PROSPECTO INTERNACIONAL DEL ENSAYO OPTIGEN
Contents
1. Lave las c maras de prueba 1 2 3 Purgue el dosificador de soluci n de desaparezcan todas las burbujas de aire Conecte el extremo de la llave de paso a la parte superior de la primera c mara de prueba Lave cada c mara de prueba con 10 ml de soluci n de lavado tamponada apretando una vez con fuerza moderada la bomba del dosificador NOTA espere a que todo el l quido se haya escurrido de cada una de las c maras de prueba antes de continuar con el paso siguiente lavado hasta que 2 3 Llene las c maras de prueba con el reactivo con anticuerpo 1 Permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de su uso Mezcle suavemente el contenido del frasco que contiene los anticuerpos antes de su uso Para evitar la contaminaci n del reactivo de anticuerpo transfiera la cantidad necesaria a un recipiente desechable u otro recipiente adecuado Golpee suavemente la base del extremo de la c mara de prueba sobre papel absorbente para eliminar todo resto de soluci n de lavado tamponada Acople la jeringa de 3 ml a la parte superior de la c mara de prueba Coloque la base de la c mara de prueba dentro del recipiente desechable que contiene el reactivo con anticuerpo Aspire LENTAMENTE con el mbolo de la jeringa de forma que introduzca el reactivo con anticuerpo en la c mara de prueba hasta cubrir la ventana superior NOTA aseg rese de que la ventana superior quede completamente cubierta p2. a lotes compatibles de reactivos y c maras de prueba No los mezcle con otras l neas de productos ya que no ser an compatibles e Se ha observado que la contaminaci n con hipoclorito de sodio lej a puede alterar la prueba OS Preparaci n de los reactivos Soluci n de lavado tamponada e Deje que el concentrado de soluci n de lavado tamponada alcance la temperatura ambiente Compruebe que todos los cristales salinos que se puedan haber formado durante la refrigeraci n se hayan disuelto Si quedan cristales sin disolver coloque el frasco de concentrado de soluci n de lavado con su tapa bien ajustada dentro de una cubeta con agua tibia hasta que se hayan disuelto todos los cristales e Enjuague con agua destilada el dispensador de soluci n de lavado y las tuber as e Mezcle el contenido del frasco de concentrado de soluci n de lavado invirti ndolo suavemente varias veces e Vierta el contenido del frasco de concentrado de soluci n de lavado 50 ml en un frasco dosificador de soluci n de lavado de 2 l e Llene el frasco dosificador de soluci n de lavado hasta la marca correspondiente a 1000 ml con agua destilada o desionizada e Mezcle muy bien e Una vez preparada la soluci n de lavado tamponada puede utilizarse durante un m ximo de un mes siempre que se conserve a temperatura ambiente 20 25 C o refrigerada 2 80 Reactivo con anticuerpo e Permita que el reactivo con anticuerpo alcance la temperatura am
3. arriba hasta el final de la bandeja del chasis de alojamiento de las c maras de prueba c Examine la c mara de prueba una vez cargada para descartar la presencia de p rdidas de l quido Limpie con un pa o limpio h medo que no suelte pelusa 2 Coloque el chasis para alojamiento de las c maras de prueba en el lumin metro CLA 1 a Apriete una vez el bot n OPEN CLOSE abrir cerrar del lumin metro CLA 1 para abrir la puerta de transporte b Sostenga el chasis de alojamiento de las c maras de prueba por su asa e inserte la bandeja cargada en la ranura de transporte para el chasis de alojamiento hasta que se oiga un chasquido c Apriete de nuevo el bot n OPEN CLOSE En este momento el chasis de alojamiento se transportar autom ticamente al interior del lumin metro CLA 1 y se cerrar la puerta de transporte 3 Programe la lista de carga en el lumin metro CLA 1 a Identifique qu panel se encuentra en cada una de las cinco posiciones del chasis de alojamiento de las c maras de prueba utilizando la hoja de programaci n del lumin metro como gu a b Apriete los botones UP arriba o DOWN abajo del lumin metro CLA 1 para seleccionar los diferentes paneles c Apriete el bot n ENTER intro cuando aparezca la opci n correcta para la posici n se alada en el chasis de alojamiento d Repita los pasos previos hasta que se hayan programado correctamente en el lumin metro CLA 1
