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Reactivos

1. Para uso diagn stico In Vitro SOLO PARA EXPORTACION NO COMERCIALIZABLE EN ESTADOS UNIDOS Uso previsto Los Controles QUANTA Flash Ro52 estan destinados a utilizarse con los Reactivos QUANTA Flash Ro52 para el control de calidad en la determinaci n de autoanticuerpos IgG anti Ro52 en suero humano Resumen y principios del procedimiento Los Controles QUANTA Flash Ro52 est n constituidos por un control negativo y un control positivo Cada uno de ellos contiene una cantidad diferente de anticuerpos anti Ro52 El control negativo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles muy bajos de autoanticuerpos El control positivo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles de autoanticuerpos entre moderados y altos Reactivos 1 Control negativo QUANTA Flash Ro52 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos humanos anti Ro52 con estabilizantes y conservantes 2 Control positivo QUANTA Flash Ro52 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos humanos anti Ro52 con estabilizantes y conservantes Advertencias 1 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente
2. Guarde los controles no abiertos entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado 2 Los controles abiertos son v lidos para 15 usos y pueden permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso El tiempo m ximo durante el que los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Si los controles permanecen destapados en el instrumento durante m s de 2 5 horas en total deben desecharse Si se utiliza el mismo tubo de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos 3 Para conseguir una estabilidad ptima retire los controles del sistema inmediatamente despu s de tomar las muestras y almac nelos tapados entre 2 y 8 C en el vial original Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el ensayo Ro52 1 Antes de utilizar los controles QUANTA Flash Ro52 por primera vez en el instrumento introduzca en el software el nombre el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo 2 En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M v Seleccione QC Ctrl F2 Haga clic en el bot n New QC Material 3 Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote En primer lugar introduzca en el software el
3. CU Pendiente IC del 95 Intersecci n en Y IC del 95 R2 Todas las _ muestras De 0 6 a 1 758 6 1 03 de 1 02 a 1 04 3 61 de 0 86 a 8 08 1 00 Interferencia y reactividad cruzada No se ha detectado interferencia con una concentraci n de hemoglobina de hasta 200 mg dL de triglic ridos de hasta 1 000 mg dL de colesterol de hasta 224 3 mg dL de bilirrubina de hasta 10 mg dL y de IgM anti RF de hasta 500 Ul mL Se han analizado 96 muestras de pacientes con diversas enfermedades autoinmunes e infecciosas para evaluar la reactividad cruzada Una muestra de un paciente con hepatitis v rica y dos muestras de pacientes con artritis reumatoide fueron positivas en el CIA QUANTA Flash Ro52 QUANTA Flash Ro52 701261 Calibradores Para uso diagn stico In Vitro SOLO PARA EXPORTACION NO COMERCIALIZABLE EN ESTADOS UNIDOS Uso previsto Los Calibradores QUANTA Flash Ro52 est n destinados a utilizarse con los Reactivos QUANTA Flash Ro52 para la determinaci n de autoanticuerpos IgG anti Ro52 en suero humano Cada calibrador establece un punto de referencia para la curva de trabajo que se emplea para calcular los valores unitarios Resumen y principios del procedimiento El inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash Ro52 usa una curva maestra predefinida espec fica de cada lote que se guarda en el c digo de barras del cartucho de reactivos Los Calibradores QUANTA Flash Ro52 est n dise ados par
4. QUANTA Flash Ro52 para la ES An lisis cl nico Diagn stico An lisis n 144 ES Sin ES Total intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 12 5 4 7 25 2 QUANTA Flash Ro52 Negativo Especificidad 96 9 91 1 99 4 Total Sensibilidad y especificidad clinicas del QUANTA Flash Ro52 para la MAI An lisis cl nico Diagn stico An lisis n 136 Sin MAI Total intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 35 0 20 6 51 7 QUANTA Flash Ro52 Negativo Especificidad 96 9 91 1 99 4 Total Comparacion de metodos con un instrumento destinado al mismo fin Las muestras para el an lisis de comparaci n de m todos han sido aquellas muestras de los estudios de validaci n cl nica pacientes con SS LES ES y MAI otros controles de enfermedad y donantes de sangre aparentemente sanos que se encontraban dentro del intervalo notificable del ensayo Sesenta y seis de dichas muestras se analizaron mediante el QUANTA Flash Ro52 y un ELISA destinado al mismo fin La tabla siguiente presenta los datos obtenidos ELISA Ro52 Porcentaje de concordancia Negativo Positivo intervalo de confianza 95 Negativo Conc pos 90 0 68 3 98 8 Comparaci n de m todos N 62 QUANTA Flash iti Conc neg 95 2 83 8 99 4 CIA Ro52 Positivo g Total Conc total 93 5 84 3 98 2 Precision y reproducibilidad La precisi n
