Sistema de pruebas AIV Plus
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1. n s a r ua A ww n a o u e a o o mm sm w 79 C a A V o mws ms oo no ws 2 w m e v o RATA Cos on ine 33 21 MA 106 IE 94 M 22 DE 9 68 9 74 1163 DE MEA 5 xo 32 MEA ME MER 7 11 11 22 28 CV VI DE a w a a Jafu z n Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS 6 Fecha rev 9 15 2015 10 11 12 13 14 15 Reactividad cruzada Los analitos MPO y PR 3 del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS se evaluaron por si presentaban reactividad cruzada con otros anticuerpos e interferencias de componentes del suero Para este estudio se evaluaron un total de 35 muestras Quince de las muestras eran positivas para varios anticuerpos de enfermedades autoinmunes e infecciosas De los 15 evaluados uno era reactivo para el analito MPO y la misma muestra era positiva para el analito PR 3 El analito GBM se evalu por si presentaba reactividad cruzada con otros anticuerpos e interferencias de componentes del suero usando un total de 26 muestras Veintis is muestras eran positivas para varios anticuerpos de enfermedades autoinmunes e infecciosas De las 26 muestras evaluadas todas fueron negativas para GBM lo que demostr que hay poca probabilidad de reactividad cruzada Adem s se probaron 10 muestras con altos niveles de MPO y 10 muestras con altos niveles de PR 3 por si presentaban reactividad cruzada con GBM Las 202. 14 Aspirador de vac o y colector de vac o para lavar las microesferas CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Suspensi n de microesferas Extraiga solo la cantidad necesaria para analizar las muestras a las que se les va a realizar la prueba y devuelva ec la porci n no utilizada a su almacenamiento ok Conjugado NO CONGELAR Sistema de pruebas controles positivos control negativo y diluyente SAVe Diluent2 sin abrir 250 Tamp n de lavado 1X hasta 7 d as entre 20 y 25 C o durante 30 d as entre 2 y 8 C A Tamp n de lavado 10X 2 25 C RECOGIDA DE LAS MUESTRAS 1 ZEUS Scientific recomienda que el usuario realice la recogida de muestras conforme al documento M29 del Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio CLSI Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Protecci n de los trabajadores de laboratorio frente a las enfermedades infecciosas 2 Ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a completa de que las muestras de sangre humana no transmitir n infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre deben considerarse potencialmente infecciosos 3 Con este ensayo solamente deben utilizarse sueros reci n extra dos y debidamente refrigerados que se hayan obtenido mediante procedimientos homologados de venopunci n as ptica 13 14 No los utilice si se han agregado anticoagulantes o conservantes Evite utilizar sueros hemolizados lip micos o contaminados con bacterias 4 Almacene la mues
3. s sonicar durante aproximadamente 30 segundos en un sonicador de ba o peque o Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS 2 Fecha rev 9 15 2015 10 11 12 b Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el contenido del ensayo se mezcle detenidamente Entre los medios adecuados de mezcla se incluye mezclar la placa en un agitador de placa durante aproximadamente 30 segundos a 800 RPM aproximadamente o ajustar una pipeta en aproximadamente del volumen en la placa y aspirar y expulsar repetidamente bomba arriba y bomba abajo el contenido del pocillo durante un m nimo de 5 ciclos EJEMPLO DE CONFIGURACI N DE LA PLACA 1 2 Control negativo etc Control positivo 1 Control positivo 2 Paciente 1 Paciente 2 Paciente 3 Paciente 4 H Paciente 5 Prepare una diluci n 1 21 por ejemplo 10uL de suero 200uL de diluyente SAVe Diluent del control negativo del control positivo y de cada suero de paciente NOTA El diluyente SAVe Diluent sufrir un cambio de color lo cual confirma que la muestra se ha combinado con el diluyente Para obtener un rendimiento adecuado es importante que las disoluciones de la muestra se mezclen detenidamente conforme al punto 2b de arriba Despu s de determinar el n mero total de pocillos a procesar utilice una pipeta multicanal o repetidora para dispensar 50 uL de suspensi n de microesferas dentro de cada uno de los pocillos de la placa de filtraci n Transfiera 10 uL
