol vengo no effettuate sotto cappa di sicurezza biologica Porte sono tenute chiuse ed apposta l indicazione di ri schio biologico Rifiuti potenzialmente contaminati sono separati dagli altri rifiuti Attrezzature e
102. cura del OGM risultante e identificare i sistemi di contenimento biologico e fisico che dovrebbero esse re usati Considerazioni di Biosicurezza per i sistemi di espressione biologica I sistemi di espressione biologica sono costituiti da vettori e cellule ospiti Devono essere soddi sfatte una serie di condizioni per renderne l uso efficace e sicuro Un esempio di sistema di espressione biologica il plasmide pUC18 Usato comunemente come vettore di clonaggio in 95 Manuale di biosicurezza nei laboratori combinazione con il ceppo K12 di Escherichia coli il plasmide pUC18 stato completamente se quenziato Tutti i geni richiesti per l espressione in altri batteri sono stati eliminati dal suo pla smide precursore pBR322 L E coli K12 un ceppo non patogeno che non pu colonizzare in mo do permanente l intestino dell uomo o dell animale in buona salute Esperimenti routinari di in gegneria genetica possono essere eseguiti con sicurezza nel sistema E coli K12 pUC18 al Livello 1 di Biosicurezza a meno che i prodotti di espressione del DNA esterno inserito non richiedano li velli di Biosicurezza pi elevati Considerazioni di Biosicurezza per il vettore di espressione Livelli di Biosicurezza pi elevati possono essere richiesti quando 1 l espressione delle sequenze di DNA derivate da organismi patogeni possono incrementare la virulenza dell OGM 2 le sequenze del DNA inserite non sono ben caratterizzate ad esempio
103. da un individuo infetto ad un altro Esistono misure preventive e terapie efficaci Gruppo di rischio 4 e evato rischio individuale e collettivo Un patogeno che usualmente provoca gravi malattie nell uomo o negli animali e che pu essere trasmesso da un individuo all altro per via diretta o indiretta Non sono disponibili efficaci misure preventive o terapie Nota per versione in Italiano la classificazione praticamente sovrapponibile a quella prevista dalla normativa nazionale e in particolare allegato XI del decreto legislativo 626 del 1994 e sue modifiche decreto 12 novembre 1999 GU n 21 del 27 01 2000 modificazioni all allegato XI del decreto legislativo 19 marzo 1996 n 242 concernente Modifiche ed integrazioni al decreto legislativo 19 settembre 1994 n 626 recante attua zione di direttive comunitarie riguardanti il miglioramento della sicurezza e della salute dei lavoratori sul luogo di lavoro Decreto Interministeriale di attuazione delle direttive 95 30 CE 97 59CE e 97 65CE di adeguamento al progresso tecnico della direttiva 90 679 CEE relativa alla protezione dei lavoratori contro i rischi derivanti da una esposizione ad agenti biologici durante il lavoro art 28 commal lett b del D Lgs 626 94 Manuale di biosicurezza nei laboratori I laboratori vengono distinti in laboratori di base Livello di Biosicurezza 1 e 2 di contenimento Livello di Biosicurezza 3 e di massimo contenimento Livell
104. ddetto alla sicurezza del labora torio vedi la sezione riguardante l incenerimento nel capitolo 14 Rischi da attrezzature chimico elettrico da incendio o da radiazioni L efficacia del sistema di contenimento dei microrganismi patogeni pu essere alterata indiretta mente da cause accidentali di natura chimica elettrica da radiazioni o da incendio quindi es senziale che in tutti i laboratori microbiologici vengano mantenuti degli standard di sicurezza elevati nei confronti di questi rischi in accordo con le norme ed i regolamenti elaborati dalle com petenti autorit nazionali I rischi di natura chimica elettrica da incendio o radiazioni saranno considerati pi in dettaglio nella parte VI del manuale capitoli 17 e 18 Ulteriori informazioni riguardanti le attrezzature e la sicurezza sono esposte nel capitolo 11 19 Manuale di biosicurezza nei laboratori 4 Laboratorio di contenimento Livello di Biosicurezza 3 Un laboratorio di contenimento con livello di Biosicurezza 3 progettato e fornito di dotazioni per lavorare con microrganismi del Gruppo di Rischio 3 e con grandi volumi o concentrazioni elevate di microrganismi del Gruppo di Rischio 2 che implicano un rischio di diffusione tramite aerosol Il contenimento di livello di Biosicurezza 3 richiede il rafforzamento dei programmi ope rativi e di sicurezza in modo tale che superino quelli dei laboratori di base ossia i Livelli di Bio sicurezza 1 e 2 esposti nel
105. de 74 82 85 pelle 143 144 145 147 148 149 150 151 152 153 154 156 157 peracidi 84 85 perclorico acido 102 140 150 perossido 39 84 85 141 piano di emergenza 75 piante transgeniche 95 97 picrico acido picrati 102 141 pipette 18 49 55 59 60 68 69 106 123 piridina 151 plasmidio pUC 18 95 96 159 poliovirus 96 porte 5 11 12 15 16 17 22 23 28 29 31 33 34 36 42 44 54 60 85 103 104 121 potassio idrossido 151 potassio permanganato 141 151 potassio tellurito 151 precauzioni universali 72 prelavaggio 20 primati non umani 31 primo soccorso 123 130 131 primo soccorso cassetta 130 prioni 73 74 82 procedure di pulizia versamenti 91 progettazione laboratorio 22 23 24 27 28 29 31 35 39 46 49 50 111 136 propan 2 olo 2 propanolo 84 protezione degli occhi 139 140 141 142 143 144 145 146 147 149 150 151 152 153 154 155 156 157 protezione del prodotto 49 50 51 54 59 pulizia 14 16 41 42 49 55 56 70 76 79 80 82 91 107 113 120 130 135 radiazioni area 21 114 radiazioni ionizzanti 105 radionuclidi 50 52 54 106 107 rame 84 85 102 138 141 152 refrigeratori 136 respiratori attrezzatura respiratoria protettiva 62 76 78 85 102 151 155 Responsabile della Biosicurezza 75 76 111 113 ricombinante DNA tecnologia 95 rifiuti 16 17 19 20 21 24 29 30 34 37
106. del laboratorio con o senza decontaminazione precedente vedi capitolo 3 L in cenerimento di materiali infetti un alternativa all autoclave solamente se l inceneritore sotto il controllo del laboratorio Un corretto incenerimento richiede efficienti mezzi di controllo della temperatura ed una came ra di combustione secondaria Molti inceneritori specialmente quelli con camera di combustio ne singola sono insoddisfacenti per trattare materiali infetti carcasse animali e plastica perch tali materiali non possono essere completamente distrutti e le emissioni dal camino possono in quinare l atmosfera con microrganismi sostanze chimiche tossiche e fumi Sono comunque dis ponibili molti tipi di camere di combustione soddisfacenti con temperature nella camera prima ria di almeno 800 C e nella camera secondaria di almeno 1000 C I materiali destinati all incenerimento anche se precedentemente decontaminati devono essere portati all inceneritore in sacchi preferibilmente di plastica Gli addetti all inceneritore devono ricevere corrette istruzioni in merito al caricamento ed al controllo della temperatura anche da rilevare che l efficienza del processo di incenerimento dipende sopratutto dal giusto assortimen to di materiali da trattare Gli inceneritori esistenti od in corso di realizzazione hanno destato varie perplessit a causa dei possibili effetti negativi sull ambiente e molto impegno viene profuso per realizzare
107. demic Press 1999 69 74 Biosafety in microbiological and biobedical laboratories 4 ed Washington DC United States Departments of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 1999 Class II laminar flow biohazard cabinetry Ann Arbor MI National Sanitation Foundation 2002 NSF ANSI 49 2002 Richmond JY McKinney RW Primary containment for biohazards selection installation and use of biological safety cabinets 2 ed Washington DC United States Departments of Health and Human Services Centers for Disease Control end Prevention National Institutes of Heath 2000 Microbiological safety cabinets Recommendation for information to be exchanged between porchaser vendor and installer and recommendations for installation London British Standards Institution 1992 Standard BS 5726 2 1992 Microbiogical safety cabinets Recommendations for selection use and maintenance London British Standards Institution 1992 standard BS 5726 4 1992 Biological containment cabinets Class I and II installation and field testing Toronto Canadian Standard Association 1995 Standard Z316 2 95 R2000 Collins CH Kennedy DA Laboratory acquired infections history incidence causes and prevention 4 ed Oxford Butterworth Heinemann 1999 Health Canada Laboratory Biosafety manual 2 ed Ottawa Minister of Supply and Services Canada 1996 Biological safety cabinets b
108. dere bene l interno della camera del rotore per posizionare correttamente portacestelli e cestelli Le provette da centrifuga ed i contenitori di campioni da usare in centrifuga devono essere di vetro spesso o preferibilmente di plastica e dovrebbero essere accuratamente ispezionati prima dell uso Le provette ed i contenitori dei campioni da centrifugare devono essere chiusi in modo sicu ro se possibile con tappo a vite I cestelli devono essere caricati equilibrati sigillati ed aperti sotto cappa di sicurezza biologica Cestelli e portacestelli devono essere appaiati per peso e con le provette gi posizionate bi lanciati correttamente Lo spazio vuoto da lasciare tra la superficie del fluido e l orlo della provetta da centrifuga do vrebbe essere indicato nelle istruzioni fornite dal fabbricante Usare acqua distillata oppure alcol propanolo al 70 per bilanciare i cestelli vuoti Evitare l uso di soluzione fisiologica o di soluzioni di ipoclorito corrosive per i metalli Usare cestelli sigillabili di sicurezza per centrifugare microrganismi classificati nei Gruppi di Rischio 3 e 4 Quando si usano rotori ad angolo fisso fare attenzione a non riempire troppo le provette per ch potrebbero disperdere materiale Ispezionare quotidianamente la camera interna della centrifuga per cercare macchie o spor co a livello del rotore In presenza di macchie o sporco necessario rivedere i protocolli di centrifugazione Ispezionare quoti
109. deve essere sotto il controllo dell autorit sanitaria nazionale o di altre autorit sanitarie competenti Le informazioni che seguono hanno come uni ca finalit quella di fornire materiale preliminare I soggetti che operano per lo sviluppo di un la boratorio con Livello di Biosicurezza 4 devono contattare il programma per la Biosicurezza del l OMS per avere ulteriori informazioni Norme di comportamento Si applicano le norme di comportamento per il Livello di Biosicurezza 3 a eccezione delle se guenti modifiche 1 Si applica la regola delle due persone ossia nessun individuo pu mai lavorare da solo Si tratta di una norma particolarmente importante quando si opera in Livello di Biosicurezza 4 con tuta pro tettiva 2 Prima di entrare nel laboratorio e all uscita dal laboratorio necessario un cambiamento com pleto di abiti e scarpe 3 Il personale deve essere addestrato alle procedure di emergenza per portare all esterno il per sonale in caso di infortunio o malore all interno del laboratorio 4 Occorre istituire un metodo di comunicazione per i contatti di routine o di emergenza fra il personale che opera all interno del laboratorio di massimo contenimento con Livello di Biosi curezza 4 ed il personale di supporto all esterno del laboratorio Progettazione e dotazioni del laboratorio Le caratteristiche di un laboratorio di contenimento con Livello di Biosicurezza 3 si applicano anche al laboratorio di massimo
110. di eccetto come polvere localizzata Indossare guanti composti d ammonio acido all ozono idrogeno solforato o solfuri m p 962 C b p 2212 C argento metallico pud causare danni ai polmoni con edema polmonare Pu causare uno scolorimento grigio blu degli occhi naso gola e pelle a seguito di esposizioni a lungo termine o ripetute argiria protettivi e occhiali di sicurezza o protezione degli occhi in combinazione con protezione respiratoria per le polveri o i fumi ossalico e acido tartarico Argento nitrato Cristalli bianchi Pu causare gravi Non combustibile ma Evitare la dispersione della Da soluzioni ammoniacali pu AgNO m p 212 C irritazioni e bruciature accelera la polvere Osservare rigorose precipitare argento nitrito b p 444 C agli occhi e alla pelle combustione di altre norme igieniche Indossare esplosivo in presenza di basi o solubile in acqua Corrosivo per sostanze guanti di protezione in gomma glucosio Pu formare prodotti ingestione Pu produrre naturale o sintetica e visiere esplosivi con etanolo e pu una decolorazione protettive o protezione degli causare polimerizzazione rosso blu della pelle a occhi in combinazione con esplosiva con acrilonitrile Pu seguito di esposizioni a protezioni respiratorie produrre fiamma od esplosione lungo termine o ripetute In caso di contatto con gli occhi se mescolato con carbone attivo argiria risciacquare con acqua e m
111. di eradicazione dell OGM Ulteriori considerazioni L utilizzo di animali o piante per scopi sperimentali richiede attente considerazioni I ricercatori devono conformarsi con le regolamentazioni restrizioni e le richieste per la condotta di lavoro con gli OGM nei Paesi ospiti e con le istituzioni I Paesi devono avere autorit nazionali che stabiliscano linee guida per lavorare con gli OGM e devono aiutare gli scienziati a classificare il loro lavoro nell appropriato livello di Biosicurezza In alcuni casi la classificazione pu differire tra le varie nazioni o le nazioni possono decidere di classificare il lavoro a pi basso o pi alto livello quando nuove informazioni su un particolare sistema vettore ospite divengono disponibili La valutazione del rischio un processo dinamico che prende in considerazione i nuovi svilup pi e progressi della scienza L ottenimento di una appropriata valutazione del rischio assicurer che i benefici della tecnologia del DNA ricombinante rimangano disponibili per il genere umano per gli anni a venire Per ulteriori informazioni vedi riferimenti bibliografici 17 e 46 48 98 PARTE VI Sicurezza chimica antincendio ed elettrica Prodotti chimici pericolosi 17 Prodotti chimici pericolosi I lavoratori dei laboratori di microbiologia sono non solo esposti a microrganismi patogeni ma anche a rischi chimici E importante che essi abbiano una appropriata conoscenza degli effetti tos sic
112. di esso Questa caratteristica si riferisce spesso alla protezione del prodotto Questi concetti base di progettazione hanno portato ad una evoluzione della cappe di sicurezza biolo gica in tre classi Il tipo di protezione fornito da ognuna di esse riportato nella Tabella 8 Nota Le cappe a flusso verticale e orizzontale con espulsione dell aria dall apertura frontale stazioni di pulizia dell aria non sono cappe di sicurezza biologica e non devono essere utilizzate come tali Cappe di sicurezza biologica di Classe Nella Figura 6 riportato uno schema di una cappa di sicurezza biologica di Classe I Un flusso d aria entra attraverso l apertura frontale ad una velocit minima di 0 38 m s passa sopra il pia no di lavoro e fuoriesce dalla cappa attraverso un estrattore Il flusso direzionale dell aria con voglia nell estrattore le particelle di aerosol che possono essersi generate nell area di lavoro al lontanandole cos dagli operatori del laboratorio L apertura frontale permette alle braccia del l operatore di raggiungere il piano di lavoro all interno della cappa mentre egli segue le opera zioni attraverso il vetro Il vetro pu anche essere completamente alzato per permettere la puli zia dell area di lavoro o per altri scopi 49 Manuale di biosicurezza nei laboratori Tabella 8 Classificazione delle cappe di Biosicurezza BSC per tipo e grado di protezione Tipo di protezione BSC da scegliere Prot
113. di microbiologia Ferite da puntura tagli ed abrasioni L operatore ferito deve rimuovere l abbigliamento protettivo lavare le mani ed ogni parte lesa applicare un appropriato disinfettante della pelle e rivolgersi ad un centro medico competente Riferire la causa della ferita e gli eventuali microrganismi coinvolti e registrare dati sanitari ap propriati e completi Ingestione di materiale potenzialmente infetto Rimuovere l abbigliamento protettivo e rivolgersi ad un medico Riferire la natura del materiale in gerito e le circostanze dell incidente e registrare dati sanitari appropriati e completi Fuoriuscita di aerosol potenzialmente infettante dalla cappa di sicurezza biologica Tutte le persone devono abbandonare immediatamente l area contaminata ed ogni individuo esposto deve essere inviato a visita medica Informare immediatamente i responsabili del labo ratorio e della Biosicurezza Nessuno deve entrare nella stanza per opportuno lasso di tempo al meno 1 h per lasciare che l aerosol venga allontanato e che le particelle pi pesanti si possano depositare Se il laboratorio non ha un sistema centralizzato di estrazione dell aria bisogna ri tardare l ingresso delle persone almeno per 24 h necessario segnalare con cartelli il divieto di accesso Trascorso il tempo dovuto procedere al la decontaminazione sotto la direzione del responsabile della Biosicurezza Indossare adatto ab bigliamento protettivo e protezion
114. di umidit con formazione di acido cloridrico Soluzioni concentrate di formaldeide diventano torbide se conservate sotto ai 21 C e devono essere conservate a 21 25 C Soluzioni diluite 1 5 o di media concentrazione mantengono molti dei rischi delle soluzioni pi concentrate Xilene miscela di isomeri C H CH 2 Dimetilbenzene Liquido incolore con odore aromatico m p 95 a 13 C b p 136 145 C insolubile in acqua Pu colpire il sistema nervoso centrale con conseguente mal di testa vertigini stanchezza e nausea Il liquido e i vapori sono irritanti per gli occhi pelle membrane mucose e vie respiratorie Nocivo se ingerito Il prolungato contatto cutaneo pu defat la pelle Manifestazioni neurologiche non specifiche L esposizione pu intensificare danni all udito causati dall esposizione al rumore Test su animali suggeriscono tossicit per la riproduzione e lo sviluppo umano Liquido infiammabile flashpoint 27 32 C Evitare il contatto con gli occhi Indossare guanti in nitrile e mezzi di protezione degli occhi Conservare i contenitori ben chiusi Tenere lontano da sorgenti di ignizione Pu contenere etilbenzene come impurit Letilbenzene un possibile carcinogeno umano Indice analitico 2 4 6 trinitrofenolo acido picrico 102 141 abrasioni 76 acari 34 accessi 36 47 acetaldeide 138 acetilene 102 138 142 145 148 acetone 138 aceton
115. dianamente rotori e cestelli per cercare segni di corrosione e fessure anche minime Cestelli rotori e camera interna della centrifuga vanno decontaminati dopo ciascun uso Dopo l uso conservare i cestelli in posizione invertita per scolare il liquido di bilanciamento Quando la centrifuga in funzione pu proiettare nell aria particelle infettive Queste se la centrifuga posta in una cappa tradizionale di Classe I o Classe II aperta frontalmente viag giano a velocit troppo alta per essere trattenute dal flusso d aria della cappa Usare la cen trifuga all interno di una cappa di sicurezza Classe III previene l estesa dispersione degli aerosol emessi In ogni caso buone tecniche di centrifugazione e provette ben tappate offro no protezione adeguata contro aerosol infettanti e particelle disperse Uso degli omogeneizzatori miscelatori agitatori ed ultrasonicatori 1 70 Non usare in laboratorio omogeneizzatori da cucina che possono disperdere materiale od aerosol Sono piti sicuri frullatori da laboratorio e dispositivi per la digestione dei tessuti Tecniche di laboratorio 2 Coperchi contenitori e flaconi devono essere in buona condizione privi di crepe od imperfe zioni I coperchi debbono chiudere bene ed avere guarnizioni efficienti 3 Durante il funzionamento di omogeneizzatori agitatori e sonicatori la pressione nel recipien te aumenta Aerosol con materiali infetti possono sfuggire tra il coperchio e il recip
116. dice analitico 158 VI Prefazione L Organizzazione Mondiale della Sanita OMS ha da tempo riconosciuto che la sicurezza la biosicurezza in particolare sono importanti questioni internazionali La OMS ha pubblicato la prima edizione del Manuale di Biosicurezza in laboratorio nel 1983 Il manuale ha spinto i vari Paesi ad accettare e mettere in opera concetti di base di Biosicurezza ed a sviluppare compendi nazionali riguardanti le nozioni pratiche per la manipolazione in sicurezza di microrganismi pa togeni nei laboratori entro i loro confini geografici Dal 1983 molte nazioni si sono avvalse della guida esperta del manuale per sviluppare codici procedurali Una seconda edizione del manua le stata pubblicata nel 1993 La OMS continua a fornire una guida internazionale per la Biosi curezza attraverso questa terza edizione del manuale affrontando le questioni di sicurezza bio logica safety e sicurezza in generale security che abbiamo di fronte in questo millennio Nella terza edizione viene evidenziata l importanza della responsabilit personale Nuovi capi toli sono stati aggiunti sulla valutazione del rischio sull uso in sicurezza della tecnologia del DNA ricombinante e sul trasporto di materiale infetto Eventi accaduti di recente nel mondo han no evidenziato l esistenza di nuove minacce alla salute pubblica attraverso la possibilit di deli berato cattivo uso e rilascio di agenti biologici e tossine La terza edizione int
117. distanza ragionevole dal laboratorio Devono essere previsti sistemi di sicurezza per la prevenzione e gestione di incendi ed emer genze elettriche una doccia di emergenza e attrezzature per il lavaggio degli occhi Dovrebbero essere presenti zone o stanze di pronto soccorso attrezzate e prontamente acces sibili Per l Italia vedi DM 15 Luglio 2003 n 388 Regolamento recante disposizioni sul pronto soccorso azien dale in attuazione dell articolo 15 comma 3 del decreto legislativo 19 settembre 1994 n 626 e successi ve modificazioni GU n 27 del 3 2 2004 13 Manuale di biosicurezza nei laboratori 15 Nella progettazione di nuove strutture bisogna dotarsi di sistemi meccanici di ventilazione che forniscano un flusso d aria verso l interno senza ricircolo In assenza di ventilazione mec canica le finestre devono essere apribili e provviste di barriere contro gli artropodi 16 essenziale avere una fornitura sicura di acqua di buona qualit Non devono esistere inter connessioni tra le forniture di acqua per il laboratorio e quelle di acqua potabile opportu no montare un dispositivo anti riflusso a protezione del sistema idrico pubblico 17 La fornitura di energia elettrica ed il sistema di illuminazione di emergenza devono essere adeguati ed affidabili per permettere l uscita in sicurezza dal laboratorio in caso di necessi t Sarebbe ideale avere un generatore di emergenza per le attrezzature essenziali come in c
118. e e quindi 2 ridurre l esposizione ad una possibile infezione 3 migliorare l efficienza del trasporto Norme internazionali sul trasporto Le norme per il trasporto dei materiali infettivi con qualsiasi modalit di trasporto si basa no sul Model Regulations on the Transport of Dangerous Goods delle Nazioni Unite 40 Queste raccomandazioni sono sviluppate dal United Nations Committee of Export on the Transport of Dangerous Goods UNCETDG Per essere legalmente valide le United Nations Model Regulations devono essere introdotte nelle legislazioni nazionali o internazionali dalle auto rit competenti es the Technical Instruction for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air 41 dell International Civil Aviation Organization ICAO per il trasporto aereo e l European Agreement concerning the International Carriage of Dangerous Goods by Road ADR 42 L International Air Transport Association IATA pubblica annualmente Infectious Substances Shipping Guidelines 43 Le Linee guida IATA devono seguire le Istruzioni Tecniche ICAO come standard minimo ma possono prevedere restrizioni maggiori Le Linee guida IATA devono essere osservate per le spedizioni tra membri dello IATA Dal momento che le Model Regulations on the Transport of Dangerous Goods delle Nazioni Unite sono una raccolta di raccomandazioni soggette a revisione biennale quando vengono consul tate e applicate ci si riferisce alla edizione pi recente OMS
119. e devono possedere la marcatura CE EN seguita da un numero di registrazione In Italia la norma di riferimento il D Lgs 475 92 e il D Lgs 626 I dispositivi di protezione individuale possono agire da barriera per minimizzare il rischio di esposizione agli aerosol schizzi o inoculazioni accidentali I DPI selezionati dipendono dalla na tura del lavoro effettuato Gli abiti protettivi dovrebbero essere indossati durante il lavoro in la boratorio Prima di lasciare il laboratorio gli abiti protettivi dovrebbero essere rimossi e le mani lavate La tavola 11 riassume alcuni tipi di DPI usati in laboratorio e le protezioni ottenute Divise da laboratorio camici tute grembiuli I camici da laboratorio dovrebbero essere completamente abbottonati Comunque delle tute lun ghe apribili posteriormente oppure sovrabiti offrono protezione migliore dei camici da labora torio e sono preferibili nei laboratori di microbiologia o durante il lavoro nei locali di sicurezza biologica Grembiuli impermeabilizzati dovrebbero essere indossati al di sopra dei camici da la boratorio dove necessita offrire ulteriore protezione contro la perdita di materiali chimici o bio logici come il sangue o fluidi di coltura Lavanderie dovrebbero essere disponibili nei pressi del l istituto I camici di laboratorio divise tute e soprabiti non dovrebbero essere indossati al di fuo ri delle aree di laboratorio Occhiali lenti di sicurezza schermi facciali La scel
120. e di materiali possono essere ottenute scrivendo ai se guenti indirizzi Biosafety programme Department of Communicable Disease Surveillance and Response World Health Organization 20 Avenue Appia 1211 Geneva 27 Switzerland http www who int csr WHO Collaborating Centre for Biological Safety Swedish Institute for Infectious Disease Control Nobels Vag 18 S 171 82 Solna Sweden http www smittskyddsinstitutet se English english htm WHO Collaborating Centre on Biosafety Technology and Consultative Services Office of Laboratory Security Health Canada 100 Colonnade Road Loc 6201A Ottawa Ontario Canada KIA 0K9 http www hc sc gc ca pphb dgspsp ols bsl WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Training Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road Mailstop F05 Atlanta GA 30333 USA http www cdc gov WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Research Division of Occupational Health and Safety Office of Research Services National Institutes of Health Department of Health and Human Services 13 3K04 13 South Drive MSC 5760 Bethesda MD 20892 5760 USA http www nih gov WHO Collaborating Centre for Biosafety Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory 10 Wreckyn St Nth Melbourne Victoria 3051 Australia Postal address Locked Bag 815 PO Carlton Sth Victoria 3053 Australia http www vidrl o
121. e di ricerca biologica dovrebbero essere regolarmente certificati La certificazione dei laboratori contribuisce a garantire che 1 vengano utilizzati gli adeguati controlli tecnici e siano adeguatamente funzionanti come da progetto 2 siano in atto adeguati controlli amministrativi specifici del protocollo e della sede 3 le attrezzature di protezione del personale siano adeguate ai compiti che vengono svolti 4 la decontaminazione dei rifiuti e dei materiali sia adeguatamente considerata e siano in at to delle procedure idonee per la gestione dei rifiuti 5 siano in atto delle procedure idonee per la sicurezza generale del laboratorio incluse la si curezza fisica elettrica e chimica La certificazione dei laboratori differisce dalle attivit di collaudo dei laboratori capitolo 7 sotto vari aspetti importanti La certificazione dei laboratori un esame sistematico di tutte le caratteristiche e i processi di sicurezza all interno di un laboratorio controlli tecnici attrezza ture di protezione personale e controlli amministrativi Vengono inoltre esaminate le pratiche e le procedure per la Biosicurezza La certificazione di laboratorio un attivit di assicurazio ne qualit e sicurezza che dovrebbe avere luogo regolarmente Le attivit di certificazione dei laboratori devono essere condotte da professionisti della Biosi curezza o in materia di salute o sicurezza adeguatamente addestrati Gli istituti possono impie gare del personal
122. e dotato delle necessarie capacit adeguate per condurre le revisioni le inda gini o le ispezioni questi termini sono usati in modo intercambiabile associate con il processo di certificazione Tuttavia gli istituti possono prendere in considerazione di ingaggiare o gli pu venire richiesto di ingaggiare terzi affinch forniscano tali servizi si rammenta che in Ita lia per le strutture sanitarie regolamentata dalle norme sull accreditamento istituzionale Le installazioni di laboratori clinici o per ricerche biomediche possono sviluppare strumenti di re visione indagine o ispezione per contribuire a garantire la coerenza nel processo di certificazione Tali strumenti dovrebbero essere abbastanza flessibili da tenere conto delle differenze fisiche e procedurali fra i laboratori determinate dal tipo di lavoro che viene condotto fornendo al tem po stesso un approccio coerente nell ambito dell istituto I sistemi di verifica devono essere uti lizzati soltanto da personale adeguatamente addestrato e che non siano utilizzati in sostitu zione di una valida valutazione professionale della Biosicurezza Esempi di tali strumenti so no forniti nelle Tabelle da 5 a 7 36 Linee guida per la certificazione di laboratori o impianti Le risultanze delle revisioni indagini o ispezioni dovrebbero venire discusse con il personale del laboratorio e con la direzione All interno del laboratorio si dovrebbe identificare una per sona che abbia la