5. al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia de VIH VHB VHC u otros agentes infecciosos Por ello los Controles QUANTA Flash Ro52 deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 2 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 3 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Los Controles QUANTA Flash Ro52 deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash Ro52 3 No transfiera los reactivos de los controles a otros tubos El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para identificar al control 4 Cada tubo de control una vez abierto es v lido para 15 usos y puede permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso 5 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1
6. lote N mero de cat logo Caducidad Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para lt n gt an lisis ONTR Control positivo ONTROL Control negativo Calibrador 1 Calibrador 2 Caja de cart n reciclable B DEBT lt gl Ee O gt Es Mantener en esta posici n QUANTA Flash es una marca comercial de INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH es una marca 17 comercial registrada de Biokit SA 2012 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos de Am rica Servicio t cnico solo para EE UU y Canada 877 829 4745 Servicio t cnico fuera de EE UU 1 858 805 7950 support inovadx com Representante autorizado en la UE Medical Technology Promedt Consulting GmBH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621260ESP Noviembre de 2012 Revisi n 0
7. nombre el n mero de lote y la caducidad que figuran en esta hoja de datos A continuaci n haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir debe estar marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo Ro52 de la lista y haga clic en Add Por ltimo introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes 1 Antes de utilizar un nuevo lote de los Controles QUANTA Flash Ro52 por primera vez introduzca en el software el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo 2 En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Cirl M v Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo Ro52 en la columna de la izquierda A continuaci n seleccione el material de control apropiado en la derecha Ro52N para el control negativo o bien Ro52P para el control positivo Haga clic en el bot n New QC Lot 3 Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote Introduzca la informaci n de esta hoja de datos en el software Dicha informaci n debe comprender el n mero de lote la caducidad la dosis objetivo y la DE objetivo Si es necesario haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir debe estar marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo Ro52 de la lista y haga clic en Add Haga clic en Save Realice este
8. proceso para ambos controles Se recomienda utilizar una vez los Controles QUANTA Flash Ro52 los d as en que se realice el ensayo Cada control debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del control y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del control e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Trazabilidad No esta disponible ningun suero de referencia internacional para los anticuerpos anti Ro52 que permita estandarizar los ensayos con estos anticuerpos En su lugar se ha analizado el suero de referencia del Center of Disease Control and Prevention para anticuerpos anti SS A Ro 152105 ANA n m 7 anti SS A Ro y se ha determinado una concentraci n de 40 8 CU Limitaciones Estos controles est n dise ados para 15 usos La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que puede
