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Vitrification Freeze Kit (Vit Kit® - Freeze)

Contents

1. pe YKO ES Ta ES 6 10 ES VS 8 1 50 HL VS 7 CryoTip HSV
2. 2 8 C Tov Modified HTF HEPES 2 4 Kal 4 Petri Cryo 5 ES
3. 3 7 ES3 1 50 uL VS 2 cryotip EIK 3 HSV zik 4 CryoTip Hamilton oro HSV 8 Ta 9 13 va 90 110
4. CryoTip HSV LN To TO CryoTip HSV Ba YA YA kai 2PN aonmik 50 pL ES Petri TO rov kai TOU
5. w Cruetzfeldt Jakob CJD CESKY EL POUZITI Sada Vit Kit Zmrazen je ur ena na pou it p i asistovan ch reproduk nich technologiich pro vitrifikaci a skladov ni lidskych oocyt MII a embryi zygot az blastocyt Tato sada je ur ena pro pouziti s ty inkou CryoTip katalogov 40709 nebo sl mkou HSV Straw katalogov 019921 spole nosti Irvine Scientific a s vitrifika ni rozmrazovaci sadou Vitrification Thaw Kit Vit Kit Thaw pro optim lni zisk ni vzork POPIS VYROBKU Equilibration Solution ES je HEPES pufrovany roztok m dia 199 obsahuj c gentamicin sulf tu 35 g ml 7 5 v v dimetylsulfoxidu a 7 5 etyl nglykolu a 20 v v Dextran Serum Suppl
6. TO ei og va H Ac Cryotip CryoTips 40x
7. Irvine Scientific CryoTip 40709 HSV 0019921 Irvine Scientific 40736 Petri 50 X 9 mm Falcon 351006 4 5 ml HTF HEPES Ap 90126 Hamilton GASTIGHT 150 uL 80901 200 um Impulse Heat Sealer SYMS To HSV Ap 016296 Yypo Dewar Styrofoam 1 2 L Yyp A uro 4 Vit
8. Kal VS 2 CryoTip CryoTip VS To 3 To rou 2 kai Tou 3 _2ppaviore pe 1 To CryoTip arr To 1 kai TO CryoTip kai ap 2 CryoTip arr To ap 4 EwBuBiore To CryoTip 12 000 C min BA 68 TO HSV ws Toha eiypa ra 1 mm
9. Equilibration Solution ES 60 uL via H 50 uL EuBp ou VS 50 pL 1 CryoTip 2 Or 20 279 C beyik ES kai VS 20 27 C ES VS ES kai VS pia
10. Toa 0 5 ul 2 TO va KAI SYMS LN LN
11. A MII 8 16 VS CryoTip KAI 2 C pe 8 C Ta Vitrification Freeze Kit Solutions 8
12. Vitrification Freeze Kit yevrapik vn OI Ta KIT Tov FDA B HBsAg C HCV HIV
13. OTTOU MII ES VS 3 ujok rrapo 2 TO 20 uL H 4 H ES1 1 1 kai 2 5 ES2 2 2 6 rov rouc ES3 6 10 53
14. Mens dustadig holder r ret p plads skal du forsegle den bne ende med en SYMS forsegler Holdraretved hj lp af en pinceti h ndteringsstangens omr de Tryk hurtigt hele r ret vertikalt ind i LN Ryst forsigtigt roret i cirkelbevaegelser i LN i et par sekunder for at undg dannelsen af et isolerende luftboblelag omkring roret Placer den vitrificerede CryoTip eller HSV ror i det nedsaenkede LN fyldte cryoror eller baegeret p cryocane Sat l g p cryororet eller b geret eller saet det p med bunden i vejret med et andet cryorar uden heette for at fastgore det vitrificerede CryoTip eller HSV ror i flydende kveelstof Flytbeholderen med flydende nitrogen LN hen ved siden af LN cryofryseren og overf r cryocane med dets indhold til cryofryseren med henblik p langtidsopbevaring EMBRYONER PN til blastocyster vitrifikationsprotokol Brug aseptisk teknik og dispenser 50 ul dr ber ES p et omvendt l g til en petrisk l Fjern dyrkningssk len med embryon er fra inkubatoren og kontroller pravens pravernes kvalitet under mikroskop N r det er muligt vzelges kun embryon er af den bedste kvalitet til vitrifikation Overfar forsigtigt proven op til to pa n gang med en minimal volumen af mediet fra dyrkningssk len til ES dr ben og start timeren Embryoner skal ekvilibreres langsomt ved frit fald i ES dr ben i 6 10 minutter Bemark Prgven vil skrumpe og derefter grad
15. VS To va VS yr VS 9 ES ES ES VS 30 KAI TO CryoTip ws B 6a TO Cryo Tip To CryoTip Hamilton VS 1 CryoTip
16. Hat rozza meg a vitrifik lni kiv nt mint k sz m t 4 Cimk zzen fel minden steril Petri cs sz t vagy a fed t s a Cryo t rol eszk zt a sz ks ges inform ci kkal 5 Haszn lat el tt vatosan ford tson fel minden ES s VS fiol t k tszer hogy a tartalm t sszekeverje 6 K sz tse el az ed nyt az oldatcseppecsk kkel a vitrifik l si folyamatra a k vetkez k ppen p A OOCYTE MII vitrifik ci s protokoll MEGJEGYZ S Az embri vitrifik ci protokollra a B r sz vonatkozik 1 Az aszepszis szab lyainak betart sa mellett m rjen ki 20 ul t a t pk zegb l a m dos tott HTF feh rj vel kieg sz tett HEPES oldatb l s az ES b l egym shoz k zel egy ford tott petrics sze fed lre az 1 br n l that m don majd helyezze a cs sz t a mikroszk p llv nyra egy 20 ul csepp m dos tott HTF HEPES feh rj vel h rom 20 ul s csepp sszesen 60 ul ES b l ES1 ES2 ES3 2 Vegye ki az inkub torb l a MII oocyt kat tartalmaz teny szt ed nyt s ellen rizze mikroszk p alatt a mint k min s g t Ahol lehet v lassza csak a legjobb min s g MII llapot oocyt kat VIGY ZAT Minimaliz lja a minta mint k f nynek val kitetts g t a H ES s VS cseppekben t rt n ekvilibr ltat s alatt 3 Vigye t az oocyt kat egyszerre maximum kett t minim lis m diumt rfogattal a teny szt ed nyb l az inkub torban a H 20ul s cseppj
17. Skystasis azotas kiekis reikalingas pripildyti inda iki 10 cm arba 4 coli gylio NAUDOJIMO NURODYMAI Reikalingi Vit Kit Freeze u aldymo rinkinio komponentai kiekvienam atvejui Equilibration Solution ES pusiausvirinimo tirpalas 60 ul pagal oocity vitrifikacijos protokola Arba 50 ul pagal embrion vitrifikacijos protokol Vitrifikavimo tirpalas VS 50 ul pagal vitrifikacijos protokol 1 CryoTip kriogeninis iaudelis arba HSV iaudeliu galima saugoti iki 2 m gini 1jungtis daugkartinio naudojimo VITRIFIKACIJOS PROTOKOLAS PASTABA Proced ras reikia atlikti kambario temperat roje 20 90 25 C ildomo mikroskopo staliuko NEGALIMA naudoti ioms proced roms PERSP JIMAS Pusiausvirinimo ES ir VS tirpaluose metu reikia kiek manoma suma inti viesos poveik m giniams 1 Prie ekvilibracijos skys io ES ir vitrifikacijos skys io VS naudojam kiek palaikykite kambario temperat roje 20 27 C PASTABA stenkit s pakartotinai vis ES ir VS buteliuk nelaikyti kambario temperat roje kai kiekvien kart reikia dalies tirpalo Geriau pamatuoti ir pa mus reikiam kiek i kart pad ti buteliuk 2 8 C temperat r Baltyminiais priedais papildyta Modified HTF HEPES terp taip pat numatyta naudoti pagal oocity vitrifikacijos protokol 2 Skystojo azoto ind pripildykite skystojo azoto iki 10 cm arba 4 coli gylio arba pakankamai kad b
18. kit stato progettato per essere utilizzato con il CryoTip Irvine Scientific N di catalogo 40709 o con la paillette HSV N di catalogo 019921 e il Kit di scongelamento dei campioni vetrificati Vit Kit Scongelamento per un recupero ottimale dei campioni DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Soluzione di Equilibrazione ES e una soluzione di tampone di HEPES di Medio 199 che contiene solfato di gentamicin 35 g mL 7 5 v v di ogni DMSO e glicolo di etili ine e 20 v v di Siero di Dextran di Sostituto Soluzione di Vetrificazione VS e una soluzione di tampone di HEPES di Medio 199 che contiene solfato di gentamicina 35 ug mL e 15 v v di ogni DMSO e glicolo etinole 20 v v di Siero di Dextran di Sostituto e 0 5 di sucrosso Questi due soluzioni devono essere utilizzati in sequenza in accordo con il protocollo di micro goccia per disgelare passo a passo step wise microdrop vitrification protocol ASSICURAZZIONE DELLA QUALITA DEL PRODOTTO Le su le soluzione in Kit di Congelazione di Vit sono filtratti membrane e controllati assetticamente in accordo con tecniche di fabricazione che erano statti convalidatte per assicurare un livello di sterilita SAL di 103 Ogni lotto di Kit di Congelazione di Vit riceve i seguenti controlli Sol luzioni e CryoTips Endotossine via metodologia di LAL Biocompatibilita via assay di embrione di tope una cellula Sterilizzazione via il Test di Ster
19. 1560 1997 Walker DL Tummon IS Hammitt DG Session DR Dumesic DA Thornhill AR Vitrification versus programmable rate freezing of late stage murine embryos a randomized comparison prior to application in clinical IVF Reprod BioMed Online 8 558 568 2004 Kasai M Vitrification a refined strategy for the preservation of mammalian embryos Review J Mamm Ova Res 14 17 28 1997 Ohta N Nohara M and Kojimahara T Ultrarapid reezing of human embryos by vitrification method A case of delivery Jpn J Fertil Steril 41 276 279 1996 Feichtinger W Hochfellner C and Ferst C Clinical experience with ultra rapid freezing of embryos Hum Reprod 6 735 736 1991 Rall WF Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification Cryobiology 24 387 402 1987 Rall WF Fahy GM Ice free cryopreservation of mouse embryos at 196 C by vitrification Nature 313 573 575 1985 IrvineScientific 2511 Daimler Street Santa Ana California 92705 5588 Telephone 1 949 261 7800 1 800 437 5706 Fax 1 949 261 6522 www irvinesci com PN 40695 Rev 17
20. KVALIT TES NODRO IN ANA Vit Kit Freeze kidumi ir filtr ti caur membr nu un aseptiski apstr d ti saska ar ra o anas proced r m kas tiku as izv rt tas attiec b uz atbilst bu sterilit tes nodro in anas l menim SAL no 10 l dz 3 Katra Vit Kit Freeze s rija tiek test ta veicot turpm k min t s p rbaudes dumi un CryoTips Endotoks nu testu p c Limulus Amebocyte Lysate LAL metodes Biolo isk atbilst ba noteikta izmantojot peles embrija uzs jumu vien nas Sterilit te noteikta izmantojot pa reiz jo Savienoto Valstu Farmakopejas sterilit tes testu lt 71 gt Zi ojums par visiem rezult tiem ir pieejams konkr t s s rijas Anal zes sertifik t kuru var sa emt p c piepras juma NEPIECIE AMIE BET NEIETVERTIE MATERIALE Irvine Scientific CryoTip kataloga nr 40709 vai HSV salmi kataloga nr 0019921 Irvine Scientific savienot js kataloga nr 40736 vai cits adapters Sterili Petri trauki 50 X 9 mm Falcon 351006 vai l dzv rt gi Kriostobrini 4 5 ml vai m rgl zes vai kriostobri u lur t ji Modific ta HTF HEPES kataloga nr 90126 kult ru vide kas bag tin ta ar prote nu Vienreiz j s lieto anas cimdi Hamilton GASTIGHT lirce 50 ul kataloga nr 880901 vai cits aspir cijas r ks P rne anas pipetes gradu ta stikla pipetes vai mikropipetes ar uzga iem ar gala iek jo diametru 200 um
21. Marca 2 da CryoTip Agora observe directamente a CryoTip e Pipetman mais VS at Marca 3 O esp cime tem de estar colocado entre a Marca 2 ea Marca 3 Sele a quente selagem 1 a CryoTip ao nivel da Marca 1 ou mesmo abaixo dela e fa a deslizar a manga de cobertura met lica novamente para baixo para cobrir e proteger a extremidade fr gil da ponta Retire cuidadosamente o CryoTip do instrumento de aspira o e adaptador e em seguida vede termicamente Veda o n 2 na extremidade larga do CryoTip acima da Marca n 4 Mergulhe a CryoTip protegida directamente no azoto liquido arrefecendo a uma velocidade de 12 000 C min ver Figura 6b Carregar e vedar a palhinha HSV da seguinte forma Utilizando uma micropipeta deposite cuidadosamente a s amostra s na calha da vareta capilar a 1 mm da extremidade A gota que transporta a s amostra s ter de ser inferior a 0 5 ul M ximo de 2 ov citos ou embri es por cada vareta capilar Coloque imediatamente a vareta capilar e o manuseador na palhinha e empurre at que a por o rectangular do manuseador fique em contacto com a extremidade dilatada da palhinha Aperte ligeiramente a palhinha entre o dedo e o polegar e retire o dispositivo de inser o Segurando ainda a palhinha no lugar vede a extremidade aberta utilizando um vedante SYMS Segure na palhinha com uma pin a na rea da varet de manuseamento Mergulhe rapidamente toda a palhinha no LN n vertic
22. NIE u ywa podgrzewanego stolika mikroskopu w poni szych procedurach UWAGA Zminimalizowa dzia anie wiat a na pr bk podczas ustalania r wnowagi w roztworach ES i VS 1 Ogrza potrzebne ilo ci roztworu r wnowa cego ES i roztworu witryfikuj cego VS do temperatury pokojowej 20 27 C UWAGA Nale y unika wielokrotnego ogrzewania do temperatury pokojowej ca ych fiolek z ES i VS je eli za ka dym razem potrzebna jest tylko cz roztworu Lepiej jest rozdzieli obj to fiolki ka dego z roztwor w na porcje o jednakowej odmierzonej obj to ci kt ra ma by u yta i po rozdzieleniu umie ci porcje ponownie w temperaturze 2 8 C Zmodyfikowany HTF HEPES z bia kiem jest r wnie wymagany do protoko u witryfikacji oocytu Wype ni zbiornik z p ynnym azotem p ynnym azotem wystarczaj co aby uzyska g boko 4 cali lub ca kowicie zanurzy prob wk kriogeniczn na pr cie i umie ci blisko mikroskopu Do czy prob wk kriogeniczn lub kubek niezamkni ty do dolnego zacisku pr tu kriogenicznego i zanurzy w ciek ym azocie w celu przechowywania witryfikowanych pr bek Oznakowa ka d steryln szalk Petriego lub wieczko oraz urz dzenie do przechowywania Cryo i umie ci na etykiecie wszystkie niezb dne informacje Delikatnie odwraca ka d fiolk ES i VS dwukrotnie aby wymiesza zawarto przed u yciem Przygotowa naczynie z kroplami roztwor w do Pr
23. Utilizzando una micropipetta depositare attentamente ili campione i nella scanalatura dell asta capillare fino ad 1 mm dallestremita La goccia contenente ill campione i deve avere un volume inferiore a 0 5 ul E possibile inserire un massimo di 2 oociti o embrioni in ciascuna asta capillare Posizionare immediatamente l asta capillare e il manipolatore nella paillette e premere fino a quando la porzione rettangolare del manipolatore non entra in contatto con l estremit svasata della paillette Comprimere delicatamente la paillette tra pollice e indice e rimuovere il dispositivo di inserimento Mentre si tiene la paillette sigillare l estremit aperta utilizzando un sigillatore SYMS Tenere la paillette nella zona dell asta per la manipolazione utilizzando delle pinze Immergere rapidamente l intera paillette nell azoto liquido LN mantenendola in posizione verticale Agitare delicatamente la paillette nell azoto liquido LN per qualche secondo in modo da evitare la formazione di uno strato d aria isolante attorno alla paillette Posizionare la CryoTip o la paillette HSV vetrificate nel criotubo o nella coppa nel supporto cryocane riempiti con azoto liquido LN Al fine di proteggere la CryoTip o la paillette HSV vetrificate presenti nell azoto liquido tappare il criotubo 0 la coppa o unirlo capovolgendolo ad un altro criotubo non tappato Muovere la cisterna di LN vicino al crio co
24. Vitrification Freeze Kit Vit Kit Freeze Catalog No 90133 HSV Includes Eguilibration Solution ES white cap Vitrification Solution VS blue cap HSV Straw Sterile Catalog No 90133 SO Includes Equilibration Solution ES white cap Vitrification Solution VS blue cap For assisted reproductive procedures F r betreute fortpflanzungsverfahren Per tecniche di riproduzione assistita Para utilizaci n en t cnicas de reproducci n asistida Para utiliza o em t cnicas de reprodug o assistida Pro technologie asistovan reprodukce Til brug ved assisteret reproduktion Avusteisiin lis ntymismenettelyihin Ar pal gl dzek iem veicam m reprodukt v m proced r m Voor geassisteerde voortplantingsprocedures Dla procedur wspomagajacych rozrodczo Pentru asistent privind procedurile de reproducere F r procedurer f r assisterad reproduktion Kasutamiseks reproduktiivse abi protseduurides Assziszt lt reprodukci s elj r sokhoz Skirta pagalbinio apvaisinimo proced roms Yardimla reme prosediirleri icin Pour les techniques de procr ation m dicalement assist e m EI IrvineScientif 2x1 mL Vials 2x1 mL Vials 2 x 4 ct Packs 2x1 mL Vials 2x1 mL Vials Catalog Number Lot Number Sterilized using aseptic processing techniques filtration Expiration Year
25. 16 s l p sig a VS oldatoknak val kitetts gre CryoTip megt lt s re cseppfoly s nitrog nbe LN mer t s re s hossz id tartamra t rt n t rol s ra E term kek haszn lat ra vonatkoz an a tov bbi r szletek rt minden laborat riumnak a saj tos orvosi programjukra speci lisan kifejlesztett s optimaliz lt saj t laborat riumi elj r saikban s protokolljaikban kell ut nan znie T ROL SI UTASIT SOK S STABILIT S A felbontatlan fiol k h tve 2 C 8 C k z tt t roland k Az utas t soknak megfelel en t rolt Vitrification Freeze Kit oldatok stabilak a fiola c mk j n felt ntetett lej rati id pontig Az ed nyek felnyit sa ut n ne haszn lja a m diumokat nyolc 8 h tn l hosszabb ideig Mivel a term kben emberi eredet anyag van a t rol s sor n apr szemcs j r szecsk k keletkezhetnek Nem ismert hogy ez az apr szemcs j anyag hat ssal lenne a term k teljes tn ny re VINT ZKED SEK S FIGYELMEZTET SEK Ezt az eszk zt gy tervezt k hogy haszn lata az eszk z tervezett alkalmaz s t is mag ba foglal elj r sokban kik pzett szem lyzet ltal t rt njen Extra el vigy zatoss gk nt tan csoljuk hogy az el k sz t si elj r s sor n minden egyes Cryotipt vizsg ljanak meg alaposan amikor a kiveszik a csomagb l Haszn lat el tt megfelel nagy t st alkalmazva 40 szeres meg kell vizsg lni CryoTipeta sz ll t s sor n esetlegesen l
26. L hdemateriaalin luovuttajat on my s seulottu Creutzfeldt Jakobin taudin CJD altistusriskin varalta Pulloa ei saa k ytt jos sen steriili pakkaus on vahingoittunut VAROITUS Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa t m n v lineen myynnin vain l k rin toimesta tai m r yksest tapahtuvaksi LATVISKI PAREDZ T IZMANTO ANA Vit Kit sald anas komplekts ir paredz ts izmanto anai reprodukt vaj s proced r s ar pal gl dzek iem cilv ka ol nu MII un embriju no zigotas l dz blastocistas stadijai is komplekts ir izstr d ts lieto anai ar Irvine Scientific CryoTip kataloga nr 40709 vai HSV salmi u kataloga nr 019921 un Vitrifik cijas atsald anas komplektu Vit Kit Thaw lai nodro in tu optim lu paraugu atg anu PRODUKTA APRAKSTS Equilibration Solution ES ir barotnes materi la 199 HEPES bufer kidums kas satur gentamicina sulf tu 35 ml pa 7 5 no kop j tilpuma dimetilsulfoks da DMSO un etil nglikola un 20 no kop j tilpuma Dextran Serum Supplement Vitrifikacijas kidums VS ir barotnes materiala 199 HEPES bufer dums kas satur gentamicina sulf tu 35 ml pa 15 no kop j tilpuma dimetilsulfoks da DMSO un etil nglikola 20 no kop j tilpuma Dextran Serum Supplement un 0 5 M sukrozes Abus os dumus j izmanto noteikt sec b saska ar mikropilienu vitrifik cijas protokol nor d tajiem so iem
27. Selle tasakaalustamise ajal ESis seadke 1 50 pL VS lahuse tilka joon 7 n ite alusel ja valmistage CryoTip v i HSV k rs ette laadimiseks J rgige lal ra toodud protokolli Osa A Oots di MII vitrifikatsiooni protokoll etappe 8 kuni 16 milles on kirjeldatud VSi lahustega kokkupuude CryoTipi laadimine vedelasse l mmastikku LN kastmine ja pikaajaline s ilitamine Toodete kasutamise ksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle mis on v lja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks S ILITAMISJUHISED JA STABIILSUS Hoidke avamata viaalid k lmkapis temperatuuril 2 C 8 C Komplekti Vitrification Freeze Kitlahused on stabiilsed viaalide etiketile m rgitud kuup evani kui neid s ilitada vastavalt juhistele P rast konteinerite avamist rge kasutage s tmeid rohkem ui kaheksa 8 n dala jooksul nimp ritolu materjali olemasolu t ttu tootes v ib hoiustamisel selles tekkida tahkeid osakesi Teadaolevalt ei m juta seesugused tahked osakesed toote toimivust ETTEVAATUSABIN UD JA HOIATUSED See seade on ette n htud kasutamiseks tervishoiut tajatele es on saanud vastava koolituse kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal Soovitame valmistusprotseduuri k igus t iendava ettevaatusabin una iga Cryotip hoolikat kontrollimist selle pakendist v ljav tmisel Enne kasutamist tuleb Cry
28. Uwaga Osi ganie stanu r wnowagi oocytu w jest zako czone gdy grubo os onki przejrzystej i przestrzeni oko o tkowej s jednakowe Oocyt y osi d na dnie kropli w ci gu 3 minut Podczas czasu osi gania r wnowagi w ES3 Aseptycznie przenie jedna 1 50 uL kropl roztworu VS na 2 minuty przed zako czeniem procesu r wnowagi i przygotowania ko c wki CryoTip Ryc 3 lub s omki HSV Ryc 4 do nape niania Ko c wka CryoTip pod czy do strzykawki Hamiltona albo odpowiedniego narz dzia aspiracyjnego stosuj c cznik lub nasadk w celu zapewnienia szczelno ci po czenia UWAGA Nie zdejmowa os onki metalowej z cienkiej rozci gni tej ko c wki aby chroni j przed uszkodzeniem a do momentu pobrania pr bki Stomka HSV pod czy d u szy koniec niebieskiego plastikowego urz dzenia wprowadzaj cego do kolorowej ko c wki pa eczki manipulacyjnej Poni sze etapy 9 13 nale y wykona w 90 110 sekund UWAGA Nale y ograniczy poddawanie pr bek dzia aniu VS aby zapobiec cytotoksyczno ci Pr bka i ma j tendencj do unoszenia si na powierzchni VS dlatego te nale y dopasowa ostro mikroskopu aby utrzyma ci g wizualizacj podczas ekspozycji i umie ci ko c wk pipety transferowej w pobli u w celu upewnienia si o szybkim przemieszczaniu pomi dzy kroplami VS Odwo a si do Ryciny 5 Po osi gni ciu stanu r wno
29. VS 50 pl voor vitrificatieprotocol 1CryoTipofhetHSV buisje bevat max 2 monsters 1 Connector VITRIFICATIEPROTOCOL OPM de procedures moeten worden uitgevoerd bij omgevingstemperatuur 20 27 C Gebruik de verwarmde microscoopfase NIET voor de volgende procedures VOORZICHTIG beperk de blootstelling van monsters aan licht tijdens equilibratie in ES en VS oplossingen tot een minimum 1 Breng de benodigde hoeveelheid equilibratieoplossing ES en vitrificatieoplossing VS op omgevingstemperatuur 20 27 C OPMERKING Laat niet de gehele ampullen met ES en VS steeds op omgevingstemperatuur komen als u elke keer maar een deel van de oplossing nodig heeft Het is beter om de benodigde hoeveelheid te doseren en de ampullen meteen na dosering opnieuw bij 2 8 C te bewaren Modified HTF HEPES met eiwit is ook vereist voor het o cytvitrificatieprotocol Vul de vloeibare stikstoftank met vloeibare stikstof voldoende voor een diepte van 10 cm 4 inch of om het cryobuisje aan de cryohouder volledig onder te dompelen en plaats deze dichtbij de microscoop Bevestig een cryobuisje of beker zonder dop aan de onderste klem van een cryohouder en dompel deze onder in de vloeibare stikstof ter voorbereiding op de opslag van de gevitrificeerde monsters Bepaal het aantal te vitrificeren monsters Plak een sticker met de noodzakelijke informatie op elke steriele petrischaal of deksel en het Cryo opslagmedium Keer elke amp
30. Vit Kit Fagyaszt t az assziszt lt reproduktiv elj r sokban a hum n oocyt k MII s embri k zig t t l blastocyst ig vitrifik l s hoz val haszn latra tervezt k Jelen k szlet az Irvine Scientific ltal gy rtott CryoTip katal gussz m 40709 vagy HSV pipetta katal gussz m 019921 valamint Vitrification Thaw Kit Vit Kit Thaw eszk z kkel val haszn latra szolg l a mint k optim lis visszanyer se rdek ben TERM KLEIR S Az Equilibration Solution ES a Medium 199 nek egy HEPES el pufferolt oldata amely tartalmaz 35ug ml gentamicin szulf tot 7 5 v v mind dimetil szulfoxidb l DMSO mind pedig etil n glikolb l s 20 v v Dextran Serum Supplementet A vitrifik ci s oldat VS a Medium 199 egy HEPES el pufferolt oldata amely tartalmaz 35 g ml gentamicin szulf tot 15 v V t mind dimetil szulfoxidb l DMSO mind pedig etil n glikolb l 20 v V t Dextran Serum Supplement b l s 0 5 M szachar zt Ezt a k t oldatot egym st k vet en kell alkalmazni a l p sekben vegrehajtott mikrocsepp vitrifikaci s protokollnak megfelel en MIN S GBIZTOSIT S A Vit Kit Freeze oldatok membr nsz rtek s aszeptikusan k sz ltek olyan gy rt si elj r sokkal amelyek 10 sterilit s biztons gi szintre SAL valid ltak A Vit Kit Freeze minden egyes t tel t ellen rzik a k vetkez tesztekkel Oldatok s CryoTip k Endotoxin Limulus Amebocyte Lysate LAL m dsz
31. be egy percre 4 Olvasszabe H cseppj t az ES1 be l sd a 1 bra 1 ny l a transzfer pipetta hegy vel s engedje hogy a k t oldat spont n keveredjen 2 percig 5 Ezt k vet en egyes tse az ES2 2 ny l oldatot a kor bban egyes tett cseppekkel majd hagyja llni 2 percig 6 Vigye t az oocit ka t minim lis oldatt rfogattal az egyes tett cseppb l az ES3 cseppbe 6 10 percre Megjegyz s Az oocyt nak oocyt knak az ekvilibr ci ja az ES3 ban akkor teljes amikor a zona pellucida vastags ga s a perivitelline t r egyenl Az oocyta k 3 percen bel l le lepednek a csepp alj ra 7 Ezalatt az ekvilibr ci s id alatt az ES3 ben Adagoljon aszeptikusan egy 1 50 ul es csepp VS2 t percekkel a teljes ekvilibr ci el tt s k sz tse el a cryotip et 3 bra vagy HSV pipett t 4 bra a t lt sre CryoTip a szoros t m t s rdek ben egy csatlakoz vagy adapter seg ts g vel csatlakoztassa a Hamilton fecskend t vagy a megfelel felsz v eszk zt MEGJEGYZ S Hagyja a f m takar mandzsett t a finom v gen annak v delme rdek ben addig am g k szen nem ll a mint k bet lt s re HSV pipetta csatlakoztassa a k k m anyag behelyez eszk z hosszabb v g t a foganty sz nezett v g re 8 A k vetkez l p seket 9 14 90 110 m sodpercen bel l kell v grehajtani VIGY ZAT A mint k VS nek val kitetts g t korl tozni kell a citotoxicit s megel z se rd
32. el cual se suministra bajo solicitud MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO EN EL KIT CryoTip n de cat logo 40709 o pajuela HSV n de cat logo 019921 de Irvine Scientific Conector de Irvine Scientific n de cat logo 40736 u otro adaptador Placas de Petri est riles 50 x 9 mm Falcon 351006 o equivalentes Criotubos 4 5 mL o goblets y cestas de congelaci n Medio de cultivo HTF modificado HEPES n de cat logo 90126 suplementado con prote na Guantes desechables Jeringa Hamilton GASTIGHT 50 uL n de cat logo 80901 u otra herramienta de aspiraci n Pipetas de tranferencia pipetas de cristal estiradas o puntas de micropipeta con un di metro interior de aprox 200 um Pinzas Selladora por impulsos de calor Sellador SYMS para la pajuela HSV n de cat logo 016296 Cron metro o reloj Contenedor de nitr geno l quido contenedor Dewar o Styrofoam con tapa con capacidad para 1 2 L Nitr geno l quido volumen suficiente para conseguir una profundidad en el contenedor de unos 10cm INSTRUCCIONES DE USO Componentes del Vit Kit Freeze necesarios para cada aplicaci n Soluci n equilibrante ES 60 pL para el Protocolo de Vitrificaci n de Oocitos o 50 UL para el Protocolo de Vitrificaci n de Embriones Soluci n de Vitrificaci n VS 50 pL para el Protocolo de Vitrificaci n 1CryoTip o pajuela HSV puede almacenar hasta 2
33. laikytum te CryoTip ar HSV Siaudelj skystame azote 12 Skystojo azoto LN ind nusine kite prie LN krio aldiklio ir kriogenin laikikl su jo turiniu perkelkite krio aldikl ilgalaikiam saugojimui B EMBRION nuo probranduoli stadijos iki blastocistos vitrifikacijos protokolas 1 Laikydamiesi aseptikos reikalavim u la inkite vien 50 pl ES tirpalo la and vidin s Petri l k tel s dangtelio pus s 2 I inkubatoriaus i imkite auginamos embriono u kult ros l k tel ir mikroskopu patikrinkite m ginio i kokyb Jei yra galimyb vitrifikacijai atrinkite tik pa ios geriausios kokyb s embrion us 3 traukdami kaip galima ma esn pas lio l k tel s terp s kiek atsargiai perkelkite m gin ne daugiau kaip du vienu kartu ant ES tirpalo la o Embrionai ES la e iki pusiausvyros b senos turi nusistov ti l tai laisvai nus sdami per 6 10 minu i Pastaba M ginys susitrauks o po to pama u gr savo pradinio dyd io b sen tai bus enklas kad pusiausvyra yra pasiekta PERSP JIMAS Pusiausvirinimo ES ir VS la uose metu reikia kiek manoma suma inti viesos poveik m giniui iams 4 iuo pusiausvirinimo ES tirpale metu Paruo kite 1 50 HL VS tirpalo la us kaip parodyta 7 pav ir paruo kite pripildyti CryoTip ar HSV iaudel Laikykit s anks iau pateikt 8 16 etap nurodym A skyrius oocit II metafazin
34. n Dikkat Federal ABD yasalar bu cihaz n bir doktor taraf ndan sat lmas veya sipari edilmesi s n rlamas n getirmektedir REFERENCES 1 Kuwayama M Vajta G Kato O Liebo SP Highly efficient vitrification of human oocytes RBM Online 11 300 308 2005 2 Stehlik E Stehlik J Katayama KP Kuwayama M Jambor V Brohammer R Kato O Vitrification demonstrates significant improvement versus slow freezing of human blastocysts RBM Online 11 53 57 2005 3 Takahashi K Mukaida T Goto T Oka C Perinatal outcome of blastocyst transfer with vitrification using cryoloop a 4 year follow up study Fertil Steril 84 88 92 2005 4 Kuwayama M Vajta G leda S Kato O Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and the elimination of potential contamination RBM Online 11 608 614 2005 5 Cremades N Sousa M Silva J Viana P Sousa S Oliveira C Teixeira de Silva J Barros A Experimental vitrification of human compacted morulae and early blastocysts using fine diameter plastic micropipettes Human Reproduction 19 300 305 2004 6 Mukaida T Nakamura S Tomiyama T Wasa S Oka C Kasai M Takahashi K Vitrification of human blastocysts using cryoloops clinical outcome of 223 eycles Hum Reprod 18 384 391 2003 7 Yoon TK Kim TJ Park SE Hong SW Ko JJ Chung HM Cha KY Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization embryo transfer program Fe
35. p zona pellucida og det perivitelline mellemrum har samme storrelse Oocytten oocytterne vil bundf lde i bunden af dr ben inden for 3 minutter 7 Under ekvilibreringstiden i ES3 Anvend aseptisk teknik og dispenser 1 50 ul dr be VS 2 minutter inden fuldfort ekvilibrering og forbered CryoTip en fig 3 eller HSV str et fig 4 til at blive fyldt CryoTip tilslutter til Hamiltonsprojten eller det passende aspirationsredskab ved hj lp af en konnektor eller adapter for at sikre en taet forsegling BEM RK Hold d kh tten af metal over den fine trukne spids for at beskytte den indtil du er klar til at inds tte prover HSV r r forbinder den lange ende af den bla indforingsanordning af plastik til den farvede ende p h ndteringsstangen 8 Folgende trin 9 13 skal udfores p 90 110 sekunder FORSIGTIG Eksponering af prover for VS skal begreenses for at forhindre cytotoksicitet Proven proverne har tendens til at flyde i VS Derfor skal fokus justeres p mikroskopet for at vedligeholde kontinuerlig visualisering under eksponering Hold spidsen af transferpipetten taet p for at sikre hurtig overforsel mellem VS dr berne Se figur 5 9 N r ekvilibrering i ES er faerdig tr kkes noget ES op i transferpipetten Overfor proven proverne med minimal volumen fra ES dr ben til dr be VS i 30 sekunder 10 Indfor og varmeforsegl CryoTip en som 11 12 folger Se figur 6a Tr k beskyttelsesmanch