4. internos si el resultado de cualquiera de los controles internos no estuviera dentro de los l mites aceptables definidos anteriormente debe realizarse lo siguiente e Coloque nuevamente la c mara de prueba en el chasis de alojamiento de las c maras de prueba asegur ndose de insertarla completamente y efect e una nueva lectura e Si los resultados siguen siendo inaceptables consulte las secciones 6 y 7 Sueros de control IgE positivo e IgE negativo Hitachi Chemical Diagnostics recomienda que cada lote nuevo de kits de reactivos y c maras de prueba utilizados en el ensayo OPTIGEN para determinaci n de IgE alergeno espec fica sean sometidos a prueba con dos tipos de sueros de control suero de control positivo para IgE y suero de control negativo para IgE Las agencias reguladoras pueden requerir un uso m s frecuente de los sueros de control positivo y negativo Consulte con la agencia reguladora correspondiente para obtener informaci n m s detallada Los sueros de control positivo y negativo para IgE de OPTIGEN se pueden adquirir en Hitachi Chemical Diagnostics Inc y se env an con un impreso en el que figuran los valores esperados Los sueros de control se env an congelados y deben permanecer as hasta su utilizaci n Los controles internos y el suero de control deben pasar las especificaciones para que se pueda informar de los resultados Resultados El lumin metro CLA 1 mide la cantidad de luz emitida por los a
5. pelusa Lumin metro CLA 1 Preparaci n de las c maras de prueba y de las muestras del paciente Centrifugue las muestras de suero inmediatamente antes de su uso si la muestra no se ha centrifugado el d a de la prueba consulte la secci n 8 Obtenci n y preparaci n de muestras Extraiga las c maras de prueba de la bolsa una por paciente Cierre bien la bolsa de pl stico y guarde de nuevo el kit en la nevera Con las ventanas orientadas hacia abajo rotule cada c mara de prueba con la identificaci n correcta del paciente NOTA conserve el kit a 2 8 C mientras no se est utilizando 1 Pon Procedimiento A Prepare la soluci n de lavado tamponada tal como se indica en la B secci n 6 Preparaci n de los reactivos Rehidrate la c mara de prueba 1 Purgue el dosificador de la soluci n de lavado tamponada en el fregadero o recipiente de drenaje hasta que hayan desaparecido todas las burbujas Acople el extremo de la llave de paso a la parte superior de la primera c mara de prueba Lave cada c mara de prueba una sola vez con 10 ml de soluci n de lavado tamponada apretando una vez con fuerza moderada la bomba del dosificador NOTA espere a que todo el l quido se haya escurrido de la c mara de prueba antes de continuar con el paso siguiente Introduzca el suero en la c mara de prueba 1 2 3 Golpee suavemente la c mara de prueba sobre papel absorbente para eliminar todo el l
6. quido residual Acople la jeringa de 3 ml a la parte superior de la c mara de prueba Inserte la base de la c mara de prueba en el vial que contiene el suero del paciente NOTA evite contactar con precipitados y capas lip dicas que pudieran estar presentes Aspire LENTAMENTE con el mbolo de la jeringa de forma que introduzca el suero en la c mara de prueba hasta cubrir la ventana superior Controle que no se formen burbujas NOTA aseg rese de que la ventana del control positivo quede completamente cubierta por el suero Tapone e incube las c maras de prueba 1 3 4 Sin desconectar la jeringa de la parte superior de la c mara de prueba inserte un tap n blanco en la base de la c mara de prueba Retire la jeringa e inserte un tap n negro en la parte superior de la c mara de prueba NOTA los tapones deben introducirse completamente para evitar p rdidas Coloque las c maras de prueba llenas de suero en posici n vertical en el soporte para c maras de prueba Incube a temperatura ambiente durante 2 horas 10 minutos Deseche el suero 1 3 Retire el tap n inferior de la base de cada c mara de prueba y coloque nuevamente la c mara de prueba en el soporte para c maras de prueba Retire el tap n superior de cada c mara de prueba y deje que el suero se escurra y caiga dentro del recipiente para el drenaje de muestras Seque los tapones y gu rdelos para utilizarlos en pasos posteriores