123. e loro caratteristiche e quelle delle cappe di si curezza biologica di Classe I e Classe II sono indicate nella Tabella 9 Ciascuna caratteristica permet te di utilizzarle per scopi specifici vedi Tabella 8 Le BSCs differiscono l una dall altra per diversi aspetti la velocit d ingresso dell aria dall apertura frontale la percentuale di aria riciclata sul piano di lavoro ed espulsa dalla cappa il sistema di espulsione che determina se l aria sia scaricata dalla cappa all interno o all esterno attraverso uno specifico sistema di estrazione o tramite quello dell edi ficio il gradiente di pressione se le cappe hanno condotti biologicamente contaminati e il plenum a pressione negativa o se gli stessi sono circondati da condotti e plenum a pressione negativa Descrizioni complete della varie cappe di classe IIA e IIB si trova nei riferimenti bibliografici 7 e 8 o nelle istruzioni della casa produttrice Figura 8 Diagramma schematico di una cappa di Biosicurezza Classe IIB1 A apertura frontale B vetro per visione all interno C filtro dell aria esausta HEPA D filtro HEPA supple mentare E aria in pressione negativa esausta F pompa G ulteriore filtro HEPA richiesto il collegamen to con il sistema dell aria esausta dell edificio A apertura frontale B sali scendi C uscita dell aria esausta prefiltrata attraverso HEPA condotta dell aria esausta in espulsione FA aria in entrata O aria potenzialmente contaminata gO aria f
124. e protezione degli occhi in Reagisce con forti ossidanti comportare convulsioni gas irritanti o tossici combinazione con protezione Reagisce lentamente con acqua perdita di coscienza delle vie aeree ed umidit producendo acido arresto del respiro e bromidrico e cianuro Intacca morte molti metalli in presenza di acqua Citocalasina Polvere bianca Tossica per ingestione Evitare il contatto con occhi Agenti fortemente ossidanti A J m p diversi inalazione o pelle vestiti indossare occhiali assorbimento percutaneo Pu provocare malformazioni congenite fetali protettivi per il rischio chimico guanti di gomma o plastica STI Cloro Cl 2 Gas giallo verdastro con odore pungente m p 101 C b p 34 C Corrosivo per gli occhi pelle e vie respiratorie Linalazione del gas pu provocare polmonite ed edema polmonare comportando sindrome da distress respiratorio nell adulto ARDS La rapida evaporazione del liquido pu provocare lesioni da freddo Elevate esposizioni possono provocare la morte Sono possibili effetti ritardati indicata l osservazione medica Non combustibile ma aumenta la combustione di altre sostanze Operare in circuito chiuso in ambiente ventilato Indossare guanti e camici protettivi occhiali di sicurezza ovvero protezione degli occhi combinata con protezione delle vie respiratorie La soluzione in acqua un acido forte reagisce violentemente con basi e molti composti
125. e respiratoria Contenitori rotti e fuoriuscita di sostanze infette I contenitori rotti contaminati con sostanze infette o fuoriuscita di sostanze infette dovrebbero es sere coperti con un fazzoletto o un panno Versare poi su di essi un disinfettante e lasciarlo agire per il tempo necessario trascorso il quale gli asciugamani e il materiale rotto possono essere asportati maneggiando con pinze i frammenti di vetro Trattare quindi l area contaminata con disinfettante Se vengono usate palette per rimuovere il materiale rotto devono essere autocla vate o immerse in un disinfettante efficace Eliminare gli stracci e la carta usati per la pulizia in un contenitore per rifiuti contaminati Indossare guanti per tutte queste operazioni Se il modulo di richiesta per il laboratorio od altri fogli di carta sono contaminati copiare le in formazioni su altri fogli ed eliminare gli originali nel contenitore per rifiuti contaminati Rottura di provette che contengono materiale potenzialmente infettante in centrifughe non dotate di cestelli sigillabili Se una rottura si verifica o sospettata mentre la macchina in moto il motore dovrebbe essere spento e la macchina lasciata chiusa almeno 30 minuti per permettere la deposizione di parti celle Se si scopre la rottura dopo che la macchina si fermata il rotore dovrebbe essere sostitui to immediatamente e lasciato chiuso 30 minuti In entrambi i casi va informato il preposto alla sicurezza
126. e una porta o un accesso attraverso un anticamera per esempio un ingresso a porta dop pia o laboratorio di base Livello di Biosicurezza 2 che delimita un area specifica destinata a mantenere la pressione differenziale fra il laboratorio e il suo spazio adiacente La zona fil tro dovrebbe disporre di dotazioni per separare gli abiti puliti da quelli sporchi pu essere inoltre necessaria una doccia Le porte della zona filtro possono essere a chiusura automatica e interbloccate in modo tale che si apra una sola porta alla volta Pu essere previsto un pannello a sfondamento da usar si come uscita di emergenza Le superfici dei muri dei pavimenti e dei soffitti dovrebbero essere resistenti all acqua e fa cili da pulire Le aperture praticate in queste superfici per esempio i fori per le tubature de gli impianti dovrebbero essere sigillate per facilitare la decontaminazione degli ambienti La stanza del laboratorio deve essere sigillabile per la decontaminazione Le condotte del l aerazione devono permettere la disinfezione mediante gas Le finestre devono essere chiuse sigillate ed antisfondamento Vicino a ciascuna uscita deve essere a disposizione un lavandino con rubinetto azionabile senza l uso delle mani Deve esserci un impianto di aerazione che crei flusso d aria direzionale dall esterno verso l interno del laboratorio in pressione negativa Occorre installare un dispositivo di monito raggio visivo con o senza allarme i
127. e violentemente con forti CH CH OH con lieve caratteristico Irritazione degli occhi flashpoint 12 C ermeticamente chiusi Tenere ossidanti odore Pu avere effetti sul limiti infiammabilit lontano da fonti di innesco m p 117 C sistema nervoso 3 19 b p 79 C centrale solubile in acqua etanolamina Liquido incolore viscoso Corrosivo per occhi Flashpoint 85 C Indossare guanti di gomma o Reagisce con forti ossidanti H NCH CH OH non volatile con odore sistema respiratorio plastica e protezione degli occhi 2 Aminoetanolo ammoniacale cute Pu causare m p 10 C sensibilizzazione b p 171 C cutanea solubile in acqua Fenolo Cristalli incolorio rosa La sostanza e i vapori Flashpoint 80 C Non respirare i vapori usare Reagisce con ossidanti C H OH pallido con odore sono corrosivi per gli Limiti di infiammabilita protezioni respiratorie Evitare il producendo fuoco e pericolo di caratteristico m p 41 C b p 182 C solubile in acqua occhi la pelle e le vie respiratorie cusando gravi ustioni assorbito attraverso la pelle Disturbi del sistema nervoso centrale coma Danni ai reni e al fegato sintomi comprendono dolori addominali vomito diarrea irritazione della pelle dolore agli occhi Il prolungato contatto con soluzioni diluite pu causare dermatiti 1 7 6 contatto con gli occhi e la pelle esplosione Lavorare sotto cappa chimica Indossare guanti in nitrile e protezione degli occhi In caso di contat
128. ee Infiammabile Evitare l inalazione dello spray o Il contatto con C H 0 decompone dopo inalazione Irritazione solido combustibile dei vapori e il contatto con gli la pelle riscaldamento a 241 C Reperibile in aerosol spray in soluzione 0 5 in butanolo solubile in acqua degli occhi sistema respiratorio e pelle Esposizioni ripetute possono causare sensibilizzazione cutanea flashpoint 39 C occhi Indossare guanti in gomma naturale o sintetica e occhiali di protezione dai prodotti chimici produce una macchia viola persistente Nitrobenzene C H NO Liquido oleoso giallo pallido con odore caratteristico m p 6 C b p 211 C Metaemoglobinemia con cianosi danni epatici i sintomi comprendono unghie blu pelle blu vertigini nausea stanchezza stato di incoscienza Assorbito attraverso la pelle Combustibile rischio di incendio ed esplosione flashpoint 88 C Lavorare con ventilazione aspirazione locale o protezione delle vie respiratorie Indossare guanti protettivi indumenti protettivi ed occhiali di sicurezza Durante la combustione produce fumi corrosivi compresi ossidi di azoto Reagisce violentemente con ossidanti forti ed agenti riducenti causando fuoco e pericolo di esplosione Attacca diversi materiali plastici Produce sostanze o misture esplosive termicamente instabili con diversi composti organici e inorganici OST Sostanza Proprieta fisiche Rischi per l
129. endo un gas instabile e si decompone in cloro gassoso Cl ed ossigeno gassoso O con emissione di calore solubile in acqua e stabile in soluzione acquosa Il diossido di cloro pu essere ottenuto in due modi 1 al momento mescolando due diverse so stanze acido cloridrico HCl e clorito di sodio NaCIO e 2 adottando la sua forma stabiliz zata da attivare poi al momento dell uso Tra i biocidi ossidanti il diossido di cloro il pi selettivo mentre ozono e cloro sono molto pi reattivi ed agiscono sulla maggioranza dei composti organici Il cloro diossido invece reagisce solamente con i composti ridotti dello zolfo con le amine se condarie e terziarie ed alcuni altri composti organici altamente ridotti e reattivi I residui pi sta bili possono essere perci trattati con cloro diossido a concentrazioni molto pi basse di quelle necessarie usando cloro od ozono Prodotto in maniera corretta il diossido di cloro per la sua selettivit pu essere usato in modo pi efficace dell ozono o del cloro in presenza di pi alte quantit di materiale organico Formaldeide La formaldeide HCHO un gas che uccide tutti i microrganismi e le spore a temperature su periori a 20 C Non attiva contro i prioni La formaldeide ha azione relativamente lenta ed ha bisogno di circa il 70 di umidit relativa commercializzata come polimero solido paraformaldeide in fiocchi o tavolette o come forma lina una solu
130. ene alla popolazione selvaggia potrebbe essere teoricamente generata una riserva ani male per quel particolare virus Questa possibilit stata discussa per poliovirus ed particolarmente rilevante nel contesto del la eradicazione della poliomielite Topi transgenici che esprimono il recettore del poliovirus uma no generati in differenti laboratori risultarono suscettibili all infezione del poliovirus in varie prove di inoculazione e la malattia risultante era clinicamente e istopatologicamente simile alla poliomielite umana Comunque il modello topo differisce da quello umano nel fatto che la re plicazione nel tratto alimentare dei poliovirus somministrati oralmente inefficiente o non av viene affatto Pertanto piuttosto inverosimile che il ritorno di un topo transgenico di questo ti po alla vita libera possa dar luogo alla formazione di una nuova riserva animale per il polovirus Nonostante ci questo esempio indica che per ogni nuova linea di animali transgenici studi det tagliati dovrebbero essere effettuati al fine di determinare le vie attraverso le quali gli animali 96 Biosicurezza e tecnologia del DNA ricombinante possono essere infettati la quantita dell inoculo richiesta per l infezione e in quale misura il vi rus viene diffuso dagli animali infettati Inoltre tutte le misure dovrebbero essere prese per assi curare uno stretto contenimento dei topi transgenici Piante transgeniche Le piante transgeniche ca
131. ente ai sensi del D Lgs 626 e successive modificazioni Progettazione del laboratorio e attrezzature Nel progettare un laboratorio e nell assegnare ad esso determinate lavorazioni con microrganismi bisogna prestare attenzione alle problematiche della sicurezza associate a particolari condizioni DoF wnr Formazione di aerosol Lavoro con elevati volumi e o alte concentrazioni di microrganismi Sovraffollamento ed eccessivo numero di attrezzature e strumenti Infestazione da parte di roditori o insetti Ingresso di persone non autorizzate Flussi di lavoro uso di campioni e reagenti specifici Nelle Figure 2 e 3 vengono mostrati esempi di laboratori rispettivamente di livello di Biosicu rezza 1 e 2 Progettazione e requisiti generali 1 12 Il laboratorio deve disporre di spazi ampi che consentano il lavoro la pulizia e la manuten zione Le pareti i soffitti e i pavimenti devono essere lisci facili da pulire impermeabili ai liquidi e resistenti agli agenti chimici e ai disinfettanti normalmente usati nel laboratorio I pavimenti devono essere anti scivolo Le superfici di lavoro devono essere impermeabili all acqua e resistenti a disinfettanti acidi alcali solventi organici e al calore moderato L illuminazione deve essere adeguata per tutte le attivit Devono essere evitati riflessi e ab bagliamenti indesiderati L arredamento del laboratorio deve essere resistente I banchi le cappe e le attre
132. ente le condizioni di sicurezza Ulteriori dettagli sulla maggior par te delle attrezzature sono forniti nelle pagine seguenti ed informazioni sul loro corretto uso sono fornite nel capitolo 12 Le informazioni sulle attrezzature e manovre potenzialmente pericolose sono presentate nell allegato 4 Isolatori a pressione negativa con pellicole flessibili L isolatore a pressione negativa con pellicole flessibili una apparecchiatura di contenimento pri mario autolimitante che fornisce la massima protezione possibile contro materiali biologici ri schiosi Pu essere montato su un piedistallo mobile Lo spazio di lavoro completamente in cluso in un involucro trasparente di cloruro di polivinile PVC sospeso da una intelaiatura di ac ciaio L isolatore mantenuto ad una pressione interna inferiore alla pressione atmosferica L a ria in entrata filtrata da un filtro HEPA e l aria in uscita filtrata attraverso due filtri HEPA ri solvendo il problema della necessit di una condotta per aria di scarico all esterno dell edificio L isolatore pu essere usato per proteggere un incubatrice un microscopio o alter attrezzature di laboratorio come centrifughe gabbie per animali piastre riscaldanti ecc Il materiale introdot to e rimosso dall isolatore attraverso porte di rifornimento e di prelievo senza compromettere la sicurezza microbiologica Le manipolazioni sono effettuate usando guaine guantate che incorpo rano guanti st
133. enti edizione in lingua italiana IX 1 Principi generali 1 Introduzione 1 Parte Linee guida per la Biosicurezza 2 Valutazione del rischio microbiologico 7 Situazioni per cui esistono informazioni limitate 8 Valutazione del rischio e microrganismi geneticamente modificati 8 3 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 9 Compendio di regole pratiche 9 Progettazione del laboratorio e attrezzature 12 Attrezzature di laboratorio 14 Sorveglianza sanitaria 16 Formazione e addestramento 16 Trattamento dei rifiuti 17 Decontaminazione 17 Procedure per la manipolazione ed eliminazione di materiali contaminati e dei rifiuti 18 Rischi da attrezzature chimico elettrico da incendio o da radiazioni 19 4 Laboratorio di contenimento Livello Biosicurezza 3 20 Norme di comportamento 20 Progettazione e dotazioni del laboratorio 21 Attrezzature del laboratorio 23 Sorveglianza sanitaria 23 5 Laboratorio di massimo contenimento Livello di Biosicurezza 4 25 Norme di comportamento 25 Progettazione e dotazioni del laboratorio 25 6 Stabulari 28 Stabulario Livello di Biosicurezza 1 29 Stabulario Livello di Biosicurezza 2 29 Stabulario Livello di Biosicurezza 3 30 Stabulario Livello di Biosicurezza 4 31 Invertebrati 31 II 7 Linee guida per il collaudo di un laboratorio o di un installazione 33 8 Linee guida per la certificazione di laboratori o impianti 36 Parte Il La Bioprotezione nei laboratori 9 Concetti
134. eratore Indossa re guanti monouso Chi lavora in laboratorio deve evitare di toccarsi bocca occhi e viso Cibo e bevande non devono essere conservati e consumati in laboratorio Nessun oggetto dovrebbe essere inserito in bocca in laboratorio penne matite chewing gum ecc Non usare cosmetici in laboratorio Faccia occhi e bocca devono essere protetti anche mediante appositi schermi protettivi du rante ogni operazione che potrebbe risultare nella produzione di schizzi a partire da materia le potenzialmente infetto Prevenzione dell inoculazione di materiale infetto 1 2 L inoculazione accidentale tramite ferite prodotte con vetro rotto o scheggiato pu essere evita ta adottando procedure accurate Sostituire il vetro con la plastica ogni qualvolta sia possibile L inoculazione accidentale pu essere il risultato di ferita da oggetti taglienti per esempio con aghi ipodermici pipette Pasteur in vetro vetri rotti Le ferite da puntura d ago possono essere minimizzate da a riducendo l uso di aghi e sirin ghe per esempio esistono apparecchi per l apertura di bottiglie schermate cos da permettere l uso di pipette al posto degli aghi e siringhe o b quando siringhe ed aghi sono proprio indi spensabili usando appositi apparecchi meccanizzati di sicurezza Gli aghi non devono mai essere rincappucciati Eliminare gli aghi monouso in contenitori a prova di foratura e dotati di coperchio Sostituire
135. ere applicati pi tardi piuttosto comune usare lo stesso germicida chimico per lavaggio preventivo e disinfezione Germicidi chimici Molti tipi di sostanze chimiche possono essere usate come antisettici e o disinfettanti Poich so no disponibili prodotti commerciali in numero e variet sempre crescenti bene scegliere atten tamente le formulazioni in base alle necessit specifiche L attivit germicida di molte sostanze chimiche pi rapida e migliore a temperature pi alte Allo stesso tempo le alte temperature possono accelerare la loro evaporazione ed anche degra darle Particolare cura richiesta nell uso ed immagazzinamento di tali sostanze nelle regioni tro picali dove la durata della loro conservazione pu essere ridotta a causa delle alte temperature ambientali Molti germicidi possono essere dannosi per l uomo o l ambiente Essi devono essere selezionati immagazzinati maneggiati usati ed eliminati con cura seguendo le istruzioni del fabbricante Per la sicurezza personale quando si preparano diluizioni di germicidi chimici sono raccoman dati guanti grembiuli e protezioni degli occhi In genere i germicidi chimici non sono necessari per la normale pulizia di pavimenti muri at trezzature e mobili Comunque il loro uso pu essere adatto in certi casi per il controllo di epi demie L uso corretto di germicidi chimici contribuisce alla sicurezza sul posto di lavoro riducendo il ri schio da agenti infett
136. erili Un manometro installato per monitorare la pressione nell involucro Gli iso latori a pressione negativa con pellicole flessibili sono usati per manipolare organismi ad alto ri schio Gruppi di Rischio 3 o 4 in campi di lavoro ove non sia possibile o appropriato installare o mantenere cappe di sicurezza biologica convenzionali 58 Tabella 10 Apparecchiature per la sicurezza biologica Attrezzature di sicurezza Apparecchiatura Rischio eliminato Caratteristiche di sicurezza Cappe di sicurezza biologica Classe 1 Classe 2 Classe 3 Aerosol e pulviscolo Aerosol e pulviscolo Aerosol e pulviscolo Minimo flusso d aria in entrata nelle aperture di accesso all area di lavoro protetta Adeguata filtrazione dell aria in espulsione Non fornisce protezione del prodotto Minimo flusso d aria in entrata nelle aperture di accesso all area di lavoro protetta Filtraggio adeguato dell aria in espulsione Fornisce protezione del prodotto Contenzione massima Garantisce la protezione del prodotto se il flusso laminare d aria incluso Isolatori a pressione negativa con pellicole flessibili Aerosol e pulviscolo Contenimento massimo Schermi per pulviscolo Pulviscolo di prodotti chimici Forma uno schermo fra l operatore ed il campo di lavoro Materiale ausiliario di uso delle pipette Rischi da uso delle pipette con la bocca come ingestione di patogeni inalazione di aerosol pr
137. eritore 3 Gli oggetti e i materiali da decontaminare pongono dei rischi potenziali biologici o no nei confronti di chi si occuper della loro eliminazione o potrebbe venirne a contatto all esterno della struttura Decontaminazione La sterilizzazione in autoclave a vapore il metodo migliore di decontaminazione Il materiale da decontaminare ed eliminare deve essere posto in contenitori ad es buste di plastica autocla vabili con un codice colore diverso se il contenuto va autoclavato e o incenerito Metodi alter 17 Manuale di biosicurezza nei laboratori nativi possono essere considerati solo se sono in grado di eliminare e o uccidere i microrganismi per ulteriori dettagli vedi capitolo 14 Procedure per la manipolazione ed eliminazione di materiali contaminati e dei rifiuti I materiali infetti ed i contenitori devono essere ben identificabili secondo le norme nazionali ed internazionali vanno considerate le seguenti categorie 1 rifiuti non contaminati non infetti che possono essere riutilizzati o riciclati o eliminati come se fossero rifiuti comuni 2 oggetti taglienti contaminati infetti aghi ipodermici bisturi coltelli e vetri rotti questi de vono essere sempre raccolti in contenitori rigidi resistenti e dotati di coperchio e quindi trat tati come materiale infetto 3 materiale contaminato da decontaminare tramite passaggio in autoclave e successivamente destinato a lavaggio e riutilizzo o riciclo 4
138. ersonale estraneo al lavoro di laboratorio ad es il personale addetto alle pulizie ed il per sonale amministrativo informato in merito ai pericoli potenziali del laboratorio ed al ma teriale che viene manipolato Sono stati affissi in luoghi ben visibili cartelli riportanti informazioni relative all ubicazione delle persone addette al primo soccorso ai numeri di telefono dei servizi di emergenza ecc Le donne in et fertile sono state avvisate in merito alle possibili conseguenze dell esposizio ne a certi microrganismi a sostanze cancerogene mutagene e teratogene Le donne in et fertile sono state informate che in caso di gravidanza certa o sospetta han no l obbligo di informare il responsabile del personale medico o scientifico in modo che si possa adibirle se necessario a mansioni alternative Esiste un programma di vaccinazioni adeguato al tipo di lavoro svolto nel laboratorio Attrezzature per il test per la TBC e per indagini radiologiche sono disponibili per il perso nale potenzialmente esposto a bacilli tubercolari o ad altro materiale che richiederebbe tali misure preventive I casi di malattia e gli infortuni vengono registrati Per ridurre i rischi sul lavoro sono stati affissi avvisi di pericolo e cartelli con le misure per la prevenzione di incidenti Il personale stato addestrato alle corrette pratiche di Biosicurezza Il personale di laboratorio viene incoraggiato a riferire potenziali esposizioni
139. ersonale pu determinare il tipo di approccio usato Alcuni individui imparano meglio con l uso di audiovisivi altri con materiale scritto Devono essere presi in considerazione anche particolari problemi del personale come ad es la presenza di persone affette da sordit Oltre a prendere in considerazione gli elementi sopra 114 La formazione citati sarebbe auspicabile che gli organizzatori di qualsiasi corso di formazione fossero a co noscenza dei metodi didattici da utilizzare con persone adulte 5 condizioni di apprendimento specifiche L evento formativo es corso di formazione uso di audiovisivi documentazione cartacea ecc non dovrebbe essere in contrasto o non correlato alle capacit preesistenti degli allievi o a quanto stato loro insegnato in passato Per esempio se l obiettivo dell evento formativo consiste nello sviluppo delle capacit di risoluzione delle problematiche l approccio istruttivo dovrebbe privilegiare l acquisizione di metodi di ragio namento piuttosto che la memorizzazione di nozioni Il corso di formazione dovrebbe richiedere un attiva partecipazione e o appropriate verifiche su quanto appreso accurate e credibili Inoltre eventi formativi che simulano nelle esercita zioni pratiche condizioni simili a quelle presenti nell attivit lavorativa miglioreranno il tra sferimento delle capacit acquisite al lavoro reale 6 metodiche di valutazione dell efficacia della formazione Forniscono infor
140. escrementi organici 72 Precauzioni con materiale che potrebbe contenere prioni 73 IV 13 Piani e procedure di emergenza 75 Piano di emergenza 75 Procedure di emergenza per laboratori di microbiologia 76 14 Disinfezione e sterilizzazione 79 Definizioni 79 Pulizia dei materiali di laboratorio 79 Germicidi chimici 80 Decontaminazione degli ambienti 85 Decontaminazione delle cappe di sicurezza biologica 85 Lavaggio e decontaminazione delle mani 86 Disinfezione e sterilizzazione con il calore 86 Incenerimento 88 Eliminazione dei rifiuti 88 15 Introduzione al trasporto di sostanze infettive 90 Norme internazionali sul trasporto 90 La configurazione base del triplo contenitore 91 Procedure di pulizia in caso di spandimenti 91 Parte V Introduzione alla Biotecnologia 16 Biosicurezza e tecnologia del DNA ricombinante 95 Considerazioni di Biosicurezza per i sistemi di espressione biologica 95 Considerazioni di Biosicurezza per il vettore di espressione 96 vettori virali per il trasferimento genico 96 Animali transgenici e knock out 96 Piante transgeniche 97 Valutazione del rischio per organismi geneticamente modificati 97 Ulteriori considerazioni 98 Parte VI Sicurezza chimica antincendio ed elettrica 17 Prodotti chimici pericolosi 101 Vie di esposizione 101 Conservazione dei prodotti chimici 101 Regole generali sulla incompatibilita tra sostanze chimiche 101 Effetti tossici delle sostanze chimiche 101 Prodotti chimi
141. ezione degli operatori da microrganismi Classe I Classe II Classe III del Gruppo di rischio 1 3 Protezione degli operatori da microrganismi del Classe III Gruppo di rischio 4 glove box laboratory dove la cappa a tenuta stagna e munita di guanti Protezione degli operatori da microrganismi del Classe I Classe Il Gruppo di rischio 4 dove il personale indossa tute complete a tenuta pressurizzate Protezione del prodotto Classe II Classe III solo se incluso un flusso laminare Radionuclidi volatili protezione chimica minime quantit Classe IIB1 Classe IIA2 espulsione dell aria collegata all esterno Radionuclidi volatili protezione chimica Classe I Classe IIB2 Classe III L aria viene espulsa dalla cappa attraverso un filtro HEPA a all interno del laboratorio e poi al l esterno attraverso gli estrattori dell edificio b all esterno attraverso gli estrattori dell edificio o c direttamente all esterno Il filtro HEPA pu essere posizionato nel plenum della cappa o su gli estrattori dell edificio Alcune cappe di sicurezza biologica di Classe I sono dotate di un aspi ratore integrato mentre altre confidano sul sistema di aspirazione dell edificio Figura 6 Diagramma schematico di una cappa di Biosicurezza Classe A apertura frontale B vetro per visione all interno C uscita dell aria estratta prefiltrata attraverso HEPA D condotta dell aria estratta in espulsione WAONE FA aria in entrata E
142. fettante in modo tale da minimizzare la generazione di aerosol Tutti i materiali che vengono a contatto con gli sversamenti devono essere disinfettati o autoclavati Certificazioni Il funzionamento e l integrit di ogni cappa di sicurezza biologica devono essere certificati secon do gli standard nazionali o internazionali al momento dell installazione e successivamente rego larmente sottoposti a manutenzione da parte di tecnici qualificati secondo le istruzioni della casa produttrice La valutazione dell efficienza di decontaminazione della cappa deve includere test per l integrit della cappa perdite dei filtri HEPA profilo della velocit del flusso d aria discen dente velocit di entrata livello di pressione ventilazione negativa schema delle correnti d aria allarmi e interblocchi Possono anche essere effettuati test opzionali per perdite di corrente inten sit della luce intensit della lampada a ultravioletti livello del rumore e delle vibrazioni Per condurre questi test sono richieste formazione abilit e attrezzature specifiche ed forte mente raccomandato che siano effettuati da personale qualificato Pulizia e disinfezione Tutti gli oggetti incluse le attrezzature che sono all interno di una BSC devono essere deconta minati e rimossi dalla cappa a fine lavoro poich i residui delle colture possono generare situa zioni di crescita di microbi Le superfici interne delle cappe devono essere decontam