36. soluci n de la gota combinada a la gota ES3 por un periodo de 6 a 10 minutos NOTA el equilibrado de los oocitos en ES3 se habr completado cuando el grueso de la zona pellucida y el espacio perivitelino sean iguales El oocito s se asentar al fondo de la gota en unos 3 minutos 7 Durante este tiempo de equilibrado en ES3 En condiciones de esterilidad dispense una 1 gota de 50 uL de soluci n VS dos 2 minutos antes de terminar el equilibrado y prepare la CryoTip Fig 3 o pajuela HSV Fig 4 para la carga CryoTip conectar a la jeringa Hamilton o a una herramienta apropiada de aspiraci n mediante un conector o adaptador para asegurar un cierre herm tico NOTA Mantenga la cubierta de metal sobre la punta fina estirada para protegerla hasta que se vayan a cargar las muestras Pajuela HSV conectar el extremo m s largo del dispositivo de inserci n azul de pl stico al extremo de color del manipulador 8 Los siguientes pasos 9 13 deben llevarse acabo en 90 110 segundos PRECAUCI N debe limitarse la exposici n de las muestras a la VS para impedir el efecto citot xico Dado que las muestras tienden aflotar en la VS ajuste el microscopio para 10 11 12 mantener un control visual continuado durante la exposici n y mantenga la punta de la pipeta de transferencia cerca para asegurar una transferencia r pida entre las gotas de VS Ver figura 5 Al completar el equilibrado en ES aspire un p
37. trej tt k rosod sokra hegyek t r sei vagy reped sek Ne haszn lja a m dium olyan fiol j t ami r szecsk k jelenl t t vagy zavaross g jel t mutatja A szennyez ssel j r probl m k elker l se rdek ben aszeptikus technik k alkalmaz s val kezelje A Vitrification Freeze Kit oldatok a gentamicin szulf t antibiotikumot tartalmazz k Megfelel el vigy zatoss gi int zked seket kell tenni arra hogy biztos tsa a beteg ne legyen szenzitiz lt erre az antibiotikumra Jelenleg a kutat si szakirodalom alapj n a vitrifik ci hossz t v hat sai tov bbra is ismeretlenek Az ezen term k elk sz t s hez haszn lt emberi v rsz rmaz kokat FDA ltal enged lyezett k szletekkel megvizsg lt k s reakci mentesnek tal lt k a Hepatitis B felsz ni antig nre HBsAg a Hepatitis C antitestekre HCV s az Emberi Inmunhi ny el id z V rus antitestekre HIV Azonban semmilyen vizsg lat nem ny jt teljes garanci t hogy az emberi sz rmaz kos term kek nem fert z ek Minden emberi v rsz rmaz kot gy kell kezelni mintha k pesek lenn nek terjeszteni a fert z st s ltal nos el vigy zatoss got kell gyakorolni A forr sanyagot ad kat is sz rt k a Creutzfeldt Jakob betegs gnek val kitetts g kock zat ra CJD Ne haszn ljon olyan veget amelyben a steril csomagol s vesz lybe ker lt VIGY ZAT A Sz vets gi US t rv ny korl tozza ennek az eszk
38. 50 uL VS 2 damlas n koyun ve CryoTip ekil 3 veya HSV payeti ekil 4 k sm n y kleme i in haz rlay n Kriyo Ug S k yal t m sa lamak i in bir konnekt r veya adapt r kullanarak Hamilton siringasina veya uygun aspirasyon arac na ba lay NOT Metal kapak man onunu ince ekmeli ucun zerinde tutarak numuneleri y klemeye haz r oluncaya kadar koruyun HSV Payet Mavi plastik insersiyon cihaz n n uzun ucunu kavrama kolunun renkli ucuna ba lay A a daki ad mlar 9 13 90 110 saniye aras nda tamamlanmal d r D KKAT Sitotoksisiteyi nlemek i in rneklerin VS ye maruziyeti s n rlan mal d r rnekler VS te y zme e ilimindedir dolay s yla klama s ras nda s rekli g r nt lemeyi s rd rmek i in mikroskoptan oda ayarlay n ve VS damlalar n n h zl transferini sa lamak i in transfer pipetinin ucunu yak nda tutun Bkz ekil5 ES de dengeleme tamamland ktan sonra bir miktar ES yi transfer pipetine ekerek 30 saniye boyunca rnekleri minimal hacimle ES damlasindan VS nin ilk damlas n n merkezine aktar n Kriyo Ucu a a daki gibi Bkz ekil 6a y kleyin ve s cak m h r bas n nce ucu a a karmak i in metal kapak mansonu Kriyo U boyunca kayd r n Mikroskop alt nda inceleme s ras nda Kriyo Ucu ve Hamilton r ngas n tutarak VS nin k k bir hacmini Kriyo U zerinde dikkatli bir ekilde aret 1 e aktar n Mikros
39. CryoTip seja cuidadosamente examinada quando for retirada da embalagem Antes de utiliz las as Cryotips devem ser examinadas sob uma ampliag o adequada 40X para inspeccionar possiveis danos tais como quebras ou fissuras que podem ter ocorrido durante o transporte N o utilize um frasco de solug o com particulas ou turvag o Para evitar problemas com contaminag o manipule com t cnica ass ptica As solu es do Vitrification Freeze Kit cont m o antibi tico sulfato de gentamicina Devem ser tomadas as precaug es adeguadas para assegurar gue o doente n o 6 sensivel ao antibi tico Actualmente a literatura de investiga o indica gue os efeitos a longo termo da vitrificag o sobre os embri es permanecem desconhecidos Os derivados de sangue humano usados no fabrico deste produto foram testados por kits aprovados pela FDA tendo se comprovado serem n o reactivos ao antigenio de superficie da Hepatite B HBsAg anticorpos Hepatite C HCV e anticorpos ao Virus de Imunodefici ncia Humana VIH No entanto nenhum m todo de teste oferece uma garantia completa de gue os produtos derivados de origem humana n o sejam infecciosos Manuseie todos os derivados de sangue humano como se fossem passiveis de transmitir infec es utilizando precau es universais Os dadores do material de origem foram ainda rastreados guanto ao risco de exposi o Doenga de Creutzfeldt Jakob CJD N o use nenhum frasco em que
40. ES ten 20 HLlik damlalar ekil 1 de g sterildi i gibi steril petri taba n n ters evrilmi kapa zerinde birbirine yak n bir ekilde koyun ve taba mikroskop tablas na yerle tirin birtane 20 uL Modifiye HTF proteinli HEPES damlas tane 20 toplam 60 uL ES ES1 ES2 ES3 damlas MII oositlerini i eren k lt r taba n ink bat rden kar n ve mikroskop alt nda rneklerin kalitesini kontrol edin M mk n oldu u durumlarda yaln zca en iyi kalite MII evresi oosit ler ini se in D KKAT H ES ve VS damlalar nda dengeleme s ras nda rneklerin a maruziyetini minimize edin Minimal medyum hacmiyle oositi bir kerede en fazla 2 tane k lt r tabagindan ink bat rde al p bir dakika i in 20 pl lik bir H damlas na aktar n H damlas n transfer pipetinin ucunu kullanarak ES1 le birle tirin Bkz ekil 1 ok 1 ve 2 dakika boyunca iki sol syonu spontan kar maya b rak n Sonra ES2 damlas n ok 2 daha nce birle tirilen damlalarla birle tirin ve 2 dakika b rak n Oositifoositleri birle tirilmi damladan ES3 damlas na minimum sol syon hacmiyle 6 10 dakikal na aktar n Not Zona pellucida ve perivitellin alan n n kal nl e it oldu unda ES3 teki oositlerin dengelenmesi tamamlanm t r Oositler 3 dakika i inde damlan n dibine oturacakt r ES3 i indeki dengelenme s reci i inde Dengelenme tamamlanmadan 2 dakika nce aseptik olarak 1
41. Month Day Caution See instructions for use Storage Temperature Manufacturer CE Mark MPIE Schutweg 13a 5145 NP Waalwijk The Netherlands IC Figure 1 H Modified HTF with HEPES 90126 protein ES Equilibration Solution 90131 Os 2min 290 2 min 20 6 10 min Figure 2 Figure 3 Prepare CryoTip for loading Connector or adaptor CryoTip i 2m gt Hamilton n or 7 Cover Sleeve appropriate aspiration tool Figure 4 Prepare HSV straw for Loading ZET a N Insertion device Capillary tube Figure 5 C Drop of VS VS Load CryoTip 6 10 min 30 Seconds HSV Straw pipette once within 110 seconds after to rinse exposure to VS drop Figure 6a Seal 2 Mark 4 Metal Cover Mark 3 Sleeve Mark 2 Mark 1 Seal 1 w Figure 6b Cryocane Goblet T CryoTip HSV Straw Eigure 7 C ON Load CryoTip HSV Straw within 110 sec after sou ES VS exposure to VS drop Drops 6 10 min 30 Sec pipette once to rise ENGLISH INTENDED USE Vi Kit Freeze is intended for use in assisted reproductive procedures for vitrification and storage of human oocytes MII and embryos zygote to blastocyst This kit is designed for use with Irvine Scientific s CryoTip Catalog No 40709 or Ki PRODUCT DESCRIPTION HSV Straw Catalog No 019921 and Vitrification Thaw Vit Kit Thaw for optimal recovery of specimens Equil
42. Mostra rele tinde s noate n VS deci ajustati focalizarea microscopului pentru a men ine o vizualizare continu n timpul expunerii i ine i v rful pipetei de transfer n apropiere pentru a asigura transferul rapid ntre pic turile VS Vezi Figura 5 9 Dup ce a i terminat echilibrarea n ES trage i n pipet de trasnfer putin ES i transfera i mostra ele cu un volum minim de ES n pic turi de VS pentru 30 secunde 10 nc rcati i etansati la cald CryoTip ul dup cum urmeaz A se vedea Figura 6a Glisati mansonul metalic n sus de a lungul CryoTip ului pentru a expune v rful fin i fragil Manipulati CryoTip i seringa Hamilton n timp ce observa i sub microscop aspirati cu grij un volum mic de VS p n la semnul 41 de pe CryoTip Continuati observarea sub microscop si aspirati cu grij mostra cu VS p n la semnul 2 de pe CryoTip Acum pute i observa direct CryoTip ul gi aspirati mai mult VS p n la semnul 43 Mostra trebuie pus ntre semnele 2 si 3 Lipitila c ldur sigilul 1 CryoTip ul pe sau numai sub semnul 1 i glisati man onul napoi n jos pentru a acoperi i proteja v rful fragil fin Scoateti cu grij CryoTip ul din instrumentul de aspirare i din adaptor i apoi etansati la cald Sigiliu nr 2 de la cap tul gros al CryoTip ului deasupra Semnului nr 4 Impingeti CryoTip acoperit direct n azotul lichid r cind la o
43. Nej pou vejte dnou lahev s po kozen m steriln m balen m POZOR Feder ln z kony USA omezuj prodej tohoto za zen pouze na l ka e nebo na jeho p edpis DANSK ANVENDELSE Vit Kit Freeze er beregnet til brug ved assisteret reproduktionsprocedurer for vitrifikation og opbevaring af humane oocytter MII og embryoner zygoter til blastocyster Dette kit er designet til brug sammen med Irvine Scientifics CryoTip Katalognr 40709 eller HSV ror Katalognr 019921 og Vitrification Thaw Kit Vit Kit Thaw for optimal gendannelse af prover PRODUKTBESKRIVELSE Eguilibration Solution ES er en HEPES bufret oplasning af Medium 199 indeholdende gentamicinsulfat 35 ug ml 7 5 96 vol vol af hver dimethylsulfoxid DMSO og ethylenglykol samt 20 vol vol Dextran Serum Supplement Vitrifikationsoplosning VS er en HEPES bufret oplosning af Medium 199 indeholdende gentamicinsulfat 35 ug ml 15 vol vol af hver dimethylsulfoxid DMSO og ethylenglykol 20 vol vol Dextran Serum Supplement og 0 5 M saccharose Disse to opl sninger skal bruges i r kkef lge i henhold til den trinvise protokol for vitrifikation af mikrodr ber KVALITETSSIKRING Oplosningerne i Vit Kit Freeze er membranfiltrerede og aseptisk fremstillet iht procedurer som er blevet valideret og opfylder et sterilitetssikkringsniveau SAL p 10 Hvert parti Vit Kit Freeze underg r folgende test Oplosninger og CryoT
44. Ol nu vitrifik cijas protokols nosaka ka nepiecie ams izmantot ar Modified HTF HEPES ar prote nu 2 lepildiet idro sl pekli idr sl pek a rezervu r lai dzi ums b tu 4 collas vai lai var tu piln b piepild t kriostobri u vai stobri u tur t ju un novietojiet mikroskopa tuvum Aplieciet kriostobri am vai m rgl zei bez aizb a stobri u tur t ja apak jo skavu un iem rciet idr sl pekl lai uzglab tu vitrific tos paraugus Nosakiet paraugu skaitu kurus nepiecie ams vitrific t 4 Pievienojiet uzl mi katram sterilajam Petri traucinam vai v ci am un kriouzglab anas ier cei ar nepiecie amo inform ciju 5 Uzman gi divas reizes apv rsiet katru ES un VS flakonu lai saturs pirms lieto anas sajauktos 6 Sagatavojiet trauci u ar dumu pilieniem vitrifik cijas proced rai k nor d ts turpm k o A OL NU MII vitrifik cijas protokols PIEZ ME Embriju vitrifik cijas protokolu skatiet noda B 1 lev rojot aseptikas noteikumus oti tuvu uzpiliniet 20 ul piliens kult ru vides modific tu HTF HEPES ar prote nu un ES uz otr di apv rsta sterila Petri trauci a v ka k nor d ts 1 att l un novietojiet trauci u uz mikroskopa platformas viens 20 ul piliens modific ta HTF HEPES ar prote nu tris 20 pil pilieni kop 60 pl ES ES1 ES2 ES3 2 Iznemiet no inkubatora kult ras trauci u ar MII ol n m
45. Pincete Siltumdro s impulsu nosl gs 5 hermetiz t js HSV salminam kataloga nr 016296 Hronometrs vai taimeris e idr sl pek a rezervu rs Dewar vai Styrofoam konteiners ar v ku tilpums 1 2 Skidrais sl peklis pietiekams daudzums kad rezervu r iepild ts 4 collu augstum LIETO ANAS NOR D JUMI Nosac jumi Vit Kit sald anas komplekta sast vda m vienai izmanto anai Equilibration Solution ES 60 ul ol nu vitrifik cijas protokolam Vai 50 ul embriju vitrifik cijas protokolam Vitrifik cijas dums VS 50 pl vitrifik cijas protokolam 1 CryoTip stobri vai HSV salminu iesp jams uzglab t l dz 2 paraugiem 1 Savienot js VITRIFIK CIJAS PROTOKOLS PIEZ ME Proced ras j veic istabas temperat r 20 27 C NELIETOJIET turpm k min taj m proced r m sasild tu mikroskopa priek metstikli u BR DIN JUMS Samaziniet l dz minimumam paraugu pak au anu gaismas iedarb bai stabiliz cijas laik ES un VS dumos 1 Sasildiet l dzsvaro anas duma ES un vitrifik cijas duma VS daudzumu l dz istabas temperat rai 20 27 C PIEZ ME Nesildiet atk rtoti visu ES un VS flakonu saturu l dz istabas temperat rai ja katru reizi ir nepiecie ama tikai dala no duma Ieteicams atdal t daudzumu kas tiks izmantots un uzreiz p c daudzuma atdal anas atkal atdzes t flakonus l dz 2 8 C temperat rai
46. Som en ekstra forholdsregel under forberedelsen tilr des det at hver Cryotip undersages noje n r den tages ud af emballagen Inden brug skal CryoTips undersoges under passende forstarrelse 40x for mulig beskadigelse s som brud p eller revner i spidserne som kan vaere opst et under transport Anvend ikke heetteglas med oplosninger der indeholder partikler eller er uklare Undg problemer med kontamination ved at bruge aseptiske teknikker Vitrification Freeze Kit oplosninger indeholder antibiotikummet gentamicinsulfat Passende forholdsregler skal overholdes for at sikre at patienten ikke er sensibiliseret mod dette antibiotikum Langtidsvirkningerne af vitrifikation af embryoner forbliver ukendt ifolge forskningslitteraturen Humane blodprodukter anvendt i fremstillingen af dette produkt er blevet testet med kit licenseret af FDA og fundet at veere ikke reaktive over for hepatitis B overfladeantigen HBsAg antistoffer mod hepatitis C HCV og antistoffer mod human immundefekt virus HIV Der findes dog ingen testmetoder som kan give fuldst ndig garanti for at produkter udvundet fra humane kilder er ikke infektigse Alle humane blodprodukter skal h ndteres som om de var i stand til at overfgre infektion ved at tage universelle forholdsregler Donorer af kildematerialet er desuden blevet screenet for risiko for eksponering for Creutzfeldt Jakobs sygdom CJD Anvend ikke nogen flasker hvor den sterile em
47. VS va 6 g A QOKYTTAPON MII BA B 1 20 uL am HEPES ES Petri 20 UL HEPES 20 uL 60 HL ES ES1 ES2 ES3 2 To MII wokUrrapa
48. aseptische Methoden veredelt Diese Fertigungsverfahren sind best tigt worden ein Sterility Assurance Level SAL von 103zu erf llen Jedes Los von Vit Kit Thaw wird durch Folgendes erprobt L sungen und CryoTips Endotoxin durch LAL Methoden Biokompatibilit t durch Mouse Embryo Assay eine Zelle Sterilit t durch aktuellen USP Sterility Test 71 Alle Ergebnisse werden auf einem Los spezifischen Analysenzeugnis berichtet das auf Antrag erh ltlich ist N TIGE ABER NICHT BELIEFERTE MATERIALEN Irvine Scientific CryoTip Katalog Nr 40709 oder HSV Straw Katalog Nr 0019921 Irvine Scientific Konnektor Katalog Nr 40736 oder anderer Adapter Sterile Petrischalen 50 x 9 mm Falcon 351006 oder quivalent Kryorohre 4 5 mL oder Becher und Cryocanes Tieftemperaturst cke Modified HTF HEPES Katalog Nr 90126 Kulturmedium mit Protein Wegwerfbare Handschuhe Hamilton GASTIGHT Spritze 50 ul Katalog Nr 80901 oder anderes Aspirationswerkzeug Transferpipetten Pipetten aus gezogenem Glas oder Micropipette D sen dessen inneren Durchmesser 200 um ist Pinzette Impulse Heat Sealer SYMS Sealer f r HSV Straw Katalog Nr 016296 Stoppuhr oder Zeitgeber Beh lter f r fl ssigen Stickstoff Dewar oder Styropor Beh lter mit Deckel Volumen von 1 2 Fl ssiger Stickstoff mit ausreichendem Volumen eine Tiefe von 4 Zoll im Beh lter zu erreichen GEBRAUCHS
49. avsedd Som en extra f rsiktighets tg rd under f rberedelseproceduren rekommenderar vi att varje Cryotip unders ks noga n r den tas ut ur f rpackningen CryoTips skall unders kas f re anv ndning i l mplig f rstoring 40x f r eventuella skador som t ex brott p spetsarna eller sprickor som kan ha uppst tt under transporten Anv nd inga ampuller med l sning som inneh ller partiklar eller r grumliga Anv nd aseptisk teknik vid hantering s att kontamination undviks Vitrification Freeze Kit l sningarna inneh ller antibiotikat gentamicinsulfat Adekvata f rsiktighets tg rder skall vidtas f r att s kerst lla att patienten inte r allergisk mot detta antibiotikum Forskningslitteraturen anger att de l ngsiktiga effekterna p embryon av vitrifiering f r n rvarande r ok nda Humana blodderivat som anv nds i framst llningen av denna produkt har testats med FDA godk nd testutrustning och befunnits vara icke reaktiva med avseende p hepatit B ytantigen HBsAg antikroppar mot hepatit C HCV och antikroppar mot humant immunbristvirus HIV Det finns emellertid ingen testmetod som fullst ndigt kan garantera att produkter som utvunnits ur humana k llor r icke smittsamma Hantera alltid humana blodderivat som om de skulle kunna verf ra smitta med anv ndande av allm nt vedertagna f rsiktighets tg rder K llmaterialets donatorer har ocks screenats med avseende p ris
50. capable of transmitting infection using universal precautions Donors of the source material have also been screened for risk of exposure to Cruetzfeldt Jakob Disease CJD Do not use any bottle in which the sterile packaging has been compromised Caution Federal U S law restricts this device to sale by or on the order of a physician DEUTSCH BESTIMMUNGSZWECK Vit Kit Freeze ist f r betreute Fortpflanzungsverfahren und ist zur Verglasung und zum Lager von menschlichen Oozyten MII und Embryos Zygote bis zu Blastozyste bestimmt Dieses Kit ist f r den Gebrauch mit dem CryoTip Katalog Nr 40709 oder HSV Straw Katalog Nr 019921 und dem Vitrification Thaw Kit Vit Kit Thaw von Irvine Scientific f r optimale Probenr ckgewinnung vorgesehen PRODUKTBESCHREIBUNG Equilibration Solution ES ist eine HEPES gepufferte L sung von Medium 199 Die L sung beinhaltet Gentamicinsulfat 35 ug ml 7 5 v v von DMSO und auch von Ethylenglykol und 20 v v Dextran Serum Supplement Vitrification Solution VS ist eine HEPES gepufferte L sung von Medium 199 Die L sung beinhaltet Gentamicinsulfat 35 ug ml 15 v v von DMSO und auch von Ethylenglykol 20 v v Dextran Serum Supplement und 0 5 M Saccharose Diese zwei L sungen sollen in Folge nach dem schrittweisen Verglasungsprotokoll f r Microtropfen gebraucht werden QUALIT TSSICHERUNG Die L sungen in Vit Kit Freeze werden durch Membranfilter und
51. cy spos b Zapomoca mikropipety ostro nie umie ci pr bke pr bki w rowku pa eczki kapilamej w odleg o ci 1 mm od ko ca Kropla zawieraj ca pr bk pr bki nie mo e by wi ksza ni 0 5 jul Maksymalnie 2 oocyty lub embriony na ka d pa eczk kapilarn Niezw ocznie umie ci pa eczk kapilarn oraz r koje ws omce i popycha do momentu gdy prostok tna cz r koje ci dotknie poszerzonego ko ca s omki Lekko zacisn s omk pomi dzy kciukiem a palcem i wysun urz dzenie wprowadzaj ce Nadal trzymaj c s omk w tej samej pozycji zamkn otwarty koniec za pomoc zamkni cia SYMS Za pomoc pincety przytrzyma s omk w obszarze pa eczki manipulacyjnej Szybko zanurzy ca s omk w ciek ym N w pozycji pionowej Delikatnie miesza s omk w ciek ym N przez kilka sekund w celu unikni cia powstania izoluj cej warstwy powietrza wok s omki 11 Umie ci zeszklon ko c wk CryoTip lub s omk HSV w zanurzonej wype nionej ciek ym N kriopr b wce lub kielichu na uchwycie cryocane Zamkn kriopr b wk lub kielich korkiem albo na o y inn niezamkni t kriopr b wk odwr con do g ry dnem celem zabezpieczenia zeszklonej ko c wki CryoTip lub s omki HSV w ciek ym azocie 12 Przysun zbiornik z p ynnym azotem LN blisko zamra arki kriogenicznej LN i przenie pr t kriogeniczny z zawarto ci do zamra arki kriogenicznej w celu
52. den vitrifizierten CryoTip oder HSV Straw in Fl ssigstickstoff zu sichern 12 Bewegen Sie den LN Beh lter beim LN Kryo K hlschrank und versetzen Sie den Cryocane mit Inhalt in den Kryo K hlschrank f r langfristiges Lager B Verglasungsprotokoll f r EMBRYOS PN bis zu Blastozysten 1 Verteilen Sie aseptisch einen 50 ul Tropfen ES auf einen umgekehrten Deckel einer Petrischale 2 Nehmen Sie die Kulturschale mit Embryo s aus dem Brutschrank und priifen Sie unter Mikroskop die Qualit t des Musters Wenn m glich w hlen Sie f r Verglasung nur den die Embryo s von h chster Qualit t 3 Versetzen Sie behutsam mit minimalem Volumen N hrboden das Muster bis zu zwei jeweils von der Kulturschale zum des ES Tropfen Starten Sie den Zeitgeber Embryos sollen f r 6 10 Minuten langsam durch freien Fall im ES Tropfen quilibrieren Hinweis Das Muster wird schrumpfen und dann allm hlich zur ck zur urspr nglichen Gr e vergr ern Dies zeigt dass die quilibrierung fertig ist VORSICHT Minimieren Sie Kontakt des Musters mit Licht w hrend der quilibrierung in ES und VS Tropfen 4 W hrend dieser quilibrierungszeit in ES 1 50 Tropfen der VS L sung wie in Abb 7 gezeigt vorbereiten und den CryoTip oder HSV Straw zum Laden vorbereiten Folgen Sie dem Protokoll wie oben angewiesen Teil A Verglasungsprotokoll f r Oozyten MIIJ von Schritten 8 durch 16 fiir Kontakt mit VS L su
53. dicho antibi tico En la actualidad la bibliograf a indica que los efectos a largo plazo de la vitrificaci n de embriones son a n desconocidos Los hemoderivados humanos utilizados en la fabricaci n de este producto han sido probados mediante kits autorizados por la FDA y se ha determinado que no son reactivos para el ant geno de superficie de la hepatitis B HBsAg los anticuerpos frente a la hepatitis C VHC ni los anticuerpos frente al virus de inmunodeficiencia humana VIH Sin embargo ning n m todo anal tico ofrece garant as absolutas de que los productos derivados de fuentes humanas no sean infecciosos Manipule todos los hemoderivados humanos como si fueran capaces de transmitir infecciones utilizando precauciones universales Los donantes del material fuente tambi n se han sometido a pruebas de detecci n del riesgo de exposici n a la enfermedad de Cruetzfeldt Jakob ECJ No usar frascos en los que el envase est ril est da ado PRECAUCI N Las leyes federales U S restringen la venta de este producto a la prescripci n de un facultativo FRANCAIS UTILISATION Vit Kit Freeze est pr vu pour la vitrification et la conservation des ovocytes M II et des embryons zygote au blastocyste humains lors des proc d s de procr ation m dicalement assist e Ce kit est con u pour tre utilis avec le CryoTip r f rence du catalogue 40709 ou l ensemble jonc capillaire du kit de vitrification h
54. e VS Transfira o o cito at 2 ao mesmo tempo com um volume m nimo de meio da placa de cultura na incubadora para o interior da gota de 20uL de H durante 1 minuto Funda a gota de H com o ES1 ver Fig 1 seta 1 com a ponta da pipeta de transfer ncia e deixe que a mistura das 2 solu es se d espontaneamente durante 2 minutos Em seguida funda a gota de ES2 seta 2 com as gotas anteriormente fundidas e deixe repousar durante 2 minutos Transfira o s o cito s da gota resultante da fus o com um volume m nimo para a gota ES3 por 6 a 10 minutos Nota o equil brio do s o cito s em ES3 estar completo quando a espessura dos espa os da zona pel cida e espa o perivitelino s o iguais O s o cito s v o assentar no fundo da gota no espa o de 3 minutos Durante o tempo de equil brio em ES3 Disponha assepticamente uma 1 gota de 50 uL de VS 2 minutos antes de completar a calibra o e prepare a cryotip fig 3 ou palhinha HSV Vitrifica o de alta seguran a fig 4 para carregamento CryoTip unir a seringa Hamilton ou um instrumento de aspira o apropriado utilizando um conector ou adaptador para garantir uma veda o estanque NOTA conserve a manga met lica de cobertura sobre a ponta fina exposta para a proteger at que esteja pronto para carregar as amostras Palhinha HSV unir a extremidade mais longa do dispositivo de pl stico azul extremidade colorida da vareta de m
55. embri vitrifik l si protokollhoz Vitrifik ci s oldat VS 50 ula vitrifik ci s protokollhoz 1 CryoTip vagy HSV pipetta maximum 2 minta t rol s ra 1 sszek t cs VITRIFIK CI S PROTOKOLL MEGJEGYZES Az elj r sokat szobah m rs kleten 20 27C kell v grehajtani NE haszn ljon melegitett mikroszk p llv nyt a k vetkez elj r sokn l VIGY ZAT Minimaliz lja a minta f nynek val kitetts g t az ES s VS oldatokkal t rt n ekvilibr ltat s alatt 1 Avitrifik lt mint k felenged se el tt hozza a felhaszn lni kiv nt egyensulyi oldat ES s vitrifik ci s oldat VS mennyis g t szobah m rs kletre 20 27 C MEGJEGYZES Ker lje a teljes veg ES s VS ism telt szobah m rs kletre hoz s t ha egyszerre csak az oldat egy reszere van sz ks g C lszer bb a felhaszn lni kiv nt mennyis get kim rni s az veget kim r s ut n r gt n visszatenni 2 8 C ra Az oocyta vitrifik ci s protokollhoz a Modified HTF HEPES is sz ks ges feh rj vel 2 T lts n a cseppfoly s nitrogen tart lyba foly kony nitrog nt elegend t ahhoz hogy 10 cm m lys get el rje vagy hogy a kriocs tart n lev kriocs teljesen al meriilj n s helyezze a mikroszk p k zel be Illessze a kriocs vet vagy krioampull t nem bez rva a kriocs tart als szorit bilincs hez s meritse a cseppfoly s nitrogenbe a vitrifik lt mint k t rol s nak el k szit s re
56. het transferpipet en breng het de monster s met minimaal volume uit de druppel ES over naar het druppel VS gedurende 5 seconden 10 Vul en heatseal de CryoTip als volgt zie figuur 6a Schuif de metalen beschermhuls omhoog langs de CryoTip zodat het uiteinde van de fijne breekbare punt bloot komt te liggen Pak de CryoTip en Hamilton spuit vast terwijl u deze onder de microscoop observeert en aspireer voorzichtig een klein volume VS tot markeringnr 1 op de CryoTip Ga door met de observatie van het monster onder de microscoop en aspireer het monster voorzichtig met VS tot aan markeringnr 2 op de CryoTip Observeer de CryoTip nu onmiddellijk en aspireer meer VS tot aan markeringnr 3 Het monster moet zich tussen markeringnr 2 en markeringnr 3 bevinden Heatseal sealnr 1 de CryoTip op of net onder markeringnr 1 en schuif de beschermhuls terug omlaag om de fijne breekbare punt af te dekken en te beschermen Haal de CryoTip voorzichtig van het zuiginstrument en de adapter af en heatseal dan bij de markering Afsluiting 2 aan het brede uiteinde van de CryoTip boven de markering Markering 4 Dompel de bedekte CryoTip direct in de vloeibare stikstof koelsnelheid 12 000 C min zie Figuur 6b Vul het HSV buisje en sluit het als volgt af Plaats het monster de monsters met behulp van een micropipet voorzichtig in de gleuf van het capillaire staafje op 1 mm van het uiteinde De druppel die he
57. hrt werden VORSICHT Kontakt der Muster mit VS soll beschr nkt sein um Zytotoxizit t zu verhindern Muster neigen dazu in VS zu schweben deshalb sollen Sie die Bildsch rfe so einstellen dass Sie durchgehende Visualisierung w hrend des Kontakts halten k nnen Behalten Sie auch die D se der Transferpipette nahe bei um schnelle Versetzung zwischen VS Tropfen zu sichern Sehen Sie Figur 5 9 Nachdem die quilibrierung in ES fertig ist ziehen Sie ein Bisschen ES in die Transferpipette und versetzen Sie f r 30 Sekunden mit minimalem Volumen das die Muster vom ES Tropfen ins des ersten Tropfens VS 10 Den CryoTip folgendermaften laden und hitzeversiegeln siehe Abbildung 6a Gleiten Sie die metallische Hilse nach oben die CryoTip entlang um das zerbrechliche Ende der D se aufzudecken W hrend Sie die CryoTip und Spritze unter Mikroskop beobachten aspirieren Sie ein kleines Volumen VS bis zum Zeichen 1 auf der CryoTip W hrend Sie das Verfahren noch unter Mikroskop beobachten aspirieren Sie das Muster mit VS bis zum Zeichen 2 auf der CryoTip Jetzt beobachten Sie die CryoTip direkt und aspirieren Sie mehr VS bis zum Zeichen 3 Verschliessen Sie die CryoTip mit Hitze Verschluss 1 auf oder gerade unter Zeichen 1 und gleiten Sie die H lse wieder nach unten um das zerbrechliche Ende der D se zu sch tzen Den CryoTip vorsichtig aus Aspirationswerkzeug und Adapter entfernen und dann am dick
58. in s t lm mikroskop tablas kullanmay n D KKAT ES ve VS sol syonlar nda dengeleme s ras nda rne in a maruziyetini minimize edin J Kullanilacak ES ve VS miktarini oda sicakligina getirin 20 27 C NOT Sol syonun bir pargasinin gerektigi her durumda ES ve VS viyallerini bitin olarak oda sicakligina getirmekten sakinin Kullanilacak miktari alikotlamak ve alikotlamadan hemen sonra viyalleri 2 8 C a geri koymak daha iyidir 6 Proteinli Modifiye HTF HEPES de oosit vitrifikasyon protokoli igin gereklidir Sivinitrojen rezervuar n s v nitrojenle doldurun 4 ing derinlik elde edecek veya kriyo t p ubu a tamamen bat racak kadar ve mikroskoba yak n bir ekilde yerle tirin Bir kriyo ubu un alt klamp na bir kriyo t p veya goblet kapaks z ilistirin ve vitrifiye rneklerin saklanmas na haz rl k olarak s v nitrojene bat r n Vitrifiye edilecek rneklerin say s n belirleyin Her steril petri taba veya kapa ve Kriyo saklama cihaz n gerekli bilgiyle etiketleyin Kullan m ncesinde i erikleri kar t rmak i in her bir ES ve VS viyalini iki kez nazik e ters evirin Taba sol syon damlaciklariyla vitrifikasyona haz rlay n zlenecek prosed r A OOS T MII Vitrifikasyon Protokol NOT Embriyo vitrifikasyon protokol i in B l m B ye bak n 1 10 Aseptik bir sekilde k lt r medyumundan proteinli Modifiye HTF HEPES ten ve