7. HITACHI Hitachi Chemical Diagnostics Inc PROSPECTO INTERNACIONAL DEL ENSAYO OPTIGEN Para diagn stico in vitro Producto de un solo uso Doc No 0649 SPA Rev 04 Fecha de revision 10 13 Indicaciones de uso El ensayo OPTIGEN es un ensayo in vitro para la determinaci n semicuantitativa de las concentraciones circulantes de IgE contra alergenos espec ficos en suero humano Se ha creado para ayudar en el diagn stico cl nico de trastornos al rgicos mediados por IgE junto con con otros hallazgos cl nicos El dispositivo est dise ado para su uso en laboratorios cl nicos Resumen y explicaci n de la prueba La inmunoglobulina E es una clase definida de anticuerpos s ricos que act a como mediadora de las reacciones de hipersensibilidad de tipo l tambi n denominadas alergia at pica Cuando tiene lugar una estimulaci n de los linfocitos B inmunocompetentes debida a la exposici n a un ant geno alergeno dichas c lulas pueden producir anticuerpos IgE espec ficos contra el alergeno que se unen a los receptores de los mastocitos y de los leucocitos bas filos Si el mismo alergeno vuelve a entrar en el organismo mediante inhalaci n ingesta o contacto cut neo se producir su uni n con los anticuerpos IgE ligados a las c lulas Esto desencadena la degranulaci n de stas y la liberaci n de aminas vasoactivas hacia los tejidos circundantes Las aminas vasoactivas como la histamina son las causantes de l
8. a contracci n del m sculo liso bronquial el prurito cut neo la tumefacci n localizada y la filtraci n de l quidos extracelulares a trav s de las barreras mucosas que caracterizan a las reacciones de hipersensibilidad de tipo l Las manifestaciones cl nicas m s comunes de las reacciones de hipersensibilidad de tipo son sinusitis asma dermatitis urticaria y en raras ocasiones shock anafil ctico La evaluaci n de las concentraciones de IgE espec fica para un determinado alergeno en el suero del paciente junto con la evaluaci n cl nica basada en la historia del paciente y en las pruebas realizadas en consecuencia puede ayudar al m dico a confirmar el diagn stico de alergia at pica y a tomar decisiones terap uticas Principio de la prueba EL ensayo OPTIGEN se realiza en un peque o dispositivo de pl stico denominado c mara de prueba en el cual el suero del paciente se expone simult neamente a varios alergenos o mezclas de alergenos La c mara de prueba contiene una fase s lida de poliestireno en la que se encuentran integradas diminutas lentes as como un control negativo blanco y un control positivo para el procedimiento El ensayo OPTIGEN se puede efectuar de manera manual o con el procesador semiautom tico AP 720S M El ensayo OPTIGEN se realiza llenando una c mara de prueba con suero del paciente tras un paso de prelavado Durante la incubaci n del suero la IgE presente en l se une a los pocillos
9. biente antes de su uso e Invierta con suavidad el frasco de reactivo con anticuerpo antes de su uso e El reactivo con anticuerpo puede usarse hasta la fecha de caducidad siempre que se conserve refrigerado 2 8 C cuando no est siendo utilizado e Un frasco de reactivo con anticuerpo es suficiente para veinte 20 c maras de prueba OPTIGEN Mezcla fotorreactiva Prepare la mezcla fotorreactiva inmediatamente antes de su uso e Permita que los agentes fotorreactivos AB y CD alcancen la temperatura ambiente antes de su uso e Utilice una micropipeta con punta desechable para combinar partes iguales de los agentes fotorreactivos AB y CD Para cada c mara de prueba extraiga 250 ul de cada frasco de agentes fotorreactivo AB y CD Disp nselos en un recipiente desechable NOTA para evitar la contaminaci n de los reactivos use una punta desechable nueva en la pipeta para cada agente fotorreactivo e Para mezclar efect e una rotaci n suave del recipiente e La mezcla de fotorreactivo debe usarse en el plazo de 60 minutos despu s de la mezcla NOTA para obtener resultados ptimos la mezcla fotorreactiva debe utilizarse inmediatamente despu s de su preparaci n Instrucciones para la conservaci n e Conserve los componentes del kit a 2 8 C Si se conservan como se indica los componentes pueden utilizarse hasta las fechas de caducidad impresas en las etiquetas de cada componente e No congele los componentes del kit