9. suero de pacientes con SS 40 70 o LES 20 40 Adem s los anticuerpos anti Ro tienen un especial significado diagn stico en el bloqueo cardiaco cong nito El bloqueo auriculoventricular completo cong nito aislado CAVB muestra una estrecha asociaci n con los anticuerpos anti Ro y anti SS B La maternales y los riesgos relativos m s elevados del CAVB se observan en la progenie de madres que poseen anticuerpos contra las prote nas Ro de 52 kDa y SS B de 48 kDa Los anticuerpos anti Ro52 pueden pasar desapercibidos en los an lisis serol gicos utilizados com nmente para el ant geno Ro Cabe destacar que la reactividad simple frente al Ro52 o Ro60 puede pasar por alto cuando se determina mediante un ELISA cl sico para Ro basado en una mezcla de ambos ant genos Es posible que aproximadamente el 20 de las muestras positivas para el Ro52 o Ro60 no sean detectadas si se utiliza una mezcla de ambos antigenos Por tanto es importante realizar an lisis separados para cada una de las dos especificidades de anticuerpos Si bien la mayor a de las veces el anti Ro52 se encuentra en pacientes con LES y SS junto al anti Ro60 se ha descrito una alta frecuencia de anti Ro52 aislado en pacientes con esclerosis sist mica ES polimiositis PM y dermatomiositis DM La prevalencia de anti Ro52 en la ES y en la miositis es significativamente m s elevada que la de anti Ro60 Una estudio basado en 1 010 pacientes afectados de ES obtuvo u
10. Con el l mite de detecci n de 20 CU ninguna de las muestras dio un resultado positivo en el QUANTA Flash Ro52 La concentraci n media fue de 8 3 CU y los valores oscilaron entre lt 2 3 CU y 19 3 CU Sensibilidad y especificidad clinicas En el estudio de validaci n cl nica se utilizaron en total 289 muestras de pacientes 81 con LES 24 con s ndrome de Sj gren 48 con ES y 40 con miositis autoinmune MAI Sirvieron de controles 50 pacientes con artritis reumatoide 20 con enfermedad tiroidea autoinmune 11 con enfermedad cel aca y 15 con varias enfermedades infecciosas La sensibilidad y la especificidad cl nicas para SS n 24 LES n 81 ES n 48 y MAI n 40 utilizando la poblaci n de control n 96 se calcula en las cuatro tablas que figuran a continuaci n Sensibilidad y especificidad cl nicas del QUANTA Flash Ro52 para el SS An lisis cl nico Diagn stico An lisis n 120 Sin SS Total intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 58 3 36 6 77 9 QUANTA Flash Ro52 Negativo Especificidad 96 9 91 1 99 4 Total Sensibilidad y especificidad cl nicas del QUANTA Flash Ro52 para el LES An lisis cl nico Diagn stico An lisis n 177 LES Sin LES Total intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 44 4 33 4 55 9 QUANTA Flash Ro52 Negativo Especificidad 96 9 91 1 99 4 Total Sensibilidad y especificidad cl nicas del
11. QUANTA Flash Ro52 701263 Reactivos Para uso diagnostico n Vitro SOLO PARA EXPORTACION NO COMERCIALIZABLE EN ESTADOS UNIDOS Uso previsto El QUANTA Flash Ro52 es un inmunoensayo por quimioluminiscencia para la determinaci n semicuantitativa de anticuerpos anti Ro52 SS A 52 en suero humano La presencia de anticuerpos anti Ro52 junto con resultados clinicos y otras pruebas de laboratorio puede ayudar a diagnosticar el lupus eritematoso sist mico el s ndrome de Sj gren la esclerosis sist mica la polimiositis y la dermatomiositis Resumen y explicaci n de la prueba Los anticuerpos anti Ro SS A descritos por primera vez en el lupus eritematoso sist mico SLE y en el s ndrome de Sj gren SS muestran la especificidad m s prevalente frente al ant geno nuclear extra ble ENA identificada en los laboratorios Se han descrito dos tipos de anticuerpo anti Ro el anti Ro de 52 kDa SS A 52 y el anti Ro de 60 kDa SS A 60 cada uno de ellos espec fico para un ant geno diferente Estos autoanticuerpos se han considerado tradicionalmente un sistema de autoanticuerpos uniforme pero estudios recientes han demostrado que el Ro60 y el Ro52 no forman parte de un complejo macromolecular estable y que los anticuerpos anti Ro52 y anti Ro60 presentan distintas asociaciones cl nicas Recientemente el ant geno Ro52 ha sido identificado como la prote na TRIM21 Los autoanticuerpos anti Ro52 est n presentes con frecuencia en el
12. a generar una curva de trabajo espec fica para el instrumento a partir de los par metros de la curva maestra con un punto de decisi n basado en las caracter sticas de rendimiento y en la evaluaci n cl nica del CIA QUANTA Flash Ro52 Los calibradores se analizan en varios instrumentos con diversos lotes de reactivos antes de efectuar la asignaci n de valores Reactivos 1 Calibrador 1 del QUANTA Flash Ro52 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para usar Los calibradores contienen anticuerpos humanos anti Ro52 con estabilizantes y conservantes 2 Calibrador 2 del QUANTA Flash Ro52 Dos tubos con etiqueta de c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para usar Los calibradores contienen anticuerpos humanos anti Ro52 con estabilizantes y conservantes Advertencias 1 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los calibradores para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia de VIH VHB VHC u otros agentes infecciosos Por ello los calibradores QUANTA Flash Ro52 deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 2 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con l
