Reactivos - annar diagnóstica
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1. El instrumento analizar cada calibrador por triplicado Una vez analizados los calibradores el software solicitar la validaci n de la calibraci n En la pantalla Instrument Summary haga clic en bot n de flecha Choose more options Ctrl M V Seleccione Calibration Ctrl F3 En la ventana de calibraci n marque el ensayo deseado y haga clic en Details En la ventana Calibration Details que se abrir seleccione la calibraci n que acaba de efectuar La curva maestra se visualizar como una l nea discontinua y la nueva curva de trabajo como una l nea continua Si los resultados de la calibraci n son v lidos en la parte inferior izquierda de la pantalla aparecer un bot n de validaci n Haga clic en el bot n Validate Calibration Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Se recomienda analizar los controles QUANTA Flash Ro60 vendidos por separado n mero de producto 701147 tras calibrar un lote de cartuchos de reactivos Trazabilidad No esta disponible ning n suero de referencia internacional para los anticuerpos anti Ro60 que permita estandarizar los ensayos con estos anticuerpos En su lugar se ha analizado el suero de referencia del Center of Disease Control and Prevention para anticuerpos anti Ro60 152076 ANA n m 7 anti SS A Ro y se ha determinado una concentraci n gt 1 374 8 CU Limitaciones Estos cal2. Valores esperados El valor esperado en la poblaci n normal es negativo Los niveles de autoanticuerpo anti Ro60 se han analizado en una cohorte de 98 donantes de sangre aparentemente normales 52 mujeres y 46 hombres edades 17 60 utilizando el QUANTA Flash Ro60 Con el l mite de detecci n de 20 CU dos de las muestras un 2 0 fueron positivas en el QUANTA Flash Ro60 La concentraci n media fue de 6 1 CU y los valores oscilaron entre lt 4 9 CU y 84 8 CU Sensibilidad y especificidad cl nicas En el estudio de validaci n cl nica se utilizaron en total 361 muestras que incluyen 100 muestras de pacientes con LES y 39 de pacientes con s ndrome de Sj gren Como controles se emplearon 20 muestras de pacientes con artritis reumatoide 20 con enfermedad tiroidea autoinmune 11 con enfermedad cel aca 40 con otras enfermedades reum ticas sist micas y artropat as y 33 con diferentes enfermedades infecciosas La sensibilidad y especificidad cl nicas para el SS n 39 y el LES n 100 usando la poblaci n de control n 124 se calcula en las dos tablas siguientes Sensibilidad y especificidad cl nicas del QUANTA Flash Ro60 en el SS An lisis cl nico Diagn stico An lisis n 163 Sin SS intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 66 7 49 8 80 9 QUANTA Flash Ro60 Negativo Especificidad 98 4 94 3 99 8 Total Sensibilidad y especificidad cl nicas del QUANTA Flash R
3. Se ha determinado que es consistente con la directriz EP17 A del CLSI con una proporci n de falsos positivos a y de falsos negativos p inferior al 5 El AMR completo que va de 4 9 CU a 1 374 8 CU es lineal Se ha realizado un estudio de linealidad conforme al documento EP6 A del CLSI utilizando cuatro muestras de suero con diferentes concentraciones de anticuerpo anti Ro60 Las cuatro muestras presentaron linealidad de diluci n individualmente y los datos combinados generaron los resultados siguientes con regresi n lineal Intervalo i E Intersecci n en Y IC Muestra anal tico CU Pendiente IC del 95 del 95 R2 Todas las De 3 6 a 1 370 1 1 00 de 0 98 a 1 01 1 69 de 4 58 a 7 95 1 00 muestras Interferencia y reactividad cruzada No se ha detectado interferencia con una concentraci n de hemoglobina de hasta 200 mg dL de triglic ridos de hasta 1 000 mg dL de colesterol de hasta 224 3 mg dL de bilirrubina de hasta 10 mg dL y de IgM anti RF de hasta 500 IU mL Se han analizado cien muestras de pacientes con diversas enfermedades autoinmunes e infecciosas para evaluar la reactividad cruzada Una muestra de un paciente con artritis reumatoide ha sido positiva en el CIA QUANTA Flash Ro60 QUANTA Flash Ro60 701146 Calibradores Para uso diagn stico In Vitro SOLO PARA EXPORTACION NO COMERCIALIZABLE EN ESTADOS UNIDOS Uso previsto Los calibradores QUANTA Flash Ro60 est n destinados
4. etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 2 Guarde los calibradores no abiertos a una temperatura entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como esta indicado Los calibradores abiertos deben desecharse al cabo de 8 horas Procedimiento 1 Cada nuevo lote de cartuchos de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre Cada calibrador debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del calibrador y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en el carrusel de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del calibrador e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH
5. ensayo Ro60 1 Antes de utilizar los controles QUANTA Flash Ro60 por primera vez en el instrumento introduzca en el software el nombre el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M v Seleccione QC Ctrl F2 Haga clic en el bot n New QC Material Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote En primer lugar introduzca en el software el nombre el n mero de lote y la caducidad que figuran en esta hoja de datos A continuaci n haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir debe estar marcada marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo Ro60 de la lista y haga clic en Add Por ltimo introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes 1 Antes de utilizar un nuevo lote de controles QUANTA Flash Ro60 por primera vez introduzca en el software el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M v Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo Ro60 en la columna de la izquierda A continuaci n seleccione el material de control apropiado en la derecha Ro60N para el control negativo o bien Ro60P para el control positivo Hag
6. rrelo Para sustituir el recipiente de l quido de lavado del sistema haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 en la esquina superior derecha En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Sys Rinse En la ventana que se abrir Add System Rinse Remove bottles haga clic en Next Siga las instrucciones de la ventana que aparecer Add System Rinse Add bottle Una vez aceptado el c digo de barras haga clic en Finish si es necesario Para vaciar el recipiente de residuos l quidos en la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Fluid Waste Extraiga el residuo l quido y elim nelo Haga clic en Next Una vez sustituido el frasco vac o haga clic en Finish M todo Preparacion del cartucho de reactivos La primera vez que se usa el cartucho de reactivos deben seguirse los pasos indicados a continuaci n para instalarlo adecuadamente en el instrumento BIO FLASH Nota No utilice el cartucho de reactivos si observa signos de que est da ado 1 Coloque el cartucho de reactivos sobre una superficie s lida Con una mano sostenga el cartucho de reactivos en su lugar Con la otra mano agarre con fuerza la pesta a roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente 2 Pulse las dos pesta as laterales del tap n de perforaci n parte gris y aplique presi n a la parte superior del cartucho de reactivos hasta que descienda y alcance un tope Las pesta as deben
7. 5 usos y puede permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los controles no abiertos entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado Los controles abiertos son v lidos para 15 usos y pueden permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso El tiempo m ximo durante el cual los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Los controles que permanezcan destapados en el instrumento durante m s de 2 5 horas en total deben desecharse Si se utiliza el mismo tubo de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Para conseguir una estabilidad ptima retire los controles del sistema inmediatamente despu s de tomar las muestras y almac nelos tapados entre 2 y 8 C en el vial original Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el
8. 9 6 80 6 95 4 QUANTA Flash Ro60 Precision y reproducibilidad La precisi n del ensayo QUANTA Flash Ro60 se ha evaluado analizando 9 muestras de suero seg n el documento EP5 A2 del CLSI Los datos obtenidos se resumen a continuaci n Intraensayo Interensayo Interd a Total Muestra N Media DE CV DE CV DE CV DE CV 1 96 797 9 36 77 4 6 50 19 6 3 20 78 2 6 65 6 8 2 2 96 26 0 1 06 4 1 2 51 9 6 0 00 0 0 2 73 10 5 3 84 12 4 035 2 9 0 36 2 9 0 10 0 8 0 51 4 1 4 96 188 0 10 84 5 8 12 04 6 4 0 00 0 0 16 20 8 6 5 96 69 1 1 82 2 6 1 81 2 6 0 58 0 8 2 63 3 8 6 88 409 1 15 01 3 7 13 99 34 7 75 1 9 21 93 5 4 7 92 23 4 0 85 3 6 1 21 5 2 0 18 0 8 1 49 6 4 8 96 9 0 0 29 3 2 0 56 62 0 15 16 0 65 7 1 9 96 20 8 1 08 5 2 1 29 6 2 0 30 15 1 70 8 2 Rango de medici n anal tica l mites y linealidad El rango de medici n anal tica AMR del ensayo va de 4 9 CU a 1 374 8 CU Si la opci n Auto Rerun est activada el instrumento volver a analizar de manera autom tica cualquier muestra con un resultado superior a 1 374 8 CU diluy ndola nuevamente seg n un factor de 20 y calcular las CU utilizando este factor de diluci n adicional La funci n Auto Rerun ampl a el intervalo notificable a 27 496 CU El l mite de detecci n de este ensayo es 527 RLU un valor inferior al AMR del ensayo 4 9 CU