59. los viales 6 Prepare las placas con las gotas de soluciones de la siguiente manera para el proceso de Vitrificaci n A Protocolo de Vitrificaci n de OOCITOS MII NOTA Lea la secci n B para el protocolo de vitrificaci n de embriones 1 Dispense as pticamente gotas de 20 uL del medio de cultivo HTF modificado HEPES con proteina y de ES en proximidad cercana sobre una placa de Petri invertida est ril tal como se muestra en la Figura 1 y cologue la placa en la platina del microscopio una gota de 20 uL de HTF modificado HEPES con prote na 3 gotas de 20uL 0 en total de ES ES1 ES2 ES3 2 Saque del incubador la placa de cultivo con los oocitos MII y compruebe al microscopio la calidad de las muestras Siempre que sea posible seleccione s lo los oocitos MII de mejor calidad PRECAUCI N Minimice la exposici n de la muestra a la luz durante su equilibrado en las soluciones ES y VS 3 Transfiera el oocito hasta 2 a la vez con el m nimo volumen posible del medio de la placa de cutivo del incubador a la gota H de 20pL 4 Conla punta de la pipeta de transferencia acerque hasta fusionar la gota H y la ES1 ver Fig 1 flecha 1 y permita la mezcla espont nea de las 2 soluciones durante 2 minutos 5 Acontinuaci n mezcle la gota de ES2 flecha 2 con las gotas anteriormente mezcladas y deje reposar durante 2 minutos 6 Transfiera el los oocito s con el m nimo volumen posible de
60. m by m ly b ty inky CryoTips prohl dnuty pod vhodn m zv t en m 40x zda nedo lo k po kozen nap nalomen hroty nebo praskliny b hem p epravy Nej p pou vejte dn ampulky roztoku kter jev zn mky omnosti stic hmoty nebo zakalen Vy n te se probl m m kontaminace p i pr ci dodr ujte aseptick metody Roztoky Vitrification Freeze Kit obsahuj antibiotikum gentamicin sulf t Dodr ujte p islu n opat en abyste se ujistili e pacient nen alergick na toto antibiotikum V sou asn dob v zkumn literatura indikuje e zn dlouhodob vliv vitrifikace na embrya nen m Deriv ty z lidsk krve pou it p i v rob to hoto produktu byly testov ny pomoc testovac ch sad v licenci americk ho adu pro potraviny a l iva FDA a nebyla u nich zji H a H t na reakce na povrchov antigen viru HBV BsAg protil tky na hepatitidu typu C HCV protil tky na virus lidsk imunodeficience IV Plat v ak e dn metoda testov n zcela nezaru uje e produkty z skan z hum nn ch zdroj jsou neinfek n Nakl dejte se v emi deriv ty z lidsk krve jako by u nich byla mo nost p enosu infekce a pou vejte v zd eobecn platn preventivn opat en D rci rojov ho materi lu tak pro li screeningem ohledn rizika vystaven Creutzfeldt Jakobov nemoci CJD
61. o embalamento esterilizado tenha sido comprometido CUIDADO As leis federais dos EUA restringem a venda deste dispositivo apenas a m dicos ou por sua prescric o EAAHNIKA Vit Kit H MII euBp wv To KIT To Irvine Scientific CryoTip 40709 HSV 019921 kai pe To Kir Vit Kit Thaw To Eguilibration Solution ES tva HEPES 199 35 ug ml 7 5 viv 20 v v Dextran Serum Supplement YaAorroinons VS HEPES M oo 199 35 g ml 15 v v DMS
62. payeti h zla dikey olarak LN2 ye bat r n Birka saniye boyunca payeti LN2 i inde sallayarak payet etraf nda izole edici bir hava kabarc katman n n olu mas n nleyin Vitrifiye Kriyo Ucu veya HSV payeti LN2 ye bat r lm kriyo t p n veya gobletin kriyo ubukta i ine yerle tirin Vitrifiye Kriyo Ucu veya HSV payeti s v nitrojende tutmak i in kriyo t p veya gobleti tpalayin veya bir ba ka tipasiz kriyo t ple birlikte ters ili tirin LN2 rezervuar n LN2 kriyo dondurucusuna yakla t r n ve kriyo ubuk i eriklerini uzun vadeli saklama i in kriyo dondurucuya aktar n B EMBR YOLAR PN den Blastokiste Vitrifikasyon Protokol 1 2 3 Bir adet 50 uLlik ES damlas n ters evrilmi bir Petri taba kapa zerine aseptik olarak koyun M mk n oldu u durumlarda vitrifikasyon i in yaln zca en iyi kalite embriyolar se in Minimal medyum hacmiyle rne i bir kerede en fazla 2 tane k lt r taba ndan al p ES damlas n n aktar n Embriyolar ES damlas i inde 6 10 dakika boyunca serbest d yoluyla dengelenecektir Not rnek k lecek sonra normal boyuna geri d necektir Bu durum dengelenmenin tamamland na i aret eder D KKAT ES ve VS damlalar i inde dengeleme s ras nda rne in veya rneklerin a maruziyetini minimize edin 4 ES i indeki bu dengelenme s resi s ras nda ekil 7 de g sterildi i
63. plon rapu galiuk Atsargiai nuimkite CryoTip nuo aspiracijos rankio ir adapterio ir po to kar iu u lydykite u dor Nr 2 storajame CryoTip gale vir ymos Nr 4 Uzdengta CryoTip iaudel pamerkite tiesiai skystaji azot aldant 12 000 C min grei iu Zr 6b pav HSV u pildykite ir sandariai u darykite taip Mikropipete atsargiai m gin ius suleiskite kapiliarinio strypelio latak 1 mm nuo galo La elis m ginio i turi b ti iki 0 5 ul Kiekviename kapiliariniame strypelyje daugiausiai 2 oocitai ar embrionai Nedelsiant kapiliarin strypeli ir manipuliatori d kite Siaudelj ir stumkite kol sta iakamp manipuliatoriaus dalis prisilies prie iaudelio plat jan io galo laudelj lengvai suimkite nyk iu ir pir tu bei nuimkite ki imo prietais Laikydami iaudel SYMS sandarikliu u sandarinkite atvir j gal Laikykite iaudel pincetu ten kur manipuliuojate strypeliu Vis Siaudelj greitai vertikaliai panardinkite skyst azot LN iaudeliu atsargiai pamai ykite skyst o azot LN kelias sekundes taip kad prie j nesusidaryt izoliuojan io oro burbuliuk sluoksnio 11 Vitrifikuot CryoTip ar HSV iaudel d kite panardinta skystame azote LN u pildyt kriom gintuv li ar taurele kriolazdel je Uzdenkite kriom gintuv li ar taurele arba u d kite kit apverst neu dengt kriom gintuv l kad i
64. r vitrifieringsprotokoll 1 CryoTip eller HSV str n f r lagring av h gst 2 preparat 1 Koppling VITRIFIERINGSPROTOKOLL OBS Dessa procedurer skall utf ras vid rumstemperatur 20 27 C OBS Minimera exponering av preparaten f r ljus under ekvilibrering i ES och VS l sningarna 1 L t den m ngd j mviktsl sning ES och vitrifieringsl sning VS som ska anv ndas anta rumstemperatur 20 27 C innan de vitrifierade proverna tinas upp OBS Undvik att l ta hela ampuller med ES och VS bli rumstempererade upprepade g nger n r endast en del av l sningen beh vs t g ngen Det r b ttre att h lla av den m ngd som ska anv ndas och sedan genast s tta tillbaka ampullerna till kylf rvaring vid 2 8 C Modified HTF HEPES med protein kr vs ocks f r vitrifieringsprotokollet f r oocyter 2 Fyll beh llaren f r flytande kv ve med flytande kv ve till ett djup p 10 cm eller s att kryor ret p h llaren r helt neds nkt och placera den intill mikroskopet Placera ett kryor r eller ett rundbottnat r r utan lock p den nedersta kl mman p en kryor rh llare och s nk ned h llaren i flytande kv ve inf r f rvaring av de vitrifierade preparaten 3 Best m hur manga preparat som skall vitrifieras 4 M rk varje steril petrisk l eller lock och kryo lagringssenhet med n dv ndig information 5 V nd f rsiktigt varje ampull ES och VS tv g nger s att inneh llet blandas f re anv
65. rukavice na jedno pou it Injek n st ka ka Hamilton GASTIGHT 50 ul katalogove amp 80901 nebo jiny aspira ni n stroj Prevodn pipety sklen n pipety z ta en ho skla nebo mikropipetov hroty s pr m rem vnit n ho hrotu 200 um Pinzeta Impulse Heat Sealer Zape etovaci za zen SYMS Sealer pro sl mky HSV Straw katalogov 016296 Stopky nebo asova Z sobn k kapaln ho dus ku Dewarova nebo polystyr nov n doba s v kem s objemem 1 2 Kapaln dus k dosta uj c objem na dosa en hloubky 10 2 cm v z sobn ku N VOD K POU IT Slo ky nezbytn p i pou it sady Vit Kit Zmrazen na aplikaci Eguilibration Solution ES 60 ul na vitrifika n protokol oocytu Nebo 50 ul na vitrifika n protokol embrya Vitrifika n roztok VS 50 ul na vitrifika ni protokol 1 ty inka CryoTip nebo sl mkou HSV Straw udr a 2 vzorky 1 Konektor VITRIFIKA N PROTOKOL POZN MKA Procedury by se m ly prov d t p i pokojov teplot 20 27 C NEPOU VEJTE vyh van stolek mikroskopu pro n sleduj c procedury POZOR Minimalizujte vystavov n vzorku sv tlu b hem ekvilibrace v roztoc ch ES a VS zajist te aby mno stvi roztoku ES a vitrifika niho roztoku VS dos hlo pokojov teploty 20 27 C POZN MKA Neuv d jte opakovan cel lahvi ky roztoku ES a VS do pokojov teploty kdy potfebujete v dy jen s
66. sis lt sekoittuu ennen k ytt 6 Valmistele malja jossa on liuosten pisaroita vitrifikaatiota varten seuraavasti A OOSYYTIN MII vitrifikaatioprotokolla HUOM Alkion vitrifikaatioprotokolla l ytyy osasta B 1 Tiputa aseptisesti 20 pl tippa viljelyliuosta Modified HTF HEPES t johon on lis tty proteiinia ja ES steriilin petrimaljan yl salaisin k nnetylle kannelle hyvin l helt kantta ks kuva 1 ja aseta malja mikroskoopin objektip yd lle yksi 20 ul tippa Modified HTF HEPES johon on lis tty proteiinia kolme 20 lin tippaa yhteens 60 ul liuosta ES ES1 ES2 ES3 2 Poista MII oosyyttej sis lt v viljelymalja inkubaattorista ja tarkista n ytteiden laatu mikroskoopilla Mik li mahdollista valitse vain parhaanlaatuinen MII asteinen oosyytti oosyytit VAROITUS Minimoi n ytteen n ytteiden altistuminen valolle sen tasapainotuksen ikana H ES ja VS tipoissa iirr oosyytti korkeintaan kaksi kerrallaan minimaalisen ravintoliuostilavuuden kanssa viljelymaljasta inkubaattorissa 20 ul n H tippaan yhdeksi minuutiksi 4 Yhdist H tippa ja ES1 ks kuva 1 nuoli 1 siirtopipetin k rjell ja anna niiden kahden liuoksen sekoittua itsest n 2 minuutin ajan 5 Yhdist sitten tippa ES2 ta nuoli 2 aikaisemmin yhdistettyihin tippoihin ja anna lev t 2 minuutin ajan 6 Siirr oosyytti oosyytit mahdollisimman pieness liuostilavuudessa yhdistetyst tip
67. t galima visi kai panardinti kriostatiniame laikiklyje tvirtint kriostatin m gintuv l ir pad kite prie mikroskopo Kriogenin m gintuv l arba taur neu dengt jtvirtinkite kriogeninio laikiklio apatin apkab l ir panardinkite skyst j azot paruo dami vitrifikuot m gini saugojimui 3 Nustatykite vitrifikuojam m gini skai i 4 Kiekvien sterili Petri l k tel ar dangtel ir Cryo saugojimo tais pa enklinkite reikiama informacija 5 Prie naudodami tirpalus sumai ykite dukart atsargiai apversdami kiekvien ES ir VS buteliuk 6 L k tele su tirpal la ais vitrifikacijos proced rai paruo kite tokiu b du A OOCITU II metafazines stadijos MII vitrifikacijos protokolas PASTABA Embrion vitrifikacijos protokol r B skyriuje 1 Asepti kai paskirstykite 20 ul kult ros terp s modifikuotos HTF HEPES su baltymu la us ir ES alia apversto sterilios petri l k tel s dangtelio kaip parodyta 1 paveiksle ir l k tel u d kite ant mikroskopo stalelio vienas 20 ul la as modifikuoto HTF HEPES su baltymu trys ES la ai ES1 ES2 ES3 po 20 ul i viso 60 ul 2 I inkubatoriaus i imkite pas lio l k tel su Il metafazin s MII stadijos oocitais ir mikroskopu patikrinkite m gini kokyb Jei yra galimyb atrinkite tik pa ios geriausios kokyb s II metafazines MII stadijos oocit us PERSP JIMAS Pusiaus
68. t d pist s pour d celer d ventuels risques d exposition la maladie de Creutzfeldt Jakob MCJ Ne pas utiliser de flacon dont la st rilit de l emballage a t compromise ATTENTION La loi f d rale limite la vente de ce dispositif aux m decins ou sur ordre d un m decin PORTUGU S UTILIZA O PREVISTA O Vit Kit Freeze destina se utiliza o em procedimentos de reprodug o assistida para vitrificag o e conservag o de o citos humanos MII e embri es zigoto a blastocisto Este kit foi concebido para ser utilizado em conjunto com CryoTip N de cat logo 40709 ou Palhinha HSV N de cat logo 019921 e Kit de Descongelag o com Vitrificag o Vit Kit Thaw da Irvine Scientific para uma recolha Optima de amostras DESCRI O DO PRODUTO Eguilibration Solution Solug o Equilibrante ES 6 uma solug o tamponada com HEPES de Meio 199 e com sulfato de gentamicina 35 ug mL 7 5 v v de DMSO e etilenoglicol cada e 20 v v de Dextran Serum Supplement suplemento substituto do soro Vitrification Solution Solug o de Vitrificag o VS 6 uma solug o tamponada com HEPES de Meio 199 e com sulfato de gentamicina 35 ug mL 15 v v de DMSO e etilenoglicol cada 20 v v de Dextran Serum Supplement suplemento substituto do soro e 0 5 M de sucrose Estas 2 solu es devem ser utilizadas seguencialmente de acordo com o protocolo de vitrifica o por microgotas passo a passo
69. the culture dish in incubator into the 20 uL drop of H for one minute Merge the drop of H to ES1 See Fig 1 arrow 1 with the tip of the transfer pipette and allow spontaneous mixing of the two solutions to occur for 2 minutes Then merge the drop of ES2 arrow 2 to the previously merged drops and leave for 2 minutes Transfer the oocyte s with minimal volume of solution from merged drop to ES3 drop for 6 10 minutes Note equilibration of oocyte s in ES3 is complete when the thickness of the zona pellucida and perivitelline space is equal The oocyte s will settle to the bottom of the drop within 3 minutes During the equilibration time in ES3 Aseptically dispense one 1 50 uL drop of VS 2 minutes prior to complete equilibration and prepare the cryotip fig 3 or HSV straw fig 4 for loading CryoTip connecting to the Hamilton syringe or appropriate aspiration tool using a connector or adaptor to assure a tight seal NOTE Keep the metal cover sleeve over the fine pulled tip to protect it until ready to load specimens HSV Straw connecting the longer end of the blue plastic insertion device to the colored end of the handling rod The following steps 9 13 should be completed in 90 110 seconds CAUTION Exposure of specimens to VS should be limited to prevent cytotoxicity Specimen s tend to float in VS so adjust the focus through the microscope to maintain continuous visualization during expo
70. uma profundidade de 10 16 cm ou at submergir completamente o criotubo na c nula e coloque perto do microsc pio Ligue um criotubo ou goblet sem tampa ao clampinferior da crioc nula e submerga o no azoto liquido como preparac o para a conservac o dos esp cimes vitrificados Determine o n mero de amostras que devem ser vitrificadas Identifique cada placa de Petri est ril ou a tampa e armazene o dispositivo Cryo com as informag es necess rias Inverta cuidadosamente cada frasco de ES e VS duas vezes para misturar o conte do antes de utilizar Prepare a placa com gotas das solug es para Vitrificag o Proceda do seguinte modo Protocolo de vitrifica o de O CITOS MII NOTA Consulte a Secc o B para o protocolo de vitrificag o do embri o Assepticamente dispense cair de 20 ul de meio de cultura HTF HEPES Modificado com proteina e ES em estreita proximidade numa tampa invertida de uma placa de Petri conforme ilustrado na Figura 1 e cologue a placa no campo do microsc pio uma gota de 20 ul de HTF Modificado HEPES com proteina tr s gotas de 20juL total de 60 uL de ES ES1 ES2 ES3 Remova a placa de cultura com os o citos MII da incubadora e verifigue a qualidade dos esp cimes ao microsc pio Quando for possivel seleccione apenas os o citos no est dio MII de melhor qualidade CUIDADO minimize a exposig o do esp cime luz durante a fase de equilibrio nas gotas H ES
71. un ar mikroskopu p rbaudiet paraugu kvalit ti Kad vien iesp jams izv lieties vien gi augst k s kvalit tes ol nas MII stadij BR DIN JUMS Samaziniet l dz minimumam parauga u pak au anu gaismas iedarb bai stabiliz cijas laik H ES un VS pilienos 3 P rnesiet ol nas l dz 2 vielaic gi kop ar minim lu barotnes daudzumu no kult ras trauka inkubator uz 20 ul H pilienu uz vienu min ti 4 Sapludiniet H pilienu ar ES1 skatiet 1 att lu bulti a 1 ar p rne anas pipetes galu un aujiet abiem dumiem spont ni sajaukties apm ram 2 min tes 5 P c tam apvienojiet ES2 pilienu 2 bulti a ar iepriek apvienotajiem pilieniem un atst jiet uz 2 min t m 6 P rnesiet ol nu as kop ar minim lu duma daudzumu no sapludin t piliena uz ES3 pilienu 6 10 min tes Piez me Ol nas u stabiliz cija ES3 ir pabeigta kad nas apvalka zona pellucida un kodolu ietvero telpa perivitelline space ir vien das Ol na s nost sies piliena apak 3 min u laik 7 Laik kam r notiek nostabiliz an s ES3 Aseptiski uzpiliniet vienu 1 50 uL VS pilienu 2 min tes pirms piln gas nostabiliz anas un sagatavojiet CryoTip 6 att vai HSV salminu 4 att uzpildi anai CryoTip savienojiet ar Hamilton lirci vai piem rotu aspir cijas r ku izmantojot savienot ju vai adapteru lai nodro in tu cie u sl gumu PIEZ ME Turiet met la p rsega uzmavu virs smalk izsti
72. veloce tra le gocce di VS Refieri a Figure 5 Dopo l equilibrazione in ES e finita portare una quantita di ES nella pipetta di trasferimento e trasferire il campione i con un volume minimo dalla goccia di ES nel della prima goccia di VS per 30 secondi Utilizzando la seguente procedura caricare e sigillare CryoTip mediante calore vedi Figura 6a Infilare la bussola di metallo coperchio su vicino al CryoTip per esporre il punto del angolo fino fragile Aspirare attentamente mentre maneggiando il CryoTip siringa quando lo osservi sul microscopio un volume piccolo di VS all Marchio 1 sulla CrypTip Continuare l osservazione sul microscopio ed aspirare il campione gentilmente con VS al Marchio 2 sulla CryoTip Osservare adesso il CryoTip direttamente ed aspirare di piu VS al Marchio 3 Campione deve essere messo fra il Marchio 42 e Marchio 3 Sigillare con calore Sigillo 1 il CryoTip su o appena giu dal Marchio 1 e disfilare la bussola di metallo di coperchio giu per coprire e proteggere il punto fino e fragile Rimuovere attentamente CryoTip dallo strumento di aspirazione e dall adattatore e sigillarlo con il calore Sigillo n 2 allestremit inspessita di CryoTip al di sopra del Segno n 4 Sottomettere il CryoTip coperto direttamente nella nitrogeno liquido congelando al ritmo di 12 000 C min vedi Figure 6b Caricare e sigillare la paillette HSV utilizzando la seguente procedura
73. 40709 lub s omki HSV nr katalogowy 0019921 cznik firmy Irvine Scientific nr katalogowy 40736 lub inna nasadka SteryIne tacki Petriego 50 x 9 mm Falcon 351006 lub odpowiednik Prob wki kriogeniczne 4 5 ml lub kubki i pr ty kriogeniczne Zmodyfikowana po ywka hodowlana HTF HEPES nr atalogowy 90126 uzupe niona bia kiem R kawiczki jednorazowego u ytku Strzykawkafirmy Hamilton GASTIGHT 50 ul nr katalogowy 80901 lub inne narz dzie aspiracyjne Pipety transferowe pipety szklane lub ko c wki mikropipet o rednicy wewn trznej ko c wki wynosz cej oko o 200 um Pinceta Impulsowy uszczelniacz pod dzia aniem wysokiej temperatury Uszczelnienie firmy SYMS dla stomki HSV nr katalogowy 016296 Stoper lub inny odmierzacz czasowy Zbiornik z ciek ym azotem naczynie Dewara lub pojemnik ze steropianu z pokryw o obj to ci 1 2 Ciekly azot wystarczaj ca obj to do osi gni cia g boko ci 4 cali w zbiorniku WSKAZ WKI U YCIA Wymagania sk adnika Vit Kit Freeze na jedno zastosowanie Roztw r do r wnowa enia ES 60 ul dla Protoko u Witryfikacji Oocyt w Lub 50 ul dla Protoko u Witryfikacji Zarodk w Vitrification Solution VS 50 ul dla Protoko u Witryfikacji 1 ko c wka CryoTip lub stomkami HSV mie ci do 2 pr bek 1 z cze PROTOK WITRYFIKACJly UWAGA Procedury nale y przeprowadzi w temperaturze pokojowej 20 279 C
74. CryoTip vai HSV salmi u piepild anai Iev rojiet protokolu k aprakst ts iepriek Noda a A Ol3 nas MII vitrifik cijas protokols no 8 l dz 16 solim attiec b uz pak au anu VS dumu iedarb bai CryoTip uzpild anu iegremd anu idraj sl pekl LN un ilglaic gu uzglab anu Lai uzzin tu papildu inform ciju par o produktu lieto anu katrai laboratorijai j iepaz stas ar taj noteiktaj m proced r m un protokoliem kas pa i izstr d ti un optimiz ti individu las medic niskas programmas veik anai UZGLAB ANAS NOR D JUMI UN STABILIT TE Neatv rtus flakonus uzglab t atdzes tus no 2 C l dz 8 C temperat r Uzglab jot k nor d ts Vitrification Freeze Kit dumi saglab stabilit ti l dz der guma termi a beig m kas atrodams uz flakonu mar juma P c konteineru atv r anas nelietot barotni ilg k par asto m 8 ned m T k produkta sast v ir cilv ka izcelsmes materi ls uzglab anas laik var izveidoties da as s kas da i as da veida da i as neietekm produkta veiktsp ju PIESARDZ BAS PAS KUMI UN BR DIN JUMI o ier ci ir paredz ts izmantot person lam kas ir apm c ts t du proced ru veik anai kuras ietver nor d to izmanto anu kurai ier ce ir paredz ta K papildu piesardz bas pas kumu sagatavo an s proced ras laik m s iesak m r p gi p rbaud t katru Cryotip iz emot no iepakoj
75. ES1 vezi Fig 1 s geta 1 cu v rful pipetei de transfer p n se omogenizeaz cele dou solu ii timp de 2 minute Apoi amesteca i pic tura de ES2 s geata 2 cu pic turile amestecate anterior i l sa i timp de2 minute Transferati ovocitul ovocitele cu un volum minim de solutie din pic tura amestecat in pic tura de solutie de echilibrare ES3 timp de 6 10 minute Not Echilibrarea ovocitului lor in ES3 este complet c nd grosimea zonei pellucida devine egal cu cea a spatiului perivitelin Ovocitul ele se va aseza la fundul pic turi in 3 minute Timpul c t dureaz echilibrarea in ES3 Repartizati aseptic o 1 pic tur de solutie de vitrificare VS de 50 uL cu 2 minute nainte de ncheierea echilibr rii si preg titi eryotipul fig 3 sau paieta HSV fig 4 pentru inc rcare CryoTip conectarea la seringa Hamilton sau la instrumentul de aspirare corespunz tor cu ajutorul unui conector sau unui adaptor pentru a asigura o etansare perfect NOT Mentineti man onul capacului metalic peste v rful fin tras pentru a l proteja p n c nd acesta este preg tit pentru nc rcarea probelor Tubul HSV conectarea cap tului lung al dispozitivului de insertie din plastic de culoare albastr la cap tul colorat al tijei de transfer Urm toarele trepte 9 13 vor fi efectuate n 90 110 secunde AVERTISMENT Expunerea mostrei la VS trebuie limitat pentru a preveni citotoxicitatea acestuia
76. Fill the liquid nitrogen reservoir with liquid nitrogen sufficient to achieve a depth of 4 inches or to completely submerge cryotube on cane and place close to microscope Attach a cryotube or goblet uncapped to he bottom clamp of a cryocane and submerge in the iquid nitrogen in preparation for storage of the vitrified specimens Determine the number of specimens to be vitrified Label each sterile petri dish or lid and Cryo storage device with necessary information Gently invert each vial of ES and VS twice to mix contents before use Prepare dish with droplets of solutions for Vitrification Procedure as follows OOCYTE MII Vitrification Protocol NOTE Refer to Section B for embryo vitrification protocol Aseptically dispense 20 uL drop of culture medium Modified HTF HEPES with protein and ES in close proximity on an inverted lid of sterile petri dish as shown in Figure 1 and place the dish on the microscope stage one 20 uL drop of Modified HTF HEPES with protein three 20 uL drops 60 uL total of ES ES1 ES2 ES3 Remove the culture dish containing MII oocytes from the incubator and check the guality of the specimens under microscope Where possible select only the best quality MII stage oocyte s CAUTION Minimize the exposure of the specimen s to light during equilibration in the H ES and VS drops Transfer the oocyte up to 2 at a time with minimal volume of medium from
77. Garantia de qualidade As solu es do Vit Kit Freeze s o filtradas atrav s de membrana e processadas assepticamente de acordo com os procedimentos de fabrico que foram validados para atingir um nivel de seguran a de esterilidade SAL de 103 Cada lote de Vit Kit Freeze passa pelos seguintes testes Solug es e CryoTips Endotoxina pela Metodologia LAL Biocompatibilidade pelo ensaio do embri o de ratinho unicelular Esterilidade pelo actual USP Sterility Test lt 71 gt Todos os resultados s o notificados num Certificado de An lise espec fico de lote que est disponivel por pedido MATERIAIS NECESS RIOS MAS N O INCLU DOS Irvine Scientific CryoTip N de cat logo 40709 ou Palhinha HSV N de cat logo 0019921 Conector Irvine Scientific N de cat logo 40736 ou outro adaptador Placas de Petri Est reis 50 X 9 mm Falcon 351006 ou equivalente Criotubos 4 5 mL ou goblets e crioc nulas HTF HEPES Modificado N de cat logo 90126 meio de cultura suplementado com prote nas Luvas descart veis Seringa Hamilton GASTIGHT 50 N de cat logo 80901 ou outro instrumento de aspirag o Pipetas de transfer ncia pipetas de vidro ou pontas de micropipetas com um di metro interno da ponta de 200 um Pingas Selante t rmico Impulse Heat Sealer Vedante SYMS para Palhinha HSV de cat logo 016296 Cron metro ou temporizador Reservat rio de azoto liguido contentor Dew
78. HINWEISE Komponentenbedarfe des Vit Kit Freeze pro Einsatz Equilibration Solution ES 60 pil f r Verglasungsprotokoll f r Oozyten Oder 50 pl f r Verglasungsprotokoll f r Embryos Vitrification Solution VS 50 pl f r Verglasungsprotokoll 1 CryoTip oder HSV Straw h lt bis zu 2 Mustern 1 Anschlussstiick VERGLASUNGSPROTOKOLL HINWEIS Verfahren sollen bei Raumtemperatur 20 27 C ausgef hrt werden Gebrauchen Sie KEINEN erhitzten Objekttr ger f r die folgenden Verfahren VORSICHT Minimieren Sie Kontakt des Musters mit Licht w hrend der guilibrierung in ES und VS L sungen 1 Die zu verwendende Menge guilibrierungsl sung ES oder Vitrifizierungsl sung VS auf Raumtemperatur bringen 20 27 C HINWEIS Es sollte vermieden werden die gesamten R hrchen mit ES und VS wiederholt auf Raumtemperatur zu bringen wenn jedes Mal nur ein Teil der L sung ben tigt wird Es ist besser die zu verwendende Menge zu aliguotieren und die R hrchen unmittelbar danach wieder auf 2 8 C zu k hlen Modified HTF HEPES mit Protein ist auch f rs Verglasungsprotokoll f r Oozyten n tig 2 F llen Sie den Beh lter f r fl ssigen Stickstoff mit fl ssigem Stickstoff mit ausreichendem Volumen eine Tiefe von 4 Zoll zu erreichen oder dass ein Kryorohr auf einem Cryocane untertaucht werden kann Stellen Sie den Beh lter beim Mikroskop Schliessen Sie ein Kryorohr oder einen Becher entdeckelt auf die untere K
79. I N Y ESTABILIDAD Conserve los envases no abiertos refrigerados a una temperatura de 2 a 8 C Si se conservan seg n lo indicado las soluciones del kit de Congelaci n post Vitrificaci n son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los envases No utilice el medio por m s de ocho 8 semanas despu s que los envases hayan sido abiertos Ya que el producto contiene sustancia de origen humano puede desarrollar part culas durante el almacenaje No hay evidencia que part culas de esta clase tengan un efecto sobre el funcionamiento del producto PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Este dispositivo debe ser utilizado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicaci n prevista para el mismo Como precauci n adicional durante la preparaci n del proceso recomendamos que cada CryoTip sea examinado cuidadosamente al sacarlo del envase Antes de su uso el Cryotip deber a ser observado al microscopio bajo un aumento suficiente 40x para comprobar que no haya sufrido da os rotura de punta o grietas durante el transporte No utilice ning n vial cuya soluci n muestre evidencias de material precipitado o turbio Para evitar problemas de contaminaci n utilice t cnicas as pticas de manipulaci n Las Soluciones del Kit de Congelaci n por Vitrificaci n contienen el antibi tico sulfato de gentamicina Debe tomar las precauciones adecuadas para asegurar que la paciente no es sensible a
80. O 20 v v Dextran Serum Supplement 0 5 M pe To Vit Kit Freeze SAL 103 Vit Kit Freeze CryoTips Limulus AAKL HOVOK TTAPO lt 71 gt
81. Un CryoTip ou l ensemble jonc capillaire du kit de vitrification haute s curit HSV peut contenir 1 ou 2 sp cimens Un connecteur PROTOCOLE DE VITRIFICATION REMARQUE Ces proc dures doivent tre effectu es temp rature ambiante 20 27 C Ne pas utiliser la platine chauffante du microscope r f rence du catalogue durant ce proc d ATTENTION minimiser l exposition des sp cimens la lumi re durant F guilibration dans les solutions ES et VS 1 Amener un flacon de chacune des solutions ES et VS temperature ambiante 20 27 C plus du milieu modified HTF HEPES avec prot ines requis pour les ovocytes Le milieu modified HTF tamponn au HEPES avec rot ines est aussi requis pour le protocole de vitrification des ovocytes 2 Remplirle r servoir d azote liquide en quantit suffisante pour obtenir 10 cm de profondeur ou compl tement submerger le cryotube fix sur une cryocane et le placer c t du microscope Attacher le cryotube ou le gobelet d capsul s la plus basse attache de la cryocane et submerger dans azote liquide la cane est ainsi pr te accueillir les sp cimens vitrifi s 3 D terminer le nombre de sp cimens vitrifier 4 Marquer chaque boite de p tri st rile ou son couvercle et chaque CryoTip avec l information n cessaire 5 Retourner doucement chacun des flacons ES et VS deux fois pour en m langer le contenu avant utilisation 6 Pr parerune boite d
82. Uzlieciet CryoTip siltumdro o plombu tie i uz vai nedaudz zem k par atz mi Nr 1 tad noslidiniet met la apvalka uzmavu atpaka uz leju lai nosegtu un aizsarg tu smalko trauslo galu Uzman gi no emiet CryoTip no aspir cijas r ka un adaptera un p c tam ar karstumu hermetiz jiet aizvars nr 2 CryoTip plat kaj gal virs 4 atz mes legremd jiet nosl gto Cryo Tip tie i idraj sl pekl dzes anas parametri 12 000 C min skatiet 6b att lu Piepildiet un hermetiz jiet HSV salmi u k aprakst ts turpm k Armikropipeti uzman gi iepildiet paraugu s kapil ra stien a notek 1 mm att lum no gala Pilienam kas satur paraugu s j b t maz kam par 0 5 ul Maksim li 2 oocitas vai embriji uz katru kapil ra stien ti Nekav joties ievietojiet kapil ra stien ti un apstr des r ku salmi un b diet tos l dz apstr des r ka taisnst rveida da a saskaras ar salmi a izliekto galu Viegli saspiediet salmi u starp k i un pirkstiem un iz emiet ievieto anas ier ci Turot salminu nekust gi hermetiz jiet atv rto galu izmantojot SYMS hermetiz t ju Turiet salminu ar pinceti apstr des stieni a apgabal tri vertik l virzien iem rciet visu salmi u idraj N Da as sekundes uzman gi maisiet salmi u pa idro N lai nov rstu izol jo a gaisa burbul u sl a veido anos ap salmi u Ievietojiet vitrific to CryoTip vai HSV salminu ie
83. Vit Kit Freeze partii l bib j rgmised testid Lahused ja CryoTips Endotoksiini m ramine limuluse am bots di l saadi LAL meetodil Bio hilduvust hiire embriio anal siga herakuline Steriilsus tagatud praeguse USA Farmakop a steriilsuse testi alusel lt 71 gt K ik tulemused on avaldatud konkreetset partiid puudutavas anal sisertifikaadis mida v ite soovi korral taotleda VAJALIKUD MATERJALID MIDA TELLITAKSE ERALDI Irvine Scientific CryoTip kataloogi nr 40709 v i HSV k rs kataloogi nr 0019921 Irvine Scientific konnektor kataloogi nr 40736 v i muu adapter Steriilsed Petri tassid 50 X 9 mm Falcon 351006 v i ekvivalent Kr okatsutid 4 5 mL v i klaasikesed ja Cryocane raamid Muudetud HTF HEPES kataloogi nr 90126 s de millele on lisatud valk hekordsed kindad Hamilton GASTIGHT s stal 50 ul kataloogi nr 80901 v i muu aspiratsioonivahend Teisalduspipetid hukeseks t mmatud klaasist pipetid v i mikropipeti otsad sisemise diameetriga 200 um N pitsad Impulse Heat Sealer HSV k rre hermeetiline SYMS sulgur kataloogi nr 016296 Stopper v i taimer Vedela l mmastiku mahuti Dewari v i st rovahust anum kaanega mahuga 1 2 L Vedel l mmastik piisavas koguses et saavutada mahutis s gavuse 10 cm a KASUTUSJUHEND Vit Kit Freeze vajalikud komponendid iga kasutuse jaoks Equilibration Solution ES 60 pL oots di vitrifikatsiooni pro