143. ficace Bottiglie e provette con tappo avvitabile Aerosol e perdite Contenimento effettivo Protezione della linea di vuoto Contaminazione del sistema Filtri a cartuccia prevengono il di vuoto del laboratorio con passaggio di aerosol particelle di aerosol e liquidi in eccesso dimensioni 0 45 um La bottiglia per il liquido in eccesso contiene un disinfettante appropriato Un bulbo di plastica pu essere usato per chiudere il vuoto automaticamente quando il contenitore di stoccaggio pieno L intero sistema autoclavabile Materiale ausiliario per l uso delle pipette Il materiale ausiliario per l uso delle pipette deve essere sempre usato Aspirare nelle pipette a bocca deve essere rigorosamente proibito L importanza del materiale ausiliario per l uso delle pipette non pu essere enfatizzato I pi comuni rischi legati ad azioni di uso delle pipette sono conseguenti all aspirazione buccale L aspirazione a bocca e l ingestione di materiale pericoloso sono stati responsabili di numerosi casi di infezione trasmesse in laboratorio I patogeni possono anche essere trasferiti alla bocca se un dito contaminato posto all estremit di aspirazione della pipetta Un rischio meno conosciuto del uso delle pipette con la bocca l i nalazione degli aerosol prodotti dalla suzione Il tappo di cotone non un filtro microbico effi ciente a pressione positiva o negativa e le particelle possono essere aspirate attraverso esso Su
144. formazione della sicurezza microbiologica 115 PARTE VIII Elenco delle verifiche di sicurezza Elenco delle verifiche di sicurezza 22 Elenco delle verifiche di sicurezza Questo elenco di verifiche ha lo scopo di agevolare la valutazione del grado di sicurezza presen te nei laboratori biomedici Strutture del laboratorio 1 Sono state prese in considerazione Linee guida per una corretta edificazione 2 Gli edifici rispettano le norme nazionali ed i regolamenti locali in materia edilizia comprese quelle emanate per prevenire le conseguenze di disastri naturali se necessario I locali sono generalmente sgombri e privi di materiale ostruente I locali sono puliti I pavimenti presentano difetti strutturali I pavimenti e le scale presentano una superficie uniforme ed antiscivolo Lo spazio di lavoro adeguato per svolgere l attivit in sicurezza Le vie di circolazione ed i corridoi sono adeguati per il movimento di persone e lo sposta mento di apparecchiature di grandi dimensioni 9 I piani di lavoro gli arredi e gli accessori sono in buone condizioni 10 I piani di lavoro sono resistenti ai solventi ed ai prodotti chimici corrosivi 11 E presente un lavandino in ogni stanza di laboratorio 12 Gli edifici sono costruiti e mantenuti in modo da evitare l ingresso di roditori e l infestazio ne da artropodi 13 Le tubazioni del vapore e dell acqua calda non poste sotto traccia sono state isolate o protet te
145. foro acetilene e b p 184 C determinare con sviluppo di incendio ammoniaca praticamente insolubile sensibilizzazione della o esplosione In caso di in acqua pelle Pu avere effetti incendio sviluppa gas sulla tiroide irritanti o tossici Mercurio Liquido argenteo Pu essere assorbito Non combustibile Conservare i contenitori Acetilene acido fulminico Conservare i Hg pesante attraverso la pelle Esposto al fuoco libera ermeticamente chiusi Reagisce con ammoniaca azidi e contenitori su Argento vivo m p 39 C Esposizioni ripetute fumi irritanti o tossici Manipolare sotto cappa chimica ossido di etilene formando ripiani provvisti b p 357 C possono provocare o in ambiente ben ventilato prodotti esplosivi Reagisce di vasca per la danni ai reni e al Evitare i versamenti Osservare violentemente con bromo Forma raccolta dei sistema nervoso rigide norme igieniche amalgama con diversi metalli versamenti centrale e possono Indossare guanti in nitrile aspirare le causare vomito diarrea gocce cadute mal di testa nausea in una piccola ionntas distacco dei bottiglia a denti doppia via fornita di un tubicino capillare e collegata a una pompa bonificare le aree contaminate con polvere di zinco per formare un amalgama 67I Metanolo Liquido volatile incolore Effetti sul sistema Facilmente Conservare i contenitori Pu reagire vigorosamente con CH OH con odore nervoso centrale che infiammabile ermeticamente chiusi age
146. gamani impregnati di alcol Disinfezione e sterilizzazione con il calore Il calore il pi comune tra gli agenti fisici usati per la decontaminazione di patogeni Il calore secco assolutamente non corrosivo e viene usato per trattare molti strumenti di labo ratorio che possono resistere a temperature di 160 C o pi per 2 4 h Altre forme di calore secco sono la bruciatura o l incenerimento vedi sotto Il calore umido pi efficace quando usato con le autoclavi La semplice bollitura non uccide ne cessariamente tutti i microrganismi e o i patogeni ma pu essere usata come trattamento mini mo di disinfezione quando altri metodi disinfezione o decontaminazione chimica autoclavag gio non sono applicabili o disponibili Gli articoli sterilizzati devono essere maneggiati ed immagazzinati in modo tale che rimangano incontaminati fino al momento dell uso Autoclavi Il vapore saturo sotto pressione autoclavaggio il mezzo pi efficace ed affidabile per steriliz zare i materiali del laboratorio Nella maggioranza dei casi i cicli di seguito riportati assicurano con autoclavi caricate correttamente la sterilizzazione 1 3 mina 134 C 2 10 min a 126 C 3 15 min a 121 C 4 25 min a 115 C Esempi di autoclavi con caratteristiche diverse Autoclavi a dislocamento per gravit Figura 10 Il vapore entra sotto pressione nella camera sposta ver so il basso l aria pi pesante ed esce attraverso la val
147. ganismi del gruppo di rischio 2 o superiore Manuale di biosicurezza nei laboratori Figura 1 Segnale di Biosicurezza da incollare sulle porte di accesso ai laboratori oy DY IOHAZARD Rischio biologico Accesso consentito solo al personale autorizzato Livello di Biosicurezza 9 v0 OHM Responsabile In caso di emergenza chiamare N telefono lavoro n telefono abitazione L autorizzazione all accesso va richiesta al responsabile indicato 2 Solo il personale autorizzato deve poter accedere alle aree del laboratorio 3 Le porte del laboratorio devono essere mantenute chiuse 4 I bambini non devono essere autorizzati ad accedere al laboratorio 5 L accesso agli stabulari deve avvenire con autorizzazione speciale 6 Nessun animale ad eccezione di quelli usati nel laboratorio pu avere accesso al laboratorio Misure individuali di protezione 1 Per tutto il tempo in cui si lavora in laboratorio devono essere indossati camici uniformi o di vise di laboratorio 2 Per tutte le procedure che prevedono contatto diretto o accidentale con sangue liquidi biolo gici animali o altri materiali potenzialmente infetti occorre indossare guanti adeguati Dopo 10 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 l uso bisogna rimuovere i guanti facendo in modo che tale manovra non comporti un esposi zione a rischio e dopo essersi tolti i guanti necessario lavarsi le mani Il personale deve l
148. gnere il fuoco prodotto dal tetraidrofurano ma pu essere usata per raffreddare i recipienti esposti alle fiamme aspirazione locale o protezione respiratoria guanti protettivi occhiali di sicurezza ossidanti basi forti ed alcuni metalli halide producendo fuoco e pericolo di esplosione Attacca alcuni tipi di plastiche gomme e coatings Il tetraidrofurano pu polimerizzare in presenza di catalizzatori cationici Refluxing con calcio idrossido pu causare esplosioni Cristalli bianchi deliquescenti m p 110 C facilmente solubile in acqua Tallio acetato TIC H 0 Estremamente tossico per ingestione con possibili effetti cumulativi Attacca il sistema nervoso e cardiovascolare Nocivo per contatto cutaneo e attraverso gli occhi Conservare i contenitori ermeticamente chiusi Lavorare sotto cappa chimica o con aspirazione localizzata Indossare indumenti protettivi incluso respiratori antipolvere occhiali contro gli agenti chimici guanti in gomma naturale o sintetica protezione degli occhi 9ST Sostanza Propriet fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica o Tolidina Cristalli incolori Nocivo per contatto con Combustibile Esposto al Evitare il contatto indossare Agenti ossidanti C H 3CH m p 131 C la pelle o ingestione La fuoco sviluppa fumi o protezione degli occhi e guanti 4NH b p 200 C polvere
149. hio q q q Protezione respiratoria q q 38 Linee guida per la certificazione di laboratori o impianti Elemento verificato inserire la data della verifica Si N D Commenti Controlli tecnici generali Il flusso di aria nel laboratorio negativo rispetto agli spazi comuni al corridoio e alla zona degli uffici Lavandini o scarichi fungono da fori di ventilazione Disponibilit di un lavandino per il lavaggio delle mani Parti di macchine pericolose esposte pulegge ingranaggi Il circuito del vuoto ha filtri e trappole sui banchi del laboratorio Rischio di riflusso alla fornitura dell acqua Sistemi ad acqua distillata in buone condizioni Programma per il controllo di artropodi e roditori attivo ed efficace Pratiche e procedure generali Alimenti per consumo umano immagazzinati al di fuori del laboratorio Forno i a microonde chiaramente etichettato i Da non utilizzare per la preparazione di cibo ad uso esclusivo del laboratorio Si mangia si beve si fuma e o si applicano cosmetici all interno del laboratorio Contenitori di vetro pressurizzati fissati con nastro adesivo o riparati per esempio trappole per le linee del vuoto Vietato pipettare con la bocca Disponibilit e utilizzo di dispositivi meccanici per pipettare Abbigliamento protettivo da laboratorio conservato separatamente dall abbigliamento da utilizzare fuori Pulizia e cura generale del laboratorio Contenitori in
150. i Disinfettante Sostanza o miscela di sostanze chimiche usate per uccidere microrganismi ma non necessariamente le spore I disinfettanti di solito sono usati per superfici inanimate ed og getti Disinfezione Utilizzo di mezzi fisici o chimici che uccidono i microrganismi ma non necessa riamente le spore Microbicida Sostanza o miscela di sostanze chimiche che uccidono i microrganismi Il termine spesso usato in luogo di biocida di germicida chimico o di antimicrobico Sporicida Sostanza o miscela di sostanze chimiche che uccidono microrganismi e spore Sterilizzazione Processo che uccide e o rimuove tutte le classi di microrganismi e spore Pulizia dei materiali di laboratorio La pulizia la rimozione di sporcizia sostanza organica e macchie Il pulire comprende spazzo lare aspirare spolverare lavare o passare lo strofinaccio umido di acqua e sapone o di detersivo 79 Manuale di biosicurezza nei laboratori Sporcizia terriccio e sostanze organiche possono offrire riparo ai microrganismi e possono inter ferire con l azione dei decontaminanti antisettici germicidi chimici e disinfettanti La pulizia preventiva essenziale per realizzare una corretta disinfezione o sterilizzazione Mol ti prodotti germicidi sono attivi solamente su oggetti puliti Eseguendo la pulizia impiegare mol ta cura per evitare l esposizione ad agenti infettanti Usare sostanze chimicamente compatibili coi germicidi che dovranno ess
151. i HEPA prima di essere rilasciata all esterno In alternativa dopo il doppio filtraggio HEPA l aria scaricata pu essere fatta ricircolare ma soltanto all interno del laboratorio Per nessun motivo permesso usare aria di ricircolo proveniente dal laboratorio in altre aree Deve es sere prestata la massima attenzione qualora si scelga di far ricircolare l aria all interno del la boratorio Occorre prendere in considerazione i tipi di ricerca condotti le attrezzature le so stanze chimiche e gli altri materiali utilizzati nel laboratorio il tipo di tuta protettiva oltre al le specie animali che possono essere coinvolte nella ricerca Tutti i filtri HEPA devono essere testati e certificati annualmente Gli alloggiamenti dei fil tri HEPA sono progettati per consentire la decontaminazione in situ del filtro prima della rimozione In alternativa il filtro pu essere rimosso in un contenitore primario sigillato impermeabile ai gas per la successiva decontaminazione e o distruzione tramite incene rimento Decontaminazione degli scarichi Tutti gli scarichi provenienti dall area protetta dalla came ra di decontaminazione dalla doccia di decontaminazione o dalle cappe di sicurezza biologi ca di Classe III devono essere decontaminati prima dello scarico finale Il trattamento me diante calore il metodo preferito Gli scarichi possono anche necessitare di una correzione a un pH neutro prima dello scarico L acqua proveniente dalle
152. i attualmente disponibili per l uso con volumi larghi o piccoli possono anche produrre aerosol Gli omogeneizzatori usati per i microrganismi del grup 60 Attrezzature di sicurezza po di rischio 3 dovrebbero essere sempre caricati e riaperti in cappe di sicurezza biologica Gli ul trasonicatori possono produrre aerosol Dovrebbero essere utilizzati sotto cappe di sicurezza bio logica o coperti con schermi durante l uso Gli schermi e l esterno degli ultrasonicatori dovreb bero essere decontaminati dopo l uso Anse di coltura monouso Il vantaggio di usare anse di coltura monouso che non devono essere sterilizzate e pertanto pos sono essere utilizzate con cappe di sicurezza biologica dove i bruciatori di Bunsen ed i microin ceneritori disturberebbero il flusso d aria Dopo l uso le anse monouso vanno poste in disinfet tante ed eliminate come rifiuti a rischio biologico vedi capitolo 3 Microinceneritori I microinceneritori scaldati a gas o elettricamente hanno vetri di borosilicato o schermi di cera mica che minimizzano il pulviscolo e la dispersione di materiale infetto quando le anse di coltu ra per il trasferimento sono sterilizzate Tuttavia i microinceneritori possono disturbare il flusso d aria e dovrebbero essere localizzati verso il retro della superficie di lavoro in cappe di sicurez za biologica Dispositivi di Protezione Individuale In Europa e nel nostro Paese i Dispositivi di Protezione Individual
153. i biosicurezza nei laboratori Conservazione di ampolle contenenti materiale infetto Non immergere mai in azoto liquido ampolle che contengono materiale infetto perch in caso di fessure o di chiusura imperfetta possono rompersi od esplodere al momento della rimozione Se sono necessarie temperature molto basse le ampolle dovrebbero essere posizionate solamente nella fase gassosa sovrastante l azoto liquido In alternativa i materiali infetti possono essere im magazzinati in congelatori meccanici a temperatura ultrabassa o con ghiaccio secco Quando le ampolle vengono rimosse dal congelatore il personale del laboratorio deve indossa re protezioni per occhi e mani e disinfettare la superficie esterna delle ampolle cos conservate Precauzioni standard con sangue ed altri fluidi tessuti ed escrementi organici Le precauzioni standard che includono le precauzioni universali 19 sono elaborate per ri durre il rischio di diffusione dei microrganismi dalle fonti di infezione riconosciute e non 2 Raccolta etichettatura e trasporto dei campioni 1 Seguire sempre le procedure standard 2 I guanti dovrebbero essere indossati per ogni ma nipolazione 2 Il sangue dovrebbe essere raccolto da pazienti o animali da personale specializzato 3 Per le punture venose i sistemi con ago convenzionale e siringa dovrebbero essere sostituiti da dis positivi di sicurezza sottovuoto vacutainer monouso che permettono la raccolta diretta d
154. i di questi prodotti delle vie di esposizione e dei rischi che possono essere associati alla ma nipolazione e alla conservazione vedi allegato 5 Le schede di sicurezza dei materiali e altre in formazioni sui rischi chimici sono disponibili dai fabbricanti dei prodotti e o dai fornitori Que ste schede dovrebbero essere a disposizione nei laboratori dove vengono usati i prodotti chimi ci come parte di un manuale di sicurezza o di procedure Vie di esposizione L esposizione ad agenti chimici pericolosi pu avvenire per inalazione contatto ingestione puntura d ago attraverso la cute lesa oF WN FR Conservazione dei prodotti chimici Nel laboratorio dovrebbero essere conservate le quantita di prodotti chimici necessari per l uso quo tidiano Grandi quantitativi dovrebbero essere tenuti in locali o spazi appositamente progettati I prodotti chimici non devono essere immagazzinati in ordine alfabetico Regole generali sulla incompatibilit tra sostanze chimiche Per prevenire l incendio e o l esplosione le sostanze nell ultima colonna a sinistra di Tavola 13 dovrebbero essere conservate e manipolate in modo tale da evitare il contatto con le corrispon denti sostanze della colonna a destra Effetti tossici delle sostanze chimiche Alcune sostanze chimiche influenzano negativamente la salute di coloro che le manipolano o ne inalano i vapori A parte i veleni evidenti alcuni prodotti chimici sono noti avere va
155. i e deve essere fornita a tutto il personale Tale formazione deve aiuta re il personale a comprendere la necessit di proteggere questi agenti e fornire le nozioni base delle specifiche misure di Biosicurezza e deve includere una panoramica su i pi importanti stan dard nazionali e specifiche procedure d istituto La formazione deve inoltre comprendere le pro cedure che descrivono i ruoli e le responsabilit del personale nel caso di violazioni della sicu rezza inoltre fondamentale per la effettiva attivit in Biosicurezza dei laboratori che tutto il personale che ha regolare autorizzazione all accesso ad agenti sensibili sia professionalmente e eticamente idoneo In definitiva le precauzioni di Biosicurezza dovrebbero diventare una routine dell attivit di la boratorio cos come le tecniche asettiche e altre pratiche microbiologiche sicure Le misure di Bio protezione non devono alterare le caratteristiche proprie degli agenti dei campioni clinici e epi demiologici e le relative informazioni necessarie per le indagini cliniche o di salute pubblica L amministrazione competente per la sicurezza non deve indebitamente interferire con l attivit giornaliera del personale scientifico o essere di impedimento alla conduzione della ricerca De vono essere consentiti accessi legittimati a ricerche e a materiali clinici importanti La valutazio ne dell idoneit del personale la formazione specifica sulla sicurezza e procedure rigorosamen
156. i giallo 2 4 6 alcol con la pelle l ingestione soluzione alcolica solo A contatto con calcestruzzo Trinitrofenolo m p 122 C pu causare mal di pu formare picrato di calcio che scarsamente solubile in testa e nausea un esplosivo sensibile all attrito acqua Irritazione degli occhi Pu reagire vigorosamente con agenti riducenti Acido Solforico Liquido viscoso incolore Soluzioni concentrate Esposto al fuoco libera In caso di contatto con gli occhi un potente ossidante Se l acido H S0 e inodore 15 corrosive fumi tossici Non sciacquare immediatamente e essiccante e reagisce concentrato amp m p 10 C causano gravi ustioni combustibile Diverse consultare un medico in caso di violentemente con diversi aggiunto b p 340 C nebbie e vapori molto reazioni Possono contatto con la pelle lavare reagenti incluso nitro composti all acqua pu con decomposizione corrosivi per inalazione produrre fuoco o immediatamente e rimuovere i organici potassio prodursi soluzioni diluite irritanti esplosioni Diluizioni con vestiti contaminati Indossare permanganato metalli alcalinie ebollizione per gli occhi e la pelle acqua generano calore guanti in nitrile protezione degli perclorati materiali combustibili localizzata causa bruciature e dermatiti e possono produrre schizzi per ebollizione Aggiungere sempre l acido all acqua mai aggiungere acqua occhi e del viso Non mettere a contatto con sostanze infiammabili ossidanti am
157. i meno gravi includono danni minori alla pelle perdita di capelli carenze ematiche danni gastrointestinali e cataratta 2 effetti ereditari come sintomi osservati nella discendenza di soggetti esposti Gli effetti eredi tari della esposizione alle radiazioni alle gonadi includono danni ai cromosomi o mutazioni genetiche L irradiazione delle cellule germinali nelle gonadi in alte dosi pu anche causare la morte delle cellule il che porta a diminuzione della fertilit in entrambi i sessi cambiamenti nel ciclo mestruale nelle donne L esposizione del feto in particolare nell ottava quindicesima settimana di gestazione pu aumentare il rischio di malformazioni congenite compromissio ne delle capacit mentali o insorgenza del cancro in et adulta Principi della protezione dalle radiazioni ionizzanti Per limitare gli effetti dannosi delle radiazioni ionizzanti l uso di radioisotopi deve essere con trollato e deve seguire gli standard nazionali La protezione dalle radiazioni viene governata sul la base di quattro principi 1 minimizzare il tempo di esposizione 2 massimizzare la distanza dalla sorgente delle radiazioni 3 schermare la sorgente delle radiazioni 4 sostituire l uso di radionuclidi con tecniche non radiometriche Le attivit di protezione includono 1 Tempo Il tempo di esposizione durante la manipolazione di materiali radioattivi pu essere ridotto con praticare tecniche nuove e non comuni senza l
158. i quando esiste un rischio di esposizione a strumenti taglienti per esempio durante attivit autoptica Questi guanti proteggono dalle ferite da taglio ma non dalle punture I guanti non dovrebbero essere indossati al di fuori del laboratorio Per ulteriori informazioni vedere i riferimenti bibliografici 12 17 e 18 63 PARTE IV Buone tecniche di laboratorio Tecniche di laboratorio 12 Tecniche di laboratorio Errori umani procedure inadeguate e cattivo uso delle attrezzature causano in laboratorio la maggioranza delle lesioni e delle infezioni connesse all attivita lavorativa Questo capitolo forni sce un compendio di misure tecniche finalizzate ad evitare o minimizzare i problemi di questa natura che pi frequentemente si presentano Sicurezza nella manipolazione dei campioni Raccogliere trasportare e manipolare in maniera impropria i campioni di laboratorio espone a ri schio di infezione Contenitori del campione I recipienti dei campioni possono essere di vetro o preferibilmente di plastica Devono essere ro busti e non lasciar fuoriuscire il materiale quando il coperchio o il tappo sono applicati corretta mente Il contenuto non deve imbrattare l esterno del contenitore Etichettare correttamente i recipienti per facilitarne l identificazione I moduli che specificano gli esami richiesti sul campione non devono essere avvolti attorno ai contenitori ma posti in involu cri separati preferibilmente a tenuta
159. i san gue in provette da trasporto e o cultura chiuse e disabilitano automaticamente l ago dopo l uso 4 Mettere le provette in contenitori adeguati per il trasporto fino al laboratorio vedere il capi tolo 15 per i requisiti di trasporto e per le varie operazioni all interno del laboratorio vedere in questo capitolo la sezione sul trasporto dei campioni fra le varie attrezzature I moduli di richiesta devono essere messi in buste od involucri separati ed a tenuta d acqua 5 Il personale dell accettazione non deve aprire questi involucri Apertura di provette da prelievo o da esame 1 Aprire le provette dei campioni all interno di una cappa di sicurezza biologica 2 Indossare i guanti Si raccomandano anche protezioni per gli occhi e per le mucose occhiali o schermi Completare l abbigliamento protettivo con un grembiule di plastica 4 Mentre si svita si deve avvolgere il tappo con un pezzo di carta o garza per evitare schizzi W Vetro e taglienti 1 Sostituire il vetro con la plastica ogni qualvolta sia possibile Usare solamente vetro da labo ratorio borosilicato e scartare qualsiasi oggetto rotto o scheggiato 2 Non usare gli aghi ipodermici per apirare vedi anche in questo capitolo la sezione su come evitare l iniezione di materiali infetti Strisci e preparati per microscopia Il fissaggio e la colorazione di campioni di sangue sputo e feci per la microscopia non uccide ne cessariamente tutti i
160. ia CNATRWNE Rischi associati con l ospite ricevente 1 Suscettibilita dell ospite 2 Patogenicit del ceppo ospite inclusa virulenza infettivit e produzione di tossine 3 Variazioni nella specificit d ospite 4 Stato immune del ricevente 5 Conseguenze dell esposizione Rischi derivanti dall alterazione di caratteristiche patogeniche esistenti Molte modificazioni non coinvolgono geni i cui prodotti sono di per s dannosi ma effetti av versi possono derivare come risultato di una alterazione di caratteristiche preesistenti non pato geniche o patogeniche Modificazioni di un gene normale possono alterare la patogenicit Nel 97 Manuale di biosicurezza nei laboratori tentativo di identificare questi potenziali rischi devono essere considerati i seguenti punti la li sta non esaustiva 1 C un aumento della infettivit o della patogenicita 2 Pu qualche mutazione disabilitante all interno dell ospite essere annullata come risultato del la inserzione di un gene estraneo 3 Il gene estraneo codifica per un determinante patogenico di un altro organismo 4 Se il DNA estraneo include un determinante patogenico prevedibile che questo gene possa contribuire alla patogenicit dell OGM 5 disponibile un trattamento 6 Pu la suscettibilit dell OGM agli antibiotici o ad altre forme di terapia essere influenzata co me conseguenza della modificazione genetica 7 disponibile un sistema
161. iali non trattabili in autoclave 12 Tutte le manipolazioni con animali infetti da agenti del Gruppo di Rischio 4 devono avveni re in condizioni di massimo contenimento con Livello di Biosicurezza 4 13 Tutti gli animali devono essere alloggiati in isolatori 14 Tutte le lettiere degli animali devono essere trattate in autoclave prima della rimozione dal l installazione 15 Devono essere garantiti i controlli sanitari da parte del medico competente per tutto il per sonale addetto Invertebrati Come per i vertebrati il livello di Biosicurezza dell installazione per animali sar determinato dai gruppi di rischio degli agenti oggetto di ricerca 0 quando diversamente indicato da una valuta zione del rischio Con alcuni artropodi sono necessarie le seguenti precauzioni aggiuntive in par ticolare con gli insetti volanti 1 Occorre provvedere a delle stanze separate per gli invertebrati infetti e per quelli non infetti 2 Le stanze dovrebbero essere sigillabili per la fumigazione 31 Manuale di biosicurezza nei laboratori p 10 11 12 13 Dovrebbero essere immediatamente disponibili degli insetticidi spray Dovrebbero essere fornite delle installazioni per il raffreddamento per ridurre dove ne cessario l attivit degli invertebrati L accesso dovrebbe avvenire attraverso un anticamera contenente trappole per insetti e con schermi a prova di artropodi alle porte Tutte le condutture per la ventila
162. iated interleukin 2 gene therapy for oral cancer Laryngoscope 1999 109 389 395 World Health Organization Maintenance and distribution of transgenic mice susceptible to human viruses memorandum from a WHO meeting Bulletin of the World Health Organization 1993 71 497 502 Furr AK CRC handbook of laboratory safety 5 ed Boca Raton FL CRC Press 2000 Lenga RE The Sigma Aldrich Library of Chemical Safety Data 2 ed Milwaukee WI Aldrich Chemical Company 1988 Lewis RJ Sax s dangerous properties of industrial materials 10 ed Toronto John Wiley and Sons 1999 129 Allegato 1 Primo soccorso Le misure di primo soccorso consistono nelle operazioni da svolgere immediatamente sull in fortunato sul luogo dell incidente in attesa di affidarlo alle cure di un medico per il trattamento definitivo L equipaggiamento minimo di primo soccorso consiste in una cassetta di pronto soccorso in in dumenti protettivi ed equipaggiamento di sicurezza per chi deve effettuare il primo soccorso ed in attrezzatura per irrigazioni congiuntivali La cassetta di primo soccorso La cassetta di primo soccorso dovrebbe essere di materiale che protegga il contenuto da polvere ed umidit Dovrebbe essere posta in posizione visibile ed essere facilmente riconosciuta Per convenzione internazionale la cassetta di primo soccorso identificata con una croce bianca in campo verde La cassetta di primo soccorso dovrebbe contenere fogl
163. icante vedi capitolo 7 Sorveglianza sanitaria Il datore di lavoro per mezzo del Medico Competente ha la responsabilit di assicurare l ade guata sorveglianza sanitaria del personale del laboratorio Lo scopo di tale sorveglianza prevenire ed individuare eventuali malattie occupazionali A tale scopo le attivit da svolgere sono 1 immunizzazione attiva o passiva quando indicato vedi appendice 2 2 elaborazione di un protocollo per la diagnosi precoce di infezioni acquisite in laboratorio 3 esclusione dal lavoro ad alto rischio di individui suscettibili es donne in gravidanza o indi vidui immunocompromessi 4 elaborazione di procedure e fornitura di dispositivi di protezione personale efficaci definiti di concerto con il Responsabile del Servizio Prevenzione e Protezione Linee guida per la sorveglianza del personale di laboratorio in contatto con microrganismi al Livello di Biosicurezza 1 Le evidenze a disposizione indicano che i microrganismi appartenenti a questo livello di rischio hanno scarsa probabilit di causare malattia negli esseri umani o di assumere importanza vete rinaria Tuttavia tutto il personale dovrebbe essere ugualmente sottoposto prima dell assunzio ne a controlli sanitari nel corso dei quali deve essere raccolta e registrata la storia medica op portuno che malattie o incidenti di laboratorio vengano segnalati tempestivamente e che tutto il personale sia informato dell importanza della b