9. QUANTA Flash Ro60 701148 Reactivos Para uso diagn stico In Vitro SOLO PARA EXPORTACI N NO COMERCIALIZABLE EN ESTADOS UNIDOS Uso previsto El QUANTA Flash Ro60 es un inmunoensayo por quimioluminiscencia para la determinaci n semicuantitativa de autoanticuerpos anti Ro60 SS A 60 en suero humano La presencia de autoanticuerpos anti Ro60 sirve de ayuda en el diagn stico del lupus eritematoso sist mico LES y del s ndrome de Sj gren junto con datos cl nicos y otras pruebas de laboratorio Resumen y explicaci n de la prueba Dado que los anticuerpos antinucleares ANA se encuentran en una gran variedad de enfermedades del tejido conjuntivo permiten realizar ensayos de detecci n sensibles Los sueros positivos para los ANA reaccionan con varios ant genos nucleares diferentes incluidas las ribonucleoprote nas nucleares peque as como el ant geno A SS A Ro del s ndrome de Sj gren El anticuerpo anti Ro descrito por primera vez en el lupus eritematoso sist mico LES y el s ndrome de Sj gren SS presenta la especificidad m s prevalente entre los anticuerpos contra los ant genos nucleares extra bles ENA Se han descrito dos tipos de anticuerpos anti Ro el anti SS A 52 kDa Ro52 y el anti SS A 60 kDa Ro60 cada uno de ellos espec fico para diferentes ant genos Hist ricamente estos autoanticuerpos se han considerado un sistema de autoanticuerpos uniforme Sin embargo varios estudios recientes han demost
10. a clic en el bot n New QC Lot Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote Introduzca la informaci n de esta hoja de datos en el software Dicha informaci n debe comprender el n mero de lote la caducidad la dosis objetivo y la DE objetivo Si es necesario haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir debe estar marcada marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo Ro60 en la lista y haga clic en Add Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Se recomienda utilizar una vez los controles QUANTA Flash Ro60 los d as en que se realice el ensayo Cada control debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del control y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en el carrusel de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del control e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Trazabilidad No
11. a utilizarse con los reactivos QUANTA Flash Ro60 para la determinaci n de autoanticuerpos IgG anti Ro60 en suero humano Cada calibrador establece un punto de referencia para la curva de trabajo que se emplea para calcular los valores unitarios Resumen y principios del procedimiento El inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash Ro60 usa una curva maestra predefinida espec fica de cada lote que se guarda en el c digo de barras del cartucho de reactivos Los calibradores QUANTA Flash Ro60 est n dise ados para generar una curva de trabajo espec fica para el instrumento a partir de los par metros de la curva maestra con un punto de decisi n basado en las caracter sticas de rendimiento y en la evaluaci n cl nica del CIA QUANTA Flash Ro60 Los calibradores se analizan en varios instrumentos con diversos lotes de reactivos antes de efectuar la asignaci n de valores Reactivos 1 Calibrador 1 del QUANTA Flash Ro60 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para usar Los calibradores contienen anticuerpos humanos anti Ro60 con estabilizantes y conservantes 2 Calibrador 2 del QUANTA Flash Ro60 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para usar Los calibradores contienen anticuerpos humanos anti Ro60 con estabilizantes y conservantes Advertencias 1 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los cal
12. con todo cuidado para no derramar los reactivos Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los cartuchos de reactivos no abiertos y el tamp n de resuspensi n entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento y permanecen estables durante 37 d as tras lo cual deben desecharse El software BIO FLASH supervisa las fechas de caducidad de los cartuchos cargados as como las de los lotes de cartuchos de reactivos Recogida preparaci n y manejo de las muestras Este procedimiento debe realizarse en una muestra de suero No deben utilizarse muestras que est n contaminadas con microorganismos que hayan recibido un tratamiento por calor o que contengan part culas visibles Tras la recogida el suero debe separarse del co gulo El documento H18 A4 del CLSI recomienda las siguientes condiciones de almacenamiento de muestras 1 No guarde las muestras a temperatura ambiente durante m s de 8 ho