13. a nueva curva de trabajo como una l nea continua Si los resultados de la calibraci n son v lidos en la parte inferior izquierda de la pantalla aparecer un bot n de validaci n Haga clic en el bot n Validate Calibration Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Se recomienda analizar los Controles QUANTA Flash Ro52 vendidos por separado n mero de producto 701262 tras calibrar un lote de cartuchos de reactivos Trazabilidad No esta disponible ningun suero de referencia internacional para los anticuerpos anti Ro52 que permita estandarizar los ensayos con estos anticuerpos En su lugar se ha analizado el suero de referencia del Center of Disease Control and Prevention para anticuerpos anti SS A Ro 152105 ANA n m 7 anti SS A Ro y se ha determinado una concentraci n de 40 8 CU Limitaciones Estos calibradores est n dise ados para realizar 4 calibraciones El tiempo m ximo durante el que los tubos del calibrador pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 8 horas Si los calibradores permanecen destapados en el instrumento durante m s de 8 horas deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de calibrador para m s de 4 calibraciones y o durante m s de 8 horas es posible que la calibraci n del ensayo sea incorrecta lo que producir resultados err neos QUANTA Flash Ro52 701262 Controles
14. asta que descienda y alcance un tope Las pesta as deben quedar ocultas NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO 3 Resuspenda las micropart culas de Ro52 a Destape el vial del tamp n de resuspensi n y recoja l quido con la pipeta de transferencia suministrada Se utilizar todo el contenido del vial b Presione suavemente el lateral estrecho del cartucho de reactivos para deslizar la tapa del cartucho hasta la posici n abierta y mant ngala en esta posici n Transfiera anal ticamente todo el jn contenido del vial al tubo de reactivo de Y micropart culas a trav s del orificio nico de la parte superior del cartucho 30X slo de reactivos C Mezcle el contenido del tubo de reactivo D ES rn de micropart culas aspirando y dispensando el l quido al menos 30 veces Si se observan grupos visibles de part culas contin e mezclando la soluci n 30 veces m s Si las micropart culas no se resuspenden NO UTILICE EL CARTUCHO d Aseg rese de dispensar todo el l quido antes de retirar la pipeta del tubo y desecharla 4 Retire el adhesivo de la parte superior del cartucho de reactivos para descubrir los otros tres orificios 5 Coloque el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carrusel de reactivos del instrumento BIO FLASH Calibracion del ensayo 1 Cada nuevo lote de cartuchos de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta q
15. c en Finish Vuelva a colocar el caj n de residuos y ci rrelo Para sustituir el recipiente de l quido de lavado del sistema haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 en la esquina superior derecha En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Sys Rinse En la ventana que se abrir Add System Rinse Remove bottles haga clic en Next Siga las instrucciones de la nueva ventana que se abrir Add System Rinse Add bottle Una vez aceptado el c digo de barras haga clic en Finish si es necesario Para vaciar el recipiente de residuos l quidos en la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Fluid Waste Extraiga el residuo l quido y elim nelo Haga clic en Next Una vez sustituido el frasco vac o haga clic en Finish M todo Preparacion del cartucho de reactivos La primera vez que se utilice el cartucho de reactivos deben seguirse los pasos indicados a continuaci n para instalarlo adecuadamente en el instrumento BIO FLASH Nota No use el cartucho de reactivos si presenta cualquier signo de da o 1 Coloque el cartucho de reactivos sobre una superficie s lida Con una mano sostenga el cartucho de reactivos en su lugar Con la otra mano agarre con fuerza la pesta a roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente 2 Pulse las dos pesta as laterales del tap n de perforaci n parte gris y aplique presi n a la parte superior del cartucho de reactivos h
