(Link) Nº de catálogo IR752
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1. El anticuerpo CCH2 1 reacciona con una prote na nuclear temprana id ntica a la prote na no estructural de uni n al ADN p52 7 El anticuerpo DDG9 reacciona con una prote na nuclear temprana inmediata de unos 76 kDa 3 En el caso de ambos anticuerpos la reactividad persiste tambi n en las etapas m s avanzadas durante la infecci n por HCMV en la que la localizaci n es menos claramente nuclear y parece producirse en el citoplasma Sin embargo la microscop a l ser confocal muestra que la reacci n se limita a la membrana nuclear 3 Los anticuerpos no presentan reactividad cruzada con el adenovirus virus del herpes simple o virus de la varicela zoster 3 Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHQ para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Interpretaci n de la tinci n 9 Limitaciones generales Mezcla lista para usar de dos anticuerpos monoclonales de rat n suministrada en forma l quida como sobrenadante de cultivo celular dializada contra 0 05 mol L de Tris HCI 0 015 mol L de NaNa pH 7 2 Clones CCH2 DDGAI 3 Isotipo lgG1 kappa CCH2 y lgG2a kappa DDGo9 Lisados celulares brutos de fibroblastos embrionarios humanos infectados con la c2. 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Procedimiento de tinci n incluido material necesario pero no suministrado Interpretaci n de la tinci n Caracter sticas de resultados Referencias bibliogr ficas Explicaci n de los s mbolos Cortes incluidos en parafina se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido fijados en formol e incluidos en parafina siguiendo el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 para Dako PT Link Siga el procedimiento previo al tratamiento explicado en el prospecto de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8000 K8004 Nota Despu s de la tinci n se deben deshidratar enjuagar y montar los cortes usando un medio de montaje permanente Cortes desparafinados se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados fijados en formol e incluidos en parafina usando Dako PT Link y siguiendo el mismo procedimiento descrito para los cortes incluidos en parafina Tras la tinci n los portaobjetos deben montarse utilizando un medio de montaje acuoso o permanente Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda el uso de FLEX IHC Microscope Slides n de cat logo K8020 El sistema de visualizaci n recomendado es E
3. epa Ad169 del citomegalovirus 3 El anticuerpo CCH2 reacciona con una prote na nuclear temprana id ntica a la prote na no estructural de uni n al ADN p52 7 Este anticuerpo ha servido para tipar m s de 200 cepas de CMV humanas que por consiguiente parece reconocer un ep topo altamente conservado entre las cepas de HCMV 3 4 El anticuerpo DDG9 reacciona con una prote na nuclear temprana inmediata de unos 76 kDa 3 En el caso de ambos anticuerpos la reactividad persiste tambi n en las etapas m s avanzadas durante la infecci n por HCMV en la que la localizaci n es menos claramente nuclear y parece producirse en el citoplasma Sin embargo la microscop a l ser confocal muestra que la reacci n se limita a la membrana nuclear 3 Los anticuerpos no presentan reactividad cruzada con el adenovirus virus del herpes simple o virus de la varicela zoster 3 1 Para usuarios profesionales 2 Este producto contiene azida s dica NaN un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura Aunque a las concentraciones presentes en el producto no est clasificado como peligroso la azida de sodio puede reaccionar con ca er as de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado el producto deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 3 Al igual que con cualquier producto derivado de fuentes biol gicas deber n aplicar
4. nVision FLEX High pH Link n de cat logo K8000 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han sido preprogramados en el software del Autostainer Link El volumen de reactivo recomendado es de 1 x 200 uL o 2 x 150 uL por portaobjetos Consulte la Gu a del usuario del Autostainer Link para ver instrucciones detalladas sobre la carga de portaobjetos y reactivos Si todav a no est n disponibles los protocolos en la plataforma del Autostainer utilizada comun quese con el servicio t cnico de Dako Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Las condiciones ptimas pueden variar seg n la muestra y el m todo de preparaci n y deber n determinarse individualmente en cada laboratorio Si el pat logo encargado de la evaluaci n desea otra intensidad de tinci n se pueden ajustar los tiempos de incubaci n y la elecci n del sistema de visualizaci n EnVision FLEX EnVision FLEX Se puede solicitar informaci n a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio t cnico para reprogramar el protocolo Verifique que el rendimiento del protocolo ajustado siga siendo v lido confirmando que el patr n de tinci n sea id ntico al descrito en Caracter sticas de resultados Se recomienda la contratinci n en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin Link n de cat logo K8008 Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente Los controles positivo y negativo deber n