13. de estas especificidades Se han utilizado varios m todos incluidas la doble difusi n de Ouchterlony y la hemoaglutinaci n pasiva para detectar anticuerpos anti Ro60 Tambi n se han desarrollado ensayos ELISA con utilidad cl nica El QUANTA Flash Ro60 es un inmunoensayo por quimioluminiscencia muy sensible para la detecci n y la determinaci n de anticuerpos anti Ro60 que proporciona resultados semicuantitativos en un amplio rango de medici n anal tica y ofrece la comodidad de un acceso aleatorio una carga continua de muestras y un corto tiempo de an lisis Principios del procedimiento Se recubren particulas paramagn ticas con antigeno Ro60 recombinante purificado y se guardan en el cartucho de reactivos en unas condiciones que mantienen el antigeno en su estado reactivo Cuando el cartucho del ensayo est preparado para el primer uso se a ade una soluci n tamp n al tubo que contiene las part culas y estas se mezclan con el tamp n A continuaci n se coloca el cartucho de reactivos en el instrumento BIO FLASH Se diluye una muestra de suero del paciente en el instrumento usando l quido de lavado del sistema en una cubeta desechable de pl stico Se combinan en una segunda cubeta y se mezclan peque as cantidades del suero de paciente diluido las part culas de Ro60 y el tamp n de an lisis Esta cubeta se incuba a 37 C y despu s se magnetizan las part culas y se lavan varias veces A continuaci n se a aden anticuerpo
14. de residuos s lidos abra el caj n de residuos Retire el recipiente de residuos s lidos y elimine de forma adecuada las cubetas usadas Vuelva a colocar el recipiente de residuos s lidos en su lugar cierre el caj n de residuos y haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Para sustituir los iniciadores haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 de la parte superior derecha a En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Triggers situado a la izquierda Se abrir la ventana Add Triggers Remove old bottles b Abra el caj n de residuos del instrumento BIO FLASH y extr igalo Deposite todas las cubetas en el caj n de residuos secos Haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Retire los frascos del iniciador de sus soportes y haga clic en el bot n Next Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustit yalos por nuevos iniciadores Realice la operaci n frasco a frasco y respete el c digo de color de los tapones blanco blanco rojo rojo c Siga las instrucciones de la ventana que se abrir Add Triggers Add Trigger 2 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco Haga clic en Next d Siga las instrucciones de la ventana Add Triggers Add Trigger 1 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo Haga clic en Finish Vuelva a colocar el caj n de residuos en su lugar y ci
15. e Sj gren s International Collaborative Clinical Alliance Cohort American College of Rheumatology 2012 64 4 475 487 Kephart DC Hood AF Provost TT Neonatal lupus erythematosus New serological findings J Invest Derm 1981 77 331 333 Friedman DM Rupel A Buyon JP Epidemiology etiology detection and treatment of autoantibody associated congenital heart block in neonatal lupus Curr Rheumatol Rep 2007 9 2 101 108 Buyon JP Neonatal lupus bedside to bench and back Scand J Rheumatol 1996 25 5 271 276 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL 5 Edition Centers for Disease Control National Institute of Health 2009 Simbolos utilizados S O S ls LOT pete o j a o re O ONTR o i E e EE Producto sanitario para diagn stico In Vitro Consulte las instrucciones de uso L mites de temperatura No reutilizar Riesgos biol gicos C digo del lote N mero de cat logo Fecha de caducidad Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para lt n gt an lisis Control positivo Control negativo Calibrador 1 Calibrador 2 Caja de cart n reciclable Mantener en esta posici n QUANTA Flash es una marca comercial registrada de INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH es una marca comercial registrada de Biokit SA 2012 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Un