16. del ensayo QUANTA Flash Ro52 se ha evaluado analizando seis muestras de pacientes seg n el documento EP5 A2 del CLSI A continuaci n se resumen los datos obtenidos Intraensayo Interensayo Interd a Total Muestra N Media CU DE CV DE CV DE CV DE CV 1 84 13 43 0 56 4 1 0 29 2 2 1 55 11 6 1 68 12 5 2 84 21 36 0 90 4 2 0 42 20 2 26 10 6 2 47 11 5 3 84 61 56 2 86 4 6 1 39 2 3 5 12 8 3 6 03 9 8 4 84 144 15 9 49 6 6 0 00 0 0 14 16 9 8 17 04 11 8 5 88 275 83 16 62 6 0 0 00 0 0 25 67 9 3 30 58 11 1 6 80 820 46 56 42 6 9 33 78 4 1 51 26 6 2 83 37 10 2 Rango de medicion analitica limites y linealidad El rango de medici n anal tica AMR del ensayo va de 2 3 CU a 1 685 3 CU El l mite de detecci n de este ensayo es 668 9 RLU un valor inferior al AMR del ensayo 2 3 CU Se ha determinado que es consistente con la directriz EP17 A del CLSI con una proporci n de falsos positivos a y de falsos negativos p inferior al 5 El AMR completo que va de 2 3CU a 1 685 3 CU es lineal Se ha realizado un estudio de linealidad conforme al documento EP6 A del CLSI utilizando seis muestras de suero con diferentes concentraciones de anticuerpo anti Ro52 Cada una de las seis muestras present linealidad de diluci n y los datos combinados generaron los resultados siguientes con regresi n lineal Muestra Rango anal tico
17. eactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre Cada calibrador debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del calibrador y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del calibrador e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH El instrumento analizar cada calibrador por triplicado Una vez analizados los calibradores el software solicitar la validaci n de la calibraci n En la pantalla Instrument Summary haga clic en bot n de flecha Choose more options Ctrl M W Seleccione Calibration Ctrl F3 En la ventana de calibraci n marque el ensayo deseado y haga clic en Details En la ventana Calibration Details que se abrir seleccione la calibraci n que acaba de efectuar La curva maestra se visualizar como una l nea discontinua y l
18. humana marcados con isoluminol que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservante 2 Tamp n de resuspensi n de color rosa en un vial que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 El tamp n del ensayo contiene una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa que puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza pilas de lavado para eliminar los reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 4 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones Pon Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Este ensayo solo debe utilizarse con el instrumento BIO FLASH Se recomienda seguir estrictamente el protocolo de resuspensi n indicado Una vez abierto el cartucho de reactivos debe almacenarse en la bandeja de reactivos del instrumento La colocaci n por primera vez de
19. indicados al final de estas instrucciones de uso Para vaciar el recipiente de residuos s lidos abra el caj n de residuos Retire el recipiente de residuos s lidos y desh gase apropiadamente de las cubetas usadas Vuelva a colocar el recipiente de residuos s lidos cierre el caj n de residuos y haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Para sustituir los iniciadores haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 de la parte superior derecha a En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Triggers situado a la izquierda Se abrir la ventana Add Triggers Remove old bottles b Abra el caj n de residuos del instrumento BIO FLASH y extr igalo Deposite todas las cubetas en el caj n de residuos secos Haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Retire los frascos del iniciador de sus soportes y haga clic en el bot n Next Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustit yalos por nuevos iniciadores Realice la operaci n frasco a frasco y respete el c digo de color de los tapones blanco blanco rojo rojo c Siga las instrucciones de la ventana que se abrir Add Triggers Add Trigger 2 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco Haga clic en Next d Siga las instrucciones de la ventana Add Triggers Add Trigger 1 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo Haga cli