4. de cada muestra diluida 1 21 y el control de la placa de disoluci n a la placa de filtraci n Para obtener un rendimiento adecuado es importante que la disoluci n de muestra y la suspensi n de microesferas se mezclen detenidamente conforme al punto 2b de arriba Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos Despu s de la incubaci n enjuague las microesferas mediante filtrado al vac o usando el tamp n de lavado que se suministra diluido en la concentraci n 1x a Coloque la placa de filtraci n sobre el colector de vac o y extraiga la soluci n dejando las microesferas detr s b Apague el vac o y a ada 200 uL de tamp n de lavado c Aplique el vac o y extraiga la soluci n d Repita los pasos 7b y 7c para un total de tres enjuagues A continuaci n del lavado final secar suavemente el fondo de la placa y permitir que la placa se seque al aire durante 3 5 minutos antes de continuar con el siguiente paso Agregue 150 ul de conjugado a cada micropocillo en el mismo orden en que se agregaron las muestras Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el conjugado y la suspensi n de microesferas se mezclen detenidamente conforme al punto 2b de arriba Mientras mezcla el conjugado tiene la opci n de transferir la mezcla a pocillos vac os de una placa de reacci n de poliestireno Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos Ajuste el instrumento AtheNA Multi Lyte para an
5. invalid y el c digo de soluci n de problemas Es posible analizar controles adicionales siguiendo las directrices o los requisitos de las normativas locales regionales o nacionales o de las organizaciones acreditadas Los controles externos deben ser representativos del suero humano normal debido a que el sistema de calibraci n de AtheNA Multi Lyte se basa parcialmente en las caracter sticas de la muestra de suero Si la formulaci n de la muestra es artificial no es suero humano se pueden producir resultados err neos Consulte el documento C24 del CLSI Statistical Quality Control for Quantitative Measurements Control de calidad estad stico para determinaciones cuantitativas para obtener informaci n sobre las pr cticas de control de calidad apropiadas INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS OlnimiololoiD gt WO 0 J O0 UI Es 0D N E O C lculos a Calibraci n del ensayo El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS utiliza la tecnolog a Intra Well Calibration Technology La tecnolog a Intra Well Calibration Technology incluye una curva est ndar con m ltiples puntos dentro de la suspensi n de microesferas Con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology cada pocillo del ensayo se calibra de manera interna sin que intervenga ning n usuario La curva est ndar est dise ada para que Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte
6. medios desviaciones est ndar y CV porcentual Las muestras se seleccionaron de manera que las muestras 5 y 6 fueran claramente negativas las muestras 1 y 2 claramente positivas y las muestras 3 y 4 cerca del l mite de referencia Los resultados de este estudio se resumen en las tablas 9 10 y 11 de abajo Tabla 9 Estudio de precisi n MPO Diluci n 1 Diluci n 2 Diluci n 1 Diluci n2 Diluci n 1 Diluci n2 D a D a2 D a3 1298 1297 1817 1682 178 1712 c v 46 69 59 cv 118 1420 1360 1611 1574 1695 f 1766 gt 39 454 453 457 489 449 cv 62 76 97 cv 80 e em e ie ass ss a o res asar 1093 o ss ass ws se w ws ws we as 97 8 wo 1 169 A A A 100 14 a er s Cv ar as vmv m amo o m o oa a oe ma 0e 986 oe 132 ams s ws o 7 o ww on mo os so 2 E e C EAAA 108 7 7 T z T a VI 19 18 24 VI 20 9 9 7 a 2 DE 260 588 922 DE 676 29 z 7 n 3 w g5 3237 332 cv 331 as as f as as a a O y O Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS 5 Fecha rev 9 15 2015 Tabla 9 Estudio de precisi n PR 3 Resultados d a 1 Resultados d a 2 Resultados d a 3 Precisi n intraensayo Com sa a e 26 C o s a a o Ce m o o a o oe aa a o TA ar m is a ss mo xo a ws us we 03 O a a AS gt r
7. microesferas tambi n contiene un conjunto de microesferas dise adas para detectar anticuerpos no espec ficos en la muestra del paciente si est presente y cuatro conjuntos de microesferas separadas que se utilizan para la calibraci n del ensayo Una botella mbar que contiene 5 5 ml Listo para usar SOLN CONJ CONTROL Conjugado anti IgG humana espec fica de la cadena y de cabra conjugada con ficoeritrina Una botella mbar que contiene 15 ml Listo para usar Control positivo 1 suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n rojo 2 3 4 Control positivo 2 suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n blanco 5 CONTROL Control negativo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n