84. a mostrelor vitrifiate Determinati num rul de mostre care trebuie s fie vitrificati Puneti etichete cu informa iile necesare pe fiecare cutie Petri steril sau capac i pe dispozitivul de p strare Cryo nainte de utilizare inv rtiti cu grij i amesteca i de dou ori con inutul din fiolele de ES i VS Preparati vasul cu pic turi de solutie pentru Procedura de Vitrificare dup cum urmeaz OVOCITE MII Protocol de Vitrificare NOT Vezi Capitolul B protocolul privind vitrificarea embrionului Distribuiti n condi ii aseptice 20 UL pic tur de mediu de cultur HTF modificat HEPES cu protein i ES n imediata apropiere pe un capac ntors al unei cutii Petri sterile dup cum este indicat n Figura 1 i pune i cutia pe platina microscopului O pic tur de 20 uL de HTF modificat HEPES cu protein Trei pic turi 20 60 total de ES ES1 ES2 ES3 Scoateti cutia de cultur con in nd ovocitele MII din incubator i verifica i calitatea mostrelor sub microscop Dac este posibil selecta i numai ovocitele de cea mai bun calitate stadiu MII AVERTISMENT Minimalizati expunerea mostrei lor la lumin n timpul echilibrarii efectuate n picaturile de H ES i VS Transferati ovocitele p n la 2 n acela i timp cu un volum minim de mediu de cultur n incubator ntr o pic tur de 20 yL de H pentru un minut Amestecati pic turile H cu
85. a tych produkt w ka de laboratorium powinno odwo a si do jego w asnych procedur laboratoryjnych i protoko w kt re zosta y specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego INSTRUKCJE DOTYCZ CE PRZECHOWYWANIA I STABILNO CI Nieotwarte prob wki przechowywa w ch odziarce w temperaturze 2 C do 8 C Gdy przechowywane zgodnie z instrukcj zestawy do witryfikacji Vitrification Freeze Kit Solutions s stabilne do up yni cia daty wa no ci umieszczonej na etykietach fiolek Nie u ywa po ywek przez wi cej ni osiem 8 tygodni pod otwarciu pojemnik w Poniewa w produkcie jest obecny materia pochodzenia ludzkiego podczas magazynowania mog powsta drobne cz stki osadu Nie wykazano aby ten typ cz stek mia wp yw na dzia anie produktu RODKI OSTRO NO CI I OSTRZE ENIA To urz dzenie jest przeznaczone do u ycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmuj cych wskazane zastosowanie dla kt rego to urz dzenie jest przeznaczone Jako dodatkowy rodek ostro no ci podczas procedury przygotowawczej zalecamy aby ka dy Cryotip zosta dok adnie zbadany przy wyjmowaniu z opakowania Przed u yciem ko c wki CryoTip nale y skontrolowa pod odpowiednim powi kszeniem 40x czy nie posiadaj uszkodze takich jak z amania lub p kni cia zako cze do kt rych mo e doj podczas transportu Nie u ywa adnej fiolki z po ywk w kt r
86. aavasti Liuokset ja CryoTipit Endotoksiini Limulus amebosyyttilysaatti menetelm ll LAL Bioyhteensopivuus hiiren alkion analyysill yksi solu Steriliteetti Yhdysvaltain nykyisen farmakopean steriilit estin mukainen lt 71 gt Kaikki tulokset raportoidaan er kohtaisesti analyysitodistuksella joka on pyynn st saatavissa TARVITTAVA MATERIAALI JOTA EI OLE MUKANA Irvine Scientific CryoTip tuotenro 40709 tai HSV pilli tuotenro 0019921 Irvine Scientific liitin tuotenro 40736 tai muu sovitin Sterilit petrimaljat 50 X 9 mm Falcon 351006 tai vastaavat Kryoputket 4 5 ml tai kuperapohjaiset putket ja ryotelineet Modified HTF HEPES viljelyliuos tuotenro 90126 johon on lis tty proteiinia Kertak ytt k sineet Hamilton GASTIGHT ruisku 50 ul tuotenro 80901 tai muu aspirointiv line Siirtopipetit vedetyt lasipipetit tai mikropipettikarjet joiden sis l pimitta on 200 um Pinsetit Impulse Heat Sealer SYMS saumaaja HSV pillille tuotenro 016296 Sekuntikello tai ajastin Nestetyppis ili kannellinen Dewar tai vaahtomuovis ili tilavuus 1 2 I Nestetyppi riitt v m r t ytt m n s ili n 10 cm n syvyydelt K YTT OHJEET Vit Kit Freeze setin osa ainevaatimukset sovelluksen mukaan Eguilibration Solution ES 60 pl oosyytin vitrifikaatiokasittelyyn tai 50 pl alkion vitrifikaatioprotokolla Vitrifikaatioliuos VS 50 ul vi
87. ajalike andmetega Keerake iga ESi ja VSi viaal enne kasutamist kaks korda p hi rnalt les alla et sisu seguneks Valmistage tass vitrifikatsiooni protseduuriks vajalike lahuste tilkadega j rgnevalt 5 amp MARKUS Embr o vitrifikatsiooni protokolli leiate osas B Jaotage aseptiliselt 20 ul s tmetilgad valgulisandiga muudetud HTF HEPES ja ES l hestikku steriilse Petri tassi p ratud kaanele vt joonist 1 ja asetage tass mikroskoobi t alusele ks 20 ul tilk muudetud HTFi HEPES valgulisandiga Kolm 20 uL tilka kokku 60 uL ESi ES1 ES2 ES3 Eemaldage inkubaatorist MII oots te sisaldav Petri tass ja kontrollige mikroskoobi all proovide kvaliteeti V imaluse korral valige ainult k ige kvaliteetsema d Mll arenguj rgus oots di d ETTEVAATUST Proovi de tasakaalustamisel Hi ESi ja VSi tilkades minimeerige nende kokkupuudet valgusega Viige oots t kuni 2 t kki korraga v imalikult v hese s tmega inkubaatorist olevast Petri tassist 20 UL suurusesse Hi tilka heks minutiks Viige teisalduspipeti otsaga H tilk hte ES1 tilgaga vt joonis 1 nool 1 ja lubage kahe lahuse spontaanset segunemist 2 minutit Siis lisage ES2 tilk nool 2 eelnevalt sulandunud tilkadele ja laske sel seista 2 minutit Viige oots t oots did koos v imalikult v hese lahusega segunenud tilgast ES3 tilka 6 kuni 10 minutiks M rkus Oots di oots tide tasakaalustamin
88. ajd h vel t mitse 2 t mit s a CryoTip vastag v g t a 4 jel felett Meritse a befedett CryoTip t k zvetlen l foly kony nitrog nbe h tve 12 000 C perc sebess ggel l sd 6b bra T ltse fel s t mitse a HSV pipett t a k vetkez k szerint Egy mikropipetta seg ts g vel vatosan tegye a mint ka t a kapill risr d v jat ba 1 mm re annak veget l A mint ka t tartalmaz cseppnek 0 5 Hl n l kevesebbnek kell lennie Kapill risrudankent legfeljebb 2 oocyta vagy embryo lehet Azonnaltegye a kapill risrudat s a nyelet a pipett ba s nyomja bele addig amig a ny l n gysz gletes r sze rintkez sbe nem ker l a pipetta kisz lesitett v g vel Finoman szor tsa ssze a mutat s a h velykujj val a pipett t majd vegye ki a behelyez eszk zt Apipetta egy helyben tart sa mellett t mitse a nyitott v get egy SYMS t mit segits g vel Tartsa meg a pipett t csipesszel a kezel r d k zel ben Gyorsan meritse f gg legesen a teljes pipett t az LN oldatba Finoman forgassa meg a pipett t az LN oldatban n h ny m sodpercig hogy elker lje a pipetta k r li l gbubor kr teg kialakul s t 11 Tegye a vitrifik lt CryoTip eszk zt vagy HSV pipett t az elmeritett LN vel t lt tt kriocs be vagy gobletbe a cryocane en Z rja le a kriocs vet vagy gobletet vagy tegyen r fejjel lefel egy m sik le nem z rt kriocs vet a vitrifik lt CryoTip ill
89. al Agite suavemente a palhinha no LN duran alguns segundos de forma a evitar a forma o d uma camada de bolhas de ar isoladoras em redor palhinha 5 vitrificada no criotubo ou copo cheio de LN mergulhado na criovara Tape o criotubo ou copo ou segure virado ao contr rio com outro criotubo destapado de modo a manter o CryoTip vitrificado ou palhinha HSV vitrificada em azoto l quido Mova o reservat rio LN para perto do crio congelador LN e transfira a crioc nula com o seu conte do para o crio congelador para uma conserva o de longo termo Protocolo de Vitrifica o de EMBRI ES PN a blastocito Dispense assepticamente uma gota de 50 uL de ES para uma tampa invertida de placa de Petri Remova a placa de cultura com o s embri o es da incubadora e verifique a sua qualidade ao microsc pio Quando for poss vel seleccione apenas os embri es de melhor qualidade para vitrifica o Retire parte da solu o ES da gota de ES para a pipeta de transfer ncia e transfira cuidadosamente a amostra at 2 de cada vez com um volume minimo de meio da placa de cultura para o gota de ES e inicie o cron metro Os embri es devem equilibrar lentamente na gota de ES por queda livre durante 6 10 minutos Nota O esp cime vai encolher e depois gradualmente voltar ao seu tamanho original o que indica que o processo de equil brio est completo CUIDADO Minimize a exposi o do s esp cime s l
90. an vitrificatie voor embryo s nog steeds onbekend zijn De voor de vervaardiging van dit product gebruikte menselijke bloedderivaten zijn getest met door de FDA Amerikaanse Instantie voor Voedsel en Geneesmiddelen gelicentieerde kits en verklaard niet reactief te zijn voor de hepatitis B oppervlakteantigeen HBsAg antilichamen voor hepatitis C HCV en antilichamen voor het menselijk immuundefici ntievirus HIV Geen enkele testmethode kan echter volledige verzekering bieden dat de uit menselijke bronnen verkregen producten niet infectieus zijn Alle menselijke bloedderivaten moeten met gebruikmaking van universele voorzorgsmaatregelen worden behandeld alsof zij infecties zouden kunnen overdragen Donoren van het bronmateriaal zijn ook gescreend op eventuele blootstelling aan de ziekte van Creutzfeldt Jakob CJD Een fles Flessen waarvan de steriele verpakking beschadigd of op enige wijze in gevaar werd gebracht mag mogen niet gebruikt worden VOORZICHTIG volgens de Amerikaanse federale wetgeving mag dit product alleen door of op voorschrift van een arts worden verkocht POLSKI WSKAZANIA DO UZYCIA Vit Kit Freeze jest przeznaczony do u ycia w procedurach wspomaganej rozrodezosci do witryfikacji i przechowywania ludzkich oocyt w MII i zarodk w zygota do blastocysty Niniejszy zestaw przeznaczony jest do stosowania z ko c wkami firmy Irvine Scientific CryoTip nr katalogowy 40709 lub stomkami HSV nr katalogo
91. anuseamento Os passos seguintes 9 13 devem ser completados em 90 110 segundos CUIDADO a exposi o das amostras ao VS deve ser limitada para evitar citotoxicidade Os esp cimes tendem a flutuar no VS por isso ajuste o foco atrav s do microsc pio para manter uma visualiza o cont nua durante a exposi o e mantenha a ponta da pipeta de transfer ncia perto para 10 1 12 13 15 Coloque o CryoTip vitrificado ou a palhinha HSV assegurar a transfer ncia r pida entre gotas de VS Consulte a Figura 5 Ap s a fase de equilibrio em ES estar completa coloque alguma quantidade de ES na pipeta de transfer ncia e transfira o s esp cime s com um volume minimo da gota de ES gota de VS durante 30 segundos Transfira rapidamente os esp cimes da primeira gota de VS para o CENTRO da segunda gota de VS VS2 durante 5 segundos Depois transfira o s esp cime s para o CENTRO da terceira gota de VS VS3 durante 10 segundos Finalmente transfira o esp cime para o FUNDO da quarta gota de VS VS4 Carregar e vedar termicamente o CryoTip da seguinte forma ver a Figura 6a Fa a deslizar a manga de cobertura met lica ao longo da CryoTip para exp r a extremidade fr gil da ponta Segurando a CryoTip e a seringa enquanto observa ao microsc pio aspire cuidadosamente um pequeno volume de VS at Marca 1 da CryoTip Continue a observar ao microsc pio e aspire cuidadosamente o esp cime com o VS at
92. apillaire HSV vitrifi dans l azote liquide D placer le r servoir d azote liquide proximit de la banque azote liquide transf rer les cryocanes avec leur contenu dans la banque pour le stockage long terme Protocole de vitrification des embryons PN au blastocyste D poser st rilement une gouttelette ES de 50 ul sur un couvercle renvers de boite de p tri Sortir la boite de culture avec les embryons de l incubateur et v rifier la qualit des sp cimens sous le microscope Dans la mesure du possible s lectionner uniquement les embryons de meilleure qualit pour la vitrification Aspirer un peu de solution ES de la gouttelette dans la pipette de transfert et soigneusement transf rer les sp cimens jusqu deux la fois et avec un volume minimal du milieu de culture de la boit de culture la gouttelette ES les placer puis d clencher le chronom tre Les embryons doivent doucement s guilibrer dans la gouttelette ES par chute libre pendant 6 10 minutes Remarque Le sp cimen va r tr cir et graduellement retourner sa taille d origine ceci indique que l quilibration est compl te ATTENTION Minimiser l exposition des sp cimens la lumi re durant l quilibration dans les gouttelettes ES et VS Durant ce temps d quilibration dans ES Pr parez 1 50 pL gouttes de solution VS comme indiqu sur la Figure 7 et pr parez le CryoTip ou l ensemble jonc ca
93. ar ou Styrofoam com tampa volume 1 2 L Azoto l quido volume suficiente para atingir 10 16 cm de profundidade no reservat rio INSTRUC ES DE UTILIZA O As necessidades de componentes do Vit Kit Freeze por aplica o Eguilibration Solution ES 60 pL para o Protocolo de Vitrifica odos O citos ou 50 HL para o Protocolo de Vitrificac o do Embri o Vitrification Solution VS 50 uL de para Protocolo de Vitrificac o 1CryoTip ou Palhinha HSV armazena at 2 esp cimes 1 Conector PROTOCOLO DE VITRIFICA O NOTA Os procedimentos devem efectuar se temperatura ambiente 20 27 C N O utilize a fase de microsc pio aquecido para os procedimentos seguintes CUIDADO minimize a exposi o do esp cime luz durante a fase de equil brio com as solu es ES e VS 1 Deixe a quantidade a ser utilizada de Solug o de Equilibrio ES e Solug o de Vitrificag o VS ficar temperatura ambiente 20 27 C NOTA evite deixar frascos inteiros de ES e VS ficarem temperatura ambiente repetidamente quando apenas for necess ria parte da solu o de cada vez E melhor retirar uma aliguota da quantidade a ser utilizada e voltar a colocar os frascos temperatura de 2 8 C imediatamente ap s retirar a aliguota O HTF HEPES modificado com prote na tamb m necess rio para o protocolo de vitrificac o dos o citos Encha o reservat rio de azoto l quido suficiente para atingir
94. asta ES3 tippaan 6 10 minuutin ajaksi Huom Oosyytin oosyyttien tasapainotus ES3 ssa on valmis kun zona pellucida ja perivitelliinitila ovat yht l iset Oosyytti oosyytit laskeutuu tipan pohjalle 3 minuutissa 7 Tasapainotuksen aikana ES3 ssa Jaa aseptisesti yksi 1 50 ul n tippa VS 2 minuuttia ennen t ydellist tasapainottumista ja valmista Cryotip kuva 3 tai HSV putki kuva 4 lataamista varten CryoTip yhdist minen Hamilton ruiskuun tai soveltuvaan aspirointiv lineeseen liittimen tai sovittimen avulla riitt v n tiiviyden varmistamiseksi HUOM Pitele metallista suojusholkkia ohuen kapean k rjen p ll suojataksesi sit kunnes n ytteet ovat valmiita ladattaviksi HSV pilli sinisen muovista valmistetun asettimen pidemm n p n liitt minen k sittelysauvan v rilliseen p h n 8 Seuraavat vaiheet 9 13 tulee suorittaa 90 110 sekunnissa VAROITUS N ytteiden altistumista VS lle tulee rajoittaa sytotoksisuuden v ltt miseksi N yte n ytteet pyrkiv t kellumaan VS ss joten mikroskoopin polttopistett tulee s t jatkuvan tarkkailun yll pit miseksi ja siirtopipetin k rke pit ulottuvilla VS tippojen v lisi pikaisia siirtoja varten Katso kuvaa 5 9 Kun tasapainotus ES ss on valmis aspiroi hieman ES t siirtopipettiin ja siirr n yte n ytteet minimitilavuudessa ES tipasta ensimm isen VS tipan 30 sekunnin ajaksi 10 Lataa ja kuumas
95. aumaa CryoTip seuraavasti ks kuva 6a Sujuta metallista suojusholkkia yl sp in pitkin CryoTipi jolloin sen ohut hauras k rki paljastuu Mikroskooppitarkastelun aikana k ytt en CryoTipi ja Hamilton ruiskua aspiroi varovasti pieni m r VS CryoTipin merkkiin 1 saakka Jatka tarkastelua mikroskoopissa ja aspiroi n yte ja VS varovasti CryoTipin merkkiin 2 saakka Tarkastele nyt suoraan CryoTipi ja aspiroi lis VS 3 merkkiin saakka N ytteen on oltava 2 ja 3 merkin v liss Kuumasaumaa sinetti 1 CryoTip merkin 1 kohdalta tai heti sen alta ja sujuta suojusholkki takaisin alas peitt m n ja suojaamaan ohutta helposti vahingoittuvaa k rke Irrota CryoTip varovasti aspirointiv lineest ja sovittimesta ja kuumasaumaa sinetti nro 2 CryoTipin paksummasta p st merkin nro 4 yl puolelta Upota suljettu CryoTip suoraan nestetyppeen j hdytysnopeus 12 000 C min ks kuva 6b Lataa ja kuumasaumaa HSV pilli seuraavasti Aseta n yte n ytteet varovasti mikropipetin avulla kapillaaritangon uraan 1 mm et isyydelle k rjest N ytteen n ytteet sis lt v n tipan on oltava tilavuudeltaan alle 0 5 pl Enint n 2 oosyytti tai alkiota kutakin kapillaaritankoa kohden Aseta kapillaaritanko ja k sittelysauva v litt m sti pilliin ja ty nn kunnes k sittelysauvan suorakaiteen muotoinen osa kohtaa pillin laajenevan p n Purista pilli kevyesti peu
96. aute s curit HSV r f rence du catalogue 019921 et le kit de d cong lation de vitrification Vi Kit d cong lation d Irvine Scientific pour une r cup ration optimale des chantillons DESCRIPTION DU PRODUIT Solution d quilibration ES est une solution compos e du milieu 199 tamponn avec du HEPES e contenant du sulfate de gentamicine 35yg ml 7 5 v v DMSO 7 5 v v thyl ne glycol et 20 v v Suppl ment S rum de Dextran Solution de vitrification VS est une solution compos e du milieu 199 tamponn avec du HEPES e contenant du sulfate de gentamicine 35ug ml 15 v v DMSO 15 v v thyl ne glycol 20 v v Suppl ment S rum de Dextran et du sucrose 0 5M Ces deux solutions doivent tre utilis es en s rie selon les tapes du protocole de vitrification en micro gouttes ASSURANCE QUALITE Les solutions contenues dans le Vit Kit Freeze ont t st rilis es par filtration et trait es de mani re aseptique selon des proc dures de fabrication qui r pondent au niveau 10 de st rilit Sterility Assurance Level Chaque lot de Vit Kit Freeze a subi les tests suivants Solutions et CryoTips Le contenu en endotoxines par la m thode LAL Test de bio compatibilit par le test d embryons de souris embryons une cellule St rilit par les tests courants de la pharmacop e am ricaine USP 71 Les r sultats de ces tests sont disponibles dans u
97. azione a lungo termine Istruzioni della conservazione Per ulteriori dettagl sull uso de queste prodotti il laboratorio dovrebbe consultare le sue protocolli tecniche standard che sono statti specificamente fatti ed ottimizzatti per la sua impianto ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONE E STABILIT Conservare i flaconi chiusi refrigerati a temperatura tra 2 C e 8 C Quando sono conservate nel modo indicato le soluzioni del kit di congelamento per vetrificazione sono stabili sino alla scadenza indicata sulle loro etichette Una volta aperti i contenitori non utilizzare il mezzo per un periodo superiore a otto 8 settimane Nel prodotto presente materiale di origine umana e si possono sviluppare sostanze particellari durante la conservazione Per quanto noto questo tipo di sostanze particellari non ha nessun effetto sulle prestazioni del prodotto PRECAUZIONI ED AVVERTIMENTTI Questo dispositivo previsto per l uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo previsto Quando il pacchetto aperto suggeriamo che ogni CryoTip esaminato con attenzione CryoTips dovrebbe essere esaminato con un microscopio ingrandimento 40x per danni possibili Non utilizzare qualsiasi fiale di soluzione che evidenzi torbidezza o material di particelle Perevitare problemi di contaminazione maneggiare utilizzando tecniche in asepsi I Soluzioni di Cong
98. ballage er blevet kompromitteret FORSIGTIG Ifolge amerikansk lov USA m dette produkt kun salges af eller efter ordination af en l ge SUOMI K YTT TARKOITUS Vit Kit Freeze on tarkoitettu avusteisten lis ntymismenettelyjen yhteydess suoritettavaan ihmisen oosyyttien MII ja alkioiden tsygootista blastokystaan vitrifikaatioon ja s ilytykseen T m pakkaus on tarkoitettu k ytett v ksi Irvine Scientificin tuotteiden CryoTip tuotenro 40709 tai HSV pilli tuotenro 019921 ja vitrifikaation sulatuspakkauksen Vit Kit Thaw kanssa n ytteiden optimaaliseen talteenottoon TUOTTEEN KUVAUS Equilibration Solution ES on HEPES puskuroitu Medium 199 liuos jossa on gentamisiinisulfaattia 35 ug ml 7 5 tilav tilav sek dimetyylisulfoksidia DMSO ja etyleeniglykolia kumpaakin ja 20 tilav tilav Dextran Serum Supplement Vitrifikaatioliuos VS on HEPES puskuroitu Medium 199 liuos joka sis lt gentamisiinisulfaattia 35 pg ml 15 96 v v kutakin dimetyylisulfoksidia DMSO ja etyleeniglykolia 20 v v Dextran Serum Supplementia ja 0 5 M sukroosia N it kahta liuosta k ytet n j rjestyksess asteittaisen mikropisaroiden vitrifikaatioprotokollan mukaisesti LAADUNVARMISTUS Vit setin Freeze liuokset on kalvosuodatettu ja aseptisesti k sitelty valmistusvaatimusten mukaisesti jotka on vahvistettu steriliteettitasoa SAL 103 vastaaviksi Jokainen Vit Kit Freeze er testataan seur
99. bir Analiz Sertifikasrnda raporlanmaktad r GEREKL OLAN AMA TEDAR K ED LMEYEN MATERYALLER Irvine Scientific CryoTip Katalog No 40709 veya HSV Payet Katalog No 0019921 Irvine Scientific Konnect r Katalog No 40736 veya ba ka adapt r Steril Petri Tabaklar 50 X 9 mm Falcon 351006 veya muadil r n Kriyo t pler 4 5 mL veya gobletler ve kriyo ubuklar cryocanes Protein takviyeli Modifiye HTF HEPES Katalog 90126 k lt r medyumu Tek kullan ml k eldiven Hamilton GASTIGHT r nga 50 uL Katalog 80901 veya bir ba ka aspirasyon arac Transfer pipetleri ekmeli cam pipetler veya 200um i u apl mikropipet u lar C mb z Impulse S cak M h r Arac HSV Payeti i in SYMS Yal t c Katalog No 016296 Kronometre veya timer S v Nitrojen Rezervuar kapakl 1 2 L hacimli termos veya strafor kap S v Nitrojen rezervuarda 4 in derinlik olu turmaya yetecek miktarda KULLANIM Y NERGELER Vit Kit Freeze bile en gereksinimleri her bir uygulama i in Dengeleme Sol syonu ES Oosit Vitrifikasyon Protokol i in 60 uL Veya Embriyo Vitrifikasyon Protokol i in 50 uL Vitrifikasyon Sol syonu VS Vitrifikasyon Protokol i in 50 uL vi N C 1 Kriyo U veya HSV Payeti 2 rnek kapasiteli 1 Konnekt r ITRIFIKASYON PROTOKOL OT Prosed rlerin oda s cakl nda 20 279 uygulanmas gerekmektedir A a daki prosed rler i
100. bleme zu meiden Vitrification Freeze Kit L sungen beinhalten das Antibiotikum Gentamicinsulfat Passende Vorsichtsmassnahmen sollen getroffen werden um zu sichern dass Patienten keine Reaktion gegen dieses Antibiotikum haben werden Zurzeit zeigt Forschungsliteratur dass die langfristigen Auswirkungen von Verglasung auf Embryos unbekannt bleibt Die zur Herstellung dieses Produkts verwendeten menschlichen Blutderivate wurden mit FDA lizenzierten Kits getestet und waren in Bezug auf das Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Antik rper gegen Hepatitis C HCV und Antik rper gegen das Human Immunodeficiency Virus HIV nicht reaktiv Keine Testmethode liefert jedoch eine hundertprozentige Garantie dass aus menschlicher Quelle gewonnene Produkte nicht infekti s sind Alle menschlichen Blutderivate sollten mit universellen Vorsichtsma nahmen so gehandhabt werden als k nnten sie eine Infektion bertragen Die Spender dieser Quellenmaterialien wurden auch hinsichtlich des Risikos f r Creutzfeldt Jakob Krankheit CJK gescreent Keine Flaschen verwenden deren sterile Verpackung besch digt wurde ORSICHT Nach US Bundesgesetz darf dieses Ger t nur von oder auf Antrag von einem Arzt verkauft werden ITALIANO USO PROGETTATO Vit Kit Freeze deve essere utilizzato per l uso nelle tecniche di riproduzione per il vetrificazione e la conservazzione di oocite umane MII ed embrioni zigoti a blastociste Questo
101. care a Oocitelor Sau 50 uL pentru Protocolul de Vitrificare a embrionului Solutie de Vitrificare VS 50 uL pentru Protocolul de Vitrificare 1 CryoTip sau Tubul HSV poate depozita dou mostre 1 Conector PROTOCOL DE VITRIFICARE NOT Procedurile trebuie executate la temperatura camerei 20 27 C NU FOLOSITI m suta portobiect a microscopului inc lzi pentru procedurile urm toare AVERTISMENT Minimalizati expunerea mostrei la lumin n timpul echilibr rii n solutia ES si VS 1 Aduceti cantitatea de solutie de echilibrare ES si de solutie de vitrificare VS ce urmeaz a fi utilizat la temperatura camerei 20 27 C NOT Evita i aducerea repetat la temperatura camerei a eprubetelor cu ES si VS atunci c nd doar o parte din solutie este necesar de fiecare dat Se recomand s se ia p rti alicote din cantitate n vederea utiliz rii i s pune i eprubetele din nou la o temperatur de 2 8 C imediat dup luarea p r ilor alicote Modified HTF HEPES cu proteine este de asemenea cerut la protocolul de vitrificare a ovocitelor Umpleti rezervorul cu lichid de azot suficient s ajunge i la o ad ncime de 4 inci sau ca s scufundati complet criotubul pe tij i pune i aproape de microscop Ata ati criotubul sau gobletul neacoperit la cap tul de jos a cle telui criotijei i scufundati n azotul lichid din containerul utilizat n preparatia pentru depozitare
102. d ugotrwa ego przechowywania B Protok Witryfikacji ZARODK W PN do blastocysty 1 Aseptycznie przenie jedna 50 ul kropl ES na odrw con pokryw tacki Petriego 2 Wyj z inkubatora naczynko na posiew zawieraj ce zarodek ki i sprawdzi jako pr bki ek pod mikroskopem Je eli jest to mo liwe nale y wybra tylko najlepszej jako ci zarodek ki do witryfikacji 3 Ostro nie przenie pr bk do dw ch ka dorazowo z minimaln obj to ci po ywki z naczynka na posiew kropli ES i w czy stoper Zarodki nale y doprowadzi powoli do stanu r wnowagi w kropli ES przez swobodne spadanie w ci gu 6 10 minut Uwaga Pr bka ulegnie sk rczeniu a nast pnie stopniowo b dzie powraca do swojego oryginalnego rozmiaru co b dzie oznacza o e proces osi gania r wnowagi zosta zako czony UWAGA Zminimalizowa dzia anie wiat a na pr bk i podczas ustalania r wnowagi w kroplach ES i VS 4 Podczas tego czasu osi gania r wnowagi w ES Przygotowa 1 50 HL krople roztworu VS jak pokazano na rys 7 i przygotowa ko c wk CryoTip lub s omk HSV do nape nienia Post powa wed ug powy szego protoko u Cz A Protok t Witryfikacji Oocytu MII od etapu 8 do 16 dotycz cego roztwor w VS adowania ko c wki CryoTip zanurzania w ciek ym azocie LN i d ugotrwa ego przechowywania Aby zapozna si z dodatkowymi szczeg ami u yci
103. de embryo s uit de incubator en controleer de kwaliteit van het de monster s onder de microscoop Kies indien mogelijk uitsluitend het de embryo s van de hoogste kwaliteit voor vitrificatie 3 Breng het monster maximaal twee tegelijkertijd met een minimaal volume medium over van de petrischaal naar het van een druppel ES en start de timer Embryo s moeten langzaam equilibreren in de ES druppel middels vrije val gedurende 6 10 minuten Opm het monster zal krimpen en dan geleidelijk terugkeren naar zijn oorspronkelijke vorm dit betekent dat de equilibratie voltooid is VOORZICHTIG beperk de blootstelling van het de monster s aan licht tijdens equilibratie in ES en VS druppels tot een minimum 4 Tijdens deze equilibratietijd in ES Plaats 1 50 HL druppels van de VS oplossing zoals aangegeven in figuur 7 en maak de CryoTip of het HSV buisje gereed voor het vullen Volg het protocol zoals hierboven beschreven Hoofdstuk A O cyt MII vitrificatieprotocol van stap 8 t m 16 voor blootstelling aan VS oplossingen laden van de CryoTip onderdompelen in vloeibare stikstof LN en langdurige opslag Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma BEWAARINSTRUCTIES EN STABILITEIT Bewaar de ongeopende ampullen gekoeld bi
104. den med hj lp av SYMS f rsegling Hall str et med pincett n ra hanteringsstaven Lat hela str et snabbt falla ner i LN vertikalt R r rsiktigt om str et i LN n gra sekunder f r a undvika att det bildas ett isolerande lager med uftbubblor runt det 11 Placera den vitrifierade CryoTip eller HSV str et i det neds nkta LN fyllda kryor ret eller b garen p kryostickan St ng kryor ret eller b garen eller s ihop det upp och ned med ett annat ppet kryor r f r att s kra att det vitrifierade CryoTip eller HSV str et ligger i flytande kv ve 12 Flytta beh llaren med flytande kv ve LN intill LN frysen och verf r kryor rh llaren med inneh ll ti frysen f r l ngtidsf rvaring B Vitrifieringsprotokoll f r EMBRYON PN till blastocyst 1 Dispensera aseptiskt en 50 uL droppe ES p ei uppochnedv nt lock fr n en petrisk l 2 Tautodlingssk len med embryot n fr n inkubatorn och kontrollera preparatets ens kvalitet under mikroskop V lj endast embryo n av b sta kvalitet f r vitrifiering n r s r m jligt 3 F r omsorgsfullt ver preparatet h gst tv i taget med en minimal volym medium fr n odlingssk len till ES droppen och starta tidtagaren Embryona b r ekvilibrera l ngsamt i ES droppen genom fritt fall i 6 10 minuter Obs Preparatet kommer att krympa och d refter successivt terg till sin ursprungliga storlek vilket anger att ekvilibrering
105. e Cryo Capovolgere gentilmente ogni fiala di ES e VS due volte per mescolare i contenenti prima dell uso Preparare la capsula con gocciette delle soluzione per il Procedimento di Vetrificazione cosi A PROTOCOLLO DI OOCITE MII NOTABENE Refieri al Parte B per il protocollo del vetrificazione dell embrione 1 Distribuire in maniera asettica alcune cadere da 20 pl di terreno di coltura HTF HEPES modificato con proteine e PES vicino al coperchio rovesciato di una piastra di petri sterile come mostrato nella Figura 1 e posizionare la piastra sul piano del microscopio una goccia da 20 ul di HTF modificato HEPES con proteine Tre gocce di 20 uL 60L in totale di ES ES1 ES2 ES3 Rimuovere la capsula di coltura che contiene oocite di MII dall incubatrice e controllare la qualit delle campione sul microscopio Dove possibile selezionare solo le oocite di qualit migliori di MII Avvertimento Minimizzare l esposizione delle campione al luce durane l equilibrazione nelle gocce di H ES e VS Trasferire il oocite fino a 2 alle volta con un volume minimo della sostanza della capsula di coltura nella incubatrice nella goccia di H per 1 minuto Combinare la goccia di H al ES1 vedi Figure 1 freccia 1 con il punto della pipetta di trasferimento e permettere il mescolare spontaneo delle 2 soluzione per 2 minuti Mescolare poi la goccia di ES2 freccia 2 alle gocce mescolate in precedenza e lascia