164. ici i sistemi di contenimento e decontaminazione nonch i si stemi di allarme e di sicurezza funzioneranno come progettato cos da garantire il contenimen to di qualsiasi microrganismo potenzialmente pericoloso con il quale si opera all interno di un particolare laboratorio o installazione per animali Le attivit di collaudo inizieranno generalmente durante la fase di programmazione del proces so e proseguiranno per tutta la costruzione e il successivo periodo di garanzia del laboratorio o dell installazione I periodi di garanzia dovrebbero generalmente prolungarsi per un anno dopo l occupazione comunque si rimanda alle normative nazionali di riferimento Si raccomanda di ingaggiare un collaudatore che sia indipendente dagli studi di architettura di progettazione e di costruzione coinvolti nella progettazione e nella costruzione L agente di collaudo funge da so stenitore dell istituto che costruisce o rinnova il laboratorio e dovrebbe essere considerato come un membro del team di progettazione il coinvolgimento dell agente nella fase iniziale della pro grammazione del progetto essenziale Se la normativa nazionale lo consente l istituto pu agi re quale proprio agente di collaudo Nel caso di installazioni di laboratorio pi complesse Livello di Biosicurezza 3 o 4 l istituto pu desiderare di ingaggiare collaudatore esterno che abbia dimostrato esperienza e successo nel col laudo di laboratori di Biosicurezza e stabulari ad a
165. icurezza 3 Figura 4 Tipico laboratorio con Livello di Biosicurezza 3 immagine grafica per gentile concessione di CUH2A Princeton NJ USA Il laboratorio separato dal flus so di passaggio generale delle persone e vi si accede attraverso un anticamera ingresso a porta doppia o laboratorio di base Livello di Biosicurezza 2 oppure una camera di compensazione All interno del locale disponibile un autoclave per la decontaminazione dei rifiuti prima dello smaltimento inoltre disponibile un lavandino con rubinetto azionabile senza l uso delle mani stato creato un flusso d aria direzionale dall e sterno verso l interno del laboratorio e ogni lavoro che comporta l uso di materiali infetti viene svolta all in terno di cappe di sicurezza biologica 22 Laboratori di contenimento Livello di Biosicurezza 3 Attrezzature del laboratorio I principi per la scelta delle attrezzature del laboratorio incluse le cappe di sicurezza biologica ve dere capitolo 10 sono gli stessi previsti per il laboratorio di base con Livello di Biosicurezza 2 Tuttavia al Livello di Biosicurezza 3 la manipolazione di tutti i potenziali materiali infetti deve essere effettuata all interno di una cappa di sicurezza biologica o di un altro dispositivo di conte nimento primario Occorre prendere in considerazione attrezzature quali le centrifughe che avranno bisogno di accessori di contenimento aggiuntivi per esempio contenitori di sicurezza o
166. iente Sono raccomandati recipienti in plastica in particolare di politetrafluoroetilene PTFE perch il ve tro pu rompersi far uscire materiale infetto e ferire l operatore 4 Quando in funzione omogeneizzatori agitatori e sonicatori devono essere ricoperti con una robusta protezione di plastica trasparente da disinfettare dopo l uso Quando possibile que ste macchine dovrebbero funzionare sotto la loro protezione di plastica all interno di una cap pa di sicurezza biologica 5 Alla fine del processo i recipienti devono essere aperti sotto cappa biologica 6 Il personale che usa i sonicatori deve essere provvisto di protezioni per l udito Uso di macinatori di tessuti 1 I macinatori in vetro devono essere tenuti con la mano protetta da guanti avvolti da materia le assorbente I macinatori di plastica PTFE sono pi sicuri 2 I macinatori di tessuti dovrebbero essere fatti funzionare ed aperti sotto cappa biologica Manutenzione ed uso di frigoriferi e congelatori 1 I frigoriferi i congelatori ed i distributori di ghiaccio secco dovrebbero essere scongelati e puliti regolarmente ed ogni ampolla provetta o conduttura danneggiata o rotta durante l immagazzinamento dovrebbe essere sostituita Durante le pulizie indossare protezioni per la faccia e guanti di gomma spessa Dopo avere pulito le superfici interne devono essere dis infettate 2 Tutti i contenitori riposti nei frigoriferi dovrebbero essere etichettati
167. il manuale operativo e di sicurezza q q q Il personale riceve aggiornamenti annuali o addestramento aggiuntivo per i cambiamenti alle procedure q q q Tutti i rifiuti contaminati sono trattati in autoclave prima dello smaltimento q q q 42 PARTE Il La Bioprotezione nei laboratori Concetti di Bioprotezione nei laboratori 9 Concetti di Bioprotezione nei laboratori Nelle precedenti edizioni il Manuale di Biosicurezza nei laboratori metteva a punto le tradizionali norme di Biosicurezza intesa come sicurezza negli ambienti di lavoro Il manuale enfatizza l u so di buone pratiche microbiologiche appropriati dispositivi di contenimento corretta progetta zione utilizzo e manutenzione delle apparecchiature e corrette procedure per ridurre il rischio di infortuni o malattie per i lavoratori Seguendo queste raccomandazioni anche il rischio per am biente e per la comunit si riduce Ora diventato necessario estendere il tradizionale approccio alla Biosicurezza introducendo misure di Bioprotezione I recenti avvenimenti hanno messo in evidenza la necessit di proteggere i laboratori ed i materiali in essi contenuti da atti di sabotag gio che possono danneggiare la popolazione il patrimonio zootecnico l agricoltura e ambien te Prima di definire quali siano le caratteristiche delle apparecchiature dei laboratori di Biosicu rezza importante comprendere la differenza fra i termini Biosicurezza e Bioprotezione Biosicurezz
168. iltrata da filtro assoluto HEPA WHO 02 138 vista frontale vista laterale 52 Cappe di sicurezza biologica Tabella 9 Differenze fra le cappe di sicurezza biologica di Classe I Il e IIl BSC Velocit d ingresso m s aria Sistema di espulsione riciclata espulsa Classe 0 36 0 100 Condotto diretto Classe IIA1 0 38 0 51 70 30 Espulsione nella stanza o attraverso un manicotto Classe IIA2 collegata 0 51 70 30 Espulsione nella stanza con l esterno o attraverso un manicotto Classe IIB1 0 51 30 70 Condotto diretto Classe IIB2 0 51 0 100 Condotto diretto Classe III NA 0 100 Condotto diretto NA non applicabile Tutte le condotte contaminate sono a pressione negativa o sono circondate da condotte o plenum a pressione negativa Cappe di sicurezza biologica di Classe III Questo tipo di cappa Figura 9 garantisce il pi alto livello di protezione personale ed utilizzato per gli agenti patogeni appartenenti al Gruppo 4 Tutte le entrate sono a tenuta di gas L aria in entrata passa attraverso un filtro HEPA e in uscita passa attraverso due filtri HEPA Il flusso dell aria ga rantito da uno specifico sistema di aspirazione esterno alla cappa che mantiene una pressione nega tiva circa 124 5 Pa all interno della cappa L accesso al piano di lavoro garantito da guanti a mani cotto di gomma pesante posizionati frontalmente Le BSCs di Classe III devono avere un box di pas saggio a doppia porta interbl
169. inate prima e dopo l utilizzo Il piano di lavoro e le pareti interne devono essere pulite con un disinfettante che sia in grado di uccidere tutti i microrganismi che potrebbero trovarsi all interno della cappa Alla fine della giornata di la voro la decontaminazione finale delle superfici deve includere la pulizia approfondita del piano di lavoro e tutti i lati interni ed esterni del vetro Una soluzione di ipoclorito o di alcol al 70 de ve essere utilizzata per una inattivazione dei microrganismi Occorre effettuare una seconda la vata con acqua sterile quando si usano disinfettanti corrosivi come l ipoclorito Si raccomanda di lasciare accesa la cappa In caso contrario deve essere lasciata in funzione per 5 minuti per pulire l aria all interno prima di essere spenta Decontaminazione Le BSCs devono essere decontaminate prima dei cambi e rimozioni dei filtri Il metodo di de contaminazione pi comune la fumigazione con gas di formaldeide La decontaminazione deve essere effettuata da personale qualificato Dispositivi di Protezione Individuale Quando si usa una cappa occorre indossare indumenti di protezione Un camice da laboratorio a maniche lunghe ammesso per Livelli 1 e 2 di Biosicurezza Un camice rinforzato sul davanti e chiuso dietro garantisce una protezione migliore e deve essere usato per Livelli 3 e 4 di Biosicu rezza eccetto per i laboratori che richiedono tute e scafandri I guanti devono essere indossati 56
170. innesco collegare a terra i contenitori per evitare scariche di elettricita statica Operare sotto cappa Indossare guanti in nitrile per evitare sgrassamento della cute L esposizione all aria ed alla luce pu provocare la formazione di perossidi esplosivi Pu reagire violentemente con perossidi ed alogeni OFT Sostanza Proprieta fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Dimetilamina Gas liquefatto incolore e Grave irritazione degli Estremamente Tenere lontano da fonti di Pu reagire con ossidanti CH NH volatile con odore occhi e sistema infiammabile agnizione In caso di contatto mercurio pungente respiratorio l inalazione flashpoint 26 C con gli occhi sciacquare m p 93 C pu causare edema limiti infiammabilit immediatamente e ricorrere al b p 7 C polmonare La rapida 2 8 2 8 14 medico Operare sotto cappa solubile in acqua evaporazione pud la soluzione altamente Indossare guanti in nitrile ed causare lesioni da infiammabile occhiali protettivi per il rischio freddo La soluzione flashpoint 18 C chimico corrosiva per occhi e cute 2 4 Polvere cristallina Irritazione di occhi e Mantenere umido per ridurre il Pu reagire energicamente con dinitrofenilidra zina C H NO 7 NHNH 1 idrazino 2 4 dinitro rosso arancio m p 200 C scarsamente solubile in acqua cute Dannoso per inalazione ingestione e conta
171. interbloccati q q q Tutti gli scaffali sono fissati q q q Piani di lavoro impermeabili e resistenti ad acidi alcali solventi organici e calore q q q Illuminazione adeguata q q q Adeguato spazio di immagazzinaggio disponibile opportunamente utilizzato q q q Bombole di gas Bombole tutte fissate q q q Cappellotti sulle bombole di riserva q q q Gas pericolosi e asfissianti soltanto in stanze ventilate q q q Presenza di bombole in eccesso o vuote q q q Sostanze chimiche Infiammabili immagazzinate in armadietti di immagazzinamento per infiammabili q q q Precursori di perossido con doppia data ricevuto e aperto q q q Sostanze chimiche adeguatamente separate per classi di compatibilit q q q Sostanze chimiche pericolose immagazzinate sopra il livello degli occhi q q q Sostanze chimiche immagazzinate sul pavimento q q q 37 Manuale di biosicurezza nei laboratori Elemento verificato inserire la data della verifica Si No N D Commenti Congelatori frigoriferi celle frigorifere Presenza di cibo per consumo umano q q q Infiammabili in unit a prova di esplosione sicure q q q Etichettati esternamente se contenenti sostanze cancerogene radioattivit e o rischio biologico q q Celle frigorifere dotate di rilascio di emergenza q q q Attrezzature elettriche Presenza di prolunghe q q q Prese dotate di messa a terra e con la giusta polarit q q q Connessioni tramite lavandini sotto docce ecc
172. io di istruzioni con le indicazioni generali di comportamento cerotti medicati sterili confezionati singolarmente di diverse dimensioni bende per bendaggi oculari con sistemi di fissaggio bende triangolari bende sterili aghi da balia assortimento di garze sterili non medicate un manuale di pronto soccorso di documentata auturevolezza od uno della Croce Rossa Internazionale Equipaggiamento di protezione individuale per le persone che prestano il primo soccorso deve comprendere 1 boccaglio per la respirazione bocca a bocca 2 guanti ed ulteriori dispositivi di barriera contro le contaminazioni da sangue 3 kit per la pulizia di contaminazioni o spandimenti di sangue vedi capitolo 14 del manuale Deve essere facilmente reperibile anche l attrezzatura per irrigazioni congiuntivali ed il persona le deve essere addestrato al suo corretto uso DN IDIAWN Garner JS Hospital Infection Control Practices Advisory Commitee Guideline for isolation precautions in hospital American Journal of Infection Control 1996 24 24 52 http www cdc gov ncidod hip isolat isolat htm 130 Nota dei traduttori in Italia esiste regolamentazione di legge Decreto n 388 del 15 luglio 2003 entrato in vigore nel luglio 2004 sul primo soccorso sull organizzazione dello stesso e sul contenuto della cassetta di pronto soccorso di cui si riporta il contenuto minimo previsto guanti sterili monouso 5 paia visie
173. iological safety cabinets class I for personnel and environment protection Sydney Standards Australia International 1994 Standard AS2252 1 1994 Biological safety cabinets laminar flow bilogical safety cabinets Class II for personnel and environment and product protection Sydney Standards Australia International 1994 Standard AS2252 2 1994 127 Manuale di biosicurezza nei laboratori 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 128 Standards Australia Standards New Zealand Biological safety cabinets installation and use Sydney Standards Australia International 2000 Standard AS NZS 2647 2000 Advisory Committee on Dangerous Pathogens Guidance on the use testing and maintenance of laboratory and animal flexible film isolators London Health and Safety Executive 1990 Standards Australia Standards New Zealand Safety in laboratories microbiological aspects and containment facilities Sydney Standards Australia International 2002 Standard AS NZS 2243 3 2002 Centers for Disease Control and Prevention Recommendations for prevention of HIV transmission in health care settings Morbidity and Mortality Weekly Report 1987 36 Suppl 2 15 188 Bosque PJ et al Prions in skeletal muscle Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2002 99 3812 3817 Bartz JC Kincaid AE Be
174. ione deve tener conto del microrganismo usato cos come delle specifiche lavorazioni da svolgere delle strutture e attrezzature di cui si dispone e delle pratiche operative e procedu re necessarie per lavorare in sicurezza Per esempio un agente assegnato al gruppo di rischio 2 in genere richiede strutture attrezzatu re pratiche di laboratorio e procedure per la conduzione del lavoro in sicurezza con livello di Biosicurezza 2 Tuttavia per le attivit nelle quali si producono aerosol molto concentrati po trebbe essere pi indicato il livello di Biosicurezza 3 che assicura un maggiore contenimento Quindi l assegnazione del livello di Biosicurezza per un particolare lavoro deve derivare da un giudizio professionale basato su una valutazione del rischio piuttosto che essere fatta automati camente in base al gruppo di rischio cui l agente patogeno che si intende usare appartiene vedi capitolo 2 Tabella 3 riassume le strutture necessarie per i quattro livelli di Biosicurezza Tabella 3 Riassunto sulle caratteristiche dei livelli di contenimento Livelli di Biosicurezza 1 2 3 4 La zona di lavoro deve essere separata da qualsiasi altra attivit nello stesso edificio No No Si Si La zona di lavoro deve poter essere chiusa a tenuta per consentire la disinfezione No No Si Si Ventilazione e la zona di lavoro deve essere mantenuta ad una pressione negativa rispetto a quella atmosferica No Auspicabile Si Si e sistema di ventilazio
175. ioni 60 che a bassa 20 indossare sempre guanti in liquidi infiammabili e altri sovrapressione acquose a diverse concentrazioni concentrazione 6 Soluzioni diluite sono irritanti per gli occhi l apparato respiratorio e la pelle nitrile e occhiali protettivi materiali combustibili carta e tessuti anilina e nitrometano nel contenitore Conservare in ambiente fre sco e al buio Da non utilizza re in contenito ri o attrezzature metalliche Chl Sostanza Proprieta fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Acroleina Liquido incolore o giallo Lacrimazione Grave Altamente Evitare il contatto con cute ed Ossidanti acidi alcali CH CHCHO con un pungente irritazione respiratoria infiammabile occhi ammoniaca ammine Se non sgradevole odore edema polmonare ad Flashpoint 26 C Operare sotto cappa o con inibito polimerizza prontamente m p 87 C elevate esposizioni Limiti esplosivita buona ventilazione con l idrochinine Pu formare b p 53 C Possibili effetti ritardati 2 8 31 perossidi sensibili agli urti Anidride Liquido incolore con un Grave irritazione degli Infiammabile Dalla No fiamme libere scintille non Reagisce violentemente con Acetica forte odore pungente occhi ed irritante per le combustione possono fumare Prevenire l esposizione acqua in ebollizione vapore forti CH C0 0 che ricorda l aceto vie respirato
176. ioni di accesso q q q Accesso al laboratorio attraverso locale filtro compensazione con porte che si chiudono da s q q q Tutte le aperture nel laboratorio sigillate o sigillabili per la decontaminazione q q q Varia estratta non riciclabile ed espulsa lontano da zone occupate q q q Disponibilit di un sistema di ventilazione controllato per monitorare il flusso di aria direzionale q q q Protezione personale Camici chiusi sul davanti indossati nel laboratorio q q q Abbigliamento da laboratorio protettivo indossato soltanto nelle aree del laboratorio e non al di fuori di esso q q q Lavandino per il lavaggio delle mani comandato a pedale con il gomito o automaticamente a fotocellula q q q Protezione delle mani Guanti doppi indossati quando si maneggiano materiali infetti attrezzature e superfici di lavoro potenzialmente contaminate q q q Protezione respiratoria Protezione respiratoria indossata da tutto il personale nel laboratorio quando gli aerosol non sono contenuti in modo sicuro in una BSC q q q Conduzione del laboratorio Fornitura di una protezione per le membrane della mucosa mascherine occhiali schermi protettivi ecc quando si lavora con materiali infetti al di fuori di una BSC q q q Informazioni al personale sui rischi speciali connessi con l agente o gli agenti q q q Al personale viene richiesto di leggere e seguire tutte le istruzioni sulle pratiche e le procedure incluso
177. ipo chirurgico sono disegnate unicamente per la protezione del paziente e non offrono protezione respiratoria al lavoratore Alcune maschere monouso ISO 13 3430 30 so no stati disegnati per protezione da esposizioni di agenti biologici Le maschere non dovrebbero essere indossate al di fuori delle aree di laboratorio 62 Attrezzature di sicurezza Guanti La contaminazione delle mani si pu verificare quando sono effettuate manipolazioni in labora torio Le mani sono anche vulnerabili a ferite da taglienti Guanti di tipo chirurgico in latex vi nile o nitrile approvati microbiologicamente sono largamente diffusi per l uso in laboratorio e per le manipolazioni di agenti infettivi sangue e liquidi organici Guanti riutilizzabili possono esse re impiegati ma bisogna fare molta attenzione al corretto lavaggio rimozione pulitura e disin fezione I guanti devono essere rimossi e le mani lavate a lungo dopo aver manipolato materiale infetto dopo aver lavorato con una cappa di sicurezza biologica o prima di lasciare il laborato rio I guanti monouso usati vanno eliminati con i rifiuti contaminati Le reazioni allergiche come dermatiti ed ipersensibilit acute sono state descritte in dipendenti di laboratori ed altri lavora tori che usano regolarmente guanti di lattice specialmente quelli con polvere di talco Alternati ve ai guanti di lattice con polvere dovrebbero essere disponibili Guanti con rinforzi in acciaio do vrebbero essere usat
178. istruzioni sulle pratiche e le procedure incluso il manuale operativo o di sicurezza richiesto per tutto il personale annualmente q q q Procedure eseguite in modo da ridurre al minimo aerosol spruzzi q q q Siringhe con blocco dell ago unita sistema luer loch siringa ago monouso utilizzate con agenti infettivi q q q L apertura dei rotori delle centrifughe e delle provette centrifugate deve avvenire soltanto in una BSC q q q Campioni infettivi trasportati al di fuori di una BSC in contenitori approvati seguendo le normative di trasporto approvate q q q Dotazione Lavandino per il lavaggio delle mani disponibile vicino all uscita del laboratorio q q q Firma del verificatore per la sicurezza Data di completamento dell indagine 41 Manuale di biosicurezza nei laboratori Tabella 7 Laboratorio di contenimento Livello di Biosicurezza 3 indagine sulla sicurezza del laboratorio Questo modulo va usato unitamente ai moduli per l indagine sulla sicurezza del laboratorio con Livello di Biosicurezza 1 e del laboratorio con Livello di Biosicurezza 2 Localit a nei alii Data une Persona responsabile del laboratorio L see nenne seen Elemento verificato inserire la data della verifica Si No N D Commenti Dotazioni strutturali Laboratorio separato dalle altre aree nell ambito dell edificio e dalle aree dove vi passaggio di persone senza restriz
179. itrile 138 acido acetico 102 139 140 acido fosforico 139 150 acroleina 142 aerosol 4 5 9 13 14 16 17 19 22 30 31 42 43 44 49 51 55 56 58 59 60 61 62 68 69 70 71 73 74 76 136 135 139 149 aghi Ipodermici 13 20 68 69 72 123 agitatori 60 70 71 135 alcoli 146 147 148 165 allarmi 29 43 62 63 ammoniacali soluzioni 29 43 62 63 149 anidride acetica 140 142 anidride carbonica solido ghiaccio secco 102 105 12 153 156 anilina 102 140 141 142 animali 3 4 6 9 12 13 16 17 19 23 29 30 31 32 33 35 49 58 72 73 85 86 88 95 96 97 98 105 112 134 145 156 carcasse 6 32 88 transgenici e knock out 95 96 97 antimicrobico 43 79 antisettico 79 81 84 aree di lavoro 13 14 15 68 105 argento 144 146 148 149 154 argento nitrato 149 aria esausta 57 58 59 aria filtrata filtri HEPA 23 24 28 29 31 32 33 36 53 56 58 120 123 artropodi 10 19 20 37 39 40 47 125 attrezzature di emergenza 83 attrezzature laboratorio III IV VI 16 48 58 123 audit 44 50 auramina 143 autoclavi 17 18 36 60 86 87 88 122 123 azidi 148 152 bambini 10 83 becchi bunsen 61 68 benzene 143 145 146 benzidina 143 biocida 79 Bioprotezione 45 46 47 158 Biosicurezza 1 2 4 5 6 7 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 38 39 40 42 43 44 46 4
180. ivi Infine il numero delle sostanze chimiche germicide in uso dovrebbe es sere contenuto per ragioni economiche per il controllo dell inventario e per limitare l inquina mento ambientale Le classi di germicidi chimici di uso pi frequente sono descritte di seguito con informazioni ge nerali sulle loro applicazioni e sulle precauzioni di sicurezza A meno di diversa indicazione le concentrazioni del germicida sono date in peso volume La tavola 12 riassume le diluizioni rac comandate dei composti che liberano cloro 80 Disinfezione e sterilizzazione Tabella 12 Diluizioni raccomandate di composti che liberano cloro Condizioni di pulito Condizioni di sporco Cloro libero richiesto 0 1 1 g l 0 5 5 g l Soluzione di ipoclorito di sodio 5 cloro libero 20 ml l 100 ml l Ipoclorito di calcio 70 cloro libero 1 4 g l 7 0 g l Dicloroisocianuro di sodio polvere 60 cloro libero 1 7 g l 8 5 g l Dicloroisocianuro di sodio compresse 1 5 g cloro libero per compressa 1 compressa litro 4 compresse litro Cloramine 25 cloro libero 20 g l 20 g l Dopo la rimozione del grosso del materiale da eliminare gt Per irrorazioni ad esempio sul sangue o prima della rimozione del grosso dello sporco Vedi il testo Cloro ipoclorito di sodio Il cloro ossidante ad azione rapida un germicida chimico a largo spettro facilmente reperibile Normalmente venduto come candeggina una soluzione acquosa di ipoclori
181. lavare abbondantemente con acqua Operare sotto cappa Indossare guanti di gomma o plastica e protezione per gli occhi occhiali Acido cromico CrO Ossido di Cromo esavalente CrVI Scaglie rosso scuro senza odore o polvere talora usata in soluzione acquosa m p 197 C Irritante per gli occhi pelle e vie respiratorie Ripetuto o prolungato contatto con la pelle pu causare dermatiti ulcere da cromo e sensibilizzazione cutanea Linalazione pu provocare reazioni simil asmatiche Pu provocare perforazione del setto nasale Cancerogeno per l uomo Oltre i 250 C si scompone in ossido di cromo ed ossigeno con aumento dei rischi di incendio Molte reazioni sono rischiose Prevenire il contatto con occhi e cute evitare l inalazione di polveri e aerosol Operare in ambienti ventilati aspirazione localizzata o protezioni respiratorie In soluzione acquosa un acido forte che reagisce con basi ed corrosivo Forte ossidante reagisce con combustibili materiali organici o altre sostanze prontamente ossidabili carta legno zolfo alluminio plastiche etc Corrosivo per i metalli Acido Fosforico H PO Liquido viscoso incolore o cristalli bianchi igroscopici m p 42 C si decompone sotto il punto di ebolizzione a 213 C solubile in acqua Corrosivo causa bruciature alla pelle e agli occhi Attacca diversi metalli con produzione di idrogeno Esposto al fuoco libera fumi t
182. le 31 32 liofilizzatori 135 liquidi corporei precauzioni standard 11 67 72 liquidi infiammabili immagazzinamento 121 livelli di contenimento tabulari 5 6 30 96 macchie per microscopia 72 159 mani decontaminazione 84 86 mani lavaggio 15 32 41 43 44 83 84 86 manutenzione personale addetto 56 113 120 materiale infettivo liofilizzato apertura delle fiale 71 materiale infetto 13 16 19 20 32 61 62 63 69 71 72 77 124 materiali contaminati vedi materiali infettivi 13 20 73 91 mercurio 39 138 140 146 148 152 154 metanolo 82 149 153 154 155 metilbenzene 156 mezzi di comunicazione 114 microbicida 79 microinceneritori 59 61 microrganismi infettivi gruppi di rischio vedi gruppi di rischio microbiologico 3 4 9 11 18 22 27 31 32 50 54 75 134 135 158 160 microscopia films e macchine per 72 159 160 miscele 83 84 138 141 148 151 153 naftilammina 149 N fenil alfa naftilamina 149 N fenil beta naftilamina 149 ninidrina 149 nitrico acido 102 138 140 nitrobenzene 149 151 occhiali di protezione 40 62 122 140 141 149 150 153 155 occhiali di sicurezza 13 138 140 144 145 149 152 155 OGM vedi organismi geneticamente modificati organismi geneticamente modificati OGM 95 96 98 osmio tetrossido 150 ossalico acido 140 142 ossigeno 82 139 141 143 150 epidemie malattie di eziologia sconosciuta 10 paraformaldei
183. le attrezzature e le pre cauzioni aumentano diventando pi restrittivi a seconda del Livello di Biosicurezza animale So no descritti di seguito e riassunti nella Tabella 4 Queste Linee guida sono aggiuntive il livello superiore incorpora quindi gli standard dei livelli inferiori Stabulario Livello di Biosicurezza 1 Questo livello adatto per la stabulazione della maggior parte degli animali da allevamento do po la quarantena a eccezione dei primati non umani in merito ai quali devono essere consulta te le autorit nazionali oltre che agli animali a cui vengono intenzionalmente inoculati agenti del Gruppo di Rischio 1 obbligatorio l applicazione del sistema buone tecniche di laborato rio GMT Il direttore dello stabulario deve stabilire politiche procedure e protocolli per tutte le operazioni nonch per l accesso allo stabulario Deve essere istituito un adeguato programma di sorveglianza sanitaria per il personale addetto da parte dei Medici Competenti Deve essere approntato e adottato un manuale delle operazioni o per la sicurezza Stabulario Livello di Biosicurezza 2 Questo livello adatto per operare con animali ai quali vengono intenzionalmente inoculati mi crorganismi del Gruppo di Rischio 2 Si applicano le seguenti precauzioni di sicurezza 1 Devono essere soddisfatti tutti i requisiti delle installazioni per animali con Livello di Biosi curezza 1 2 Segnali di avvertimento di rischio biologico
184. le pipette Pasteur di vetro con quelle di plastica Separazione del siero Solo personale specificamente addestrato dovrebbe essere utilizzato per questo lavoro Guanti e protezione per le mucose occhi e faccia devono essere usati Schizzi ed aerosol possono essere evitati o ridotti al minimo solo con l adozione di buone tec niche di laboratorio Sangue e siero devono essere attentamente pipettati non versati Non de ve essere consentito pipettare con la bocca Dopo l uso le pipette devono essere completamente immerse in un disinfettante appropriato 69 Manuale di biosicurezza nei laboratori Devono rimanere nel disinfettante per un tempo adeguato prima di gettarle di lavarle o di risterilizzarle Le provette di campioni da gettare che contengono coaguli di sangue od altro materiale van no nuovamente tappate e messe in contenitori a perfetta tenuta adatti per l incenerimento od il trattamento in autoclave Devono essere disponibili sul posto disinfettanti adatti alla pulizia di schizzi e versamenti ve di capitolo 14 Uso delle centrifughe 1 DI Si 10 11 12 13 14 15 16 L efficacia delle performance meccaniche un pre requisito per la sicurezza microbiologica nell uso di centrifughe da laboratorio Le centrifughe devono essere utilizzate in accordo con le istruzioni del produttore Le centrifughe devono essere posizionate ad un altezza tale che i lavoratori possano ve
185. legato un dispositivo di scarico della pres sione I cappellotti di protezione sono installati sulle bombole quando non vengono utilizzate o du rante il loro trasporto Le bombole di gas compressi sono assicurate in modo tale da non cadere soprattutto in caso di disastro naturale Le bombole ed i serbatoi di benzina sono tenuti a distanza da fonti di calore Il personale stato addestrato all uso ed al trasporto di gas compressi e liquefatti Rischio elettrico 1 L installazione di nuovi impianti elettrici gli interventi di modifica e le riparazioni su quelli gi esistenti vengono effettuati conformemente alle norme di sicurezza in materia di elettricit L impianto elettrico dell edificio dotato di un conduttore a terra ad es un sistema a tre cavi Tutti i circuiti del laboratorio sono stati dotati di deviatori e interruttori di sicurezza in caso di guasto alla messa a terra Tutte le apparecchiature elettriche hanno la certificazione di un laboratorio di verifica I cavi flessibili di collegamento delle apparecchiature sono sufficientemente corti in buone condizioni e non rovinati danneggiati o intrecciati Le prese di corrente sono usate ciascuna per una sola apparecchiatura non si devono usare prese multiple Protezione personale 1 dd Vengono forniti a tutto il personale adeguati Dispositivi di Protezione individuale per le atti vit di laboratorio es camici grembi