16. est disponible ning n suero de referencia internacional para los anticuerpos anti Ro60 que permita estandarizar los ensayos con estos anticuerpos En su lugar se ha analizado el suero de referencia del Center of Disease Control and Prevention para anticuerpos anti Ro60 152076 ANA num 7 anti SS A Ro y se ha determinado una concentraci n gt 1 374 8 CU Limitaciones Estos controles est n dise ados para 15 usos La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que pueden marcarse para controlar el n mero de usos El tiempo m ximo durante el cual los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante m s tiempo deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Bibliografia 1 Kavanaugh A Tomar R Reveille J Solomon DH Homburger HA Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific autoantibodies to nuclear antigens American College of Pathologists Arch Pathol Lab Med 2000 124 1 71 81 Egner W The use of laboratory tests in the diagnosis of SLE J Clin Pathol 2000 53 6 424 432 Alspaugh MA N Talal and EM Tan Differentiation and characterization of autoantibodies and their antigens in Sj gren s syndrome Arthritis Rheu
17. ibradores est n dise ados para realizar 4 calibraciones El tiempo m ximo durante el cual los tubos del calibrador pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 8 horas Si los calibradores permanecen destapados en el instrumento durante m s de 8 horas deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de calibrador para m s de 4 calibraciones y o durante m s de 8 horas es posible que la calibraci n del ensayo sea incorrecta lo que producir resultados err neos QUANTA Flash Ro60 701147 Controles Para uso diagn stico In Vitro SOLO PARA EXPORTACION NO COMERCIALIZABLE EN ESTADOS UNIDOS Uso previsto Los controles QUANTA Flash Ro60 est n destinados a utilizarse con los reactivos QUANTA Flash Ro60 para la determinaci n de autoanticuerpos IgG anti Ro60 en suero humano Resumen y principios del procedimiento Los controles QUANTA Flash Ro60 est n constituidos por un control negativo y un control positivo Cada uno de ellos contiene una cantidad diferente de anticuerpos anti Ro60 El control negativo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles muy bajos de autoanticuerpos El control positivo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles de autoanticuerpos entre moderados y altos Reactivos 1 Control negativo QUANTA Flash Ro60 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles cont
18. ibradores para este producto se ha analizado y ha arrojado resultados negativos con respecto a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los calibradores del QUANTA Flash Ro60 deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 2 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 3 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Los calibradores del QUANTA Flash Ro60 deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash Ro60 No transfiera los reactivos de los calibradores a otros tubos El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para ajustar los calibradores al tipo de an lisis adecuado Una vez abiertos los tubos los calibradores pueden utilizarse durante un m ximo de 8 horas o 4 calibraciones transcurrido este tiempo los reactivos deben desecharse Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a
19. idos de Am rica Servicio t cnico solo para EE UU y Canada 877 829 4745 Servicio t cnico fuera de EE UU 1 858 805 7950 support inovadx com Representante autorizado en la UE Medical Technology Promedt Consulting GmBH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621145ESP Octubre 2012 Revision 0
20. ienen anticuerpos humanos anti Ro60 con estabilizantes y conservantes 2 Control positivo QUANTA Flash Ro60 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos humanos anti Ro60 con estabilizantes y conservantes Advertencias 1 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto se ha analizado y ha arrojado resultados negativos con respecto a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los controles QUANTA Flash Ro60 deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Los controles del QUANTA Flash Ro60 deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash Ro60 No transfiera los reactivos de los controles a otros tubos El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para identificar al control 4 Cada tubo de control una vez abierto es v lido para 1
