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1 - GE Healthcare Life Sciences

1. ATTENZIONE Non spostare il gruppo Western con flaconi collocati su di esso AVVISO Scollegare i cavi Per evitare di danneggiare l apparecchiatura scollegare sempre i cavi prima di spostare il gruppo strumento Istruzioni per il sollevamento Passo Operazione 1 Staccare tutti i cavi compresi quelli di alimentazione dai gruppi strumento e togliere i flaconi dai gruppi 2 Sono necessarie due persone Per sollevare un gruppo afferrare con le mani ciascun lato e sollevare 214 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 7 Informazioni di riferimento 7 Informazioni di riferimento Informazioni sul capitolo Questo capitolo elenca le specifiche tecniche dell Amersham WB analyzer Questo capi tolo comprende anche una Guida alla resistenza chimica ed un Rapporto di decontami nazione che deve essere usato per registrare i dettagli relativi alla decontaminazione prima di un intervento di assistenza In questo capitolo Il presente capitolo contiene le seguenti sezioni Sezione Vedere pagina 7 1 Specifiche del sistema 216 7 2 Guida alla resistenza chimica 221 7 3 Modulo di dichiarazione di salute e sicurezza 223 7 4 Traduzioni di accessori e materiali di consumo 225 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 215 7 Informazioni di riferimento 7 1 Specifiche del sistema 7 1 Specifiche del sistema Introduzione In questa sezione sono el
2. 2 Quando appare la finestra di dialogo Windows Security cliccare sul pulsante Install Would you like to install this device software Mame GE Healthcare Life Sciences Publisher GE Healthcare Bio Sciences AB Always trust software from GE Healthcare Don t Install Bio Sciences AB F You should only install driver software from publishers you trust How can decide which device software is safe to install 3 Una volta installati tutti i requisiti avviare l installazione del software cliccan do su Next nella finestra di dialogo Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software Daas Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software The InstallShield R Wizard will install Amersham WB software on your computer To continue click Next WARNING This program is protected by copyright law and international treaties lt Back ita cance Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 111 4 Installazione 4 3 Installazione software Passo Operazione 4 Leggere il contratto di licenza del software Dopo aver letto ed accettato il contratto di licenza selezionare l opzione accept e cliccare su Next Please read the following license agreement carefully GE Healthcare STANDARD SOFTWARE END USER LICENSE AGREEMENT FOR LIFE SCIENCES SOFTWARE PRODUCTS IMPORTANT PLEASE READ CAREFULLY THIS IS THE LICENSE AGREEMENT THAT END USER IS REQUIRED
3. OP o AVVISO Non utilizzare sostanze chimiche diverse da quelle elencate nelle informazioni sulla resistenza chimica Manutenzione AVVERTENZA Pericolo di scossa elettrica Tutte le riparazioni devono essere eseguite da personale di assistenza autorizzato da GE Non aprire i coperchi o sostituire i componenti salvo se specificamente indicato nella documentazione d uso AVVERTENZA Scollegare l alimentazione Scollegare sempre l alimentazione del gruppo strumento prima di sostituire un suo componente fatto salvo ove altrimenti specificato nella documentazione d uso 24 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza AVVERTENZA Rimuovere eventuali flaconi dal relativo cestello prima di aprire il coperchio del vano di servizio AVVERTENZA Quando si utilizzano sostanze chimiche pericolose evitare le fuo riuscite e indossare occhiali di protezione e altri dispositivi di prote zione individuale adeguati Per esempio l NaOH corrosivo e dunque pericoloso per la salute AVVERTENZA Soltanto i pezzi di ricambio e gli accessori che sono approvati o forniti da GE possono essere utilizzati per l assistenza o la manuten zione del sistema AVVERTENZA Quando si sostituisce un cavo di alimentazione danneggiato usarne uno sostitutivo dello stesso tipo e dimensioni e conforme a tutti i requisiti nor
4. 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Immagine d insieme del montaggio del sandwich da trasferire 148 La seguente illustrazione mostra una vista d insieme del montaggio del sandwich da trasferire La seguente tabella descrive brevemente il procedimento di preparazione di un sandwich da trasferire Fase Descrizione 1 La scheda PVDF viene preventivamente bagnata nell etanolo e poi equilibrata nel tampone di trasferimento 2 Una spugna viene messa sul fondo del supporto di trasferimento coperchio nero 3 Una carta di trasferimento viene preventivamente bagnata nel tampone di trasferimento e poi collocata nel supporto di trasferimento 4 Il telaio scheda gel compreso il gel con le proteine separate viene tolta dal supporto del telaio e sistemata nel supporto di trasferimento 5 La scheda PVDF posta nel supporto di trasferimento 6 La seconda carta di trasferimento viene preventivamente bagnata nel tampone di trasferimento e poi collocata nel supporto di trasferimento 7 Le bolle d aria vengono eliminate per mezzo del rullo incorporato nel supporto di trasferimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Fase Descrizione 8 Una seconda spugna viene posizionata sulla carta di trasferimento 9 Il supporto di trasferimento viene chiuso Amersham
5. cli di congelamento scongela mento ripetuti del reagente colorante Cy5 Il reagente colorante Cy5 dilui to deve essere utilizzato entro 30 min e non deve essere con gelato 62 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di consumo Materiale di consumo Temperatura di stoccaggio Ambiente Amersham WB molecular Da 15 a 30 C Proteggere i marcatori del peso weight markers molecolare MW dalla luce di retta del sole Marcatori MW devono essere sempre conser vati nel congelatore Ridurre al minimo il tempo passato a temperatura ambiente prima dell uso e evitare il ricongela mento marker MW diluiti nel tampo ne di caricamento con DTT possono essere distribuiti in aliquote per singolo uso se congelati direttamente dopo la diluizione Le aliquote non devo no essere conservate per pi di una settimana Amersham WB gel card Da 4 C a 8 C Conservare in cella frigorifera o locale freddo Amersham WB buffer strips Da 4 C a 8 C Conservare in cella frigorifera o locale freddo Amersham WB PVDF card Temperatura ambiente Conservare le schede PVDF nella confezione singola all in terno della scatola con cui vengono fornite Conservare la scatola in un luogo pulito ed asciutto proteggendola dalla luce Amersham WB transfer paper Temperatura ambiente Conservare le carte di trasferi mento in
6. consigliata per eliminare il colorante in eccesso quando si utilizzano campioni pre etichettati In tal modo si riduce il background migliorando cos il rilevamento e la quantificazione delle proteine meno abbondanti lt 1 ng striscia e di quelle a basso peso molecolare M lt 40 000 La pulizia dei pozzetti di campione in genere migliora la risoluzione delle strisce anche per i campioni non etichettati di elevate concentrazioni di proteine o di grandi quantit di campioni Per informazioni pi dettagliate su come usare il pettine di carta vedere Avviare e moni torare l elettroforesi e la scansione di gel a pagina 140 Immagine del pettine di carta L immagine sottostante mostra un pettine di carta Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 75 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 Accessorie materiali di consumo per le fasi di Western blot Introduzione Questa sezione descrive gli accessori e i materiali di consumo da utilizzare per il trasfe rimento di proteine dal gel sulla membrana il sondaggio della membrana con anticorpi primari e secondari e la scansione delle schede PVDF In questa sezione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento 77 3 7 2 Anticorpi secondari sondaggio 82 3 7 3 Supporto di asciugatura Asciugatura scheda PVDF 84
7. 3 Insert the Custom tubing in at least 450 ml cleaning solution 4 Insert the tubing for probing Block Wash and Final wash in an empty bottle 5 Make sure there are four empty tubes in the antibody solution compartment 6 Make sure there are no membranes left in the probing chambers Note Discard all solutions and the antibody tubes after the cleaning The procedure will take about 45 minutes Start clean Cancel 2 Pulire la tubazione di sondaggio il coperchio e i bordi della camera di son daggio con un panno umido 3 Immergere la tubazione P Water in un flacone contenente almeno 1 000 ml di acqua purissima 4 Immergere la tubazione P Custom in un flacone contenente almeno 450 ml di 0 5 M NaOH 5 Inserire la tubazione P Block P Wash e P Final Wash in un flacone di smal timento vuoto 6 Inserire e collegare quattro provette vuote e pulite da 15 ml nel vano anti corpi 7 Fare clic su Start clean nella finestra di dialogo Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 201 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio Passo Operazione 8 Al termine della pulizia spostare la tubazione in un flacone vuoto Nota Dopo la pulizia smaltire tutte le provette con le soluzioni e gli anticorpi 202 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzio
8. 3 7 4 Adattatore membrana Scansione scheda PVDF 85 76 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento Introduzione La presente sezione descrive e Amersham WB transfer holder accessorio e Amersham WB PVDF card materiale di consumo e Amersham WB transfer paper materiale di consumo e Amersham WB sponge materiale di consumo Amersham WEB transfer holder Questo supporto viene usato durante il trasferimento Contiene il sandwich da trasferire spugna carta di trasferimento scheda gel scheda PVDF carta di trasferimento e spugna preparato prima di cominciare il trasferimento Le proteine separate sono trasferite dal gel sulla membrana nel corso del ciclo di trasferimento Appositi perni guida nel supporto di trasferimento assicurano che la scheda gel e la scheda PVDF siano posizionate correttamente quando si prepara il sandwich da trasfe rire Usando il rullo incorporato quando si sposta il rullo sopra il sandwich sulle apposite guide le bolle d aria vengono eliminate e una pressione riproducibile viene applicata alla scheda gel e alla scheda PVDF a garanzia di una procedura di trasferimento uniforme Vedere Iniziare a realizzare il sandwich da trasferire a pagina 154 per ulteriori informazioni su com
9. Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 121 5 Esecuzione di un esperimento 5 3 Impostare un esperimento col software o Introduzione Questa sezione descrive come avviare l Amersham WB software e impostare un esperi mento Amersham WB nel software Per ulteriori informazioni vedere l Amersham WB Impostare un esperimento col software software Help nel pannello di destra del software Avviare il software Passo 1 2 Operazione Avviare il computer e collegarsi a Microsoft Windows Fare du volte clic sull icona Amersham WB software presente sul desktop Amersham WB Software Risultato Viene visualizzata la schermata iniziale del software Amersham WB software CR gt 46 Amersham WB software S Create New Experiment All Western experiments include necessary SDS PAGE steps Easy Western Western with total protein normalization Western with endogenous protein normalization Easy SDS PAGE Create Create new experiment Open experiment based on a previous run Open New from existing la File x Control w Remote w Easy Western Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and t
10. Passo Operazione 1 Una volta completato il trasferimento si apre la finestra di dialogo Transfer Completed Clean Transfer Flow Path Nota Si raccomanda di pulire la corsia di flusso per trasferimento ad ogni ciclo Se si sceglie di omettere la fase di pulizia della corsia di flusso per trasferimen to cliccare su Cancel e passare a Continuare il sondaggio a pagina 168 Ad ogni modo ricordarsi di pulire la corsia di flusso per trasferimento in una se conda fase dell esperimento La pulizia pu essere eseguita selezionando Control Clean Transfer flow path dalla barra dei menu Se si omesso di eseguire la pulizia la corsia di flusso per trasferimento deve essere svuotata manualmente selezionando Empty Transfer tank nel menu Control 2 Spostare la tubazione T Buffer in un flacone d acqua contenente 1000 ml di acqua purissima assieme alla tubazione T Water J Fare clic su Start clean nella finestra di dialogo Transfer Completed Clean Transfer Flow Path La pulizia iniziata e richieder circa 9 minuti Nota Il sondaggio pu essere avviato mentre si pulisce la corsia di flusso per trasfe rimento vedere Continuare il sondaggio a pagina 168 4 Smaltire la soluzione del flacone d acqua e mettere le tubazione in un flacone vuoto 5 Pulire la parte superiore dell interno del serbatoio di trasferimento con un panno senza sfilacciature bagnato 6 Eliminare eventuali particelle fibre e pezzi di gel residui vis
11. Prerequisiti per la pre etichettatura dei campioni tramite il protocollo Western Tamponi di lisi compatibili tamponi di lisi comuni a base tris con pH da 7 a 9 e con vari detergenti e sali sono compatibili con la pre etichettatura di campioni di cellule tessuti per esempio e Tampone GE per estrazione di proteine di mammiferi e Tampone RIPA pH del campione Il pH del campione deve essere compreso tra 7 e 9 Il pH ottimale non un punto critico per i lisati cellulari o gli estratti di tessuto dato che non richiesta un elevata sensibilit per il segnale delle proteine totali Il segnale delle proteine totali inun esperimento Western con normalizzazione delle proteine totali deve essere proporzionale alla quantit di proteine e non dipendere dall alta sensibilit Soluzioni e materiali richiesti Per la pre etichettatura delle proteine sono richieste le seguenti soluzioni e materiali e Materiali di consumo per la pre etichettatura reagente colorante Cy5 tampone di etichettatura tampone di caricamento e 1MDIT ditiotreitolo di soluzione stock DTT ed acqua purissima se viene eseguita la riduzione SDS PAGE e Acqua purissima per la diluizione del reagente colorante Cy5 e Tampone di lisi originale per regolare il volume di reazione solo per esperimenti Western e provette microfughe da 0 5 ml e bloccoriscaldante e agitatore e centrifuga Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 12
12. Dimensioni L x P x A Inferiore a 80 dB A 47x51x27cm Peso escluso il computer 25 kg Alimentazione Tensione 100 240 V CA 10 Frequenza 50 60 Hz Potenza assorbita Potenza max 300 VA Fuse Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2x T4AH 250V 217 7 Informazioni di riferimento 7 1 Specifiche del sistema Specifiche dello scanner Parametro Sensore immagini Fotodiodo al silicone Tempo di riscaldamento Almeno 1 minuto Nota Il tempo di riscaldamento incluso nella modalit di sensibilit automatica Obiettivo F1 0 13 mm Fonte di luce Cy5 Modulo a diodi laser 635 nm 10 mW Cy3 Modulo a diodi laser 532 nm 10 mW Funzionamento Completamente automatizzato esposi zione automatica nessuna necessit di messa a fuoco o di altra regolazione o taratura Dimensioni massime campione 2 campioni di circa 80 x 65 mm Scala di grigi 65 536 livelli 16 bit Gamma dinamica 4 6 ordini di grandezza Uscita immagine Scala di grigi a 16 bit tif Specifiche di separazione Parametro Descrizione Voltage 250 600 V t Corrente 20 50 mA 1 La potenza massima di 20 W scheda gel valori massimi dei parametri non possono essere raggiunti contemporaneamente 218 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 7 Informazioni di riferimento 7 1 Specifiche del sistema Specifiche di
13. durante la fase di valutazione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 131 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine Introduzione Questa sezione descrive come realizzare l elettroforesi delle proteine Descrive inoltre e preparazioni prima di cominciare l elettroforesi e esecuzione della pulizia pozzetto campione e avvio e monitoraggio elettroforesi e scansione delle schede di gel e procedure al termine dell elettroforesi e della scansione delle schede di gel In questa sezione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 5 6 1 Prima dell elettroforesi 133 5 6 2 Avviare l elettroforesi 140 5 6 3 Procedure post elettroforesi e scansione delle schede di gel 142 132 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi 5 6 1 Prima dell elettroforesi Introduzione La presente sezione descrive come caricare le strisce tampone la scheda gel gli Amersham WB molecular weight markers preparati e i campioni per il ciclo di elettrofo resi Preparativi prima di cominciare l elettroforesi AVVERTENZA Esplosione vetro Non mettere in funzione il sistema se il vetro del coperchio di sigillatura del gruppo Elpho amp scan graffiato o rotto Spegnere lo strumento sc
14. portastrisce tampone sono dotati di elettrodi incorporati che assicurano il contatto tra l elettrodo e la striscia tampone consentendo quindi il passaggio di cor rente elettrica per l esecuzione del ciclo Le strisce tampone sono caricate nei loro supporti prima di avviare il ciclo e quindi ven gono gettate al termine dello stesso La forma del supporto guida l utente quando colloca le strisce tampone nei supporti e quando pone i supporti nel gruppo Elpho amp scan Per ulteriori informazioni vedere Preparativi prima di cominciare l elettroforesi a pagina 133 Tampone usato nelle strisce tampone Il tampone usato nelle strisce tampone tris tricina Immagine delle strisce tampone L immagine seguente mostra una striscia tampone Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 73 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 3 Amersham WB buffer strip e Amersham WB buffer strip holder Immagine dei portastrisce tampone L immagine seguente mostra un portastriscia tampone 74 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 4 Amersham WB paper comb 3 6 4 Amersham WB paper comb Introduzione Il pettine di carta usato per pulire i pozzetti di campione una volta che le proteine sono migrate nel gel per qualche minuto La pulizia dei pozzetti di campione
15. so 200 Riempire preventivamente la camera di sondaggio 175 Sostituire la testa della pompa di sondaggio 206 Spugna Descrizione 81 Sistemare nel supporto di trasferimento 154 Stoccaggio dei materiali di consumo 62 Striscia tampone Descrizione 73 Inserire nel portastrisce tampone 133 Strumento Collegare al computer 102 Collegare i cavi di alimenta zione 103 Collegare i gruppi strumen to 102 Controllare il collegamento dello strumento 114 Indicatori 39 Supporto di asciugatura 84 Pulizia 189 195 Supporto di trasferimento Descrizione 77 Pulire 168 Togliere al termine del ci clo 166 Supporto tubazione Descrizione 87 Fissare 105 1 Tamponi Tamponi di lisi 127 229 Indice 230 Tamponi e soluzioni Acqua purissima puli zia 145 170 Soluzione anticorpi sondag gio 170 Soluzione bloccante 170 Tampone di lavaggio son daggio 170 Tampone di lavaggio finale sondaggio 170 Tampone di trasferimen to 145 Testa della pompa Sostituire la testa della pompa di sondaggio o di trasferimento 206 Tipi di schede di gel 70 Togliere la copertura del pozzet to campione 138 Torrette portatubi Montare 103 Trasferimento Avviare e monitorare 164 Collegare le soluzioni 146 Preparare e collegare le so luzioni 145 Principio di base del proces so di trasferimento 57 Pulire la corsia di flusso per trasferimento 195 Pulizia della corsia di flus so 199 Sostituire gli elettrodi di tr
16. 126 Avviare elettroforesi e scansione Sezione 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine a pagi na 132 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimen to Sezione 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferi mento a pagina 145 Preparare il sandwi ch da trasferire Avviare trasferimen to Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anti corpi Sezione 5 7 Eseguire il trasferimento a pagina 144 Sezione 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi a pagina 170 Eseguire il sondaggio e l asciugatura Sezione 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura a pagi na 169 Effettuare la scansione dellamembrana e vede re i risultati Sezione 5 9 Effettuare la scansione della membrana e ve dere i risultati a pagina 185 Trovare maggiori informazioni Per informazioni di supporto e informazioni dettagliate su come pianificare gli esperimenti fare riferimento a Amersham WB system User Manual Ad esso si pu accedere dal software selezionando Help View user manual nella barra dei menu Per informazioni dettagliate sul software vedere Amersham WB software help integrata in esso accessibile dal pannello destro del software Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 119 5 Esecuzione di un esperimento 5 2 Avviare l Amersham WB analyzer 5 2 Avviare l Amersham WB analyzer Introduzione Questa sezione descrive come avviare i gruppi Amersham
17. 20 in 1xPBS o 5 di sieroalbumina bovina BSA bovine serum albumin in PBS Utilizzare soluzioni bloccanti con bassa autofluore scenza vedere il manuale Western Blotting Princi ples and Methods per le raccomandazioni Tampone di lavaggio PBS T 0 1 di Tween 20 in 1xPBS 560 ml Tampone di lavaggio finale PBS pH 7 4 290 ml Soluzione anticorpi Anticorpi in PBS T 0 1 di Tween 20 in 1xPBS Da5a12 ml Vedere Amersham WB system User Manual per ulte riori informazioni su come determinare concentrazio ni ottimali di anticorpi Acqua purissima utilizzata per Acqua purissima il risciacquo tra le diverse fasi di sondaggio e pulizia della corsia di flusso per sondaggio 170 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi Collegare la tubazione alle soluzioni di sondaggio sul cestello dei flaconi ATTENZIONE Per evitare di spruzzare liquidi pericolosi usare filtri di ingresso pesanti collegati alle tubazioni nei flaconi Vedere Sezione 3 8 Altri accessori a pagina 86 per le descrizioni dei filtri d ingresso e dei supporti tubazione Vedere Fissare i supporti tubazione a pagina 105 per le istruzioni su come collegare gli accessori Prima di iniziare il sondaggio collegare la tubazione dalle torrette centrale e destra alle soluzioni usate
18. 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 3 Procedure post elettroforesi e scansione delle schede di gel Pulire il gruppo Elpho amp scan Passo Operazione 1 Gruppo Togliere i portastrisce tampone dal supporto e gettare le strisce tampone 2 Asciugare il liquido strofinandolo dalla piastra portascheda con un panno senza sfilacciature se necessario inumidirlo con 50 di etanolo 3 Eliminare il liquido e lo sporco eventualmente presenti sul vetro protettivo con un panno senza sfilacciature se necessario inumidirlo con 50 di eta nolo Nota importante tenere il vetro protettivo pulito per poter ottenere buoni risultati di scansione delle schede di gel e di quelle PVDF 4 Chiudere il coperchio di sigillatura e premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato Il caricatore viene inserito 5 Pulire i portastrisce tampone usando acqua corrente per eliminare i sali e il tampone Lasciare asciugare i portastrisce tampone all aria capovolti Continua trasferimento Procedere in uno dei seguenti modi e Se le soluzioni di trasferimento sono state preparate e collegate al gruppo Western procedere con le istruzioni riportate in Sezione 5 7 2 Preparare il sandwich da trasfe rire a pagina 147 altrimenti e procedere con le istruzioni riportate in Sezione 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento a pagina 145 Amersham WB sys
19. ABS r al Open New from existing Maintenance clean Transfer User manual x z Web resource Maintenance clean Probing 88 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 9 Descrizione generale del software Immagine della schermata principale del software L immagine seguente mostra la schermata principale del software per un esperimento Western Unsaved experiment Amersham Wih sottwane basy Wescher Gel cord 14 13 5 1 File sx Contro s Remote sw Help w era Gel card A Gel card Tyee sanple IL Furia nni o Dommens G Blank hl Amersham WE WY Marker lt Sample Sample Sg Print the experiment and samples information E bright the experiment A sampisi information 5 Sample ef optional wa b Sample ka TRAMEPER 7 Sarmiple a B Sample pe Dotare cuendee U Experiment informatico W 9 Sample Su PROSING 10 Sample et G DEIR Ul Sample Ta 12 Sample ll 1 Sample we ME ROERANE SCANTU 14 Sample Su Amersham WE MW Markere ef Elani lidi cilena di Antibodies for Membrone A Primary amtaay Labeled secondary ab Promany andiboziy Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 89 3 Descrizione del sistema 3 9 Descrizione generale del software Area Descrizione 1 Barra menu La barra dei menu costituita da quattro menu e File per creare aprire e salvare
20. La presente documentazione d uso contiene messaggi di sicurezza AVVERTENZA ATTEN ZIONE e AVVISO riguardanti l utilizzo sicuro del prodotto Vedere le definizioni seguenti AVVERTENZA AVVERTENZA indica una situazione pericolosa che se non viene evitata potrebbe causare la morte o lesioni gravi importante procedere soltanto quando tutte le condizioni indicate sono state soddisfatte e chiaramente comprese ATTENZIONE ATTENZIONE indica una situazione pericolosa che se non viene evitata potrebbe causare lesioni moderate o di lieve entit im portante procedere soltanto quando tutte le condizioni indicate sono state soddisfatte e chiaramente comprese AVVISO AVVISO indica delle istruzioni che devono essere seguite al fine di evitare danni al prodotto o ad altre attrezzature Note e suggerimenti Nota Una nota viene usata per riportare informazioni importanti per un impiego del prodotto ottimale e senza problemi Suggerimento Un suggerimento contiene informazioni utili che possono migliorare o ottimizzare le procedure Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 9 1 Introduzione 1 3 Informazioni di carattere normativo 1 3 Informazioni di carattere normativo Introduzione La presente sezione descrive le direttive e le norme che sono soddisfatte dall Amersham WB system Informazioni sulla costruzione La tabella che segue riassume le informazioni sulla produzione
21. Procedura 141 Portafiltro d ingresso Descrizione 86 Portastrisce tampone Descrizione 73 Inserire il gruppo Elpho amp scan 134 Pulire 143 194 Precauzioni di sicurezza Introduzione 18 Pre etichettatura 126 pH del campione 127 Preparativi 128 protocollo di pre etichettatu ra Western 129 Soluzioni e materiali richie sti 127 Tamponi di lisi compatibi li 127 Procedure al termine dell elet troforesi 142 Procedure d emergenza Arresto d emergenza 32 Interruzione dell alimentazio ne 33 Proteine marker MW 69 protocollo di pre etichettatu raWestern 129 Pulire Adattatore membrana 189 194 Corsia di flusso per il sondag gio 195 Corsia di flusso per trasferi mento 167 195 Corsia di flusso sondag gio 181 gruppo Elpho amp scan 143 Portastrisce tampone 143 194 Scomparto di asciugatu ra 197 Serbatoio di trasferimen to 195 Supporto di trasferimen to 168 Pulizia Supporto di asciugatu ra 189 195 PVDF Collocare nella camera di sondaggio 177 Descrizione 79 Preparare 150 Spostare nello scomparto di asciugatura 179 PVDF scheda Avviare e monitorare la scansione 187 R Requisiti del computer 95 Requisiti del locale 93 Requisiti di spazio 94 Ricette Soluzioni anticorpi 170 Soluzioni di sondaggio 170 Soluzioni di trasferimen to 145 Riciclaggio delle sostanze peri colose 35 S Sandwich da trasferire Caricare nel serbatoio di trasferimento 163 Materiali 14
