Rosco Diagnostica - Medica-Tec
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1. 33 1060 1063 1995 9 Kloos W E Schleifer K H Simplified scheme for routine identification of human staphylococcus species J Clin Microbiol 1 82 88 1975 10 L mmler C Evaluation of the Staph Zym System for Identification of Staphylococcus hyicus and Staphylococcus intermedius J Vet Med B 36 180 184 1989 11 Leung M J et al Case of Staphylococcus schleiferi Endocarditis and a Simple Scheme To Identify Clumping Factor Positive Staphylococci J Clin Microbiol 37 3353 3356 1999 12 Refsahl K Andersen B M Coagulase negative staphylococci Identification and antibacterial resistance Nord Med 106 228 231 1991 Norwegian abstract in English 13 Renneberg J Rieneck K Gutschik E Evaluation of Staph ID 32 System and Staph Zym System for Identification of Coagulase Negative Staphylococci J Clin Microbiol 33 1150 1153 1995 14 Watts J L Washburn P J Evaluation of the Staph Zym System with Staphylococci Isolated from Bovine Intramammary Infections J Clin Microbiol 29 59 61 1991 3 4 Rosco DIAGNOSTICA Tabla de interpretaci n de Staph zym C digo marcado en el panel Componente del reactivo principios activos en cada comprimido Beta Glucosidase p Nitrofenil P D Glucopiran sido 0 3 mg Beta Galactosidase o Nitrofenil P D Galactopiran sido 0 4 mg Beta Glucuronidase cido p Nitrofenil D glucur nico 0 3 mg Trehalose D Trehalosa dihidrato 2 mg2. Maltose Maltosa monohidrato 3 mg Urease Urea 8 mg Arginine Dihydrolase L Arginina HCl 3 mg Nitrate Reduction Molibdato s dico 40 ug nitrato pot sico 4 mg Pyrrolidonyl Aminopeptidase L Pirrolidonil f naftilamida 0 2 mg Alkaline Phosphatase E Principio activo dosis C digo Valor Di metro de zona McFarland 0 5 S R Novobiocin 5 ug gt 14 mm lt 13 mm Polymyxins 150 ug Colistina Deferoxamine 250 ug mesilato de deferoxamina gt 14 mm lt 13 mm 9 mm ninguna zona gt 9 mm cualquier zona C digo en los comprimidos Reactivo a a adir antes de la incubaci n Aceite A ada tres gotas de aceite de parafina est ril al tubo y cierre el panel Reactivos a a adir tras la incubaci n CE Reactivo Reacci n positiva Reacci n negativa Amarillo Incoloro Amarillo Incoloro Amarillo Incoloro Amarillo naranja amarillento Amarillo naranja amarillento Rojo rojo anaranjado Rojo rojo anaranjado Rojo violeta Amarillo naranja Rojo violeta Amarillo naranja Incoloro rosa claro Rojo rosa Amarillo verde Rojo Incoloro amarillo claro Di metro de zona Zonas de CC Semiconfluente S R McFarland McFarland gt 16 mm lt 15 mm gt 16 mm lt 15 mm 9 mm ninguna zona gt 9 mm cualquier zona I A ada 1 gota de N N dimetil o naftilamina y 1 gota de soluci n sulfan lica Efect
3. e la lectura en un plazo de 2 minutos Il A ada 3 gotas del Aminopeptidase reagent Rosco n 92231 y lea la reacci n de color en un plazo de 5 minutos Comentarios a En el caso de muchas cepas sensibles a la Deferoxamine existe un desarrollo de peque as colonias dentro de la zona Se debe medir la zona hasta las colonias de tama o normal sin tener en cuenta las menores 4 4
