Monoclonal Mouse
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1. Uso previsto Sin nimos del ant geno Ingreso de datos y explicaci n Reactivo suministrado Inmun geno Especificidad Precauciones 115549 001 C FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clon T311 Ready to Use Link N de cat logo IR061 Para uso en diagn stico in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human E Cadherin Clon T311 Ready to Use Link est indicado para su uso en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Autostainer Link Este anticuerpo resulta til para la identificaci n de lesiones melanoc ticas y melanoma La interpretaci n cl nica de los resultados de cualquier tinci n o su ausencia debe complementarse con estudios morfol gicos con controles adecuados y debe evaluarla un pat logo calificado dentro del contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas 1311 EC 1 14 18 1 La tirosinasa es una glucoenzima de cobre implicada en la producci n de los pigmentos de la melanina incluida la eumelanina y la feomelanina 1 3 En este proceso la tirosinasa cataliza la hidroxilaci n de la L tirosina a la L dopa y la oxidaci n de la L dopa a la L dopaquinona 1 3 Como marcador del linaje melanoc tico la tirosinasa se localiza en los melanocitos que se pueden encontrar en la zona de uni n d rmica epid rmica de la piel normal pero no se detecta en otras c lulas normales 2 Tambi n contienen melanocitos las partes pigmentadas del ojo como2. Adamina M Bolli M Guller U Noppen C Padovan E Schultz Thater E Heberer M Spagnoli G Phase I II clinical trial of a nonreplicative vaccinia virus expressing multiple HLA A0201 restricted tumor associated epitopes and costimulatory molecules in metastatic melanoma patients Hum Gene Ther 2003 14 16 1497 1510 s Limite de temperatura Fabricante Fecha de caducidad BA PT0020 Rev C Edici n 09 07 115549 001 Dako North America Inc Dako Denmark A S e 6392 Via Real Produktionsvej 42 C digo de lote Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Consulte las instrucciones de uso Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 www dako com 307137ES_001 pag 3 3
3. la coroides y el iris La expresi n de la tirosinasa se encuentra tambi n en las lesiones melanoc ticas incluidos los nevos benignos y la mayor parte de los melanomas malignos primarios y metast sicos pero no en los tumores no melanoc ticos 2 4 5 Adem s las c lulas T citot xicas aut logas de los pacientes con melanoma pueden reconocer la tirosinasa y por lo tanto los p ptidos de la tirosinasa son tiles en las vacunas para los melanomas 6 7 Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHQ para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Interpretaci n de la tinci n y 9 Limitaciones generales Se suministra anticuerpo de rat n monoclonal listo para su uso en forma l quida en un tamp n que contiene prote na estabilizadora y 0 015 mol L de NaNs Clon T311 Isotipo IgG2 kappa Proteina de tirosinasa no glicosilada purificada recombinante compuesta por 452 aminoacidos de la proteina de la tirosinasa humana madura de 511 aminoacidos 1 La inmunotransferencia se realiz con c lulas L transfectadas con gen de tirosinasa y en cuatro l neas de c lulas que expresan el ARNm de la tirosinasa SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 y SK MEL 37 1 Compati
4. sistema de visualizaci n recomendado es EnVision FLEX High pH Link n de cat logo K8000 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han sido preprogramados en el software del Autostainer Link Consulte la Gu a del usuario del Autostainer Link para ver las instrucciones detalladas sobre la carga de portaobjetos y reactivos Si no hay protocolos disponibles sobre la plataforma de Autostainer utilizado p ngase en contacto con los Servicios T cnicos de Dako Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Las condiciones ptimas pueden variar de acuerdo con la muestra y del m todo de preparaci n y deber n determinarse individualmente en cada laboratorio Si el pat logo encargado de la evaluaci n desea otra intensidad de tinci n se puede solicitar informaci n a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio t cnico para reprogramar el protocolo Verifique que el resultado del protocolo ajustado siga siendo v lido confirmando que el patr n de tinci n sea id ntico al descrito en Caracter sticas de resultados Se recomienda la contratinci n en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin Link n de cat logo K8008 Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente Los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente El control positivo de tejido debe incluir melanocit
5. 10x Link n de cat logo K8000 K8004 Cortes desparafinados Se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados fijados en formol e incluidos en parafina usando Dako PT Link n de cat logo PT100 PT101 Para m s detalles consulte la Gu a del usuario del PT Link Siga el procedimiento de pretratamiento explicado en el prospecto de EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Link n de cat logo K8000 K8004 Se deben aplicar los siguientes par metros para el PT Link Temperatura de precalentamiento 65 C temperatura y tiempo de recuperaci n del ep topo 97 C para 20 1 minutos enfriar a 65 C Enjuagar las secciones con EnVision FLEX Wash Buffer 10x Link n de cat logo K8000 diluido a temperatura ambiente Cortes incluidos en parafina Como m todo alternativo de preparaci n de una muestra tanto el desparafinado como la recuperaci n del ep topo se pueden realizar en el PT Link con un procedimiento modificado Ver instrucciones en la Gu a del usuario de PT Link Despu s de finalizado el procedimiento de tinci n se deben deshidratar enjuagar y montar los cortes usando un medio de montaje permanente Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda el uso de Dako Silanized Slides n de cat logo S3003 El