verde Diluyente SAVe Diluent Una botella de 50 ml con tap n verde de soluci n salina tamponada con fosfato Listo para usar NOTA El diluyente SAVe DIL Enit Diluent cambiar de color cuando se combine con suero Tamp n de lavado concentrado 10X diluir 1 parte del concentrado 9 partes de agua desionizada o destilada Una botella de 50 ml con tap n transparente de soluci n salina tamponada con fosfato concentrada 10x Z i D A N 1 Los siguientes componentes no dependen del n mero de lote del sistema de pruebas y se pueden usar indistintamente con cualquier sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte de ZEUS Tamp n de lavado y diluyente SAVe Diluent 2 El sistema de pruebas tambi n contiene a Una etiqueta de compone
8. of disease activity in Wegener s granulomatosis Lancet 1 425 429 1985 Feehally J Wheeler DC Walls J et al A case of microscopic polyarteritis associated with antineutrophilia cytoplasmic antibodies Clin Nephrol 27 214 215 1987 Falk RJ Becker M Terrell R Jennette JC Antigen specificity of P ANCA and C ANCA Abstract The 3rd International Workshop on ANCA Washington DC 1990 2 3 Jennette JC Falk RJ Anti neutrophil cytoplasmic autoantibodies with specificity for myeloperoxidase in patients with systemic vasculitis and idiopathic necrotizing and crescentic glomerulonephritis N Engl J Med 318 1651 1657 1988 Savage COS Tizard J Jayne D et al Anti neutrophil cytoplasmic antibodies in Kawasaki disease Arch Dis Child 64 360 363 1989 Saxena R Bygren P Arvastson B Wieslander J Circulating autoantibodies as serological markers in the differential diagnosis of pulmonary renal syndrome J Intern Med 238 143 152 1995 Hellmark T Johansson C Wieslander J Characterisation of anti GBM antibodies involved in Goodpasture syndrome Kidney Int 46 823 829 1994 Wieslander J Barr J Butkowski R Edwards S Bygren P Heinegard D Hudson B Goodpasture antigen of the glomerular basement membrane Localization to noncollagenous regions of type IV collagen Proc Natl Acad Sci USA 81 3838 42 1984 Butkowski R Wieslander J Wisdom B Barr J Noelken M Hudson B Properties of the globular domain of type IV collagen and i
9. AIV Plus de ZEUS 3 Fecha rev 9 15 2015 se ajuste autom ticamente bas ndose en las caracter sticas nicas del paciente o suero de control Los valores del calibrador se asignan de acuerdo con los est ndares internos de ZEUS que son espec ficos del lote y est n codificados en el CD de calibraci n del lote b L mite de referencia analitos Cada analito del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS tiene un l mite de referencia asignado ZEUS determina los l mites de referencia para cada lote de sistema de pruebas y est n codificados en el CD de calibraci n del lote c Con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology todos los c lculos se realizan autom ticamente cuando se utiliza el sistema AtheNA Multi Lyte La tecnolog a Intra Well Calibration Technology ejecuta un an lisis de regresi n de las normativas internas y a continuaci n ajusta los valores de unidad calculados bas ndose en una normativa adicional y en las caracter sticas de la muestra de suero Interpretaciones Los valores unitarios de las muestras de GBM MPO y PR 3 se interpretan como sigue Muestras negativas lt 100 AU mL Muestras positivas gt 120 AU mL Muestras dudosas 100 120 AU mL LIMITACIONES DE LA PRUEBA El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS es una herramienta para el diagn stico pero no es en s una prueba diagn stica Los resultados de la prueba se deben interpretar junto con la evaluaci n cl nica y los res
10. ZEUS AtheNA Sistema de pruebas AIV Plus IVD dote Multi Lyte A96101 CE USO PREVISTO El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte Autoimmune Vasculitis AIV Plus de ZEUS est dise ado para la detecci n cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos de clase IgG en tres ant genos separados membrana basal glomerular GBM mieloperoxidasa MPO y proteinasa 3 PR 3 en suero humano El sistema de pruebas est dise ado para ayudar en el diagn stico de vasculitis autoinmune caracterizada por concentraciones elevadas de anticuerpos seleccionados Los MPO y o PR 3 se pueden asociar con trastornos autoinmunes como la granulomatosis de Wegener GNFSI PAM y SPR Los anticuerpos anti GBM ayudan en el diagn stico del s ndrome de Goodpasture Esta prueba est concebida exclusivamente para uso diagn stico in vitro IMPORTANCIA Y ASPECTOS GENERALES Los anticuerpos citoplasm ticos antineutr filos ANCA fueron descritos inicialmente por Davies y cols en 1982 1 Desde este descubrimiento inicial se ha encontrado que los ANCA se asocian con varias vasculitis sist micas VS En la actualidad se sabe que los ANCA incluyen dos especificidades principales C ANCA dirigido contra la PR 3 y P ANCA dirigido contra la MPO El an lisis de P ANCA y C ANCA es muy recomendable en el estudio diagn stico de pacientes que acuden con un cuadro cl nico que sugiere VS Los s ndromes cl nicos m s frecuentes asociados con ANCA son los siguientes granulomatosis de Wege