10. e El embalaje de las c maras de prueba contiene un absorbente de humedad y debe cerrarse adecuadamente despu s de cada uso Si se conservan en las bolsas bien cerradas a 2 8 C las c maras de prueba permanecer n estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas o cajas del kit e No use componentes del kit que presenten signos de deterioro Los signos de deterioro comprenden olores fuera de lo normal aspecto turbio y otras indicaciones de contaminaci n ES Obtenci n y preparaci n de muestras Manipule todas las muestras del paciente y los componentes usados del kit seg n las recomendaciones para el manejo de cualquier muestra de suero o sangre humanos potencialmente infecciosos Cumpla con las precauciones universales o con las normativas de su centro para la manipulaci n de muestras de pacientes En el m todo manual el volumen m nimo de suero humano que se requiere por cada c mara de prueba es C mara de prueba gt 20 alergenos 500 pl C mara de prueba lt 20 alergenos 300 pl En el m todo semiatom tico usando el AP 7208 el volumen m nimo de suero humano que se requiere por cada c mara de prueba es C mara de prueba gt 20 alergenos 600 pl C mara de prueba lt 20 alergenos 490 pl Debe seguirse el siguiente protocolo para la obtenci n preparaci n y conservaci n de suero para uso en la prueba OPTIGEN para evaluaci n de alergias 1 Recoja una muestra de sangre venosa en un tubo de sepa
11. el tap n negro correspondiente a la parte superior de la c mara 3 Examine las c maras de prueba taponadas para descartar la presencia de p rdidas de l quido 4 Elimine todo resto de mezcla fotorreactiva de la parte externa de las c maras de prueba utilizando un pa o limpio h medo que no suelte pelusa Permita que las c maras reposen durante 10 minutos 1 Deje incubando todas las c maras de prueba durante 10 minutos antes de proceder a la lectura en el lumin metro La lectura de todas las c maras de prueba se debe realizar durante los 60 minutos posteriores a la introducci n del agente fotorreactivo 2 Para obtener m s informaci n consulte la secci n Lectura de los resultados de la prueba acerca de la utilizaci n del lumin metro Lectura de los resultados con el lumin metro CLA 1 NOTA no abra bajo ninguna circunstancia la carcasa del lumin metro CLA 1 Si lo hace la garant a del dispositivo quedar ANULADA impedir el funcionamiento del lumin metro CLA 1 que necesitar la realizaci n de ajustes en f brica y expondr al usuario a lesiones personales graves 1 Coloque la c mara de prueba en la bandeja del chasis de alojamiento de las c maras de prueba a Coloque la c mara de prueba en el chasis de alojamiento de las c maras de prueba en el orden indicado en la hoja de programaci n del OPTIGEN b Deslice la c mara de prueba con el tap n negro al frente y las ventanas orientadas hacia
12. ento del Intraensayo se procesaron diez replicados de suero en una sola serie El promedio del coeficiente de variaci n medio de las respuestas se calcul por clase Clase CV 1 31 2 16 3 16 4 5 Entre ensayos se procesaron diez replicados de una muestra de suero en cinco d as distintos El promedio del coeficiente de variaci n de las respuestas se calcul por clase Clase CV 1 25 2 15 3 9 4 1 B L mite de detecci n El l mite de detecci n del ensayo se sit a entre 12 y 26 UL y est vinculado a los al rgenos C Especificidad anal tica No se detect reacci n cruzada con las inmunoglobulinas s ricas humanas IgA IgM IgG o IgD cuando las concentraciones eran las fisiol gicas y normales D Comparaci n de m todos in vitro para la alergia Como promedio la concordancia calculada como eficiencia entre cada prueba in vitro para alergenos CLA y las pruebas in vitro alternativas es de aproximadamente 90 el intervalo de concordancia oscila entre el 83 y el 98 Nota no existen alergenos de referencia estandarizados para la comparaci n entre m todos ni para la gran mayor a de los alergenos cl nicamente importantes Bibliograf a 1 Safety Management No CDC 22 Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts Atlanta GA Centers for Disease Control April 30 1976 2 U S Dept of Health and Human Services Centers f