22. Titolo ACPEIP Administration on the Control of Pollution Caused by Electronic Information Products Amministrazione sul controllo dell inquinamento proveniente da prodotti elettronici informatici Restrizioni cinese sull uso di so stanze pericolose ROHS cinese Conformit normativa dell attrezzatura collegata Eventuali attrezzature collegate ad Amersham WB analyzer devono rispettare i requisiti di sicurezza della norma IEC EN UL CSA 61010 1 IEC EN UL CSA 60950 1 o di altre norme e regolamenti di sicurezza nazionali pertinenti L apparecchiatura deve essere installata ed usata secondo le istruzioni del costruttore Nell ambito dell UE l apparecchiatura collegata deve essere marcata CE Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 13 1 Introduzione 1 4 Amersham WB Documentazione system 1 4 Amersham WB Documentazione system Introduzione Questa sezione descrive la documentazione per l utente e la documentazione associata per l Amersham WB system Documentazione per l utente La tabella seguente fornisce un elenco della documentazione per l utente fornita con l Amersham WB system Documento Principali contenuti Disponibilit Amersham WB analyzer Queste istruzioni descrivono come disim All interno della scatola di Istruzioni per il ballare l Amersham WB analyzer spedizione dell Amersham disimballaggio WB analyzer Istruzioni di funzionamento Questo manuale contiene le informazio
23. dettagliate sul sistema selezio nare Help View user manual nella barra dei menu oppure premere Ctrl F1 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 91 4 Installazione 4 Installazione Informazioni sul capitolo Questo capitolo descrive l installazione dell Amersham WB system In questo capitolo Il presente capitolo contiene le seguenti sezioni Sezione Vedere pagina 4 1 Preparazione della sede d 4 2 Installazione hardware 96 4 3 Installazione software 110 92 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 1 Preparazione della sede 4 1 Preparazione della sede Perch preparare il luogo di installazione Il sito del laboratorio deve essere opportunamente programmato e preparato prima dell installazione dell Amersham WB system Le specifiche prestazionali del sistema possono essere soddisfatte soltanto se l ambiente del laboratorio conforme ai requisiti indicati in questa sezione Seguire sempre le normative locali sulla sicurezza Requisiti del locale AVVERTENZA Collocare l Amersham WB analyzer in un locale dotato di aerazione nel caso si utilizzi il metanolo o altri prodotti chimici che richiedono la ventilazione gruppi strumento non devono essere esposti alla luce diretta del sole La polvere pre sente nell atmosfera deve essere mantenuta a livelli minimi limiti per gli intervalli di temperatura e umidit sono specificati nel
24. di colorante reagente Cy5 diluito nel rapporto 1 10 in acqua purissima Nota Il colorante diluito deve essere appena preparato ed usato entra 30 minuti Non pu essere congelato e riutilizzato e Agitare brevemente fino a miscelatura completa 2 Incubare a temperatura ambiente per 30 minuti Nota Accertarsi che il tempo di etichettatura ed il volume siano uguali per tutti i campioni Per i campioni sensibili alla temperatura incubare su ghiaccio per 30 minuti 3 Aggiungere 20 ul di tampone di caricamento 4 Scaldare i campioni a 95 C per 3 minuti 5 Centrifugare i campioni Il volume totale di campione di 40 ul per reazione volume di carico consigliato 20 ul Procedere al caricamento dei campioni come descritto in Preparativi prima di cominciare l elettroforesi a pagina 133 Se l esame di elettroforesi viene eseguito in un secondo momento conser vare i campioni pre etichettati a 20 C Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 129 5 Esecuzione di un esperimento 5 5 Preparazione di Amersham WB molecular weight markers 5 5 Preparazione di Amersham WB molecular weight markers Introduzione Togliere una fiala di Amersham WB molecular weight markers marcatori del peso mo lecolare sufficiente per l utilizzo di due schede di gel dal congelatore e scongelarla completamente Esperimenti Western In esperimenti il Western Amersham WB molecular weight markersdeve essere diluito
25. gli esperimenti Stampare informazioni e uscire dal software e Control per interrompere un ciclo svuotare la camera di trasferimento e sondaggio iniziare la pulizia delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio e Remote percollegare e scollegare l accesso remoto allo strumento Recuperare i codici di accesso allo strumento e gestire un utente remoto Modificare la configurazione della connessione remota Nota Visibile solo quando uno strumento collegato e Help Generare rapporti di sistema Aprire il pannello di help il manuale d uso e la finestra di dialogo About Amersham WB 2 Pannello procedura di lavoro Il pannello della procedura di lavoro mostra le diverse fasi operative del software durante un esperimento possibile spostarsi in avanti o indietro per visualizzare e modificare le informazioni e i parametri durante le diverse fasi della lavorazione prima di avviare un ciclo cio l elettro foresi il trasferimento il sondaggio l asciugatura o la scansione della membrana sempre possibile tornare indietro e modificare il testo nei campi delle informazioni nelle diverse fasi della lavorazione durante e dopo un ciclo Ad esempio la tabella dei campioni pu essere compilata ad elettroforesi in corso Nota Per un esperimento di elettroforesi i passaggi della procedura di lavoro TRANSFER PROBING amp DRYING e MEMBRANE SCANNING sono disattivati Essi sono attivi solamente negli esperimenti Western 3 Area di la
26. holder supporto di trasferimento Amersham WB sponge spugna Amersham WB membrane adapter adattatore membrana Amersham WB drying holder Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE supporto di asciugatura 225 Indice Indice 226 A Adattatore membrana Descrizione 85 Mettere sulla piastra porta scheda 186 Pulire 189 194 Anticorpo secondario CyDyes coniugati 82 Descrizione 82 Stoccaggio di anticorpi liofi lizzati 64 Stoccaggio di anticorpi rico stituiti 64 Asciugatura Avviare e monitorare 183 Avvisi di sicurezza 9 C Caricare campioni 139 caricatore Elpho amp scan caricatore 42 Carta di trasferimento Descrizione 80 CE conformit 10 Composizione della scheda gel 70 Conformit FCC 12 Controllare il collegamento dello strumento 114 Convenzioni tipografiche 7 Corsia di flusso del liquido di sondaggio 58 trasferimento 56 CyDye Lunghezza d onda di eccita zione 82 Lunghezza d onda di emis sione 82 D Decontaminazione 35 Descrizione della procedura di lavoro Western con normalizzazio ne delle proteine totali 118 Descrizione generale del software 88 Documentazione Documentazione per l uten te 14 File di dati e note applicati ve 16 Manuale di metodo 15 E Elementi di protezione per il trasporto Rimuovere 99 Elettrodi di trasferimento Installare 99 Sostituire gli elettrodi di tra sferimento 209 Elet
27. i pesi molecolari di tutte le bande rilevate in ogni corsia Ogni confezione di Amersham WB molecular weight markers contiene una soluzione per l utilizzo di 10 schede di gel dove 2 corsie scheda gel vengono caricate con Amersham WB molecular weight markers L immagine che segue mostra le dimensioni degli Amersham WB molecular weight markers separati su scheda gel a gradiente immagine a sinistra ed una scheda gel omogenea immagine a destra Mx10 __ 225 Veni 97 n 66 ms 50 ce 55 25 20 a 14 as 10 225 9 me 66 50 om 55 Bas ma 20 a 14 om 10 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Proteine marker MW La tabella seguente mostra le proteine che sono incluse Proteina Peso molecolare M x105 Proteina ricombinante Fosforilasi b muscolo di coniglio Albumina serica di bovino Proteina ricombinante Proteina ricombinante Proteina ricombinante Inibitore di tripsina soia Alfa lattoalbumina latte bovino Proteina ricombinante Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 69 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 2 Amersham WB gel card 3 6 2 Amersham WB gel card Introduzione La presente sezione descrive la sc
28. in basso ciascuna torretta nell apposita sede e ruotarla in senso orario fino ad avvertire un clic di inserimento La tubazione deve essere installata nel modo seguente Posizione delle torrette Tubazione vista frontale dello strumento Sinistra T buffer e T water Centro Pwater P block e Pwash Destra P Final wash e P Custom Nota Quando si montano le torrette fare attenzione a non togliere nessuna delle etichette della tubazione 104 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Fissare i supporti tubazione Per compensare le tensioni che si creano quando la tubazione viene messa nei flaconi ed evitare che questi ultimi cadano al diminuire del livello del liquido si devono fissare supporti a tutta la tubazione Nota supporti tubazione devono essere montati su tutta la tubazione prima di fissare i filtri d ingresso Passo Operazione 1 Inserire una tubazione nel foro del supporto Z Continuare ad inserire l estremit aperta della tubazione nella fessura del supporto Nota Assicurarsi che le etichette siano ancora perfettamente applicate alla tuba zione Non necessario che ci sia un etichetta all interno del supporto tuba zione Fissare i filtri d ingresso alla tubazione Inserire la tubazione nel supporto tubazione con il filtro d ingresso e ruotare il portafiltro per fissare la tubazione Amersham WB syst
29. l Amersham WB software per le informazioni riguardanti l errore suggerimenti su come risolvere il pro blema sono forniti dal software Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 39 3 Descrizione del sistema 3 2 Gruppo Elpho amp scan 5 2 Gru Introduzione ppo Elpho amp scan Il gruppo Elpho amp scan utilizzato per separare le proteine dei campioni trattati SDS in un gel di poliacrilammide anche utilizzato per eseguire la scansione dei gel al termine dell elettroforesi e delle schede PVDF al termine del sondaggio e dell asciugatura in un esperimento Western Questa sezione fornisce una panoramica del gruppo Elpho amp scan Immagine del gruppo Elpho amp scan 40 L immagine seguente mostra i componenti principali del gruppo Elpho amp scan t g 3 ig i Descrizione 1 Pannello strumento con indicatori di stato 2 Caricatore Elpho amp scan Per il caricamento di schede gel o schede PVDF Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 2 Gruppo Elpho amp scan Descrizione Tasto di espulsione Per aprire chiudere il caricatore dell elettroforesi e lo scomparto di scan sione Nota Il caricatore pu essere aperto solo quando non in corso nessun esperi mento di elettroforesi o di scansione Un eventuale ciclo in esecuzione deve prima essere arrestato per mezzo delle apposite istruzio
30. lo sulla piastra portascheda facendo passare i fori di guida dell adattatore membrana sui perni di guida Nota Fare attenzione a non graffiare la piastra portascheda con oggetti affilati Aprire il supporto di asciugatura Togliere la scheda PVDF dal supporto di asciugatura e posizionare la scheda nell adattatore membrana facendo passare i fori di guida sui perni di guida Nota Fare attenzione a non toccare la zona di blotting della scheda PVDF 186 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Chiudere l adattatore membrana Chiudere il coperchio di sigillatura Premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato caricatore chiuso Avviare e monitorare la scansione della membrana Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Nel software fare clic sulla fase di lavoro GQ MEMBRANE SCANNING SCANNING Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 187 5 Esecuzione di un esperimento 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati Passo Illustrazione della fase Membranes Membrane Position A Position B ID Note Scanning Sensitivity Automatic sensitivity O Manual sensitivity Default Azioni
31. move equipment from normal operating location prior to GE arrival Consumables such as columns or gels have been removed or isolated from the instrument and from any area that may impede access to the instrument AII buffer waste vessels are labeled Excess containers have been removed from the area to provide access Provide explanation for any No answers here Equipment type Product No Serial No hereby confirm that the equipment specified above has been cleaned to remove any hazardous substances and that the area has been made safe and accessible Name Company or institution Position or job title Date YYYY MM DD Signed GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 2010 14 General Electric Company All rights reserved First published April 2010 DOC1149542 28 9800 26 AC 05 2014 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 223 7 Informazioni di riferimento 7 3 Modulo di dichiarazione di salute e sicurezza Restituzione prodotto o assistenza Un rapporto Health amp Safety Declaration Form for Product Return or Servicing come quello indicato nell esempio seguente deve essere usato per registrare i dettagli relativi alla decontaminazione prima di restituire o prestare assistenza al prodotto Health amp Safety Declaration
32. richieste Per ulteriori informazioni vedere il documento della Dichiarazione di conformit UE DoC Requisito Contenuto Nome e indirizzo del costruttore GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 SE 751 84 Uppsala Sweden Conformit con le direttive UE Questo prodotto conforme alle Direttive europee elencate nella tabella adempiendo alle norme armonizzate corrispondenti Direttiva Titolo 2006 42 CE Direttiva macchine MD 2004 108 CE Direttiva Compatibilit Elettromagnetica EMC 2006 95 CE Direttiva bassa tensione LVD 10 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Marcatura CE 1 Introduzione 1 3 Informazioni di carattere normativo Il marchio CE e la relativa dichiarazione UE di conformit valida per lo strumento quando esso e utilizzato come unit autonoma oppure e collegato ad altri prodotti suggeriti o descritti nella documentazione d uso e e utilizzato nello stesso stato in cui stato spedito GE fatta eccezione per le modifiche descritte nella documentazione d uso Norme internazionali requisiti standard soddisfatti dal presente prodotto sono riepilogati nella seguente ta bella EN IEC 61010 1 UL 61010 1 CAN CSA C22 2 N 1010 1 Descrizione Prescrizioni di sicurezza per gli appa recchi elettrici di misurazione con trollo e uso in laboratorio Norma EN armo nizzata con la Direttiva Euro pea 2006 95 CE EN IE
33. salute e sicurezza Assistenza in situ Un rapporto On Site Service Health amp Safety Declaration Form come quello indicato nell esempio seguente deve essere usato per registrare i dettagli relativi alla decontami nazione prima di un intervento di assistenza in situ On Site Service Health amp Safety Declaration Form Service Ticket To make the mutual protection and safety of GE service personnel and our customers all equipment and work areas must be clean and free of any hazardous contaminants before a Service Engineer starts a repair To avoid delays in the servicing of your equipment please complete this checklist and present it to the Service Engineer upon arrival Equipment and or work areas not sufficiently cleaned accessible and safe for an engineer may lead to delays in servicing the equipment and couldbe subject to additional charges Please review the actions below and answer Yes or No Provide explanation for any No answers in box below Instrument has been cleaned of hazardous substances Please rinse tubing or piping wipe down scanner surfaces or otherwise ensure removal of any dangerous residue Ensure the area around the instrument is clean If radioactivity has been used please perform a wipe test or other suitable survey Adequate space and clearance is provided to allow safe access for instrument service repair or installation In some cases this may require customer to
34. sistema gruppo Western Parametro Dimensioni L x P x A 43 x53x39cm Peso 20 kg Alimentazione Tensione 100 240 V Frequenza 50 60 Hz Potenza assorbita Potenza max 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V Tubazione di trasferimento e connettori Materiale della tubazione FEP ID 1 8 Ghiera blu Connettore tubazione Dado 5 16 24UNF 2 A Tubazione di sondaggio e connettori Materiale della tubazione FEP ID 0 063 Ghiera gialla Connettore tubazione Dado 1 4 28UNF 2 B Specifiche di trasferimento Parametro Descrizione Voltage 10 100 V 1 1 La potenza max di 40 W La corrente max di 400 mA Specifiche di sondaggio Parametro Descrizione Volumi sondaggio anticorpi 5 12 ml Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 219 7 Informazioni di riferimento 7 1 Specifiche del sistema Specifiche di asciugatura Parametro Temperatura Descrizione Massimo 45 C Tempo di asciugatura 220 10 minuti Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 7 Informazioni di riferimento 7 2 Guida alla resistenza chimica 7 2 Guida alla resistenza chimica Introduzione Questa sezione specifica la resistenza chimica dell Amersham WB analyzer ad alcuni dei prodotti chimici pi comunemente utilizzati nell elettroforesi e nel Western blot Supposizioni effettuate La classificazione si basa sulle seguenti supposizioni e Gli effetti sinergici d
35. tubazione nella provetta e facendo scattare la provetta in posizione La tabella indicata di seguito descrive quali anticorpi devono essere messi in quale posizione di provetta nel vano anticorpi Posizione A PRIMARY Descrizione Posizione da usare per anticorpi primari diretti sulla membrana nella posizione A della camera di sondaggio A SECONDARY Posizione da usare per anticorpi secondari diretti sulla membrana nella posizione A della camera di sondaggio B PRIMARY Posizione da usare per anticorpi primari diretti sulla membrana nella posizione B della camera di sondaggio B SECONDARY Posizione da usare per anticorpi secondari diretti sulla membrana nella posizione B della camera di sondaggio 3 Chiudere il coperchio del vano anticorpi Nota Per ciascuna membrana presente una provetta per anticorpi per gli anticorpi primari e una per gli anticorpi secondari Questo significa per esempio che se vengono scelti due anticorpi primari per etichettare la membrana in Position A questi vengono mischiati tra loro nella stessa provetta per anticorpi e poi posizionati in posizione A PRIMARY Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 173 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 2 Eseguire il sondaggio 5 8 2 Eseguire il sondaggio Introduzione Questa sezione descrive come e collocarele schede PVDF nelle camere di sondaggio e avvia
36. 14 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 3 Corsie di flusso del liquido Descrizione Sensore dell aria Per rilevare la presenza di aria nella tubazione Quando il flacone della soluzione vuoto il rivelatore d aria mette in pausa il ciclo Valvola di selezione camera di sondaggio Per scegliere se dirigere la soluzione alle camere di sondaggio o dalle ca mere di sondaggio all uscita di scarico Camere di sondaggio Principio di base del processo di sondaggio Nel sondaggio gli anticorpi primari sono legati alle proteine sulla membrana e poi gli anticorpi secondari coniugati a un CyDye sono legati agli anticorpi primari ll principio di base del processo di sondaggio descritto di seguito Fase Descrizione 1 La camera di sondaggio viene riempita preventivamente con la prima solu zione cos come riportato nel protocollo di sondaggio nel software la solu zione di blocco viene usata in modo predefinito Il riempimento preventivo della camera di sondaggio viene avviato dall utente selezionando il comando software appropriato 2 Le schede PVDF sono inserite nelle camere di sondaggio e vengono eseguite le incubazioni sequenziali comprese la fasi di lavaggio della membrana con la soluzione di blocco gli anticorpi primari e quelli secondari Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 59 3 Descrizione del sistema 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materi
37. 3 etichettati permette la normalizzazione di segnali target che usano pro teine totali in ciascuna corsia L Amersham WB software che fa parte di serie del sistema estremamente semplice da usare e consente il controllo dei vari passaggi della proce dura di lavoro e la valutazione automatizzata o manuale dei risultati ottenuti Per un elenco dei nomi tradotti di accessori e materiali di consumo vedere Sezione 7 4 Traduzioni di accessori e materiali di consumo a pagina 225 In questo capitolo Questo capitolo contiene le seguenti sezioni Sezione Vedere pagina 1 1 Informazioni su questo manuale 7 1 2 Importanti informazioni d uso 8 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 1 Introduzione Sezione Vedere pagina 1 3 Informazioni di carattere normativo 10 1 4 Amersham WB Documentazione system 14 6 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 1 Introduzione 1 1 Informazioni su questo manuale 1 1 Informazioni su questo manuale Scopo del presente manuale Le Istruzioni di funzionamento forniscono le istruzioni necessarie per installare utilizzare ed eseguire la manutenzione dell Amersham WB system in piena sicurezza Scopo del presente manuale Le Istruzioni di funzionamento contengono le seguenti informazioni informazioni sulla sicurezza e di carattere normativo una descrizione del sistema compresi gli accessori e i materiali di consumo da usare con il sistema is
38. 6 Se non impedito dal costruttore e se il computer un laptop quest ultimo pu essere sistemato direttamente sul gruppo Elpho amp scan Vedere le spe cifiche del computer relative all ambiente Se si utilizza un computer da banco il monitor e la tastiera possono essere sistemati in cima al gruppo Elpho amp scan Il resto del computer non deve essere collocato in cima al gruppo 98 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Rimuovere gli elementi di protezione per il trasporto del gruppo Elpho amp scan Per proteggere fragili componenti dello scanner del gruppo Elpho amp scan vengono fis sati elementi di protezione per il trasporto Rimuovere con cura gli elementi di protezione per il trasporto prima dell accensione Installare gli elettrodi di trasferimento AVVERTENZA Scollegare l alimentazione Scollegare sempre l alimentazione del gruppo strumento prima di sostituire un suo componente fatto salvo ove altrimenti specificato nella documentazione d uso Passo Operazione 1 Aprire il coperchio del serbatoio di trasferimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 99 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione 2 Inserire l elettrodo di trasferimento sinistro all estrema sinistra del serbatoio di trasferimento e premere verso il basso 3 Inserire l elettrodo di trasferimento de
39. 7 5 Esecuzione di un esperimento 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei campioni Preparativi prima della pre etichettatura Passo Operazione 1 e Togliere una delle seguenti fiale sufficiente per l utilizzo di due schede di gel dal congelatore 1 fiala Amersham WB Cy5 1fiala Amersham WB loading buffer e Scongelare completamente i componenti di pre etichettatura e Portare la fiala Cy5 a temperatura ambiente prima dell apertura per evitare la formazione di condensa 2 Centrifugare brevemente il liquido reagente colorante Cy5 per mezzo di una centrifuga 3 Portare la temperatura del blocco riscaldante a 95 C 4 Per ridurre I SDS PAGE aggiungere una sostanza riducente al tampone di caricamento e Aggiungere 29 pl 1 M DTT di soluzione stock a 0 7 ml una fiala di tam pone di caricamento e agitare per miscelare 128 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei campioni Eseguire la pre etichettatura di campioni protocollo Western Suggerimento Il protocollo che segue pu essere aumentato progressivamente Passo Operazione 1 Eseguire la reazione di etichettatura in una provetta microfuga da 0 5 ml e Aggiungere 2 19 ul di campione di lisato cellulare o estratto di tessuto max 40 ug di proteine totali e riempire fino ad un volume di 19 ul ser vendosi del tampone di lisi del campione originale e Aggiungere 1 ul
40. 7 Preparare 147 Vista d insieme del montag gio 148 Scansione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Preparativi preliminari 185 Procedure successive a 189 schedaPVDF 185 Scheda gel Allentare il telaio portagel dal relativo supporto 156 Mettere sulla piastra porta scheda 137 Risoluzione della separazio ne delle proteine 70 Scegliere il tipo 123 Togliere la pellicola protetti va prima dell elettrofore si 136 Vista d insieme dello smon taggio 155 Scheda PVDF Posizionare nel gruppo El pho amp scan 185 Scomparto di asciugatura Descrizione 52 Pulire 197 Scomparto di sondaggio Descrizione 51 Serbatoio di trasferimento Caricare il sandwich da tra sferire 163 Descrizione 50 Pulire 195 Smaltimento istruzioni genera li 35 Smaltimento dei componenti elettrici 35 Software Avviare 122 Installazione 110 Soluzioni Anticorpi 170 Bloccanti 170 Collegare le soluzioni anti corpi 172 Collegare le soluzioni di sondaggio 171 Collegare le soluzioni di tra sferimento 146 Sondaggio 170 Trasferimento 145 Sondaggio Avviare e monitorare 178 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Indice Collegare le soluzioni anti corpi 172 Collegare le soluzioni di sondaggio 171 Preparare le soluzioni di sondaggio e di anticor pi 170 Principio di base del proces so di sondaggio 59 Pulire la corsia di flus so 181 195 Pulizia della corsia di flus
41. 77 AE Passo Operazione 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione 3 Scollegare la tubazione pompa a destra Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE deck a ra 207 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Passo Operazione 5 Ruotare la testa della pompa in senso antiorario o TRANSFER sil DI 6 Sollevare la testa della pompa ed estrarla dal vano di servizio Nota Durante la rimozione della testa fare attenzione a non danneggiare o piegare una delle tubazioni del gruppo Western Se una tubazione viene danneggiata o piegata bisogna sostituirla con una nuova Contattare il Servizio d assistenza 7 Disimballare una testa di pompa nuova 208 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Passo 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Operazione 10 11 12 Mettere la testa di pompa nuova nella corretta posizione e ruotarla in senso orario Nota Assicurarsi che la rotella corrisoondente della testa della pompa sia nella corretta posizione per poter montare l albero di comando del motorino pompa Bloccare il fermo per mantenere la testa della pompa nella corretta posizione Collegare la tubazione pompa di destra al connettore destro della testa della pompa Collegare la tubazione pomp