11. alizar las reacciones Para ello seleccione la plantilla AIV Plus Consulte el manual del operador para obtener detalles relacionados con el funcionamiento del instrumento AtheNA Multi Lyte Los resultados se pueden leer en la placa del filtro o en una placa de reacci n NOTA Para obtener un an lisis adecuado de la muestra es importante que el instrumento se instale calibre y mantenga de acuerdo con las instrucciones del fabricante Consulte el manual del instrumento para obtener informaci n sobre la preparaci n del instrumento antes de leer los resultados del ensayo Tras finalizar la incubaci n del conjugado tiene 60 minutos para leer la placa Tiene la opci n de agitar la placa durante unos 15 segundos antes de la lectura Este paso opcional puede reducir la cantidad de tiempo necesario para leer la placa Paso Procedimiento de prueba abreviado 1 Diluya las muestras al 1 21 en diluyente SAVe Diluent Mezcle bien Combine 50 uL de suspensi n de microesferas y 10 uL de muestra diluida en un pocillo vac o Mezcle bien Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos Enjuague las microesferas 3 veces con 200 uL de tamp n de lavado 1x Seque suavemente el fondo de la placa y secar con aire durante 3 5 minutos Agregue 150 uL de conjugado en cada pocillo Mezcle bien Transfi ralo a una placa de reacci n opcional Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos Agite la placa opcional Lea los resultados en un periodo de 60 min
12. cidad relativa 283 336 84 2 Concordancia relativa 368 427 86 2 Las muestras dudosas se excluyeron de los c lculos de concordancia Tabla 7 Rendimiento del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS analito GBM en comparaci n con el sistema de pruebas ELISA ANCA de ZEUS Resultado de ELISA Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 31 2 0 33 AtheNA Multi Lvte Negativo 1 195 1 197 SS Dudoso O O 0 O Total 32 197 1 230 Porcentaje de concordancia positivo 31 33 93 9 Porcentaje de concordancia negativo 195 197 99 0 Porcentaje de concordancia general 226 230 98 3 Las muestras dudosas se excluyeron de los c lculos de concordancia Tabla 8 Resumen del rendimiento comparado Andito N Sensibilidad relativa Especificidad relativa Concordancia general 55 57 96 5 338 377 89 6 393 439 90 6 85 91 93 4 283 336 84 2 368 427 86 2 31 33 93 9 195 197 99 0 226 230 98 3 2 Reproducibilidad Se llev a cabo una evaluaci n en nuestros laboratorios del intraensayo y de la reproducibilidad del interensayo Se probaron seis muestras En cada d a de prueba cada muestra se diluy dos veces y despu s de carg para cuatro replicados resultando en un total de ocho pocillos para cada una de las seis muestras Este protocolo se sigui durante tres d as A continuaci n estos resultados se utilizaron para calcular los valores AU ml
13. e bioseguridad 2 tal como se Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS 1 Fecha rev 9 15 2015 recomienda para cualquier muestra de sangre o suero humano potencialmente infeccioso en el manual de Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Bioseguridad en laboratorios microbiol gicos y biom dicos de los Centros para el Control de Enfermedades Institutos Nacionales de la Salud ltima edici n y en la Norma de la OSHA sobre Pat genos que se transmiten en la sangre 20 5 Para lograr resultados precisos es esencial cumplir estrictamente los tiempos y temperaturas de incubaci n especificados Se debe dejar que todos los reactivos alcancen temperatura ambiente 20 25 C antes de empezar el ensayo Devuelva los reactivos no utilizados a una temperatura refrigerada inmediatamente despu s de su uso 6 Un lavado inadecuado podr a ocasionar resultados de falsos positivos o falsos negativos Debe reducirse al m nimo la cantidad de soluci n de lavado residual p ej mediante secado o aspiraci n antes de a adir el conjugado No permita que los pocillos se sequen entre una incubaci n y la siguiente 7 El diluyente SAVe Diluent9 la suspensi n de microesferas los controles y el conjugado contienen azida s dica en una concentraci n de lt 0 1 p v Se ha informado que la azida s dica forma azidas de plomo o cobre en las ca er as del laboratorio lo que puede ocasionar explosiones al g