106. e ES3s on t ielik kui zona pellucida ja perivitelliinruumi paksus on v rdne Oots t oots did langevad tilga p hja 3 minuti jooksul ES3es tasakaalustamise ajal Dispenseerige aseptiliselt ks 1 50 pL tilk VS lahust 2 minutit enne t ielikku tasakaalustumist ja valmistage ette cryotip joonis 3 v i HSV k rs joonis 4 laadimiseks CryoTip hendatakse Hamiltoni s stlaga v i sobiva aspiratsioonivahendiga kasutades hermeetilise kinnituse tagamiseks konnektorit v i adapterit M RKUS Hoidke metallkatte mbris peene v ljat mmatud otsa mber et kaitsta seda kuni see on valmis proovide laadimiseks HSV k rs hendab sinise plastikust vaheseadme pikemat otsa teisaldusvarda v rvilise otsaga J rgmised sammud 9 13 tuleb teostada 90 110 sekundi jooksul ETTEVAATUST Proovide kokkupuudet VSiga tuleb piirata v ltimaks tsiitotoksilisust Proov id kipuvad VSis ujuma sellep rast tuleb mikroskoobi fookust pidevalt korrigeerida et kokkupuute k igus saaks proove pidevalt j lgida ja hoida teisalduspipeti 10 12 ots nende vahetus l hedus tagamaks kiiret leviimist hest VSi tilgast j rgmisse Vt joonist 5 P rast t ielikku tasakaalustamist ESis t mmake osa ESist teisalduspipetti ja viige proov id koos v imalikult v hese s tmega ESi tilgast esimese VSi tilga 30 sekundiks Laadige ja kuumtihendage CryoTip j rgmiselt vt joonist 6a Libistage metallist h ls
107. e for at blande indholdet inden brug 6 Forbered sk len med dr ber af oplgsning til vitrifikation som folger A Protokol for vitrifikation af OOCYTTER MII BEM RK Se afsnit B for at se protokollen for vitrifikation af embryoner 1 Dispenser aseptisk 20 ul dr be af dyrkningsmediet Modificeret HTF HEPES med protein og ES i n rheden af et omvendt l g p en steril petrisk l som vist i figur 1 og placer sk len p mikroskopets platform en20yldr be Modificeret HTF HEPES med protein tre 20 ul dr ber 60 pl i alt af ES ES1 ES2 ES3 2 Fjern dyrkningssk len med MIl oocytterne fra inkubatoren og kontroller provernes kvalitet under mikroskop N r det er muligt v lges kun oocyt ter af den bedste kvalitet p MII stadiet FORSIGTIG Minimer udseettelse af prove r for lys under ekviliberering i H ES og VS dr ber 3 Overfgr oocytten op til 2 ad gangen med en minimal volumen af mediet fra dyrkningssk len i inkubatoren ind i 20 pl dr ben af H i t minut 4 LadH dr ben flyde sammen med ES1 se fig 1 pil 1 vha spidsen p transferpipetten og tillad spontan blanding af de to opl sninger i 2 minutter 5 Bland derefter dr ben af ES2 pil 2 med de tidligere blandede dr ber og lad den st i 2 minutter 6 Overfor oocytten oocytterne med minimal volumen af oplosningen fra den sammenflydte ES3 drabe i 6 10 minutter Bemark Ekvilibrering af oocyt ter i ES3 er feerdig n r tykkelsen
108. e kogu k rs kiiresti vertikaalselt LN sisse Segage ettevaatlikult k rt LN sees m ni sekund et v ltida isoleeritud humullikihi moodustumist k rre mbruses Asetage vitrifitseeritud CryoTip v i HSV k rs sukeldatud LN ga t idetud kr okatsutisse v i klaasikesse Cryocane raamil Korkige sulguriga kr okatsut v i klaasike v i lisage sellele tagurpidi teine korkimata kr okatsut selleks et kinnitada vitrifitseeritud CryoTip v i HSV k rs vedell mmastikus Liigutage vedela l mmastiku LN mahuti LN kr ok lmuti l hedale ja viige Cryocane raam koos selle sisuga kr ok lmutisse pikaajaliseks s ilitamiseks EMBR OTE PN kuni blastots stini vitrifikatsiooni protokoll Dispenseerige aseptiliselt ks 50 uL tilk ESi Petri tassi mberp ratud kaanele Eemaldage inkubaatorist embr ot embr osid sisaldav tass ja kontrollige mikroskoobi all proovi de kvaliteeti V imaluse korral valige vitrifitseerimiseks ainult k ige kvaliteetsema d emb o d Ettevaatlikult viige proov kuni kaks proovi korraga v imalikult v hese s tmega Petri tassist ESi tilga ja pange taimer k ima Embr od peavad ESi tilgas vabalt langedes aeglaselt tasakaalustuma 6 10 minutit M rkus Proov kahaneb ja siis taastab j rkj rguliselt esialgse suuruse mis n itab et tasakaalustumine on t ielik ETTEVAATUST Proovi de tasakaalustamisel ESi ja VSi tilkades minimeerige nende kokkupuudet valgusega 4
109. e p tri avec des gouttelettes de solutions de vitrification de la mani re suivante A Protocole de vitrification des ovocytes MII REMARQUE Pour le protocole de vitrification des embryons se r f rer la section B 1 R partissez de mani re aseptis e des laisser tomber 20 ul du milieu de culture HTF HEPES modifi avec des roteines et la solution ES de fagon rapproch e sur le couvercle invers d une bo te de p tri st rile comme indiqu sur la Figure 1 et placez la bo te sur la platine du microscope une goutte de 20 ul de HTF modifi HEPES avec prot ines Trois gouttelettes de 20 ul 60 ul au total de ES ES1 ES2 ES3 Sortir la boite de culture contenant les ovocytes de l incubateur et v rifier la qualit des sp cimens sous un microscope Dans la mesure du possible s lectionner uniquement les ovocytes MII de meilleure qualit ATTENTION Minimiser l exposition des sp cimens la lumi re durant l quilibration dans les gouttelettes H ES et VS 3 Avec un volume minimal du milieu de culture transf rer les ovocytes une ou deux la fois de la boite de p tri incubateur dans la gouttelette de 20 ul de mod HTF HEPES pendant 1 minute Faire confluer les gouttelettes H et ES1 cf figure 1 fl che 1 avec le bout de la pipette de transfert et laisser le m lange des deux solutions se faire de mani re spontan e pendant 2 minutes 5 Ajoutez ensuite la goutte d ES2 fl che 2 aux g
110. e reproducci n asistida Este kit est indicado para su uso con los productos CryoTip n de cat logo 40709 o pajuela HSV n de cat logo 019921 y kit de vitrificaci n Vit Kit Thaw de Irvine Scientific para la recuperaci n ptima de muestras DESCRIPCI N DEL PRODUCTO Soluci n Equilibrante ES es una soluci n de Medio 199 tamponada con HEPES que contiene sulfato de gentamicina 35 mg mL 7 5 v v de DMSO y de etilen glicol 20 v v de Dextran Serum Supplement Soluci n de Vitrificaci n VS es una soluci n de Medio 199 tamponada con HEPES gue contiene sulfato de gentamicina 35 mg mL 15 v v de DMSO y de etilen glicol 20 v v de Dextran Serum Supplement y 0 5 M de sacarosa Estas dos soluciones deben usarse secuencialmente siguiendo los pasos del protocolo de vitrificaci n en microgotas CONTROL DE CALIDAD Las soluciones incluidas en el Vit Kit Freeze est n filtradas a trav s de membrana y procesadas en condiciones de esterilidad de acuerdo a los procesos de manufactura validados para conseguir un nivel de garant a de esterilidad SAL de 10 Cada lote de Vit Kit Freeze se somete a los siguientes ensayos Soluciones y CryoTips Endotoxinas por el m todo LAL Biocompatibilidad por ensayo en embriones de rat n 1 c lula Esterilidad de acuerdo al ensayo de esterilidad USP vigente lt 71 gt Todos los resultados se reflejan en el Certificado de An lisis espec fico de lote disponible
111. ej widoczne sa cz steczki materii lub zm tnienie Aby unikn pr blem w z zanieczyszczeniem pos uguj c si tym produktem nale y stosowa technik aseptyczn Roztwory Vitrification Freeze Kit zawieraj antybiotyk siarczan gentamycyny Nale y zastosowa odpowiednie rodki ostro no ci w celu upewnienia si e pacjent nie jest uczulony na ten antybiotyk Obecnie pi miennictwo naukowe stwierdza e d ugotrwa y wp yw witryfikacji na zarodki jest nieznany Ludzkie preparaty krwiopochodne wykorzystane podczas wytwarzania tego produktu zosta y przetestowane za pomoc zestaw w zatwierdzonych przez ameryka ski Urz d Kontroli ywno ci i Lek w FDA z potwierdzeniem braku reaktywno ci wobec antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia w troby typu B HBsAg przeciwcia przeciwko wirusowi zapalenia w troby typu C HCV i przeciwcia przeciwko ludzkiemu wirusowi upo ledzenia odporno ci HIV adna metoda analityczna nie daje jednak ca kowitej pewno ci e produkty pochodz ce z materia u ludzkiego s niezaka ne Wszelkie ludzkie preparaty krwiopochodne nale y traktowa jako potencjalnie zaka ne stosuj c uniwersalne rodki ostro no ci Dawcy materia w wykorzystanych w produkcji zostali r wnie poddani testom przesiewowym w kierunku ryzyka choroby Creutzfeldta Jakoba CJD Nie u ywa adnej butelki w kt rej dosz o do naruszenia ja owego opakowania UWAGA Prawo federalne S
112. ek ben A minta mint k ltal ban sznak a VS ben ez rt gy ll tsa be a mikroszk p f kusz t hogy a kitetts g alatt folyamatosan tartani tudja a l that s got s tartsa a k zelben a transzfer pipetta hegyet hogy biztos tani tudja VS cseppek k zt a gyors transzfereket 5 br ra vonatkozik 9 Miut n az egyens lyba hozatal az ES ben befejez d tt sz vjon fel valamennyi ES t a transzfer pipett ba s vigye ta mint t mint kat minim lis t rfogattal ES cseppj b l a VS 30 m sodpercre 10 T ltse fel s t m tse h vel a CryoTip eszk zt a k vetkez k szerint l sd 6a bra Huzzafelaf m takar h velyt a CryoTip ment n hogy szabadd tegye a v kony t r keny cs csv get A CryoTip t s Hamilton fecskend t kezelve a mikroszk p alatt figyelve vatosan szivjon le egy kis t rfogat VS t a CryoTip en lev 1 sz m jelig Folytassa a megfigyel st a mikroszk p alatt s Ovatosan szivja le a mint t VS el a CryoTip en l amp v 2 jelig Most figyelje meg a CryoTip t k zvetlen l s sz vjon le t bb VS t a 3 sz mu jelig A specimennek a 2 s 3 sz m jelek k z tt kell elhelyezkedni Hegeszt ssel z rja le 1 lez r s a CryoTip t az 1 sz mu jeln l vagy csak pp alatta s cs sztassa vissza a takar h velyt hogy fedje s v dje a vekony t r keny hegyet Ovatosan vegye le a CryoTip eszk zt a felsz v eszk zr l s az adapterr l m
113. elazione di Vetrificazione contengono l antibiotico solfato di gentamicina Le precauzioni appropriate devono essere pressi per assicurare che il paziente non e allergico a questo antibiotico Attualmente la literatura di ricerca indica che gli effetti di lungo termine di vetrificazione sull embrioni rimangono sconosciuti I derivati da sangue umano usati nella fabbricazione di questo prodotto sono stati testati tramite kit autorizzati dalla FDA e hanno mostrato di essere non reattivi verso Pantigene di superficie dell epatite B HBSAg gli anticorpi per l epatite C HCV e gli anticorpi per il virus dell immunodeficienza umana HIV Tuttavia nessun metodo di analisi offre una garanzia completa che i prodotti derivati da fonti umane siano non infettivi Manipolare tutti i derivati da sangue umano come se fossero in grado di trasmettere infezioni adottando le precauzioni universali I donatori del materiale d origine sono stati sottoposti anche ad analisi per il rischio di esposizione alla malattia di Creutzfeldt Jacob CJD Creutzfeldt Jacob disease Non usare flaconi in cui la confezione sterile sia stata compromessa CAUTELA La legge federale U S se limita questo meccanismo prodotto a la vendita da o sull ordine di un medico o dottore ESPANOL APLICACI N EI Vit Ki Freeze ha sido desarrollado para la vitrificaci n y conservaci n de oocitos humanos MII y embriones de zigotos a blastocisto en t cnicas d
114. ement Vitrifika n roztok VS je HEPES pufrovany roztok m dia 199 obsahuj c gentamicin sulf tu 35 ug ml 15 v v dimetylsulfoxidu DMSO 15 ethylenglykolu 20 v v Dextran Serum Supplement a 0 5 M sacharidu yto tii roztoky se pou ivaji v pofadi podle krok protokolu vitrifikace mikrokapek KONTROLA KVALITY Roztoky v sade Vit Kit Freeze jsou filtrov ny pres membr nu azpracov ny asepticky podle vyrobnich metod u kterych bylo ov eno e spl uj hladinu zaru en sterilizace SAL 10 Ka d ar e sady Vit Kit Freeze podstoup n sleduj c esty Roztoky a ty inky CryoTips Endotoxin pomoc metody testu Limulus Amebocyte Lysate LAL Biokompatibilita testem embrya laboratorn my i jednobun n ho Sou asn pou van test na kontrolu sterility podle Farmakognozie Spojen ch st t americk ch lt 71 gt V echny v sledky se zaznamen vaj do Dokladu o anal ze konkr tn ar e kter je k dispozici na po d n NEDODAN ALE NEZBYTN MATERI L CryoTip katalogov 40709 nebo HSV Straw katalogov 0019921 spole nosti Irvine Scientific Konektor katalogov 40736 spole nosti Irvine Scientific nebo jin adapt r Sterilni Petriho misky 50 x 9 mm Falcon 351006 nebo obdobn Kryo zkumavky 4 5 ml nebo trubi ky a kryo dr ky Kultiva ni m dium Modified HTF HEPES katalogov 90126 s p id n m b lkoviny Ochrann
115. en r fullbordad OBS Minimera exponering av preparatet n f r Ijus under ekvilibrering i ES och VS dropparna 4 Under denna ekvilibreringsperiod i ES placera 1 50 uL droppar VS l sning enligt figur 7 och f rbered CryoTip eller HSV str et f r laddning F lj ovanst ende protokoll avsnitt A Vitrifieringsprotokoll f r oocyt MII fr n steg 8 t o m 16 f r exponering f r VS l sningar laddning av CryoTip neds nkning i flytande kv ve LN samt l ngtidsf rvaring F r ytterligare information om anv ndning av dessa produkter b r varje laboratorium konsultera sina egna laboratorief rfaranden och protokoll som utvecklats och optimerats s rskilt f r de egna medicinska programmen F RVARING OCH HALLBARHET O ppnade ampuller ska f rvaras i kylsk p vid 2 8 C Vid f rvaring enligt anvisningarna r l sningarna i satsen f r vitrifiering och nedfrysning h llbara fram till det utg ngsdatum som anges p ampulletiketterna Medierna f r inte anv ndas under l ngre tid n tta 8 veckor efter att beh llarna har ppnats Eftersom produkten inneh ller material av humant ursprung kan partiklar bildas under f rvaring Denna typ av partiklar har inte visats ut va n gon effekt p produktens funktion F RSIKTIGHETS TG RDER OCH VARNINGAR Denna produkt r avsedd att anv ndas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade till mpning f r vilken produkten r
116. en Ende des CryoTip oberhalb von Markierung Nr 4 hitzeversiegeln Versiegelung Nr 2 Tauchen Sie die bedeckte fl ssigen Stickstoff unter Der Stickstoff soll eine K hlungsmaR von 12 000 C min haben sehen Sie Figur 6b Den HSV Straw folgendermaften laden und versiegeln Mit einer Mikropipette die Probe n vorsichtig 1 mm vom Ende entfernt in die Rinne des Kapillarstabes einbringen Der Tropfen mit der Probe muss weniger als 0 5 il betragen Maximal 2 Oozyten oder Embryos ur jeden Kapillarstab Den Kapillarstab und die Handhabungsvorrichtung sofort in den Straw platzieren und eindr cken bis der rechteckige Teil der Handhabungsvorrichtung das ausgestellte Ende des Straws ber hrt Den Straw zwischen Daumen und Zeigefinger zusammendr cken und die Einf hrungsvorrichtung entfernen Den Straw weiterhin festhalten und das offene Ende mit einem SYMS Versiegler versiegeln Den Straw mit einer Pinzette im Bereich des Handhabungsstabes festhalten Den gesamten Straw rasch vertikal in LN eintauchen Den Straw f r einige Sekunden vorsichtig in LN r hren um die Bildung einer isolierenden Luftblasenschicht um den Straw herum zu vermeiden 11 Den vitrifizierten CryoTip oder HSV Straw in das eingetauchte mit LN gef llte Kryor hrchen oder den Becher platzieren auf dem Cryocane Das Kryor hrchen oder den Becher verschlieRen oder umgekehrt an ein anderes unverschlossenes Kryor hrchen anschlieRen um
117. en exponeras Hantera CryoTip och Hamilton sprutan medan du observerar i mikroskopet och aspirera f rsiktigt en liten volym VS till m rke nr 1 p CryoTip Forts tt att observera under mikroskop och sug f rsiktigt upp preparatet med VS till m rke nr 2 p CryoTip Observera nu CryoTip direkt och aspirera mer VS till m rke nr 3 Preparaten maste befinna sig mellan m rke 2 och m rke 3 V rmef rsegla f rsegling nr 1 CryoTip vid eller strax nedanf r m rke nr 1 och skjut sedan skyddshylsan tillbaka ned s att den tunna och sk ra spetsen skyddas Avlagsna f rsiktigt CryoTip fran aspirationsverktyget och adaptern och v rmef rsegla sedan f rsegling nr 2 vid den tjocka nden av CryoTip ver m rke nr 4 S nk ned den t ckta CryoTip direkt i flytande kv ve nedkylning vid en hastighet av 12 000 C min se igur 6b Ladda och f rsegla HSV str et enligt f ljande Placera f rsiktigt provet proverna med hj lp av en mikropipett i kapill rr ret i r nnan 1 mm fran nden Provdroppen m ste vara under 0 5 ul Maximalt 2 oocyter eller embryon till varje kapill rr r Placera genast kapill rr ret och hanteringsstaven i str et och tryck p tills den rektangul ra delen av handtaget kommer i kontakt med den vidgade nden av str et Fatta f rsiktigt tag i str et med tummen och pekfingret och tag bort inf ringsenheten Medan str et fortfarande halls p plats f rsegla den Oppna n
118. en s must be under 0 5 ul Maximum of 2 oocytes or embryos for each capillary rod Immediately place the capillary rod and handler into he straw and push until the rectangular portion of he handler comes in contact with the flared end of he straw Slightly pinch the straw between your thumb and inger and remove the insertion device While still holding the straw in place seal the open end using a SYMS sealer Hold the straw using tweezers in the area of the handling rod Quickly plunge the entire straw into LN vertically Gently stir the straw in LN for a few seconds so as to avoid formation of an isolating air bubble layer around the straw Place the vitrified CryoTip or HSV straw into the submerged LN filled cryotube or goblet on the cryocane Cap the cryotube or goblet or attach up side down with another uncapped cryotube in order to secure the vitrified CryoTip or HSV straw in liquid nitrogen Movethe LN reservoir close to the LN cryo freezer and transfer the cryocane with contents to the cryo freezer for long term storage EMBRYOS PN to Blastocyst Vitrification Protocol Aseptically dispense one 50 uL drop of ES on an inverted lid of Petri dish Remove the culture dish with embryo s from the incubator and check the quality of the specimen s under microscope Where possible select only the best quality embryo s for vitrification Carefully t
119. ept uzga a lai aizsarg tu to l dz var ievietot paraugus HSV salmi savienojiet zil s plastmasas ievieto anas ier ces gar ko galu ar apstr des stienisa kr saino galu 8 Turpm kie so i 9 13 j paveic 90 110 sekun u laik BR DIN JUMS Paraugus dr kst pak aut tikai ierobe otai VS iedarb bai lai nepie autu citotoksicit tes ra anos Paraugiem ir tieksme sl d t VS t d piel gojiet mikroskopa fokusu lai saglab tu past v gu vizualiz ciju 10 11 12 apstr des laik k ar turiet pipetes galu cie i blakus lai nodro in tu tru p rne anu starp VS pilieniem Skatiet 5 att lu P c tam kad stabiliz cija ES pabeigta ievelciet nedaudz ES p rne anas pipet un p rnesiet paraugu s kop ar minim lu daudzumu no ES piliena uz pirm VS piliena 30 sekund m Piepildiet un ar karstumu hermetiz jiet CryoTip k nor d ts turpm k skatiet 6a att lu Pavelciet CryoTip met la apvalka uzmavu uz aug u lai k tu redzams smalkais trauslais gals Izmantojot CryoTip and Hamilton lirci kam r veicat nov ro anu mikroskop r p gi aspir jiet nelielu VS daudzumu l dz atz mei Nr 1 uz CryoTip Turpiniet veikt nov ro anu mikroskop un uzman gi aspir jiet paraugu kop ar VS l dz atz mei Nr 2 uz CryoTip Tagad v rojiet tie i CryoTip un aspir jiet vair k VS l dz atz mei Nr 3 Paraugs j ievieto starp atz m m Nr 2 un Nr 3
120. er Petrischale im Brutschrank in den 20 ul Tropfen Modified HTF HEPES 4 Mischen Sie den Tropfen von H mit ES1 sehen Sie Fig 1 Pfeil 1 Gebrauchen Sie die D se einer Transferpipette und erm glichen Sie f r 2 Minuten die spontane Mischung der zwei L sungen 5 Dann den Tropfen ES2 Pfeil 2 mit den zuvor kombinierten Tropfen kombinieren und 2 Minuten stehen lassen 6 Die Oozte n mit minimaler Menge der L sung des Tropfengemisches auf den ES3 Tropfen bertragen und 6 10 Minuten warten Hinweis guilibrierung des der Oozyten in ES3 ist fertig wenn die Dicke der Zona Pellucida und die Dicke des perivitellinen Raums gleich sind Der die Oozyt en wird werden innerhalb von 3 Minuten auf das untere Ende des Tropfen niederlassen 7 W hrend der guilibrierungszeit in ES3 Einen 1 VS Tropfen 50 pL mit aseptischer Technik 2 Minuten vor Beendigung der Eguilibrierung bertragen und den Cryotip Abb 3 bzw HSV Straw Abb 4 zur Beladung vorbereiten CryoTip Mit einem Konnektor oder Adapter an die Hamilton Spritze oder ein angemessenes Aspirationswerkzeug anschlieRen um eine dichte Versiegelung sicherzustellen HINWEIS Die Metallabdeckung auf der d nnen Spitze belassen um sie bis zum Laden der Proben zu sch tzen HSV Straw Das l ngere Ende der blauen Kunststoff Einf hrungsvorrichtung an das farbige Ende des Handhabungsstabs anschlieRen 8 Die Folgenden Schritte 9 13 sollen in 90 110 Sekunden ausgef
121. errel Biokompatibilit s eg r embrio assay vel egy seit Sterilit s a jelenlegi US Pharmacopeia sterilit si vizsg lattal lt 71 gt Minden eredm nyr l jelent s k sz lt egy t tel specifikus Analitikai Bizonylaton ami k r sre rendelkez sre ll SZ KS GES DE ITT NEM BIZTOSITOTT ANYAGOK Irvine Scientific CryoTip katal gussz m 40709 vagy HSV pipetta katal gussz m 0019921 Irvine Scientific csatlakoz katal gussz m 40736 vagy egy b adapter Steril Petri cs sz k 50 x 9 mm Falkon 351006 vagy azzal ekvivalens Kriocs vek 4 5 ml vagy krioampullak s kriocs tart k Modositott HTF HEPES katal gussz m 90126 t ptalaj hozz adott feh rj vel Egyszer haszn latos keszty k Hamilton GASTIGHT fecskend 50 ul katal gussz m 80901 vagy m s felsziv eszk z Transzfer pipett k kih zott vegpipett k vagy mikropipetta hegyek 200 um bels hegy tmer vel Csipesz Impulse Heat Sealer SYMS t mit a HSV pipetta katal gussz m 016296 eszk zh z Stopper ra vagy id m r Foly kony nitrogen tart ly Dewar vagy Styrofoam ed ny fed vel 1 2 terfogatu Cseppfoly s nitrog n elegend mennyis g ahhoz hogy a tart lyban kb 10 cm m lys get el rjen HASZN LATI UTASIT S Vit Kit Fagyaszt hoz sz ks ges alkot k alkalmaz sonk nt Equilibration Solution ES 60 ul az oocyta vitrifik l si protokollhoz Vagy 50 ul az
122. etten af metal op over CryoTip en indtil den tynde skrobelige spids stikker ud H ndter CryoTip og Hamilton sprojten under mikroskopisk observation og aspirer forsigtigt en lille volumen VS til maerke nr 1 p CryoTip Forts t observation under mikroskopet og aspirer forsigtigt proven med VS til maerke nr 2 p CryoTip Observer nu CryoTip direkte og aspirer mere VS til meerke nr 3 Pr ven skal v re fyldt i til mellem m rke nr 2 og nr 3 Luk CryoTip vha varmeforsegling forsegling nr 1 p eller lige under m rke nr 1 og tr k beskyt telsesmanchetten ned igen for at beskytte den tynde skrobelige spids Fjern forsigtigt CryoTip en fra aspirationsredskabet og adapteren og varmeforsegl derefter Forsegling nr 2 iden tykke ende af CryoTip en oven Maerke nr 4 Neds nk den lukkede CryoTip direkte i det flydende nitrogen kolingshastighed p 12 000 C min se figur 6b Indsat og forsegl HSV rgret som folger Brug en mikropipette til omhyggeligt at deponere proven erne i rillen p kapillarroret 1 mm fra enden Dr ben der holder proven erne skal veere under 0 5 ul Maksimalt 2 oocytter eller embryoner for hvert kapillarror Placer gjeblikkeligt kapillarroret og h ndteringsanordningen i roret og skub indtil den firkantede del af h ndteringsanordningen kommer i kontakt med den kegleformede ende p r ret Klem forsigtigt r ret mellem tommel og pegefinger og fjern indforingsanordningen
123. etve HSV pipetta foly kony nitrog nbe helyez s hez 12 Vigye a cseppfoly s nitrogen LN tartalyt a LN m lyh t k zel be s helyezze t a kriocs tart t tartalm val egy tt a m lyh t be hossz id tartamra val t rol sra B EMBRI K PN t l Blastocyst ig vitrifik ci s protokollja 1 Adagoljon aszeptikusan ES b l egy 50 ul s cseppet egy Petri cs sze felford tott tetej re 2 Vegye ki az inkub torb l az embri kat tartalmaz teny szt ed nyt s ellen rizze mikroszk p alatt a mint k min s g t Ahol lehet a legjobb min s g embri t kat v lassza ki a vitrifik ci ra 3 Ovatosan vigye t a mint t egyszerre maximum kett t minim lis m dium t rfogattal a teny szt ed nyb l az ES csepp ind tsa el az id m r t Az embri kat ekvilibr ltatni kell az ES cseppben lassan szabad es ssel 6 10 percre Megjegyz s A minta zsugorodni fog majd fokozatosan visszat r az eredeti m ret hez ami jelzi hogy az egyens ly teljes VIGY ZAT Minimaliz lja a mintalmint k f nynek val kitetts g t mialatt egyens lyba hozza ES s VS cseppekben 4 Ez alatt az ekvilibr ci s id alatt az ES ben k sz tsen el 1 50 uL csepp VS oldatot ahogy az a 7 br n l that majd k sz tse el a CryoTip eszk zt vagy a HSV pipett t a bet lt sre K vesse a fent le rt protokollt A r sz Oocyta MII vitrifik ci s protokoll a 8 s l p st l a
124. fikovanou ty inku CryoTip nebo sl mku HSV Straw do pono en kryozkumavky nebo trubi ky na kryo dr ku napln n LN Zaz tkujte kryozkumavku i trubi ku nebo ji p ipevn te v p evr cen poloze k jin neuzav en kryozkumavce aby byla vitrifikovan ty inka CryoTip nebo sl mka HSV Straw bezpe n ulo ena v tekut m dus ku P ineste z sobn k kapaln ho dus ku LN bl zko kryo mrazni ky LN a p eve te kryo dr ky s jejich obsahem do kryo mrazni ky na dlouhodob skladov n Vitrifika n protokol EMBRY PN na Blastocyst Steriln metodou odk pn te jednu 50 ul kapku ES na vnit n stranu obr cen ho v ka Petriho misky Vyjm te kultiva n misku obsahuj c embryo embrya z inkub toru a ov te si kvalitu vzorku vzork pod mikroskopem Kde je to mo n zvolte si pouze embryo a nejlep kvality pro vitrifikaci Opatrn p eve te vzorek nanejv dva najednou s minim ln m objemem m dia z kultiva n misky do kapky ES a spus te asova Embrya by m la b t ekvilibrov na v kapce ES pomalu voln m p dem po dobu 6 10 minut Pozn mka Vzorek se smr t a pak se postupn navr t do p vodn velikosti co bude indikovat dokon en ekvilibrace POZOR Minimalizujte vystavov n vzorku vzork sv tlu b hem ekvilibrace v kapk ch ES a VS B hem t to ekvilibra n doby v ES Pripravte 1 50 pL kapky roztoku VS jak je zn zorn no na obr 7 a pripra
125. gende testen Oplossingen en CryoTips Endotoxine door de Limulus Amebocyte Lysate LAL methode Biocompatibiliteit door muisembryoassay eencellig Steriliteit volgens de huidige Amerikaanse Pharmacopeia Sterility Test lt 71 gt Alle resultaten worden gerapporteerd op een partijspecifiek Analysecertificaat dat op verzoek beschikbaar is VEREISTE MAAR NIET MEEGELEVERDE MATERIALEN Irvine Scientific CryoTip catalogusnr 40709 of HSV buisje catalogusnr 0019921 Irvine Scientific Connector catalogusnr 40736 of een andere adapter Steriele petrischalen 50 X 9 mm Falcon 351006 of gelijkwaardig Cryobuisjes 4 5 ml of bekers en cryohouders Gewijzigd HTF HEPES catalogusnr 90126 kweekmedium aangevuld met eiwit Wegwerphandschoenen Hamilton GASTIGHT spuit 50 pl catalogusnr 80901 of een ander opzuiginstrument Transferpipetten geblazen glazen pipetten of micropipetpunten met een inwendige puntdiameter van 200 um Pincet Impuls heatsealer SYMS afsluiter voor HSV buisje catalogusnr 016296 Stopwatch of timer Tank met vloeibare stikstof Dewar of Styrofoam container met deksel en een inhoud van 1 2 I Vloeibare stikstof voldoende volume voor een tankvulling van 10 cm 4 inch GEBRUIKSAANWIJZING Vit Kit Freeze componenteisen per toepassing Equilibration Solution ES 60 ul voor o cytvitrificatieprotocol of 50 pl voor embryovitrificatieprotocol Vitrificatieoplossing
126. gibi 1 50 uL damla VS sol syonu haz rlay n ekil 2 ve Kriyo Ucu veya HSV Payeti y kleme i in haz rlay n Yukar da yaz ld ekilde B l m A Oosit MII Vitrifikasyon Protokol VS sol syonlar na maruziyet Kriyo Ucu veya HSV Payetin y klenmesi LN2 ye bat r lmas ve uzun vadeli saklama i in 8 ad mdan 15 ad ma kadar prosed r takip edin Bu r nlerin kullan m yla ilgili ek ayr nt lar i in her laboratuar kendi medikal program n z i in zel olarak geli tirilmi ve optimize edilmi olan kendi laboratuar prosed rlerine ve protokollerine ba vurmal d r SAKLAMA TAL MATI VE STAB L TE A lmam flakonlari 2 C 8 C de buzdolab nda saklay n Talimat verildi i ekilde sakland nda Vitrifikasyon Dondurma Kiti Sol syonlar flakon etiketlerinde g sterilen son kullanma tarihine kadar stabildir Kaplar a ld ktan sonra ortamlar sekiz 8 haftadan fazla ullanmay n r nde insan kaynakl materyal bulundu undan saklama s ras nda baz partik ller geli ebilir Bu t r partik llerin r n performans na bir etkisi oldu u bilinmemektedir NLEMLER VE UYARILAR Bu cihaz cihazla ilgili olarak tan mlanan uygulamalar da apsayan yard mla reme prosed rlerinde e itimli personel taraf ndan kullan ma y nelik olarak tasarlanm t r Haz rlama prosed r s ras nda ek bir nlem olarak her bir Kriyo Ucun paketten kar l rken dikkatle incelenmesini a
127. gimas prie rankenos strypo spalvoto galo 8 Tolesnius etapus 9 14 reikia u baigti per 90 110 sekund i PERSP JIMAS Saugantis citotoksinio poveikio b tina apriboti m gini s lyt su VS tirpalu Meginiai ys yra link pl duriuoti VS tirpale tod l pareguliuokite mikroskopo idinio nuotol nuolatiniam geram matomumui apdorojimo metu palaikyti ir alia tur kite pasiruo perk limo pipet s antgal kad garantuotum te greit perk lim i vieno VS la o kit i r kite 5 pav 9 Pusiausvyrai ES tirpale nusistov jus pipet traukite iek tiek ES tirpalo ir paimdami kaip galima ma esn tirpalo kiek 30 sekund ms perkelkite m gin ius i ES la o pirmojo VS la o 10 CryoTip pripildykite ir kar iu u lydykite taip Zr 6a paveiksl Metaline apsaugin mova paslinkdami CryoTip iaudeliu atidenkite jo trap plon j galiuk Laikydami CryoTip iaudel ir Hamilton virk ta ir stebedami mikroskopu atsargiai iki CryoTip 1 padalos siurbkite nedidel VS tirpalo kiek Toliau steb dami mikroskopu atsargiai jsiurbkite m gin su VS tirpalu iki CryoTip 2 padalos Dabar tiesiogiai steb dami CryoTip Siaudeli iki 3 padalos traukite daugiau VS tirpalo M ginys turi b ti tarp 2 padalos ir 3 padalos CryoTip iaudel hermeti kai u lydykite 1 u doris ies 1 padala ar po pat ja ir v l u stumkite apsaugin mov u dengdami ir apsaugodami