42. Amersham WB system Istruzioni di funzionamento Tradotto dall inglese EEE ea SS Pagina lasciata vuota intenzionalmente Sommario Sommario i VO 5 14 Informazioni Su gusto Mono aaa 7 2 INIT lea 8 1 3 Informazioni di carattere NOrMOtIVO sssssssssssssssssiisiiiiiiiiiiriirrrierrrrresrsssrsssssssssssssssssssssnsssnsstssens 10 1 4 Amersham WB Documentazione SYSTEM i 14 2 ISTUZIONI Ol SIC OP sora 17 2 1 Precauzioni di SICUFEZZa ocx ssscsccessesteesssecuzssebess tessusccoreesoscessvtasesasebosaeiatanieceessnseis auesttodinnesticanGeussace 18 EN E ccc eases OE E E E cease EAT ETE AEE EAE TEET 27 25 Procedure diem 0620 32 24 RON 35 3 Descrizione del ee 36 3 1 Descrizione generale dello strumento i 37 3 2 GUDO nia 40 3 3 ig 610 1 0 oh i qq beeeeeerneneneoeet armen teteerte E E tere ree eee nent eee 45 3 3 1 COL A VIA 46 55 2 Scomparti del gruppo Western silla a 50 3 3 3 OO 55 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di CONSUMO 60 3 5 Materiali di consumo perla pre etichettatura sssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssserresrrrrrrrreen 65 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi iiiin 67 36 1 Amersham WB molecular weight markers u s 68 3 6 2 luana 70 3 6 3 Amersham WB buffer strip e Amersham WB buffer strip holder 73 3 6 4 Amersham WB paper rali 75 3 7 Accessori e materiali
43. Amersham WB analyzer in caso di malfunzionamento o se ha subito danni ad esempio e dannialcavo di alimentazione o alla spina e danni derivanti dalla caduta dell attrezzatura e danneggiamento di altre parti che possono influire sul corretto funzionamento Liquidi infiammabili ATTENZIONE Rischio d incendio e Seestato versato del liquido all esterno di Elpho amp scan o dell alloggiamento del gruppo Western staccare la corrente e asciugare il liquido strofinando e Seestato versato del liquido sui gruppi dello strumento che penetrato nell alloggiamento di Elpho amp scan o del gruppo Western staccare il cavo di alimentazione dei gruppi e contat tare l assistenza ATTENZIONE Rischio d incendio Assicurarsi che la tubazione di smaltimento del gruppo Western sia indirizzata verso un flacone di smaltimento posizionato sotto il banco e che non ci siano perdite prima di avvia re un ciclo necessario un flacone di smaltimento vuoto da almeno 4 ATTENZIONE Rischio d incendio Non usare soluzioni tampone di trasferimento con piu del 40 di etanolo o del 40 di metanolo Si raccomanda di utilizzare solo il 20 di etanolo nei tamponi di trasferimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 19 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza Protezione individuale AVVERTENZA Indossare sempre i guanti indumenti e occhiali protettivi quando si ma
44. C61326 1 Emissioni secondo CISPR 11 Gruppo 1 Classe A Apparecchi elettrici di misurazione controllo e uso in laboratorio Requi siti EMC compatibilit elettromagne tica Norma EN armo nizzata con la Direttiva Euro pea 2004 108 CE EN ISO 12100 Sicurezza del macchinario Principi generali di progettazione Valutazio ne e riduzione dei rischi Lo standard EN ISO armonizza to con la diretti va UE 2006 42 CE EN IEC 60825 1 Sicurezza dei prodotti laser Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Norma EN armo nizzata con la Direttiva Euro pea 2006 95 CE 11 1 Introduzione 1 3 Informazioni di carattere normativo Norme e regolamenti per l uso del laser Questa apparecchiatura un prodotto laser di classe 1 IEC 60825 1 2007 EN 60825 1 2007 Questo strumento soddisfa i requisiti di sicurezza delle radiazioni laser indicati nel Codice delle Norme Federali TITOLO 21 CFR Capi tolo 1 Sottocapitolo J Parte 1040 10 Prodotti Laser Conformit FCC Questo dispositivo conforme alla Parte 15 delle Norme FCC L utilizzo vincolato alle seguenti due condizioni 1 Il dispositivo non deve causare interferenze nocive e 2 il di spositivo deve accettare qualsiasi interferenza ricevuta comprese quelle che possono causare un funzionamento indesiderato Nota Si avverte l utente che eventuali cambiamenti o modifiche non espressamente approvate d
45. E 151 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Passo Operazione 4 Togliere la seconda carta protettiva blu IN Nota Non toccare la zona di blotting contrassegnata con un riquadro rosso in figu ra con le dita Tenere la scheda PVDF per le manigliette 152 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Passo Operazione 5 Opzionale Inserire le informazioni della scheda PVDF nel software e Selezionare la fase di lavoro TRANSFER nel software e Nell area Gel Cards amp Membranes portare il cursore nell apposito campo ID e Digitare manualmente il numero di identificazione oppure scansionare il tag della matrice dati sull etichetta della confezione singola della scheda PVDF Amersham WB PVDF card 1 piece n 29022566 Lot no 00115381 Identity no 0000001 Remove oand A e se e Perinserireunanota sulla membrana portare il cursore nel campo Note e digitarla Suggerimento Digitare il numero di lotto Non incluso nella matrice dati ma disponi bile sull etichetta applicata alla scatola delle schede PVDF Gel Cards amp Membranes Membrane Position A N Position B ID Note 6 Afferrare le manigliette della scheda PVDF e bagnare preventivamente la scheda nell etanolo lasciandola nel recipiente con etanolo per c
46. Form for Product Return or Servicing Return authorization and or number Service Ticket Request To make sure the mutual protection and safety of GE personnel our customers transportation personnel and our environment all equipment must be clean and free of any hazardous contaminants before shipping to GE To avoid delays in the processing of your equipment please complete this checklist and include it with your return 1 Please note that items will NOT be accepted for servicing or return without this form 2 Equipment which is not sufficiently cleaned prior to return to GE may lead to delays in servicing the equipment and could be subject to additional charges 3 Visible contamination will be assumed hazardous and additional cleaning and decontamination charges will be applied Please specify if the equipment has been in contact with any of the following Radioactivity please specify Infectious or hazardous biological substances please specify Other Hazardous Chemicals please specify Equipment must be decontaminated prior to service return Please provide a telephone number where GE can contact you for additional information concerning the system equipment Telephone No Liquid and or gas in equipment is Water Ethanol None empty Argon Helium Nitrogen Liquid Nitrogen Other please specify Equipment type Product No
47. La manutenzione si divide in e Dopo ciascun ciclo e manutenzione settimanale e Manutenzione mensile e Manutenzione annuale e Manutenzione secondo necessit Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 193 6 Manutenzione 6 1 Programma di manutenzione Programma di manutenzione periodica seguenti interventi di manutenzione periodica devono essere eseguiti dall utente dell Amersham WB analyzer Intervallo Intervento di manutenzione Istruzioni Al termine di ogni ciclo del gruppo Elpho amp scan Asciugare il liquido strofinandolo Utilizzare un panno senza sfilacciature dalla piastra portascheda o carta che non graffi il vetro protettivo na CA o la piastra portascheda Eliminare il liquido e lo sporco eventualmente presenti sul vetro protettivo del coperchio di sigillatu ra Per rimuovere le macchie utilizzare un panno senza sfilacciature imbevuto al 50 di etanolo Se si ha bisogno di sostituire una parte del coperchio di sigillatura contattare il Servizio d assistenza Controllare se il vetro del coperchio di sigillatura presenta graffi o segni e verificare che il vetro sia saldamen te fissato al suo telaio Controllare il portello del coperchio di sigillatura quando il telaio chiu so ed eliminare l eventuale sporco Pulire i portastrisce tampone Pulire i portastrisce tampone con acqua corrente per eliminare i sali e il tampo ne Lasciare asciugare i portastrisce tampo n
48. La versione inglese in forma Amersham WB system ni necessarie per to cartaceo viene fornita col l l sistema e installare maneggiare ed eseguire la manutenzione dell Amersham wB Le versioni tradotte sono di system in piena sicurezza sponibili come file PDF sul CD della Documentazione Uten e eseguire un esperimento tipico in ie modo sicuro Esso contiene anche informazioni di carattere normativo e di sicurezza una descrizione del sistema e informazioni di riferimento 14 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 1 Introduzione 1 4 Amersham WB Documentazione system Documento Principali contenuti Disponibilit Amersham WB system User Questo manuale contiene le informazio Integrato con Amersham WB Manual ni necessarie per software come manuale HTML nel menu di Help e utilizzare ed eseguire la manutenzio ne dell Amersham WB system in Disponibile anche come file piena sicurezza PDF sul CD della Documenta oo zione Utente pianificare eseguire e valutare l elettroforesi e gli esperimenti We stern eseguire la procedura di risoluzione dei problemi e relativi risultati Contiene anche una descrizione del si stema informazioni di riferimento e in formazioni per effettuare gli ordini Amersham WB software Amersham WB software Help contiene Integrato con l Amersham Help informazioni su WB software nel pannello di destra del software e le procedure di lavor
49. Probing Risultato Il sondaggio viene avvia Start Ready for Probing to La progressione della fase di son daggio viene visualizzata nell area Probing Probing a Ready at Remaining time Start Probing in progress 16 36 2 27 n Probing steps Dur min Repeat Black 10 Wash Primary antibody Wash Secondary antibody 1 2 1 4 1 Wash 4 6 e e negn Final wash Total time 2 31 h 178 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio Introduzione Questa sezione descrive come e posizionare la scheda PVDF nel supporto di asciugatura e Mettere il supporto nello scomparto di asciugatura e iniziare la procedura e pulire la corsia di flusso per il sondaggio Spostare la schedale PVDF nello scomparto di asciugatura Passo Operazione 1 Rimuovere un Amersham WB drying holder supporto di asciugatura dallo scomparto di asciugatura e aprire 2 Scheda Prendere le manigliette della scheda PVDF con le dita o servirsi di pinzette a punta piatta e sollevare la scheda PVDF dalla camera di sondaggio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 179 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio Passo Operazione 3 Posizionare la s
50. Serial No Name Company or j institution Position or job title Date YYYY MM DD Signed A GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company To receive a return authorization number or service number GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue P O Box 1327 Piscataway please call local technical support or customer service NJ 08855 1327 US 2010 14 General Electric Company All rights reserved First published April 2010 DOC1149544 28 9800 27 AC 05 2014 224 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 7 Informazioni di riferimento 7 4 Traduzioni di accessori e materiali di consumo Nome del prodotto in inglese Amersham WB labeling buffer Traduzioni di accessori e materiali di consumo Traduzione tampone di etichettatura Amersham WB loading buffer tampone di caricamento Amersham WB molecular weight markers Marker del peso molecolare Amersham WB gel card 14 8 18 scheda gel Amersham WB gel card 14 13 5 Amersham WB buffer strip scheda gel striscia tampone Amersham WB PVDF card scheda PVDF Amersham WB transfer paper carta di trasferimento Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 capra anti coniglio Cy3 Cy5 Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 capra anti topo Cy3 Cy5 Amersham WB paper comb pettine di carta Amersham WB buffer strip holder portastrisce tampone Amersham WB transfer
51. Sezione 7 1 Specifiche del sistema a pagina 216 94 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 1 Preparazione della sede Requisiti del computer Parametro Sistema operativo Windows 7 Professional 32 bit or 64 bit versione inglese Browser Internet Windows Internet Explorer 8 o successivo Risoluzione dello schermo Risoluzione di 1280 x 800 o superiore Prestazioni Min memoria fisica di 2 GB Consigliato memoria fisica di 4 GB Nota Il computer deve essere installato posizionato ed utilizzato seguendo le istruzioni e le specifiche fornite dal suo costruttore Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 95 4 Installazione 4 2 Installazione hardware 42 Installazione hardware Disimballare l Amersham WB analyzer Vedere Amersham WB analyzer Istruzioni per il disimballaggio Sollevare i gruppi strumento sul banco AVVERTENZA Accertarsi che il sistema venga posizionato su un banco piano e stabile con adeguato spazio di ventilazione AVVERTENZA Non bloccare l accesso all interruttore di alimentazione e al cavo di alimentazione L interruttore di alimentazione deve essere sempre facilmente accessibile Il cavo di alimentazione e la presa devono essere sempre facili da scollegare ATTENZIONE Dispositivi di protezione individuale DPI Durante l imballaggio il disimballaggio il trasporto o lo spostamento del siste
52. T Buffer in un flacone contenente 1000 ml di 0 5 M NaOH 5 Fare clic sul pulsante Start clean nella finestra di dialogo 6 Al termine della pulizia spostare la tubazione in un flacone vuoto Nota Al termine della pulizia smaltire tutte le soluzioni Pulizia di manutenzione della corsia di flusso per il sondaggio La procedura richiede circa 45 minuti Il trasferimento e l asciugatura possono essere 200 eseguiti parallelamente Nota Verificare che non ci siano schede PVDF lasciate nelle camere di son daggio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio AVVERTENZA Quando si utilizzano sostanze chimiche pericolose evitare le fuo riuscite e indossare occhiali di protezione e altri dispositivi di prote zione individuale adeguati Per esempio l NaOH corrosivo e dunque pericoloso per la salute Passo Operazione 1 Selezionare nel software Control Maintenance clean Probing flow path oppure fare clic sul pulsante Maintenance clean Probing nella schermata iniziale del software Risultato Si apre la finestra di dialogo Maintenance Clean Probing Flow Path Maintenance Clean Probing Flow Path Maintenance cleaning of the probing flow path 1 Wipe all probing tubing with a wet tissue 2 Insert the probing Water tubing in at least 1000 ml water
53. TO ACCEPT BEFORE INSTALLING AND USING GE HEALTHCARE SOFTWARE CAREFULLY READ ALL OF THE TERMS AND CONDITIONS OF THIS LICENSE AGREEMENT BEFORE PROCEEDING I accept the terms in the license agreement I do not accept the terms in the license agreement InstallShield 9 e Percambiarela directory di default sconsigliata cliccare su Change e portarsi nella directory desiderata e Fare clic su Next Click Next to install to this folder or dick Change to install to a different Tok E7 Install Amersham WB software to C Program Files x86 GE Healthcare Amersham WB software Change InstallShield 112 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 3 Installazione software Passo Operazione 6 e Perriesaminare o modificare le impostazioni di installazione fare clic su Back e Per iniziare l installazione fare clic su Install ar Ce n f cri j fr gt a el ATTIETSI T i gt 38 x o S ie ZOIL Lt ri a aah DR EORPA PESO VEAN Ready to Install the Program The wizard is ready to begin installation Click Install to begin the installation If you want to review or change any of your installation settings dick Back Click Cancel to exit the wizard InstallShield 7 Fare clic su Finish per uscire dalla procedura guidata di installazione The InstallShield Wizard has successfully installed Amersham WB software Click Finish to exit
54. WB analyzer possibile im postare un esperimento in anticipo su un computer in ufficio senza nessun collegamento con lo strumento Nota I due gruppi strumento devono sempre essere accesi durante un ciclo Avviare il gruppo Amersham WB elpho amp scan Passo Operazione Sul pannello posteriore del gruppo Elpho amp scan premere l interruttore di alimentazione di rete in posizione I ON Risultato Il gruppo Elpho amp scan entra in funzione Durante l avvio il pannello indicatori indica quanto segue ELPHO amp SCAN Quando lo strumento pronto per l uso viene visualizzato un rettangolo bianco ELPHO amp SCAN S 120 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 2 Avviare l Amersham WB analyzer Avviare il gruppo Amersham WB western Passo Operazione Gruppo Sul pannello posteriore del gruppo Western premere l interruttore di alimentazione di rete in posizione I ON Nota Il gruppo Elpho amp scan deve essere acceso prima che sia possibile avviare il gruppo Western Risultato Il gruppo Western entra in funzione Durante l avvio il pannello indicatori indica quanto segue TRANSFER PROBING DRYING Quando gli scomparti del gruppo Western sono pronti per l uso viene visua lizzato un rettangolo bianco per ognuno dei tre scomparti trasferimento sondaggio e asciugatura TRANSFER MD PROBING DRYING
55. WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 149 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Preparare la scheda PVDF 150 Scheda Le seguenti istruzioni descrivono come predisporre la realizzazione di un sand wich da trasferire Passo Operazione 1 Togliere una confezione singola di scheda PVDF dalla scatola schede PVDF Amersham WB PVDF cord 1 piece si 290221568 Lot no ORSI Identity mo 0000008 terno rt sat Pe buo sr 4 at eee ee Nota Conservare la confezione per l ID di ogni singola scheda PVDF ed anche per una successiva conservazione 2 Togliere la scheda PVDF dalla confezione e staccare la prima carta protettiva di colore blu Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Passo 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Operazione Opzionale e Prima di togliere la seconda carta blu scrivere una nota con una matita sulla superficie di scrittura della scheda PVDF Suggerimento La superficie di scrittura pu essere usata per inserire la posizione A o B in cui la scheda PVDF usata e Selezionare l opzione TRANSFER nel software Portare il cursore nell ap posito campo Note e digitare il testo Gel Cards amp Membranes Membrane Position A j Position B ID FEE Note Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 A
56. a sferimento 209 Sostituire il filtro del serbato io di trasferimento 211 Sostituire la testa della pompa di trasferimento 206 V Vano anticorpi Collegare le soluzioni anti corpi 172 Descrizione 53 Vano di servizio Descrizione 54 Sostituire il filtro dell aria 204 Sostituire le teste delle pompe 206 Visualizzazione risultati 188 W Western Avvio 121 Descrizione 116 Western gruppo 45 Western unit Scomparto di asciugatu ra 52 Scomparto di sondaggio 51 Serbatoio di trasferimen to 50 Vano anticorpi 53 Vano di servizio 54 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Pagina lasciata vuota intenzionalmente Per contattare gli uffici locali visitare il sito www gelifesciences com contact GE Healthcare UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA Regno Unito www gelifesciences com Il monogramma GE e GE sono marchi di fabbrica General Electric Company Amersham Cy CyDye MiniTrap e Sephadex sono marchi di GE Healthcare o di una delle sue aziende consociate Microsoft e Windows sono marchi di fabbrica registrati di Microsoft Corporation Tween un marchio di Uniqgema Americas LLC CyDye Questo prodotto fabbricato con licenza esclusiva da Carnegie Mellon University ed coperto da brevetto degli Stati Uniti n 5 569 587 e 5 627 027 L acquisto di prodotti CyDye comprende una licenza limitata per poter utilizzare i prodotti CyDye p
57. a 3 9 Descrizione generale del software 3 9 Descrizione generale del software Introduzione Questa sezione fornisce una panoramica dell Amersham WB software Immagine della schermata iniziale del software Nella schermata iniziale del software possibile creare nuovi esperimenti e aprire quelli salvati precedentemente Per informazioni su come creare e impostare un esperimento vedere Creare e impostare un esperimento a pagina 123 A Amersham WB software 96 Fee al Igziale aa MA WB software File x Control Remote w Help w Wy Create New Experiment Easy Western gt o o DD All Western experiments include necessary SDS PAGE steps Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison Easy Western One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Western with total protein normalization gt Western with endogenous protein normalization Easy SDS PAGE Create Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment Create new experiment Maintenance clean Open experiment based on a previous run Learn more
58. a GE potrebbero annullare l autorizzazione dell utente all uso dell apparecchiatura Questa apparecchiatura stata testata e ritenuta compatibile con i limiti previsti per un dispositivo digitale di Classe A ai sensi della Parte 15 delle Norme FCC Questi limiti vengono stabiliti per fornire una protezione ragionevole contro le interferenze dannose quando l apparecchiatura viene utilizzata inun ambiente commerciale Questa apparec chiatura produce utilizza e pu irradiare frequenze radio e se non installata e usata in base a quanto indicato nel manuale di istruzioni pu provocare interferenze dannose nelle comunicazioni radio L utilizzo di questa apparecchiatura in una zona residenziale pu provocare interferenze dannose nel qual caso l utente dovr provvedere a risolvere l interferenza a sue spese Conformit ambientale 12 Direttiva Titolo 2011 65 UE Direttiva sulle restrizioni d uso di sostanze pericolose ROHS Restriction of Hazardous Substances 2012 19 EU Direttiva sui rifiuti provenienti da apparecchiature elet triche ed elettroniche WEEE Waste Electrical and Electronic Equipment Normativa CE Nr Registrazione valutazione autorizzazione e restrizione 1907 2006 delle sostanze chimiche REACH Registration Evalua tion Authorization and restriction of Chemicals Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 1 Introduzione 1 3 Informazioni di carattere normativo Direttiva
59. a a terra Utilizzare soltanto un cavo di alimentazione omologato a 3 fili for nito o approvato da GE oppure conforme a tutti i requisiti norma tivi in campo elettrico in vigore a livello locale ATTENZIONE Non spostare il gruppo Western con flaconi collocati su di esso ATTENZIONE Oggetto pesante Sono necessarie due persone per sollevare gruppi dello strumento in modo sicuro AVVISO L eventuale computer usato con l apparecchiatura deve essere conforme a IEC EN UL CSA 60950 1 o ad altre norme di sicurezza Esso deve essere installato ed usato conformemente alle istruzione del costruttore O O0bb AVVISO Scollegare i cavi Per evitare di danneggiare l apparecchiatura scollegare sempre i cavi prima di spostare il gruppo strumento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza Funzionamento del sistema AVVERTENZA Esplosione vetro Non mettere in funzione il sistema se il vetro del coperchio di sigillatura del gruppo Elpho amp scan graffiato o rotto Spegnere lo strumento scollegare il cavo di alimentazione e con tattare un tecnico di assistenza autorizzato AVVERTENZA Pericolo di scossa elettrica in seguito alla fuoriuscita di liquido durante il ciclo Qualora ci fosse il rischio che il liquido fuoriuscito possa penetrare nell alloggiamento dell Amersham WB analyzer spegnere immediatamen
60. a devono essere raccolti separatamente Contattare un rappre sentante autorizzato del costruttore per informazioni relative allo smantellamento dell attrezzatura Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 35 3 Descrizione del sistema 2 Descrizione del sistema Informazioni sul capitolo Questo capitolo descrive le diverse parti dell Amersham WB system L Amersham WB system costituito da e Amersham WB analyzer due gruppi e accessorie materiali di consumo da utilizzare con lo strumento e un computer non compreso nella fornitura e Amersham WB software In questo capitolo 36 Il presente capitolo contiene le seguenti sezioni Sezione Vedere pagina 3 1 Descrizione generale dello strumento ST 3 2 Gruppo Elpho amp scan 40 3 3 Gruppo Western 45 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di consumo 60 3 5 Materiali di consumo per la pre etichettatura 65 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 67 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 76 3 8 Altri accessori 86 3 9 Descrizione generale del software 88 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 1 Descrizione generale dello strumento 3 1 Descrizione generale dello strumento Introduzione Questa sezione fornisce una panoramica dell Amersham WB analyzer L Amersham WB analyzer costituito da due gruppi e Amersham WB Gruppo elpho amp
61. a di sinistra al connettore sinistro della testa della pompa Chiudere il coperchio del vano di servizio Sostituire gli elettrodi di trasferimento Nel caso la procedura di trasferimento non riuscisse il motivo potrebbe risiedere in un guasto degli elettrodi di trasferimento Si raccomanda di sostituire entrambi gli elettrodi Le seguenti istruzioni descrivono come sostituire gli elettrodi di trasferimento Passo Operazione 1 Aprire il coperchio del serbatoio di trasferimento Gli elettrodi sono posizio nati su ciascun lato Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 209 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Passo Operazione 2 Estrarre l elettrodo 3 4 Ripetere la procedura allo stesso modo per l elettrodo di destra 5 Chiudere il coperchio del serbatoio di trasferimento 210 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Sostituire il filtro del serbatoio di trasferimento Nota Se il filtro di trasferimento sporco non possibile toglierlo pulirlo e rimetterlo al suo posto Il filtro deve essere sostituito Le seguenti istruzioni descrivono come sostituire il filtro del serbatoio di trasferimento Passo Operazione il Aprire il coperchio del serbatoio di trasferimento Il filtro si trova nella parte inferiore del serbato