14. ecauci n neutralice cualquier desecho l quido con pH cido antes de agregarlo a la soluci n de lej a 18 No permita que el conjugado entre en contacto con recipientes o instrumentos que hayan podido contener previamente una soluci n que utilice azida de sodio como conservante Los residuos de azida de sodio pueden destruir la actividad enzim tica del conjugado 19 No exponga ninguno de los reactivos a soluciones que contengan lej a o a ning n olor fuerte de soluciones que contengan lej a Los restos de lej a hipoclorito de sodio incluso a nivel de trazas pueden destruir la actividad biol gica de muchos de los reactivos incluidos en este sistema de pruebas MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Pipetas capaces de dispensar con exactitud entre 10 y 200 yl 2 Pipeta multicanal capaz de dispensar con exactitud 10 200 ul 3 Dep sitos de reactivos para pipetas multicanal 4 Pipetas serol gicas 5 Puntas de pipetas descartables 6 Toallas de papel 7 Cron metro de laboratorio para controlar los pasos de incubaci n 8 Recipiente para desechos y desinfectante es decir lej a de uso dom stico al 10 hipoclorito de sodio al 0 5 9 Sistema AtheNA Multi Lyte instrumento Luminex con tamp n de lavado n mero de producto 40 50000 10 Agua destilada o desionizada 11 V rtex 12 Sonicador de ba o peque o 13 Agitador de placas capaz de agitar a una velocidad de 800 RPM opcional para el mezclado
15. llame de forma gratuita o escriba a support zeusscientific com Molenstraat 15 Fax 1 908 526 2058 Para consultas al Servicio de atenci n al cliente y al Soporte EC 2513 BH The Hague P gina Web www zeusscientific com t cnico desde fuera de EE UU contacte con su distribuidor local The Netherlands AtheNA Multi Lyte y SAVe Diluent son marcas registradas de Tel 31 0 70 345 8570 ZEUS Scientific Inc 2015 ZEUS Scientific Inc Todos los derechos reservados Fax 31 0 70 346 7299 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS 7 Fecha rev 9 15 2015
16. muestras fueron negativas para GBM lo que demostr que hay poca probabilidad de reactividad cruzada entre MPO y PR 3 con GBM Sustancias interferentes Se evaluaron un total de 20 muestras MPO PR 3 que conten an sustancias potencialmente interferentes Estos 20 muestras conten an o bien niveles anormales de hem lisis n 5 bilirubina n 5 concentraci n de lgG por encima de lo normal n 5 o bien niveles de l pidos por encima de lo normal n 5 Dos de las muestras fueron positivas para los analitos MPO y PR 3 Se evaluaron un total de seis muestras GBM que conten an sustancias potencialmente interferentes Estas seis muestras se a adieron con niveles anormales de hem lisis n 2 bilirubina n 2 niveles de l pidos por encima de lo normal n 2 albumina n 2 colesterol n 2 o triglic ridos n 2 El resultado cualitativo de las seis muestras no mostr cambios salvo una muestra que se a adi con un nivel elevado de colesterol y dos muestras que se a adieron con niveles elevados de triglic ridos Las muestras lip micas pueden interferir en el resultado de este ensayo Debe evitarse el uso de estos tipos de muestras REFERENCIAS Davies D Moran ME Niall JF Ryan GB Segmental glomerulonephritis with antineutrophil antibody Possible arbovirus aetiology Br J Med 285 606 1982 van der Woude FJ Rasmussen N Lobatto S Wiik A Permin H van Es LA Autoantibodies against neutrophils and monocytes Tools for diagnosis and marker
17. ner 2 poliarteritis 3 vasculitis de superposici n 4 glomerulonefritis semilunar idiop tica ICGN 5 enfermedad de Kawasaki 6 y trastornos renales autoinmunes como el s ndrome de Goodpasture 7 Aunque la identificaci n inicial de C ANCA y P ANCA se bas en la inmunofluorescencia indirecta la mejor identificaci n y purificaci n de PR 3 y MPO ha dado lugar al desarrollo de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas ELISA e inmunoensayos basados en micropart culas para ambos marcadores El s ndrome de Goodpasture se caracteriza por la hemorragia pulmonar el fallo renal y la presencia de anticuerpos anti GBM 8 En el s ndrome de Goodpasture una parte del dominio globular de las cadenas de