13. erpos de cabra contra IgE humana marcados con enzima suero salino tamponado con fosfato 0 01 M pH 7 2 estabilizadores de prote nas Proclin al 0 1 como agente conservante Agente fotorreactivo AB Un frasco de 8 ml Soluci n que contiene Luminol 3 aminoftalhidrazida 7 15 mM potenciador 5 25 uM y tamp n borato 0 025 M pH 9 4 Agente fotorreactivo CD Soluci n que contiene Etil naranja 0 00125 M per xido de hidr geno 0 002 M Un frasco de 8 ml Tapones de goma para las c maras de prueba parte superior Tapones negros para la parte superior de las c maras de prueba 22 tapones Tapones de goma para las c maras de prueba base Tapones blancos para la base de las c maras de prueba 22 tapones Precauciones e El ensayo OPTIGEN es para diagn stico in vitro e El concentrado de soluci n de lavado tamponada contiene azida s dica como agente conservante Se ha informado que la azida s dica reacciona con el plomo o el cobre de las ca er as y forma azidas met licas potencialmente explosivas Por lo tanto tome las precauciones adecuadas cuando deseche este reactivo y siempre haga correr suficiente cantidad de agua para prevenir la acumulaci n de azidas met licas en los sistemas de ca er as e No use los componentes del kit despu s de la fecha de caducidad La fecha de caducidad est impresa en cada uno de los componentes e Los reactivos provistos en los kits del ensayo OPTIGEN pertenecen
14. lergenos existentes en las c maras de prueba El lumin metro mide la emisi n de luz en unidades de luminiscencia UL Para calcular la respuesta de IgE del paciente el instrumento resta autom ticamente el nivel de emisi n de luz del control negativo del nivel de emisi n de cada alergeno Los valores CLA se clasifican de O a 4 seg n la cantidad de luz emitida por cada uno de los alergenos presentes en la c mara de prueba A partir de estos valores se obtiene el sistema de puntuaci n de alergia en clases CLA del ensayo OPTIGEN para determinaci n de IgE alergeno espec fica La correspondencia entre las cantidades de IgE los valores de la clasificaci n CLA y las lecturas del instrumento se muestran en la tabla siguiente Niveles de anticuerpos detectados Clase CLA UL netas Concentraci n de IgE alergeno espec fica 4 gt 242 Niveles muy altos de anticuerpos 3 143 242 Niveles altos de anticuerpos 2 66 142 Niveles moderados de anticuerpos 1 27 65 Niveles bajos de anticuerpos 0 0 26 No se detectan anticuerpos Los valores de 1 o superiores en la clasificaci n CLA indican concentraciones progresivamente crecientes de anticuerpos contra alergenos espec ficos La clase CLA O indica ausencia o niveles no detectables de anticuerpos contra alergenos espec ficos Limitaciones de la prueba Los resultados medidos podr an variar 1 clase Los resultados positivos de niveles bajos se deben inter
15. ntes de realizar el ensayo las muestras de suero deben centrifugarse de nuevo durante 10 20 minutos a 2 000 3 000 x g o 2 500 3 600 rpm E Procedimiento del ensayo Consulte la Gu a del usuario de OPTIGEN ref 60501 y el Manual del usuario del lumin metro CLA 1 Doc n 0277 para obtener instrucciones detalladas sobre c mo efectuar la prueba Si utiliza el aparato semiautom tico AP 720S consulte el Manual de instrucciones Doc n 0780 y la Gu a del panel LCD del AP 720S Doc n 0781 Materiales provistos e Ensayo OPTIGEN consulte la secci n 4 Reactivos componentes Materiales necesarios pero no suministrados e Equipo para la prueba OPTIGEN que comprende Soporte para c maras de prueba capaz de contener hasta 40 c maras de prueba Recipiente para drenaje de muestras