128. gremd taj kriocaurul vai kausi uz krion jas kas piepild ts ar idro N Aizv kojiet kriocauruli vai kausi u vai piestipriniet tai otr di apgrieztai v l vienu neaizv kotu kriocauruli lai vitrific to CryoTip vai HSV salmi u nostiprin tu idraj sl pekli Pievirziet idr sl pek a LN rezervu ru LN sald t jam un p rvietojiet kriostobri u tur t ju ar visu saturu uz kriosald t ju ilgsto ai uzglab anai EMBRIJU NU PN l dz blastocistu vitrifik cijas protokols Aseptiski uzlieciet vienu 50 pl pilienu ES uz apv rsta Petri trauci a v ka Iz emiet no inkubatora kult ras trauci u ar embriju iem un ar mikroskopu p rbaudiet parauga u kvalit ti Kad vien iesp jams vitrifik cijai izv lieties vien gi augst k s kvalit tes embriju s Uzman gi p rnesiet paraugu l dz diviem vienlaic gi kop ar minim lu kult ras barotnes daudzumu no kult ras barotnes trauci a uz ES piliena start jiet taimeri Embrijus l n m j nostabiliz ES pilien br vi atlai ot 6 10 min u laik Piez me Paraugs sarausies un p c tam pak peniski atg s s kotn jo lielumu kas nor da ka stabiliz cija ir pabeigta BR DIN JUMS Samaziniet l dz minimumam paraugu pak au anu gaismas iedarb bai stabiliz cijas laik ES un VS pilienos Laik kam r notiek nostabiliz an s ES uzpiliniet 1 50 yl pilienus VS duma k par d ts 7 att l un sagatavojiet
129. i dissement de 12 000 C min cf figure 6b Chargez et soudez l ensemble jonc capillaire HSV comme indiqu ci apr s A l aide d une micropipette d posez avec pr cautions le ou les chantillons dans la goutti re du capillaire 1 mm le l extr mit La goutte contenant le ou les chantillons loit tre inf rieure 0 5 ul Deux ovocytes ou embryons au maximum pour chaque capillaire Placezimm diatementle capillaire et le manipulateur dans le jonc et poussez jusqu ce que la partie rectangulaire lu manipulateur entre en contact avec l extr mit largie lu jonc Pincez l g rement le jonc entre votre pouce et votre index et retirez le dispositif d insertion Tout en maintenant le jonc en place soudez l ouverture l aide de la soudeuse SYMS Tenez le jonc avec des pinces dans la zone du capillaire le manipulation Plongez rapidement la totalit du jonc dans l azote liquide LN en position verticale Remuez d licatement le jonc dans l azote liquide LN pendant quelques secondes afin amp viter la formation d une couche de bulles d air isolantes autour du jonc Placez le CryoTip ou l ensemble jonc capillaire HSV vitrifi dans le tube cryog nique ou gobelet rempli submerg dans l azote liquide LN sur le cryocane Bouchez le lube cryog nigue ou gobelet ou fixez le la t te l envers un autre tube cryog nique non bouch afin de s curiser le CryoTip ou l ensemble jonc c
130. i fino a 2 campioni 1 Connettore PROTOCOLLO PER LA VITRIFICAZIONE per oocite ed embrioni Notabene Le procedimenti tecniche devono essere fatti a temperatura ambientale 20 27 C le Non utilizzare microscoppe scaldatti per tecniche seguente Caution Minimizare esposizione alla luce durante l equilibrazione nelle soluzioni di es e vs 1 BO Portare la quantit di soluzione di eguilibrio ES e soluzione di vetrificazione VS da utilizzare a temperatura ambiente 20 27 C NOTA quando amp necessario utilizzare una sola parte della soluzione evitare di portare ripetutamente le intere fiale di ES e VS a temperatura ambiente E consigliabile aliguotare la quantit da utilizzare e riportare le fiale a 2 8 C subito dopo averle aliguotate HTF modificato HEPES con proteina e richiesto per il protocollo del vetrificazione dei oocite Riempire il cisterno di nitrogeno liguido con nitrogeno liguido sufficiente per arrivare a una profondita di 4 police o per sottomettere completamente il criotubo o cane e mettere vicino al microscopio Attacare un criotubo o goblet nontappato al morsetto al fondo del criocane e sottomettere nel nitrogeno liquido in preparazione per la conservazione delle campione vetrificate Determinare il numero di campioni per essere vetrificati Apporre un etichetta con le informazioni necessarie su ogni piatto sterile Petri 0 coperchio e sul dispositivo di conservazion
131. ibration Solution ES is a HEPES buffered sol 20 Vi sol ution of Medium 199 containing gentamicin sulfate 35 Hg mL 7 5 v v of each DMSO and ethylene glycol and v v Dextran Serum Supplement trification Solution VS is a HEPES buffered lution of Medium 199 containing gentamicin sulfate 35 ug mL 15 v v of each DMSO and ethylene glycol 20 v v Dextran Serum Supplement and 0 5 M sucrose hese two solutions are to be used in sequence according he step wise microdrop vitrification protocol QUALITY ASSURANCE he solutions in Vit Kit Freeze are membrane filtered and aseptically processed according to manufacturing procedures which have been validated to meet a sterility assurance level SAL of 10 Each lot of Vit Kit Freeze receives the following tests Solutions and CryoTips Endotoxin by Limulus Amebocyte Lysate LAL methodology Biocompatibility by Mouse Embryo Assay one cell Sterility by the current USP Sterility Test lt 71 gt All results are reported on a lot specific Certificate of Analysis which is available upon request MATERIALS REQUIRED BUT NOT INCLUDED Irvine Scientific CryoTip Catalog No 40709 or HSV Straw Catalog No 0019921 Irvine Scientific Connector Catalog No 40736 or other adaptor Sterile Petri Dishes 50 X 9 mm Falcon 351006 or equivalent Cryotubes 4 5 mL or goblets and cryocanes Modified HTF HEPES Catalog 90126 culture medium suppleme
132. ilita attuale di USP lt 71 gt Tui ti risultatti sono archivatti su una lotto specifico Certiicato di Analisi che e disponibile sulla richiesta MATERIE RICHIESTI MA NON INCLUSI CryoTip Irvine Scientific N di catalogo 40709 o paillette HSV N di catalogo 0019921 Connettore Irvine Scientific N di catalogo 40736 o altro adattatore Capsule di Petri Sterilizzatti 50 X 9mm Falcon 351006 o equivalente Criotubi 4 5 mL o goblets e criocani Terreni di coltura HTF HEPES modificati N di catalogo 90126 integrati con proteine Guanti usa e getta Siringa GASTIGHT Hamilton 50 pl N di catalogo 80901 o un altro strumento di aspirazione Pipetti di trasferimento pipette di vetro tiratti o i punti con una diametro del punto interiore di 200um Pinzette Sigillante di impulso di calore Sigillatore SYMS per paillette HSV N di catalogo 016296 Arresto vigilato o timer Cisterna di Nitrogeno in Liquido contenitore di Dewar or Styrofoam con tappo volume di 1 2 L Nitrogeno di Liguido volume sofficiente per arrivare a una profondita di 4 police nella cisterna ISTRUZIONI PER L USO Componenti di Kit di Congelazione di Vit per applicazione Equilibration Solution ES 60 pL for Oocyte Vitrification Protocol O 50 uLper il protocollo del Vitrificazione del Embrione Soluzione di Vitrificazione VS 50 pL per il Protocollo di Vitrificazione 1 CryoTip o con la paillette HSV per la conservazione d
133. ips Endotoxin med Limulus Amebocyte Lysate metoden LAL Biokompatibilitet ved analyse af museembryo 6tcellet Sterilitet med den aktuelle United States Pharmacopeia test USP lt 71 gt Alle resultater rapporteres p et partispecifikt analysecertifikat Certificate of Analysis som kan f s efter anmodning NODVENDIGE MATERIALER DER IKKE MEDFGLGER Irvine Scientific CryoTip Katalognr 40709 eller HSV ror Katalognr 0019921 Irvine Scientific konnektor Katalognr 40736 eller en anden adapter Sterile petrisk le 50 x 9 mm Falcon 351006 eller ilsvarende Cryorar 4 5 ml eller b gre og cryocaner Modificeret HTF HEPES Katalognr 90126 dyrkningsmedium suppleret med protein Engangshandsker Hamilton GASTIGHT spr jte 50 ul Katalognr 80901 eller andet aspirationsredskab Transferpipetter glaspipetter af trukket glas eller mikropipettespidser med en indvendig diameter i spidsen p 200 um Pincet Impulse Heat Seale SYMS forsegler til HSV ror Katalognr 016296 Stopureller timer Beholder til flydende nitrogen Dewar eller Styrofoam beholder med lag 1 2 volumen Flydende nitrogen tilstr kkelig volumen til at fa en dybde pa 10 2 cm i beholderen BRUGSANVISNING Vit Kit Freeze krav til komponenter pr applikation Equilibration Solution ES 60 ul til vitrifikation af oocytter eller 50 ul til vitrifikation af embryoner Vitrifikationsoplos
134. j 2 C tot 8 C Als Vitrificatie invrieskit oplossingen zoals voorgeschreven worden bewaard zijn deze stabiel tot aan de uiterste gebruiksdatum die op de sticker van de ampul is vermeld Gebruik de media niet langer dan acht 8 weken nadat de verpakking is geopend Omdat menselijk bronmateriaal in het product aanwezig is kunnen zich tijdens de opslag enkele vaste deeltjes ontwikkelen Van dit soort vaste deeltjes is niet bekend dat ze gevolgen hebben voor de prestatie van het product VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld Als extra voorzorgsmaatregel tijdens de preparatieprocedure raden wij aan elk Cryotip zorgvuldig te onderzoeken nadat het uit de verpakking is gehaald V r het gebruik moeten CryoTips met een geschikte vergroting 40x worden onderzocht op mogelijke beschadiging zoals gebroken of gescheurde punt tijdens het transport Gebruik geen ampullen met een oplossing die vaste deeltjes bevat of troebel is Gebruik aseptische methoden om besmettingsproblemen te vermijden Vitrification Freeze Kit oplossingen bevatten het antibioticum gentamicinesulfaat Passende voorzorgsmaatregelen dienen te worden genomen om ervoor te zorgen dat de pati nt niet gevoelig is voor dit antibioticum De onderzoeksliteratuur geeft momenteel aan dat de langetermijneffecten v
135. jo el microscopio la calidad de los mismos Siempre que sea posible seleccione para la vitrificaci n s lo los embriones de mejor calidad Aspire una peque a cantidad de soluci n ES de la gota de ES enla pipeta de transferencia y con cuidado transfiera la muestra hasta 2 a la vez con el m nimo volumen de medio de la placa de cultivo a la la gota de ES y ponga en marcha el cron metro Los embriones deben equilibrarse lentamente en la gota de ES cayendo libremente durante unos 6 10 minutos Nota la muestra perder volumen y a con tinuaci n lo recuperar lentamente volviendo a su forma original indicando que el equilibrio se ha completado PRECAUCI N Minimice la exposici n de la muestra s a la luz durante la etapa de equilibrio en las gotas de ES y VS 4 Durante esta etapa de equilibrio vierta 1 50 pL gotas de soluci n VS tal como se indica en la Figura 7 y prepare el CryoTip o la pajuela HSV para la carga Siga el protocolo descrito anteriormente Secci n A Protocolo de Vitrificaci n de OOCITOS MII desde el paso 8 hata el paso 16 para la exposici n a soluciones VS carga del CryoTip inmersi n en el Nitr geno L quido y almacenamiento a largo plazo Para m s detalles sobre la utilizaci n de estos productos consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa m dico particular INSTRUCCIONES DE CONSERVAC
136. k f r exponering f r Creutzfeldt Jakobs sjukdom CJD Anv nd aldrig en flaska vars sterila f rpackning inte r helt intakt OBS Enligt federal USA lag f r denna produkt endast s ljas av eller p ordination av l kare EESTI ETTEN HTUD KASUTUS Vit Kit Freeze on m eldud kasutamiseks reproduktiivse abi protseduurides inimese oots tide MII ja embriiote s gootide kuni blastots stide vitrifitseerimiseks ja s ilitamiseks See komplekt on ette n htud kasutamiseks koos Irvine Scientific CryoTip iga kataloogi nr 40709 v i HSV k rrega kataloogi nr 019921 ning vitrifitseerimise sulatamiskomplektiga Vit Kit Thaw proovide optimaalseks v tmiseks TOOTE KIRJELDUS Eguilibration Solution ES on gentamitsiinsulfaati 35 ug mL 7 5 v v nii dimet lsulfoksiidi DMSO et leengl kooli kui ka Dextran Serum Supplementi sisaldav HEPESiga puhverdatud s tme Medium 199 lahus Vitrifikatsiooni lahus VS on gentamitsiinsulfaati 35 ug mL 15 v v nii dimet lsulfoksiidi DMSO kui ka et leengl kooli 20 v v Dextran Serum Supplementi sisaldav HEPESiga puhverdatud 199 lahus Neid kahte lahust tuleb kasutada j rjestikku vastavalt etapilisele mikrotilga vitrifitseerimise protokollile KVALITEEDI GARANTII Vit Kit Freezeis antud lahused on membraanfiltreeritud ja aseptiliselt t deldud vastavalt valideeritud tootmismeedoditele mis garanteerivad steriilsustaseme SAL 105 Iga
137. kalon ja etusormen v liss ja irrota asetin Pid pilli edelleen paikoillaan ja saumaa avonainen p SYMS saumaajalla Pitele pilli pinseteill k sittelysauvan kohdalta Ty nn koko pilli nopeasti pystyasennossa nestetyppeen LN Sekoita varovasti pilli nestetypess LN muutaman nnin ajan jotta pillin ymp rille ei muodostuisi eri ilmakuplakerrosta 11 Aseta vitrifioitu CryoTip tai HSV pilli upotettuun nestetypell LN t ytettyyn kryoputkeen tai uperapohjaiseen putkeen kryotelineess Sulje ryoputki tai kuperapohjainen putki tai kiinnit se yl salaisin avoimeen kryoputkeen jotta vitrifioitu CryoTip tai HSV pilli pysyisi nestetypess 12 Siirr nestetyppis ili LN l helle LN kryopakastinta ja siirr kryoteline sis lt ineen kryopakastimeen pitk aikaiss ilytyst varten B ALKIOIDEN PN blastokystaan vitrifikaatioprotokolla 1 Tiputa aseptisesti yksi 20 ul n tippa ES i petrimaljan yl salaisin k nnetylle kannelle 2 Poista viljelymalja alkioineen inkubaattorista ja tarkista n ytteen n ytteiden laatu mikroskoopilla Mik li mahdollista valitse vain parhaanlaatuinen alkio alkiot vitrifikaatioon 3 Siirr n yte varovasti korkeintaan kaksi kerrallaan minimim r isine ravintoliuoksineen viljelymaljasta ES tipan P LLE ja k ynnist ajastin Alkiot tulee tasapainottaa ES tipassa hitaasti vapaasti pudottaen 5 15 minuuttia Huom N yte kuti
138. kop alt nda g zlemlemeye devam edin ve VS li me i Kriyo U zerinde nazik e aret 2 ye aktar n imdi do rudan Kriyo Ucu g zlemleyin ve aret 3 e daha fazla VS aktar n rnek aret 2 ile aret 3 aras nda bulunmal d r Kriyo Ucuna aret 1 zerinde veya hemen alt nda s cak m h r bas n M h r 1 ve ince ucu kapatmak ve korumak i in kapak man onunu geri kayd r n Kriyo Ucu aspirasyon arac ndan ve adapt rden dikkatli bir ekilde kar n ve aret 4 n zerinde Kriyo Ucun kal n ucundan s cak m h r bas n M h r 2 Kapat lm Kriyo Ucu do rudan s v nitrojene bat r n 12 000 C dakika h zla so uma Bkz ekil 6b A a da belirtilen ekilde HSV payetini y kleyin ve yal t n 11 12 Birmikropipet kullanarak rnekleri dikkatli bir ekilde uca 1 mm mesafede kapiler t p n olu una y n mekleri i eren damla 0 5 ul nin alt nda olmal d r her bir kapiler t p i in en fazla 2 oosit veya embriyo olmal d r Kapiler t p ve kavramay hemen payetin i ine yerle tirin ve kavraman n dikd rtgen k sm payetin konik ucuna emas edene kadar itin Payeti ba parma n zla i aret parma n z aras nda hafif e s k t r n ve insersiyon cihaz n kar n Payeti yerinde tutmaya devam ederken bir YSMS yal t c kullanarak a k ucu yal t n C mb z kullanarak payeti kavrama ubu u alan nda tutun T m
139. ku CryoTip na zna ce 1 nebo t sn pod n a p et hn te kovov kryt sm rem dol na ochranu jemn ho k ehk ho hrotu Opatrn vyjm te ty inku CryoTip z aspira n ho n stroje a adapt ru a pot ji teplem zape e te nad zna kou 4 Ponoite uzav enou ty inku CryoTip p mo do kapaln ho dus ku chlad c se v pom ru 12 000 C min viz obr 6b Napl te a zape e te sl mku HSV Straw podle n sleduj c ho popisu Pomoc pipety opatrn p eneste vzorek i vzorky do kan lku kapil rov ty inky ve vzd lenosti 1 mm od konce Kapka obsahuj c vzorek i vzorky mus b t men ne 0 5 ul Maxim ln m ete pou t 2 oocyty nebo embrya pro ka dou kapil rovou ty inku Okam it vsu te kapil rovou a manipula n y inku do sl mky a zasouvejte dovnit dokud se obd ln kov st manipula n ty inky nedostane do kontaktu s roz en m koncem sl mky Jemn stiskn te sl mku palcem a ukazov kem a vyt hn te zav d c p pravek Dr te sl mku v p vodn pozici a zape ette jej otev en konec pomoc zape e ovac ho za zen SYMS Sealer Dr te sl mku pinzetou v prostoru manipula n ty inky Rychle pono te celou sl mku ve svisl poloze do kapaln ho dus ku LN Opatrn pohybujte sl mkou v LN po n kolik sekund aby se kolem sl mky nevytvo ila izola n vrstva vzduchov ch bublin Vlo te vitri
140. ku obsahuj c MII oocyty z inkub toru a ov te si kvalitu vzork pod mikroskopem Kde je to mo n zvolte si pouze oocyt y st dia MII nejlep kvality POZOR Minimalizujte vystavov n vzorku vzork sv tlu b hem ekvilibrace v kapk ch H ESaVS Pfevedte oocyty nanejvy dv najednou s minim lnim objemem media z kultiva ni misky inkub toru do 20 ul kapky H na jednu minutu Spojte kapku H s ES1 viz obr 1 Sipka 1 hrotem pienosne pipety a umo n te spont nni smi eni t chto dvou roztok po dobu 2 minut Pot spojte kapku roztoku ES2 ipka 2 s d ve spojen mi kapkami a ponechejte po dobu 2 minut P eneste oocyt y s minim ln m mno stv m roztoku ze spojen kapky na kapku ES3 na dobu 6 10 minut Pozn mka ekvilibrace oocytu oocyt v ES3 je dokon en kdy tlou ka mezery mezi zona pellucida a vrstvou kolem loutku perivitelline je stejn Oocyt y se usad na spodu kapky b hem 3 minut B hem ekvilibra n doby v ES3 Asepticky dejte jednu 1 50 pL kapku VS 2 minuty p ed kompletn m vyrovn n m a p ipravte ty inku cryotip obr 3 nebo ty inku HSV obr 4 pro napln n CryoTip p ipojen k injek n st ka ce Hamilton nebo vhodn mu aspira n mu n stroji s pou it m konektoru nebo adapt ru pro zaji t n t sn ho spojen POZN MKA Ponechte kovov kryt nasazen na jemn vyta en konec pro jeho ochranu dokud nejste p ipraveni plni
141. laisten henkil iden k ytett v ksi jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteit joihin kuuluu laitteen k ytt tarkoituksen mukainen asianmukainen k ytt Lis varotoimenpiteen valmistelun aikana suosittelemme ett kukin Cryotip tarkastetaan huolellisesti kun se otetaan pakkauksesta Ennen k ytt CryoTipit tulee tarkastaa sopivalla suurennuksella 40 x mahdollisen kuljetuksen aikana sattuneen vaurion varalta kuten esim k rjen rikkoutuminen tai s r t l k yt ravintoliuospulloa jossa n kyy hiukkasia tai joka on sameaa Kontaminaatio ongelmat v ltet n aseptisella k sittelytekniikalla Vitrification Freeze Kit liuokset sis lt v t antibiootti gentamisiinisulfaattia Tarkoituksenmukaisia varotoimenpiteit on noudatettava jotta potilas ei herkisty t lle antibiootille T ll hetkell tutkimuskirjallisuuden mukaan alkioiden vitrifikaation pitk aikaisvaikutuksia ei tunneta T m n tuotteen valmistuksessa k ytetyt ihmisveren johdannaiset on testattu k ytt en FDA n lisensoimia testipakkauksia ja ne on todettu ei reaktiivisiksi hepatiitti B n pinta antigeenille HBsAg hepatiitti C n HCV vasta aineille ja ihmisen immuunikatoviruksen HIV vasta aineille Mik n testausmenetelm ei kuitenkaan anna t ytt varmuutta siit ett ihmisper iset tuotteet olisivat tartuttamattomia K sittele ihmisveren johdannaisia niin kuin ne voisivat aiheuttaa tartuntaa ja noudata yleisi varotoimia
142. lammer eines Cryocanes an und untertauchen Sie beide in den fl ssigen Stickstoff in Vorbereitung f r das Lager der verglasten Muster 3 Bestimmen Sie die Zahl der Muster die zu verglasen sind 4 Jede sterile Petrischale oder Deckel und jede Kryovorrichtung f r die Aufbewahrung mit den erforderlichen Informationen beschriften 5 Kehren Sie behutsam jedes Fl schchen von ES und VS zweimal um um den Inhalt vor dem Gebrauch zu mischen 6 Bereiten Sie die Schale mit Tr pfchen von den L sungen f rs Verglasungsprotokoll wie hier angewiesen A Verglasungsprotokoll fiir OOZYTEN MII HINWEIS Sehen Sie Teil B f r Verglasungsprotokoll f r Embryos 1 Mit aseptischer Technik 20 ul Tropfen des Kulturmediums Modified HTF HEPES mit Protein und ES wie in Abbildung 1 gezeigt in unmittelbarer N he auf einen umgekehrten Deckel einer sterilen Petrischale geben und die Schale auf den Objekttisch platzieren ein20 ul Tropfen Modified HTF HEPES mit Protein drei 20 ul Tropfen 60 ul im Total ES ES1 ES2 ES3 2 Nehmen Sie aus dem Brutschrank die Kulturschale die MII Oozyten beinhaltet Pr fen Sie unter Mikroskop die Oualit t der Muster Wenn m glich w hlen Sie nur die Oozyten MII von h chster Oualit t VORSICHT Minimieren Sie Kontakt des Musters mit Licht w hrend der Aquilibrierung in den H ES und VS Tropfen 3 Versetzen Sie mit minimalem Volumen N hrboden die Oozyten bis zu 2 jeweils von d
143. les ar boj tu sterilo iepakojumu BR DIN JUMS Feder lie ASV likumi pie auj s ier ces tirdzniec bu vien gi rstiem vai ar vi u nor kojumu NEDERLANDS BEDOELD GEBRUIK Vit Kit Freeze invriesmiddel is bestemd voor gebruik bij geassisteerde voortplantingsprocedures voor de vitrificatie en opslag van menselijke o cyten MII en embryo s zygoot tot blastocyst Deze kit is bestemd voor gebruik met de CryoTip catalogusnr 40709 of het HSV buisje catalogusnr 019921 en de Vitrificatie ontdooikit Vit Kit Thaw van Irvine Scientific voor optimale terugwinning van monsters PRODUCTBESCHRIJVING Equilibration Solution ES is een HEPES gebufferde oplossing van Medium 199 die gentamicinesulfaat 35 ug ml 7 5 v v van elk dimethylsulfoxide DMSO en ethyleenglycol en 20 v v Dextran Serum Supplement bevat Vitrificatieoplossing VS is een HEPES gebufferde oplossing van Medium 199 die gentamicinesulfaat 35 ug ml 15 v v van elk dimethylsulfoxide DMSO en ethyleenglycol 20 v v Dextran Serum Supplement en 0 5 M sucrose bevat Deze drie oplossingen moeten achtereenvolgens worden gebruikt volgens het stapsgewijze microdruppelvitrificatieprotocol KWALITEITSBORGING De oplossingen in de Vit Kit Freeze zijn membraangefilterd en op aseptische wijze bewerkt volgens productieprocedures die zijn gevalideerd voor een Sterility Assurance Level SAL van 10 Elke partij Vit Kit Freeze ondergaat de vol
144. ligt analys av musembryon en cell Sterilitet enligt aktuell USP test f r sterilitet lt 71 gt United States Pharmacopeia Alla resultat finns rapporterade p ett lotspecifikt analyscertifikat Certificate of Analysis som f s p beg ran MATERIAL SOM KR VS MEN INTE MEDF LJER Irvine Scientific CryoTip Katalognr 40709 eller HSV str n Katalognr 0019921 Irvines Scientific anslutning Katalognr 40736 eller annan adapter Sterila petriskalar 50 X 9 mm Falcon 351006 eller motsvarande Kryor r 4 5 mL eller rundbottnade r r utan lock samt kryor rh llare Modifierad HTF HEPES Katalognr 90126 odlingsmedium med tillsats av protein Engangshandskar Hamilton GASTIGHT spruta 50 ul Katalognr 80901 eller annat verktyg f r aspiration Overforingspipetter glaspipetter med tunn spets eller mikropipettspetsar med en inre spetsdiameter p cirka 200 um Pince Impulse Heat Sealer SYMS f6rseglare f r HSV str n Katalognr 016296 Stoppur eller tidtagare Beh llare med flytande kv ve Dewar eller Styrofoam beh llare med lock volym 1 2 L Flytande kv ve tillr cklig volym f r att erh lla ett djup p 10 cm i beh llaren BRUKSANVISNING Vit Kit Freeze komponenter som kr vs per applikation Equilibration Solution ES 60 uL f r vitrifieringsprotokoll f r oocyt Eller 50 uL f r vitrifieringsprotokoll f r embryo Vitrifieringsl sning VS 50 pL f
145. llucida och det perivitellina spatiet har samma tjocklek Oocyten oocyterna sjunker till botten av droppen inom 3 minuter 7 Under ekvilibreringsperioden i ES3 Dispensera aseptiskt en 1 50 uL droppe VS2 minuter f re fullst ndig ekvilibrering och f rbered cryotip fig 3 eller HSV str et fig 4 f r laddning CryoTip koppla till Hamilton sprutan eller annat l mpligt aspirationsverktyg med hj lp av en koppling eller adapter f r att tillf rs kra t t f rslutning OBS L t metallhylsan sitta kvar ver den tunna spetsen s att den skyddas tills det r dags att dispensera proverna HSV str koppla den langa delen av den bl inf ringsenheten till den f rgade nden av hanteringsstaven 8 F ljande steg 9 13 b r utf ras inom 90 110 sekunder OBS F r att f rhindra cytotoxicitet skall exponering av preparaten f r VS begr nsas Preparat tenderar att flyta i VS s justera mikroskopets fokus s att kontinuerlig visualisering bibeh lls under exponeringen och ha verf ringspipettens spets i n rheten s att snabb verflyttning mellan VS dropparna s kerst lls Se figur 5 9 Efter avslutad ekvilibrering i ES dra upp litet ES i verf ringspipetten och flytta ver preparatet n fran ES droppen med minimal volym till droppen VS i30 sekunder 10 Ladda och v rmef rsegla CryoTip enligt f ljande se figur 6a Skjut upp skyddshylsan av metall l ngs CryoTip s att den tunna sk ra spets nd
146. matter is not known to have an effect on product performance PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in assisted reproductive procedures that include the indicated application for which the device is intended As an added precaution during the preparation procedure we recommend that each Cryotip be carefully examined when taken out of the package Prior to use the CryoTips should be examined under a suitable magnification 40x power for possible damage such as tip breakages or cracks that may have occurred during transport Do not use any vial of solution that shows evidence of particulate matter or cloudiness To avoid problems with contamination handle using aseptic techniques Vitrification Freeze Kit Solutions contain the antibiotic gentamicin sulfate Appropriate precautions should be taken to ensure that the patient is not sensitized to this antibiotic Currently research literature indicates the long term effects of vitrification on embryos remains unknown Human blood derivatives used in the manufacture of this product has been tested by FDA licensed kits and found to be non reactive for the Hepatitis B surface antigen HBsAg antibodies to Hepatitis C HCV and antibodies to Human Immunodeficiency Virus HIV However no test method offers complete assurance that products derived from human sources are noninfectious Handle all Human blood derivatives as if it were
147. ment les CryoTips leur sortie de la boite Les CryoTips doivent tre examin s sous microscope avec un grossissement convenable x40 pour tout ventuel dommage comme les cassures du bout ou f lures survenant durant le transport N utiliser aucun flacon de solution trouble ou contenant des particules Manipuler st rilement afin d viter les probl mes de contamination Les solutions de ce kit contiennent Pantibiotigue Sulfate de Gentamicine Les pr cautions d usage doivent tre prises pour s assurer que les patients ne pr sentent aucune sensibilit a cet antibiotigue Actuellement la litt rature scientifique indigue que l effet long terme de la vitrification sur les embryons reste encore inconnu Les d riv s du sang humain utilis s pour fabriquer ce produit ont t test s au moyen de trousses brevet es de l administration am ricaine pour l alimentation et les m dicaments FDA et reconnus non r actifs l antig ne de surface de l h patite B AgHBs aux anticorps de l h patite C VHC et aux anticorps du virus de l immunod ficience humaine VIH Toutefois aucune m thode d examen ne garantit totalement la non contagiosit des produits d riv s de sources humaines Manipulez tous les d riv s du sang humain comme s ils taient susceptibles de transmettre une infection c est dire en prenant toutes les pr cautions qui s imposent Les donneurs de mat riaux source ont galement
148. muestras 1 Conector PROTOCOLO DE VITRIFICACI N NOTA el proceso debe llevarse a cabo a temperatura ambiente 20 27 C NO utilice la platina calefactora del microscopio para los pasos descritos a continuaci n PRECAUCI N Minimice la exposici n de la muestra a la luz durante su equilibrado en las soluciones ES y VS 1 Deje la cantidad que vaya a usar de la soluci n de equilibrado ES y la soluci n de vitrificaci n VS a temperatura ambiente 20 27 C NOTA Evite dejar los frascos enteros de ES y VS a temperatura ambiente repetidamente si solamente necesita una parte de la soluci n cada vez Es mejor obtener la parte al cuota de la cantidad que necesite usar y refrigerar de nuevo los frascos a 2 8 C inmediatamente despu s Para oocitos tambi n es necesario preparar HTF modificado HEPES con prote na 2 Llene un contenedor con nitr geno l quido suficiente vol men para poder sumergir en l un criotubo en su cesta y sit elo cerca del microscopio Enganche un criotubo o un goblet destapado a la abrazadera inferior de una cesta de congelaci n y sum rjalo en el N l quido como preparaci n para el almacenamiento de las muestras vitrificadas Determine el n mero de muestras a vitrificar 4 Etiquete una placa de Petri est ril o tapa y dispositivo de cr o conservaci n con la informaci n necesaria 5 Antes de usar las soluciones ES y VS mezcle su contenido con un par de inversiones suaves de
149. n certificat d analyses sp cifique chaque lot et mis disposition sur demande MAT RIEL REQUIS NON INCLUS DANS LE KIT CryoTip r f rence du catalogue 40709 ou ensemble jonc capillaire HSV r f rence du catalogue 0019921 d Irvine Scientific Connecteur d Irvine Scientific 40736 ou autre adaptateur Boites de p tri st riles 50 x 9 mm Falcon 351006 ou amp guivalent Cryotubes 4 5 mL ou gobelets et Cryocanes HTF HEPES modifi r f rence du catalogue 90126 milieu de culture suppl ment en prot ines Gants usage unique Seringue Hamilton GASTIGHT 50 ul r f rence du catalogue 80901 ou autre outil d aspiration Pipettes de transfert pipettes de verre tir es ou des bouts de micro pipettes avec un diametre interne d environ 200 um Pinces Thermosoudeuse lectrique impulsions Soudeuse SYMS pour l ensemble jonc capillaire HSV r f rence du catalogue 016296 Chronom tre R servoir d azote liquide Dewar ou boite en polystyr ne avec couvercle d une capacit de 1 2 litres Azote liquide en quantit suffisante pour obtenir un fond de 10 cm environ CONSEILS D UTILISATION Composantes du Vit Kit Freeze requises par application Solution d quilibration ES 60 ul pour le protocole de vitrification des ovocytes ou 50 pl pour le protocole de vitrification des embryons Solution de vitrification VS 50 ul pour le protocole de vitrification
150. ndning 6 Preparera sk len med droppar av l sning f r vitrifieringsf rfarandet p f ljande s tt A Vitrifieringsprotokoll f r OOCYT MII OBS Se avsnitt B f r vitrifieringsprotokoll f r embryo 1 Dispensera aseptiskt 20 ul droppe odlingsmedium modifierad HTF HEPES med protein och ES alldeles intill p ett upp och nedv nt lock till en steril Petrisk l s som visas i figur 1 och placera sk len p mikroskopets objektbord en 20 ul droppe modifierad HTF HEPES med protein tre 20 pL droppar sammanlagt 60 uL ES ES1 ES2 ES3 2 Ta ut odlingssk len med MII oocyter fr n inkubatorn och kontrollera preparatens kvalitet under mikroskop V lj endast stadie Mll oocyt er av b sta kvalitet n r s r m jligt OBS Minimera exponering av preparatet n f r Ijus under ekvilibrering i H ES och VS dropparna 3 Flytta ver oocyten h gst tv i taget med en minimal volym medium fr n odlingssk len i inkubator till 20 uL H droppen i en minut 4 Sammanf r H droppen med ES1 se fig 1 pil 1 med spetsen p verf ringspipetten och l t de tv l sningarna blandas spontant i 2 minuter 5 Lat sedan ES2 droppen pil 2 blanda sig med de redan blandade dropparna och l t st 2 minuter 6 Flytta ver oocyten erna med minimal volym l sning fr n den sammanf rda droppen till ES3 droppen i 6 10 minuter Obs Ekvilibreringen av oocyt er i ES3 r fullbordad n r zona pe