col geno IV es antig nica y responsable del desarrollo de anticuerpos anti GBM en la glomerulonefritis progresiva 9 10 y 11 FUNDAMENTO DE LA PRUEBA El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS est dise ado para detectar anticuerpos de la clase IgG en suero humano ante MPO PR 3 y GBM El procedimiento de prueba comporta dos pasos de incubaci n 1 Los sueros de prueba diluidos correctamente se incuban en una mezcla multiplexada de la suspensi n de microesferas La suspensi n de microesferas contiene una mezcla de conjuntos distinguibles de microesferas de poliestireno cada conjunto conjugado con un ant geno diferente Si est presente en los sueros del paciente determinados anticuerpos se unir n con el ant geno i
18. nmovilizado en uno o m s conjuntos de microesferas Las microesferas se enjuagan para extraer las prote nas s ricas no reactivas 2 Se agrega anti IgG humana de cabra conjugada con ficoeritrina al recipiente y se incuba la placa El conjugado reaccionar con el anticuerpo de tipo IgG inmovilizado en la fase s lida del paso 1 La suspensi n de microesferas se analiza despu s con el instrumento AtheNA Multi Lyte El conjunto o conjunto de microesferas se clasifican identifican y la cantidad de mol cula informante conjugado PE se determina para cada conjunto de microesferas Con la Intra Well Calibration Technology tecnolog a de calibraci n dentro del pocillo se utilizan conjuntos de microesferas de calibraci n para convertir fluorescencia sin procesar en resultado unidades COMPONENTES DEL SISTEMA DE PRUEBAS Materiales suministrados Cada sistema de pruebas contiene los siguientes componentes en cantidad suficiente para realizar el n mero de pruebas indicado en la etiqueta del envase NOTA los siguientes componentes contienen como conservante azida de sodio a una concentraci n de lt 0 1 p v suspensi n de microesferas controles conjugado y m D lt o Q c D 5 et a BEAD 1 Suspensi n de microesferas contiene microesferas de poliestireno de 5 5 micras separadas y distinguibles que se conjugan con los siguientes ant genos mieloperoxidasa MPO proteinasa 3 PR 3 y membrana basal glomerular GBM La suspensi n de
19. nte a un laboratorio para una prueba de autoanticuerpos ANCA rutinaria y 173 muestras de personas enfermas de pacientes diagnosticados cl nicamente con trastornos SV Los resultados de la investigaci n se resumen en las tablas 5 y 6 siguientes Los datos comparativos de GBM obtenidos a partir de 230 muestras incluyendo 115 sueros de pacientes que podr an tener el s ndrome de Goodpasture se muestran en la tabla 7 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS 4 Fecha rev 9 15 2015 Tabla 5 Rendimiento del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS analito MPO en comparaci n con el sistema de pruebas ELISA MPO IgG de ZEUS Resultado de ELISA Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 55 39 2 96 AtheNA Multi Lyte Negativo 2 338 1 341 Resultados Dudoso 1 4 0 5 Total 59 383 3 445 Sensibilidad relativa 55 57 96 5 Especificidad relativa 338 377 89 6 Concordancia relativa 393 434 90 6 Las muestras dudosas se excluyeron de los c lculos de concordancia Tabla 6 Rendimiento del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS analito PR 3 en comparaci n con el sistema de pruebas ELISA PR 3 IgG de ZEUS Resultado de ELISA Positivo Negativo Dudoso Total h Positivo 85 53 1 139 a Negativo 6 283 O 289 Rec ltsdss Dudoso 4 10 0 14 Total 96 348 1 445 Sensibilidad relativa 85 91 93 4 Especifi
20. ntes que contiene informaci n espec fica de lote dentro de la caja del sistema de pruebas b CD de calibraci n que incluye los valores de calibraci n del kit espec ficos de los lotes y necesarios para el an lisis de la muestra y el control de calidad del ensayo as como el prospecto c Una placa de disoluci n de 96 pocillos d Una placa de filtro de 96 pocillos PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro 2 Se deben seguir las precauciones normales que se utilizan para manipular reactivos de laboratorio En caso de contacto con los ojos enjuague inmediatamente con abundante agua y busque asistencia m dica Utilice ropa de protecci n adecuada guantes y protecci n para la cara ojos No respire los vapores Respete todas las leyes locales estatales y federales para la eliminaci n de residuos 3 La suspensi n de microesferas AtheNA Multi Lyte no contiene organismos viables No obstante las tirillas deben considerarse como materiales biol gicos potencialmente peligrosos y deben manipularse como tal 4 Los controles son material con potencial riesgo biol gico Los materiales a partir de los cuales se obtuvieron estos productos resultaron negativos para el ant geno del VIH 1 el HBsAg y para anticuerpos contra el VHC y el VIH por m todos de prueba homologados Sin embargo dado que ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a total de que no hay agentes infecciosos estos productos deber n manipularse con un Nivel d