186. li prima di essere eliminati Dopo essere stato autoclavato il materiale pu es sere posto in contenitori di trasferimento per il trasporto all inceneritore Se possibile il materia le derivante da attivit sanitarie non deve essere mandato alle discariche nemmeno dopo decon taminazione ma deve essere destinato all incenerimento Se presente un inceneritore presso il laboratorio il passaggio in autoclave pu essere evitato i rifiuti contaminati vanno messi in appositi contenitori es buste in plastica con codice a colori e trasportate direttamente all inceneritore I contenitori di trasferimento riutilizzabili devono esse re a prova di liquidi e con coperchio a tenuta Vanno disinfettati e puliti prima di essere restitui ti al laboratorio per essere riutilizzati Ogni postazione di lavoro deve essere dotata di contenitori per i rifiuti bacinelle e secchi prefe ribilmente infrangibili ad es in plastica Quando si usano disinfettanti i rifiuti devono rimane 18 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 re in contatto stretto col disinfettante cio senza l interposizione di bolle d aria per il tempo pre visto a seconda del disinfettante usato vedi capitolo 14 I recipienti per i rifiuti vanno deconta minati e lavati prima di essere riutilizzati L incenerimento dei rifiuti decontaminati deve ottenere l approvazione delle autorit preposte alla salute pubblica e inquinamento oltre che del funzionario a
187. lico CH CHOH hanno propriet disinfettanti simili Sono attivi contro le forme vegetative di batteri funghi e virus con involucro lipidico ma non contro le spore La loro azione sui virus con involucro non lipidico variabile Per una pi alta efficacia dovrebbero essere usati a concentrazione di circa il 70 v v in acqua ma concentrazioni pi alte o pi basse possono non essere germicide Uno dei maggiori vantag gi delle soluzioni acquose di alcoli che non lasciano residui sugli articoli trattati Le miscele con altri agenti ad esempio alcol al 70 v v con 100 g l di formaldeide ed alcol con 2g 1 di cloro libero sono pi efficaci del solo alcol Una soluzione acquosa al 70 v v di etano lo pu essere usata sulla pelle sulle superfici di lavoro dei banchi e delle cappe di Biosicurezza e per immergere piccoli strumenti chirurgici Dato che l etanolo pu essiccare la pelle spesso vie ne mescolato con emollienti Asciugamani impregnati di alcol sono raccomandati per la decon taminazione di mani poco sporche nelle situazioni in cui il corretto lavaggio delle mani non conveniente o possibile Comunque bisogna ricordare che l etanolo inefficace contro le spore e pu non uccidere tutti i tipi di virus con involucro non lipidico Gli alcoli sono volatili e infiammabili e non devono essere usati vicino a fiamme libere Le solu zioni di lavoro devono essere conservate in contenitori idonei ad evitare l evaporazione Posso
188. lle lavare immediatamente con acqua rimuovere gli abiti contaminati Indossare occhiali di protezione dai prodotti chimici e guanti in gomma naturale o sintetica Tenere sotto chiave in deposito ventilato Per contatto con acidi o acqua contenente anidride carbonica disciolta libera gas acido cianidrico HCN estremamente tossico Trattare i versamenti delle soluzioni con polvere candeggiante sodio ipoclorito e lasciare per 24 h Raccogliere i versamenti solidi con attenzione ed aggiungerli ad acqua contenente polvere candeggiante lasciare per 24 h prima di eliminare Conservare a disposizione in laboratorio un kit di antidoti nei confronti dei cianuri Sodio idrossido NaOH Fiocchi polvere gocce o bastoncini incolori m p 318 C b p 1390 C solubile in acqua Solido e soluzioni concentrate L inalazione della polvere causa danni alle vie respiratorie edema polmonare Corrosivo per ingestione Soluzioni diluite irritano gli occhi o possono causare gravi danni se il contatto con gli occhi prolungato Non combustibile Il contatto con l umidit o con l acqua pu generare calore sufficiente a dar fuoco a sostanze combustibili In caso di contatto con gli occhi sciacquare immediatamente e consultare un medico in caso di contatto con la pelle lavare immediatamente con acqua rimuovere i vestiti contaminati Indossare guanti in gomma naturale o sintetica e protezione degli occhi
189. lmente infetti utile per i servizi di soccorso visitare preventivamente il laborato rio per conoscere la sua configurazione fisica e funzionale Dopo un disastro naturale i servizi di emergenza locali o nazionali devono essere messi in guar dia contro i rischi potenziali presenti nel laboratorio e o negli edifici vicini I soccorritori do vrebbero entrare solamente se accompagnati da un esperto operatore del laboratorio Raccoglie re i materiali infetti in contenitori rigidi a perfetta tenuta od in robusti sacchi monouso Il recupero o l eliminazione definitiva vengono decisi dallo staff della Biosicurezza sulla base del la normativa locale Servizi di emergenza chi contattare I seguenti numeri telefonici e indirizzi devono essere esposti con evidenza nell ambiente di la voro la denominazione dell ente o del laboratorio l indirizzo e l ubicazione pu non essere no ta con precisione a chi chiama od ai servizi chiamati 1 Il direttore dell ente o del laboratorio l indirizzo esatto potrebbe non essere conosciuto in dettaglio dalla persona che inoltra la chiamata di emergenza Direttore dell Istituto o del laboratorio Supervisore del laboratorio Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione o Addetto per la Biosicurezza Vigili del fuoco e squadre di emergenza interne Ospedale servizi ambulanza staff medico nome di cliniche individuali dipartimenti o per sonale medico se possibile 7 Polizia 8 L Ufficiale Sani
190. lta complessit Allorch si ricorre a un agen 33 Manuale di biosicurezza nei laboratori te di collaudo esterno l istituto deve comunque essere designare un proprio membro nel team di collaudo Si raccomanda che oltre all agente di collaudo facciano parte del team anche il Diri gente della Sicurezza Responsabile Servizio Prevenzione e Protezione il Dirigente di Progetto Progettista il Direttore del Programma Datore di lavoro e un rappresentante del personale Rappresentante dei lavoratori per la sicurezza addetto al Funzionamento e alla Manutenzione Di seguito si riporta l elenco dei sistemi e delle componenti del laboratorio che possono essere in clusi nel piano di collaudo per il collaudo funzionale a seconda del livello di contenimento del l installazione che viene rinnovata o costruita L elenco non esaustivo Ovviamente l effettivo piano di collaudo rifletter la complessit del laboratorio che viene pianificato 1 2 3 VENA 34 Sistemi di automazione dell edificio che includono il collegamento a un monitoraggio a di stanza e a sedi di controllo Sorveglianza elettronica e sistemi di rilevamento delle presenza e degli accessi Chiusure di sicurezza elettroniche e lettori di dispositivi di prossimita Impianti di riscaldamento ventilazione immissione e aspirazione e condizionamento HVAC Impianti di filtraggio HEPA high efficiency particulate air sistema di filtrazione ad alta ef ficien
191. mazioni che aiuta no a valutare il raggiungimento degli obiettivi prefissati Le valutazioni possono essere fatte in almeno quattro modi valutando le reazioni dei partecipanti alle istruzioni fornite valutando quanto appreso dai partecipanti a livello teorico e pratico valutando le modifiche dei comportamenti sul lavoro valutando gli esiti tangibili in termini di raggiungimento degli obiettivi organizzativi La valutazione pi completa di un corso di formazione comprende valutazioni relative a cia scuna delle quattro modalit Il metodo meno efficiente di valutazione considerare soltanto le reazioni dei partecipanti alla formazione in quanto questo pu essere scarsamente indicati vo del livello di apprendimento ottenuto Non dovrebbe essere usato come unica misura del l efficacia dell evento formativo 7 verifica della formazione Le valutazioni del corso di formazione raramente indicano un suc cesso completo o un totale fallimento a causa dei molti criteri usati per valutare i risultati Di solito i dati indicano una migliore comprensione assimilazione o applicazione di alcuni ar gomenti del corso rispetto ad altri Le differenze o i divari nella conoscenza o le competenze desiderate risultate dallo sforzo di addestramento possono essere attribuite al bisogno di una maggiore quantit di tempo dedicata alla formazione a metodiche di apprendimento alterna tive o docenti pi preparati L OMS possiede diversi strumenti per la
192. mine basi acqua liberando calore e la maggior parte dei metalli all acido Acido Cristalli bianchi Corrosivo causa gravi Non combustibile Evitare il contatto con gli occhie Reazione violenta con miscele di Conservare in Tricloroacetico igroscopici con odore bruciature agli occhi Nell incendio sviluppa la pelle indossare guanti in rame dimetilsulfossido e per luogo asciutto CCI COOH pungente pelle e vie respiratorie fumi tossici gomma naturale o sintetica ed contatto con basi forti agenti Soluzioni m p 58 C occhiali di protezione dagli agenti ossidanti e metalli come ferro acquose b p 197 5 C chimici o visiera in combinazione zinco alluminio concentrate solubile in acqua con protezione respiratoria In possono etanolo dietiletere caso di contatto con gli occhi decomporsi sciacquare immediatamente e violentemente consultare un medico Acqua Liquido senza colore Corrosivo se a contatto Agente ossidante in Lavare immediatamente con Reagisce violentemente con Pu decompor Ossigenata m p 39 C 70 con la pelle per un caso di contatto con molta acqua in caso di contatto molti composti chimici tra cui gli si sviluppando perossido di b p 125 C 70 tempo prolungato sia ad materiale combustibile con la pelle Se la ossidanti e le basi Intacca i ossigeno deter idrogeno miscibile con acqua alta concentrazione pu causare incendio concentrazione superiore al metalli e i loro sali reagisce con minando una H 0 possibili soluz
193. n im mediatamente visibile Tutte le uscite sono sgombre da arredi apparecchiature materiali e mantenute aperte quan do l edificio occupato L accesso alle uscite disposto in modo da non dover attraversare un area ad alto rischio per potervi accedere Tutte le uscite conducono ad uno spazio aperto I corridoi i passaggi e le vie di circolazione sono mantenuti sgombri per consentire il pas saggio di vigili del fuoco e di attrezzature antincendio Le attrezzature antincendio sono facilmente identificabili tramite un colore codificato Gli estintori portatili sono tenuti sempre carichi in buone condizioni e collocati nei posti sta biliti I locali del laboratorio a rischio incendio sono dotati di estintori e o di coperte antifiamma per l uso in caso di emergenza Se in alcuni locali vengono utilizzati liquidi e gas infiammabili l impianto di aerazione suffi ciente a rimuovere i vapori infiammabili prima che raggiungano una concentrazione pericolosa Il personale stato addestrato sulle modalit di intervento in caso di incendio Conservazione dei liquidi infiammabili Il magazzino per la conservazione dei liquidi infiammabili separato dall edificio principale chiaramente identificato come area a rischio di incendi dotato di un impianto di aerazione a gravit o meccanico separato dall impianto dell e dificio principale L impianto elettrico antideflagrante o collocato fuori dell edificio
194. n modo tale che il personale possa accertarsi in ogni mo mento che nel laboratorio venga mantenuto il flusso di aria nella giusta direzione Il sistema di aerazione dell edificio deve essere realizzato in modo tale che l aria provenien te dal laboratorio di contenimento con Livello di Biosicurezza 3 non venga fatta ricircolare in altre parti dell edificio L aria pu essere filtrata con filtri HEPA high efficiency particu late air sistema ad alta efficienza di filtrazione delle particelle d aria ricondizionata e fatta ricircolare all interno del laboratorio stesso L aria in uscita dal laboratorio tranne quella pro veniente dalle cappe di sicurezza biologica deve essere scaricata direttamente all esterno dell edificio in modo da disperdersi lontano dagli edifici e dalle prese d aria A seconda de gli agenti utilizzati gli scarichi dell aria dovranno essere dotati di filtri HEPA possibile in stallare un sistema di controllo per riscaldamento ventilazione e aria condizionata HVAC per prevenire la pressurizzazione positiva prolungata del laboratorio Occorre prendere in considerazione l installazione di allarmi uditivi o chiaramente visibili per avvisare il perso nale di eventuali guasti al sistema HVAC Tutti i filtri HEPA devono essere installati in modo tale da consentire la disinfezione mediante gas ed essere testati Le cappe di sicurezza biologica vanno poste lontano dalle zone di passaggio e dalle correnti d
195. na buona penetrazione del calore la camera non deve essere troppo riempita cos che il vapore possa arrivare uniformemente al contenuto 5 Nelle autoclavi prive di interblocco di sicurezza che impedisca l apertura del coperchio quan do la camera in pressione prima di aprire la porta deve essere chiusa la valvola principale del vapore e la temperatura lasciata scendere sotto gli 80 C 6 Usare lenti flussi di estrazione dei vapori quando si autoclavano liquidi poich questi a cau sa del surriscaldamento possono entrare in ebollizione tumultuosa al momento della rimo zione 7 Gli operatori devono indossare guanti appropriati e visiere di protezione quando aprono Yautoclave anche quando la temperatura scesa sotto gli 80 C 8 In ogni monitoraggio routinario delle prestazioni dell autoclave mettere al centro di ciascun carico indicatori biologici o termocoppie Un regolare monitoraggio con termocoppie e l abi tuale registrazione dei dati in caso di cattive prestazioni sono estremamente utili per defini re corretti cicli di funzionamento 9 Il filtro di scarico della camera se presente deve essere rimosso e pulito quotidianamente 10 Assicurarsi che le valvole di sicurezza delle autoclavi da fornello non siano rimaste bloccate da carta od altro materiale nel corso delle operazioni di carica Incenerimento L incenerimento utile quando necessario sbarazzarsi di carcasse animali di parti anatomiche e di altri rifiuti
196. ne controllato No Auspicabile Si Si e l aria estratta nella zona di lavoro deve essere filtrata attraverso un ultrafiltro HEPA No No Si No Si Doppia porta di accesso No No Si Si Zona filtro con porte interbloccate a tenuta d aria No No No Si Zona filtro con porte interbloccate a tenuta d aria e doccia No No No Si Stanza filtro No No Si Stanza filtro con doccia No No Si No No Trattamento di decontaminazione degli scarichi No No Si No Si Autoclave e nelle vicinanze No Auspicabile Si Si e in laboratorio No No Auspicabile Si e passante No No Auspicabile Si Cappa di Biosicurezza No Auspicabile Si Si Possibilit di vedere il personale dall esterno No No Auspicabile Si Ambientale e funzionale dal traffico generale gt Dipende dal posizionamento della bocca di espulsione vedi capitolo 4 Dipende dagli agenti biologici usati in laboratorio g Esempio finestra di ispezione circuito televisivo interno doppia via di accesso Manuale di biosicurezza nei laboratori Quindi l assegnazione di un livello di biosicurezza tiene conto del microrganismo agente pato geno usato delle strutture di cui si dispone delle pratiche operative e delle procedure necessa rie per lavorare in sicurezza nel laboratorio Per versione italiana si riporta quanto scritto nel D Lgs 626 Specifiche sulle misure di contenimento e sui livelli di contenimento Nota preliminare le misure contenute in questo allegato devono essere applicate
197. no anche resistenza a certi tipi di antibiotici Il significato di questa scoperta ignoto Alcuni composti fenolici possono essere inattivati dalla durezza dell acqua e perci devono es sere diluiti con acqua distillata o deionizzata I composti fenolici sono sconsigliati per superfici a contatto con il cibo e per aree frequentate da bambini piccoli Possono essere assorbiti dalla gomma e possono anche penetrare nella pelle Se guire la normativa nazionale sulla sicurezza chimica Composti dell ammonio quaternario Molti tipi di composti dell ammonio quaternario sono usati come miscele e spesso in combina zione con altri germicidi come l alcol Hanno buona attivit contro le forme vegetative dei bat teri e dei virus con involucro lipidico Alcuni tipi come il benzalconio cloruro sono usati come antisettici L attivit germicida di certi tipi di composti dell ammonio quaternario notevolmente ridotta dalla sostanza organica dalla durezza dell acqua e dai detersivi anionici ed perci necessaria 83 Manuale di biosicurezza nei laboratori molta cura nella scelta degli agenti per il lavaggio preventivo quando per la disinfezione si pre vede l uso di composti dell ammonio quaternario Batteri potenzialmente dannosi possono cre scere nelle loro soluzioni Avendo bassa biodegradabilit questi composti si possono anche accumulare nell ambiente Alcoli Etanolo alcol etilico C H OH e 2 propanolo alcol isopropi
198. nti ossidanti La reazione con caratteristico possono portare a flashpoint 16 C conservare lontano da sorgenti magnesio o bromo pu essere m p 98 C perdita di coscienza limiti di infiammabilit di ignizione Evitare di respirarei violenta e quelle con forti b p 65 C irritazione delle 7 37 vapori e il contatto con la pelle ossidanti o cloroformio con sodio miscibile con acqua membrane mucose Manipolare sotto cappa chimica possono essere esplosive L esposizione cronica o in ambiente ben ventilato pu provocare danno Indossare guanti in gomma alla retina e al nervo naturale o sintetica e protezione ottico Il contatto degli occhi cutaneo prolungato pu causare dermatiti Pu essere assorbito attraverso la pelle Naftilamina Cristalli da bianchi a Entrambe le forme sono Combustibile Evitare qualsiasi esposizione Il suo uso alfa e beta rosa con odore molto tossiche per indossare appropriati indumenti proibito o C H N caratteristico inalazione ingestione e protettivi Lavorare sotto cappa legalmente N fenil alfa alfa m p 50 C contatto con la pelle chimica o sistema di aspirazione controllato in naftilamina e b p 301 C Carcinogeno umano pu molti Stati N fenil beta beta m p 113 C causare cancro alla naftilamina b p 306 C vescica scarsamente solubile in Mutageno e teratogeno acqua ma il cloridrato sperimentale idrosolubile Assorbito attraverso la pelle Ninidrina Solido giallo chiaro si Nocivo per ingestion
199. ntire la sicurezza Un programma di sicurezza efficace comincia dai Direttori del laboratorio che devono assicurare che l addestramento di base dei lavoratori comprenda le procedure e la buona pratica di laboratorio L addestramento sulle misure di sicurezza deve es sere parte integrante dell inserimento del nuovo lavoratore nel laboratorio Ai lavoratori devono essere fatti conoscere il compendio delle pratiche i protocolli le procedure e le Linee guida vi genti incluso il manuale di sicurezza o operativo necessario prevedere modalit attraverso le quali assicurarsi che i lavoratori abbiano letto e compreso le Linee guida ad esempio l obbligo della firma I responsabili del laboratorio hanno un ruolo fondamentale nell addestramento alla buona pratica di laboratorio del personale da loro dipendente Il preposto alla sicurezza del la boratorio pu essere di aiuto nell addestramento e nella messa a punto di documentazione o di materiale informativo ed esplicativo vedi anche capitolo 21 L addestramento del personale e le istruzioni sulle pratiche da adottare in laboratorio dovrebbe ro sempre prendere in considerazione i rischi associati a tutte le attivit che vengono svolte in la boratorio in particolare 1 rischi da inalazione ad es produzione di aerosol nell usare anse strisciare piastre di agar pi pettare effettuare strisci aprire recipienti di coltura prendere campioni di sangue siero cen trifugare ecc
200. o di Biosicurezza 4 L assegnazione del livello di Biosicurezza tiene conto delle caratteristiche strutturali del laborato rio delle capacit di contenimento delle attrezzature disponibili delle attivit svolte e delle pro cedure operative ritenute necessarie per lavorare con agenti appartenenti ai vari gruppi di rischio La tabella 2 mette in relazione i gruppi di rischio nei quali sono classificati i microrganismi con il livello di Biosicurezza dei laboratori previsto per ciascun gruppo ma non stabilisce una totale cor rispondenza Nelle diverse aree geografiche dovrebbe essere stabilita una specifica classificazione dei micror ganismi per gruppi di rischio considerando 1 Patogenicit del microrganismo 2 Modalit di trasmissione e spettro d ospite del microrganismo Questi fattori possono essere influenzati dai livelli di immunit esistenti nella popolazione locale dalla densit e dagli spo stamenti della popolazione dalla presenza di vettori appropriati dagli standard di igiene am bientale 3 Disponibilit di efficaci misure preventive Queste possono includere profilassi attiva o passi va vaccini somministrazione di immunoglobuline antisieri ecc misure di sanit pubblica ad es igiene dei cibi e delle acque controllo dei serbatoi animali o degli artropodi vettori 4 Disponibilit di terapie efficaci Queste possono includere l immunizzazione passiva o la vac cinazione post esposizione cos come la dis
201. o essere effettuati ed il livello di compe tenza richiesto 3 specificare il contenuto del corso di formazione ed i mezzi di comunicazione utilizzati Il con tenuto costituito dalle nozioni teoriche o attivit pratiche che il partecipante al corso deve ap prendere per essere in grado di migliorare i propri comportamenti lavorativi Le persone pi esperte professionalmente sono quelle in grado di definire meglio i contenuti del programma di formazione in Biosicurezza Alcuni metodi di insegnamento si basano su esercitazioni mirate a risolvere problemi pratici oppure su metodi di apprendimento finalizzati alla correzione di errori che le persone com piono nel corso di un operazione Non chiaro se esista una metodica di insegnamento le zioni formazione fatta con mezzi audiovisivi uso di computer nella didattica video interatti vo ecc pi efficace di un altra Molto dipende dai bisogni specifici di addestramento dalla tipologia di partecipanti al corso ecc 4 considerare le diverse capacit individuali di apprendimento Un corso di formazione effica ce deve tener conto delle caratteristiche o delle particolarit dei partecipanti Gli individui ed i gruppi possono differire per attitudine grado di alfabetismo cultura lingua parlata e pree sistenti livelli di capacit lavorativa Il modo in cui il corso di formazione visto dai partecipanti in rapporto al bisogno di miglio rare la loro capacit lavorativa o la sicurezza p
202. o gas gli occhi indossare occhiali e e mercurio e altri composti m p 190 C ingerito La polvere irritanti o tossici guanti protettivi decomposes irritante per le vie respiratorie e gli occhi Le soluzioni irritano gli occhi e possono causare ustioni alla pelle Acido Liquido incolore Corrosivo causa gravi Potente agente Evitare l inalazione dei vapori ed Materiali combustibili ed agenti Potente agente Perclorico miscibile con acqua ustioni agli occhi e alla ossidante Non altre esposizioni indossare riducenti anidride acetica ossidante pu HCIO pelle e se ingerito combustibile ma indumenti protettivi incluso bismuto e sue leghe alcoli formare prodotti vapori sono corrosivi per gli occhi la pelle e le vie respiratorie Linalazione dei vapori pu cusare edema polmonare accelera la combustione di altre sostanze guanti in nitrile e protezione degli occhi e del viso Con soluzioni calde lavorare sotto cappa chimica metalli carta legno ed altri materiali organici esplosivi se in contatto con vari materiali inorganici ed organici contaminated legno nei pavimenti banchi ecc Pu esplodere per percussione IVI Acido Picrico Cristalli gialli bagnati Tossico per ingestione Esplosivo allo stato Conservare bagnato at all time Forma sali con diversi metalli che Macchia la C H NO 0H con acqua o sciolti in inalazione o contatto secco con acqua o usare solo in sono pi esplosivi dell acido da pelle d
203. occate che pu essere sterilizzato e dotato di filtro HEPA La cappa di Classe III pu essere collegata ad una autoclave passante e usata per decontaminare tutto il materia le che entra o esce dalla cappa Diversi glove box possono essere uniti insieme per ampliare il piano di lavoro Le BSCs di Classe III sono idonee per lavorare in laboratori con livelli di Biosicurezza 3 e 4 Figura 9 Diagramma schematico di una cappa di Biosicurezza Classe III Cappa con guanti A apertura frontale con buchi a tenuta per i guanti B vetro per visione all interno C doppio filtro HEPA per l aria esausta D filtro HEPA supplementare E doppia chiusura con auclave passante o accesso attraverso una scatola chiudibile F tanica con prodotti chimici condotta dell aria esausta in espulsione su impianto indipendente rispetto all aspirazione di altre cappe e dell edificio ri roe TA aria in entrata aria potenzialmente contaminata g aria filtrata da filtro assoluto HEPA vista frontale vista laterale 53 Manuale di biosicurezza nei laboratori Condotti d aria delle cappe di sicurezza biologica Un manicotto o una cappa sono progettati per essere utilizzati con le BSC di Classe IIA1 e HA2 che immettono l aria direttamente all esterno Il manicotto posizionato sopra la cappa biologi ca e convoglia l aria nello scarico dell edificio Una piccola apertura generalmente di 2 5 cm collocata tra il manicotto e lo scarico della c
204. odotti dall aspirazione della bocca sulla pipetta fuoriuscita di condensa o di gocce dalla pipetta contaminazione dell estremit di aspirazione della pipetta Facili da usare Controlla la contaminazione dell estremit di aspirazione della pipetta proteggendo il materiale di uso delle pipette l utilizzatore e la linea di aspirazione Pu essere risterilizzato Controlla il gocciolamento dall estremita della pipetta Microinceneritori per anse anse monouso Pulviscolo da anse di trasferimento Schermati in bocchette ad estremit aperta o tubi di ceramica riscaldati da gas o elettricit Monouso riscaldamento non necessario Provette a prova di perdita per raccolta e trasporto di materiali infetti per sterilizzazione in una struttura Aerosol perdite e trasudazioni Costruiti a tenuta stagna con tappi o coperchi d Durevoli predisposta Autoclavabili Contenitori per taglienti monouso Ferite da puntura Autoclavabili Robusti a prova di perforazione da ago Contenitori di trasporto fra laboratori ed istituti Rilascio di micro organismi nell ambiente Robusti Contenitore primario e secondario per contenere filtrazioni esterne Materiale assorbente per contenere le filtrazioni 59 Manuale di biosicurezza nei laboratori Apparecchiatura Rischio eliminato Caratteristiche di sicurezza Autoclavi manuali o automatiche Materiale infetto Design approvato Sterilizzazione al calore ef
205. on microrganismi del Gruppo di Rischio 3 devono essere alloggiati in gab bie in isolatori o in stanze con estrazione dell aria posteriormente alle gabbie La lettiera dovrebbe essere il pi possibile priva di polveri Tutto l abbigliamento protettivo deve essere decontaminato prima di essere lavato Le finestre devono essere chiuse e sigillate oltre che antisfondamento Dovrebbe essere offerta la vaccinazione del personale addetto a seconda dei casi Stabulari Stabulario Livello di Biosicurezza 4 Il lavoro in queste installazioni sara di norma collegato con quello di un laboratorio di massimo contenimento con Livello di Biosicurezza 4 inoltre le norme e le regolamentazioni nazionali e locali devono essere armonizzate per applicarsi a entrambi Se il lavoro deve essere svolto in un laboratorio con tuta protettiva devono essere rispettate ulteriori pratiche e procedure che supe rano quelle qui descritte vedere capitolo 5 1 Devono essere soddisfatti tutti i requisiti delle installazioni per animali con Livello di Biosi curezza 1 2 e 3 2 L accesso deve essere rigorosamente controllato dovrebbe essere autorizzato a entrare sol tanto il personale addetto designato dal direttore dell istituzione 3 Gli operatori non devono lavorare da soli si deve applicare la regola delle due persone 4 Il personale deve avere ricevuto il livello di addestramento per microbiologi il pi elevato possibile e avere famigliarit con i ris