4. ug NOVO 5 Polymyxins y Deferoxamine Los resultados que expresan resistencia quedan registrados como negativos 0 mientras que aquellos que expresan sensibilidad aparecen como positivos con la siguiente puntuaci n 1 para NOVO 5 2 para Polymyxins y 4 para Deferoxamine Este n mero de cinco cifras constituye el denominado perfil num rico del microorganismo desconocido e Registre y calcule el perfil num rico del microorganismo desconocido utilizando la Ficha de registro de Staph zym FICHA DE REGISTRO DE STAPH ZYM Prueba Valores de los positivos Resultados SUMA de positivos NOVO 5 POLYMYXINS DEFEROXAMINE Sensible 1 2 4 C digo num rico 3631 7 Resistente 0 0 0 Identificaci n SUMA I S 2 S 4 S Compare el perfil num rico resultante con los perfiles facilitados en el ndice Staph zym incluido en la caja C digo num rico Perfil num rico 36317 Identificaci n Staphylococcus epidermidis 2 4 Rosco DIAGNOSTICA CE Resultados inesperados o no concluyentes Se recomienda repetir el ensayo as como efectuar una prueba con cepas de CC En algunos casos puede ser til recurrir a pruebas suplementarias o a una nueva muestra Como alternativa se puede enviar la cepa a un laboratorio de referencia para una identificaci n complementaria CONTROL INTERNO DE CALIDAD Para supervisar los resultados de Roscozym se deber aplicar un proce
5. Incube a 35 37 C durante la noche 18 24 horas p ej utilizando una bandeja para kits 1 2 3 Lectura Se efect a la interpretaci n de las reacciones positiva negativa por comparaci n del color con la Ficha de registro de Staph zym incluida en la caja e Abrir la mitad de la tapa flexible Vierta tres gotas del Aminopeptidase reagent al n 9 PYR debe esperar cinco minutos antes de efectuar la lectura as como una gota de la soluci n de N N dimetil o naftilamina y una gota de la soluci n de cido sulfan lico al n 8 NO3 por ltimo cierre el panel Lea todas las reacciones 1 10 e Eltubo ALK P N 10 deber tener color amarillo intenso para considerar que el resultado es positivo e La interpretaci n de las reacciones positivo negativo est descrita con mayor detalle en la correspondiente tabla II Resultados e Las 10 pruebas est n agrupadas de tres grupos de tres pruebas y 1 grupo de 1 prueba Los resultados negativos quedan registrados como 0 los positivos quedan como 1 en la primera prueba de cada grupo f GLU TRE ADH y ALK P como 2 en la segunda ONPG MAL y NO3 y como 4 en la tercera PGUA URE y PYR v ase la tabla de interpretaci n e Sumando los valores obtenidos en las pruebas tres o una de cada uno de los cuatro grupos se obtiene un n mero de cuatro cifras e Se a ade una quinta cifra que corresponde al resultado de sensibilidad o resistencia a Novobiocin 5
6. Rosco DIAGNOSTICA CE Instrucciones para uso de Staph zym Revisi n DBV0014G Fecha de publicaci n 20 04 2007 Idioma Espa ol Staph zym Kit para identificaci n de estafilococos Fabricante ROSCO Diagnostica A S Taastrupgaardsvej 30 DK 2630 Taastrup Dinamarca www rosco dk Uso previsto Identificaci n in vitro de las especies del g nero Staphylococcus Fundamento Staph zym es un sistema de identificaci n combinada enzim tico antimicrobiana para el g nero Staphylococcus e El kit Staph zym combina un total de 10 tests enzim ticos que utilizan unos comprimidos con sustratos convencionales modificados y cromog nicos contenidos en 11 minitubos contiguos dispuestos en un panel el tubo No 11 no contiene tableta pero puede ser utilizado para hacer un test suplementario Las enzimas preformadas contenidas en la suspensi n bacteriana permiten la reacci n de los sustratos contenidos en los comprimidos y despu s de una incubaci n durante toda una noche a 35 37 C se puede leer los resultados de las pruebas como reacciones de color ya sea por adici n de reactivos o sin ellos e Para la identificaci n de las especies del g nero Staphylococcus son tiles los patrones de sensibilidad natural Tras incubar durante toda la noche se examinan las placas y se mide el di metro de las zonas de inhibici n alrededor de los comprimidos para interpretarlo de acuerdo con la tabla de interpretaci n de zonas sensibles resistente