21. lizar los controles Se recomienda analizar los controles una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local C lculo de los resultados INOVA genera una curva maestra de cinco puntos para cada nuevo lote del QUANTA Flash Ro60 Esta curva log stica de cuatro par metros se codifica mediante el c digo de barras de cada cartucho de reactivos Una vez calibrado un cartucho de reactivos se utilizar una curva de trabajo espec fica del instrumento para convertir las RLU a CU La reactividad del anticuerpo frente al Ro60 puede entonces clasificarse seg n la tabla siguiente Reactividad CU Negativa lt 20 Positiva 220 La reactividad expresada en CU est directamente relacionada con la valoraci n de autoanticuerpos en la muestra del paciente Los aumentos y disminuciones de las concentraciones de autoanticuerpos en los pacientes se reflejar n en un correspondiente aumento o disminuci n de la CU que es proporcional a la cantidad de anticuerpos El intervalo de medici n anal tica AMR del ensayo va de 4 9 CU a 1 374 8 CU Si el resultado de un paciente es inferior a 4 9 CU el sistema BIO FLASH indicar lt 4 9 CU Dado que es un valor inferior a 20 CU se considera un resultado negativo Si el resultado de un paciente es superior a 1 374 8 CU el sistema BIO FLASH indicar gt 1 374 8 CU Este valor se considera un resultado posi
22. m 1976 19 216 222 Alexander EL Hirsch TJ Arnett FC Provost TT Stevens MB Ro SS A and La SS B antibodies in the clinical spectrum of Sjogren s Syndrome J Rheumatology 1982 9 239 246 Schulte Pelkum J Fritzler M Mahler M Latest update on the Ro SS A autoantibody system Autoimmun Rev 2009 8 7 632 637 S nchez Guerrero J Lew RA Fossel AH Schur PH Utility of anti Sm anti RNP anti Ro SS A and anti La SS B extractable nuclear antigens detected by enzyme linked immunosorbent assay for the diagnosis of systemic lupus erythematosus Arthritis Rheum 1996 39 6 1055 1061 Moutsopoulos HM Zerva LV Anti Ro SSA La SSB antibodies and Sj grengapos s syndrome Clin Rheumatol 1990 Mar 9 1 Suppl 1 123 30 Maddison PJ Provost TT and Reichlin M Serological findings in patients with amp quot ANA negative amp quot systemic lupus erythematosus Medicine 1981 60 87 93 Shiboski SC Shiboski CH Criswell LA Baer AN Challacombe S Lanfranchi H Schigdt M Umehara H Vivino F Zhao Y Dong Y Greenspan D Heidenreich AM Helin P Kirkham B Kitagawa K Larkin G Li M Lietman T Lindegaard J McNamara N Sack K Shirlaw P Sugai S Vollenweider C Whitcher J Wu A Zhang S Zhang W Greenspan JS Daniels TE for the Sj gren s International Collaborative Clinical Alliance SICCA Research Groups American College of Rheumatology Classification Criteria for Sj gren s Syndrome A Data Driven Expert Consensus Approach in th
23. o el suero de referencia del Center of Disease Control and Prevention para anticuerpos anti Ro60 152076 ANA num 7 anti SS A Ro y se ha determinado una concentraci n gt 1 374 8 CU Limitaciones del procedimiento 1 No todos los pacientes con LES o s ndrome de Sj gren son positivos para los anticuerpos anti Ro60 2 Los resultados de este an lisis deben utilizarse junto con datos cl nicos y otras pruebas serol gicas 3 Si la resuspensi n de las part culas recubiertas de Ro60 no se efect a de un modo adecuado pueden obtenerse resultados inferiores en comparaci n con los an lisis que han tenido una resuspensi n adecuada 4 Las caracteristicas de funcionamiento de este ensayo no se han establecido para matrices de muestras distintas del suero Intervalo de referencia El l mite de detecci n del ensayo se ha determinado utilizando 156 muestras de sujetos de referencia 115 muestras de donantes de sangre aparentemente sanos 15 hombres y 100 mujeres edades 19 69 8 muestras positivas para la hepatitis v rica 6 hombres y 2 mujeres edades 19 54 5 muestras positivas para la s filis 1 hombre y 4 mujeres edades 27 57 5 muestras positivas para el VIH 4 hombres y 1 mujer edades 28 51 y 23 muestras de AR los datos de edad y sexo no est n disponibles El l mite de detecci n se ha establecido como superior al percentil 99 de los resultados obtenidos en los sujetos de referencia y se le ha asignado un valor de 20 CU
24. o60 en el LES An lisis cl nico Diagn stico An lisis n 224 LES Sin LES intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 26 0 17 7 35 7 Negativo Especificidad 98 4 94 3 99 8 Total QUANTA Flash Ro60 Comparacion de metodos con un instrumento destinado al mismo fin Las muestras para el an lisis de comparaci n de m todos han sido aquellas muestras de los estudios de validaci n cl nica pacientes con SS y LES otros controles de enfermedad y donantes de sangre aparentemente sanos que se encontraban dentro del intervalo notificable del ensayo Dichas muestras se analizaron mediante el QUANTA Flash Ro60 y un ELISA destinado al mismo fin Los datos se presentan de dos maneras con las muestras de ELISA dudosas como negativas en la primera tabla y despu s como positivas en la tabla siguiente Comparaci n de m todos N 77 ELISA Ro60 Muestra de ELISA dudosa como negativa Negativo Conc pos 98 0 89 1 99 9 Positivo Conc neg 75 0 55 1 89 3 Total Conc total 89 6 80 6 95 4 Porcentaje de concordancia Negativo Positivo intervalo de confianza 95 QUANTA Flash Ro60 Comparaci n de m todos N 77 ELISA Ro60 Muestra de ELISA dudosa como positiva Porcentaje de concordancia Negativo Positivo intervalo de confianza 95 Negativo Conc pos 96 1 86 5 99 5 Positivo Conc neg 76 9 56 4 91 0 Total Conc total 8