206. on recapito medico Parte frontale del tesserino AVVISO DI VIGILANZA MALATTIE Fotografia del titolare del tesserino Nome AL DIPENDENTE Portare sempre con s questo tesserino In caso di patologia febbrile inspiegabile presentare il tesse rino al proprio medico e avvisare uno dei nominativi qui elencati nell ordine indicato Dott Tel lavoro Tel casa Tel lavoro Tel casa 23 Manuale di biosicurezza nei laboratori Parte posteriore del tesserino AL MEDICO Il titolare di questo tesserino lavora in un area a in cui sono presenti agenti patogeni quali virus rickettsia batteri protozoi ed elminti Nell eventualita di una patologia feb brile inspiegabile chiedere al dipendente informazioni sugli agenti ai quali pu essere stato esposto Nome del laboratorio Indirizzo 24 Laboratorio di massimo contenimento Livello di Biosicurezza 4 5 Laboratorio di massimo contenimento Livello di Biosicurezza 4 Un laboratorio di massimo contenimento con Livello di Biosicurezza 4 progettato per lavora re con microrganismi del Gruppo di Rischio 4 Prima di costruire e di rendere operativo un la boratorio di questo genere si deve richiedere una consulenza approfondita a istituti che abbiano esperienza nella gestione di una struttura simile Il funzionamento di un laboratorio di massimo contenimento con Livello di Biosicurezza 4
207. oratori Pulire perfettamente le aree contaminate Se disponibile richiedere l aiuto del servizio di sicurezza Scrivere e conservare rapporti sugli incidenti Figura 12 Simbolo internazionale del rischio da radiazioni CAUTION R a RADIOACTIVE MATERIAL 108 PARTE VII Organizzazione della sicurezza e formazione Il responsabile della Biosicurezza ed il comitato per la sicurezza 19 Il responsabile della Biosicurezza ed il comitato per la sicurezza essenziale che ogni azienda istituto ente dal quale dipendano laboratori abbia una politica della sicurezza un manuale di sicurezza ed un programma di supporto che ne permetta l attua zione La responsabilit di tutto questo normalmente del direttore dell istituto o del laborato rio che pu delegare alcuni obblighi ad un responsabile della sicurezza o ad altro personale in grado di svolgerli gli obblighi per la sicurezza in Italia sono regolamentati dal D Lgs 626 e successive integrazioni Lavorare in sicurezza all interno del laboratorio costituisce un obbligo per tutto il personale ogni singolo lavoratore responsabile della propria sicurezza e di quella dei colleghi I lavoratori devo no segnalare ai propri superiori eventuali condizioni di pericolo Sono auspicabili verifiche perio diche delle condizioni di sicurezza effettuate da personale interno o a cura di consulenti esterni Il preposto della Biosicurezza Nell ambito del servizio deve
208. ore e per il cambio dei filtri Operatori Se le BSCs non sono usate correttamente la loro efficacia di protezione diminuisce notevolmente Gli addetti devono porre molta attenzione nel mantenere l integrit del flusso d aria in entrata quando muovono le loro braccia dentro e fuori la cappa Il movimento dentro fuori delle braccia 54 Cappe di sicurezza biologica deve essere lento e perpendicolare rispetto all apertura frontale La manipolazione dei materiali all interno delle BSC deve essere ritardata almeno 1 minuto dopo aver posizionato mani e braccia all interno dell area di lavoro per permettere il riequilibrio del flusso e il suo defluire su mani e braccia Anche il numero dei movimenti dentro fuori la cappa deve essere ridotto al minimo po sizionando tutto il materiale necessario all interno della cappa prima di iniziare il lavoro Posizionamento del materiale La griglia dell aria in ingresso delle BSCs di Classe II non deve essere ostruita da carta attrezza ture o altri materiali Tutti i materiali introdotti all interno della cappa devono essere decontaminati con alcol al 70 Utilizzare carta assorbente inumidita con disinfettante per raccogliere schizzi e spruzzi Tutti i materiali devono essere collocati quanto pi possibile in modo razionale nella cappa ver so il bordo posteriore del piano di lavoro senza ostruire la griglia posteriore Le attrezzature che generano aerosol es miscelatori centrifughe ecc
209. ore prodotto distorce il flusso d aria e pu danneggiare i filtri ammesso un microinceneritore elettrico ma preferibile utilizza re anse sterili monouso 10 11 12 Tecniche di laboratorio Tutte le operazioni devono essere eseguite nella parte mediana o posteriore della superficie di lavoro ed essere controllabili attraverso il pannello di osservazione Traffico e spostamenti alle spalle dell operatore devono essere ridotti al minimo L operatore non deve disturbare il flusso d aria con l introduzione e l estrazione ripetuta del le braccia Non bloccare le griglie dell aria con fogli di annotazioni pipette od altri materiali perch questo ostacola il flusso d aria e pu causare potenziale contaminazione del materiale ed esposizione dell operatore Pulire la superficie della cappa di sicurezza biologica con adatto disinfettante a lavoro ese guito ed alla fine della giornata Il ventilatore della cappa deve girare per almeno 5 minuti sia prima di cominciare il lavoro che dopo il completamento delle operazioni Non mettere mai fogli di carta all interno delle cappe di sicurezza biologica Per ulteriori informazioni vedere il capitolo 10 Prevenzione dell ingestione di materiale infetto o di contatto con pelle ed occhi 1 ak WON Le grosse particelle o le goccioline gt 5 um in diametro rilasciate durante manipolazioni bio logiche si posano rapidamente sulla superficie di lavoro o sulle mani dell op
210. orretti otticamente o indossati sopra gli occhiali da vista e Schermi laterali Schermi facciali Impatto e schizzi e Scherma il viso intero e Facilmente rimuovibile in caso di incidente Maschere respiratori Inalazione di aerosol e Sono disponibili maschere monouso maschere capaci di proteggere a met o totalmente il viso e purificare l aria attraverso filtri maschere pieno facciali respiratori riforniti di aria Guanti Contatti diretti con i microrganismi e Latex Vinile o Nitrile testati per la tenuta ai microrganismi Tagli e Protezione delle mani Respiratori maschere Le protezioni delle vie respiratorie dovrebbero essere adottate durante lo svolgimento di proce dure ad alto rischio per esempio pulitura di materiale infetto La scelta del tipo di respiratore dipender dal tipo di rischio I respiratori sono disponibili con filtri intercambiabili per prote zione contro gas vapori particelle e microrganismi imperativo che i filtri siano inseriti nel respiratore dedicato corrispondente Per ottenere la mi gliore protezione ogni respiratore dovrebbe essere applicato al viso dell operatore e deve essere verificata la tenuta test di tenuta I respiratori completamente isolati con una riserva d aria in tegrale offrono protezione completa Un opinione dovrebbe essere ottenuta da una persona ade guatamente preparata per esempio un igienista industriale per la selezione del respiratore giu sto Le maschere di t
211. ossici In caso di contatto con gli occhi sciacquare con acqua e consultare un medico Indossare guanti in nitrile e protezione degli occhi OFT Sostanza Proprieta fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilit Altri rischi chimica Acido Nitrico Liquido fumante Corrosivo causa gravi Ossidante il contatto Non respirare i vapori usare Acido acetico acido cromico L acido nitrico 50 70 incolore o giallo pallido bruciature agli occhi e con materiale sistemi di protezione delle vie acido cianidrico anilina concentrato HNO m p 42 C alla pelle l inalazione combustibile pud respiratorie carbone idrogeno solforato coinvolto in b p 83 121 C dei vapori pu causare produrre fuoco In caso di contatto con gli occhi basi metalli e diverse altre varie miscibile in acqua edema polmonare Bruciando sviluppa fumi sciacquare immediatamente e sostanze pericolose tossici rivolgersi a un medico reazioni con In caso di contatto con la pelle diversi altri lavare immediatamente togliere i reagenti vestiti contaminati Indossare chimici guanti in PVC grembiuli in materiale sintetico e occhiali di protezione dai prodotti chimici Lavorare sotto cappa chimica Acido Ossalico Cristalli incolori Nocivo se a contatto Combustibile Bruciando Evitare il contatto con la pelle e Agenti ossidanti anche argento HO CCO H solubile in acqua con la pelle o se libera fumi
212. paci di esprimere geni che conferiscono loro tolleranza agli erbicidi o resistenza agli insetti costituiscono motivo di controversia in molte parti del mondo Le discus sioni riguardano la sicurezza alimentare di queste piante e le conseguenze ecologiche a lungo ter mine della loro coltivazione Le piante transgeniche che esprimono geni di origine animale o umana sono usate per sviluppa re prodotti medicinali e alimentari Una valutazione del rischio dovrebbe determinare un appro priato livello di sicurezza per la produzione di queste piante Valutazione del rischio per organismi geneticamente modificati La valutazione del rischio per lavorare con organismi geneticamente modificati dovrebbe pren dere in considerazione le caratteristiche sia dell organismo donatore che del ricevente Alcune delle caratteristiche da prendere in considerazione sono le seguenti Rischi derivanti direttamente dal gene inserito organismo donatore La valutazione necessaria in situazioni dove il prodotto del gene inserito ha note propriet bio logiche o farmacologiche che possono produrre effetti dannosi come ad esempio tossine citochine ormoni regolatori dell espressione genica fattori di virulenza o enhancers sequenza di geni oncogeni resistenza agli antibiotici allergeni La considerazione di questi casi dovrebbe includere la stima del livello di espressione richiesto per ottenere l attivit biologica o farmacolog
213. plificare il confinamento la pulizia e la decontaminazione L area di lavoro con radionuclidi deve essere localizzata in una piccola stanza nelle vicinanze del laboratorio principale o in una stanza de dicata dentro il laboratorio stesso ma separata da altre attivit All entrata dell area radioatti va devono essere apposti cartelli di avvertimento con il simbolo internazionale del rischio ra dioattivo vedi Figura 12 2 Ripiani di lavoro Usare vassoi per le perdite dotati di materiale assorbente monouso Limitare le quantit di radionuclidi Schermare le sorgenti radioattive nelle aree a rischio sui ripiani di lavoro e nelle aree dei rifiuti radioattivi Apporre sui contenitori di prodotti radioattivi il simbolo di rischio con l identificazione del radionuclide l attivit e la data della misurazione Utilizzare misuratori di radiazioni per monitorare le aree gli indumenti protettivi e le ma ni dopo il lavoro Utilizzare contenitori per il trasporto opportunamente schermati L area dei rifiuti radioattivi Allontanare frequentemente i rifiuti dall area di lavoro Tenere accurata registrazione dell uso e della eliminazione dei materiali radioattivi Effettuare esami dosimetrici in caso di materiali che superino i limiti di dose Progettare e applicare periodicamente i piani di emergenza In caso di emergenza per prima cosa assistere le persone ferite 107 Manuale di biosicurezza nei lab
214. ponibilit di antibiotici o di farmaci antivirali te nendo conto della possibilit che emergano ceppi resistenti Tabella 2 Gruppi di rischio per Livello di Biosicurezza Gruppo Livello di Tipo di Laboratorio Pratiche Attrezzature Biosicurezza 1 Base Insegnamento di base Buona pratica Nessuna banco Livello 1 ricerca di laboratorio da lavoro 2 Base Diagnostica di base Buona pratica di Banco da lavoro Livello 2 ricerca laboratorio pi pi Cappe di Dispositivi di protezione sicurezza per le Individuali DPI e segnale procedure che di pericolo producono aerosol 3 Contenimento Diagnostica Come Livello 2 pi Cappe di sicurezza Livello 3 specialistica ricerca DPI speciali accesso per tutte le controllato ventilazione procedure senza ricircolo 4 Massimo Patogeni pericolosi Come Livello 3 pi Cappe di sicurezza contenimento ingresso autorizzato di classe III Livello 4 doccia di decontaminazione glove box o Tute adeguato sistema di smaltimento dei materiali monouso come rifiuti pressurizzate con Cappe di classe Il pi autoclave passante e sistema di ventilazione con filtri assoluti Principi generali L assegnazione di un dato livello di Biosicurezza per le attivit di laboratorio con uno specifico mi crorganismo deve derivare da una attiva valutazione del rischio piuttosto che essere fatta auto maticamente in base al solo gruppo di rischio cui l agente patogeno appartiene vedi capitolo 2 L assegnaz
215. preservation 5 ed Philadelphia PA Lippincott Williams amp Wilkins 2001 Rutala WA APIC guideline for selection and use of disinfectants 1994 1995 and 1996 APIC Guidelines Committee Association for Professionals in Infection Control and Epidemiology INC American Journal of Infection Control 1996 24 313 342 Sattar SA Springthorpe VS Rochon M A product based on accelerated and stabilized hydrogen peroxide evidence for broad spectrum germicidal activity Canadian Journal of Infection Control 1998 13 123 130 Schneider PM Emerging low temperature sterilization technologies In Rutala WA eds Disinfection amp sterilization in health care Champlain NY Polyscience 1997 79 92 Springthorpe VS New chemical germicides In Rutala WA eds Disinfection amp sterilization in health care Champlain NY Polyscience 1997 273 280 Steelman VM Activity of sterilization processes and disinfectants against prions In Rutala WA eds Disinfection amp sterilization in health care Champlain NY Polyscience 1997 255 271 Taylor DM Transmissible degenerative encephalopathies inactivation of the unconventional causal agents In Russell AD Hugo WB Ayliffe GAJ eds Disinfection preservation and sterilization 3 ed Oxford Blackwell Scientific 1999 222 236 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 Infection control guidelines for hand washing cleaning disinfection
216. presi guanti vestiti lunghi e grembiuli monuso devono es sere autoclavati a 134 137 C per un singolo ciclo di 18 minuti o per sei cicli successivi di 3 minuti ognuno e quindi inceneriti Gli strumenti riusabili inclusi i guanti di maglia di acciaio devono essere raccolti per la de contaminazione I rifiuti liquidi infetti contaminati con prioni devono essere trattati per 1 h con sodio ipoclo rito contenente cloro libero alla concentrazione finale di 20 g 1 2 Il trattamento con vapori di paraformaldeide non diminuisce la quantit di prioni che sono resistenti anche ai raggi ultravioletti Comunque si deve continuare a decontaminare le cap pe con metodi standard ad esempio vapori di formaldeide per inattivare altri agenti che possono essere presenti Le cappe di sicurezza biologica e le altre superfici contaminate da prioni possono essere de contaminate con ipoclorito di sodio al 20 g 1 2 di cloro libero per 1 h Dopo la rimozione incenerire i filtri ad alta efficienza HEPA ad una temperatura minima di 1000 C Provvedimenti addizionali raccomandati prima dell incenerimento includono vaporizzazione della superficie esposta del filtro con lacca per capelli prima della ri mozione imbustamento del filtro durante la rimozione rimozione del filtro HEPA mentre la cappa in funzione per non contaminare le parti inaccessibili Gli strumenti dovrebbero essere lasciati a bagno in ipoclorito di sodio contenen
217. pulitura per il loro riutilizzo Limballaggio ed il trasporto dei campioni devono seguire le norme nazionali e o internazio nali esistenti in materia Le finestre che si possono aprire devono essere dotate di barriere per gli artropodi per es zan zariere 11 Manuale di biosicurezza nei laboratori Gestione della Biosicurezza 1 Il Direttore del laboratorio la persona che ha responsabilit diretta del laboratorio ha la re sponsabilit ed il compito di assicurare che vengano messi a punto ed adottati il piano di si curezza ed il manuale operativo Il Preposto alla sicurezza del laboratorio che riferisce al Direttore del laboratorio deve assi curare che il personale venga regolarmente istruito sulla Biosicurezza Il personale deve essere formato ed informato riguardo ai rischi specifici deve leggere il ma nuale di sicurezza o operativo e seguire le pratiche e le norme raccomandate compito del responsabile del laboratorio assicurarsi che le pratiche e le norme vengano comprese da tutto il personale Una copia del manuale di sicurezza o operativo deve essere a disposizione nel la boratorio Deve essere sviluppato un programma di controllo contro artropodi e roditori Tutto il personale deve essere sottoposto a sorveglianza e in caso di bisogno ad adeguati con trolli medici e trattamenti sanitari necessario mantenere un idoneo registro di tali attivit che verr gestito dal medico compet
218. ra paraschizzi flacone di soluzione cutanea di iodopovidone al 10 di iodio da 1 litro esempio di prodotto commercia le Braunol 7 5 soluzione cutanea flaconi di soluzione fisiologica NaC 0 9 da 500 ml 3 flaconi compresse di garza sterile 10 x 10 cm in busta singola 10 buste compresse di garza sterile 18 x 40 cm in busta singola 2 buste teli sterili monouso 2 confezioni pinzette da medicazione sterili monouso 2 confezione di rete elastica di misura media 1 confezione di cotone idrofilo 1 confezioni di cerotti di varie misure pronti all uso 2 rotoli di cerotto alto 2 5 cm 2 un paio di forbici 3 tre lacci emostatici 2 confezioni di ghiaccio pronto uso 2 sacchetti monouso per la raccolta di rifiuti sanitari impermeabili e chiudibili ermeticamente termometro apparecchio per la misurazione della pressione arteriosa Relativamente alla classificazione degli insediamenti ed unit produttive ed alla conseguente differenzia zione nell organizzazione e nelle attrezzature del pronto soccorso cassetta di pronto soccorso di cui sopra o pacchetto di medicazione etc si faccia riferimento al decreto Relativamente all applicazione del de creto citato all interno di strutture sanitarie si faccia riferimento alle Linee guida ancora in elaborazione del Ministero della Salute Comitato Tecnico in cui sono previste ragionevoli semplificazioni sui requisiti e formazione degli addetti al pronto soccorso
219. radiazioni posizionati tra lo peratore o altro personale del laboratorio e la sorgente aiutano a limitare l esposizione La scel ta e lo spessore di ogni materiale dipende dalla capacit di penetrazione della radiazione tipo ed energia Una barriera di materiale acrilico legno o metalli leggeri di spessore 1 3 1 5 cm fornisce protezione contro particelle B ad alta energia mentre il piombo ad alta densit ne cessario per proteggersi da raggi ye X ad alta energia Sostituzione I materiali a base di radionuclidi non devono essere utilizzati dove sono disponi bilit tecniche alternative Se non possibile la sostituzione deve essere utilizzato il radionu clide con il minor potere di penetrazione o la minore energia Procedure di sicurezza per lavorare con radionuclidi Le regole per lavorare con sostanze radioattive devono comprendere considerazioni in quattro aree 1 2 3 4 area di lavoro esposta area del lavoro al banco area dei rifiuti radioattivi registrazioni e emergenza Alcune delle regole pi importanti sono 1 Area di lavoro esposta Utilizzare sostanze radioattive solo in aree dedicate Permettere la presenza solo del personale strettamente necessario Utilizzare dispositivi di protezione individuale come indumenti occhiali guanti a per dere Monitorare l esposizione personale alle radiazioni I laboratori dove vengono utilizzati radionuclidi devono essere progettati per sem
220. re 5 10 volte v v con acqua sterilizzata Le soluzioni di solo perossido di idrogeno al 3 6 hanno potere germicida relativamente lento e limitato I prodotti ora disponi bili contengono altri ingredienti che stabilizzano il perossido accelerano la sua azione germicida e lo rendono meno corrosivo Pu essere usato per la decontaminazione di superfici del lavoro dei banchi di laboratorio e del le cappe di Biosicurezza e le soluzioni pi forti possono essere appropriate per disinfettare ap parecchi medici odontoiatrici danneggiabili dal calore L uso di perossido di idrogeno o di aci 84 Disinfezione e sterilizzazione do peracetico CH COOOH vaporizzati per la decontaminazione di dispositivi medici e chirur gici sensibili al calore richiede un equipaggiamento specializzato Il perossido di idrogeno ed i peracidi possono essere corrosivi per metalli come alluminio rame ottone e zinco e possono anche decolorare stoffe capelli pelle e mucose Gli oggetti cos trattati devono essere sciacquati accuratamente prima di essere posti a contatto con occhi e mucose Devono essere sempre conservati lontano dal calore e protetti dalla luce Decontaminazione degli ambienti La decontaminazione degli ambienti del laboratorio degli arredi e delle sue attrezzature richie de una combinazione di disinfettanti liquidi e gassosi Le superfici possono essere decontamina te con una soluzione di sodio ipoclorito NaOCl mentre una soluzione che contiene
221. re cos la cappa per 30 minuti pri ma di rimuovere i sigilli dell apertura anteriore e del portello di scarico Le superfici della cappa devono essere asciugate per rimuovere i residui prima di metterla in uso 85 Manuale di biosicurezza nei laboratori Lavaggio e decontaminazione delle mani Ogni qualvolta sia possibile quando si manipolano materiali a rischio biologico si devono in dossare guanti appropriati anche se questo non esclude la necessita che il personale del labora torio si lavi le mani in modo corretto ed abituale Le mani devono essere lavate dopo avere ma neggiato materiali a rischio biologico ed animali e prima di lasciare il laboratorio Nella maggioranza dei casi uno scrupoloso lavaggio delle mani con acqua e sapone comune sufficiente a decontaminarle ma l uso di saponi germicidi raccomandato in situazioni ad alto rischio Cospargere e strofinare attentamente le mani con il sapone per almeno 10 secondi sciac quarle con acqua pulita ed asciugarle con asciugamani puliti di carta o stoffa se disponibile pu essere usato un asciugatore ad aria calda Sono raccomandati rubinetti azionabili con il piede o con il gomito se questi non sono in dota zione usare un asciugamani di carta o di stoffa per chiudere il rubinetto per evitare la riconta minazione delle mani lavate Come gi detto quando non possibile lavarsi le mani in maniera corretta per decontaminare mani poco sporche possono essere usati asciu
222. rg au 133 Allegato 4 Sicurezza ed attrezzature L uso di alcune attrezzature di laboratorio o parti di esse pu costituire fonte di rischio micro biologico Altre attrezzature o parti di esse sono invece specificatamente progettate per prevenire o ridurre il rischio biologico vedi capitolo 11 del manuale Attrezzature che possono costituire fonte di rischio Nella Tabella A4 1 sono elencate attrezzature ed operazioni che possono costituire fonte di ri schio e viene inoltre suggerito come tale rischio possa essere eliminato o ridotto Tabella A4 1 Attrezzature ed operazioni che possono costituire fonte di rischio Attrezzatura Rischi Come eliminare o ridurre i rischi Aghi ipodermici Inoculazione accidentale Produzione di aerosol Spandimenti e non reincappucciare o piegare gli aghi e usare sistemi di fissaggio dell ago alla siringa che prevengano la loro separazione es luer lock ed usare dispositivi a perdere in cui l ago sia un tutt uno non separabile dalla siringa usare buone tecniche di laboratorio es riempire con attenzione la siringa per minimizzare la formazione di bolle o microbolle evitare di usare siringhe per miscelare liquidi infettanti se necessario usarle assicurarsi che l ago sia mantenuto sotto la superficie del liquido ed evitare di usare una pressione eccessiva coprire l ago ed avvolgerlo in cotone imbevuto in appropriato disinfettante prima di estrarlo da
223. ri effetti tos sici Possono essere influenzati negativamente o seriamente danneggiati il sistema respiratorio il sangue i polmoni il fegato i reni il sistema gastrointestinale come altri organi e tessuti Di al cuni prodotti sono note le propriet cancerogene o teratogene 101 Manuale di biosicurezza nei laboratori Tabella 13 Regole generali sulla incompatibilita tra sostanze chimiche Categoria della sostanza Sostanze incompatibili Metalli alcalini sodio potassio cesio litio Anidride carbonica idrocarburi clorati acqua Alogeni Ammoniaca acetilene idrocarburi Acido acetico acido solfidrico anilina Agenti ossidanti acido cromico acido nitrico idrocarburi acido solforico perossidi permanganati I vapori di alcuni solventi sono tossici per inalazione A parte gli effetti pi gravi accennati sopra l esposizione pu dare luogo a menomazioni che non danno luogo a effetti sulla salute imme diatamente riconoscibili ma che possono includere mancanza di coordinamento sonnolenza e sintomi analoghi che d luogo ad un aumento della predisposizione agli incidenti La prolungata o ripetuta esposizione a molti solventi organici liquidi pu dar luogo a danni alla cute Ci pu essere causato dall effetto sgrassante ma possono insorgere anche sintomi allergi ci e corrosivi Informazioni dettagliate sugli effetti tossici dei prodotti chimici sono in allegato 5 Prodotti chimici esplosivi Gli azoidrati
224. ri sono Non combustibile ma Operare in circuito chiuso in Forte ossidante reagisce Intacca alcuni Br colore bruno rossastro corrosivi per gli occhie aumenta la combustione ambiente ventilato Indossare violentemente con combustibili e tipi di plastica scuro vie respiratorie di altre sostanze Molte guanti e camici protettivi sostanze riducenti Reagisce gomma m p 7 2 C l inalazione pu reazioni possono occhiali di sicurezza maschera violentemente con ammoniaca in rivestimenti b p 58 8 C provocare edema provocare incendi o facciale ovvero protezione degli soluzione acquosa ossidanti polmonare ed effetti sul esplosioni Il occhi combinata con protezione metalli composti organici e sistema nervoso riscaldamento pu delle vie respiratorie fosforo centrale Contatto con causare aumento di gli occhi pu provocare pressione con rischio di visione indistinta dolore incendio gravi lesioni tessutali Cianuro di Cristalli bianchi o Gravi effetti su occhi Non combustibile ma Operare in circuito chiuso con Quando scaldato o a contatto bromo incolori con odore pelle e vie respiratorie quando scaldato ventilazione Indossare guanti ed con acidi si scompone in cianuro BrCN pungente l inalazione di vapori produce gas abiti protettivi occhiali di molto tossico ed infiammabile m p 52 C pu causare edema infiammabili Coinvolto sicurezza e maschera facciale o ed acido bromidrico corrosivo b p 61 C polmonare che pu inunincendio produc
225. rie azione svilupparsi fumi o gas di cute ed occhi ossidanti alcoli ammine basi m p 73 C corrosiva Possibili irritanti o tossici forti e molti altri composti b p 139 C effetti ritardati Flashpoint 49 C Attacca numerosi metalli in Limiti esplosivit presenza di acqua 2 7 10 3 Anidride Solido bianco traslucido Rischio di asfissia in Indossare guanti protettivi isolati Metalli alcalini basi forti carbonica a 79 C aree confinate e poco termicamente in forma solida Sublima a gas a ventilate il contatto con Stoccare solamente in locali od ghiaccio temperatura ambiente il ghiaccio secco causa aree ventilate ed in contenitori secco CO lesioni da freddo non stagni Anilina Liquido oleoso da Cianosi dovuta alla Combustibile Stoccare in contenitori ermetici Forti ossidanti C H NH incolore a bruno con un metaemoglobinemia Flashpoint 70 C in aree separate da ossidanti Acidi forti odore simile ad amine Irritazione ad occhi e Limiti esplosivit Evitare il contatto con occhi e aromatiche cute Pu essere 1 2 11 cute Operare sotto aspirazione m p 6 C assorbita attraverso la localizzata o protezione b p 185 C pelle ripetute o respiratoria guanti protettivi prolungate esposizioni indumenti protettivi maschera possono provocare facciale sensibilizzazione Argento Metallo bianco vira al Linalazione di elevati Non combustibile Lavorare con aspirazione Incompatibile con acetilene Ag nero per esposizione quantitativi di vapori
226. rischi di ingestione nel manipolare campioni strisci e colture rischi di esposizione percutanea quando si usano siringhe e aghi rischio di essere morsi e graffiati nel lavoro con animali manipolazione di sangue e altri materiali patologici potenzialmente a rischio decontaminazione ed eliminazione di materiale infetto AJIAN Trattamento dei rifiuti Per rifiuto si definisce qualsiasi materiale da eliminare Nei laboratori la decontaminazione dei rifiuti strettamente connessa alla loro eliminazione fi nale Nell uso quotidiano poco o nulla del materiale contaminato richieder di essere portato via dal laboratorio e distrutto La maggior parte della vetreria degli strumenti e del vestiario di la boratorio verr riutilizzato o riciclato La condizione ideale sarebbe quella in cui tutto il materia le infetto fosse decontaminato autoclavato o incenerito ovviamente dipende dalle possibilit e dai quantitativi di materiale nel laboratorio Le domande principali da porsi prima di gettare qualunque oggetto o materiale utilizzato in un laboratorio nel quale si svolgono attivit con microrganismi potenzialmente infettivi o tessuti animali sono 1 Gli oggetti o il materiale infetto sono stati efficacemente decontaminati o disinfettati secondo una procedura approvata 2 In caso di risposta negativa sono stati impacchettati secondo le regole per essere immediata mente inceneriti sul posto o trasferiti ad un altro incen