7. dimiento de control de calidad con cepas ATCC u otras cepas positivas o negativas conocidas Se deber realizar el control de calidad de acuerdo con procedimientos de control de calidad de laboratorio reconocidos M s abajo figuran los resultados positivos negativos correspondientes a cepas ATCC Un c digo num rico correcto para las respectivas cepas ATCC confirma la conformidad en las caracter sticas de todo el procedimiento Tabla de control de calidad de Staph zym Valores de positivo Cepa ATCC S aureus ATCC 25923 S epidermidis ATCC 12228 S haemolyticus ATCC 29970 Las cepas ATCC citadas en la tabla de interpretaci n de Staph zym deben ser utilizadas como cepas de control de calidad al efectuar las pruebas de sensibilidad Si se observa alg n resultado aberrante en el control de calidad se renunciar a notificar los resultados clinicos LIMITACIONES DEL M TODO e El m todo Staph zym deber ser empleado s lo para diferenciar los distintos estafilococos e Se deber utilizar cultivos de microorganismos que sean puros ya que una poblaci n microbiana mixta dar a lugar a resultados aberrantes e En unos pocos casos ser n necesarias otras pruebas adicionales para completar la identificaci n v ase el ndice de Staph zym e Eluso de Staph zym para la identificaci n de estafilococos y la interpretaci n de los resultados requiere la presencia de un t cnico experto en m todos microbiol gic
8. ndas pipetas y recipientes colectores 1 4 Rosco DIAGNOSTICA CE I Instrucciones para uso I 1 Instrucciones para uso en las pruebas de sensibilidad I 1 1 Preparaci n del in culo Suspenda en 4 5 ml de soluci n de NaCl al 0 9 varias colonias morfol gicamente similares obtenidas por cultivo no selectivo en una placa de agar durante 18 24 h hasta obtener una turbidez similar a la del patr n McFarland 0 5 Si se prefiere un crecimiento semiconfluyente diluya el patr n McFarland 0 5 en la proporci n 1 100 No utilice agar sangre con la Deferoxamine emplee en su lugar el agar de Mueller Hinton Efect e una prueba de sensibilidad normalizada I 2 Instrucciones para uso del panel I 2 1 Preparaci n del in culo e Escoja colonias bien aisladas y morfol gicamente id nticas de la placa primaria TSA sangre y prepare una suspensi n en 3 ml de suero fisiol gico NaCl al 0 9 hasta conseguir una turbidez que sea igual como menos a la del patr n n 2 de McFarland e Utilice solamente cultivos recientes 18 24 horas e Efect e un ensayo de pureza sembrando sobre una placa de agar no selectivo 1 2 2 Inoculaci n e incubaci n e Abra el panel y reparta la suspensi n bacteriana en al cuotas de 0 25 ml entre los 10 tubos e A ada tres gotas de aceite de parafina est ril al tubo n 7 ADH y cierre el panel presionando firmemente la tapa sobre todos los tubos las dos asas mirando hacia direciones opuestas e
9. os deber n ser manejados exclusivamente por t cnicos que dispongan de la formaci n adecuada Como precauci n frente a los riesgos microbiol gicos se deber esterilizar adecuadamente las muestras los recipientes los medios y los paneles despu s de su uso A la hora de eliminar los paneles y las placas de agar con posibles pat genos se los considera como residuos microbiol gicos Muestras Para distinguir los estafilococos de los micrococos resistentes estos a la furazolidona se utiliza Furazolidone 50 ug Neo Sensitabs Los an lisis posteriores tendr n lugar s lo con las cepas sensibles a la furazolidona estafilococos La toma de muestras y la manipulaci n de las mismas deben ser conformes con las directrices recomendadas