20. l cartucho de reactivos en el instrumento debe realizarse con todo cuidado para no derramar reactivos Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los cartuchos de reactivos no abiertos y el tamp n de resuspensi n entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento Permanecen estables durante 24 d as y deben desecharse transcurrido este tiempo El software BIO FLASH supervisa las fechas de caducidad de los cartuchos cargados asi como las de los lotes de cartuchos de reactivos Recogida preparaci n y manejo de las muestras Este procedimiento debe realizarse en una muestra de suero No deben utilizarse muestras que est n contaminadas con microorganismos que hayan recibido un tratamiento a base de calor o que contengan part culas visibles Tras la recogida el suero debe separarse del co gulo El documento H18 A4 del CLSI recomienda las siguientes condiciones de almacenamiento de mues
21. n marcarse para realizar un seguimiento del n mero de usos El tiempo m ximo durante el que los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante m s tiempo deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Bibliografia 1 10 Kavanaugh A Tomar R Reveille J Solomon DH Homburger HA Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific autoantibodies to nuclear antigens American College of Pathologists Arch Pathol Lab Med 2000 124 1 71 81 Schulte Pelkum J Fritzler M Mahler M Latest update on the Ro SS A autoantibody system Autoimmun Rev 2009 8 7 632 637 Ghillani P Andr C Toly C Rouquette AM Bengoufa D Nicaise P Goulvestre C Gleizes A Dragon Durey MA Alyanakian MA Chretien P Chollet Martin S Musset L Weill B Johanet C Clinical significance of anti Ro52 TRIM21 antibodies non associated with anti SSA 60kDa antibodies results of a multicentric study Autoimmun Rev 2011 10 9 509 513 Defendenti C Atzeni F Spina MF Grosso S Cereda A Guercilena G Bollani S Saibeni S Puttini PS Clinical and laboratory aspects of Ro SSA 52 autoantibodies Autoimmun Rev 2011 10 3 150 154 Parker JC Burlingame RW Bunn CC Prevalence of an
22. na prevalencia de anti Ro52 del 15 38 En los subgrupos definidos por el anti Ro60 y por el anticuerpo anti sintetasa aminoacil tARN el anti Ro52 estuvo presente en el 92 y en el 100 de los casos respectivamente El anti Ro52 aislado sin anti Ro60 puede encontrarse en hasta el 20 37 de los pacientes con miositis Sin embargo en los sueros de miositis positivos para el anti Jo 1 la frecuencia de los anticuerpos anti Ro52 ha sido mucho m s elevada 58 Asimismo la coexistencia de anticuerpos anti Ro52 y anti Jo 1 parece ser un predictor de enfermedad pulmonar intersticial relativamente grave en pacientes con miopat a inflamatoria Principios del procedimiento Se recubren part culas paramagn ticas con ant geno Ro52 recombinante purificado y se guardan en el cartucho de reactivos en unas condiciones que mantienen el ant geno en su estado reactivo Cuando el cartucho del ensayo est preparado para el primer uso se a ade una soluci n tamp n al tubo que contiene las part culas y estas se mezclan con el tamp n A continuaci n se coloca el cartucho de reactivos en el instrumento BIO FLASH Mediante el instrumento se diluye una muestra de suero de paciente en una cubeta desechable de pl stico Se combinan en una segunda cubeta y se mezclan peque as cantidades del suero de paciente diluido las part culas de Ro52 y el tamp n del ensayo Esta cubeta se incuba a 37 C y despu s las part culas se magnetizan y se lavan va
23. os reactivos suministrados 3 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Los Calibradores QUANTA Flash Ro52 deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash Ro52 No transfiera los reactivos de los calibradores a otros tubos El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para ajustar los calibradores al tipo de an lisis adecuado Una vez abiertos los tubos los calibradores pueden utilizarse durante un m ximo de 8 horas o 4 calibraciones transcurrido este tiempo los reactivos deben desecharse Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 2 Guarde los calibradores no abiertos a una temperatura entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como esta indicado Los calibradores abiertos deben desecharse al cabo de 8 horas Procedimiento 1 Cada nuevo lote de cartuchos de r