E Frasco dosificador graduado de soluci n de lavado tamponada de 2 litros Recipientes desechables de 10 ml Jeringa de 3 ml con dispositivo luer lock Pipeta de volumen fijo electr nica o manual opcional Probeta graduada o matraz aforado de 1 litro para preparar la soluci n de lavado tamponada e Agua desionizada o destilada e Tubos para separaci n de suero o con tap n rojo de 10 5 ml para la recogida de muestras e Centr fuga capaz de alcanzar 2 000 3 000 x g 2 500 3 600 rpm Tubos de pl stico para almacenamiento limpios para la preparaci n de muestras Toallas de papel absorbente Pa os limpios que no suelten
16. or Disease Control Guidelines For Prevention of Transmission of Human Immunodeficiency Virus and Hepatitis B Virus to Health Care and Public Safety Workers February 1989 3 Richardson SH Barkley WE eds Biosafety in microbiological and biomedical laboratories 2nd ed Washington DC US Dept of Health and Human Services 1988 4 Federal OSHA Standard 1910 1030 Bloodborne pathogens 29 CFR 1910 1030 5 Data available upon request Para asistencia t cnica p ngase en contacto con Hitachi Chemical Diagnostics Fuera de los Estados Unidos p ngase en contacto con el representante local de Hitachi Chemical Diagnostics Hitachi Chemical Diagnostics Inc Hitachi Europe Ltd Hitachi Chemical Diagnostics Inc 630 Clyde Court Whitebrook Park Lower Cookham Road Mountain View California 94043 Tel 650 961 5501 Maidenhead Berkshire SL6 8YA Reino Unido Tel 44 0 1628 585 590 Fa650 969 2745 Fax 44 0 1628 585 594 2010 Hitachi Chemical Diagnostics Inc OPTIGEN es una marca registrada de Hitachi Chemical Diagnostics Inc Fabricado bajo uno o m s de los siguientes n meros de patente de Estados Unidos 3 941 876 4 031 197 4 459 360 y patentes correspondientes extendidas en Canad Australia Jap n Espa a Francia Alemania Italia Suecia y Gran Breta a 4 510 393 4 558 013 5 567 149 y patentes correspondientes extendidas en Canad Australia Jap n Espa a Francia Alemania Italia Suecia Suiza Au
17. or el reactivo con anticuerpo Esto reducir la formaci n de burbujas de aire que podr an alterar los resultados de la prueba H Tapone e incube las c maras de prueba il Inserte el tap n blanco en la base de la c mara de prueba sin desconectar la jeringa de la parte superior de la c mara de prueba Retire la jeringa e inserte el tap n negro correspondiente a la parte superior de la c mara Coloque las c maras de prueba llenas de reactivo en posici n vertical en el soporte para c maras de prueba Incube a temperatura ambiente durante 2 horas 10 minutos y anote la hora de comienzo de la incubaci n en la hoja de programaci n NOTA conserve los kits a 2 8 C mientras no se est n utilizando I Deseche el reactivo con anticuerpo 1 3 Retire el tap n inferior de la base de cada c mara de prueba y coloque cada c mara de prueba nuevamente en el soporte para c maras de prueba Retire el tap n superior de cada c mara de prueba y deje que el l quido se escurra y caiga dentro del recipiente para el drenaje de muestras Anote la hora de finalizaci n de la incubaci n en la hoja de programaci n Seque los tapones y gu rdelos para utilizarlos en pasos posteriores J Lave las c maras de prueba de Purgue el dosificador en el fregadero o en el recipiente de drenaje hasta que desaparezcan todas las burbujas de aire Acople el extremo de la llave de paso a la parte superior de la primera c mara de pr
18. pretar a la luz de los signos cl nicos El suero hemolizado o lip mico puede afectar negativamente al rendimiento del ensayo OPTIGEN El diagn stico cl nico definitivo y los reg menes de administraci n de inmunoterapia no deben basarse nicamente en los resultados de ninguna prueba diagn stica aislada sino que deben ser formulados por el m dico despu s de la valoraci n de todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio El ensayo OPTIGEN proporciona resultados semicuantitativos El m todo no tiene un est ndar absoluto y sus niveles se clasificaci n se definieron arbitrariamente Puesto que la capacidad de uni n del anticuerpo de clase IgE espec fico puede