151. nferior a 0 5 jul M ximo de 2 ovocitos o embriones por tubo capilar Coloque inmediatamente el tubo capilar y e manipulador en la pajuela y empuje hasta que la parte rectangular del manipulador est en contacto con el extremo ensanchado de la pajuela Pellizque ligeramente la pajuela con el pulgar y el ndice y extraiga el dispositivo de inserci n Mientras sujeta la pajuela selle el extremo abierto usando un sellador SYMS Sujete la pajuela usando pinzas en la zona del manipulador Empuje r pidamente toda la pajuela en el LN de forma vertical Agite suavemente la pajuela en el LN durante unos segundos para evitar la formaci n de una capa de burbujas de aire aislantes alrededor de la pajuela Coloque el CryoTip o la pajuela HSV vitrificados en el criotubo o frasco en el vial criog nico sumergido de LN Tape el criotubo o frasco o col quelo boca arriba sobre otro criotubo sin tapar para fijar el CryoTip o la pajuela HSV vitrificados en nitr geno l quido Coloque el contenedor de Nitr geno l quido cerca de crio congelador de Nitr geno l quido y transfiera la cesta de congelaci n con su contenido a dicho congelador para su almacenamiento a largo plazo EMBRIONES PN a Blastocisto Protocolo de Vitrificaci n En condiciones as pticas dispense 1 gota de 50uL de ES sobre una tapa invertida de una placa de Petri Saque del incubador la placa de cultivo con los embriones y compruebe ba
152. ngelatore di LN e trasferire il criocane con i contenenti al criocongelatore per conservazione a lungo termine PROTOCOLLO DI VITRIFICAZIONE D EMBRIONI PN A BLASTOCISTI Dispensare asetticamente una goccia di 50 uL di ES sulla tappo invertito per conservazione a lungo termine Rimuovere la capsula di coltura con l embrioni dall incubatrice e controllare la qualit delle campione sull microscopio Dove possibile selezionare solamente solo l embrioni del migliore qualit per vetrificazione Trasferire attentamente i campioni fino a due alla volta con un volume minimo di sostanza dalla capsula di coltura al goccia di ES e incominci il timer o cronografo L embrioni devono equilibrarsi nella goccia di ES lentamente via cadere liberamente free fall per 6 a 10 minuti NOTABENE IL CAMPIONE DIMINUISCE E POI DOPPO SE RITORNA GRADUALMENTE ALLA LARGHEZZA ORIGINALE CHE INDICA CHE L EQUILIBRAZIONE E FINITA AVVERTIMENTO Minimizzare l esposizione della campione alla luce durante Peguilibrazione nelle gocce di ES e VS 4 Durante questo periodo d equilibrazione in ES erogare 1 50 pL cadere di soluzione VS come mostrato nella Figura 7 e preparare la CryoTip o la paillette HSV per il caricamento Seguirei il protocollo come e scrito sopra sezione a protocllo di vitrificazione dei oocite mii dai passi 8 fino a 16 per l esposizione alle soluzione di vs il carico di cryotip sottomettendo nel In e la conserv
153. ngen Ladung der CryoTip Untertauchung in LN und langfristiges Lager Fuer weitere Einzelheiten zum Gebrauch diesen Produkten soll das Labor in seinen eigenen Protokollen nachschlagen die f r die spezifische medizinische Einstellung spezifisch entwickelt und optimiert worden sind AUFBEWAHRUNGSANWEISUNGEN UND STABILIT T Die unge ffneten Ampullen im K hlschrank bei 2 C bis 8 C aufbewahren Bei Aufbewahrung unter diesen Bedingungen sind die Vitrification Freeze Kit L sungen bis zum Haltbarkeitsdatum das auf den Ampullen Etiketten angegeben ist haltbar Die Medien nach dem ffnen der Beh lter nicht l nger als acht 8 Wochen verwenden Weil das Produkt menschliches Ursprungsmaterial enth lt k nnen w hrend der Aufbewahrung Schwebstoffe entstehen Diese Art Schwebstoffe haben vermutlich keine Auswirkung auf die Produkt Performance VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Diese Vorrichtung ist f r die Anwendung durch Personal vorgesehen das in Verfahren ausgebildet wurde welche die f r diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten Wann das Paket ge ffnet ist empfehlen wir dak jedes CryoTip sorgf ltig berpr ft wird CryoTips sollte mit einem Mikroskop lineare Wiedergabe 40x f r m gliche Besch digung berpr ft werden Gebrauchen Sie kein L sung Fl schchen das Zeichen von Schwebstoff oder Tr bheit zeigt Behandeln Sie das Produkt mit aseptischen Methoden um Kontaminierungspro
154. ning VS 50 ul til vitrifikation 1 CryoTip eller HSV ror kan opbevare op til 2 prover 1 konnektor VITRIFIKATIONSPROTOKOL BEM ERK Procedurerne skal udfgres ved stuetemperatur 20 27 C BRUG IKKE et opvarmningsmikroskop til folgende procedurer FORSIGTIG Minimer udsattelse af prover for lys under ekviliberering i ES og VS oplgsninger 1 Bring den m ngde af opl sning til zekvilibrering ES og oplasning til vitrificering VS som skal anvendes til stuetemperatur 20 27 C BEM RK Undg at hele haetteglassene med ES og VS opn r stuetemperatur gentagne gange da en del af oplosningen behoves hver gang Det er bedre at udportionere den maengde der skal anvendes og returnere haetteglassene til 2 8 C lige efter udportionering Modified HTF HEPES med protein er ogs p kraevet til vitrifikation af oocytter 2 Fyld nitrogenbeholderen med flydende nitrogen tilstreekkeligt til at f en dybde p 10 2 cm eller til helt at kunne neds nke cryorgret p cryocanen og s t den ved siden af mikroskopet S t et cryoror eller b ger uden l g fast i den nederste klemme p en cryoholder og nedsaenk den i det flydende nitrogen som forberedelse til opbevaring af de vitrificerede prover 3 Fastsaet det antal prover der skal vitrificeres 4 S ten etiketmed de n dvendige oplysninger pa hver steril petrisk l eller l g og hver Cryo opbevaringsbeholder 5 Vend forsigtigt hvert heetteglas med ES og VS om to gang
155. nted with protein Disposable gloves Hamilton GASTIGHT Syringe 50 uL Catalog 80901 or other aspiration tool Transfer pipettes pulled glass pipettes or micropipette ips with an inner tip diameter of 200um Tweezers mpulse Heat Sealer SYMS Sealer for HSV Straw Catalog No 016296 Stopwatch or timer Liquid Nitrogen Reservoir Dewar or Styrofoam container with lid 1 2 L volume Liquid Nitrogen sufficient volume to achieve 4 inch depth in reservoir DIRECTIONS FOR USE Vit Kit Freeze component requirements per application Eguilibration Solution ES 60 uL for Oocyte Vitrification Protocol Or 50 uL for Embryo Vitrification Protocol Vitrification Solution VS 50 for Vitrification Protocol 1 CryoTip or HSV Straw stores up to 2 specimens 1 Connector VITRIFICATION PROTOCOL NOTE Procedures are to be done at room temperature 20 27 C DO NOT use heated microscope stage for the following procedures CAUTION Minimize exposure of specimen to light during equilibration in ES and VS solutions Bring the quantity to be used of ES and VS to room temperature 20 27 C NOTE Avoid bringing the entire vials of ES and VS to room temperature repeatedly when a partial of the solution is needed each time It is better to aliquot the quantity to be used and return he vials to 2 8 C right after aliquoting Modified HTF HEPES with protein is also required for oocyte vitrification protocol
156. numai la comanda unui medic sau pe baz de comanad SVENSKA AVSEDD ANV NDNING Vit Kit Freeze r avsedd f r anv ndning vid procedurer f r assisterad reproduktion f r vitrifiering och f rvaring av humana oocyter MII och embryon zygot till blastocyst Detta kit r avsett att anv ndas tillsammans med Irvine Scientifics CryoTip Katalognr 40709 eller HSV str n Katalognr 019921 och Vitrifieringsupptinings kit Vit Kit Thaw f r optimalt terst llande av prover PRODUKTBESKRIVNING Eguilibration Solution ES r en HEPES buffrad l sning av Medium 199 inneh llande gentamicinsulfat 35 ug mL 7 5 v v av vardera dimetylsulfoxid DMSO och etylenglykol samt 20 v v Dextran Serum Supplement Vitrifieringsl sning VS r en HEPES buffrad l sning av Medium 199 inneh llande gentamicinsulfat 35 ug mL 15 v v av vardera dimetylsulfoxid DMSO och etylenglykol samt 20 v v Dextran Serum Supplement samt 0 5 M sukros Dessa tv l sningar skall anv ndas i sekvens enligt det stegvisa mikrodroppe vitrifieringsprotokollet KVALITETSS KRING L sningarna i Vit Kit Freeze r membranfiltrerade och aseptiskt behandlade enligt tillverkningsf rfaranden som har validerats f r att uppfylla en sterilitetsniv SAL Sterility Assurance Level p 103 Varje lot Vit Kit Freeze genomg r f ljande tester L sningar och CryoTips Endotoxin via LAL metod Limulus Amebocyte Lysate Biokompatibilitet en
157. oTipe kontrollida sobiva suurenduse all 40x et sellel ei esine ranspordil tekkida v ivaid kahjustusi sh katkine v i m ranenud ots rge kasutage s det viaalist milles on m rgata osakesi v i h gusust Saastamise v ltimiseks k sitsege vahendeid aseptilist tehnikat kasutades Vitrification Freeze Kit lahused sisaldavad antibiootikumi gentamitsiinsulfaat Tuleb rakendada sobivaid ettevaatusabin usid veendumaks et patsient ei ole selle antibiootikumi suhtes litundlik Praegused uuringuaruanded vihjavad et vitrifikatsiooni pikaajalised m jud embr ole ei ole teada Selle preparaadi valmistamisel kasutatud inimvere derivaate on testitud USA Toidu ja Ravimiameti FDA litsentseeritud komplektidega On tehtud kindlaks et nad on mitte reaktiivsed B hepatiidi pinnaantigeeni HBsAg C hepatiidi antikehade HCV ning inimese immuunpuudulikkuse viiruse antikehade HIV suhtes Ent kski katsemeetod ei taga t ielikult et inimallikatest saadud preparaadid on nakkusvabad K sitlege k iki inimvere derivaate nagu nad oleksid v imelised nakkust edasi kandma ning kasutage ldkehtivaid ettevaatusmeetmeid Algmaterjali doonoreid on skriinitud ka Creutzfeldt Jakobi t ve CJD suhtes rge kasutage htegi pudelit mille steriilne pakend on kahjustunud ETTEVAATUST Riiklik USA seadusandlus piirab seadme m ki ning see v ib toimuda ksnes arsti poolt v i arsti korraldusel MAGYAR RENDELTETES
158. ocedury Witryfikacji jak nast puje Protok Witryfikacji MII OOCYT W UWAGA W celu zapoznania si z protoko em witryfikacji zarodk w nale y odwo a si do Cz ci B W warunkach aseptycznych umie ci 20 ul kropla po ywki hodowlanej zmodyfikowanego HTF HEPES z bia kiem oraz ES w bliskiej od siebie odleg o ci na odwr conej pokrywce sterylnej p ytki Petriego jak pokazano na rys 1 i po o y p ytk na stoliku mikroskopu jedna20 ul kropla zmodyfikowanej po ywki HTF HEPES z bia kiem trzy 20 ul krople 60 ul og em roztworu ES ES1 ES2 ES3 Wyj z inkubatora naczynko na posiew zawieraj ce oocyty MII i sprawdzi jako pr bek pod mikroskopem Je eli jest to mo liwe nale y wybra tylko najlepszej jako ci oocyt y z etapu MII UWAGA Zminimalizowa dzia anie wiat a na pr bk i podczas ustalania r wnowagi w kroplach H ES i VS Przenie oocyty do dw ch ka dorazowo z minimaln obj to ci po ywki z naczynka na posiew w inkubatorze do 20 ul kropli H na jedn minut Przy u yciu ko c wki pipety transferowej po czy kropl H z ES1 zob Ryc 1 strza ka 1 i pozostawi do samowymieszania te dwa roztwory na 2 minuty Nast pnie po czy kropl ES2 strza ka 2 z uprzednio zmieszanymi kroplami i pozostawi na 2 minuty Przenie oocyt y z minimaln obj to ci roztworu z wymieszanych kropli do kropli ES3 na 6 10 minut
159. oco de ES con la pipeta de transferencia y transfiera la muestra s con el m nimo volumen desde la gota de ES gota de VS durante 30 segundos Cargue y selle t rmicamente el CryoTip como se indica a continuaci n v ase Figura 6a Deslice la funda de metal hacia arriba a lo largo del CryoTip para exponer el fr gil extremo de la punta Observando bajo el microscopio manipule el CryoTip y la jerinuilla aspire cuidadosamente un pequefio volumen de VS hasta la Marca 1 del CryoTip Contin e observando al microscopio y aspire suavemente la muestra con VS hasta la Marca 2 del CryoTip Observe el CryoTip directamente y aspire m s VS hasta la Marca 3 La muestra debe situarse entre la Marca 2 y la Marca 3 Termoselle Sellado 1 el CryoTip sobre o justo debajo de la Marca 1 y deslice la funda met lica hacia abajo para tapar y proteger la fr gil punta fina Extraiga con cuidado el CryoTip de la herramienta de aspiraci n y del adaptador y a continuaci n selle t rmicamente sello n 2 el extremo grueso del CryoTip sobre la marca n 4 Sumergir el CryoTip recubierto con la funda directamente en el Nitr geno l quido enfriando a una velocidad de 12000 C min ver Figura 6b Cargue y selle la pajuela HSV como se indica a continuaci n Usando una micropipeta deposite con cuidado la s muestra s en la boca del tubo capilar a 1 mm desde el extremo La mezcla con la s muestra s debe ser i
160. outtes pr c demment ajout es et laissez reposer pendant 2 minutes Transf rer les ovocytes avec un volume minimum de solution de la goutte conflu e dans la goutte ES3 pendant 6 10 minutes Remarque l quilibration des ovocytes dans ES3 est compl te quand l paisseur de la zone pellucide et celle de l espace p rivitellin sont gales Les ovocytes se d poseront au fond de la gouttelette dans les 3 minutes 7 Durant cette quilibration dans ES3 Distribuer de fa on aseptique une 1 goutte de 50 ul de VS 2 minutes avant pour compl ter P quilibration et pr parer le CryoTip fig 3 ou la paillette VHS fig 4 pour le chargement CryoTip Se connecte la seringue Hamilton ou un outil d aspiration appropri l aide d un connecteur ou d un adaptateur pour garantir une fermeture herm tique REMARQUE gardez le manchon m tallique sur la pointe fine tir e afin de la prot ger jusqu ce que vous soyez pr t charger les chantillons Ensemble jonc capillaire HSV connecte l extr mit longue du dispositif d insertion en plastique bleu l extr mit color e du capillaire de manipulation 8 Les tapes suivantes 9 13 doivent tre compl t es dans 90 110 secondes ATTENTION L exposition des sp cimens au VS doit tre limit e pour pr venir toute cytotoxicit Les sp cimens ont tendance flotter dans la solution de vitrification VS ajuster la mise au point du microscope pour maintenir une
161. pillaire HSV pour le chargement Suivre le protocole comme indiqu ci dessus section A protocole de vitrification des ovocytes de l tape 8 l tape 16 pour l exposition la solution VS la mise en place dans les CryoTips l immersion dans l azote liquide et le stockage long terme Pour plus de d tails sur l utilisation de ce produit chaque laboratoire doit consulter ses propres proc dures et protocoles standards sp cialement d velopp s et optimis s pour chaque tablissement m dical particulier CONSIGNES DE CONSERVATION ET STABILIT Conserver les flacons non entam s et ferm s dans un r frig rateur entre 2 C et8 C Conserv es ainsi les solutions du Kit de Vitrification sont stables jusqu la date d expiration indiqu e sur les tiquettes des flacons Ne pas utiliser les milieux au del de huit 8 semaines apr s l ouverture des flacons Comme du mat riel biologique d origine humaine est pr sent dans le produit l apparition de mati re particulaire est possible durant sa conservation Ce type de mati re particulaire ne semble avoir aucun effet sur la performance du produit PR CAUTIONS ET MISE EN GARDE Ce dispositif est destin une utilisation par un personnel form aux proc dures comprenant l application indiqu e pour laquelle le dispositif est destin Pour plus de pr cautions durant les pr paratifs pour le proc d il est recommand d examiner minutieuse
162. plu v rful spart sau cr pat Nu utiliza i sticlute sau fiole cu mediu care prezint reziduuri de particule sau sunt ncetosate Pentru a evita probleme de contaminare m nuiti folosind tehnici aseptice Solu ia Vitrification Freeze Kit con ine sulfat de gentamicin ca i antibiotic Precau ii apropiate trebuie luate pentru a asigura c pacientul nu este alergic la acest antibiotic n prezent literatura de specialitate nu indic efecte de lung durat a procesului de vitrificare pe embrioni Derivatele din s nge uman care au fost utilizate la fabricarea acestui produs au fost testate cu ajutorul unor truse aprobate de FDA i au fost g site ca fiind ne reactive la antigenul de suprafa al virusului hepatiei B AgHBs anticorpii mpotriva virusului hepatitei C VHC i anticorpii mpotriva virusului imunodeficien ei umane VIH Cu toate acestea nicio metod de testare nu ofer garan ii complete c produsele derivate din surse umane sunt neinfectioase Manipularea tuturor derivatelor de s nge uman trebuie s se fac ca i cum acestea sunt purt toare de agen i infectiosi folosind m suri universale de precau ie Donorii materialului surs au fost la r ndul lor testati din punct de vedere al riscului de expunere la boala Cruetzfeldt Jakob BCJ Nu utiliza i niciun flacon al c rui ambalaj steril a fost compromis AVERTISMENT Legile Federale n SUA nu permit v nzarea acestui aparat
163. r de ES3 druppel gedurende 6 10 minuten Opm de equilibratie van het de o cyt en in ES3 is voltooid als de dikte van de zona pellucida en perivitelline ruimte met elkaar overeenkomt Het de o cyt en zal zullen zich binnen 3 minuten ophopen in het onderste gedeelte van de druppel Tijdens de equilibratietijd in ES3 Pipetteer op aseptische wijze n 1 50 HL druppel VS 2 minuten v r volledige equilibratie en prepareer de cryotip afb 3 of het HSV rietje afb 4 voor het vullen CryoTip verbinden met deHamilton spuit of een ander geschikt zuigapparaatje via een connector of een adapter om te zorgen dat hij goed afgesloten is OPMERKING Laat het metalen afdekhulsje over de fijne geblazen punt zitten om hem te beschermen tot de monsters erin geplaatst kunnen worden HSV buisje het langste uiteinde van de blauwe plastic inbrenger verbinden met het gekleurde uiteinde van het geleidingsstaafje De volgende stappen 9 13 dienen binnen 90 110 seconden te worden uitgevoerd VOORZICHTIG blootstelling van monsters aan VS dient te worden beperkt om cytotoxiciteit te voorkomen Het de monster s hebben de neiging om te drijven in VS pas de focus van de microscoop dus aan voor continue observatie tijdens de blootstelling en houd de punt van het transferpipet bij de hand om een snelle overdracht tussen VS druppels te garanderen Zie Figuur 5 Zuig als equilibratie in ES is bereikt een kleine hoeveelheid ES op in
164. r nesimato pa eidim pvz galiuk l i ar skilim kurie gal jo atsirasti gabenimo metu Negalima naudoti jokio tirpalo buteliuko jei skystyje matyti kiet j daleli ar jis atrodo drumstas Norint i vengti u kr timo naudojimo metu reikia laikytis metodini aseptikos reikalavim Vitrification Freeze Kit tirpal sud tyje yra antibiotiko gentamicino sulfato B tina imtis tinkam atsargumo priemoni u tikrinant kad pacientas n ra alergi kas iam antibiotikui Dabartiniais mokslin s literat ros altini duomenimis ilgalaikis vitrifikacijos poveikis embrionams teb ra ne inomas io preparato gamybai naudojami mogaus kraujo dariniai buvo tirti FDA patvirtintu JAV Maisto ir vaist agent ros reaktyv komplektu ir buvo nustatyta kad jie neraguoja su B hepatito pavir iniu antigenu HBsAg antik nais prie C hepatit HCV ir antik nais prie mogaus imunodeficito virus IV Ta iau jokie tyrimo b dai galutinai neu tikrina kad mogaus kilm s preparatai yra be u krato Elkit s su mogaus kraujo dariniais taip lyg jie gal t perne ti infekcij ir laikykit s bendr atsargumo priemoni Kraujo donorai taip pat buvo i tirti d l galimo pavojaus u sikr sti Kruetzfeldto Jakobo liga KJL Nenaudokite buteliuko jeigu sterili pakuot buvo pa eista PERSP JIMAS Pagal federalinius JAV statymus is prietaisas gali b ti parduodamas tik gydytoj arba j u
165. ransfer the specimen up to two at one time with a minimal volume of medium from the culture dish to the drop of ES and start the timer Embryos should equilibrate in the ES drop slowly by free fall for 6 10 minutes Note The specimen will shrink and then gradually return to its original size which indicates that the eguilibration is complete CAUTION Minimize the exposure of specimen s to light during equilibration in ES and VS drops During this eguilibration time in ES setup one 50 pL drop of VS solution as shown in Fig 7 and prepare the CryoTip or HSV Straw for loading Follow protocol as written above Section A Oocyte MII Vitrification Protocol from steps 9 through 12 for exposure to VS solutions loading of CryoTip or HSV Straw plunging in LN and long term storage For additional details on the use of these products each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program STORAGE INSTRUCTIONS AND STABILITY Store the unopened vials refrigerated at 2 C to 8 C When stored as directed Vitrification Freeze Kit Solutions are stable until the expiration date shown on the vial labels Do not use media for more than eight 8 weeks once containers have been opened As human source material is present in the product it may develop some particulate matter during storage This type of particulate
166. rat de 12 000 C minute Vezi Figura 6b nc rcati si etansati tubul HSV dup cum urmeaz Cuo micropipet transferati cu aten ie proba probele n canalul tijei capilare la 1 mm de cap t Pic tura care include proba probele trebuie s fie sub 0 5 ul Maxim 2 ovocite sau embrioni pentru fiecare tij capilar Plasati imediat tija capilar i manipulatorul in tub i ap sa i p n ce por iunea dreptunghiular a manipulatorului intr n contact cu cap tul conic al tubului Str ngeti u or tubul ntre degetul mare i degetul ar t tor i ndep rta i dispozitivul de insertie n timp ce continua i s ine i tubul nemiscat etansati cap tul deschis cu dispozitivul de etan are SYMS Tineti tubul cu o penset n zona tijei de transfer Scufundati rapid tubul ntreg n azot lichid LN in pozi ie vertical Agitati u or tubul n azot lichid LN timp de c teva secunde pentru a evita formarea unui strat de bule de aer izolant n jurul tubului 11 Plasati CryoTip ul vitrificat sau tubul HSV n tubul de criogenare sau gobletul umplut i scufundat n azot lichid LN pe CryoCane Acoperiti tubul de criogenare sau gobletul cu un capac sau conectat n pozi ie r stumat cu un alt tub de criogenare f r capac pentru a fixa CryoTip ul vitrificat sau tubul HSV n nitrogen lichid 12 Mutati rezervorul cu azotul lichid N n crio congelator N i transferati criotija c
167. re riposare per 2 minuti Trasferire l ovocita 0 ovociti con un volume minimo di soluzione dalla goccia mescolata alla goccia ES3 per 6 10 minuti NOTABENE l equilibrazione delle oocite in ES3 e completato guando la larghezza delle spazi delle zone pellucida e perivitelline sono uguali II oocite si stabilisce al fondo della goccia entro 3 minuti Durante il periodo d equilibrazione in ES3 Distribuire in modo asettico una 1 goccia di 50 JL di VS 2 minuti prima di completare l equilibramento e preparare la cannuccia Cryotip fig 3 o HSV fig 4 per il caricamento CryoTip per ottenere una tenuta ottimale connetterlo alla siringa Hamilton o ad uno strumento di aspirazione adeguato utilizzando un connettore o un adattatore NOTA tenere la copertura metallica sulla punta fine estratta leggermente per proteggerla fino a quando non si pronti a caricare i campioni Paillette HSV connettere l estremit pi lunga del dispositivo di inserimento in plastica blu all estremit colorata dell asta per la manipolazione I passi seguenti 9 a 13 devono essere finiti entro 90 110 secondi AVVERTIMENTO L esposizione delle campioni al VS deve essere limitato per prevenire citotossisita campioni tendono di ondeggiare in VS allora aggiustare il foco attraverso il microscopio per mantenere visualizzazione continuo durante l esposizione e mantenere il punto della pipetta di trasferimento vicino per assicurare il trasferimento
168. rtil Steril 79 1323 1326 2003 8 Mukaida T Takahashi K Kasai M Blastocyst cryopreservation ultrarapid vitrification using cryoloop technigue RBM Online 6 221 225 2002 9 Yokota Y Sato S Yokota M Ishikawa Y Makita M Asada T and Araki Y Successful pregnancy following blastocyst vitrification Hum Reprod 15 1802 1803 2000 10 Yoon TK Chung HM Lim JM Han SE Ko JJ and Cha KY Pregnancy and delivery of healthy infants developed from vitrified oocytes in a stimulated in vitro fertilization embryo transfer program Fertil Steril 74 180 181 2000 GASTIGHT is a Registered Trademark of Hamilton Co Chen S U Lien Y R Cheng Y Y Chen H F Ho H N and Yang Y S Vitrification of mouse oocytes using closed pulled straws CPS achieves a high survival and preserves good patterns of meitic spindles compared with conventional straws open pulled straws OPS and grids Hum Reprod 16 2350 2356 2001 Isanchenko V Selman H Isachenko E Montag M EI Danasouri and Nawroth F Modified vitrification of human pronuclear oocytes efficacy and effect on ultrastructure Reproductive BioMedicine Online 7 211 216 2003 Van den Abbeel E Camus M Van Waesberghe L Devroey P Van Steirteghem AC A randomized comparison of the cryopreservation of one cell human embryos with a slow controlled rate cooling procedure or a rapid cooling procedure by direct plunging into liguid nitrogen Hum Reprod 12 1554
169. s stadijos MII vitrifikacijos protokolas apibr ian i m gini apdorojim VS tirpalais CryoTip iaudeli pildym panardinim skyst j azot LN ir ilgalaik saugojim D l i samesni i produkt naudojimo gairi kiekviena laboratorija turi i r ti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir metodinius nurodymus specialiai parengtus ir optimizuotus pagal atskiros medicinin s programos nuostatas LAIKYMO S LYGOS IR STABILUMAS Neatidarytus buteliukus laikykite aldytuve nuo 2 C iki 8 C temperat roje Laikant pagal nurodymus vitrifikacijos u aldymo rinkinio tirpal savyb s i lieka stabilios iki tinkamumo termino datos pa ym tos buteliuk etiket se Atidarius talpykl jokios terp s negalima naudoti ilgiau nei a tuonias 8 savaites Produkto sud tyje yra mogaus kilm s med iag tod l laikymo laikotarpiu jame gali susidaryti iek tiek kiet j daleli N ra inoma kad tokio pob d io kietosios dalel s tur t poveikio produkto funkcin ms savyb ms ATSARGUMO PRIEMON S IR SP JIMAI is prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams apmokytiems atlikti proced ras susijusias su prietaiso taikymu pagal numatyt paskirt Papildomai apsisaugant paruo iamosios proced ros metu rekomenduojame i mus i pakuot s kiekvien Cryotip atid iai ap i r ti Prie naudojant CryoTip iaudelius reikia ap i r ti taikant tinkam objekto padidinim 40x stiprumo a
170. s m da CryoTipi lespoole kuni peenik habras ots ilmub n htavale CryoTipi ja Hamiltoni s stla kasutust mikroskoobi all j lgides rnalt aspireerige v ike kogus VSi CryoTipi 1 m rgini J tkates mikroskoobi all j lgimist rnalt aspireerige VSiga proov CryoTipi 2 m rgini N d j lgige otse CryoTipi ja aspireerige rohkem VSi kuni 3 m rgini Proov peab paiknema 2 m rgi ja 3 m rgi vahepeal Kuumtihendage plomm nr 1 CryoTipi 1 m rgi kohal v i vahetult selle all ja libistage h lss tagasi alla et see kataks ja kaitseks peenikest habrast otsa Eemaldage CryoTip ettevaatlikult aspiratsioonivahendist ja adapterist ja kuumtihendage siis 2 plommiga CryoTipi j medas otsas lalpool 4 m rki Kastke kaetud CryoTip otse vedelasse l mmastikku jahutamiskiirus 12000 C min vt joonis 6b Laadige ja sulgege HSV k rs hermeetiliselt j rgmiselt Pipeteerige proov id mikropipetiga ettevaatlikult kapillaarvarda renni 1 mm kaugusele selle otsast Proovi proove hoidev tilk peab olema alla 0 5 ul Maksimaalselt 2 oots ti v i embr ot iga kapillaarvarda jaoks Paigutage kapillaarvarras ja paigaldi kohe k rre sisse ja l kake kuni paigaldi nelinurkne osa puutub kokku k rre muhvotsaga Pigistage k rt kergelt p idla ja s rmega ja eemaldage sisestusseade K rtedasi paigal hoides sulgege avatud ots SYMS sulguriga Hoidke k rt pintsettide abil teisaldusvarda alas Vajutag
171. sakymu Ki T RK ULLANIM AMACI Vit Kit Freeze insan oositlerinin MII ve embriyolarinin zigottan blastokiste vitrifikasyonu ve depolanmasina y nelik yardimla reme prosed rlerinde kullanim igindir Bu kit rneklerin optimal geri kazan m i in Irvine Scientific CryoTip Katalog No 40709 veya HSV Payet Katalog No 019921 ve Vitrifikasyon Eritme Kiti Vit Kit Thaw ile kullan m i in tasarlanm t r R N TANIMI Dengeleme Sol syonu ES HEPES tamponlu bir Medyum 199 sol syonudur ve gentamisin s lfat 35 ug mL 7 5 v v DMSO ve etilen glikol ve 20 v v Dekstran Serum Takviyesi igerir Vi vi Vi Vi ifikasyon Soliisyonu VS HEPES tamponlu bir Medyum 199 soliisyonudur ve gentamisin s lfat 35 ug mL 15 v v DMSO ve etilen glikol 20 v v Dekstran Serum Takviyesi ve 0 5 M s kroz i erir Bu iki sol syon ad ml mikro damla rifikasyon protokol ne g re s rayla kullan lmal d r KAL TE G VENCES Kit Freeze deki sol syonlar membran filtrelidir ve 10 3 lik sterilite g vence d zeyini kar lad do rulanm retim prosed rlerine g re aseptik olarak i lenmi tir Kit Freeze partilerinden her biri unlar i in test edilmi tir Endotoksin Limulus Amebosit Lizat Testi ile Biyouyumluluk Tek H creli Fare Embriyo Testi ile Sterilite g ncel USP Sterilte Testi ile lt 71 gt T m sonu lar talep zerine sunulacak olan parti spesifik
172. stuu ja palaa sitten v hitellen alkuper iseen kokoon merkiksi ett tasapainotus on valmis VAROITUS Minimoi n ytteen n ytteiden altistuminen valolle sen tasapainotuksen aikana ES ja VS tipoissa 4 T m n ES ss tasapainottamisen aikana ota 1 50 pL tippaa VS liuosta ks kuva 7 ja valmistele CryoTip tai HSV pilli lataamista varten Noudata yll osassa A Oosyytin MII vitrifikaatioprotokolla annettujen ohjeiden vaiheita 8 16 joissa selvitet n altistus VS liuoksille CryoTipin lataaminen nestetyppeen LN upottaminen ja pitk aikainen s ilytys Lis tietoja n iden tuotteiden k yt st kunkin laboratorion tulee hakea omista menet elyohjeistaan ja protokollista jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista l kinn llist ohjelmaa varten S ILYTYSOHJEET JA S ilyt avaamattomia ampul 2 8 C Ohjeiden muka STABIILIUS leja j kaapissa l mp tilassa isesti s ilytettyn lasitus j dytyspakkauksen liuokset ovat stabiileja ampullien etiketiss olevaan viimeiseen k ytt p iv n asti Elatusaineita saa k ytt korkeintaan kahdeksan 8 viikkoa s ili iden avaamisesta lukien Koska tuotteessa on l sn ihmisper ist materiaalia siihen voi ilmaantua jonkin verran hiukkasmaista ainesta s ilytyksen aikana T m n hiukkasmaisen aineksen ei tiedet vaikuttavan tuotteen toimivuuteen VAROITUKSIA JA VAROTOIMENPITEIT T m laite on tarkoitettu sel