24. para los anticuerpos anti Ro52 2 Los resultados de este an lisis deben utilizarse junto con datos cl nicos y otras pruebas serol gicas 3 Si la resuspensi n de las part culas recubiertas de Ro52 no se efect a de un modo adecuado pueden obtenerse resultados inferiores en comparaci n con los an lisis que han tenido una resuspensi n adecuada 4 Las caracter sticas de funcionamiento de este ensayo no se han establecido para matrices de muestras distintas del suero Intervalo de referencia El l mite de detecci n del ensayo se ha determinado utilizando 155 muestras procedentes de sujetos de referencia 115 muestras de donantes de sangre aparentemente sanos 15 hombres y 100 mujeres edades 19 69 8 muestras positivas para la hepatitis v rica 6 hombres y 2 mujeres edades 19 44 5 muestras positivas para la s filis 1 hombre y 4 mujeres edades 27 57 5 muestras positivas para el VIH 4 hombres y 1 mujer edades 28 51 y 22 muestras de AR los datos de edad y sexo no est n disponibles El l mite de detecci n se ha establecido como superior al percentil 98 de los resultados obtenidos en los sujetos de referencia y se le ha asignado un valor de 20 CU Valores esperados El valor esperado en la poblaci n normal es negativo Los niveles de autoanticuerpo anti Ro52 se han analizado en una cohorte de 111 donantes de sangre aparentemente normales 21 mujeres y 90 hombres edades 17 60 utilizando el QUANTA Flash Ro52
25. rias veces A continuaci n se a ade anticuerpo anti IgG humana conjugado con isoluminol a la cubeta y se incuba a 37 C De nuevo las part culas se magnetizan y se lavan repetidamente El conjugado de isoluminol produce una reacci n luminiscente cuando se a aden a la cubeta los reactivos iniciadores La luz generada por la reacci n se mide como unidades relativas de luz RLU mediante el sistema ptico del BIO FLASH El n mero de RLU es proporcional a la cantidad de conjugado de isoluminol ligado que a su vez es proporcional a la cantidad de anticuerpos anti Ro52 unidos al Ro52 en las part culas El ensayo QUANTA Flash Ro52 utiliza una curva maestra predefinida espec fica para cada lote que se carga en el instrumento mediante el c digo de barras del cartucho de reactivos A partir de los resultados obtenidos mediante el an lisis de dos calibradores se genera una curva de trabajo espec fica para el instrumento que el software utiliza para calcular las unidades de quimioluminiscencia CU bas ndose en el valor de RLU obtenido para cada muestra Reactivos 1 El cartucho de reactivos del QUANTA Flash Ro52 contiene los siguientes reactivos para 50 determinaciones a Part culas paramagn ticas recubiertas de Ro52 conservadas antes del primer uso b Tamp n del ensayo de color rosa que contiene soluci n salina tamponada con Tris Tween 20 estabilizantes de prote nas y conservantes C IgG trazadora anticuerpos anti IgG
26. strucciones detalladas sobre c mo introducir todos los datos necesarios de cada control en el software y c mo analizar los controles Se recomienda analizar los controles una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local C lculo de los resultados INOVA genera una curva maestra de cinco puntos para cada nuevo lote del QUANTA Flash Ro52 Esta curva log stica de cuatro par metros se codifica mediante el c digo de barras de cada cartucho de reactivos Una vez calibrado un cartucho de reactivos se utilizar una curva de trabajo espec fica del instrumento para convertir las RLU a CU La reactividad del anticuerpo frente al Ro52 puede entonces clasificarse seg n la tabla siguiente Reactividad CU Negativa lt 20 Positiva 220 La reactividad expresada en CU est directamente relacionada con la valoraci n de autoanticuerpos en la muestra del paciente Los aumentos y disminuciones de concentraci n de los autoanticuerpos de los pacientes se reflejar n en un correspondiente aumento o disminuci n del valor CU que es proporcional a la cantidad de anticuerpo El intervalo de medici n anal tica AMR del ensayo va de 2 3 CU a 1 685 3 CU Si el resultado de un paciente es inferior a 2 3 CU el sistema BIO FLASH indicar lt 2 3 CU Dado que este valor es inferior a 20 CU se considera un resultado negativo Si el resultado de un paciente es
27. superior a 1 685 3 CU el sistema BIO FLASH indicar gt 1 685 3 CU Este valor se considera un resultado positivo El software BIO FLASH dispone de una opci n denominada Auto Rerun rean lisis autom tico Si esta opci n est seleccionada el instrumento volver a analizar de forma autom tica cualquier muestra que presente un resultado superior a 1 685 3 CU tras diluirla nuevamente seg n un factor de 35 y calcular las CU reales a partir de este factor de diluci n adicional Interpretacion de los resultados El ensayo QUANTA Flash permite detectar peque as diferencias en las poblaciones de pacientes Se aconseja que cada laboratorio verifique el intervalo de referencia indicado por el fabricante y si lo desea establezca su propio intervalo normal a partir de sus propios controles y su poblaci n de pacientes de acuerdo con sus procedimientos particulares Es recomendable que los resultados comunicados por el laboratorio incluyan la informaci n siguiente Los siguientes resultados se han obtenido mediante el inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash Ro52 de INOVA Es posible que los valores obtenidos con m todos de ensayo de otros fabricantes no sean intercambiables con dichos resultados La magnitud de los niveles de autoanticuerpos obtenidos no siempre puede correlacionarse con una valoraci n de punto final Limitaciones del procedimiento 1 No todos los pacientes con LES SS ES y MAI son positivos