21. olpear con un martillo Para evitarlo enjuague bien el lavabo con agua despu s de eliminar las soluciones que contengan azida de sodio 8 La soluci n concentrada del tamp n de lavado es IRRITANTE Irritante para los ojos el sistema respiratorio y la piel 9 La diluci n o adulteraci n de estos reactivos puede generar resultados err neos 10 No utilice reactivos de otro origen o fabricante 11 Nunca pipetee con la boca Evite el contacto de los reactivos y las muestras de pacientes con la piel y las membranas mucosas 12 Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos Esto puede ocasionar resultados incorrectos 13 La contaminaci n cruzada de reactivos y o muestras podr a ocasionar resultados err neos 14 Evite salpicar o generar aerosoles 15 No exponga los reactivos a la luz intensa durante el almacenamiento o la incubaci n La suspensi n de microesferas y el conjugado son reactivos sensibles a la luz Ambos se han embalado en envases que protegen de la luz Las exposiciones normales que se experimentan durante el curso de la ejecuci n del ensayo no afectar n en rendimiento del ensayo No exponga estos reactivos a fuentes potentes de luz visible de manera innecesaria 16 Recoja la soluci n de lavado en un lavabo de eliminaci n Trate la soluci n de desecho con desinfectante es decir lej a de uso dom stico al 10 hipoclorito de sodio al 0 5 Evite la exposici n de los reactivos a los vapores de la lej a 17 Pr
22. omedio Resultado medio valor bajo Resultado alto Rutina MPO 211 6 35 5 0 1887 PR 3 396 3 73 5 3405 l ni MPO 272 50 14 2451 AOS PR 3 267 2 62 18 3041 ml MPO 53 35 0 684 PR 3 128 57 0 1636 GBM La investigaci n cl nica incluy 115 muestras que se enviaron a un laboratorio para una prueba ANCA vasculitis sist mica y 115 muestras que se entregaron para una prueba GBM s ndrome de Goodpasture Los datos resultantes se usaron para demostrar el resultado esperado para tales grupos Tabla 3 Resultado esperado de los analitos ANCA y GBM utilizando diferentes poblaciones de muestra Resultado AtheNA Multi Lyte N Analito Inv lido Dudoso Positivo Negativo ANCA Cantidad 0 0 20 95 115 1 6 1 6 17 4 82 6 GBM Cantidad 0 0 13 102 0 00 0 00 11 3 88 7 Tabla 4 Resultado esperado de los analitos ANCA y GBM utilizando diferentes poblaciones de muestra Resultados AtheNA Multi Lyte Intervalo Anali Resul i Resul i nalito esultado promedio esultado medio Valor bajo iio ANCA 105 26 2 1180 GBM 85 39 13 1336 CARACTER STICAS DE COMPORTAMIENTO Estudio comparativo Se ha realizado un estudio comparativo interno para demostrar la equivalencia del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte AIV Plus de ZEUS con el sistema de pruebas ELISA comercializado El rendimiento se evalu usando 445 muestras 150 de sueros de donantes normales 122 muestras enviadas previame
23. tra a temperatura ambiente durante un lapso no superior a las 8 horas Si la prueba no se realiza dentro de las 8 horas el suero puede almacenarse a entre 2 8 C durante un lapso no superior a las 48 horas Si tiene previsto retrasar la realizaci n de la prueba conserve los sueros de la prueba a 2O C o a temperaturas inferiores Evite m ltiples ciclos de congelaci n descongelaci n que puedan ocasionar la p rdida de actividad de los anticuerpos y dar lugar a resultados err neos Es responsabilidad del propio laboratorio utilizar todas las referencias disponibles y o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad de su laboratorio 15 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 1 Retire los componentes individuales del kit del lugar de almacenamiento y permita que alcancen la temperatura ambiente 20 25 C 2 Determine el n mero total de controles y muestras que se desean probar Es necesario incluir el control negativo y dos controles positivos con cada tanda de pruebas El control negativo debe probarse en el pocillo A1 el control positivo 1 en el pocillo B1 y el control positivo 2 en el pocillo C1 Cada control y muestra necesita un micropocillo para su procesamiento a Para optimizar los tiempos de lectura la suspensi n de microesferas debe estar bien mezclada antes de su empleo La manera m s efectiva de volver a suspender las microesferas es en primer lugar utilizar el v rtex durante aproximadamente 30 segundos y despu