62. a funzione sleep mode modalit sospensione del computer o di impostarla su 3 ore quando collegato all Amersham WB analyzer In modalit sospensione sleep mode la connessione all accesso remoto dello strumento viene interrotta di conseguenza lo stato di esecuzione non verr caricato finch il computer non sar di nuovo attivo 2 Collegare l Elpho amp scan unit contact Western unit alla Western unit contatto Elpho and scan unit per mezzo del cavo Ethernet fornito Di 102 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione 3 Collegare i cavi di alimentazione ai relativi connettori dei gruppi TV CAAA 4 Collegare i cavi di alimentazione ad una presa a muro collegata a terra Per le informazioni su tensione e frequenza vedere Sezione 7 1 Specifiche del sistema a pagina 216 Nota Non accendere l interruttore di alimentazione di rete prima che tutti i collegamenti siano stati effettuati Montare le torrette portatubi del gruppo Western Le torrette portatubi per la tubazione del gruppo Western non sono preinstallate nella confezione fornita e devono pertanto essere montate dall utente Passo Operazione 1 Aprire il sacchetto di plastica contenente le torrette e la tubazione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 103 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione 2 Premere
63. a matrice Portafiltro d ingresso portafiltro d ingresso con i relativi filtri d ingresso sono fissati alle provette di ingresso che sono inserite nei flaconi sul relativo cestello Le particelle vengono filtrate dal filtro d ingresso e il portafiltro d ingresso stesso permette di tenere le tubazioni in posizione nella parte inferiore dei flaconi L immagine seguente mostra un portafiltro d ingresso con un filtro d ingresso montato e fissato alla tubazione 86 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 8 Altri accessori Supporti tubazione Per compensare le tensioni che si creano quando la tubazione viene inserita nei flaconi ed evitare che questi ultimi cadano al diminuire del livello del liquido si deve fissare un apposito supporto alla tubazione Vedere l immagine seguente Accessori aggiuntivi installabili dall utente Gli elettrodi di trasferimento e le guide di asciugatura membrana devono essere instal late dall utente Per ulteriori informazioni vedere Installare gli elettrodi di trasferimento a pagina 99 e Installare le guide di asciugatura membrana nello scomparto di asciugatura a pagina 107 Accessori per la manutenzione utente Per una descrizione degli accessori usati dall utente per la manutenzione vedere Acces sori di manutenzione a pagina 203 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 87 3 Descrizione del sistem
64. al Regulations 29 CFR Parte 1910 7 30 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 2 Etichette Simboli relativi alle sostanze pericolose usati sulle etichette del gruppo strumento seguenti simboli sulle etichette si riferiscono a sostanze pericolose Rinomina Descrizione Questo simbolo indica che le apparecchiature elettriche ed elettro niche non devono essere smaltite come rifiuti urbani indifferenziati ma essere smaltite separatamente Contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante per informazioni relative allo smantella mento dell attrezzatura Questo simbolo indica che il prodotto contiene delle sostanze peri colose oltre i limiti stabiliti dalla norma cinese SJ T11363 2006 Re quisiti sui Limiti delle Concentrazioni per Certe Sostanze Pericolose negli Apparecchi Elettronici Etichetta di sicurezza relativa alla luce laser La seguenti etichette sono relative alla luce laser e la prima applicata al pannello po steriore del gruppo Elpho amp scan La seconda applicata all interno del caricatore Elpho amp scan Rinomina Descrizione Questa apparecchiatura un dispositivo equipag giato con laser di classe 1 IEC 60825 1 2007 EN Questo strumento soddisfa i requisiti di sicurezza Complies with 21 CFR 1040 10 and 1040 11 except delle radiazioni laser indicati nel Codice delle Nor for deviations pursuant to Laser Notice No 50 me Fed
65. ali di consumo 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di consumo Introduzione Questa sezione fornisce una panoramica degli accessori e dei materiali di consumo da utilizzare con l Amersham WB analyzer Contiene anche informazioni sulla conservazione dei materiali di consumo e come ordinarli Accessori e materiali di consumo La tabella sottostante riporta gli accessori e i materiali di consumo da utilizzare con lo strumento in relazione all operazione da eseguire Gli accessori dello strumento sono forniti con il sistema mentre i materiali di consumo vanno ordinati a parte Gli accessori da installare sono descritti in Sezione 4 2 Installazione hardware a pagina 96 e gli accessori per gli interventi di manutenzione dell utente sono descritti in Accessori di manutenzione a pagina 203 Per una descrizione dettagliata degli accessori e dei materiali di consumo vedere le successive sezioni Operazione Materiali di consumo richiesti Accessori Per i det richiesti tagli ve dere Pre etichettatura e Amersham WB Cy5 N D Sezione di campioni 3 5 e Amersham WB labeling buffer Campio ne da etichettare e Amersham WB loading buffer Tampone di caricamento e Amersham WB MiniTrap kit opzionale Ciclo di elettrofore e Amersham WB molecular weight mar Amersham WB buffer Sezione S kers Marker del peso molecolare strip holder Porta 3 6 strisce tampone e Amersham WB gel card Sche
66. are il funzionamento del lettore di tag della matrice dati come riportato nella relativa documentazione d uso Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 109 4 Installazione 4 3 Installazione software 4 3 Installazione software Installare l Amersham WB software 110 Per installare il software sul computer con Windows 7 Professional Nota Si consiglia di installare eventuali aggiornamenti Windows in sospeso prima di installare il software e poi seguire le istruzioni dei prompt Si raccomanda di completare l intera procedura d installazione senza interruzioni dopo aver cliccato su Install Passo Operazione 1 Inserire il DVD del software nel computer Quando appare la prima finestra di dialogo della procedura guidata cliccare su Install per installare i requisiti software Amersham WB software InstallShield Wizard Amersham WB software requires the following items to be installed on your computer Click Install to begin installing these requirements Status Pending Pending Pending Pending Pending Requirement GE Healthcare Life Sciences Windows Driver Package Microsoft Visual C 2005 SP 1 Redistributable Package x86 Microsoft Visual C 2008 SP 1 Redistributable Package x86 JRE_SE 1 7 0_02 x86 Microsoft NET Framework 4 0 Full Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 3 Installazione software Passo Operazione
67. cheda PVDF nel supporto di asciugatura facendo passare fori di guida della scheda PDVF sui tre perni di guida 4 Chiudere il supporto di asciugatura Assicurarsi che il supporto di asciugatura sia bloccato dall apposito fermo 180 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio Passo Operazione 5 Mettere il i supportoli di asciugatura nella posizione adatta nello scomparto di asciugatura cio scheda PVDF in posizione di sondaggio A per posizione di asciugatura A Pulire la corsia di flusso per il sondaggio Nota Prima di procedere alla pulizia spostare lale schedale PVDF nello scomparto di asciugatura vedi istruzioni sopra Passo Operazione 1 Una volta completato sondaggio si apre la finestra di dialogo Probing Completed Clean Probing Flow Path Nota Si raccomanda di pulire la corsia di flusso per il sondaggio ad ogni ciclo Se si sceglie di omettere la fase di pulizia della corsia di flusso per trasferimen to cliccare su Cancel e passare a Sezione 5 8 4 Eseguire l asciugatura a pagina 183 Ad ogni modo ricordarsi di pulire la corsia di flusso per sondaggio in una seconda fase dell esperimento La pulizia pu essere eseguita selezio nando Control Clean Probing flow path dalla barra dei menu Se si omesso di eseguire la pulizia la corsia di flusso per sondaggio d
68. chettatura dei campioni 126 5 5 Preparazione di Amersham WB molecular weight markers 130 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 132 5 7 Eseguire il trasferimento 144 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 169 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati 185 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 115 5 Esecuzione di un esperimento 5 1 Generalit 5 1 Generalit Introduzione Questa sezione fornisce una panoramica dei due tipi principali di esperimenti che si possono eseguire e esperimenti di elettroforesi e esperimenti Western comprende l elettroforesi delle proteine La presente sezione descrive anche la procedura di lavoro di un tipico esperimento de scritta nelle successive sezioni illustrato con il tipo di esperimento Western with total protein normalization Esperimenti di elettroforesi Negli esperimenti di elettroforesi i campioni sono pre etichettati con liquido reagente colorante Cy5 prima dell elettroforesi stessa Ci consente il rilevamento diretto di pro teine pre etichettate nel campione eliminando cos la necessit di post macchiatura del gel In fase di Valutazione al termine della scansione del gel viene eseguita un ana lisi automatica delle bande di proteine e i risultati sono quindi presentati nel software Esperimenti Western Esperimento Negli esperimenti Western le proteine non etichettate o pre etichettate Cy5 sono separate nel gel d
69. chimiche pericolose evitare le fuo riuscite e indossare occhiali di protezione e altri dispositivi di prote zione individuale adeguati Per esempio l NaOH corrosivo e dunque pericoloso per la salute Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 199 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio Passo Operazione 1 Selezionare nel software Control Maintenance clean Transfer flow path oppure fare clic sul pulsante Maintenance clean Transfer nella schermata iniziale del software Risultato Si apre la finestra di dialogo Maintenance Clean Transfer Flow Path Maintenance Clean Transfer Flow Path Maintenance cleaning of the transfer flow path Wipe both transfer tubing with a wet tissue Insert the transfer Water tubing in 2000 ml water Insert the transfer Buffer tubing in 1000 ml wash solution Make sure that no transfer holders are left in the tank Note Discard all solutions after cleaning The procedure will take about 25 minutes Start clean Cancel 2 e Pulire la parte superiore del serbatoio di trasferimento ed entrambe le tubazioni di trasferimento con un panno umido e Verificare che il filtro del serbatoio di trasferimento sia intatto e pulito Se necessario sostituire il filtro 3 Immergere la tubazione T Water in un flacone contenente 2 000 ml di acqua purissima 4 Immergere la tubazione
70. collegare le soluzioni di trasferimento 145 5 2 Preparare il sandwich da trasferire iii 147 57a Avviare trasferimento ceccssessssesssessssessssecsssssssessssssssscssuecsssssssscssnsessecssuecssscessecsssecssecssuccasecsssecesseen 162 5 7 4 Procedure al termine del trasferimento hai 166 5 9 Eseguire i sondaggio FOSCIUOGIUFO ira 169 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi s s 170 5 8 2 Eseguire il SOOO ONO illa 174 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio tollera 179 5 8 4 Eseguire OSCIUGOLUFO ricca 183 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati nn 185 CIR er 190 6 1 Programma di MONUIenzio asili 193 6 2 ISTROZION I per la manutenZAONE seinio e eia E SE 198 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio 199 6 2 2 Procedure di sostituzione csi 203 6 2 5 Spostamento dei gruppi SU UCN LO ionica 214 7 Informazioni di riferimento sesesseseeseesoesessessesesseeseesessesseseeseesesseseessesesseesesseee 215 Ti Specicnedesbl nina 216 Le Uil 221 7 3 Modulo di dichiarazione di salute SiCUrezza iii 225 7 4 Traduzioni di accessori e materiali di CONSUMO ov eeecessesssesssessseessecssesssecssecssecssecsseesseesseeesnees 225 Wa 226 4 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 1 Introduzione 1 Introduzione L Amersham WB system Il Amersham WB system un sistema integrato per SDS PAGE e l a
71. da PVDF nel gruppo Elpho amp scan Scheda PVDF dalla fase di asciugatura Amersham WB membrane adapter Adattatore membra na Sezione 3 7 4 Altro Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 61 3 Descrizione del sistema 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di consumo Operazione Materiali di consumo richiesti Accessori Per i det richiesti tagli ve dere Scansione dei tag Lettore ditag matrice Sezione della matrice dati da ordinare a parte 3 8 sulle schede di gel e sulle confezioni singole di schede PVDF opzionale 1 Incluso nella fornitura dell Amersham WB analyzer Ordinare materiali di consumo A seconda degli esperimenti da effettuare sono richieste diverse combinazioni di mate riali di consumo Una guida alla scelta per poter comporre un kit di materiali diconsumo disponibile all indirizzo www gelifesciences com Per informazioni sulle ordinazioni di materiali diconsumo a parte vedere Amersham WB system User Manual Stoccaggio dei materiali di consumo La tabella seguente riassume le condizioni di stoccaggio e quelle ambientali per i vari tipi di materiali di consumo La data di scadenza dei materiali di consumo stampata sulla confezione Materiale di consumo Temperatura di stoccaggio Ambiente Materiali di consumo per la Da 15 a 30 C Proteggere il contenuto dalla pre etichettatura luce diretta del sole Evitare ci
72. da gel e Amersham WB buffer strip Striscia tampone e Amersham WB loading buffer e Amersham WB paper comb opzionale pettine di carta 60 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Operazione Western fasi di blot Materiali di consumo richiesti 3 Descrizione del sistema 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di consumo Accessori richiesti Per i det tagli ve dere Trasferimento Amersham WB gel card del ciclo di elettroforesi Amersham WB PVDF card scheda PVDF Amersham WB transfer paper carta di trasferimento Amersham WB sponge Spugna Soluzioni di trasferimento preparate in laboratorio per le ricette vedere Solu zioni di trasferimento ricette a pagi na 145 Amersham WB transfer holder Supporto di trasferi mento Sezione 3 7 1 Sondaggio Soluzioni di anticorpi primari preparate in laboratorio Anticorpo secondario Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 capra anti topo Cy3 Cy5 o Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 capra anti coniglio Cy3 Cy5 Scheda PVDF dalla fase di trasferimento Soluzioni di sondaggio preparate in la boratorio per le ricette vedere Ricette di soluzioni di sondaggio e di anticorpi a pagina 170 Provette di soluzioni anticorpi Sezione 5 1 2 Asciugatura Scheda PVDF dalla fase di sondaggio Amersham WB dry ing holder Supporto di asciugatura Scansione della sche
73. del 40 di etanolo o del 40 di metanolo Si raccomanda di utilizzare solo il 20 di etanolo nei tamponi di trasferimento Soluzione Ricetta Quantit ciclo Tampone di trasferimen 25 mM Tris 192 mM glicina 20 etanolo 1 000 ml to pH 8 3 Nel tampone di trasferimento possibile usare il metanolo invece dell etanolo Nota Alcuni tipi di etanolo hanno propriet autofluorescenti che determinano un elevato background della membrana Assicurarsi che l etanolo usato per il trasferimento non sia autofluorescente Acqua purissima Acqua purissima 1 000 ml usata per la pulizia Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 145 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento Collegare la tubazione al tampone di trasferimento e all acqua purissima sul cestello dei flaconi ATTENZIONE Per evitare di spruzzare liquidi pericolosi usare filtri di ingresso pesanti collegati alle tubazioni nei flaconi Vedere Sezione 3 8 Altri accessori a pagina 86 per le descrizioni dei filtri d ingresso e dei supporti tubazione Vedere Fissare i supporti tubazione a pagina 105 per le istruzioni su come collegare gli accessori Prima di cominciare il trasferimento collegare la tubazione al tampone di trasferimento e all acqua purissima usata per pulire il serbatoio di trasferimento nel modo seguente Passo Operazione 1 Dal
74. dell operatore Utilizzare le impostazioni di default per la scansione della membrana come mostrato nella schermata Scan Ready for Membrane scanning di Membrane Scanning Fare clic su Scan nell area Membrane Scan ning Risultato La scansione della membrana viene avviata Membrane Scanning Remaining time Scanning Membranes 9 27 min Position B Cy par Position A Cy5 Position A Cy3 Position B Cy3 La progressione delle scansioni viene visua lizzata nell area Membrane Scanning Una volta conclusa la scansione le immagini della membrana verranno visualizzate nell area Membrane Scanning Visualizzazione dei risultati Passo Operazione 1 Fare clic sulla fase di lavoro EVALUATION nel software Risultato Le immagini nell area Membrane Scanning vengono valutate La progressione della valutazione viene visualizzata da un apposita barra di avanzamento 188 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati Passo Operazione 2 Una volta conclusa la valutazione delle immagini queste vengono visualiz zate nella schermata Valutazione che mostra i valori normalizzati per l esperimento sulla scheda opzione Bar chart Per ulteriori informazioni su come analizzare i risultati vedere User Manual o software help Procedure successive alla scansione della membrana Passo O
75. di consumo per le fasi di Western blot weenie 76 SIA Accessori e materiali di CONSUMO per trasferimento sses 77 372 Anticorpi secondari sondaggio siriana 82 575 Supporto di asciugatura Asciugatura scheda PVDF u seessessssessssesssseessessssecsstecsseeesses 84 3 7 4 Adattatore membrana Scansione scheda PVDF u eecssesssssesssssessssessssssssssecesseessssecssseeen 85 5 Mila 86 3 9 Descrizione generale del software iiin 88 Ia 92 li Penone deld cde sarraa E AE 93 42 installazione IO ONS annali 96 di Dade Well 110 5 Esecuzione di un esperimento ccccsccescsccssccsscesccsssccessesssecsscessescseeeseeseeees 115 gt T E E E E E E S EO 116 5 2 Avviare l Amersham WB analyzer iii 120 5 3 Impostare un esperimento col Software oo eccescsesssessssessseesseessesssesssesssecssecssecssecssecsseesseesseeeseees 122 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei CAMPIONI ssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssrssrsssrssrserrrrrrrrrrrren 126 5 5 Preparazione di Amersham WB molecular weight markers s 130 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Sommario 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine iiiiii 132 5 6 1 Prima dell elettroforeSi iiii 153 5 6 2 AMIR lia 140 5 6 3 Procedure post elettroforesi e scansione delle schede di gel 142 57 Es g ireiltrasterimentO lla 144 5 7 1 Preparare e
76. dy for Probing pre fil gio viene riempita con qualche millilitro della prima soluzione della tabella della sequenza di sondaggio per default la solu zione bloccante Nota Dopo aver riempito preventivamen te la camera di sondaggio e None piu possibile cambiare il tipo della prima fase nella tabel la della sequenza di sondaggio Tuttavia Dur min e Repeat possono essere modificate e Il pulsante Pre Fill diventa un pulsante di Start e viene visua lizzato il messaggio di stato Ready for Probing Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 175 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 2 Eseguire il sondaggio Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Aprire il coperchio scomparto di sondaggio e usare il fermo per aprire il coperchio della camera di sondaggio Aprire il supporto di trasferimento e togliere la spugna e la carta di trasferimento dalla sommit della scheda PVDF e Togliere la scheda PVDF dal supporto di trasferimento Te nere le manigliette della sche da PVDF con le dita oppure servirsi di pinzette a punta piatta e Collocare la scheda PVDF nella camera di sondaggio vedere punto 5 e Per pulire il supporto di trasfe rimento e gestire lo scarto vedere Pulire il supporto di trasferimento a pagina 168 176 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un e
77. e capovolti all aria Pulire gli adattatorimembrana Pulire gli adattatori membrana con un panno senza sfilacciature e metterli nello spazio di stoccaggio del vano an ticorpi 194 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 1 Programma di manutenzione Intervallo Intervento di manutenzione Istruzioni Al termine di ogni ciclo del gruppo Western Pulire la corsia di flusso per trasferimen to Se la corsia di flusso per iltrasferimento non stata pulita al termine del trasfe rimento eseguire la procedura di pulizia cliccando su Control Clean Transfer flow path nella barra dei menu Pulire la corsia di flusso per il sondaggio Se la corsia di flusso per il sondaggio non stata pulita al termine del sondag gio eseguire la procedura di pulizia cliccando su Control Clean Probing flow path nella barra dei menu Pulire il supporto di trasferimento Vedere Pulire il supporto di trasferimen to a pagina 168 Pulire i supporti di asciugatura Pulire i supporti di asciugatura con un panno senza sfilacciature e metterli nello scomparto di asciugatura Eliminare eventuali particelle presenti nel serbatoio di trasferimento Controllare il serbatoio ed eliminare eventuali residui di gel o fibre di carta usando delle pinzette Verificare il filtro del serbatoio di trasfe rimento e sostituirlo se sporco vedere Sostituire il filtro del serbatoio di trasferi men
78. e della fase Azioni dell operatore e Togliere una scheda di gel dalla propria confezio ne con lato anteriore ri volto verso l alto I e Opzionale Posizionare il cursore nel campo ID del software in corrisponden za del passaggio della procedura di lavoro ELECTROPHORESIS amp GEL SCANNING del soft ware e eseguire la scan sione dei tag della matri ce dati sulle schede di gel Gel Cards or indicato con un cerchio Gel card Position A Position B i en rr arancione servendosi Note del lettore di tag della matrice In alternativa digitare le cinque cifre dell ID p es 00123 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 135 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore e Girare la scheda di gel di modo che il lato inverso sia rivolto verso l alto manigliette gel blu senza etichette rivolte in alto e Afferrare l estremit della pellicola protettiva nella parte inferiore della scheda gel e toglierla con cura e Afferrare l estremit della pellicola protettiva nella parte superiore della scheda gel e toglierla con cura Rimuovendo le pellicole pro tettive si stabilisce un contat to tra il gel e iltampone allor ch si mette la scheda gel sulla piastra portascheda Fare attenzione a non tocca re le superfici di gel scoper
79. e di un esperimento 5 1 Generalit Procedura di lavoro Western con normalizzazione delle proteine totali L immagine seguente mostra le fasi principali del tipo di esperimento Western with total protein normalization Questa procedura utilizzata per spiegare come eseguire un esperimento tipico e che poi ulteriormente descritta nelle successive sezioni Per altri tipi di esperimenti vedere l Amersham WB system User Manual Esperimento Western Western con normalizzazione delle proteine totali 118 Avviare lo strumento Impostare l esperimento nel software Eseguire pre etichettatura Avviare elettroforesi e scansione di gel Preparare il sandwich da trasferire Avviare trasferimento Eseguire sondaggio e asciugatura Effettuare la scansione Te o 3 Ma membrana e e visualizzare i risultati Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 1 Generalit La seguente tabella elenca le sezioni nelle quali sono descritte le fasi di lavoro Avviare lo strumento Vedere Sezione 5 2 Avviare l Amersham WB analyzer a pagina 120 Impostare un esperimen to col software Eseguire pre etichettatu ra Sezione 5 3 Impostare un esperimento col software a pa gina 122 Sezione 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei campioni a pagina
80. e preparare il sandwich da trasferire Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 77 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento Immagine del supporto di trasferimento chiuso L immagine sottostante mostra il supporto di trasferimento quando chiuso Immagine del supporto di trasferimento smontato L immagine sottostante mostra il supporto di trasferimento dopo lo smontaggio 3 4 5 La tabella sottostante descrive le diverse parti del supporto di trasferimento Parte Funzione Parte inferiore coperchio nero 1 Fissaggi 78 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento Funzione Perni guida per la scheda gel e la scheda PVDF Guide del rullo per i perni del rullo Parte superiore coperchio bianco Perni del rullo da inserire nelle guide del rullo per montare i coperchi Rullo Maniglia Fori per i fissaggi Amersham WB PVDF card Scheda Nella fase di trasferimento le proteine sono trasferite dal gel all area di blotting della scheda PVDF La scheda PVDF una membrana PVDF a bassa fluorescenza L immagine seguente mostra le diverse parti della scheda PVDF e la confezione sing
81. edure post elettroforesi e scansione delle schede di gel 5 6 3 Introduzione Procedure post elettroforesi e scansione delle schede di gel La presente sezione descrive come rimuovere la scheda di gel e pulire il gruppo Elpho amp scan al termine dell elettroforesi Rimuovere le schede di gel 142 AVVERTENZA Al termine dell elettroforesi o dopo il trasferimento quando il sandwich da trasferire stato aperto e la scheda PVDF stata posizionata nella camera di sondaggio smaltire il gel in modo si curo Leggere il foglio tecnico di sicurezza della scheda gel SDS MSDS per le istruzioni di sicurezza relative allo smaltimento del gel Nota Il ciclo di trasferimento deve essere avviato entro un ora dal completa mento dell elettroforesi Passo Operazione 1 Quando l elettroforesi pronta e la spia bianca che indica pronto accesa sul pannello strumenti premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato Il caricatore espulso 2 Aprire il coperchio di sigillatura usando il dispositivo di chiusura 3 Rimuovere la scheda di gel e collocarla capovolta sul banco 4 Procedere a Pulire il gruppo Elpho amp scan a pagina 143 Nota Si raccomanda di pulire il gruppo Elpho amp scan dopo ogni ciclo Tuttavia se il tempo non lo consente procedere al trasferimento e pulire il gruppo in un secondo momento nel corso dell esperimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento
82. eine possono essere pre etichettate con Cy5 e possono pertanto essere rilevate diret tamente nel gel dopo l elettroforesi Negli esperimenti Western i campioni di proteine non etichettate o pre etichettate Cy5 sono trasferiti su membrane e le proteine target possono essere rilevate tramite Cy3 e o anticorpi secondari coniugati Cy5 Il rilevamento basato sulla fluorescenza offre un elevata sensibilit e un ampia gamma dinamica consentendo analisi multiplex della stessa membrana Western blot Amersham WB system inteso unicamente a scopo di ricerca e non deve essere usato nelle procedure cliniche oppure a scopi diagnostici Presupposti Per far funzionare il sistema nel modo previsto necessario rispettare i seguenti prere quisiti e necessario avere una conoscenza generale del funzionamento del PC e di Micro soft Windows e Sirichiede la comprensione dei concetti di elettroforesi e di Western blot 8 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 1 Introduzione 1 2 Importanti informazioni d uso e lostrumentoe il software devono essere installati secondo le istruzioni descritte in Capitolo 4 Installazione a pagina 92 Suggerimento Per maggiori informazioni sui principi e i metodi Western blot e per una guida su come eseguire il Western blot con successo scaricare o ordinare il relativo manuale Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 da www gelifesciences com Avvisi di sicurezza
83. ell operatore Eliminare le bolle d aria nel modo seguente e Prendere il coperchio bianco e inserirlo nelle due sedi imma gine a sinistra e Afferrarele manigliette della carta di trasferimento con la mano sinistra e trascinare il rullo sulle guide del supporto verso il lato opposto del sup porto di trasferimento usando la mano destra Collocare la seconda spugna sulla carta di trasferimento Chiudere il supporto di trasferimen to premendo il coperchio finch i ganci di fissaggio scattano in posi zione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 161 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 3 Avviare trasferimento 5 7 3 Avviare trasferimento Introduzione La presente sezione descrive e come caricare il supporto di trasferimento nel serbatoio di trasferimento e come avviare e monitorare il trasferimento e le procedure da eseguire dopo il trasferimento Prima del trasferimento Verificare che tampone di trasferimento e acqua purissima siano stati collegati per il ciclo di trasferimento Per ulteriori informazioni vedere Collegare la tubazione al tampone di trasferimento e all acqua purissima sul cestello dei flaconi a pagina 146 162 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 3 Avviare trasferimento Caricare i sandwich da trasferire Passo Illustrazione de
84. elle miscele chimiche non sono stati presi in considerazione e Si presuppone la temperatura ambiente e una sovrappressione limitata Nota Gli influssi chimici dipendono dal tempo e dalla pressione Se non di chiarato diversamente tutte le concentrazioni sono al 100 Elenco delle sostanze chimiche Per un elenco dei prodotti chimici usati nelle schede gel e nelle strisce tampone vedere la Scheda Tecnica di Sicurezza SDS MSDS Uso Prodotto chimico Concentrazione CAS n e EC n General Tamponi acquosi pH 4 10 p es 0 0 2 M N D Tris Glicina Fosfato Trasferimento Etanolo 40 64 17 5 200 578 6 Metanolo 40 67 56 1 200 659 6 Trasferimento eson Cloruro di sodio 0 2 M 7647 14 5 231 598 3 daggio Cloruro di potassio 50 mM 7447 40 7 231 211 8 Tween 1 9005 64 5 500 018 3 Pulizia delle corsie di Idrossido di sodio 0 5 M 1310 73 2 215 185 5 flusso i l Ipoclorito di sodio 5 7681 52 9 231 668 3 Pulizia della piastra Etanolo 50 64 17 5 200 578 6 portascheda Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 221 7 Informazioni di riferimento 7 2 Guida alla resistenza chimica Prodotto chimico Concentrazione Pulizia delle superfici Etanolo 64 17 5 200 578 6 Detergenti delicati 222 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 7 Informazioni di riferimento 7 3 Modulo di dichiarazione di salute e sicurezza 7 3 Modulodi dichiarazione di
85. em Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 105 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Posizionare la tubazione di scarico e di troppo pieno ATTENZIONE La tubazione di scarico e di troppo pieno deve essere correttamente fissata per evitare il rischio che la tubazione fuoriesca dal conteni tore di smaltimento Posizionare la tubazione di scarico e di troppo pieno in modo tale che le uscite siano pi in basso del banco sul quale l Amersham WB analyzer collocato Tagliare la tubazione ad una lunghezza adeguata e fissarla per evitare il rischio che la tubazione fuoriesca dal contenitore di smaltimento 106 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Installare le guide di asciugatura membrana nello scomparto di asciugatura Passo Operazione 1 Aprire il sacchetto di plastica con le due guide di asciugatura membrana Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 107 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione 3 Inserire le guide di asciugatura membrana nelle due fessure 108 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Installare un lettore di tag della matrice opzionale Passo Operazione 1 Collegare il cavo USB al lettore di tag della matrice 2 Collegare il cavo USB al computer 3 Programmare e verific
86. encati i dati delle specifiche del sistema Amersham WB analyzer Condizioni ambientali Parametro Gamme delle temperature di stoccaggio Da 25 C a 60 C e trasporto Condizioni chimiche Vedere Sezione 7 2 Guida alla resistenza chimica a pagina 221 Gamma di funzionamento Parametro Limiti Gamma delle temperature di esercizio Da 15 C a 32 C Per il massimo delle prestazioni da 16 C a 28 C Umidit relativa Da 20 a 80 senza condensa Per il massimo delle prestazioni 20 70 senza condensa Altitudine Massimo 2000 m Grado di inquinamento 2 Livello transitorio Categoria sovratensione ll Ambiente Solo al chiuso 216 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Specifiche del sistema Amersham WB analyzer Parametro Configurazione del sistema 7 Informazioni di riferimento 7 1 Specifiche del sistema Sistema per banco da lavoro costituito da un computer esterno e da due gruppi Gruppo Elpho amp scan e gruppo Western Il computer non compreso nella fornitu ra Controllo del sistema operativo del com puter PC con Windows 7 Software di controllo Amersham WB software Connessione tra gruppo Elpho amp scan e gruppo Western Cavo Ethernet Connessione tra PC e gruppo Elpho amp scan Grado di inquinamento Cavo USB Tipo A o Tipo B 2 Livello sonoro Specifiche di sistema gruppo Elpho amp scan Parametro
87. enti per l uso del laser 12 Norme internazionali 11 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Indice Informazioni su come effettua re gli ordini Ordinare materiali di consu mo 62 Informazioni sulla produzio ne 10 Installazione Installare gli elettrodi di tra sferimento 99 Installare il lettore di tag della matrice 109 Installare le guide di asciuga tura membrana 107 Installazione del soft ware 110 Montare le torrette portatu bi 103 Requisiti del computer 95 Requisiti del locale 93 Requisiti di spazio 94 Interruttori di sicurezza 37 L Lettore di tag della matrice Descrizione 86 Installare il lettore di tag della matrice 109 M Manutenzione Accessori 203 Programma di manutenzio ne 190 Pulizia della corsia di flusso per il sondaggio 200 Pulizia della corsia di flusso per il trasferimento 199 Sostituire gli elettrodi di tra sferimento 209 Sostituire il filtro d ingres so 212 Sostituire il filtro dell aria 204 Sostituire il filtro del serbato io di trasferimento 211 Sostituire il fusibile di re te 212 Sostituire la testa della pompa di sondaggio o di trasferimento 206 221 Indice 228 Marchio CE 11 Modulo di dichiarazione di salu te e sicurezza 223 224 N Norme internazionali 11 Note e suggerimenti 9 O Ordinare materiali di consumo 62 p Panoramica della procedura di lavoro Generale 117 Pettine di carta Descrizione 75
88. enziati tra loro generando una diafonia minima vedere tabella seguente Lunghezza d onda eccitazio Lunghezza d onda di emissio ne ne Al termine dell eccitazione i segnali ad emissione fluorescente che ne risultano vengono catturati per mezzo dello scanner fluorescente multicanale del gruppo Elpho amp scan CyDye hanno un elevata fotostabilita Il segnale sulla membrana sondata stabile per gt 3 mesi se conservato nell oscurit Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 2 Anticorpi secondari sondaggio Preparazione e stoccaggio di anticorpi secondari ricostituiti Ricostituire gli anticorpi secondari in fiala da 150 pl di acqua purissima con una concen trazione di 1 ug ul Agitare e centrifugare gli anticorpi secondari ricostituiti Si consiglia di conservare gli anticorpi secondari in aliquote a 15 30 C proteggendoli dalla luce Evitare cicli di congelamento scongelamento ripetuti Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 83 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 3 Supporto di asciugatura Asciugatura scheda PVDF 3 7 3 Supporto di asciugatura Asciugatura scheda PVDF Introduzione Il Amersham WB drying holder supporto di asciugatura orienta e fissa la scheda PVDF nella corretta posizione per ottenere i
89. er ricerca e sviluppo interni ma non per scopi commerciali L eventuale licenza per poter usare i prodotti CyDye per scopi commerciali soggetta ad un accordo di licenza specifico con GE Healthcare Tutti gli altri marchi di fabbrica sono di propriet dei rispettivi possessori 2014 2015 General Electric Company Tutti i diritti riservati Prima pubblicazione Mar 2014 Tutte le merci e i servizi sono venduti in conformit ai termini e alle condizioni di vendita della societ all interno di GE Healthcare che li fornisce Una copia dei presenti termini e condizioni disponibile su richiesta Contattare il rappresen tante locale di GE Healthcare per accedere alle informazioni pi aggiornate GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 751 84 Uppsala Sweden GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Germany GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 USA GE Healthcare Japan Corporation Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Japan 29 0214 77 AE 03 2015 a24
90. erali TITOLO 21CFR Capitolo 1 Sottocapi dated July 24 2007 IEC EN 60825 1 2007 tolo J Parte 1040 10 Prodotti Laser Jan Feb _ Mar _ Apr May _ Jun _ Jul _ Aug _ Sep _ Oct _ Nov _ Dec _ L etichetta riporta anche il mese di fabbricazione Il simbolo visibile quando il caricatore Elpho amp scan aperto Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 31 2 Istruzioni di sicurezza 2 3 Procedure di emergenza 2 5 Procedure di emergenza Introduzione La presente sezione descrive come eseguire un arresto d emergenza dell Amersham WB analyzer e le conseguenze in caso di interruzione dell alimentazione Spegnimento in caso di emergenza In una situazione di emergenza scollegare i cavi d alimentazione di rete dai pannelli posteriori del gruppo Elpho amp scan e del gruppo Western Questo garantir l arresto immediato dell alimentazione anche se in uso un gruppo di continuit UPS 32 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 3 Procedure di emergenza Interruzione di corrente Le conseguenze in caso di interruzione dell alimentazione sono le seguenti Mancanza di alimenta si tradurr in zione a Amersham WB analyzer Tutti gli esperimenti in corso vengono arrestati Gli esperimenti in corso non verranno portati a termine una volta ristabilita la normale alimentazione Nota Un gruppo UPS pu aiutare ad e
91. erchio di sigillatura stato chiuso nel gruppo Elpho amp scan prima di applicare i campioni 4 Manigliette gel per facilitare la manipolazione del gel una volta che stato rimosso dal suo supporto per Western blot immunorivelazione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 71 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 2 Amersham WB gel card Descrizione Fori di guida per il corretto posizionamento delle schede di gel nel caricatore Elpho amp scan e nel supporto di trasferimento Etichetta con tag della matrice di dati numero di lotto e ID Immagine del lato inverso di una scheda gel L immagine sottostante mostra la scheda di gel con il lato inverso rivolto verso l alto Descrizione Pellicole protettive che vengono tolte prima dell elettroforesi per consentire il contatto tra il gel e le strisce tampone Pellicola protettiva che viene tolta quando si prepara il sandwich da trasferire solo in esperi menti Western 72 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 3 Amersham WB buffer strip e Amersham WB buffer strip holder 3 6 3 Amersham WB buffer strip e Amersham WB buffer strip holder Introduzione portastrisce tampone trattengono le strisce tampone in posizione durante il ciclo di elettroforesi
92. eriori informazioni sulla marcatura delle periferiche del computer consultare le istruzioni del costruttore Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 27 2 Istruzioni di sicurezza 2 2 Etichette Posizione delle etichette sull Amersham WB analyzer L ilustrazione seguente mostra l ubicazione delle etichette sul gruppo Elpho amp scan e sul gruppo Western 28 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 2 Etichette Descrizione Computer Western unit Etichetta prodotto gruppo Amersham WB elpho amp scan Etichetta di sicurezza relativa alla luce laser Etichetta prodotto gruppo Amersham WB western Elpho amp scan unit Only for service Etichetta gruppo Elpho amp scan L immagine seguente mostra un esempio di etichetta del prodotto applicata al gruppo Elpho amp scan L etichetta si trova sul pannello posteriore del gruppo strumento 29032030 Amersham WB elpho amp scan unit Code no 29009368 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 300 VA Fuse 2x T4AH 250 V X Lo cus NED CCA in 4001767 MPA VT GE Healthcare Bio Sciences AB Tse Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden Conforms to ANSI UL Std 61010 1 Cert to CAN CSA Std C22 2 No 61010 1 M Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 29 2 Istruzioni d
93. eve essere svuotata manualmente selezionando Empty Probing chamber nel menu Control Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 181 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio Passo Operazione 2 Inserire provette per soluzione anticorpi nuove nel vano anticorpi Nota Inserire sempre quattro provette vuote nuove 3 Pulire le tubazioni di sondaggio P Block P Wash e P Final Wash con un panno umido e spostare la tubazione nel flacone con acqua purissima contenente la tubazione P Water Nella finestra di dialogo del software controllare la quantit di acqua puris sima necessaria per la pulizia accertarsi che il flacone contenga perlomeno quella quantit d acqua 4 Fare clic su Start clean nella finestra di dialogo Probing completed clean probing system La pulizia iniziata e richieder circa 13 minuti Nota L asciugatura delle membrane pu essere iniziata mentre si pulisce la corsia di flusso per il sondaggio 5 Al termine della pulizia smaltire la soluzione del flacone d acqua e smaltire l acqua di scarto delle provette della soluzione anticorpi Mettere le tubazione in un flacone vuoto 182 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 4 Eseguire l asciugatura 5 8 4 Eseguire l asciugatura Introduzione Questa sezio
94. fasi di Western blot 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento Amersham WB sponge Quando si prepara il sandwich da trasferire si utilizzano due spugne Le spugne devono essere sostituite dopo ogni ciclo L immagine seguente mostra una spugna Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 81 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 2 Anticorpi secondari sondaggio 3 7 2 Anticorpi secondari sondaggio Introduzione Le proteine target sono identificate sondando la membrana con anticorpi primari e an ticorpi secondari coniugati specifici per specie CyDye Utilizzando due diverse specie di anticorpi primari topo e coniglio un anticorpo secondario coniugato Cy3 e un anticorpo secondario coniugato Cy5 possibile eseguire un esperimento multiplex per rilevare due proteine simultaneamente sulla stessa membrana Sono disponibili le seguenti varianti di anticorpi secondari coniugati CyDye e Amersham WB goat anti mouse Cy3 capra anti topo Cy3 e Amersham WB goat anti rabbit Cy3 capra anti coniglio Cy3 e Amersham WB goat anti mouse Cy5 capra anti topo Cy5 e Amersham WB goat anti rabbit Cy5 capra anti coniglio Cy5 CyDye coniugato ad anticorpi secondari 82 CyDye coniugati agli anticorpi secondari hanno una loro lunghezza d onda di eccitazione e di emissione specifica negli spettri della luce visibile e sono spettralmente differ
95. gi ne Afferrare gli angoli del telaio porta gel inferiore e allentare il telaio portagel tra gli angoli inferiori cos come indicato dalla linea tratteg giata e dalle frecce Nota Mentre si stacca il gel continuare a premere la scheda gel verso il banco con le dita Afferrare gli angoli del telaio porta gel superiore e allentare il telaio portagel come indicato dalla linea tratteggiata Accertarsi che il telaio portagel sia completamente sganciato dal tappo di gomma bianco indicato dalla freccia superiore arancione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 157 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Continuare ad allentare il telaio portagel con cautela dai bordi della scheda gel in direzione dell estremit inferiore finch il gel non si stacca completamente Nota Mentre si stacca il gel continuare a premere la scheda gel verso il banco con le dita Nota Fare attenzione a non toccare il gel Afferrare le manigliette del telaio portagel e sollevare con cautela il gel dal supporto del telaio 158 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Passo Illustrazione della fase Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferiment
96. heda gel in dettaglio Tipi di schede di gel Vi sono due tipi di schede di gel e Scheda gel omogenea Amersham WB gel card 14 13 5 e Scheda gel a gradiente Amersham WB gel card 14 8 18 Composizione del gel gel sono preconfezionati nell apposita cassetta gel sono in poliacrilammide bisacri lammide e contengono un tampone tris acetato Risoluzione della separazione delle proteine La tabella sottostante elenca la risoluzione della separazione delle proteine per i vari tipi di schede gel Tipo di scheda gel Risoluzione di separazione M x10 Amersham WB gel card 14 13 5 da 100225 Omogenea Amersham WB gel card 14 8 18 da6a 225 proteine pre etichettate A gradiente e da3 5a 225 esperimenti Western rileva mento di anticorpi 70 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 2 Amersham WB gel card Immagine del lato anteriore di una scheda di gel L immagine sottostante mostra la scheda di gel con il lato anteriore rivolto verso l alto S INNO Le Lot 12087504 7 6 Descrizione Superficie di scrittura per annotazioni personali Nota Usare sempre una matita per le annotazioni L annotazione pu essere inserita anche nel software Etichetta con il tipo di scheda gel 3 Copertura del pozzetto campione che deve essere rimosso quando il cop
97. i sicurezza 2 2 Etichette Etichetta gruppo Western L immagine seguente mostra un esempio di etichetta del prodotto applicata al gruppo Western L etichetta si trova sul pannello posteriore del gruppo strumento N 29032030 Amersham WB western unit Code no 28993466 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V Z Hoy c US NEMO CER ma 4001767 WEL YY GE Healthcare Bio Sciences AB G Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden Conforms to ANSI UL Std 61010 1 Cert to CAN CSA Std C22 2 No 61010 1 A Simboli di sicurezza usati sulle etichette del gruppo strumento seguenti simboli di sicurezza sono usati sulle etichette Rinomina Descrizione Attenzione Prima di utilizzare il sistema leggere la documentazione d uso Aprire i coperchi o sostituire i componenti solo se ci speci ficamente indicato nella documentazione d uso Il sistema rispetta le direttive europee applicabili Fare riferimento a Norme internazionali a pagina 11 Il sistema rispetta i requisiti applicabili per Australia e Nuova Zelan AN da Questo simbolo indica che l Amersham WB system stato certificato C q4 US da un Nationally Recognized Testing Laboratory NTRL Per NRTL si intende un organizzazione riconosciuta dall ente US Occupational Intertek Safety and Health Administration OSHA conforme ai requisiti legali della sezione 29 del Code of Feder
98. ibili con delle pinzette Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 167 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 4 Procedure al termine del trasferimento Pulire il supporto di trasferimento AVVERTENZA Al termine dell elettroforesi o dopo il trasferimento quando il sandwich da trasferire stato aperto e la scheda PVDF stata posizionata nella camera di sondaggio smaltire il gel in modo si curo Leggere il foglio tecnico di sicurezza della scheda gel SDS MSDS per le istruzioni di sicurezza relative allo smaltimento del gel Nota Eseguire questa operazione quando il sandwich da trasferire stato aperto e la scheda PVDF stata posizionata nella camera di sondaggio Passo Operazione 1 Togliere la scheda gel dal sandwich di trasferimento Smaltire il gel secondo le istruzioni SDS MSDS e rispettando le procedure in vigore a livello locale per la gestione dei rifiuti 2 Rimuovere e smaltire le spugne e carte per il trasferimento 5 Pulire le varie parti del supporto di trasferimento in acqua corrente 4 Lasciare asciugare all aria il supporto di trasferimento Continuare il sondaggio Procedere in uno dei seguenti modi e Se le soluzioni di sondaggio e anticorpi sono state preparate e collegate al gruppo Western procedere seguendo le istruzioni riportate in Sezione 5 8 2 Eseguire il son daggio a pagina 174 altrimenti e procedere seguendo le istru
99. io di trasferimento 2 Forare al centro del filtro usando delle pinzette Nota Non rimuovere il filtro tenendolo per i bordi per evitare di danneggiare la guarnizione filtro 3 Usare il foro per tenere e rimuovere il filtro 4 Inserire il filtro nuovo e spingerlo delicatamente sulla guarnizione filtro Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 211 212 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Sostituire i filtri d ingresso Sostituire il filtro d ingresso quando necessario per esempio quando i filtri si intasano Materiale richiesto serie di filtri d ingresso Seguire le istruzioni indicate di seguito per sostituire un filtro d ingresso ed una rete di supporto Passo Operazione l Togliere la rete di supporto ed il filtro d ingresso dall apposito portafiltro sosti Menti Montare la rete di supporto e il filtro d ingresso nuovi e premere il filtro in posizione nel relativo supporto Sostituire il fusibile di rete AVVERTENZA Staccare sempre l alimentazione di rete prima di sostituire il fusibile di rete Per mantenere una protezione continua contro il rischio d incendio sostituire unicamente con un fusibile del tipo e della classe specificati sulle etichette del gruppo strumento Passo Operazione 1 Togliere l alimentazione all Amersham WB analyzer portando i tasti dell ali mentazione di rete sui lati poster
100. ion B ID Note Electrophoresis Protocol Voltage limit 600 250 600 V Current limit 50 20 50 mA Pause for sample well cleanup after 5 minutes Stop electrophoresis on front detection Estimated time 42 minutes D Stop electrophoresis on time Gel Scanning Protocol N Scan gel automatically after electrophoresis Scanning sensitivity Automatic sensitivity O Manual sensitivity Nel passaggio della pro cedura di lavoro ELEC TROPHORESIS amp GEL SCANNING utilizzare le impostazioni di default per l elettroforesi e la scansione delle schede di gel come mostrato nella schermata Opzionale Selezionare Pause for sample well cleanup after 5 minutes se viene usato il pettine di carta Per ulteriori infor mazioni vedere Sezio ne 3 6 Accessori e mate riali di consumo per l elettroforesi a pagi na 67 Il tempo di pausa e calcolato in base alle impostazioni di tensione e corrente Il valore di default di 5 minuti Opzionale Inserire una nota sulle schede gel nei campi Note 140 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 2 Avviare l elettroforesi Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Start Ready for Electrophoresis Electrophoresis Elapsed time Electrophoresis in progress p prog 37 P Voltage Power Temp Gel A 50 mA Gel B 50 mA Curren
101. iori dei gruppi Elpho amp scan e Western in posizione di spegnimento 0 2 Staccare i cavi di alimentazione di rete dalle relative prese sui gruppi Elpho amp scan e Western 3 Individuare l estrattore di fusibili sul pannello dei connettori del gruppo inte ressato Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Passo Operazione 4 Inserire un piccolo cacciavite nell intaglio accanto all estrattore di fusibili 5 Ruotare il cacciavite per aprire l estrattore di fusibili 6 Sostituire i fusibili Per i dati relativi ai fusibili vedere le etichette dei gruppi strumento sui pan nelli posteriori 7 Inserire l estrattore di fusibili nella relativa sede sul pannello dei connettori Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 213 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 3 Spostamento dei gruppi strumento 6 2 3 Spostamento dei gruppi strumento Precauzioni ATTENZIONE Dispositivi di protezione individuale DPI Durante l imballaggio il disimballaggio il trasporto o lo spostamento del sistema indos sare e Scarpeantinfortunistiche preferibilmente con rivestimento in acciaio e Guanti da lavoro per proteggersi da bordi taglienti e Occhiali protettivi ATTENZIONE Oggetto pesante Sono necessarie due persone per sollevare gruppi dello strumento in modo sicuro
102. irca 20 se condi 7 Spostare la scheda PVDF nel recipiente del tampone di trasferimento scheda PVDF e equilibrarla per almeno 5 minuti Nota Durante tale periodo assicurarsi che la scheda PVDF sia ricoperta di tampone di trasferimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 153 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Iniziare a realizzare il sandwich da trasferire Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore e Posizionare il supporto di tra sferimento con il lato nero rivol to verso il basso e Aprire il supporto di trasferi mento premendo i ganci di fissaggio e sollevando il coper chio bianco e Premere sul coperchio finch i perni del rullo raggiungono le due sedi contrassegnati nell immagine con cerchi arancioni e Togliere il coperchio bianco sollevandolo dalle due sedi Mettere la prima spugna sul coper chio nero Bagnare preventivamente una carta di trasferimento nel tampo ne di trasferimento e collocarla sulla spugna sul coperchio nero La maniglietta della carta di tra sferimento deve essere posiziona ta tra i perni di guida 154 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Immagine d insieme dello smontaggio della scheda gel L immagine seguen