28. tibodies to Ro 52 in a serologically defined population of patients with systemic sclerosis J Autoimmune Dis 2009 6 6 2 Brouwer R Hengstman Gu Vree Egberts W Ehrfeld H Bozic B Ghirardello A Gr ndal G Hietarinta M Isenberg D Kalden JR Lundberg I Moutsopoulos H Roux Lombard P Vencovsky J Wikman A Seelig HP van Engelen BG van Venrooij WJ Autoantibody profiles in the sera of European patients with myositis Ann Rheum Dis 2001 60 2 116 123 Rutjes SA Vree Egberts WT Jongen P Van Den Hoogen F Pruijn GJ Van Venrooij WJ Anti Ro52 antibodies frequently co occur with anti Jo 1 antibodies in sera from patients with idiopathic inflammatory myopathy Clin Exp Immunol 1997 109 1 32 40 La Corte R Lo Mo Naco A Locaputo A Dolzani F Trotta F In patients with antisynthetase syndrome the occurrence of anti Ro SSA antibodies causes a more severe interstitial lung disease Autoimmunity 2006 39 3 249 253 Vancsa A Csipo Nemeth J Devenyi K Gergely L Danko K Characteristics of interstitial lung disease in SS A positive Jo 1 positive inflammatory myopathy patients Rheumatol Int 2009 29 9 989 994 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL 5 Edition Centers for Disease Control National Institute of Health 2009 Simbolos utilizados Producto sanitario para diagn stico In Vitro Consulte las instrucciones de uso Limites de temperatura No reutilizar Riesgos biol gicos C digo del
29. tras 1 No guarde las muestras a temperatura ambiente durante m s de 8 horas 2 Si el an lisis no se efect a en un plazo de 8 horas refrigere las muestras a una temperatura de2a8 C 3 Si el an lisis no va a realizarse en un plazo de 48 horas o si las muestras deben prepararse para ser enviadas cong lelas a una temperatura 48 C o inferior Las muestras congeladas deben mezclarse bien despu s de descongelarse y antes del an lisis Procedimiento Materiales suministrados 1 1 1 Cartucho de reactivos QUANTA Flash Ro52 Tamp n de resuspensi n Pipeta de transferencia Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO FLASH con ordenador para manejarlo Liquido de lavado del sistema BIO FLASH numero de componente 3000 8205 Iniciadores BIO FLASH numero de componente 3000 8204 Cubetas BIO FLASH n mero de componente 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash Ro52 numero de componente 701261 Controles QUANTA Flash Ro52 numero de componente 701262 Uso del analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH 1 Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Para obtener m s informaci n o solucionar problemas relativos a este ensayo p ngase en contacto con el servicio t cnico de INOVA Diagnostics Inc en la direcci n o n mero de tel fono
30. ue se calibre 2 Consulte el apartado Calibradores QUANTA Flash Ro52 701261 de este documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo calibrar el cartucho de reactivos 3 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Programaci n y an lisis de las muestras 1 Pulse el bot n Worklist de la parte superior de la pantalla y seleccione la pesta a Racks de la parte inferior 2 Seleccione la gradilla de muestras que se utilizar marc ndola en la pantalla o escaneando su c digo de barras con el lector manual Escanee o escriba el nombre de la muestra indique el tipo de muestra elija el tipo de recipiente tubo copa y seleccione Ro52 en el panel del ensayo Repita estos pasos para todas las muestras 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y col quela en la bandeja de muestras del instrumento 4 Cuando todos los materiales necesarios est n cargados en el instrumento el icono de inicio pasara a estar disponible en color verde en la parte superior de la pantalla Pulse el icono Start F4 para comenzar el an lisis Control de calidad Los Controles QUANTA Flash Ro52 vendidos por separado n mero de producto de INOVA 701262 contienen los controles positivos y negativos para el Ro52 Consulte el apartado Controles QUANTA Flash Ro52 701262 de este documento para obtener in

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