227. risultanti da manipolazioni di laboratorio parenterale aerea da ingestione Persistenza dell agente nell ambiente Concentrazione dell agente e volume del materiale concentrato da manipolare Presenza di un ospite recettivo umano o animale Disponibilit di informazioni derivanti da studi animali segnalazioni di casi di infezioni con tratte in laboratorio casi clinici Attivit di laboratorio previste sonicazione generazione di aerosol centrifugazione etc 10 Qualunque manipolazione genetica del microrganismo che possa ampliarne lo spettro d o spite o alterarne la sensibilit a trattamenti terapeutici disponibili ed efficaci vedi capitolo 16 11 Disponibilit in loco di efficaci interventi di profilassi e trattamento NOS e he Manuale di biosicurezza nei laboratori Sulla base delle informazioni acquisite nel corso della valutazione del rischio si pud assegnare un livello di Biosicurezza all attivita di laboratorio che si intende condurre si possono scegliere adeguati dispositivi di protezione individuale e sviluppare procedure operative standard per as sicurare che lo svolgimento del lavoro sia il pi sicuro possibile Situazioni per cui esistono informazioni limitate La procedura di valutazione del rischio appena descritta praticabile quando esistono adeguate informazioni Tuttavia a volte le informazioni esistenti sono insufficienti per effettuare una cor retta valutazione del rischio come
228. rmativi sono stabiliti limiti in peso e o in volume per il confezionamento di materiali infettivi L involucro esterno protegge l involucro secondario da danneggiamenti fisici durante il traspor to Secondo le pi recenti norme deve essere inoltre disponibile documentazione contenente in formazioni sul campione trasportato la sua identificazione o descrizione nonch dati sul mit tente e sul destinatario Le Nazioni Unite nel Model Regulations prescrivono l utilizzo di due differenti tripli contenitori La configurazione base si adotta per il trasporto dei materiali infettivi comunque i materiali ad alto rischio devono essere spediti seguendo regole pi severe Per ulteriori dettagli sull uso di differenti sistemi di contenimento a seconda del tipo di materiali da trasportare raccomanda bile la consultazione di regolamenti nazionali e o internazionali Procedure di pulizia in caso di spandimenti In caso di spandimenti di materiali infettivi o potenzialmente tali devono essere osservate le se guenti procedure 1 Indossare guanti e indumenti protettivi comprese protezioni del volto e degli occhi se racco mandato 2 Coprire il materiale fuoriuscito con stracci o carta assorbente per contenerlo 3 Versare un disinfettante appropriato sulla carta assorbente e sull area immediatamente circo stante normalmente soluzione di ipoclorito al 5 per spandimenti su velivoli dovrebbero es sere usati disinfettanti a base di ammonio qua
229. rmicidi chimici 80 83 84 86 glutaraldeide 73 83 grembiuli 40 61 62 74 80 122 140 155 guanti 10 12 13 30 40 43 44 50 53 56 58 62 63 69 71 72 73 76 78 80 86 88 91 102 107 122 124 130 131 135 138 139 140 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 HEPA filtri vedi filtri ad alta efficienza per aria particolato idrogeno cloruro 139 idrogeno solfuro 154 illuminazione 14 16 31 36 39 120 138 immunizazione staff 18 22 incenerimento 20 21 29 32 70 74 86 88 89 inceneritori 6 88 89 Incidenti 13 18 42 75 78 102 108 110 130 136 equipaggiamento relativo 60 75 78 85 130 vedi anche primo soccorso infortuni 123 130 131 sversamenti 42 56 indumenti protettivi vedi attrezzature indumenti per la protezione personale 18 44 122 infortunio vedi incidente sversamenti 27 ingegneria genetica 95 96 111 ingestione di materiale infetto 9 19 59 60 69 73 76 inoculazione accidentale 37 insetti volanti 33 34 International air trasport association IATA 90 92 International civil aviation organization ICAO 90 interruttori 39 105 122 Invertrebati 33 34 Iodio 84 131 148 Isolatori film flessibili a pressione negativa 6 32 33 34 60 59 Ispezione sicurezza in laboratorio 5 38 87 knock out animali 95 96 laboratorio direttore 9 14 16 25 31 33 36 39 42 77 111 lenti a contatto 13 62 lettiera anima
230. ro della cappa di sicurezza biologica La precauzione principale per l operatore quella di evitare l ingestione di materiali contamina ti o la puntura della cute Poich gli agenti non vengono uccisi con i normali processi di disinfe zione e sterilizzazione del laboratorio devono anche essere prese le seguenti precauzioni sup plementari 1 assolutamente raccomandato l uso di attrezzatura dedicata non condivisa con gli altri la boratori 73 Manuale di biosicurezza nei laboratori 10 11 12 13 14 15 16 Devono essere indossati sia abbigliamento protettivo vestito lungo e grembiuli che guanti monouso per i patologi guanti a maglia di acciaio assieme ai guanti di gomma fortemente raccomandato l uso di strumenti monouso di plastica che possono essere trat tati ed eliminati come rifiuti asciutti Non usare con materiale tissutale apparecchi automatici difficili da disinfettare ma preferi re contenitori e beaker di plastica Tutte le manipolazioni devono essere condotte sotto cappe di sicurezza biologica Porre la massima cura per evitare la produzione di aerosol ingestione tagli e puntura della pelle Anche dopo contatto prolungato i tessuti fissati con formalina devono essere considerati an cora infettanti I campioni istologici che contengono prioni sono sostanzialmente inattivati dopo esposizio ne ad acido formico al 96 per 1 h 24 25 I rifiuti del banco di lavoro com
231. rodotti genici per ulteriori studi Le molecole di DNA ricombinante sono state utilizzate anche per crea re OGM come animali transgenici e knock out e piante transgeniche La tecnologia del DNA ricombinante ha gi avuto un enorme impatto in biologia e in medicina ed avr probabilmente un influenza ancora maggiore ora che disponibile la sequenza nucleoti dica dell intero genoma umano Decine di migliaia di geni le cui funzioni sono ancora scono sciute saranno studiate utilizzando la tecnologia del DNA ricombinante La terapia genica pu diventare un trattamento di routine per alcune malattie e nuovi vettori per il trasferimento di ge ni probabile vengano messi a punto utilizzando le tecniche dell ingegneria genetica Inoltre le piante transgeniche prodotte con tecnologia del DNA ricombinante possono giocare un ruolo sempre pi importante nella moderna agricoltura Gli esperimenti che coinvolgono la creazione o l uso di OGM dovrebbero essere condotti dopo aver effettuato una valutazione del rischio biologico Le propriet patogeniche e i potenziali ri schi associati con tali organismi possono essere insoliti e non ben caratterizzati Dovrebbero es sere valutate le propriet dell organismo donatore la natura della sequenza del DNA che verr trasferito le propriet dell organismo ricevente e le caratteristiche dell ambiente Questi fattori dovrebbero aiutare a stabilire il livello di Biosicurezza richiesto per la manipolazione si
232. roduce quindi an che concetti di Biosicurezza quali la protezione di agenti biologici da furto o un uso inappro priato che potrebbe rappresentare un danno alla salute pubblica La presente edizione contiene anche informazioni sulla sicurezza derivanti dalla pubblicazione OMS del 1997 Sicurezza nei la boratori sanitari 1 La terza edizione del Manuale di Biosicurezza nei laboratori dell OMS un utile riferimento e guida per i Paesi che accettano la sfida a sviluppare e mettere a punto com pendi nazionali sulle procedure per mettere al sicuro gli agenti microbiologici ma assicurando la loro disponibilit per scopi epidemiologici clinici o di ricerca Dr A Asamoa Baah Assistant Director General Communicable Diseases World Health Organization Geneva Switzerland VII Ringraziamenti Lo sviluppo della terza edizione del Laboratory Biosafety Manual stato possibile grazie al contributo dei seguenti esperti ai quali siamo molto riconoscenti Dr W Emmet Barkley Howard Hughes Medical Institute Chevy Chase MD USA Dr Murray L Cohen Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA in pensione Dr Ingegerd Kallings Swedish Institute of Infectious Disease Control Stoccolma Svezia Ms Mary Ellen Kennedy Consultant in Biosafety Ashton Ontario Canada Ms Margery Kennett Victorian Infectious Diseases Reference Laboratori North Melbourne Australia in pensione Dr Richard Knudsen Office of Health
233. ruciatore Bunsen adottando un microinceneritore elettrico chiuso per sterilizzare le anse di trasferimento Meglio ancora utilizzare anse monouso che non bisogna sterilizzare Quando si essiccano campioni di sputo evitare di creare aerosol Mettere i campioni e le culture da buttare e o autoclavare in contenitori a perfetta tenuta ad esempio in sacchi per rifiuti di laboratorio Rafforzarne la chiusura ad esempio con il nastro da autoclave prima di eliminarli nei contenitori dei rifiuti Decontaminare le aree di lavoro con disinfettanti appropriati alla fine di ciascun processo Per ulteriori informazioni vedere riferimento bibliografico 12 Uso di cappe di sicurezza biologica 1 9 68 L uso e le restrizioni delle cappe di sicurezza biologica dovrebbero essere spiegati a tutti i po tenziali utilizzatori vedi capitolo 10 con riferimento agli standard nazionali ed alla lettera tura di rilievo Protocolli scritti o di sicurezza o manuali operativi dovrebbero essere conse gnati allo staff In particolare si deve avvertire chiaramente che la cappa non protegge l o peratore da versamenti rotture o cattiva tecnica Non usare la cappa se non funziona correttamente Non aprire il pannello di vetro quando la cappa in funzione Dentro la cappa ridurre al minimo la presenza di strumenti e materiali La circolazione di aria nella parte posteriore non deve essere bloccata Non usare nella cappa bruciatori Bunsen perch il cal
234. rumore sono accettabili Esiste un organizzazione adeguata per la raccolta e l eliminazione dei rifiuti non pericolosi Riscaldamento ed aerazione La temperatura consente di lavorare in maniera confortevole Le finestre esposte alla luce diretta del sole sono dotate di tende idonee L aerazione adeguata ad es sono presenti almeno sei ricambi d aria all ora soprattutto nel le stanze dotate di ventilazione meccanica Il sistema di aerazione dotato di filtri HEPA L aerazione meccanica compromette i flussi d aria intorno ed all interno delle cappe chimiche e di sicurezza biologiche Illuminazione 1 2 3 4 oF Lilluminazione generale adeguata ad es 300 400 lux I piani di lavoro sono dotati di illuminazione localizzata Nei locali e nei corridoi sono presenti angoli bui o poco illuminati Le lampade fluorescenti sono parallele ai piani di lavoro Le lampade fluorescenti sono del tipo a luce naturale Servizi 1 WD Ciascun locale del laboratorio adeguatamente fornito di lavandini acqua prese di corrente e di gas Esiste una manutenzione programmata per fusibili luci cavi tubi ecc I guasti vengono riparati in tempo ragionevole Sono disponibili servizi di manutenzione interni con ingegneri esperti e personale in posses so anche di nozioni relative al tipo di lavoro svolto in laboratorio controllato e documentato l accesso alle varie aree del laboratorio da par
235. sente un sistema d allarme per il personale che opera all interno del laboratorio con tute a tenuta pressurizzate che segnali i guasti del sistema di fornitura dell aria vedere capitolo 10 2 Accesso controllato Il laboratorio di massimo contenimento con Livello di Biosicurezza 4 de 26 ve essere posizionato in un edificio separato o in una zona chiaramente delimitata all interno di un edificio sicuro L ingresso e l uscita del personale e dei materiali devono avvenire attra verso un sistema a filtro con porte interbloccate a tenuta d aria all uscita obbligatorio per il personale fare la doccia prima di indossare gli abiti della vita civile Sistema ad aria controllata Nella struttura deve essere mantenuta una pressione negativa Sia l aria fornita sia l aria estratta deve essere filtrata con filtri HEPA Le differenze fra i siste mi di ventilazione dei laboratori con cappe di Classe III e quelli dei laboratori con tuta a tenu ta pressurizzata sono significative Laboratori con cappe di Classe III La fornitura di aria alle cappe di sicurezza biologica di Clas se III pu provenire dall interno della stanza attraverso un filtro HEPA montato sulla cap pa oppure pu essere fornita direttamente dal sistema di fornitura dell aria L aria scarica ta dalle cappe di sicurezza biologica di Classe III deve passare attraverso due filtri HEPA prima di essere espulsa all esterno La cappa deve essere sempre fatta funzionare
236. sicurarsi della loro corretta chiusura Liofilizzatori essiccatori a freddo Produzione di aerosol Contaminazione per contatto diretto e usare connettori con O ring guarnizioni a tenuta per sigillare i contenitori all apparecchiatura e usare filtri dell aria per proteggere le linee del vuoto e usare un efficace metodo di decontaminazione es chimico e installare un filtro metallico anti condensa e percolato e ispezionare accuratamente per le crepe superficiali ogni contenitore in vetro da vuoto Usare solamente manufatti in vetro progettati per essere usati con il vuoto Bagnomaria Crescita di microrganismi Formazione di composti esplosivi con alcuni metalli da parte di sodio azide e eseguire regolari operazioni di pulizia e disinfezione e non usare sodio azide per prevenire la crescita di microrganismi Oltre al rischio microbiologico devono essere previsti e prevenuti altri rischi connessi all uso di apparecchiature La Tabella A4 2 elenca esempi di alcune cause di incidente 135 Tabella A4 2 Altre frequenti cause di incidenti riconducibili alle apparecchiature Incidente Causa di incidente Come eliminare o ridurre i rischi Difetti di progettazione o costruzione Incendi da elettricit negli incubatori Shock elettrico Mancanza di termostato che disconnetta se si raggiungono sovratemperature pericolose Inefficace collegamento a terra e adeguamento alle norme standard nazionali
237. so di spandimenti accidentali di materiale po tenzialmente infetto 9 organizzare un adeguata gestione dei rifiuti 10 provvedere affinch le attrezzature siano sempre decontaminate prima di essere sottoposte ad interventi di manutenzione o di revisione 11 mantenere vivo l interesse nei confronti delle problematiche ambientali e della salute 12 istituire procedure appropriate per la ricezione e la spedizione di materiale a rischio biologico a da il laboratorio in applicazione di quanto previsto dalla normativa nazionale 13 esaminare gli aspetti relativi alla Biosicurezza di tutti progetti i protocolli e le procedure ope rative relativi a lavori di ricerca che implicano l esposizione ad agenti infettivi prima dell i nizio di tali attivit 14 istituire un piano operativo per affrontare eventuali emergenze g Il comitato per la Biosicurezza Un comitato per la Biosicurezza dovrebbe essere costituito per sviluppare Linee guida istituzio nali di Biosicurezza e protocolli attuativi Il comitato per la Biosicurezza dovrebbe anche riesa minare i protocolli di ricerca che prevedono l utilizzo l esposizione ad agenti infettivi l uso di animali il DNA modificato e organismi geneticamente modificati Il comitato potrebbe occupar si anche di valutazioni del rischio dell elaborazione di Linee guida in materia di sicurezza oltre che arbitrare dispute concernenti questioni di sicurezza I componenti del comitato di Biosicurezza
238. sospendere materiali infetti e centrifugare liquidi infetti o lavorare con animali possono generare aerosol infetti Le particelle di aerosol con diametro inferiore a 5 um e piccole goccioline droplets con diametro fra 5 100 um non sono visibili a occhio nudo Generalmente gli addetti dei laboratori non sono consapevoli della generazione di tali particelle che possono es sere inalate o indurre contaminazioni crociate dei materiali sul piano di lavoro Le cappe di si curezza biologica quando usate correttamente hanno dimostrato una alta efficienza nella ridu zione delle infezioni acquisite in laboratorio e delle contaminazioni crociate di colture dovute al l esposizione di aerosol Le cappe di protezione biologica salvaguardano anche l ambiente Nel corso degli anni la progettazione delle cappe di sicurezza biologica ha subito numerose mo difiche Il maggior cambiamento si deve all aggiunta dei filtri ad alta efficienza di filtrazione HE PA per la filtrazione dell aria estratta Il filtro HEPA trattiene il 99 97 delle particelle di diame tro 0 3 um e il 99 99 di particelle di grandezza superiore o inferiore Questo fa si che il filtro HE PA trattenga efficacemente tutti gli agenti infettivi conosciuti ed assicura che dalla cappa fuorie sca solo aria libera da micro organismi La seconda modifica stata l introduzione del filtro HE PA direttamente sul piano di lavoro permettendo la protezione da contaminazioni dei materiali collocati su
239. spesso utilizzati in soluzioni antibatteriche non devono venire in contatto con ra me o piombo come nelle condutture di scarico in quanto possono esplodere violentemente se soggetti anche a piccoli urti Gli eteri che sono stati invecchiati e disidratati a cristalli sono molto instabili e potenzialmente esplosivi L acido perclorico quando viene lasciato asciugare su manufatti in legno pietra o tessuto pu esplodere e causare incendio se sottoposto ad urti L acido picrico e i picriti possono detonare se riscaldati o per urto Spandimenti di prodotti chimici La maggior parte dei fabbricanti di prodotti chimici di laboratorio forniscono istruzioni scritte sulle procedure da attuare in caso di spandimenti Sono inoltre disponibili in commercio istru zioni e kit per gli spandimenti Le istruzioni devono essere esposte in posizioni opportune del la boratorio Devono inoltre essere messe a disposizione i seguenti accorgimenti kit per spandimenti abiti protettivi guanti pesanti in gomma soprascarpe o stivali in gomma respiratori scope e palette pinzette per raccogliere vetri rotti spugnette stracci e carta assorbente secchi cenere di soda carbonato di sodio Na CO o bicarbonato di sodio NaHCO per neutraliz zare acidi e prodotti chimici corrosivi 8 sabbia da gettare sopra spandimenti di alcali 9 detergenti non infiammabili In caso di ingenti spandimenti di prodotti chimici dovrebbero essere
240. sposizioni ripetute possono essere tossiche per la riproduzione umana e lo sviluppo possono causare fiamme improvvise flashpoint 4 C Limiti di infiammabilit 1 4 7 Mezzi di estinzione per piccoli incendi polveri chimiche anidride carbonica schiuma acqua nebulizzata o gas inerte azoto conservare lontano da sorgenti di ignizione mettere a terra i contenitori per prevenire scariche elettriche statiche Non inalare i vapori usare protezioni respiratorie Lavorare sotto cappa chimica o in area ben ventilata Indossare guanti in nitrile ZST Tricloroetilene Liquido incolore di CHCICCI odore caratteristico m p 73 C b p 87 C Combustibile sotto specifiche condizioni Irritazione degli occhi pelle esposizioni prolungate possono causare dermatiti e interessare il sistema nervoso centrale con conseguente perdita di memoria Pu colpire il fegato e i reni un probabile carcinogeno umano Lavorare con ventilazione aspirazione localizzata Indossare guanti occhiali di sicurezza o altre protezioni degli occhi in combinazione con protezione respiratoria Per contatto con superfici calde o fiamme si decompone formando gas tossici e corrosivi fosgene acido cloridrico A contatto con basi forti si decompone producendo dicloroacetilene reagisce violentemente con polveri di metalli come ad esempio alluminio bario magnesio e titanio decomposto lentamente dalla luce in presenza
241. ssen RA Rapid prion neuroinvasion following tongue infection Journal of Virology 2003 77 583 591 Thomzig A et al Widespread PrP accumulation in muscles of hamsters orally infected with scrapie EMBO Reports 2003 4 530 533 Glatzel M et al Extraneural pathologic prion protein in sporadic Creutzfeld Jakob disease New England Journal of Medicine 2003 349 1812 1820 Brown P Wolff A Gajdusek DC A simple and effective method for inactivating virus infectivity in formalin fixed tissue samples from patients with Creutzfield Jakob disease Neurology 1990 40 887 890 Taylor DM et al The effect of formic acid on BSE and scrapie infectivity in fixed and unfixed brain tissue Veterinary Microbiology 1997 58 167 174 Safar J et al Prions In Richmond JY McKinney RW eds Biosafety in microbiological and biomedical laboratories 4 ed Washington DC United States Department of Health and Human Services 1999 134 143 Bellinger Kawahara C et al Purified scrapie prions resist inactivation by UV irradiation Journal of Virology 1987 61 159 166 Health Services Advisory Committee Safe working and the prevention of infection in clinical laboratories London HSE Books 1991 Russell AD Hugo WB Ayliffe GAJ Disinfection preservation and sterilization 3 ed Oxford Blackwell Scientific 1999 Ascenzi JM Handbook of disinfectants and antiseptics New York NY Marcel Dekker 1996 Block SS Disinfection sterilization amp
242. ssenziali di sicurezza 1 Pipettatori automatici o elettrici per evitare di pipettare a bocca Ne esistono diversi modelli 2 Cappe di Biosicurezza da usare ogni qualvolta vengono manipolati materiali infetti tali materiali possono essere centrifugati fuori dalla cappa nel caso si usino cestelli di sicurezza sigillati e questi vengano aperti e chiusi sotto cappa esiste un elevato rischio di contaminazione per via aerea si svolgono procedure ad alto potenziale di produzione di aerosol queste possono include re la centrifugazione frammentazione omogenizzazione agitazione o miscelazione vigo rosa sonicazione apertura di contenitori di materiali infetti a pressione diversa dalla pres sione ambientale inoculazione intranasale di animali e raccolta di tessuti infetti da anima li e uova 3 Anse di plastica monouso In alternativa sotto cappa di Biosicurezza possono essere utilizza ti sterilizzatori elettrici per anse al fine di ridurre la produzione di aerosol 4 Provette e contenitori con tappo a vite 5 Autoclavi o altri mezzi per decontaminare i materiali infetti 15 Manuale di biosicurezza nei laboratori 6 Pipette Pasteur monouso in plastica per evitare il vetro quando possibile 7 Le attrezzature quali le autoclavi e le cappe di Biosicurezza devono essere collaudate con me todi adeguati prima di essere messe in uso La manutenzione dovrebbe avvenire ad intervalli regolari secondo le indicazioni del fabbr
243. ta degli equipaggiamenti per proteggere gli occhi e la faccia dagli spruzzi ed oggetti con tundenti dipender dall attivit effettuata Gli occhiali per correzione oppure piatti fabbricati con montature speciali che permettono alle lenti di essere inseriti nella montatura dal davanti utilizzano materiale a prova d urto incurvato oppure provvisto di schermi laterali occhiali di 61 Manuale di biosicurezza nei laboratori sicurezza Le lenti di sicurezza non garantiscono una assoluta protezione dagli schizzi anche quando degli schermi laterali sono indossati Gli occhiali di protezione dagli schizzi o dagli im patti dovrebbero essere indossati al di sopra dei normali occhiali da vista o lenti a contatto che non offrono alcuna protezione dal rischio chimico e biologico Gli schermi facciali visori sono fatti di plastica si indossano sopra la faccia e sono tenuti in situ da lacci adesivi Lenti di sicurezza occhiali di protezione e visori non dovrebbero essere indossati al di fuori del le aree di laboratorio Tabella 11 Apparecchiature per la sicurezza biologica Apparecchiatura Rischio eliminato Caratteristiche di sicurezza Tute divise camici da laboratorio Contaminazione degli abiti e Apertura posteriore e Copre gli abiti civili Grembiuli plastificati Contaminazione degli abiti e Impermeabilizzati Calzari Impatto e schizzi e Chiusura ermetica Occhiali Contatto e schizzi e Lenti resistenti all impatto devono essere c
244. tario 9 Direttore Ufficio Tecnico 10 Le aziende distributrici di acqua di gas e di elettricit supwn Attrezzature per l emergenza Le seguenti attrezzature di emergenza dovrebbero essere immediatamente disponibili 1 kit di pronto soccorso compresi antidoti universali e specifici 2 estintori adeguati coperte antifiamma 77 Manuale di biosicurezza nei laboratori I seguenti articoli sono anche suggeriti ma possono variare in funzione delle circostanze locali 1 abiti di protezione totale tuta integrale in un pezzo unico guanti e copertura per il capo per incidenti che coinvolgano microrganismi di gruppo 3 e 4 respiratori facciali con filtri idonei per agenti chimici e particolati apparato di disinfezione di stanze come spruzzatori e vaporizzatori di formaldeide barelle attrezzi per esempio martelli asce piedi di porco giraviti funi cavi etc equipaggiamento di demarcazione di area a rischio e cartelli di avvertimento AJIAN Per ulteriori informazioni vedi riferimenti bibliografici 12 e 28 78 Disinfezione e sterilizzazione 14 Disinfezione e sterilizzazione La conoscenza delle basi della disinfezione e della sterilizzazione fondamentale per la Biosicu rezza in laboratorio Poich gli oggetti molto sporchi non possono essere disinfettati o sterilizza ti in tali condizioni altrettanto importante tener presente che la disinfezione deve essere pre ceduta da una corretta p
245. te cloro dis ponibile in ragione di 20 gr l 2 per 1 ora quindi sciacquati bene in acqua prima del pas saggio in autoclave Gli strumenti che non possono essere autoclavati possono essere puliti con passaggi frequenti con ipoclorito di sodio contenente sodio disponibile in ragione di 20 gr 1 2 per 1 ora E necessario lavaggio adeguato per rimuovere l ipoclorito di sodio residuo Per ulteriori informazioni sulla manipolazione di agenti non convenzionali vedi riferimenti bi bliografici 12 26 e 27 74 Piani e procedure di emergenza 13 Piani e procedure di emergenza Ogni laboratorio che lavora con microrganismi infettivi deve stabilire misure precauzionali di sicurezza appropriate al pericolo costituito da organismi e dagli animali trattati Un piano di emergenza scritto per intervenire in caso di incidenti nelle attivit di laboratorio e di gestione degli animali necessario in qualsiasi attivit che comporta l uso o la conserva zione di microrganismi classificati nei Gruppi di Rischio 3 o 4 Biosicurezza livello di conte nimento 3 e Biosicurezza livello massimo di contenimento 4 Le autorit sanitarie naziona li e o locali dovrebbero essere coinvolte nella preparazione del piano di emergenza Piano di emergenza Il piano di emergenza deve prevedere procedure operative per precauzioni contro disastri naturali come fuoco inondazioni terremoti ed esplosioni valutazione del rischio biologico
246. te di personale ad detto alla manutenzione In assenza di servizi interni di manutenzione gli ingegneri e i manutentori esterni sono stati informati in merito alle apparecchiature e al tipo di lavoro svolto in laboratorio Sono disponibili servizi di pulizia controllato e documentato l accesso alle varie aree del laboratorio del personale addetto al le pulizie Sono disponibili addetti informatici Sicurezza 1 stata fatta una valutazione per definire i rischi dai quali dovrebbe proteggere un sistema di sicurezza 120 oe Wh Elenco delle verifiche di sicurezza Sono stati definiti criteri per definire i rischi e la loro incidenza L intero edificio viene chiuso quando non pi occupato da personale Porte e finestre sono a prova di rottura I locali contenenti materiali pericolosi e apparecchiature costose sono chiusi a chiave quando non sono occupati controllato e documentato l accesso a questi locali ai materiali pericolosi e alle apparecchia ture costose Prevenzione degli incendi Soe eee 11 12 13 14 15 Esiste un sistema di allarme incendi Sono in buone condizioni le porte antincendio Il sistema di allarme incendi in buone condizioni e regolarmente controllato I segnali di allarme incendio sono accessibili Le uscite sono indicate da appositi segnali luminosi L accesso alle uscite chiaramente indicato quando il percorso per raggiungerle no
247. ternario 4 Applicare il disinfettante in maniera concentrica iniziando dal margine esterno dell area inte ressata dallo spandimento dirigendosi verso il centro 5 Trascorso un periodo di tempo congruo per esempio 30 minuti pulire via i materiali Se ci sono vetri rotti o altri materiali acuminati usare una paletta per spazzatura o un pezzo di car tone duro per raccogliere il materiale e metterlo dentro un contenitore per rifiuti resistente al le punture Pulire e disinfettare l area interessata dallo spandimento se necessario ripetere i punti 2 5 7 Eliminare i materiali contaminati in un contenitore per rifiuti a prova di perdita e resistente al le punture 8 Dopo aver eseguito in maniera corretta la disinfezione informare i servizi competenti che il si to stato decontaminato CN 91 Manuale di biosicurezza nei laboratori Figura 11 Esempio di confezionamento con tripla protezione figura gentilmente concessa da IATA Montreal Canada Confezionamento ed etichettatura per l invio di sostanze infettive di Categoria A as tappo materiale assorbente primo contenitore etichetta indicante in modo dettagliato il contenuto secondo contenitore contenitore esterno etichetta di orientamento del contenitore non obbligatoria quando il contenitore primario non supera i 50 ml marchio specifico ONU _ primo recipiente a tenuta stagna rastrelliera in pe spugna a tenuta lista