24. ts relationship to the Goodpasture antigen J Biol Chem 262 7874 7877 1987 Butkowski R Langveld J Wieslander J Hamilton J Hudson B Localization of Goodpasture epitope to novel chain of basement membrane collagen J Biol Chem 260 3739 3747 1985 U S Department of Health and Human Services Public Health Service Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health U S Government Printing Office Washington D C 4th Ed 1999 U S Department of Labor Occupational Safety and Health Administration Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Fed Register 56 64175 64182 1991 Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood Body Fluids and Tissues Approved Guideline NCCLS CLSI Document M29 Vol 17 12 1997 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests Approved Guidelines 4 Edition 2010 CLSI Document GP44 A4 ISBN 1 56238 724 3 Clinical and Laboratory Standards Institute 950 West Valley Road Suite 2500 Wayne PA 19087 O ZEUS Scientific sal ZEUS Scientific Inc Para consultas al Servicio de atenci n al cliente en EE UU 200 Evans Way Branchburg New Jersey 08876 EE UU contacte con su distribuidor local Llamada gratuita EE UU 1 800 286 2111 opci n 2 Para consultas al Soporte t cnico contacte con ZEUS Scientific EMERGO EUROPE Internacional 1 908 526 3744
25. ultados de otros procedimientos diagn sticos Las muestras hemol ticas ict ricas o lip micas pueden interferir en el resultado de este ensayo Adem s las muestras con concentraciones de IgC anormales pueden interferir en el resultado de este ensayo Debe evitarse el uso de estos tipos de muestras RESULTADOS ESPERADOS MPO PR 3 La investigaci n cl nica incluy 122 muestras que se enviaron al laboratorio para una prueba ANCA de rutina 173 muestras de pacientes con diagn stico cl nico y 150 muestras de donantes de sangre normales Los resultados de MPO y PR 3 se usaron para demostrar el resultado esperado para tales grupos Los resultados de cada poblaci n se ilustran en las Tablas 1 a 2 siguientes Tabla 1 Resultado esperado de los resultados de analitos MPO y PR 3 utilizando diferentes poblaciones de muestra Resultado AtheNA Multi Lyte Grupo N Analito Inv lido Dudoso Positivo Negativo MPO a 2 2 21 97 Rutina 122 2 a e a E PR 3 Cantidad 2 2 50 68 1 6 1 6 41 0 55 7 MPO Cantidad 1 2 104 66 Cl nicos 173 2 pe n o 2 PR 3 Cantidad 1 6 104 62 0 6 3 5 60 1 35 8 MPO ULL 0 1 9 140 Mos 150 Yo 0 0 0 7 6 0 93 3 PR 3 Cantidad 0 6 27 117 0 0 4 0 18 0 78 0 Tabla 2 Resultado esperado de los resultados de analitos MPO y PR 3 utilizando diferentes poblaciones de muestra Resultados AtheNA Multi Lyte i i Intervalo Grupo Analito Resultado pr
26. utos CONTROL DE CALIDAD Cada vez que se realiza el ensayo es necesario incluir el control negativo en el pocillo A1 y los dos controles positivos en los pocillos B1 hasta el C1 La validez de la tirada se determina mediante la realizaci n de los controles positivos y negativos Estos criterios se analizan autom ticamente con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology a El control negativo y los dos controles positivos deben ser todos negativos en la microesfera no espec fica o de ant geno de control b El control negativo debe ser negativo para cada uno y todos los analitos incluidos en la suspensi n de microesferas c Cada control positivo debe ser positivo para un determinado grupo de analitos que se incluyen en la suspensi n de microesferas Estos intervalos est n codificados dentro del CD de calibraci n d Si no se cumple ninguno de los criterios anteriores toda la tirada se considerar como no v lida y se tendr que repetir La validez de la muestra se basa en las caracter sticas de las microesferas y sus interacciones con los sueros de los pacientes Hay varios par metros que se supervisan autom ticamente con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology Si se determina que cualquiera de los criterios no cumple las especificaciones los resultados del paciente se considerar n como no v lidos y deber n repetirse En caso de que esto se produzca el informe de datos indicar la muestra en particular que se
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