25. p n estabilizantes de prote nas y conservante 2 Tamp n de resuspensi n de color rosa en un vial que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 El tamp n del ensayo contiene una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 4 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones Pon gt Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Este ensayo solo debe utilizarse con el instrumento BIO FLASH Se recomienda seguir estrictamente el protocolo de resuspensi n indicado Una vez abierto el cartucho de reactivos debe almacenarse en la bandeja de reactivos del instrumento La colocaci n del cartucho de reactivos en el instrumento por primera vez debe realizarse
26. quedar ocultas NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO 3 Resuspenda las micropart culas de Ro60 a Destape el vial del tamp n de resuspensi n y recoja l quido con la pipeta de transferencia suministrada Se utilizar todo el contenido del vial b Presione suavemente el lateral estrecho del cartucho de reactivos para deslizar la tapa del cartucho a la posici n abierta y mant ngala as Transfiera analiticamente todo el contenido del vial al tubo de reactivo de micropart culas a trav s del orificio nico de la parte superior del cartucho de reactivos C Mezcle el contenido del tubo de reactivo de microparticulas aspirando y dispensando el l quido al menos 30 veces Si se observan masas visibles de part culas contin e mezclando la soluci n 30 veces m s Si las micropart culas no se resuspenden NO UTILICE EL CARTUCHO d Aseg rese de dispensar todo el l quido antes de retirar la pipeta del tubo y desecharla 4 Retire el adhesivo de la parte superior del cartucho de reactivos para descubrir los otros tres orificios 5 Coloque el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carrusel de reactivos del instrumento BIO FLASH Calibracion del ensayo 1 Cada nuevo lote de cartuchos de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Consulte el apartado Calibradores QUANTA Flash Ro60 701146 de este documento para obtener ins
27. rado que el Ro60 y el Ro52 no forman parte de un complejo macromolecular estable y que los anticuerpos anti Ro52 y anti Ro60 presentan distintas asociaciones cl nicas Los anticuerpos Ro60 reaccionan con una prote na de uni n al ARN de 60 kDa y se detectan con frecuencia junto a los anticuerpos anti Ro52 y anti SS B Los autoanticuerpos anti Ro60 se encuentran en el 30 50 de los pacientes con LES y en el 50 80 de los pacientes con s ndrome de Sj gren Los anticuerpos anti Ro60 tambi n se han detectado en pacientes con caracter sticas cl nicas de LES que son negativos para ANA Un resultado positivo para anticuerpos anti Ro60 es uno de los tres criterios indicados en la lista de criterios de clasificaci n del American College of Rheumatology para el s ndrome de Sj gren Asimismo tanto los anticuerpos anti Ro60 como los anti Ro52 presentan un significado diagn stico especial en el bloqueo cardiaco cong nito El bloqueo auriculoventricular completo cong nito aislado CAVB muestra una estrecha asociaci n con los anticuerpos anti Ro y anti SSB maternales Es importante destacar que la reactividad simple a Ro52 o Ro60 puede omitirse cuando se determina mediante un ELISA cl sico basado en una mezcla de ambos ant genos Aproximadamente el 20 de las muestras positivas para Ro52 o Ro60 pueden pasar desapercibidas si se utiliza una mezcla de ambos antigenos Por tanto es importante realizar por separado un an lisis de detecci n
28. ras 2 Si el an lisis no se efect a en un plazo de 8 horas refrigere las muestras a una temperatura de2a8 C 3 Si el an lisis no va a realizarse en un plazo de 48 horas o si debe preparar las muestras para enviarlas cong lelas a una temperatura de 20 C o inferior Las muestras congeladas deben mezclarse bien despu s de descongelarse y antes del an lisis Procedimiento Materiales suministrados 1 1 1 Cartucho de reactivos QUANTA Flash Ro60 Tamp n de resuspensi n Pipeta de transferencia Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO FLASH con ordenador para manejarlo Liquido de lavado del sistema BIO FLASH numero de componente 3000 8205 Iniciadores BIO FLASH numero de componente 3000 8204 Cubetas BIO FLASH numero de componente 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash Ro60 numero de componente 701 146 Controles QUANTA Flash Ro60 numero de componente 701147 Uso del analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH 1 Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Para obtener m s informaci n o solucionar problemas relativos a este ensayo p ngase en contacto con el servicio t cnico de INOVA Diagnostics Inc en la direcci n o n mero de tel fono indicados al final de estas instrucciones de uso Para vaciar el recipiente