173. sure and keep the tip of the transfer pipette nearby to assure rapid transfer between VS drops Refer to Figure 5 9 4 After eguilibration in ES is complete draw up some ES into the transfer pipet and transfer the specimen s with minimal volume from the drop of ES into the drop of VS for 30 seconds Load and heat seal the CryoTip as follows See Figure 6a Slide the metal cover sleeve up along the CryoTip to expose the fine fragile tip end Handling the CryoTip and Hamilton syringe while observing under the microscope carefully aspirate a small volume of VS to the Mark 1 on the CryoTip Continue observation under the microscope and gently aspirate the specimen with VS to the Mark 2 on the CryoTip Now observe the CryoTip directly and aspirate more VS to the Mark 3 Specimen must be located between Mark 2 and Mark 3 Heat seal Seal 1 the CryoTip on or just below Mark 1 and slide the cover sleeve back down to cover and protect the fine fragile tip Carefully remove the CryoTip from the aspiration tool and adaptor and then heat seal Seal 2 at the thick end of the CryoTip above the Mark 4 Plunge the covered CryoTip directly into liquid nitrogen cooling at a rate of 12 000 C min See Figure 6b Load and seal the HSV straw as follows Using a micropipette carefully deposit the specimen s into the gutter of the capillary rod at 1 mm from the end The drop holding the specim
174. t monster de monsters bevat moet minder dan 0 5 ul zijn Maximaal 2 o cyten of embryo s voor elk capillair staafje Plaats het capillaire staafje en het geleidingsstaafje in het buisje en duw tot het rechthoekige gedeelte van de geleider in contact komt met het ronde uiteinde van het buisje Klem het buisje voorzichtig tussen uw duim en wijsvinger en verwijder de inbrenger Terwijl u het buisje nog in dezelfde positie houdt sluit u het open einde af met behulp van een SYMS afsluiter Houd het buisje met behulp van een pincet vlakbij het geleidingsstaafje Dompel het hele buisje snel verticaal in LN onder Schud het buisje zachtjes een paar seconden in LN heen en weer om te voorkomen dat zich een isolerende laag van luchtbellen om het buisje vormt 11 Plaats de gevitrificeerde CryoTip of het HSV buisje in de ondergedompelde met LN gevulde cryohouder of beker op het cryostaafje Sluit de cryohouder of beker af of maak hem ondersteboven vast aan een andere onafgesloten cryohouder om de gevitrificeerde CryoTip of het HSV buisje in vloeibare stikstof te verzekeren 12 Zet de tank met vloeibare stikstof LN dichtbij de LN cryovriezer en breng de cryohouder met inhoud over naar de cryovriezer voor langdurige opslag B EMBRYO S PN tot Blastocyst vitrificatieprotocol 1 Pipetteer op aseptische wijze n 50 ul druppel ES op een omgekeerd deksel van een petrischaal 2 Haal de petrischaal met het
175. t jejich obsahu Je vhodn j i odd lit jen mno stvi potfebn pro pou iti a ihned po odd leni vr tit lahvi ky do prostredi s teplotou 2 8 C Modified HTF HEPES roztok s proteinem je take nutny pro vitrifika amp ni protokol oocytu Napl te z sobnik kapaln ho dusiku kapalnym dusikem tak aby se dos hlo hloubky 10 2 cm nebo aby byla kryotrubi ka nebo dr k pln amp ponofeny a polozte jej blizko mikroskopu Pfipevn te kryo zkumavku nebo trubi ku otevfenou ke spodni svorce kryo dr ku a ponofte do kapaln ho dusiku pro pfipravu na uskladn ni vitrifikovanych vzork Ur ete po et vzork na vitrifikaci Ozna te ka dou sterilni petriho misku nebo viko a skladovaci zafizeni Cryo potfebnymi informacemi Opatrn dvakr t p evra te ka dou ampulku ES a VS aby se obsah p ed pou it m promichal P ipravte misku s kapkami roztoku na vitrifika n proceduru n sledovn A Vitrifika n protokol OOCYT MII POZN MKA Vitrifika n protokol pro embryo najdete v sti B 1 Steriln m zp sobem p eneste 20 ul pokles kultiva n ho m dia Modified HTF HEPES s bilkovinou a roztoku ES z mal vzd lenosti na obr cenou vnit n stranu v ka steriln Petriho misky jak je zn zorn no na obr 1 a polo te misku na stolek mikroskopu jedna kapka 20 ul m dia Modified HTF HEPES s b lkovinou t i 20 ul kapky celkem 60 ul ES ES1 ES2 ES3 Vyjm te kultiva n mis
176. t vzorky HSV Straw p ipojen del ho konce modr ho plastikov ho zav d c ho p pravku ke zbarven mu konci manipula n ty inky N sleduj c kroky 9 13 by m ly b t dokon eny b hem 90 110 vte in POZOR Vystavov n vzork VS roztoku by m lo b t omezeno aby se p ede lo cytotoxicit Vzorky maj tendenci v roztoku VS plavat proto si zaost ete mikroskop abyste je mohli nep etr it sledovat b hem vystaven a polo te si hrot p enosn pipety po ruce abyste mohli zabezpe it rychl p enos mezi 10 12 kapkami VS Viz obr 5 Po dokon eni ekvilibrace v ES odeberte trochu ES do prenosn pipety a preneste vzorek vzorky minim lniho objemu z kapky ES do kapky VS na 30 vte in Naplite a teplem zapecette ty inku CryoTip podle n sledujiciho popisu viz obr 6a Vysu te kovov ochrann kryt sm rem nahoru pod l ty inky CryoTip abyste odhalili jemn k ehk hrot Pou it m ty inky CryoTip a injek n st ka ky Hamilton za st l ho pozorov n pod mikroskopem opatrn aspirujte mal objem VS po zna ku 1 na ty ince CryoTip P i trval m sledov n pod mikroskopem opatrn aspirujte vzorek s VS po zna ku 2 na ty ince CryoTip Nyni pozorujte ty inku CryoTip p mo a vys n m odeberte VS a po zna ku 3 Vzorek mus b t um st n mezi zna kou 2 a zna kou 3 Horkem zape e te pe e 1 ty in
177. tan w Zjednoczonych zezwala na sprzeda tego urz dzenia tylko przez lub na polecenie lekarza ROM N UTILIZARE DESTINAT Vit Kit Congelarea este utilizat n tehnicile de reproducere asistat pentru vitrificare i depozitare a ovocitelor umane MII i a embrionilor de la zigot la blastocist Acest kit este destinat utiliz rii cu CryoTip Irvine Scientific Nr de catalog 40709 sau Tubul HSV vitrificare cu grad nalt de sigurant Nr de catalog 019921 si Kitul de decongelare a vitrific rii Vit Kit Thaw pentru recuperarea in conditii optime a probelor DESCRIEREA PRODUSULUI Equilibration Solution ES este o solutie tamponant HEPES a Mediului 199 contin nd sulfat de gentamicin 35 ug mL 7 5 v v dimetilsulfoxid DMSO 7 5 glicol de etilen si 20 v v Dextran Serum Supplement Solutia de Vitrificare VS este o solutie tamponat HEPES a mediului 199 care contine sulfat de gentamicin 35 Hg mL 15 v v al fiec rui dimetilsulfoxid DMSO glicol de etilen 20 v v Dextran Serum Supplement i 0 5Mzaharoz Aceste dou solutii vor fi utilizate n succesiune conform protocolul de vitrificare de decongelare si sortare n trepte a micropic turilor ASIGURAREA CALIT II Solutile din Vit Kit Freeze au fost filtrate prin membrane si prelucrate aseptic conform procesului de fabrica ie care asigur un nivel de sterilitate SAL de 103 Fiecare lot de Vit Kit Freeze primeste urm
178. tatre pe timp ndelungat Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs iecare laborator trebuie s consulte protocolul pentru procedurile utilizate n laborator care sunt specifice i optimizate pentru programul medical individual INSTRUC IUNI DE P STRARE I VALABILITATE P strati fiolele nedeschise refrigerate la o temperatur ntre 2 C i 8 C P strate conform instruc iunilor solu iile kitului de congelare prin vitrificare r m n stabile p n la data expir rii nscris pe eticheta fiolei Dup deschiderea containerelor durata de utilizare a mediilor nu trebuie trebuie s dep easca opt 8 s pt m ni ntruc t n produs este prezent material de natur uman acesta ar putea genera o oarecare cantitate de particule n suspensie pe durata p str rii Nu este cunoscut ca acest tip de particule n suspensie s aib vreun efect asupra performan ei produsului PRECAUTII I AVERTISMENTE Acest dispozitiv este destinat s fie utilizat de personalul specializat n proceduri care includ aplicarea indicat pentru care a fost creat dispozitivul V recomand m ca i o precau ie ad ugat s examinati cu aten ie fiecare produs Cryotip scos din pachet nainte de nceperea procedurilor de preparare nainte de utilizare CryoTips ul trebuie s fie examinat prin m rire potrivit de 40X pentru a depista eventualele deterior ri care pot apare n timpul transportului de exem
179. toarele teste Solutji si CryoTips Endotoxinele prin metodologia de Limulus Amebocyte Lysate LAL Biocompatibilitatea prin analiza embrionului de soarece o celul Sterilitate determinat prin testare prezent in Farmacopeea USA lt 71 gt Toate rezultatele sunt raportate la un lot specific ntr un Certificat de Analiz care este disponibil la cerere MATERIALE NECESARE CARE NU SUNT INCLUSE CryoTip Irvine Scientific Nr de catalog 40709 sau Tub HSV Nr de catalog 0019921 Conector Irvine Scientific Nr de catalog 40736 sau alt adaptor Cutie Petri Steril 50 X 9mm Falcon 351006 sau echivalent Criotuburi 4 5 ml sau goblete si criotije Mediu de cultur HTF modificat HEPES suplimentat cu protein Nr de catalog 90126 Manusi disponibile Sering Hamilton GASTIGHT 50 UL Nr de catalog 80901 sau alt instrument de aspirare Transferati pipetele trage i pipetele de sticl sau micropipetele cu un varf interior cu diametrul de 200 um Pensete Ermetizare la c ldur Dispozitiv de etan are SYMS pentru Tubul HSV Nr de catalog 016296 Ceas cu cronometru sau Cronomertru Rezervor cu Azot lichid container cu volum de 1 2 L prev zut cu capac Dewar sau Stirofoam Azot lichid volum suficient n rezervor de 4 inch ad ncime INSTRUCTIUNI DE UTILIZARE Kituri de congelare VIT a componentilor pe aplicatie Equilibration Solution ES 60 uL pentru Protocolul de Vitrifi
180. tokolli jaoks v i 50 uL embr o vitrifikatsiooni protokolli jaoks Vitrifikatsiooni lahus VS 50 pL vitrifikatsiooni protokolli jaoks 1 CryoTip v i HSV k rrega hoiab kuni 2 proovi 1 konnektor VITRIFIKATSIOONI PROTOKOLL M RKUS Protseduurid tuleb l bi viia toatemperatuuril 20 27 C RGE kasutage j rgmiste protseduuride jaoks soojendatud mikroskoobi esemelauda ETTEVAATUST Lahuste ES ja VS tasakaalustamise ajal minimeerige proovi kokkupuudet valgusega 1 OOTS DI MII vitrifikatsiooni protokoll Viige tasakaalustava lahuse ES ja vitrifikatsioonilahuse VS toatemperatuurini 20 27 C M RKUS Hoiduge kogu ESi ja VSi viaalide korduvast toatemperatuurile viimisest kui iga kord on vaja kasutada vaid os lahusest Parem on m rata kasutatav kogus nin viaalid kohe p rast jaotamist 2 8 C temperatuuri tagasi viia Oots tide vitrifikatsiooni protokolliks oi vaja ka proteiiinilisandiga Modified HTFi HEPES T itke vedela l mmastiku mahuti vedela l mmastikuga piisavalt et saavutada s gavus 10 cm v i et raamile paigaldatud kr okatsut t ielikult sukelduks ja asetage mikroskoobi l hedusse Kinnitage korgita kr okatsut v i klaasike Cryocane raami alumisele klambrile ja sukeldage see vedelasse l mmastikku vitrifitseeritud proovide s ilitamise ettevalmistamiseks Tehke kindlaks mitu proovi kuulub vitrifitseerimisele M rgistage iga steriilne Petri tass v i kaas ja Cryo s ilitusseade v
181. trifikaatioprotokollaa varten 1 CryoTip tai HSV pilli s ilytt korkeintaan 2 n ytett flitin VITRIFIKAATIOPROTOKOLLA HUOM Toimenpiteet tulee suorittaa huoneenl mm ss 20 27 C L k yt kuumennettua mikroskoopin objektip yt seuraavissa toimenpiteiss VAROITUS Minimoi n ytteen altistuminen valolle sen tasapainotuksen aikana ES ja VS liuoksissa 1 Anna tarvittavan m r n tasapainoliuosta ES ja vitrifiointiliuosta VS saavuttaa huoneenl mp 20 27 C HUOM l anna ES ja VS pullojen koko sis ll n l mmet toistuvasti huoneenl mp iseksi jos kerralla tarvitaan vain osa liuoksesta On parempi jakaa k ytett v m r yht suuriin osiin ja palauttaa pullot v litt m sti takaisin 2 8 C n l mp tilaan t m n j lkeen Modified HTF t HEPES ja proteiinia tarvitaan my s oosyyttien vitrifikaatioprotokollassa 2 T yt nestetyppisaili nestetypell 10 cm syvyydelt jotta kryoputki telineess on t ysin upoksissa ja aseta se l helle mikroskooppia Kiinnit kryoputki tai kuperapohjainen putki avoimena kryotelineen pohjakiinnikkeeseen ja upota se nestetyppeen valmiina vitrifioitujen n ytteiden s ilytyst varten 3 M rit kuinka monta n ytett tullaan vitrifioimaan 4 Merkitse jokaiseen steriiliin petrimaljaan tai kanteen ja Cryo s ilytyslaitteeseen tarvittavat tiedot 5 K nn kukin ES ja VS pullo kevyesti kaksi kertaa yl salaisin jotta niiden
182. u con inutul n crio congelator pentru depozitare de lung durat B Protocol de Vitrificare pentru EMBRIONII PN Blastocite 1 Distribuiti aseptic o pic tur de 50 uL de ES pe capacul r sturnat al unei cutii Petri 2 Scoateti cutia de cultur contin nd embrionul ii din incubator i verifica i calitatea mostrei lor sub microscop Dac este posibil selecta i numai embrioni de cea mai bun calitate pentru vitrificare 3 Transferati cu grij mostra p n la 2 n acela i timp cu un volum minim din mediul de cultur p n la Suprafa a pic turi de ES i porni i cronometrul Embrionii trebuie echilibrati ncet n pic turile ES prin c dere liber timp de 6 10 minute Not Mostrele se vor mic ora n diametru iar dup aceea vor reveni treptat la m rimea original ceea ce indic c echilibrarea a fost realizat cu succes AVERTISMENT Minimaliza i expunerea mostrei lor la lumin n timpul echilibr rii efectuate n pic turile de ES i VS 4 n timpul acestei echilibr ri de timp n ES preg ti i 1 50 HL pic turi de solutie de vitrificare VS a a cum este indicat n Figura 7 i preg ti i CryoTip ul sau tubul HSV pentru nc rcare Urmati protocolul cum este scris deasupra Sec iunea A MII Protocol de Vitrificare a ovocitelor de la treapta 8 p n la 16 privind expunerea solu iei VS nc rcati CryoTip ul scufunda i l in azotul lichid N si depozi
183. ul ES en VS twee keer om zodat de inhoud v r het gebruik wordt gemengd Prepareer de schaal als volgt met druppeltjes oplossing voor de vitrificatieprocedure O CYT MII vitrificatieprotocol OPM raadpleeg Deel B voor het embryovitrificatieprotocol Pipetteer op aseptische wijze 20 ul druppel van het kweekmedium Gewijzigd HTF HEPES met eiwit en ES dicht bij elkaar op een omgekeerd deksel van een steriele petrischaal zoals afgebeeld in figuur 1 en plaats de schaal onder de microscoop G n 20 pl druppel Gewijzigd HTF HEPES met eiwit drie 20 ul druppels 60 ul in totaal ES ES1 ES2 ES3 Haal de petrischaal met de MII o cyten uit de incubator en controleer de kwaliteit van de monsters onder de microscoop Kies indien mogelijk uitsluitend het de MII fase o cyt en van de hoogste kwaliteit VOORZICHTIG beperk de blootstelling van het de monster s aan licht tijdens eguilibratie in de H ES en VS druppels tot een minimum Breng het o cyt maximaal twee tegelijkertijd met een minimaal volume medium over van de petrischaal in de incubator naar de 20 ul druppel H gedurende n minuut Meng de druppel H met ES1 zie Fig 1 pijl 1 met de punt van het transferpipet en laat de twee oplossingen spontaan mengen gedurende 2 minuten Meng dan de druppel ES2 pijltje 2 met de eerder gemengde druppels en laat 2 minuten staan Breng het de o cyt en met minimaal oplossingsvolume over van de gemengde druppel naa
184. uma Pirms lieto anas CryoTip j p rbauda izmantojot atbilsto u palielin jumu 40x stipr ku lai noteiktu iesp jamos boj jumus piem ram smail gala l zumu vai pl sumu kas var tu b t radu ies transport anas laik Nelietot nevienu duma flakonu kur saskat mas vielas da i as vai du ainums Lai izvair tos no kontamin cijas probl m m r kojieties izmantojot aseptiskas tehnikas Vitrification Freeze Kit satur antibiotiku gentamicina sulf tu J veic atbilsto i piesardz bas pas kumi lai nodro in tu ka pacientam nav paaugstin tas jut bas pret o antibiotiku Pa laik pieejam izp tes literat r ir nor d ts ka ilglaic ga vitrifik cijas iedarb ba uz embrijiem joproj m nav zin ma Cilv ka asins prepar ti kas tika izmantoti l dzek a pagatavo an ir p rbaud ti ar FDA licenc tiem testa komplektiem un nav uzr d ju i pozit vu reakciju pret hepat ta B virsmas antig niem HBsAg hepat ta C antiviel m HCV un cilv ka im ndefic ta v rusa antiviel m HIV Tom r ir j em v r ka neviena testa metode nesniedz piln gu garantiju tam ka l dzek i kas ieg ti no cilv ka organisma neb s infekciozi Ar visiem cilv ka asins prepar tiem j r kojas k ar iesp jamiem infekciju p rnes jiem t p c sekojiet standarta piesardz bas proced r m Prepar tu donori ir p rbaud ti ar pret Kreicfelda Jakoba slim bas risku CJD Nelietojiet pude
185. uos bandymus Tirpalai ir CryoTip iaudeliai Endotoksin kiekio nustatymas pagal kardauodegio krabo Limulus polyphemus amebocit lizato LAL analiz s metod Biologinio suderinamumo nustatymas pagal pel s embriono chemin s analiz s vienos l stel s metod Sterilumo nustatymas pagal iuo metu patvirtint Jungtini Valstij farmakop jos sterilumo test lt 71 gt Visi rezultatai pateikiami pagal atskir partij parametrus parengtuose analiz s sertifikatuose kuriuos galima gauti u sakius REIKALINGOS BET PAKUOT JE NEPATEIKTOS MED IAGOS Irvine Scientific CryoTip katalogo Nr 40709 arba HSV iaudelis katalogo Nr 0019921 Irvine Scientific jungtis katalogo Nr 40736 ar kitas adapteris Sterilios Petri l k tel s 50 x 9 mm Falcon 351006 arba lygiavert s Kriogeniniai megintuveliai 4 5 ml arba taur s ir krio geniniai laikikliai Modifikuota HTF HEPES katalogo Nr 90126 kult ros terp papildyta baltymu Vienkartin s pir tin s Hamilton GASTIGHT virk tas 50 ul katalogo Nr 80901 ar kitas aspiracijos rankis Perk limo pipet s vientiso stiklo pipet s arba mikropipe i antgaliai kuri vidinis antgalio skersmuo yra 200 um Pincetas Impulse Heat Sealer impulsinio u lydymo aparatas SYMS sandariklis HSV iaudeliui katalogo Nr 016296 Sekundmatis arba laikmatis Skystojo azoto indas Diuaro indas arba putplas io lermosas su dang iu 1 2 talpos
186. uz durante o processo de equil brio nas gotas de ES e VS 4 Durante o tempo de equil brio em ES disponha 1 50 pL gotas de solu o VS conforme ilustrado na Fig 7 e prepare o CryoTip ou Palhinha HSV para o carregamento Siga o protocolo com foi descrito acima Sec o A Protocolo de vitrifica o de O citos MII a partir do passo at 16 para exposi o s solu es VS enchimento da CryoTip mergulho em LN e conserva o a longo termo Para detalhes adicionais sobre a utiliza o destes produtos o laborat rio deve consultar os seus pr prios procedimentos padr o e protocolos que foram especificamente desenvolvidos e optimizados para a sua institui o INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE Conserve os frascos selados refrigerados entre 2 C e 8 C Quando armazenados como indicado as solug es do Kit Vitrification Freeze s o est veis at o fim do prazo de validade que consta nos r tulos dos frascos N o utilize o meio alem de oito 8 semanas ap s a abertura dos recipientes Como h material humano neste produto ele pode desenvolver mat ria particulada durante o armazenamento N o se conhece nenhum efeito desse tipo de mat ria particulada sobre o desempenho do produto AVISOS E PRECAU OES Este dispositivo deve ser utilizado por funcion rios treinados em procedimentos aos quais se destina Como precaug o acrescida durante o procedimento de preparac o recomendamos que cada
187. virinimo H ES ir VS la uose metu reikia kiek manoma suma inti viesos poveik m giniui iams 3 traukdami kaip galima ma esn pas lio l k tel s inkubatoriuje terp s kiek vienai minutei perkelkite oocit ne daugiau kaip 2 vienu kartu 20 ul H tirpalo la 4 Pipet s galiuku H tirpalo la leiskite ES1 tirpal r 1 pav 1 rodykl ir leiskite 2 minutes abiems tirpalams savaime susimai yti 5 Poto ilasinkite ES2 la 2 rodykl anks iau la intus la us ir palikite 2 minut ms 6 traukdami kiek manoma ma esn terp s tirpalo kiek oocita us 6 10 minu i perkelkite ES3 la Pastaba oocit pusiausvyros b sena ES3 tirpale pasiekiama kai skaidriosios zonos Zona pellucida ir tarpo iki plazmin s membranos angl perivitelline space storis yra vienodas Oocitas ai nus da la o dugn per 3 minutes 7 Pusiausvirinimo ES3 tirpale metu Likus 2 minut ms iki pusiausvirinimo pabaigos aseptin mis salygomis u la inkite vien 1 50 pl VS tirpalo la ir paruo kite u pildymui CryoTip 3 pav arba HSV Siaudelj 4 pav CryoTip Hamilton virk to ar atitinkamo aspiracijos jrankio prijungimas naudojant jungti ar adapteri kad b t hermetiska PASTABA metalin dangtelio mov u d kite ant gerai u mauto antgalio kad apsaugotum te j kol bus pritraukta m gini HSV iaudelis m lyno plastikinio d jimo prietaiso ilgesnio galo prijun
188. vist vende tilbage til dens oprindelge stgrrelse hvilket angiver at ekvilibrering er fuldfort FORSIGTIG Minimer udsattelse af prove r for lys under ekviliberering i ES og VS dr ber Under ekvilibreringstiden i ES dr ben anbring 1 50 pL dr ber VS oplosning som vist i fig 7 og forbered CryoTip eller HSV rgret til indforing Folg protokollen som angivet ovenfor Afsnit A Vitrifikationsprocedure for oocytter MII fra trin 8 til 16 med henblik p eksponering for VS oplosninger fyldning af CryoTips nedsankning i flydende nitrogen LN og langtidsopbevaring For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget medicinske program ANVISNINGER FOR OPBEVARING OG STABILITET U bnede h tteglas opbevares nedkolet ved 2 8 C N r Vitrification Freeze Kit oplosninger opbevares som anvist er produkterne stabile indtil udlabsdatoen p flaskernes etiketter Mediet m ikke bruges i mere end otte 8 uger hvis beholderne har v ret bnet Eftersom der er humant kildemateriale i produktet kan det udvikle partikler under opbevaring Det vides ikke om denne type partikler p virker produktets ydeevne FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale der er uddannet i procedurer der inkluderer den indicerede anvendelse som dette udstyr er beregnet til
189. visualisation continue durant Pexposition et garder le bout de la pipette de N gt gt 11 12 transfert proche pour assurer un transfert rapide entre les differentes gouttelettes VS Se referer a la figure 5 Ala fin de l quilibration dans ES aspirer un peu de ES dans la pipette de transfert et transf rer les sp cimens avec un minimum de volume de la gouttelette ES au gouttelette VS pendant 30 secondes Chargez et soudez la chaleur le CryoTip comme indiqu ci apres Voir Figure 6a Glisser la manche m tallique le long du CryoTip pour exposer le bout fin et fragile En manipulant le CryoTip et la Hamilton GASTIGHT Seringue sous le microscope soigneusement aspirer un petit volume de VS jusqu au rep re n 1 du CryoTip Continuer l observation sous le microscope et aspirer doucement les sp cimens avec la solution VS jusqu au rep re n 2 du CryoTip Maintenant en regardant le CryoTip directement aspirer plus de solution VS jusqu au rep re n 3 Sceller le CryoTip la chaleur au niveau du rep re n 1 soudure n 1 Glisser la manche couvrante vers le bas pour couvrir et prot ger le bout fin et fragile Retirez pr cautionneusement le CryoTip de l outil d aspiration et de l adaptateur puis soudez la chaleur Soudure N 2 au niveau de l extr mit paisse du CryoTip au dessus de la marque N 4 Plonger le CryoTip couvert directement dans l azote liquide taux de refro
190. vsiye ediyoruz Kullan m ncesinde Kriyo U lar ta ma s ras nda meydana gelmi olabilecek olas hasarlara kar u k r lmalar veya atlamalar gibi uygun bir b y tme 40x alt nda incelenmelidir Partik lat madde veya bulan kl k kan tlar sergileyen herhangi bir sol syon viyali kullanmay n Kontaminasyon sorunlar ndan sak nmak i in aseptik teknikler kullan n Vitrifikasyon Dondurma Kiti Sol syonlar antibiyotik Gentamisin S lfat i erir Hastan n bu antibiyoti e a r hassas olmad ndan emin olunmas i in uygun nlemler al nmal d r u anda ara t rma literat r vitrifikasyonun embriyolar zerindeki uzunvadeli etkilerinin hala bilinmedi ini g stermektedir Bu r n n retiminde kullan lan insan kan t revleri FDA lisansl kitlerle test edilmi ve i eri in Hepatit B Y zey Antijeni Hepatit C antikorlar ve nsan Ba kl k Eksikli i Vir s HIV antikorlar a s ndan tepkisiz oldu u bulunmu tur Bununla birlikte hi bir test y ntemi insan kaynaklar ndan t retilen r nlerin non infeksiy z oldu u konusunda tam g vence sunmaz T m insan kan t revlerini enfeksiyon yayma potansiyeline sahipmi gibi evrensel nlemler alarak kullan n Kaynak madde don rleri Cruetzfeldt Jakob Hastal kontrol nden de ge irilmi tir Steril ambalajlamayla ilgili herhangi bir eksiklik veya sorun ta yan hi bir i eyi kullanmay
191. vte CryoTip nebo HSV Straw pro napln ni Postupujte podle vy e uvedenych metod st A Vitrifika ni protokol oocytu MII od kroku 8 po 6 18 t kaj c ch se vystaven roztoku VS pln ni ty inek CryoTip ponoreni do kapaln ho dusiku LN a dlouhodob ho skladovani Pro dodate n podrobnosti o pou iti t chto vyrobk by ka d laboratof m la konzultovat vlastn laboratorn metody a protokoly kter byly vytvofeny a optimalizov ny zvla t pro va konkr tni zdravotnicky program POKYNY PRO UCHOVAVANI A STABILITU Net a otev en ampulky uchov vejte zmrazen p i teplot 2 C 8 C P i uchov v n podle pokyn jsou roztoky vitrifika ni sady Vitrification Freeze Kit Solutions stabiln a do data expirace uveden ho na etiket ch ampulek M dia nepou vejte po otev en n dobek po del dobu ne osm 8 t dn Proto e je ve v robku p tomen materi l z lidsk ho zdroje mohou se b hem skladov n vytvo it ste ky O tomto typu ste ek nen zn mo e by m l vliv na v konnost v robku VAROV N A BEZPE NOSTN OPAT EN Za zen bylo ur eno pro pou it kolen m person lem p i z l roc ch kter zahrnuj indikovanou aplikaci pro kterou je za zen ur eno Ja o dopl kov opat en b hem p pravn procedury doporu ujeme aby byla ka d ty inka Cryotip opatrn zkontrolov na po vyjmut z obalu P ed pou it
192. wagi w roztworze ES naci gn pipet transferow pewn ilo roztworu ES i przenie pr bk i o minimalnej obj to ci z kropli ES do kropli roztworu VS na 30 sekund 10 Pobra pr bk i na gor co zamkn ko c wk CryoTip w nast puj cy spos b patrz rys 6a Zsuna metalow otoczk wzd u ko c wki CryoTip aby ods oni delikatne zako czenie Postugiwa si ko c wk CryoTip i strzykawk Hamil tona podczas prowadzenia obserwacji pod mikroskopem ostro nie pobieraj c ma obj to VS do oznaczenia nr 1 na CryoTip Kontynuowa obserwacje pod mikroskopemi delikatnie pobra pr bk z VS do oznaczenia nr 2 na CryoTip Kontynuowa obserwacj bezpo redni CryoTip i delikatnie pobra wi cej VS do oznaczenia nr 3 Pr bka musi by umieszczona pomi dzy ozna kowaniem nr 2 i oznakowaniem nr 3 Uszczelni pod dzia aniem wysokiej temperatury uszczelnienie nr 1 ko c wk CryoTip na wysoko ci lub tu poni ej oznaczenia nr 1 izsun os onk pokrywaj c w d aby przykry i zabezpieczy delikatn ko c wk Ostro nie wysun ko c wk CryoTip z narz dzia aspiracyjnego i nasadki a nast pnie uszczelni na gor co uszczelnienie 2 na grubszym ko cu ko c wki CryoTip powy ej oznaczenia 4 Zanurzy zamkni t CryoTip bezpo rednio w p ynnym azocie z szybko ci ch odzenia 12 000 C min zob Rycina 6l Nape ni i zamkn s omk HSV w nast puj
193. wy 019921 oraz zestawem do optymalnej regeneracji pr bek Vit Kit Thaw OPIS PRODUKTU Equilibration Solution ES jest to zbuforowany HEPES roztw r Medium 199 zawierajacy siarczan gentymycyny 35 ug ml 7 5 v v dimetylosulfoksazyd DMSO 7 5 v v glikol etylenowy i 20 v v Dextran Serum Supplement Vitrification Solution VS jest zbuforowanym HEPES roztworem Medium 199 zawieraj cym siarczan gentymycyny 35 ug ml 15 v v dimetylosulfotlenku DMSO i alkoholu etylowego 20 v v Dextran Serum Supplement i 0 5 M sachoroze Te dwa roztwory sa przeznaczone do u ycia kolejno po sobie zgodnie z etapami protokotu witryfikacji mikrokropli KONTROLA JAKOSCI Roztwory w Vit Kit Freeze sa filtrowane membranowo i przetwarzane aseptycznie zgodnie Z procedurami wytwarzania kt re zostaly zweryfikowane w celu osiagniecia bezpiecznego poziomu sterylno ci SAL wynoszacy 10 Ka da seria Vit Kit Freeze jest poddawana nastepujacym testom Roztwory i ko c wki CryoTip Endotoksyna otrzymywana metodologi Limulus Amebocyte Lysate LAL Kompatybilno biologiczna przez test na zarodku mysim jedna kom rka Sterylno wed ug bie cego Testu Farmakopei Stan w Zjednoczonych lt 71 gt Wszystkie wyniki s notowane na specyficznym dla danej serii wiadectwie Analizy kt re jest dost pne na danie MATERIA Y WYMAGANE ALE NIE ZA CZONE Ko c wki firmy Irvine Scientific CryoTip nr katalogowy
194. znek az rt kes t s t csak orvos ltal vagy orvosi utas t sra t rt nhet LIETUVI K NUMATYTOJI PASKIRTIS Vit Freeze u aldymo rinkinio med iagos yra skirtos naudoti Zmogaus oocitu Il metafazin s stadijos MII ir embriony nuo zigotu iki blastocistu vitrifikacijai ir saugojimui atliekant pagalbinio apvaisinimo proced ras Sis rinkinys skirtas naudoti su Irvine Scientific CryoTip katalogo Nr 40709 arba HSV iaudeliu katalogo Nr 019921 ir vitrifikacijos at ildymo rinkiniu Vit Kit Thaw optimaliam m giniy atk rimui PRODUKTO APRASYMAS Eguilibration Solution ES yra HEPES junginiu buferintas terpes 199 tirpalas kurio sudetyje yra gentamicino sulfato 35 jig ml po 7 5 v v dimetilsulfoksido DMSO ir etilenglikolio bei 20 v v Dextran Serum Supplement priedo Vitrification Solution VS yra HEPES junginiu buferintas terp s 199 tirpalas kurio sud tyje yra gentamicino sulfato 35 ug ml po 15 v v dimetilsulfoksido DMSO ir etilenglikolio 20 v v Dextran Serum Supplement priedo ir 0 5 M sacharoz s Siuos du tirpalus reikia naudoti paeiliui pagal pakopines mikrola vitrifikacijos protokol KOKYB S LAIDAVIMAS Vitrifikacijos rinkinio Freeze tirpalai yra filtruoti naudojant membranin filtr ir asepti kai apdoroti pagal gamybos metodus patvirtintus 10 sterilumo u tikrinimo lygiui SAL atitikti Kiekvienos Vit Kit Freeze partijos produktai tikrinami atliekant i

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