variar de alergeno a alergeno el hecho de que alergenos diferentes sean clasificados de manera similar no implica necesariamente una equivalencia cl nica En las pruebas de alergia a alimentos podr a no ser posible detectar los anticuerpos de clase IgE circulantes si estos est n dirigidos contra formas alteradas de los alergenos p ej cocinados procesados o digeridos y estas formas alteradas poseen caracter sticas diferentes a las de los alergenos alimentarios utilizados en la prueba Los resultados falsos positivos en pruebas efectuadas en personas con alergia a alimentos pueden llevar a restricciones inapropiadas en la dieta mientras que los resultados falsos negativos en personas con sensibilidad a los alimentos pueden dar lugar a reacciones anafil cticas de distin
19. raci n de suero o un tubo con tap n rojo de 5 ml No es necesario que el paciente est en ayunas No se requiere ning n preparativo en especial NOTA los tubos separadores de suero SST serum separator tubes contienen un material inerte que separa el suero de las c lulas cuando se someten a centrifugaci n La presencia de hem lisis puede afectar negativamente al rendimiento del ensayo OPTIGEN para evaluaci n de alergias 2 Invierta suavemente el tubo de recogida del suero 3 5 veces 3 Etiquete el tubo que contiene la muestra con el nombre del paciente y la fecha de extracci n 4 Permita que la sangre se coagule en el recipiente original tapado durante un m ximo de 2 horas a temperatura ambiente o hasta que tenga lugar la coagulaci n 5 Centrifugue la sangre coagulada durante 10 a 20 minutos a 2 000 3 000 x g o 2 500 3 600 rpm en el recipiente original tapado 6 Transfiera el suero del tubo utilizado para la centrifugaci n a un tubo de pl stico para almacenamiento limpio y adecuadamente etiquetado 7 Las muestras de suero pueden conservarse a 2 8 C durante un m ximo de una semana Para conservarlas durante per odos m s prolongados congele las muestras a 20 C NOTA debe evitarse congelar y descongelar repetidamente las muestras de suero Despu s de descongelar una muestra congelada debe mezclarse muy bien la muestra antes de su centrifugaci n Una vez retiradas del lugar de conservaci n e inmediatamente a
20. recubiertos de alergeno Tras un periodo de incubaci n la c mara de prueba se lava con soluci n tamponada para eliminar aquellos componentes del suero que no se hayan unido A continuaci n se agrega a la c mara de prueba un anticuerpo contra IgE marcado con enzima el cual se une a la IgE previamente unida a los pocillos Tras un segundo lavado la c mara de prueba se llena con una mezcla fotorreactiva que cuando se combina con el anticuerpo contra IgE marcado con enzima emite una luz generada por un proceso qu mico es decir quimioluminiscencia La cantidad de luz emitida por cada pocillo es directamente proporcional a la cantidad de IgE espec fica para el alergeno presente en el suero del paciente El Reactivos componentes Ensayo OPTIGEN Conserve a una temperatura de 2 a 8 C hasta la fecha de caducidad No congelar Descripci n de los componentes Cada kit para 20 pruebas contiene 20 c maras de prueba C maras de prueba La c mara de prueba contiene una fase s lida de poliestireno y lentes de peque o tama o integradas en cada una de la cuales hay un alergeno o una mezcla de alergenos Concentrado de soluci n de lavado tamponada Soluci n que cuando se diluye contiene suero salino tamponado con fosfato 0 01 M Tween 20 al 0 1 y azida s dica al 0 001 como agente conservante Un frasco de 50 ml Reactivo con anticuerpo Un frasco de 16 ml Soluci n que contiene Soluci n de color azul con anticu
21. stria B lgica Pa ses Bajos Luxemburgo y Gran Breta a 4 568 184 285 485 4 743 541 y patentes correspondientes extendidas en Canad Australia Jap n Francia Alemania Suecia Suiza y Gran Breta a y 5 082 768 y patentes correspondientes extendidas en Jap n