29. s anti lgG humana conjugados con isoluminol a la cubeta y se incuba a 37 C De nuevo las part culas se magnetizan y se lavan repetidamente El conjugado de isoluminol produce una reacci n luminiscente cuando se a aden a la cubeta los reactivos iniciadores La luz generada por la reacci n se mide como unidades relativas de luz RLU mediante el sistema ptico del BIO FLASH El n mero de RLU es proporcional a la cantidad de conjugado de isoluminol ligado que a su vez es proporcional a la cantidad de anticuerpos anti Ro60 unidos al Ro60 en las part culas El ensayo QUANTA Flash Ro60 utiliza una curva maestra predefinida espec fica para cada lote que se carga en el instrumento mediante el c digo de barras del cartucho de reactivos A partir de los resultados obtenidos mediante el an lisis de dos calibradores se genera una curva de trabajo espec fica para el instrumento que el software utiliza para calcular las unidades de quimioluminiscencia CU bas ndose en el valor en RLU obtenido para cada muestra Reactivos 1 El cartucho de reactivos del QUANTA Flash Ro60 contiene los siguientes reactivos para 50 determinaciones a Part culas paramagn ticas recubiertas de Ro60 conservadas antes del primer uso b Tamp n del ensayo de color rosa que contiene soluci n salina tamponada con Tris Tween 20 estabilizantes de prote nas y conservantes C IgG trazadora anticuerpos anti IgG humana marcados con isoluminol que contiene tam
30. tivo El software BIO FLASH dispone de una opci n denominada Auto Rerun Si esta opci n est seleccionada el instrumento volver a analizar de manera autom tica cualquier muestra con un resultado superior a 1 374 8 CU diluy ndola nuevamente seg n un factor de 20 y calcular las CU utilizando este factor de diluci n adicional La funci n Auto Rerun ampl a el intervalo notificable a 27 496 CU Interpretaci n de los resultados El ensayo QUANTA Flash permite detectar peque as diferencias en las poblaciones de pacientes Se aconseja que cada laboratorio verifique el intervalo de referencia indicado por el fabricante y si lo desea establezca su propio intervalo normal a partir de sus propios controles y su poblaci n de pacientes de acuerdo con sus procedimientos particulares Es recomendable que los resultados comunicados por el laboratorio incluyan la informaci n siguiente Los siguientes resultados se han obtenido mediante el inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash Ro60 de INOVA Es posible que los valores obtenidos con m todos de ensayo de otros fabricantes no sean intercambiables con dichos resultados La magnitud de los niveles de autoanticuerpos obtenidos no siempre puede correlacionarse con una valoraci n de punto final Trazabilidad No est disponible ning n suero de referencia internacional para los anticuerpos anti Ro60 que permita estandarizar los ensayos con estos anticuerpos En su lugar se ha analizad
31. trucciones de uso detalladas sobre c mo calibrar el cartucho de reactivos 3 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Programaci n y an lisis de las muestras 1 Pulse el bot n Worklist de la parte superior de la pantalla y seleccione la pesta a Racks de la parte inferior 2 Seleccione la gradilla de muestras que se utilizar marc ndola en la pantalla o escaneando su c digo de barras con el lector manual Escanee o escriba el nombre de la muestra indique el tipo de muestra elija el tipo de recipiente tubo copa y seleccione Ro60 en el panel del ensayo Repita estos pasos para todas las muestras 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y coloque esta en el carrusel de muestras del instrumento 4 Cuando todos los materiales necesarios est n cargados en el instrumento el icono de inicio pasara a estar disponible en color verde en la parte superior de la pantalla Pulse el icono Start F4 para comenzar el an lisis Control de calidad Los controles QUANTA Flash Ro60 vendidos por separado n mero de producto de INOVA 701147 contienen los controles positivos y negativos para Ro60 Consulte el apartado Controles QUANTA Flash Ro60 701147 de este documento para obtener instrucciones detalladas sobre c mo introducir en el software todos los datos necesarios de cada control y c mo ana
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