103. l migliore risultato di asciugatura possibile Immagine del supporto di asciugatura Le illustrazioni seguenti mostrano il supporto di asciugatura quando chiuso sopra e quando aperto sotto 84 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 4 Adattatore membrana Scansione scheda PVDF 3 7 4 Adattatore membrana Scansione scheda PVDF Introduzione Il Amersham WB membrane adapter adattatore membrana orienta e fissa la scheda PVDF nella corretta posizione per ottenere la migliore scansione e rilevamento possibili nell unit Elpho amp scan Immagine dell adattatore membrana Le illustrazioni seguenti mostrano l adattatore membrana quando chiuso a sinistra e quando aperto a destra Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 85 3 Descrizione del sistema 3 8 Altri accessori 3 8 Altri accessori Lettore di tag matrice Il lettore di tag della matrice viene usato per inserire informazioni della scheda gel e della scheda PVDF codice prodotto ID e numero di lotto nel software eseguendo la scansione dei tag della matrice dati sulla scheda gel e sull etichetta della confezione singola della scheda PVDF Deve essere ordinato a parte vedere Informazioni su come effettuare gli ordini in Amersham WB system User Manual L immagine seguente mostra il lettore di tag dell
104. la tabella seguente Parametro Intervallo ammesso Temperatura ambiente di esercizio Da 15 C a 32 C Per le migliori prestazioni da 16 C a 28 C Temperatura ambiente stoccaggio e Da 25 C a 60 C trasporto Umidit relativa di esercizio Da 20 a 80 senza condensa Per le migliori prestazioni 20 70 senza condensa Altitudine Massimo 2000 m Ambiente Solo al chiuso Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 93 4 Installazione 4 1 Preparazione della sede Requisiti di spazio AVVERTENZA Non bloccare l accesso all interruttore di alimentazione e al cavo di alimentazione L interruttore di alimentazione deve essere sempre facilmente accessibile Il cavo di alimentazione e la presa devono essere sempre facili da scollegare gruppi strumento devono essere sistemati su un banco da laboratorio Il banco deve essere pulito in piano livellato stabile e in grado di sostenere il peso dell Amersham WB system gruppi strumento 45 kg pi il peso del laptop e dei liquidi presenti nel gruppo Western Per i requisiti di spazio vedere di seguito Lasciare almeno 10 cm di spazio libero dietro i gruppi strumento per la ventilazione Lo spazio necessario per i due gruppi di 90 cm Tuttavia consigliabile un banco da 140 cm per consentire lo spazio necessario per la preparazione del reagente il maneggio delle schede di gel ecc Requisiti di alimentazione Vedere
105. la torretta della tubazione di sinistra mettere la tubazione contrassegnata T Buffer in un flacone da 1000 ml con tampone di trasferimento 2 Mettere la tubazione contrassegnata T Water in un flacone da 1000 ml con acqua purissima 146 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Materiali richiesti Quando si prepara il sandwich da trasferire sono necessari i seguenti accessori e mate riali di consumo 1 supporto di trasferimento 1 scheda gel gi utilizzata 1 Scheda PVDF 2 spugne 2 carte di trasferimento 1 recipiente con tampone di trasferimento per la bagnatura delle carte di trasferi mento 1 recipiente con almeno il 96 di etanolo per la pre bagnatura della scheda PVDF 1 recipiente con il tampone di trasferimento per l equilibrazione della scheda PVDF Nota Alcuni tipi di etanolo hanno propriet autofluorescenti che determinano un elevato background della membrana Assicurarsi che l etanolo usato per il trasferimento non sia autofluorescente Precauzioni AVVERTENZA Indossare sempre i guanti indumenti e occhiali protettivi quando si maneggiano schede di gel schede PVDF e altri materiali di con sumo forniti con Amersham WB system Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 147 5 Esecuzione di un esperimento
106. le dei normali ambienti di laboratorio riguardo alla concentrazione di polveri nell aria Vedere Sostituire il filtro dell aria a pagi na 204 Sostituire la testa della pompa di trasfe rimento Vedere Sostituire la testa della pompa di sondaggio o di trasferimento a pagi na 206 Sostituire la testa della pompa di son daggio Vedere Sostituire la testa della pompa di sondaggio o di trasferimento a pagi na 206 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Intervallo Secondo necessit Intervento di manutenzione 6 Manutenzione 6 1 Programma di manutenzione Istruzioni Pulire lo scomparto di asciugatura Pulire lo scomparto di asciugatura da polvere o particelle usando un panno senza sfilacciature inumidito in acqua purissima Lasciare che lo scomparto si asciughi prima di usarlo Sostituire gli elettrodi di trasferimento Vedere Sostituire gli elettrodi di trasferi mento a pagina 209 Sostituire i portastrisce tampone Vedere Amersham WB system User Manual per le informazioni sugli ordini Sostituire il fusibile di rete Vedere Sostituire il fusibile di rete a pa gina 212 Sostituire il cavo di alimentazione dan neggiato Sostituire il filtro del serbatoio di trasfe rimento Vedere Precauzioni all inizio di questo capitolo Controllare il filtro e se sporco o danneg giato sostituirlo Vedere Sostituire il filtro del serbatoio di trasferi
107. liminare il pericolo di perdita dei dati in caso di interruzione dell alimentazio ne elettrica consentendo lo spegnimento controllato dell Amersham WB analyzer L orario dell arresto viene registrato nel software dei gruppi strumento Computer Il computer collegato al gruppo Elpho amp scan si spe gne Tutti gli esperimenti in corso vengono proseguiti e portati a termine dato che lo strumento ancora ali mentato Quando il computer viene riavviato e il contatto rista bilito i risultati dell esperimento verranno memorizzati Se possibile le immagini verranno scansionate Riavvio dopo uno spegnimento d emergenza o un interruzione di alimentazione dello strumento Al ripristino della corrente nessuno degli esperimenti in corso al momento dell arresto d emergenza potr essere continuato Procedere nel modo seguente Passo Operazione 1 Se i cavi di alimentazione di rete sono stati scollegati collegarli ai pannelli posteriori dei gruppi strumento Assicurarsi che gli interruttori di alimentazione di rete sui pannelli posteriori dei gruppi strumento siano attivati I Risultato gruppi strumento vengono avviati Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 33 2 Istruzioni di sicurezza 2 3 Procedure di emergenza Passo Operazione 2 Avviare il computer e il software vedere Avviare il software a pagina 122 Quando i gruppi strumento sono collegati l evento viene memorizzato nel
108. lla fase Azioni dell operatore Aprire il coperchio del serbatoio di trasferi mento Inserire i supporti di trasferimento nel serba toio Assicurarsi che la freccia bianca sia rivol ta verso la freccia sullo strumento verso di s Chiudere il coperchio del serbatoio di trasfe rimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 163 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 3 Avviare trasferimento Avviare e monitorare il trasferimento ATTENZIONE Pericolo di scossa elettrica Arrestare sempre un ciclo di trasferi mento in corso prima di pulire il liquido dallo strumento o dal banco Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Nella schermata principale del software fare la clic sulla fase di lavoro TRANSFER TRANSFER Gel Cords amp Membranes Utilizzare le impostazioni di default per il ae Transfer Protocol come mostrato nella Membrane 7 Position A J Position B i i ID Enter ID Enter ID E Note Write note Write note Gel card ID Note gt 4 IF Transfer Protocol Duration 30 15 180 minutes Ort Voltage limit 100 10 100V Default Solutions amp Volumes Transfer buffer Cleaning Description Tris Glycine 20 Ethanol Water Total volume 1000 ml 1000 mi 164 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseg
109. ltro ruotando il dado in senso antiorario e toglierlo 204 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Passo Operazione 3 Togliere il filtro dal telaio tirandolo verso l alto e usando il supporto fissato 4 Togliere la parte superiore della griglia di plastica sul supporto dove allog giato il filtro 5 Sostituire il filtro con uno nuovo e fissare la parte superiore sulla griglia di plastica 6 Inserire il Supporto con filtro nuovo nelle guide del telaio Ti Rimettere il coperchio sullo scomparto filtro e stringere il dado ruotandolo in senso orario 8 Chiudere il coperchio del vano di servizio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 205 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Sostituire la testa della pompa di sondaggio o di trasferimento Le seguenti istruzioni descrivono come sostituire una testa di pompa usando come esempio una pompa di sondaggio La sostituzione di una testa di pompa di trasferimento simile Passo Operazione 1 Aprire il coperchio del vano di servizio per accedere alle pompe di trasferi mento e sondaggio Nota La pompa di sondaggio posizionata a sinistra e la pompa di trasferimento a destra 2 Scollegare la tubazione pompa a sinistra 206 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214
110. lu si riferiscono ai componenti dello strumento 5 T WASTE T BUFFER T WATER 56 La tabella sottostante descrive i componenti del diagramma di flusso Descrizione 1 Blocco valvola di trasferimento Per scegliere quale soluzione si deve pompare attraverso la corsia di flusso di liquido Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 3 Corsie di flusso del liquido Descrizione Serbatoio di trasferimento Pompa di trasferimento Per pompare la soluzione attraverso la corsia di flusso di liquido Gruppo di raffreddamento per trasferimento Per raffreddare il tampone di trasferimento e mantenerlo a temperatura ambiente Troppo pieno serbatoio di trasferimento Principio di base del processo di trasferimento Durante il trasferimento avviene un trasferimento elettroforetico delle proteine separate nel gel sulla membrana Il principio di base del processo di trasferimento descritto di seguito Fase Descrizione 1 Una volta che l Amersham WB transfer holder s supporto di trasferimento stato caricato nel serbatoio di trasferimento quest ultimo viene riempito con il tampone di trasferimento la provetta contrassegnata con T Buffer 2 In fase di trasferimento il tampone di trasferimento viene pompato attraver so il serbatoio di trasferimento il gruppo di raffreddamento per trasferimento la pompa di trasferimento e il bl
111. ma indos sare e Scarpe antinfortunistiche preferibilmente con rivestimento in acciaio e Guanti da lavoro per proteggersi da bordi taglienti e Occhiali protettivi ATTENZIONE Oggetto pesante Sono necessarie due persone per sollevare gruppi dello strumento in modo sicuro 96 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione i Sollevare manualmente gruppi strumento servendosi degli appositi spazi vuoti previsti accanto ad essi Assicurarsi che i gruppi siano collocati su un banco in piano e stabile i Sollevare il primo gruppo strumento Usare l appiglio sotto e accanto allo strumento nelle cavit del polistirolo Procedere al posizionamento sul banco da laboratorio 3 Sollevare l altro gruppo strumento e collocarlo sul banco da laboratorio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 97 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione 4 Per consentire una ventilazione adeguata il gruppo Eloho amp scan deve essere posizionato a sinistra e il gruppo Western a destra Lasciare almeno 10 cm di spazio libero dietro i gruppi strumento per la ventilazione Non bloccare l accesso all interruttore di alimentazione e al cavo di alimen tazione 5 Regolare i piedini per livellare i gruppi in posizione orizzontale Questa ope razione particolarmente importante per il gruppo Western
112. mativi in campo elettrico a livello locale in vigore e approvato da GE AVVERTENZA Staccare sempre l alimentazione di rete prima di sostituire il fusibile di rete Per mantenere una protezione continua contro il rischio d incendio sostituire unicamente con un fusibile del tipo e della classe specificati sulle etichette del gruppo strumento ATTENZIONE Adottare tutte le misure protettive del caso durante l impiego di sostanze chimiche pericolose indossando ad esempio guanti e occhiali di protezione resistenti a tali sostanze Seguire le istruzioni e le normative locali in merito al funzionamento e alla manutenzio ne del sistema in condizioni di sicurezza Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 25 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza Assistenza AVVERTENZA Decontaminare l apparecchiatura prima dell intervento di assistenza per essere sicuri che i residui pericolosi vengano eliminati Smantellamento AVVERTENZA Prima dello smantellamento finale decontaminare l apparecchia tura per essere sicuri che tutti i residui pericolosi vengano eliminati 26 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 2 Etichette 2 2 Etichette Introduzione Questa sezione descrive le etichette di sicurezza e quelle relative alle sostanze pericolose che sono state applicate all Amersham WB analyzer Per ult
113. mbrana La presente sezione descrive e prerequisiti per la pre etichettatura e materiali richiesti per la pre etichettatura e preparativi prima di cominciare la pre etichettatura e etichettatura di campioni protocollo di pre etichettatura In questo esempio viene eseguita la pre etichettatura di campioni di lisi di cellule tessuti da utilizzare in un esperimento Western with total protein normalization Per ulteriori informazioni sulla pre etichettatura vedere Amersham WB system User Manual AVVERTENZA Quando si lavora con la pre etichettatura di campioni di proteine e Indossare sempre guanti indumenti e occhiali protettivi e Leggere la Scheda Tecnica di Sicurezza SDS MSDS prima di eseguire la pre etichettatura di campioni ATTENZIONE Una volta eseguita la pre etichettatura di proteine in campioni si pu sprigionare un forte odore dalle tracce di solfuro di dimetile DMS e di dimetilsolfossido DMSO Pu rendersi necessaria un aerazione locale Seguire le istruzioni e le normative locali per un funzionamento sicuro Nota Per ottenere efficienze di etichettatura comparabili Importanti para metri come pH volume di reazione temperatura e sali tampone devono rimanere invariati Le efficienze di etichettatura variano anche da proteina a proteina Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei campioni
114. mento a pagina 211 Sostituire i filtri d ingresso Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Vedere Sostituire i filtri d ingresso a pa gina 212 197 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione Introduzione La presente sezione descrive la Manutenzione che si deve eseguire sull Amersham WB analyzer In questa sezione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il 199 sondaggio 6 2 2 Procedure di sostituzione 203 6 2 3 Spostamento dei gruppi strumento 214 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferi mento e il sondaggio Introduzione Eseguire la pulizia di manutenzione delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio ogni settimana oppure se il gruppo non viene usato per un paio di giorni Pulizia di manutenzione della corsia di flusso per il trasferimento La procedura richiede circa 25 minuti Il sondaggio e l asciugatura possono essere ese guiti parallelamente Nota Verificare che non ci siano supporti di trasferimento lasciati nel serba toio AVVERTENZA Quando si utilizzano sostanze
115. mmagine seguente mostra i pannelli strumento sui due gruppi con i nomi degli scomparti illuminati ELPHO amp SCAN E TRANSFER E PROBING E DRYING 38 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 1 Descrizione generale dello strumento Indicatori dello strumento La tabella seguente descrive i diversi indicatori Gli indicatori Pronto ciclo terminato Ciclo e Errore o avvertenza sono identici per tutti gli scomparti dei gruppi strumento In questo esempio vengono descritti gli indicatori TRANSFER Indicatori di stato Descrizione TRANSFER Avvio Il testo illuminato quando il gruppo si sta avviando ed eseguendo i test interni TRANSFER Pronto ciclo termi La spia si accende quando nato e il gruppo scomparto pronto per un nuovo esperimento una fase cio elettroforesi scansio ne trasferimento sondaggio o asciugatura stata completata TRANSFER Messa in funzione La luce accesa e quando il gruppo scomparto in funzione e durante la pulizia delle corsie di flusso per il trasferimento o il son daggio Nota Durante il funzionamento non aprire illi relativo i coperchioli Per esempio aprire il coperchio del trasferimento du rante tale operazione comporta l arresto del ciclo di trasferimento con possibili ripercussioni sul risultato TRANSFER Errore o La luce accesa quando si verificato avvertenza un errore Vedere
116. mmagine seguente mostra lo scomparto di sondaggio del gruppo Western 1 2 gt 4 5 Descrizione i Camera di sondaggio 2 Coperchio camera di sondaggio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 51 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 2 Scomparti del gruppo Western Descrizione Indicatore di posizione A e posizione B Perni di guida per la scheda PVDF contrassegnata da cerchi arancioni Coperchio scomparto di sondaggio Sportello coperchio scomparto di sondaggio Immagine dello scomparto di asciugatura L immagine seguente mostra lo scomparto di asciugatura del gruppo Western 2 zam EE Descrizione Guide di asciugatura membrana Indicatore di ubicazione della posizione A e della posizione B 52 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 2 Scomparti del gruppo Western Immagine del vano anticorpi L immagine seguente mostra il vano anticorpi in cui vengono inserite provette di soluzione anticorpi da 15 ml con anticorpi primari e secondari prima del sondaggio lato sinistro Per ulteriori informazioni vedere Collegare le provette della soluzione anticorpi a pagi na 171 Il lato destro del vano utilizzato per lo stoccaggio degli Amersham WB membrane adapters adattatori membrane Descrizione Supporto tubo Tubazione Serratura sportello magnetica Adatta
117. mo Amersham WB buffer strip Amersham WB buffer strip holder Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB paper comb se viene eseguita la pulizia del pozzetto campioni Amersham WB loading buffer vedere Sezione 3 5 Materiali di consumo per la pre etichettatura a pagina 65 per le informazioni relative al tampone di caricamento In questa sezione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 68 3 6 2 Amersham WB gel card 70 3 6 3 Amersham WB buffer strip e Amersham WB buffer strip holder 73 3 6 4 Amersham WB paper comb 75 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 67 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Introduzione Contenuto Immagine dei marker MW 68 Amersham WB Gli molecular weight markers sono una miscela di nove proteine native e ricombinanti M da 10 000 a 225 000 etichettate sia con Cy3 che con Cy5 per stabilire il peso molecolare delle proteine su schede di gel e schede PVDF scansionate Il software calcola le curve di calibrazione del peso molecolare Quando si utilizzano due curve di calibrazione del peso molecolare i dati interpolati delle curve sono usati per creare curve di calibrazione specifiche per le corsie campione Quindi vengono calcolati
118. nalisi Western blotting delle proteine in base al rilevamento a fluorescenza Elettroforesi scansione trasferimento e sondaggio automatizzato sono tutte operazioni eseguite dal medesimo sistema reagenti usati per la pre etichettatura e il rilevamento di anticorpi cos come i materiali di consumo come il gel e la membrana sono tutti presenti Il Amersham WB system comprende lo strumento l Amersham WB analyzer il Amersham WB software software cos come gli accessori e i materiali di consumo L Amersham WB analyzer comprende due unit l unit Amersham WB elpho amp scan e l unit Amersham WB western Il sistema supporta molte applicazioni dall esame rapido della composizione di proteine o abbondanza alle analisi quantitative avanzate per le comparazioni dei livelli di proteine tra campioni Le proteine possono essere pre etichettate con il reagente colorante Amersham WB Cy 5 e possono perci essere rilevate direttamente nel gel dopo l elet troforesi Negli esperimenti Western i campioni di proteine non etichettate o pre etichet tate Cy5 sono trasferiti alle membrane e le proteine target possono essere rilevate tra mite anticorpi secondari coniugati Cy3 e o Cy5 Il rilevamento basato sulla fluorescenza offre un elevata sensibilit e un ampia gamma dinamica consentendo analisi multiplex della stessa membrana Western blot L analisi multiplex di proteine totali pre etichettate con Cy5 e target rilevate con anticorpi secondari Cy
119. ne 6 2 2 Procedure di sostituzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Introduzione Questa sezione descrive come sostituire e filtro dell aria e teste delle pompe di trasferimento e sondaggio e elettrodi di trasferimento e filtro del serbatoio di trasferimento e filtri d ingresso e fusibile di rete Accessori di manutenzione Per la manutenzione dell Amersham WB analyzer sono richiesti i seguenti accessori e testa della pompa per pompa di trasferimento o pompa di sondaggio e filtro dell aria e filtro del serbatoio di trasferimento e elettrodi di trasferimento e serie di filtri d ingresso e fusibile per l uso corretto vedere Sezione 7 1 Specifiche del sistema a pagina 216 Precauzioni AVVERTENZA Scollegare l alimentazione Scollegare sempre l alimentazione del gruppo strumento prima di sostituire un suo componente fatto salvo ove altrimenti specificato nella documentazione d uso AVVERTENZA Rimuovere eventuali flaconi dal relativo cestello prima di aprire il coperchio del vano di servizio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 203 6 Manutenzione 6 2 Istruzioni per la manutenzione 6 2 2 Procedure di sostituzione Sostituire il filtro dell aria Le seguenti istruzioni descrivono come sostituire il filtro dell aria Passo Operazione 1 Aprire il coperchio del vano di servizio gt 2 Aprire il coperchio sopra lo scomparto dove alloggiato il fi
120. ne descrive come eseguire l asciugatura delle schede PDVF Asciugare la scheda PVDF consente di ottenere un sottofondo uniforme e basso e segnali pi forti Eseguire l asciugatura Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Assicurarsi che i supporti di asciugatura con la schedale PVDF sia stata inserita nello scomparto di asciugatura nella posizione corretta cio scheda PVDF in posizione di sondaggio A per posizione di asciugatura A Nella fase di lavoro PROBING amp DRYING del Yf software fare clic su Start nell area Drying PROBING amp DRYING Drying Remaining time Start Ready for Drying 10 mi min Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 183 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 4 Eseguire l asciugatura Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Una volta completata l asciugatura e Aprire il coperchio dello scomparto di asciugatura e Togliere illi supportoli di asciugatura e La scheda PVDF ora pronta per la scansione Effettuare la Sezione 5 9 Effet tuare la scansione della membrana e ve dere i risultati a pagina 185 Nota Se le membrane non sono completamente asciutte fare clic su Start nell area Drying per eseguire un nuovo ciclo di asciugatura 184 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 9 Effettuare la scan
121. neggiano schede di gel schede PVDF e altri materiali di con sumo forniti con Amersham WB system AVVERTENZA Quando si lavora con la pre etichettatura di campioni di proteine e Indossare sempre guanti indumenti e occhiali protettivi e Leggere la Scheda Tecnica di Sicurezza SDS MSDS prima di eseguire la pre etichettatura di campioni AVVERTENZA Amersham WB analyzer un prodotto di Classe A In un ambiente domestico questo prodotto potrebbe provocare interferenze radio nel qual caso l utente deve intraprendere le misure necessarie ATTENZIONE Sostanze pericolose Quando si usano sostanze biologiche e chi miche pericolose adottare tutte le misure protettive adeguate per es indossando guanti e occhiali di protezione resistenti a tali so stanze Rispettare le normative nazionali e o locali relative alla si curezza di utilizzo manutenzione e dismissione del sistema ATTENZIONE Una volta eseguita la pre etichettatura di proteine in campioni si pu sprigionare un forte odore dalle tracce di solfuro di dimetile DMS e di dimetilsolfossido DMSO Pu rendersi necessaria un aerazione locale Seguire le istruzioni e le normative locali per un funzionamento sicuro 20 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza ATTENZIONE Indossare sempre i guanti indumenti e occhiali protettivi durante l uso e la manu
122. nel ciclo di sondaggio nel modo seguente Passo Operazione 1 Dalla torretta della tubazione centrale collocare la tubazione contrassegnata con e P Water in un flacone da 1000 ml con acqua purissima e P Block in un flacone da 100 ml con soluzione bloccante 2 Dalla torretta della tubazione di estra mettere la tubazione contrassegnata con e P Wash in un flacone da 1 000 ml con soluzione di lavaggio PBS T e P Final Wash in un flacone da 500 ml con soluzione di lavaggio finale PBS 3 Prima di iniziare il sondaggio collegare le provette della soluzione anticorpi nel relativo vano per informazioni vedere sotto Collegare le provette della soluzione anticorpi Nota Le soluzioni anticorpi devono essere preparate e collegate a ridosso dell inizio del sondaggio Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 171 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi Passo Operazione 1 Aprire il vano anticorpi sul gruppo Western premendo il simbolo di espulsione sul coperchio del vano anticorpi 172 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Passo Operazione 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi 2 Inserire ciascuna provetta con soluzione anticorpi nella posizione corrispon dente collocando la
123. nel rapporto 1 20 in tampone di caricamento prima del caricamento sulla scheda gel Prima dell uso iltampone di caricamento fornito deve essere diluito in acqua purissima e contenere un aggiunta di DTT Passo Operazione 1 Aggiungere 29 ul di soluzione stock 1 M DTT a 0 7 ml una fiala di tampone di caricamento Agitare per miscelare 2 Diluire il tampone di caricamento che contiene DTT con un pari quantit di acqua purissima Agitare per miscelare 3 Diluire i marcatori del peso molecolare nel rapporto 1 20 con il tampone di caricamento preparato Nota I marcatori del peso molecolare possono essere ulteriormente diluiti nel tampone di caricamento preparato per far corrispondere i campioni con segnali deboli Tuttavia necessario selezionare l opzione Stop electrophoresis on time Esperimenti di elettroforesi Negli esperimenti di elettroforesi generalmente non necessaria la diluizione di Amersham WB molecular weight markers Se necessario diluire i marcatori del peso molecolare con tampone di caricamento contenente DTT diluito con un pari quantit di acqua purissima 130 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 5 Preparazione di Amersham WB molecular weight markers Replicati Si consiglia di includere due piste di marcatore nel ciclo cos da ottenere i migliori risul tati possibili nella calibrazione automatica del peso molecolare di proteine campione