La muestra debe ser un cultivo puro totalmente t pico de la especie cuya identificaci n deseamos Procedimiento Materiales suministrados 20 paneles de Staph zym 1 cartucho de Novobiocin 5 ug Neo Sensitabs 1 cartucho de Polymyxins 150 ug Neo Sensitabs y 1 vial de Deferoxamine 250 ug Diatabs Una Ficha de registro de Staph zym y un ndice de Staph zym Materiales necesarios pero no suministrados Medio de cultivo Aminopeptidase reagent Rosco n 92231 N N dimetil a naftilamina soluci n de cido sulfan lico Furazolidone 50 ug Rosco n 74412 microorganismos para control de calidad y equipo de laboratorio necesario para efectuar la identificaci n p ej asas para inoculaci n toru
10. os generales y que sepa manejar de forma razonable conocimientos experiencias informaci n sobre muestras as como otros procedimientos pertinentes antes de dictaminar la identidad del microorganismo aislado e Los resultados de ensayos adicionales pueden afectar al resultado de la identificaci n final BIBLIOGRAF A 1 Instrucciones de uso de Neo Sensitabs www rosco dk 2 Gu a del usuario de Neo Sensitabs www rosco dk 3 Gu a del usuario de Diatabs www rosco dk 4 Casals J B Pringler N Staph zym a rapid identification system for staphylococci Third European Congress of Clinical Microbiology The Hague May 1987 5 Casals J B Pringler N The Value of 3 Tests in the Identification of Staphylococci Pyrrolidonyl Aminopepetidase PYR and Susceptibility towards Polymyxins and Furazolidone Staphylococci Symposium Society for Applied Bacteriology Edinburgh Scotland July 1989 6 De Paulis A et al Five test simple scheme for species level identification of clinically significant coagulase negative staphylococi J Clin Microbiol 41 1219 1224 2003 7 Heltberg O Bruun B Polymyxin susceptibility in Staphylococci differentiating coagulase positive and coagulase negative strains Acta path microbiol immunol Scand sect B 91 157 161 1983 8 Ieven M Verhoeven J Pattyn S R Goossens H Rapid and Economical Method for Species Identification of Clinically Significant Coagulase Negative Staphylococci J Clin Microbiol
11. s de cada comprimido Para las pruebas de sensibilidad en agar de Mueller Hinton se utiliza Deferoxamine 250 ug Diatabs Novobiocin 5 ug y Polymyxins 150 ug Neo Sensitabs en ambos casos Instrucciones de conservaci n 1 En el momento de la recepci n almacene el envase externo en un frigor fico a 2 8 C 2 Es recomendable almacenar a temperatura ambiente los cartuchos con Novobiocin 5 ug y Polymyxins 150 ug as como el vial con Deferoxamine 250 ug una vez estrenados Si se encuentran a 2 8 C deje que alcancen la temperatura ambiente antes de abrirlos Y hora 1 hora La fecha de caducidad y los c digos REF y LOT est n marcados de forma individual en cada art culo La fecha de caducidad de los paneles cartuchos viales es v lida s lo en los paneles cartuchos viales con tapa y almacenados a la temperatura prescrita Reactivos El kit Staph zym comprende un panel Staph zym con diez diferentes comprimidos de 6 mm incluidos en minitubos destinados a la detecci n de actividad enzim tica adem s para las pruebas de sensibilidad en agar vienen tres comprimidos de 9 mm marcados con un c digo de cinco cifras Precauciones Respete las instrucciones de uso La eficacia del kit Staph zym depende de la adecuada elecci n del in culo y del tiempo de incubaci n as como de la correcta interpretaci n del color y del di metro de la zona despu s de la incubaci n Al manipular los comprimidos de 9 mm utilice pinzas Los product
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