5. realizarse de manera simult nea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente El tejido de control positivo debe incluir tejidos infectados por HCMV y las c lulas y estructuras deben mostrar patrones de reacci n como se describe para este tejido en Caracter sticas de resultados en todas las muestras positivas El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control Mouse Link n de cat logo IR750 El patr n de tinci n celular es una reacci n intranuclear intensa Es posible observar tinci n citoplasm tica Las c lulas marcadas por el anticuerpo muestran un patr n de tinci n nuclear en las etapas tempranas de la infecci n por el HCMV En las fases m s avanzadas puede observarse un posible patr n de tinci n citopl smica 3 Tejidos normales una evaluaci n de tejidos humanos normales procedentes de donantes sin infecci n con HCMV mediante el anticuerpo CCH2 no mostr reacci n alguna con coraz n pulm n h gado ri n bazo ganglios linf ticos am gdala m dula sea m sculo esquel tico cerebro tiroides y gl ndulas paratiroides 1 Tejidos anormales en tejidos infectados con HCMV el anticuerpo CCH2 marc c lulas de pulm n h gado ri n ganglios linf ticos cerebro tiroides y gl ndulas paratiroides 1 Los anticuerpos CCH2 y DDG9 utilizados juntos marcaron tejidos infectados con HCMV del es fago est mago intestino delgado colon ves cula biliar pulm n gl nd
6. se procedimientos adecuados de manejo 4 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 5 La soluci n no utilizada debe desecharse con arreglo a las normativas locales provinciales y nacionales Almacenar a 2 8 No utilizar despu s de la fecha de caducidad impresa en el vial Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas el usuario debe comprobarlas No existen signos evidentes que indiquen inestabilidad de este producto Por lo tanto los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea con las muestras del paciente En caso de observarse una coloraci n inesperada que no pueda ser explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo comun quese con la Asistencia T cnica de Dako El anticuerpo puede utilizarse para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Las muestras de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 um Se requiere el tratamiento previo con recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER usando Dako PT Link n de cat logo PT100 PT101 Para m s detalles consulte la Gu a del usuario de PT Link Se obtienen resultados ptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8000 K8004 IR752 ES MN1 2009 12 04 p 1 2 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK
7. sitivo m dico para Contiene suficiente para Fabricante diagn stico in vitro lt n gt ensayos Consulte las instrucciones C di T de uso Lor digo del lote 118322 003 IR752 ES MNl 2009 12 04 p 2 2 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
8. ula suprarrenal ovarios y tejido neural 2 1 Niedobitek G Finn T Herbst H Gerdes J Grillner L Landqvist M et al Detection of cytomegalovirus by in situ hybridization and immunohistochemistry using new monoclonal antibody CCH2 a comparison of methods J Clin Pathol 1988 41 1005 9 2 Saiz E Lubin J Robinson MJ The modified Steiner stain a new use for an old stain Staining cytomegalovirus infected cells in gastrointestinal biopsies Histochem J 1998 30 549 52 3 Wirgar BZ Development of rapid methods for early diagnosis of cytomegalovirus infections dissertation Stockholm Karolinska Hospital 1991 4 Wirgart BZ Landqvist M H keberg l Eriksson B M Olding Stenkvist E Grillner L Early detection of cytomegalovirus in cell culture by a new monoclonal antibody CCH2 J Virol Methods 1990 27 211 20 5 Doniger J Muralidhar S Rosenthal LJ Human cytomegalovirus and human herpes virus 6 genes that transform and transactivate Clin Microbiol Rev 1999 12 367 82 6 Jarvis MA Nelson JA Human cytomegalovirus persistence and latency in endothelial cells and macrophages Curr Opin Microbiol 2002 5 403 7 7 Plachter B Nordin M Wirgart BZ Mach M Stein H Grillner L et al The DNA binding protein P52 of human cytomegalovirus reacts with monoclonal antibody CCH2 and associates with the nuclear membrane at late times after infection Virus Res 1992 24 265 76 o Limitaci n de temperatura Fecha de caducidad IVD Dispo
9. y Uso previsto Resumen y explicaci n Reactivo suministrado Inmun geno Especificidad Precauciones Almacenamiento Preparaci n de las muestras incluido material necesario pero no suministrado 118322 003 0843 FLEX Monoclonal Mouse Anti Cytomegalovirus Clones CCH2 DDG9 Ready to Use Link N de cat logo IR752 Para uso en diagn stico in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Cytomegalovirus Clones CCH2 DDG9 Ready to Use Link est indicado para su uso en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Autostainer Link Este anticuerpo resulta til en la identificaci n de tejidos infectados por el citomegalovirus humano HCMV 1 2 La interpretaci n de los resultados de cualquier tinci n o su ausencia debe complementarse con estudios morfol gicos con controles adecuados y debe evaluarla un anatomopat logo cualificado en el contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas El citomegalovirus humano es un virus herpes ampliamente distribuido La infecci n primaria se suele producir en la ni ez donde normalmente cursa de forma asintom tica Tras la exposici n inicial el virus crea una infecci n vitalicia En neonatos as como en pacientes inmunodeprimidos como pueden ser los pacientes con SIDA o sometidos a trasplantes el HCMV puede provocar infecciones graves potencialmente mortales y se presenta como la causa m s com n de anomal as cong nitas v ricas 5 6
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