6. ble con informes anteriores el clon T311 reconoci un grupo de prote nas con un peso de 70 80 kDa en inmunotransferencias de las cinco l neas de c lulas 1 Se ti una banda adicional de 55 kDa en transferencias de l neas celulares muy reactivas SK MEL 19 1 Adem s las inmunotransferencias de c lulas L no transfectadas y tres l neas de c lulas que no expresan el ARNm de la tirosinasa MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 y MZ2 MEL2 2 fueron negativas con el clon T311 1 Las c lulas L transfectadas con la prote na 1 relacionada con la tirosinasa TRP 1 gp75 tampoco fueron reactivas con el clon T311 en ensayos de inmunofluorescencia e inmunotransferencia lo cual indica que el anticuerpo no tiene reactividad cruzada con la prote na asociada a los melanosomas TRP 1 gp75 1 1 Para usuarios profesionales 2 Este producto contiene azida de sodio NaNz un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura Aunque a las concentraciones presentes en el producto no est clasificada como peligrosa la azida de sodio puede reaccionar con ca er as de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 3 Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados 4 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar
7. el contacto con los ojos y la piel 5 La soluci n que no se utilice deber desecharse de acuerdo con las normativas locales provinciales y nacionales 307137ES_001 p g 1 3 Almacenamiento Preparacion de las muestras incluido material necesario pero no suministrado Procedimiento de tincion incluido material necesario pero no suministrado Interpretacion de la tinci n Caracter sticas de resultados 115549 001 Almacenar a 2 8 C No utilizar despu s de la fecha de caducidad impresa en el vial Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas el usuario debe comprobar dichas condiciones No existen signos evidentes que indiquen inestabilidad de este producto Por lo tanto los controles positivo y negativo deber n analizarse de manera simult nea con las muestras del paciente En caso de observarse una coloraci n inesperada que no puede ser explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospeche la existencia de un problema con un anticuerpo comun quese con la Asistencia T cnica de Dako El anticuerpo se puede utilizar para marcar secciones de tejido fijadas con formol e incluidas en parafina Las muestras de tejido deben cortarse en cortes de aproximadamente 4 um Se requiere el pretratamiento con recuperaci n del epitopo inducida por calor HIER Se consiguen resultados ptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH
8. ment Proc Natl Acad Sci USA 1995 92 18 8125 8129 Jungbluth AA Iversen K Coplan K Kolb D Stockert E Chen YT Old LJ Busam K T311 an anti tyrosinase monoclonal antibody for the detection of melanocytic lesions in paraffin embedded tissues Pathol Res Pract 2000 196 4 235 242 Garcia Borron JC Solano F Molecular anatomy of tyrosinase and its related proteins beyond the histidine bound metal catalytic center Pigment Cell Res 2002 15 3 162 173 Clarkson KS Sturdgess IC Molyneux AJ The usefulness of tyrosinase in the immunohistochemical assessment of melanocytic lesions a comparison of the novel T311 antibody anti tyrosinase with S 100 HMB45 and A103 anti melan A J Clin Pathol 2001 54 3 196 200 Hofbauer GF Kamarashev J Geertsen R Boni R Dummer R Tyrosinase immunoreactivity in formalin fixed paraffin embedded primary and metastatic melanoma frequency and distribution J Cutan Pathol 1998 25 4 204 209 Slingluff CL Jr Petroni GR Yamshchikov GV Barnd DL Eastham S Galavotti H Patterson JW Deacon DH Hibbitts S Teates D Neese PY Grosh WW Chianese Bullock KA Woodson EM Wiernasz CJ Merrill P Gibson J Ross M Engelhard VH Clinical and immunologic results of a randomized phase II trial of vaccination using four melanoma peptides either administered in granulocyte macrophage colony stimulating factor in adjuvant or pulsed on dendritic cells J Clin Oncol 2003 21 21 4016 4026 Zajac P Oertli D Marti W
9. os de la capa basal y las c lulas estructuras deben exhibir patrones de reacci n como se describe para este tejido en Caracter sticas de resultados en todas las muestras positivas El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control Mouse Link n de cat logo IR750 El patr n de tinci n celular es citoplasm tico y o perinuclear Tejidos normales Se analiz un panel de 33 tejidos normales con anti Tyrosinase clon T311 mediante inmunohistoqu mica y s lo fue positiva la piel 2 En la piel normal los melanocitos fueron inmunorreactivos mientras que los queratinocitos basales de la piel fueron negativos 1 2 Tejidos anormales Se analiz el clon T311 con lesiones melanoc ticas benignas y malignas y se encontr que ti e la mayor a de los nevos benignos y los melanomas analizados Se observ una baja inmunorreactividad de la tirosinasa en los melanomas de las c lulas desmopl sicas y fusiformes 1 2 4 5 Se ha demostrado la especificidad de la anti Tyrosinasa para las lesiones melanoc ticas mediante la inmunotinci n de m s de 70 tipos diferentes de tumores no melanoc ticos sin que se encontrase inmunorreacci n lo cual indica que la expresi n de la tirosinasa se limita a las c lulas de linaje melanoc tico 2 307137ES_001 p g 2 3 Referencias 1 bibliogr ficas Chen YT Stockert E Tsang S Coplan KA Old LJ Immunophenotyping of melanomas for tyrosinase implications for vaccine develop
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