124. nerale del software a Easy SDS PAGE pagina 88 Hamper af pel carde e Scegliere il numero di WW schede gel per l esperi EXPERIMENT mento amp SAMPLES asti 68 Sela ia e Scegliere il tipo di scheda Gel card 14 8 18 gel Vedere Risoluzione della separazione delle proteine a pagina 70 per le informazioni sugli inter valli di separazione delle proteine Risultato La tabella Gel card A e le opzioni nell area Anti bodies for Membrane A sono attivate Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 123 5 Esecuzione di un esperimento 5 3 Impostare un esperimento col software Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Inserire le informazioni del Sree eii campione ei commenti nella Typ Suen BI Agron aye Cinnet 1 fina E lt r tabella Gel card A opziona 3 merch WE MW Martens W Sarit ai le Mina Vedere Sezione 3 6 1 C i Sampie J Amersham WB molecular fergie x Erama a J weight markers a pagina 68 6 Sarees a ae S per le informazioni sui mar 5 fai cd Bs B ker MW ed il calcolo automa Sample af di tico della curva di calibrazio 14 Sample a A SSS ne del peso molecolare 16 Blank peng Suggerimento Durante l elettroforesi la ta bella dei campioni accessi bile Pertanto possibile compilare la tabella durante la fase di elettroforesi dopo aver avviato il ciclo se si ha fretta di avviarne un
125. ni software per poter espellere il caricatore Piedini regolabili 4 piedini un piedino ad ogni angolo Immagine del pannello posteriore del gruppo Elpho amp scan L illustrazione seguente mostra i componenti principali del pannello posteriore del gruppo Elpho amp scan I i ta i J PA Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 41 3 Descrizione del sistema 3 2 Gruppo Elpho amp scan Descrizione Connettore cavo USB USB tipo B Per collegare il gruppo Elpho amp scan a un computer Connessione di comunicazione del gruppo Western usare cavo ethernet Ingresso aria Interruttore di alimentazione ON l OFF 0 Estrattore fusibili 5x20 mm Connettore cavo di alimentazione 60320 C14 Feritoie di ventilazione Caricatore Elpho amp scan Il caricatore Elpho amp scan usato per caricare e e schede di gel per elettroforesi e scansione e le schede PVDF per le scansioni Quando si caricano schede PVDF per la scansione bisogna prima posizionare un Amersham WB membrane adapter sulla piastra della scheda per ulteriori informazioni vedere Sezione 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati a pagina 185 Il caricatore espulso dal gruppo Elpho amp scan premendo il tasto di espulsione sul pan nello anteriore 42 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 2 Grup
126. o 124 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 3 Impostare un esperimento col software Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore a i Inserire il nome descrizione O Primary ab against target Enter description del Primary ab against tar Labeled secondary ab Select Labeled secondayab get opzionale e selezionare Goat anti mouse Cy 3 l appropriato Labeled secon Goat anti rabbit Cy 3 dary ab nella scheda opzio ne Gel card A In questo protocollo per la pre etichettatura stato usato il Cy5 Scegliere un an ticorpo secondario coniugato a Cy3 Ripetere le operazioni 3 4 per la scheda gel B se compresa nell esperimento Suggerimento possibile stampare il proto collo e utilizzarlo congiunta mente alla preparazione e alla pre etichettatura di campioni Per stampare il protocollo fare clic sull icona e a l a destra delle schede di opzione della scheda gel o premere Ctrl P Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 125 5 Esecuzione di un esperimento 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei campioni 5 4 Eseguire la pre etichettatura dei campioni Introduzione Precauzioni 126 Quando si eseguono esperimenti di elettroforesi richiesta la pre etichettatura dei campioni per il rilevamento E richiesta anche negli esperimenti Western quando si rile vano le proteine totali su una me
127. o 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Azioni dell operatore Mettere il telaio portagel sulla carta di trasferimento facendo in serire i fori di guida nei perni guida e applicando il gel sulla carta di trasferimento 159 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Applicare la scheda PVDF e terminare l assemblaggio del sandwich da trasferire Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Stringere entrambe le manigliette della scheda PVDF conle dita op pure servirsi di pinzette a punta piatta Togliere la scheda dal vas soio del tampone di trasferimento Nota Non toccare la zona di blotting della scheda PVDF contrassegnata con un riquadro rosso in figura Mettere la scheda PVDF sulla scheda gel facendo inserire i fori di guida della scheda PVDF nei perni guida e applicando la sche da PVDF al gel Nota Una volta messa sulla scheda gel non regolare piu la posizione della scheda PVDF Bagnare preventivamente una carta di trasferimento nel tampo ne di trasferimento e collocarla sulla scheda PVDF la maniglietta della carta di trasferimento deve essere posizionata tra i perni di guida 160 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Passo Illustrazione della fase Azioni d
128. o etichettatura Amersham WB labeling buffer Tampone tris base contenen Campione da etichettare te SDS con pH 8 7 a 25 C Quantit 5 fiale cappucci neri 0 7 ml di soluzione tampone di etichettatura per fiala sufficienti per due schede di gel Amersham WB loading buffer 50 MM Tri Cl 0 25 w v Tampone di caricamento Arancione G 4 SDS 0 5 mM di lisina Materiale di consumo per la preparazione di campioni 5 fiale cappucci arancione 0 7 ml di soluzione tampone di caricamento per fiala sufficienti per due schede di gel La tabella seguente descrive il Amersham WB MiniTrap kit Materiale di consumo perla pre Funzione parazione di campioni Amersham WB MiniTrap kit Il kit studiato per la pulizia rapida e comoda dei campio ni di proteine gt 5000 M_ che contengono sostanze interfe renti p es l imidazolo Quantit 30 colonne PD MiniTrap G 25 preconfezionate monouso contenenti il mezzo di coltura Sephadex G 25 1 flacone di 10x Amersham WB labeling buffer 14 ml di soluzione stock Supporto colonna integrato vassoio di smaltimento e sup porto del tubo 66 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi 3 6 Accessori e materiali di consumo per l elettroforesi Introduzione Per l elettroforesi delle proteine sono necessari i seguenti accessori e materiali di consu
129. o utente per eseguire l elettroforesi ed esperimen ti Western descrizione del software link all Amersham WB system User Manual per informazioni dettagliate sulla gestione dello strumento degli accessori e dei materiali di consumo Manuale di metodo Il manuale Western Blotting Principles and Methods offre indicazioni per l intera proce dura di Western blot Descrive aspetti teorici e pratici della tecnica offrendo utili consigli e suggerimenti L obiettivo del Manuale quello di guidare ed ispirare sia i principianti che gli esperti verso una corretta procedura Western blot Scaricare o ordinare il manuale Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 da www gelifesciences com Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 15 1 Introduzione 1 4 Amersham WB Documentazione system File di dati e note applicative file di dati e le note applicative possono essere ordinati o scaricati da www gelifesciences com 16 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 struzioni di sicurezza Informazioni sul capitolo Questo capitolo descrive le misure di sicurezza e le procedure di arresto d emergenza dell Amersham WB system Anche le etichette sugli strumenti e le informazioni relative al riciclaggio sono descritte In questo capitolo Il presente capitolo contiene le seguenti sezioni Sezione Vedere pagina 2 1 Precauzioni di sicurez
130. occo valvola di trasferimento per far circo lare iltampone di trasferimento nel corso del ciclo Il gruppo di raffreddamento per il trasferimento fa in modo che il tampone di trasferimento venga tenuto a temperatura ambiente nel corso del ciclo 3 Al termine del ciclo e dopo aver rimosso i supporti di trasferimento si utilizza acqua purissima per pulire la corsia del flusso di liquido viene utilizzata la provetta contrassegnata con T Water Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 57 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 3 Corsie di flusso del liquido Immagine della corsia del flusso di liquido di sondaggio 58 L immagine seguente mostra un diagramma di flusso dettagliato del processo di son daggio Il diagramma di flusso mostra le interconnessioni tra i componenti dello strumen to Le etichette bianche si riferiscono a quelle delle tubazioni numeri blu si riferiscono ai componenti dello strumento P WASTE P CUSTOM P WASTE P FINAL uu P WATER P WASH WasH J P BLOCK uu Descrizione 1 Vano anticorpi con le provette della soluzione anticorpi contenente anti corpi primari e anticorpi secondari per le posizioni A e B 2 Blocco valvola di sondaggio Usato per selezionare la soluzione da pompare attraverso la corsia di flusso 3 Pompa per sondaggio Per pompare la soluzione attraverso la corsia di flusso di liquido Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 02
131. ola della scheda PDVF Amersham W PVDF card le ae reer Lot n SONIM Identity mo 0000001 prod A TIE he Se est E dala pb La tabella seguente descrive le diverse parti della scheda PVDF e la confezione singola della scheda PDVF Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 79 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le fasi di Western blot 3 7 1 Accessori e materiali di consumo per trasferimento Descrizione Fori di guida Nota I fori guida servono al corretto posizionamento della scheda nel supporto di trasferimento della camera di sondaggio del supporto di asciugatura e del caricatore Elpho amp scan Superficie di scrittura per annotazioni personali Nota Usare sempre una matita per le annotazioni L annotazione pu essere inserita anche nel software Manigliette della scheda Area di blotting Confezione singola della scheda PDVF Scheda PDVF con cartine protettive Etichetta con codice prodotto numero di lotto codice di identificazione e tag della matrice di dati codice prodotto numero di lotto e numero ID Amersham WB transfer paper Le carte per il trasferimento sono usate quando si prepara il sandwich da trasferire L immagine seguente mostra una carta di trasferimento 80 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 7 Accessori e materiali di consumo per le
132. ollegare il cavo di alimentazione e con tattare un tecnico di assistenza autorizzato ATTENZIONE Parti in movimento Fare attenzione quando si apre chiude il cari catore per evitare che le dita o gli indumenti restino impigliati quando il caricatore si muove Non mettere mai flaconi o fiale davanti al gruppo Elpho amp scan Quando si apre il caricatore possono cadere Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Inserire le strisce tampone nei portastrisce tampone to gliendo due strisce tampone dalla loro confezione e met tendole direttamente sui portastrisce Nota Per evitare la contaminazione delle strisce tampone non toccarle oppure usare guanti puliti Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 133 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Gruppo Premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato I caricatore espulso Aprire il coperchio di sigillatu ra usando il dispositivo di chiusura Inserire i portastrisce tampo ne nelle cavit della piastra portascheda del caricatore 134 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi Passo Illustrazion
133. olo Questa sezione fornisce l elenco delle attivit di manutenzione periodica cui tenuto l utilizzatore dell Amersham WB analyzer e delle attivit di manutenzione che devono essere effettuate quando necessario Precauzioni AVVERTENZA Non utilizzare Amersham WB analyzer in caso di malfunzionamento o se ha subito danni ad esempio e dannialcavo di alimentazione o alla spina e danni derivanti dalla caduta dell attrezzatura e danneggiamento di altre parti che possono influire sul corretto funzionamento AVVERTENZA Pericolo di scossa elettrica Tutte le riparazioni devono essere eseguite da personale di assistenza autorizzato da GE Non aprire i coperchi o sostituire i componenti salvo se specificamente indicato nella documentazione d uso AVVERTENZA Scollegare l alimentazione Scollegare sempre l alimentazione del gruppo strumento prima di sostituire un suo componente fatto salvo ove altrimenti specificato nella documentazione d uso 190 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione AVVERTENZA Quando si utilizzano sostanze chimiche pericolose evitare le fuo riuscite e indossare occhiali di protezione e altri dispositivi di prote zione individuale adeguati Per esempio l NaOH corrosivo e dunque pericoloso per la salute AVVERTENZA Soltanto i pezzi di ricambio e gli accessori che sono approvati o forniti da GE possono essere utilizza
134. perazione 1 Premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato Il caricatore espulso 2 Aprire il coperchio di sigillatura 3 Togliere l adattatore membrana con la scheda PVDF dalla piastra portasche da 4 Togliere la scheda PVDF dall adattatore membrana Suggerimento La scheda PVDF pu essere conservata in condizioni di essiccazione tra due filtri di carta all interno della confezione singola della scheda PVDF segnali sulla scheda PVDF asciutta sono stabili per circa 3 mesi 5 Pulire gli adattatori membrana con uno straccio non sfilacciato e riportare gli adattatori nello spazio di stoccaggio del vano anticorpi 6 Pulire i supporti di asciugatura con un panno senza sfilacciature e riportare i supporti nello scomparto di asciugatura Fi Pulire strofinando la piastra portascheda con un panno senza sfilacciature se necessario inumidirlo con 50 di etanolo 8 Pulire strofinando il vetro protettivo con un panno senza sfilacciature se necessario inumidirlo con 50 di etanolo Nota importante tenere il vetro protettivo pulito su entrambi i lati per poter otte nere buoni risultati di scansione delle schede di gel e di quelle PVDF 9 Chiudere il coperchio di sigillatura e premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato Il caricatore viene inserito Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 189 6 Manutenzione 6 Manutenzione Informazioni sul capit
135. po Elpho amp scan Immagine del caricatore Elpho amp scan L immagine seguente mostra il gruppo Elpho amp scan con caricatore espulso e coperchi di sigillatura della piastra portascheda sinistra aperta 1 2 3 i E f 5 PE Descrizione Dispositivo di chiusura Per aprire il coperchio di sigillatura Coperchio di sigillatura Indicatore di posizione A e posizione B Cavit Per portastrisce tampone con connettori elettrici per gli elettrodi del tam pone 5 Perni guida Per il corretto posizionamento delle schede di gel o degli adattatori mem brana comprese le schede PVDF 6 Piastra per schede Per il raffreddamento delle schede di gel e il mantenimento in piano delle schede durante la scansione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 43 3 Descrizione del sistema 3 2 Gruppo Elpho amp scan Parte Descrizione Vetro protettivo 44 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 5 5 Gruppo Western Introduzione Il gruppo Western utilizzato per e trasferire le proteine separate nel gel sulla membrana e sondare le proteine sulla membrana con anticorpi primari e poi anticorpi secondari coniugati a un CyDye e asciugare le schede PVDF prima della scansione nel gruppo Elpho amp scan Questa sezione fornisce una panoramica del gruppo Western In questa se
136. re e monitorare il sondaggio Precauzioni AVVERTENZA Al termine dell elettroforesi o dopo il trasferimento quando il sandwich da trasferire stato aperto e la scheda PVDF stata posizionata nella camera di sondaggio smaltire il gel in modo si curo Leggere il foglio tecnico di sicurezza della scheda gel SDS MSDS per le istruzioni di sicurezza relative allo smaltimento del gel ATTENZIONE Rischio di schiacciamento Non toccare la camera di sondaggio in movimento durante un ciclo Prima del sondaggio Accertarsi che tamponi acqua purissima anticorpi soluzioni bloccanti e di lavaggio siano collegate prima di iniziare il sondaggio Nota L acqua purissima deve essere sempre collegata perch viene usata per il risciacquo tra le fasi di sondaggio La soluzione di lavaggio usata per il risciacquo tra anticorpi primari in posizione A e B 174 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 2 Eseguire il sondaggio Riempire preventivamente la camera di sondaggio e caricare le schede PVDF Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Riempire preventivamente la ca mera di sondaggio ye W e Fare clic sulla fase di lavoro PROBING PROBING amp DRYING nel soft amp DRYING ware e Fare clic su Pre Fill nell area Probing Probing Risultato La camera di sondag Pre Fill Rea
137. registro degli esperimenti 3 Se si desidera completare un ciclo che stato interrotto aprire il file dell esperimento per il ciclo Quindi aprire la finestra di dialogo Experiment Information e selezionare la scheda Experiment log Nella scheda Experi ment log verificare a quale stadio l esperimento stato interrotto Rimuovere le parti della procedura gi completate quando l esperimento stato inter rotto e riavviare l operazione 34 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 4 Informazioni sul riciclaggio 2 4 Informazioni sul riciclaggio Introduzione Questa sezione contiene informazioni relative allo smantellamento dell Amersham WB analyzer Decontaminazione L Amersham WB analyzer deve essere decontaminato prima dello smantellamento e devono essere rispettate tutte le normative locali in materia di rottamazione dell appa recchiatura Smaltimento istruzioni generali Quando si pone l Amersham WB analyzer definitivamente fuori servizio i vari materiali devono essere separati e riciclati secondo le normative ambientali locali e nazionali Riciclaggio delle sostanze pericolose L Amersham WB analyzer contiene sostanze pericolose Informazioni dettagliate sono disponibili presso il rappresentante GE Smaltimento dei componenti elettrici rifiuti di attrezzature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti urbani indifferenziati m
138. rn L illustrazione seguente mostra i componenti principali del pannello posteriore del gruppo Western 1 2 5 D Gai gt Descrizione Uscite di scarico e tubazione di troppo pieno Connessione di comunicazione del gruppo Elpho amp scan usare cavo ethernet Connettore cavo di alimentazione 60320 C14 Estrattore fusibili 5x20 mm Interruttore di alimentazione principale ON I OFF O 6 Feritoie di ventilazione 48 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 1 Generalit Parte Descrizione Ingresso aria Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 49 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 2 Scomparti del gruppo Western 3 3 2 Scomparti del gruppo Western Introduzione Questa sezione descrive i diversi scomparti del gruppo Western con i coperchi aperti Immagine del serbatoio di trasferimento L immagine seguente mostra il serbatoio di trasferimento del gruppo Western Descrizione 1 Guide del sandwich 2 Indicatore di posizione A e posizione B 3 Elettrodo di trasferimento destro 50 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 2 Scomparti del gruppo Western Descrizione Filtro serbatoio di trasferimento Elettrodo di trasferimento sinistro Immagine dello scomparto di sondaggio L i
139. scan e Amersham WB Gruppo western gruppi strumento sono controllati da un PC sul quale installato il Amersham WB software Nota gruppi strumento devono sempre essere collegati tra loro durante un ciclo due gruppi devono essere accesi quando si effettua un esperimento nel gruppo Western Interruttori di sicurezza All interno del gruppo Elpho amp scan sono presenti alta tensione e due laser Il gruppo dotato di doppi interruttori di sicurezza che tolgono l alimentazione al convertitore dell alta tensione e ai laser quando il caricatore aperto Nel serbatoio di trasferimento del gruppo Western presente alta tensione Il gruppo dotato di interruttori di sicurezza che tolgono l alimentazione quando il coperchio del serbatoio di trasferimento aperto Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 37 3 Descrizione del sistema 3 1 Descrizione generale dello strumento Immagine dell Amersham WB analyzer L immagine seguente mostra l Amersham WB analyzer con gruppo Elpho amp scan a sinistra e gruppo Western a destra Immagine dei pannelli strumento La stessa configurazione di spie luminose disponibile per ciascuno scomparto dei gruppi strumento elettroforesi e scansione trasferimento sondaggio e asciugatura Quando i gruppi strumento sono accesi le luci che indicano i nomi degli scomparti sono accese Gli indicatori sono presenti sul pannello strumento di ciascun gruppo L i
140. sione della membrana e vedere i risultati 59 Effettuare la scansione della membrana e vedere ri sultati Introduzione Questa sezione descrive come e posizionare la scheda PVDF nell unit Elpho amp scan e avviare e monitorare la scansione e visualizzare i risultati della scansione Collocare la scheda PVDF nel caricatore ATTENZIONE Parti in movimento Fare attenzione quando si apre chiude il cari catore per evitare che le dita o gli indumenti restino impigliati quando il caricatore si muove Non mettere mai flaconi o fiale davanti al gruppo Elpho amp scan Quando si apre il caricatore possono cadere Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Premere il tasto di espulsione sul gruppo Elpho amp scan Risultato Il caricatore espulso e Ruotare verso l alto i ganci di fermo e aprire il coperchio di sigillatura e Eliminare il liquido e lo sporco eventual mente presenti sul vetro protettivo della piastra portascheda con un panno senza sfilacciature Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 185 5 Esecuzione di un esperimento 5 9 Effettuare la scansione della membrana e vedere i risultati Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore e Togliere un adattatore membrana dal vano anticorpi del gruppo Western Nota Assicurarsi che l adattatore membrana sia asciutto e pulito Aprire l adattatore membrana e sistemar
141. sperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 2 Eseguire il sondaggio Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Scheda Riporre la scheda PVDF nella camera di sondaggio prece dentemente riempita inserendo i fori della scheda PVDF sopra i perni guida contrassegnati con cerchi arancioni e applicando la scheda PVDF nella camera di son daggio Nota Fare attenzione a non toccare la zona di blotting della scheda PVDF Chiudere il coperchio della camera di sondaggio e il coperchio dello scomparto di sondaggio Assicurar si che il coperchio della camera di sondaggio sia bloccato dall appo sito fermo Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 177 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 2 Eseguire il sondaggio Avviare e monitorare il sondaggio Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Nel software fare clic sulla fase di 1 Yf lavoro PROBING amp DRYING PROBING amp DRYING acid dana bian Utilizzare le impostazioni di default per Probing steps nell area Pro 2 1 Block ill 10 1 _ insert step bing come mostrato nella scher 2 Wash v 1 2 Remove step mata 3 Primary antibody v 60 1 Wash 1 4 Default o Defaut Secondary antibody y 30 1 Wash v 1 a ae Final wash se 1 6 eo Total time 2 31 h Cliccare su Start
142. stro all estrema destra del serbatoio di trasferimento e premere verso il basso 4 Chiudere il coperchio del serbatoio di trasferimento 100 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Collegare i gruppi strumento e il computer e collegare i cavi di alimentazione AVVERTENZA Messa a terra di protezione e cavo di alimentazione Amersham WB analyzer deve essere sempre collegato ad una presa di corrente collegata a terra Utilizzare soltanto un cavo di alimentazione omologato a 3 fili for nito o approvato da GE oppure conforme a tutti i requisiti norma tivi in campo elettrico in vigore a livello locale AVVERTENZA Tensione di alimentazione Accertarsi che la tensione di alimenta zione della presa a muro corrisponda alla marcatura indicata sullo strumento prima di collegare il cavo di alimentazione AVVISO L eventuale computer usato con l apparecchiatura deve essere conforme a IEC EN UL CSA 60950 1 o ad altre norme di sicurezza Esso deve essere installato ed usato conformemente alle istruzione del costruttore Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 101 4 Installazione 4 2 Installazione hardware Passo Operazione 1 Collegare il computer al gruppo Elpho amp scan contatto Computer usando il cavo USB in dotazione Western unit Albe Comper Nota Si consiglia di disattivare l
143. sumo per pre etichettatura sono usati per la pre etichettatura di cam pioni di proteine con colorante fluorescente Pre etichettatura fluorescente di campioni e consentellrilevamento delle proteine totali durante la scansione della scheda di gel e elimina la necessit di post macchiatura del gel Quando usare la pre etichettatura di proteine La pre etichettatura delle proteine viene sempre eseguita prima dell elettroforesi quando si eseguono e esperimenti di elettroforesi e esperimenti Western con normalizzazione delle proteine totali Materiali di consumo per la pre etichettatura materiali di consumo per la pre etichettatura sono confezionati in appositi sacchetti separati Ciascun sacchetto contiene reagenti in soluzione sufficienti per l utilizzo di 10 schede di gel in cui 14 corsie scheda gel vengono caricate con campioni pre etichettati vale a dire 140 singole reazioni di etichettatura La tabella che segue riassume il contenuto dei materiali di consumo per pre etichetta tura Materiale di consumo per pre Contenuto Quantita etichettatura Amersham WB Cy5 0 25 mg ml circa 250 5 fiale cappucci blu pmol ul di Cy5 colorante in 35 ul di soluzione colorante Cy5 DMSO per fiala sufficienti per due schede di gel Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 65 3 Descrizione del sistema 3 5 Materiali di consumo per la pre etichettatura Materiale di consumo per pre Contenut