22. to grado de gravedad En las pruebas de alergia a alergenos inhalados los resultados falsos positivos pueden conducir a la prescripci n de medicaci n inadecuada para esas personas Los resultados falsos negativos pueden llevar a omitir un tratamiento m dico adecuado Una respuesta de IgE alergeno espec fica de nivel bajo debe interpretarse con cuidado si los valores totales de IgE son superiores o iguales a 2500 Ul ml La obtenci n de resultados fiables y reproducibles requiere que los procedimientos de la prueba se efect en cumpliendo estrictamente las instrucciones de uso del producto y buenos procedimientos de control de calidad Se ha observado que la contaminaci n con hipoclorito de sodio puede alterar la prueba El material de laboratorio que haya sido descontaminado con hipoclorito de sodio debe ser aclarado profusamente con agua destilada o desionizada NOTA el uso de soluciones que contengan alcohol para la desinfecci n del soporte para c maras de prueba llevar a la formaci n de grietas en el pl stico del soporte y a fallos prematuros en su funcionamiento Valores esperados Caracter sticas A Se recomienda que cada laboratorio determine su propio rango de valores esperados para la poblaci n de inter s El umbral de corte entre resultados positivos y negativos se ha determinado como tres desviaciones est ndar sobre el valor medio de la poblaci n normal de procedimiento est ndar Precisi n rendimi
23. todas las c maras de prueba cargadas en el chasis de alojamiento 4 Lea e imprima los resultados a Una vez programadas las cinco posiciones del chasis de alojamiento de c maras de prueba la pantalla del lumin metro CLA 1 mostrar la LISTA DE CARGA correspondiente Si esta lista corresponde correctamente a las c maras de prueba cargadas en el chasis de alojamiento apriete el bot n ENTER para comenzar el an lisis b El lumin metro CLA 1 imprimir los resultados del an lisis al cabo de aproximadamente un minuto c Anote el nombre del paciente en la hoja impresa con los resultados y adjunte los resultados al informe de an lisis del lumin metro CLA 1 Control de calidad A Pocillos de control interno Cada c mara de prueba contiene un control positivo para el procedimiento y un control negativo blanco Estos controles sirven como indicadores internos en cada c mara de prueba Control positivo para el procedimiento el control positivo para el procedimiento comprueba el rendimiento de los reactivos del kit Los controles positivos para el procedimiento deben producir lecturas no inferiores a 243 UL en el lumin metro CLA 1 Control negativo blanco el control negativo blanco compensa cualquier uni n no espec fica de IgE que se pueda producir El control negativo blanco debe dar lugar a una lectura igual o inferior a 69 UL en el lumin metro CLA 1 Resultados inaceptables de los controles
24. ueba Lave cada c mara de prueba una sola vez con 10 ml de soluci n de lavado tamponada apretando una vez con fuerza moderada la bomba del dosificador NOTA espere a que todo el l quido se haya escurrido de cada una de las c maras de prueba antes de continuar con el paso siguiente K Prepare la mezcla fotorreactiva 1 Prepare la mezcla fotorreactiva tal como se indica en la secci n 6 Preparaci n de los reactivos NOTA permita que los fotorreactivos alcancen la temperatura ambiente antes de su uso NOTA para obtener resultados ptimos utilice la mezcla fotorreactiva inmediatamente despu s de su preparaci n L Llene las c maras de prueba con la mezcla fotorreactiva 1 Golpee suavemente la base de la c mara de prueba sobre una toalla de papel absorbente para eliminar los restos del tamp n de lavado Acople una jeringa a la parte superior de la c mara de prueba Coloque la base de la c mara de prueba en el recipiente que contiene la mezcla fotorreactiva Aspire LENTAMENTE con el mbolo de la jeringa de forma que introduzca la mezcla fotorreactiva en la c mara de prueba hasta llenarla completamente NOTA compruebe que la ventana superior completamente cubierta con la mezcla fotorreactiva quede M Tapone las c maras de prueba 1 Inserte el tap n blanco en la base de la c mara de prueba sin desconectar la jeringa de la parte superior de la c mara de prueba 2 Retire la jeringa e inserte
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