248. to affinch siano rese disponibili le attrezza ture e le strutture adeguate al lavoro che si deve svolgere In Italia la valutazione del rischio pre rogativa del Datore di lavoro il quale si avvale della collaborazione del direttore del laboratorio e o dei sin goli ricercatori si avvale inoltre della collaborazione del Servizio Prevenzione e Protezione dei Medici Com petenti e della consultazione dei Rappresentanti dei Lavoratori per la Sicurezza si avvale inoltre della col laborazione del Direttore del laboratorio e o dei singoli ricercatori da quest ultimo designati Una volta effettuata la valutazione del rischio deve essere periodicamente rivalutata e se neces sario aggiornata tenendo conto dell acquisizione di nuovi dati e delle informazioni provenienti dalla letteratura scientifica In Italia l aggiornamento della valutazione del rischio biologico prevista ogni tre anni e comunque ad ogni cambiamento nel ciclo produttivo Uno degli strumenti pi utili per la valutazione del rischio microbiologico la classificazione de gli agenti patogeni in gruppi di rischio vedi capitolo 1 Tuttavia una corretta valutazione del ri schio non pu fare semplicemente riferimento al gruppo di rischio di un particolare agente Al tri fattori che devono essere considerati sono Patogenicit dell agente e dose infettiva Conseguenza potenziale dell esposizione Modalit naturale di trasmissione Altre modalit di trasmissione
249. to con gli occhi sciacquare immediatamente con acqua e consultare un medico in caso di contatto con la pelle togliere ogni indumento contaminato e tamponare l area contaminata con glicerolo polietilenglicole 300 o una miscela di polietilene glicole liquido 70 e alcol metilico 30 e poi lavare abbondantemente con acqua Gluteraldeide OHC CH CHO Soluzione incolore o giallo pallido con odore pungente m p 14 C b p 189 C solubile in acqua Grave irritazione degli occhi e prime vie aeree una esposizione prolungata per inalazione o contatto cutaneo pu provocare sensibilizzazione Operare sotto cappa o in zone Pu reagire energicamente con ben ventilate Indossare guanti in ossidanti gomma o plastica e protezione degli occhi Talora viene fornita in soluzione acquosa a varie concentrazioni con aggiunta di stabilizzanti srl Sostanza Proprieta fisiche Rischi per la salute Rischio d incendio Precauzioni per la sicurezza Incompatibilita Altri rischi chimica lodio Color marrone scuro Irritante per gli occhi Non combustibile ma Non respirare i vapori evitare il Reagisce violentemente con i I con caratteristico l apparato respiratorio e facilita la combustione contatto con gli occhi Indossare metalli compresi alluminio odore la pelle Ripetute di altre sostanza Pu guanti in nitrile potassio e sodio e con miscele di m p 114 C esposizioni possono determinare reazioni etanolo fos
250. to di sodio NaOCl che pu essere diluita con acqua per preparare varie concentrazioni di cloro libero Il cloro specialmente come candeggina estremamente alcalino e pu corrodere i metalli La sua attivit notevolmente ridotta dalla presenza di sostanze organiche proteine Conservare le scorte di candeggina come soluzione madre o soluzioni di lavoro in contenitori aperti e parti colarmente ad alte temperature lascia sfuggire gas di cloro indebolendo cos il loro potenziale germicida La frequenza con cui rinnovare le soluzioni di lavoro di candeggina dipende dalla lo ro concentrazione iniziale dal tipo ad esempio con o senza chiusura e dalla grandezza dei con tenitori dalla frequenza e dalla natura dell uso e dalle condizioni ambientali Come indicazione generale le soluzioni usate molte volte al giorno su materiali con grandi quantit di sostanza or ganica devono essere cambiate almeno quotidianamente mentre quelle di uso meno frequente possono durare anche una settimana Un disinfettante di laboratorio di uso generale dovrebbe avere una concentrazione di 1 0 g 1 di cloro libero In presenza di versamenti a rischio biologico e di grandi quantit di sostanza orga nica si raccomanda una soluzione pi forte con 5 0 g 1 di cloro libero Le soluzioni di ipoclorito di sodio come la candeggina ad uso domestico contengono 50 g l di cloro libero e perci vanno diluite 1 50 o 1 10 per ottenere rispettivamente la concentrazione
251. triche liquidi infiammabili incendi di metalli Anidride carbonica CO Liquidi e gas infiammabili Metalli alcalini carta gas estinguenti impianti elettrici Polvere Liquidi e gas infiammabili Apparecchiature e strumenti da riutilizzare impianti e apparecchiature in quanto i residui sono molto difficili da rimuovere elettriche metalli alcalini Schiuma Liquidi infiammabili Impianti e apparecchiature elettriche Per ulteriori informazioni vedi riferimento bibliografico 49 Rischio elettrico essenziale che tutti gli impianti e le apparecchiature elettriche siano ispezionati e testati rego larmente compresi gli impianti di terra Gli interruttori elettrici e gli interruttori differenziali devono essere installati in maniera oppor tuna nei circuiti dei laboratori Gli interruttori magnetotermici non proteggono il personale essi sono progettati per proteggere i cavi elettrici dal sovraccarico e quindi per prevenire gli incendi Gli interruttori differenziali sono progettati per proteggere il personale da shock elettrici Tutte la apparecchiature elettriche devono essere dotate di cavo di terra preferibilmente tramite prese a spina a tre alveoli Tutti gli impianti e le apparecchiature elettriche devono rispettare le norme e gli standard di si curezza elettrica nazionali Il rumore Gli effetti dell eccessivo rumore sono insidiosi nel tempo Alcuni tipi di apparecchiature per la boratorio come alcuni tipi di laser cos
252. trollato BSC e abbigliamento protettivo speciale per tutte le attivit 4 ABSL 4 Pratiche ABSL 3 pi accesso strettamente limitato Cambiamento degli abiti prima di entrare BSC Classe III o tute in pressione positiva Doccia all uscita Decontaminazione di tutti i rifiuti prima della rimozione dai locali ABSL animal facility Biosafety level ossia livello di Biosicurezza delle installazioni per animali BSC biological safety cabinets ossia cappe di sicurezza biologica Gli stabulari come i laboratori possono essere designate conformemente alla valutazione del ri schio e al gruppo di rischio dei microrganismi oggetto di ricerca come Livello di Biosicurezza del le installazioni per animali 1 2 3 e 4 Riguardo agli agenti da utilizzare nel laboratorio per animali i fattori da tenere in considerazio ne includono 1 la normale via di trasmissione 2 i volumi e le concentrazioni da utilizzare 3 la via di inoculazione 4 se e per quali vie tali agenti possono essere escreti 28 Stabulari Riguardo agli animali da utilizzare nei laboratori per animali i fattori da tenere in considerazio ne includono 1 la natura degli animali ossia l aggressivit e la tendenza a mordere e a graffiare 2 i loro ectoparassiti ed endoparassiti naturali 3 le patologie zoonotiche a cui sono predisposti 4 la possibile disseminazione di allergeni Come per i laboratori i requisiti per le caratteristiche di progettazione
253. tti Inoltre bene che gli avambracci siano completamente coperti e il camice termini con degli elastici sui polsini L abbigliamento protettivo da laboratorio non deve essere indossato al di fuori del laboratorio e deve essere decontaminato prima di essere lavato La rimozione dell abbigliamento indossato all aperto e il cambiamento con l apposito abbigliamento da laboratorio devono essere garantiti quando si lavora con certi agenti per esempio agenti per l agricoltura o zoonotici 3 La manipolazione di tutto il materiale potenzialmente infetto deve essere effettuata sotto una cappa di sicurezza biologica o altro dispositivo di contenimento primario vedere anche il ca pitolo 10 20 Laboratori di contenimento Livello di Biosicurezza 3 4 I dispositivi di protezione respiratoria possono essere necessari per alcune procedure di labo ratorio o quando si lavora con animali infetti da certi patogeni vedere capitolo 11 Progettazione e dotazioni del laboratorio Si applicano la progettazione e le dotazioni del laboratorio per i laboratori di base ossia i Livel li di Biosicurezza 1 e 2 ad eccezione delle seguenti modifiche 1 10 11 Il laboratorio deve essere separato dalle aree che sono aperte al flusso di passaggio di perso ne senza restrizioni all interno dell edificio possibile ottenere una separazione aggiuntiva collocando il laboratorio all estremit cieca di un corridoio oppure costruendo una tramez za
254. tto cutaneo rischio di esplosione Indossare filtrante facciale per polveri guanti di gomma o plastica ed occhiali protettivi per il rischio chimico ossidanti e riducenti benzene Diossano Liquido incolore con Irritazione per occhi e Altamente infiammabile Operare con ventilazione Pu formare perossidi esplosivi C H 0 caratteristico odore vie respiratorie Pu possibile innesco a aspirazione localizzata Non in Reagisce energicamente con Dietilen m p 12 C avere effetti sul sistema distanza possono presenza di fiamme libere forti ossidanti ed acidi forti diossido b p 101 C nervoso centrale generarsi cariche scintille sigarette accese concentrati Reagisce in modo provocando cefalea nausea tosse faringodinia dolore addominale vertigini sonnolenza vomito incoscienza Possibile assorbimento cutaneo Provoca danni a reni e fegato Probabilmente un cancerogeno per l uomo elettrostatiche in conseguenza di travasi agitazione etc contatto con forti ossidanti o superfici calde Non usare aria compressa per riempire svuotare travasare usare utensili che non producano scintille Indossare guanti ed indumenti protettivi maschera facciale o protezione degli occhi in combinazione con protezione delle vie aeree esplosivo con alcuni catalizzatori Intacca numerose plastiche LVI Etanolo Liquido volatile incolore Dannoso se ingerito Altamente infiammabile Mantenere i contenitori Reagisc
255. tutti gli aspetti relativi le cappe Gli operatori devono ricevere una formazione formale su uso e funzione delle cappe Per ulteriori informazioni vedere i riferimenti bibliografici 5 e 7 16 e il capitolo 11 57 Manuale di biosicurezza nei laboratori 11 Attrezzature di sicurezza Dal momento che gli aerosol sono un importante veicolo di infezione bisogna fare attenzione a ridurre le possibilita di una loro formazione e propagazione Aerosol pericolosi possono essere generati da molte operazioni di laboratorio come la miscelazione l impiego di agitatori la cen trifugazione e l esposizione ad ultrasuoni di materiale infetto Anche quando sono usati adegua ti dispositivi di sicurezza meglio eseguire queste operazioni utilizzando una cappa biologica di sicurezza approvata ogni qualvolta sia possibile L uso delle cappe di sicurezza ed il loro test discusso nel capitolo 10 L uso di dispositivi di sicurezza di per se non garantiscono comunque la protezione a meno che non siano usati da un operatore correttamente addestrato ed usando le tecniche adeguate In Italia i Dispositivi di Protezione individuale prevedono l obbligo di adeguata in formazione e formazione dei lavoratori Inoltre le attrezzature di sicurezza devono essere testate regolar mente per assicurarne le adeguate prestazioni La Tavola 10 fornisce una lista di controllo delle attrezzature di sicurezza finalizzata a ridurre al cuni rischi e definisce brevem
256. ubatori cappe di Biosicurezza congelatori ecc o per la ventilazione di gabbie animali 18 Deve esistere una fornitura di gas affidabile ed adeguata obbligatorio avere una buona in stallazione e una manutenzione continua 19 I laboratori e gli stabulari possono occasionalmente essere bersaglio di vandalismi Occorre prevedere sistemi di sicurezza fisici e contro il fuoco Porte robuste finestre protette e un nu mero limitato di chiavi sono misure obbligatorie Altre misure devono essere considerate ed applicate per aumentare la sicurezza quando necessario vedi capitolo 9 Attrezzature di laboratorio La prevenzione del rischio biologico pu essere assicurata non solo dalla buona pratica e l ap plicazione delle procedure raccomandate ma anche di attrezzature di sicurezza Questa sezione riporta i principi di base riguardanti le attrezzature da adottare nei laboratori di tutti i livelli di Biosicurezza I requisiti delle attrezzature per i laboratori di pi alto livello di Biosicurezza sono trattati nei capitoli corrispondenti Il Direttore del laboratorio dopo essersi consultato con il Responsabile del rischio biologico o il Comitato di Biosicurezza qualora individuati deve assicurare la fornitura al laboratorio la for nitura delle attrezzature adeguate e assicurarsi sul loro corretto uso Le attrezzature vanno scelte secondo alcuni principi generali per i quali esse devono essere 1 pensate per impedire o limitare il
257. uli guanti Sono disponibili indumenti protettivi DPI supplementari per l esposizione a prodotti chimi ci pericolosi sostanze radioattive e cancerogene ad es grembiuli di gomma e guanti per i pro dotti chimici da usare anche in caso di versamenti guanti resistenti al calore per prelevare il materiale da autoclavi e forni Sono disponibili occhiali di protezione maschere e visori Sono disponibili lava occhi di sicurezza Sono disponibili docce di emergenza con getto forte 122 Elenco delle verifiche di sicurezza La radioprotezione viene attuata conformemente alle norme nazionali ed internazionali com presa l assegnazione di dosimetri Sono a disposizione maschere regolarmente pulite disinfettate ispezionate e conservate in adeguate condizioni di igiene Sono a disposizione filtri adeguati alle maschere per esempio filtri HEPA per i microrganismi appositi filtri per gas o polveri Le maschere sono presenti nelle taglie adatte Salute e sicurezza del personale BON 11 12 13 14 presente un servizio di Medicina Preventiva Sono presenti cassette di pronto soccorso collocate in punti strategici Sono presenti persone qualificate per prestare il primo soccorso Queste persone sono state addestrate per le emergenze caratteristiche del laboratorio ad es il contatto accidentale con prodotti chimici corrosivi l ingestione accidentale di veleni e di so stanze infette Il p
258. ulizia preventiva A tale riguardo i principi generali sottoelencati si ap plicano a tutte le classi note di microbi patogeni I requisiti specifici della decontaminazione dipendono dal tipo di operazioni sperimentali e dal la natura dell agente infettivo trattato Le informazioni generali qui fornite possono essere usate per sviluppare procedure sia generali che pi specifiche per far fronte ai rischi biologici presen ti in un particolare laboratorio I tempi di contatto per i disinfettanti sono specifici per ogni singolo prodotto e marchio di fab brica pertanto tutte le procedure d uso dei disinfettanti devono essere conformi alle raccoman dazioni del fabbricante Definizioni Molti termini differenti sono usati nella disinfezione e nella sterilizzazione Quelli che seguono sono tra i pi comuni Antimicrobico Agente che uccide microrganismi o ne sopprime la crescita e la moltiplicazione Antisettico Sostanza che inibisce la crescita e lo sviluppo di microrganismi senza necessaria mente ucciderli Gli antisettici sono di solito applicati sulle superfici corporee Biocida Termine generale per qualsiasi agente che uccida organismi Germicida chimico Sostanza o miscela di sostanze chimiche usate per uccidere microrganismi Decontaminazione Qualsiasi processo capace di rimuovere e o uccidere microrganismi Il ter mine anche usato per la rimozione o neutralizzazione di sostanze chimiche pericolose e di ma teriali radioattiv
259. uona pratica microbiologica Linee guida per la sorveglianza del personale di laboratorio in contatto con microrganismi al Livello di Biosicurezza 2 1 necessario un controllo sanitario prima dell assunzione o prima dell assegnazione ad un particolare lavoro Occorre registrare la anamnesi della persona e fare una valutazione ad hoc del rischio occupazionale 2 La Direzione del laboratorio dovrebbe registrare le assenze per malattie in Italia nelle strut ture complesse normalmente avviene ad opera dei Servizi Uffici del personale 3 Le donne in et fertile devono essere informate dei rischi per un futuro bambino derivanti dal l esposizione occupazionale a certi microrganismi es il virus della rosolia Le misure prese a protezione del feto saranno variabili a seconda dei microrganismi a cui le donne possono es sere esposte Formazione e addestramento Errori umani e capacit tecniche inadeguate possono compromettere le migliori misure di prote zione del personale di laboratorio Quindi un personale consapevole dell importanza della sicu rezza e bene informato sul riconoscimento e il controllo dei rischi fondamentale per la preven zione delle infezioni che si possono contrarre in laboratorio degli incidenti o dei problemi che si possono determinare 16 Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 Per questo motivo sono essenziali la formazione e l aggiornamento continuo del personale sulle misure volte a gara
260. utenzione degli edifici e degli impianti Il personale di questi servizi addetto alla manutenzione ed alla riparazione degli edifici degli impianti e delle attrezzature dovrebbe conoscere il tipo di lavoro svolto nel laboratorio e le nor me di sicurezza Il collaudo di apparecchiature sottoposte a revisione es verificare l efficienza delle cappe di si curezza biologiche dopo averne cambiato i filtri dovrebbe essere effettuato dal responsabile del la Biosicurezza oppure sotto la sua diretta supervisione I laboratori o le istituzioni sprovvisti di servizi interni di manutenzione dovrebbero instaurare con i fornitori locali di servizi di manu tenzione rapporti di collaborazione tali da consentire a queste persone di conoscere le apparec chiature utilizzate ed il lavoro di laboratorio Il personale addetto alla manutenzione dovrebbe entrare nei laboratori con livello di Biosicurez za 3 e in quelli con livello 4 soltanto se in possesso dell autorizzazione o sotto la supervisione del responsabile della Biosicurezza o del responsabile del laboratorio Servizi di pulizia Nei laboratori di Biosicurezza di Livello 3 e di Livello 4 le pulizie dovrebbero essere effettuate dal personale del laboratorio Il personale addetto alle pulizie dovrebbe entrare nei laboratori di Livello 3 o 4 soltanto dopo essere stato autorizzato dal responsabile della Biosicurezza o dal re sponsabile del laboratorio 113 Manuale di biosicurezza nei laboratori 21
261. va collaborazione il Dr Gaetano Cosenza Direttore Generale dell Azienda Ospedaliera Universitaria San Martino di Genova e lo staff del Servizio Prevenzione e Protezione Dr Bernardo Odone Dr ssa Annamaria Polimeni Sig ra Marialuisa Albinelli Sig Riccardo Foscoli IX Principi generali 1 Principi generali Introduzione Nel presente manuale i microrganismi infettivi sono classificati in quattro gruppi di rischio Classificazione OMS Gruppi 1 2 3 4 Questa classificazione deve ritenersi valida solo per le attivit di laboratorio In Tabella 1 la descrizione dei Gruppi di rischio Tabella 1 Classificazione dei microrganismi infettivi per gruppo di rischio Gruppo di rischio 1 nessun rischio o basso rischio individuale e collettivo Un microrganismo che difficilmente causa di malattia nell uomo o negli animali Gruppo di rischio 2 Moderato rischio individuale basso rischio collettivo Un patogeno che pu causare malattia nell uomo o negli animali ma che difficilmente pone un serio peri colo per il personale di laboratorio la collettivit il bestiame o l ambiente L esposizione in laboratorio pu causare infezione grave esistono misure preventive e terapie efficaci ed il rischio di diffusione dell infe zione limitato Gruppo di rischio 3 elevato rischio individuale basso rischio collettivo Un patogeno che di solito causa di grave malattia nell uomo o negli animali ma che normalmente non si trasmette
262. vola dello scarico equipaggiata con filtro HEPA Autoclavi a prevuoto Queste macchine permettono la rimozione di aria dalla camera prima di im mettere vapore L aria viene evacuata attraverso una valvola dotata di filtro HEPA Alla fine del ciclo il vapore viene allontanato automaticamente Queste autoclavi possono operare a 134 C e di conseguenza il ciclo di sterilizzazione pu essere ridotto a 3 minuti Sono ideali per materiali porosi ma non possono essere usate per trattare liquidi a causa della presenza del vuoto 86 Disinfezione e sterilizzazione Figura 10 Autoclave a dislocamento per gravita valvola di manometro valvola di manometro sicurezza vacuometro sicurezza vi filtro di cotone i alla camicia ingresso del lt valvola vapore deflettore camera lt portello alla camera prc alla pompa a vuoto o all estrattore di vapore valvola filtri arresto del vapore sifoni valvola ia valvola antiriflusso Autoclavi a pressione riscaldate con fornello Dovrebbero essere usate solamente se non disponibi le un autoclave a dislocamento per gravit Sono caricate dall alto e sono riscaldate con gas elet tricit od altri tipi di combustibile Il vapore generato scaldando l acqua dal basso e l aria vie ne spostata in alto verso un foro di uscita Quando tutta l aria stata rimossa si chiude la val vol
263. vono essere eseguite da tecnici qualificati Qualsiasi malfunzionamento deve essere segnalato e riparato prima di riutilizzare la BSC Lampade a ultravioletti Lampade a ultravioletti non sono richieste nelle BSCs Se utilizzate devono essere pulite settima nalmente per rimuovere polvere e sporco che possono compromettere la sua capacit germicida L intensit della luce ultravioletta deve essere controllata quando viene fatta la manutenzione or dinaria per assicurare che la emissione di luce sia adeguata Le lampade ad ultravioletti devono es sere spente quando la stanza occupata per proteggere occhi e pelle da esposizione accidentali Fiamme libere L uso di fiamme libere all interno della cappa dove si creato un ambiente libero da microbi de ve essere evitato Esse interrompono il flusso d aria e possono essere pericolose quando sono uti lizzate anche sostanze volatili o infiammabili Per sterilizzare anse da semina consigliabile e preferibile utilizzare micro bruciatori o sterilizzatori elettrici 55 Manuale di biosicurezza nei laboratori Sversamenti Una copia della procedura da seguire in caso di sversamenti accidentali deve essere esposta in laboratorio letta e appresa da tutti gli utilizzatori del laboratorio Quando avviene uno sversa mento di materiale potenzialmente pericoloso all interno della cappa occorre immediatamente pulire mentre la cappa continua ad operare Deve essere utilizzato un efficace disin
264. za delle particelle in aria Sistemi di decontaminazione dei filtri HEPA Controllo degli impianti HVAC e di scarico dell aria e dispositivi di blocco Registri d aria dell isolamento a tenuta d aria Sistemi di refrigerazione da laboratorio Caldaie e sistemi a vapore 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Sistemi di rilevazione estinzione e allarme finalizzati alla sicurezza antincendio Dispositivi di prevenzione del riflusso dell acqua per uso domestico Sistemi trattamento dell acqua ossia osmosi inversa acqua distillata Sistemi di neutralizzazione e trattamento dei liquidi effluenti Sistemi di scarico fognario Sistemi decontaminanti chimici Sistemi verifica e controllo dei gas per laboratorio Impianti per aria respirabile Impianti per l aria per strumenti e servizi Verifica del differenziale di pressione in caduta dei laboratori e delle aree di supporto Sistemi di dati informatici e rete locale LAN Impianti di alimentazione elettrica normale Impianti di alimentazione elettrica di emergenza gruppi elettrogeni Impianti di alimentazione elettrica non interrompibili gruppi di continuit Impianti d illuminazione d emergenza Sigilli di penetrazione apparecchiature di illuminazione Sigilli di penetrazione meccanica ed elettrica Impianti telefonici Dispositivi di interblocco della porta della c
265. zione acquosa del gas di circa 370 g 1 37 stabilizzata con metanolo 100 ml 82 Disinfezione e sterilizzazione Ambedue le formulazioni vengono riscaldate per liberare il gas usato per decontaminazione e disinfezione di ambienti chiusi come cappe di sicurezza e stanze vedi in questo capitolo la se zione sulla decontaminazione ambientale locale La formaldeide formalina al 5 in acqua pu essere usata come disinfettante liquido sospettata di essere cancerogena un gas pericoloso e irritante con odore pungente che pu irritare occhi e mucose Deve perci essere immagazzinato ed usato entro contenitori appositi che impediscano la diffusione dei va pori oppure in area ben ventilata Seguire la normativa nazionale sulla sicurezza chimica Glutaraldeide Come la formaldeide la glutaraldeide OHC CH CHO attiva contro le forme vegetative di batteri spore funghi e virus con involucro lipidico e non lipidico Non corrosiva ed ha azione pi rapida che la formaldeide anche se impiega molte ore per uccidere le spore batteriche La glutaraldeide generalmente reperibile come soluzione alla concentrazione di circa 20 g l 2 ed alcuni prodotti possono avere bisogno di essere attivati resi alcalini prima dell uso aggiungendo il bicarbonato fornito assieme al prodotto La soluzione attiva pu essere usata per 1 4 settimane a seconda dalla formulazione del tipo e della frequenza d uso Gli indicatori che accompagnano
266. zione di aerosol e polveri SIRO oe NI 29 Manuale di biosicurezza nei laboratori 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Tutti i materiali di rifiuto e le lettiere devono essere decontaminati prima dello smalti mento L utilizzo di strumenti taglienti deve essere limitato ogniqualvolta sia possibile Gli aghi devono sempre essere raccolti in contenitori a prova di resistenti alla foratura dotati di chiusure e trattati come infetti Il materiale per il trattamento in autoclave o l incenerimento deve essere trasportato in modo sicuro in contenitori chiusi Le gabbie degli animali devono essere decontaminate dopo l uso Le carcasse degli animali devono essere incenerite Nell installazione devono essere indossati abbigliamento e dispositivi di protezione che vanno poi tolti quando si lascia l installazione Si deve provvedere a delle dotazioni per il lavaggio delle mani Il personale addetto de ve lavarsi le mani prima di lasciare l installazione per animali Tutti gli infortuni anche quelli di minore entit devono essere trattati adeguatamente ri feriti e registrati Mangiare bere fumare o applicarsi cosmetici deve essere vietato all interno dell instal lazione Tutto il personale deve ricevere un adeguato addestramento Stabulario Livello di Biosicurezza 3 Questo livello adatto per operare con animali ai quali vengono intenzionalmente inoculati de gli agenti del Gruppo di Rischio 3 o
267. zione di scarico e le finestre apribili devono essere dotate di zanzariere a prova di artropodi I sifoni dei lavandini non si devono fare essiccare Tutti i rifiuti devono essere decontaminati con trattamento in autoclave in quanto alcuni in vertebrati non vengono uccisi da tutti i disinfettanti Occorre mantenere un controllo del numero delle forme larvali e adulte degli artropodi vo lanti striscianti e saltanti I contenitori per zecche e acari dovrebbero essere posti in vaschette di olio Gli insetti volanti infetti o potenzialmente infetti devono essere contenuti in gabbie a doppia rete Gli artropodi infetti o potenzialmente infetti devono essere maneggiati in cappe di sicurezza biologica o in isolatori Gli artropodi infetti o potenzialmente infetti possono essere manipolati su vaschette a raf freddamento Per ulteriori informazioni vedere i riferimenti bibliografici 3 6 32 Linee guida per il collaudo di un laboratorio o di un installazione 7 Linee guida per il collaudo di un laboratorio o di un installazione Il collaudo di un laboratorio o di un installazione pu essere definito come il sistematico proces so di riesame della documentazione indicante che le componenti strutturali del laboratorio spe cifiche i sistemi e o le componenti dei sistemi sono state installate ispezionate testate dal pun to di vista funzionale e verificate affinch soddisfino gli standard nazionali o internazionali a se conda dei casi
268. zzature de vono essere separate tra loro e inferiormente dotati di spazi aperti in modo da essere acces sibili per le operazioni di pulizia Deve essere previsto lo spazio sufficiente per conservare in ordine i materiali in uso e per evi tarne l accumulo sui banconi e nei corridoi Deve essere previsto uno spazio opportunamente posto al di fuori delle aree di lavoro del laboratorio per l immagazzinamento dei materiali Devono essere previsti spazi e mezzi adeguati per l impiego in sicurezza e la conservazione di solventi materiali radioattivi gas compressi e liquefatti Laboratori di base Livelli di Biosicurezza 1 e 2 Figura 2 Un tipico laboratorio con livello di Biosicurezza 1 immagini gentilmente concesse da CUHZA Princeton NJ USA 10 11 12 13 14 Gli spogliatoi ed armadietti per gli indumenti o oggetti personali devono essere al di fuori delle aree di lavoro del laboratorio Gli spazi per mangiare bere e riposare devono essere al di fuori delle aree di lavoro del la boratorio In ogni stanza del laboratorio devono essere presenti lavandini se possibile con acqua cor rente per il lavaggio delle mani possibilmente vicino alle porte di uscita Le porte devono avere pannelli trasparenti adeguata certificazione anti incendio ed essere preferibilmente a chiusura automatica Per il livello di Biosicurezza 2 una autoclave o un altro mezzo di decontaminazione deve essere presente o disponibile ad una

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