144. t mA 60 Gel B 40 Gel A 0 j gt 4 4 0 0 2 0 4 0 6 0 8 1 Time Minutes 2 Electrophoresis Cliccare su Start nell area Electrophoresis Risultato I ciclo di elettrofo resi viene avviato La progressione del ciclo visualizzata dalle curve che indicano corrente tensione effetto o temperatura Anche il tempo trascorso del ciclo viene visualizzato Suggerimento Durante l elettroforesi c tempo per preparare i tampo ni e le soluzioni per le proce dure Western Per ulteriori in formazioni vedere Sezio ne 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento a pagina 145 e Sezione 5 8 1 Preparare e collegare la son da e le soluzioni anticorpi a pagina 170 Pause for sample well clean up 1 Open the elpho amp scan loader 2 Apply the Paper comb in the sample wells for 5 seconds 3 Close the elpho amp scan loader Press the button below to continue the electrophoresis run Continue run Se si selezionato l opzione Pause for sample well clea nup after 5 minutes seguire le istruzioni indicate di segui to 1 Aprire il caricatore 2 Mettere il pettine nel pozzetti dei campioni e tenerlo in questa posizio ne per circa 5 secondi 3 Chiudere il caricatore e continuare il ciclo Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 141 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 3 Proc
145. te 136 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Passo Illustrazione della fase 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi Azioni dell operatore e Girare la scheda di gel di modo che il lato anterio re sia rivolto verso l alto cio copertura del poz zetto campione rivolta in alto Nota Assicurarsi che la piastra portascheda sia comple tamente asciutta e Mettere la scheda gel sulla piastra portascheda allineando i fori del telaio scheda gel con i perni di guida contrassegnati con cerchi arancioni Nota Fare attenzione a non graffia re la piastra portascheda con oggetti affilati Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 137 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore e Chiudere il coperchio di sigillatura e Afferrare l estremit della copertura pozzetto cam pione e toglierla con cu ra Suggerimento Cambiare impugnatura quando si toglie la copertura pozzetto campione per poter mantenere il pi possibile la vicinanza con i pozzetti Nota Se la copertura pozzetto campione si rompe Lasciare la scheda gel nel caricatore con il coperchio di sigillatura chiuso Utilizzare per esempio delle pinzette per rimuovere il resto della coper
146. te lo strumento scollegare il cavo di ali mentazione e contattare un tecnico di assistenza autorizzato AVVERTENZA Al termine dell elettroforesi o dopo il trasferimento quando il sandwich da trasferire stato aperto e la scheda PVDF stata posizionata nella camera di sondaggio smaltire il gel in modo si curo Leggere il foglio tecnico di sicurezza della scheda gel SDS MSDS per le istruzioni di sicurezza relative allo smaltimento del gel ATTENZIONE Parti in movimento Fare attenzione quando si apre chiude il cari catore per evitare che le dita o gli indumenti restino impigliati quando il caricatore si muove Non mettere mai flaconi o fiale davanti al gruppo Elpho amp scan Quando si apre il caricatore possono cadere ATTENZIONE Pericolo di scossa elettrica Arrestare sempre un ciclo di trasferi mento in corso prima di pulire il liquido dallo strumento o dal banco A A A A A Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 23 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza ATTENZIONE Rischio di schiacciamento Non toccare la camera di sondaggio in movimento durante un ciclo ATTENZIONE Non togliere nessun coperchio del gruppo Elpho amp scan All interno del gruppo presente un laser di classe 3B ATTENZIONE Per evitare di spruzzare liquidi pericolosi usare filtri di ingresso pesanti collegati alle tubazioni nei flaconi
147. te mostra una vista esplosa delle parti della scheda gel da smontare al termine del ciclo di elettroforesi La tabella sottostante descrive brevemente le parti della scheda gel da smontare Fase Descrizione 1 Pellicola protettiva Questa pellicola viene tolta per prima 2 Telaio portagel bordi del telaio portagel sono pre allentati dal supporto del telaio portagel 3 nell immagine e poi rimossi con cautela 3 Il supporto del telaio portagel si trova sul banco Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 155 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Allentare il telaio portagel dal relativo supporto e collocarlo nel supporto di trasferimento Nota Quando si allenta il telaio portagel non toccare la zona del gel con trassegnata con una X rossa Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Tenere la scheda gel con presa ferma Togliere la pellicola protet tiva afferrando l estremit indicata con una freccia arancione e tiran dola diagonalmente nel senso della freccia 156 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Collocare la scheda gel sul banco con il gel scoperto rivolto verso l alto come illustrato nell imma
148. tem Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 143 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 Eseguire il trasferimento Introduzione Questa sezione descrive come preparare il sandwich da trasferire come avviare e mo nitorare il ciclo di trasferimento e le procedure da eseguire al termine di quest ultimo In questa sezione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento 145 5 7 2 Preparare il sandwich da trasferire 147 5 7 3 Avviare trasferimento 162 5 7 4 Procedure al termine del trasferimento 166 144 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento 5 7 1 Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento Introduzione Questa sezione descrive come preparare e collegare i tamponi e le soluzioni per il trasfe rimento Le soluzioni per il trasferimento possono essere preparate durante il ciclo di elettroforesi e devono essere collegate prima di cominciare il trasferimento Soluzioni di trasferimento ricette AVVERTENZA Collocare l Amersham WB analyzer in un locale dotato di aerazione nel caso si utilizzi il metanolo o altri prodotti chimici che richiedono la ventilazione ATTENZIONE Rischio d incendio Non usare soluzioni tampone di trasferimento con pi
149. tenzione di Amersham WB analyzer ATTENZIONE Dispositivi di protezione individuale DPI Durante l imballaggio il disimballaggio il trasporto o lo spostamento del sistema indos sare e Scarpeantinfortunistiche preferibilmente con rivestimento in acciaio e Guanti da lavoro per proteggersi da bordi taglienti e Occhiali protettivi Installazione e spostamento AVVERTENZA Collocare l Amersham WB analyzer in un locale dotato di aerazione nel caso si utilizzi il metanolo o altri prodotti chimici che richiedono la ventilazione AVVERTENZA Tensione di alimentazione Accertarsi che la tensione di alimenta zione della presa a muro corrisponda alla marcatura indicata sullo strumento prima di collegare il cavo di alimentazione AVVERTENZA Accertarsi che il sistema venga posizionato su un banco piano e stabile con adeguato spazio di ventilazione Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 21 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza 22 AVVERTENZA Non bloccare l accesso all interruttore di alimentazione e al cavo di alimentazione L interruttore di alimentazione deve essere sempre facilmente accessibile Il cavo di alimentazione e la presa devono essere sempre facili da scollegare AVVERTENZA Messa a terra di protezione e cavo di alimentazione Amersham WB analyzer deve essere sempre collegato ad una presa di corrente collegat
150. the wizard Cantel Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 113 4 Installazione 4 3 Installazione software Controllare la comunicazione dello strumento Passo Operazione 1 Accendere il computer il gruppo Elpho amp scan e il gruppo Western 2 Avviare l Amersham WB software Risultato il software visualizza la comunicazione stabilita con i gruppi strumento Se la comunicazione non stata stabilita e collegamenti dei cavi o del cavo di alimentazione potrebbero essere errati Controllare tutta l installazione dell hardware e Laroutine del driver USB potrebbe non essere corretta Sostituire la porta USB del computer 114 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 Esecuzione di un esperimento Informazioni sul capitolo Questo capitolo fornisce una panoramica dei due principali tipi di esperimenti che si possono eseguire tramite l Amersham WB system Esso descrive inoltre la procedura da seguire per l esperimento Western with total protein normalization Precauzioni ATTENZIONE Indossare sempre i guanti indumenti e occhiali protettivi durante l uso e la manutenzione di Amersham WB analyzer In questo capitolo Il presente capitolo contiene le seguenti sezioni Sezione Vedere pagina 5 1 Generalit 116 5 2 Avviare l Amersham WB analyzer 120 5 3 Impostare un esperimento col software 122 5 4 Eseguire la pre eti
151. ti per l assistenza o la manuten zione del sistema AVVERTENZA Quando si sostituisce un cavo di alimentazione danneggiato usarne uno sostitutivo dello stesso tipo e dimensioni e conforme a tutti i requisiti normativi in campo elettrico a livello locale in vigore e approvato da GE AVVERTENZA Staccare sempre l alimentazione di rete prima di sostituire il fusibile di rete Per mantenere una protezione continua contro il rischio d incendio sostituire unicamente con un fusibile del tipo e della classe specificati sulle etichette del gruppo strumento ATTENZIONE Adottare tutte le misure protettive del caso durante l impiego di sostanze chimiche pericolose indossando ad esempio guanti e occhiali di protezione resistenti a tali sostanze Seguire le istruzioni e le normative locali in merito al funzionamento e alla manutenzio ne del sistema in condizioni di sicurezza In questo capitolo Il presente capitolo contiene le seguenti sezioni Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 191 6 Manutenzione Sezione Vedere pagina 6 1 Programma di manutenzione 193 6 2 Istruzioni per la manutenzione 198 192 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 6 Manutenzione 6 1 Programma di manutenzione 6 1 Programma di manutenzione Introduzione Questa sezione fornisce l elenco delle attivit di manutenzione che l utilizzatore dell Amersham WB analyzer deve eseguire
152. to a pagina 211 Pulire la parte superiore del serbatoio di trasferimento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Pulire la parte superiore del serbatoio di trasferimento con un panno umido 195 6 Manutenzione 6 1 Programma di manutenzione Intervallo Intervento di manutenzione Istruzioni Ogni settimana o se lo strumento non viene utilizzato per qualche giorno Intervallo Annualmente Pulizia di manutenzione della corsia di flusso per il trasferimento Vedere Sezione 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio a pagina 199 Pulizia di manutenzione della corsia di flusso per il sondaggio Vedere Sezione 6 2 1 Pulizia settimanale delle corsie di flusso per il trasferimento e il sondaggio a pagina 199 Controllare e se danneggiati sostituire pompe tubo filtro dell aria filtro d ingresso Controllare e serrare i connettori delle tubazioni Intervento di manutenzione Vedere Sezione 6 2 2 Procedure di sosti tuzione a pagina 203 per informazioni su come sostituire le teste delle pompe il filtro dell aria e il filtro d ingresso Se si ha bisogno di sostituire una tuba zione contattare il Servizio d assistenza Istruzioni 196 Sostituire il filtro dell aria nel modulo essiccatore I filtro dell aria potrebbe aver bisogno di essere sostituito pi frequentemente se l ambiente esterno pi diffici
153. tori membrane Supporti per adattatori membrane Serratura sportello Indicatore di posizione della provetta con soluzione anticorpi A PRIMARY A SECONDARY B PRIMARY e B SECONDARY Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 53 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 2 Scomparti del gruppo Western Immagine del vano di servizio L immagine seguente mostra il vano di servizio del gruppo Western Descrizione Blocco valvola di trasferimento Pompa per sondaggio Pompa di trasferimento Coperchio scomparto filtro aria Blocco valvola di sondaggio 54 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 3 Corsie di flusso del liquido 3 3 3 Corsie di flusso del liquido Introduzione La presente sezione si occupa delle corsie di flusso del liquido di trasferimento e sondag gio nel gruppo Western e descrive i principi basilari di funzionamento Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 55 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 3 Corsie di flusso del liquido Immagine della corsia di flusso del liquido di trasferimento L immagine seguente mostra un diagramma di flusso dettagliato del processo di trasfe rimento Il diagramma di flusso mostra le interconnessioni tra i componenti dello stru mento Le etichette bianche si riferiscono a quelle delle tubazioni numeri b
154. troforesi Avviare e monitorare 140 Caricare campioni 139 Inserire le strisce tampone nei portastrisce tampo ne 133 Mettere i portastrisce tam pone Gruppo Elpho amp scan 134 Preparare 133 Procedure al termine di 142 Rimuovere la scheda di gel 142 Elpho amp scan Aprire 134 Chiudere 139 Pulire 143 Elpho amp scan gruppo 40 Elpho amp scan Strumento 42 Esperimento Creare 123 Esperimenti di elettrofore si 116 esperimenti Western 116 Inserire le informazioni degli anticorpi 125 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Inserire le informazioni del campione 124 Esperimento di elettroforesi Descrizione 116 Panoramica 117 esperimento Western Panoramica 117 F Filtro d ingresso Fissare i filtri d ingresso alla tubazione 105 Portafiltro d ingresso 86 Sostituire il filtro d ingres SO 212 Filtro dell aria Sostituire il filtro dell aria 204 Filtro serbatoio di trasferimento Sostituire il filtro del serbato io di trasferimento 211 Fusibile di rete Sostituire il fusibile di re te 212 G Gruppo Elpho amp scan strumento 40 Gruppo Elpho amp scan Avvio 120 Gruppo strumento Western 45 Guide di asciugatura membra na Installare le guide di asciuga tura membrana 107 Immagine degli Marker MW 68 Indicatori 39 Informazioni di carattere nor mativo 10 Conformit ambientale 12 Conformit normativa dell attrezzatura collega ta 13 Norme e regolam
155. truzioni per l installazione informazioni su come eseguire un esperimento in modo sicuro istruzioni per la manutenzione da parte dell utente specifiche e informazioni di riferimento aggiuntive Convenzioni tipografiche Gli elementi software sono identificati all interno del testo mediante caratteri in corsivo grassetto due punti separano i livelli dei menu quindi File Open si riferisce alcomando Open nel menu File Gli elementi hardware sono evidenziati all interno del testo da caratteri in grassetto ad es interruttore Power Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 1 Introduzione 1 2 Importanti informazioni d uso 1 2 Importanti informazioni d uso Leggere questo manuale prima di mettere in funzione l Amersham WB analyzer Tutti gli utenti devono leggere interamente le Istruzioni di funzionamento prima di procedere all installazione all uso o alla manutenzione dello strumento Tenere sempre le Istruzioni di funzionamento a portata di mano quando si mette in funzione Amersham WB analyzer Utilizzare l Amersham WB analyzer esclusivamente secondo le modalit descritte nella documentazione d uso In caso contrario si esposti a pericoli che possono causare infortuni e provocare danni all apparecchiatura Uso previsto Amersham WB system un sistema per elettroforesi delle proteine e di Western blot immunorivelazione che comprende la scansione di schede gel e schede PVDF Le pro t
156. tura pozzet to 138 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 1 Prima dell elettroforesi Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Caricare i campioni il tampo ne di caricamento e o i Marker del peso molecolare nei pozzetti generalmente 20 ul pozzetto come indica to nella schermata EXPERI MENT amp SAMPLES del soft ware Nota Non aprire mai il coperchio dopo aver caricato i campio ni Nota Tutti pozzetti devono essere caricati con un campione il tampone di caricamento di luito con un pari quantit di acqua purissima o Marker del peso molecolare Si consi glia di inserire il tampone di caricamento nei pozzetti 1 e 16 e il Marker del peso molecolare nei pozzetti 2 e 15 Gruppo Una volta caricati tutti i campioni premere il tasto di espulsione Risultato I caricatore viene inserito nel gruppo Elpho amp scan Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 139 5 Esecuzione di un esperimento 5 6 Eseguire l elettroforesi delle proteine 5 6 2 Avviare l elettroforesi 5 6 2 Avviare l elettroforesi Introduzione Questa sezione descrive come avviare e monitorare l elettroforesi Avviare e monitorare l elettroforesi e la scansione di gel Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Gel Cards Gel card Position A Posit
157. uire il trasferimento 5 7 3 Avviare trasferimento Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Fare clic su Start nell area Transfer Transfer Nota Durante il ciclo di trasferimento si consiglia di preparare e collegare le soluzioni da usare nella fase di sondaggio Start Ready for Transfer Per ulteriori informazioni vedere Sezione 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi a pagina 170 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 165 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 4 Procedure al termine del trasferimento 5 7 4 Procedure al termine del trasferimento Introduzione Questa sezione descrive le procedure di pulizia da eseguire al termine del trasferimento Togliere illi supportoli di trasferimento Passo Operazione 1 Aprire il coperchio del serbatoio di trasferimento 2 Togliere supporti di trasferimento Sospenderli diagonalmente nella parte anteriore interna del serbatoio di trasferimento sopra il liquido Nota Per evitare che le membrane si secchino in questa fase non aprire i supporti di trasferimento 166 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 7 Eseguire il trasferimento 5 7 4 Procedure al termine del trasferimento Pulire la corsia di flusso per trasferimento Nota Prima di procedere alla pulizia togliere il supporto di trasferimento
158. un luogo asciutto e all interno della scatola con cui vengono fornite Proteggere dalla polvere Amersham WB paper comb Temperatura ambiente Conservare i pettini di carta in un luogo asciutto e all interno della scatola con cui vengono forniti Proteggere dalla polvere Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 63 3 Descrizione del sistema 3 4 Descrizione generale degli accessori e dei materiali di consumo Materiale di consumo Amersham WB sponge Amersham WB goat anti mou se Cy3 Cy5 o Amersham WB anti rabbit Cy3 Cy5 liofilizzato Temperatura di stoccaggio Temperatura ambiente Da 2 C a 8 C Ambiente Proteggere dalla polvere e dal la luce diretta del sole Proteggere gli anticorpi secon dari dalla luce Anticorpi secondari ricostituiti ricostituiti in acqua purissima con una concentrazione di 1 ug pi Conservare le aliquote a 15 30 C Proteggere gli anticorpi secon dari ricostituiti dalla luce Le aliquote non devono essere conservate per pi di 6 mesi Evitare cicli di congelamen to scongelamento ripetuti Anticorpi primari 64 Vedere le istruzioni del produt tore Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Vedere le istruzioni del produt tore 3 Descrizione del sistema 3 5 Materiali di consumo per la pre etichettatura 3 5 Materiali di consumo per la pre etichettatura Introduzione materiali di con
159. urante l elettroforesi e trasferite dal gel ad una membrana La membrana viene sondata con anticorpi primari e poi anticorpi secondari coniugati a colorante Cy3 o Cy5 per il rilevamento di proteine target Per il rilevamento delle pro teine totali il campione viene pre etichettato con Cy5 Al termine del sondaggio la membrana viene asciugata e quindi sottoposta a scansione In fase di Valutazione viene eseguita un analisi automatica delle bande di proteine e i risultati sono presentati nel software 116 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Descrizione generale della procedura di lavoro 5 Esecuzione di un esperimento 5 1 Generalit L illustrazione seguente mostra le fasi principali per lo svolgimento dell elettroforesi e degli esperimenti Western Esperimento di elettroforesi i Esperimento l Western Avviare lo strumento Impostare l esperimento nel software Eseguire pre etichettatura OPPURE Avviare elettroforesi e Valutare i risultati scansione di gel Preparare il sandwich da trasferire Avviare trasferimento Eseguire sondaggio e I asciugatura Effettuare la scansione della le membrana le Valutare i risultati Preparare i campioni non etichettati per il caricamento Preparare e collegare le soluzioni di trasferimento Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 117 5 Esecuzion
160. voro L area di lavoro mostra le informazioni di testo i parametri e i controlli relativi al passaggio della procedura di lavoro attualmente visualizzato 90 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 9 Descrizione generale del software Descrizione Pannello di stato strumento Il pannello di stato strumento mostra lo stato di connessione dello strumento Quando lo strumento collegato viene mostrato lo stato di ciascun modulo hardware scomparto di elettroforesi e scansione serbatoio di trasferimento vano di sondaggio e vano di asciugatura e l andamento dei cicli nei moduli Si possono aprire diversi esperimenti simultaneamente Per ogni esperimento deve essere aperta una nuova istanza del software Il pannello di stato strumento mostra lo stato dello strumento per tutti gli esperimenti in corso Ogni modulo hardware pu essere utilizzato da un esperimento per volta Ci significa che si possono effettuare quattro diversi passaggi della procedura di lavoro di quattro diversi esperimenti in parallelo Pannello di Help Il pannello di help mostra istruzioni di guida per la schermata correntemente visualizzata nell area di lavoro Quando si seleziona un nuovo passaggio della procedura di lavoro le istruzioni di guida vengono aggiornate automaticamente al fine di visualizzare la guida per la schermata attiva Suggerimento Per visualizzare il manuale d uso che contiene informazioni
161. wo corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment VA gt Maintenance clean Learn more User manual Maintenance clean Transfer Web resource Maintenance clean Probing Help w Suggerimento 122 schermata attiva fare clic sul pulsante del pannello di help O premere F1 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE Per visualizzare il pannello di help con le istruzioni di guida per la 5 Esecuzione di un esperimento 5 3 Impostare un esperimento col software Per aprire il manuale d uso selezionare Help View user manual o premere Ctrl F1 Creare e impostare un esperimento Passo Illustrazione della fase Azioni dell operatore Selezionare il tipo di esperi Create New Experiment mento e fare clic su Create All Western experiments include necessary SDS PAGE steps In questo esempio Western dini with total protein normaliza Western with total protein normalization tio n D Western with endogenous protein normalization Risultato La schermata prin cipale del software si apre mostrando la fase della pro Create cedura di lavoro EXPERI MENT amp SAMPLES Per informazioni generali sulla schermata principale vedere Sezione 3 9 Descrizio ne ge
162. za 18 2 2 Etichette 27 2 3 Procedure di emergenza 32 2 4 Informazioni sul riciclaggio 55 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 17 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza Introduzione L Amersham WB analyzer alimentato con tensione di rete e utilizza liquidi che possono risultare pericolosi Prima di procedere all installazione all uso o alla manutenzione dei gruppi strumento necessario conoscere i rischi descritti in questo manuale Seguire sempre le istruzioni e le normative locali in merito al funzionamento e alla ma nutenzione del sistema e alla manipolazione sicura dei prodotti chimici Seguire le istruzioni fornite per evitare lesioni personali o danni all attrezzatura Le precauzioni di sicurezza nella presente sezione sono raggruppate nelle seguenti ca tegorie e Precauzioni generali e Liquidi infiammabili e Protezione individuale e Installazione e spostamento e Funzionamento del sistema e Manutenzione e Smantellamento Precauzioni generali AVVERTENZA Non utilizzare Amersham WB analyzer in nessun altro modo se non quello descritto in Istruzioni di funzionamento AVVERTENZA Non utilizzare accessori che non siano stati forniti o consigliati da GE 18 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 2 Istruzioni di sicurezza 2 1 Precauzioni di sicurezza AVVERTENZA Non utilizzare
163. zione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 3 3 1 Generalit 46 3 3 2 Scomparti del gruppo Western 50 3 3 3 Corsie di flusso del liquido 55 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 45 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 1 Generalit 3 3 1 Generalit Introduzione Questa sezione fornisce una panoramica dei pannelli anteriore e posteriore del gruppo Western Immagine del gruppo Western L immagine seguente mostra i componenti principali del gruppo Western Descrizione 1 Coperchio vano anticorpi 2 Area da premere per aprire il coperchio del vano anticorpi 3 Pannello strumento per gli indicatori di stato 4 Coperchio serbatoio di trasferimento 46 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 1 Generalit Descrizione Cestello per flaconi e coperchio vano di servizio Nota Quando si ispezionano le pompe e i tubi o quando si sostituiscono dei componenti come descritto in Capitolo 6 Manutenzione a pagina 190 rimuo vere solamente il cestello dei flaconi Supporti tubazione Coperchio scomparto di sondaggio Coperchio dello scomparto di asciugatura Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 47 3 Descrizione del sistema 3 3 Gruppo Western 3 3 1 Generalit Immagine del pannello posteriore del gruppo Weste
164. zioni riportate in Sezione 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi a pagina 170 168 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura Introduzione Questa sezione descrive come eseguire il sondaggio e l asciugatura In questa sezione La presente sezione contiene le seguenti sottosezioni Sezione Vedere pagina 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi 170 5 8 2 Eseguire il sondaggio 174 5 8 3 Procedure al termine del sondaggio 179 5 8 4 Eseguire l asciugatura 183 Amersham WB system Istruzioni di funzionamento 29 0214 77 AE 169 5 Esecuzione di un esperimento 5 8 Eseguire il sondaggio e l asciugatura 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi 5 8 1 Preparare e collegare la sonda e le soluzioni anticorpi Introduzione Questa sezione descrive come preparare e collegare i tamponi e le soluzioni per il ciclo di sondaggio Le soluzioni per sondaggio e di anticorpi possono essere preparate durante il ciclo di trasferimento e devono essere collegate prima di iniziare il ciclo di sondaggio Ricette di soluzioni di sondaggio e di anticorpi Soluzione Ricetta Quantit ci clo Soluzione bloccante Il sistema compatibile con la maggior parte delle soluzioni bloccanti per esempio l agente 2 ECL PRIME in PBS T 0 1 di Tween

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