- LIATEST® VWF:Ag - Annar Diagnóstica Import
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1. STA LIATEST VWF Ag Determinaci n inmunoturbidim trica del factor von Willebrand e Contenido del kit 4 viales de Reactivo 1 Buffer 4 viales de Reactivo 2 Latex 4 viales de Reactivo 3 Latex Diluent REF 00518 CE Julio 2011 Espa ol 6 1 UTILIZACI N DEL KIT Dosificaci n antig nica del factor von Willebrand VWF Ag mediante un m todo inmunoturbidim trico en los aparatos de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos 2 INFORMACI N SOBRE EL FACTOR VON WILLEBRAND e Bioqu mica del factor von Willebrand El factor von Willebrand VWF es una glucoprote na multim rica con un peso molecular que puede alcanzar los 15 000 kDa Est compuesta por la asociaci n de n prot meros id nticos que a su vez est n formados por dos subunidades similares cada una con un peso molecular de unos 270 kDa 10 El VWF se sintetiza en las c lulas endoteliales y en los megacariocitos 2 Una vez liberado a la circulaci n por las c lulas endoteliales puede sufrir la acci n proteol tica de la plasmina o ser incluido por endocitosis en los gr nulos a de las plaquetas e Funciones del factor von Willebrand El factor von Willebrand interviene en la hemostasia primaria y en la coagulaci n El VWF desempe a un papel determinante en la adhesi n de las plaquetas al subendotelio vascular y en la formaci n de trombos por su uni n a los complejos glucoprot icos GP Ib IX y llb llla 10 En la coa2. C Estos reactivos se destinan exclusivamente a un uso in vitro y deben ser manipulados por personal autorizado del laboratorio Utilizar nicamente reactivos de un mismo kit o de un mismo lote Los residuos se eliminar n con arreglo a la reglamentaci n local vigente El estuche STA Liatest VWF Ag esta dise ado especialmente para los aparatos de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos Antes de cualquier utilizaci n leer con atenci n el Manual del Operador del instrumento utilizado Tener cuidado en el manejo de estos reactivos y las muestras 6 OBTENCI N Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA La obtenci n de la muestra debe ajustare a las recomendaciones para las pruebas de hemostasia e Obtenci n de sangre en soluci n de citrato tris dico 0 109 M 1 vol de citrato por 9 vol de sangre e Centrifugaci n 15 minutos a 2000 2500 g e Conservaci n del plasma 8 horas a 20 5 C 24 horas a 2 8 C 1 mes a 20 C Atemperar la muestra a 37 C el tiempo necesario y suficiente para que la descongelaci n sea completa No congelar nuevamente 7 CONSERVACI N Y PREPARACI N DE LOS REACTIVOS Conservados a 2 8 C en su embalaje original los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche e Reactivo 1 Antes de abrir dejar que el Reactivo R1 se estabilice durante 15 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Homogeneizar luego a adir un STA mini Reducer nuevo REF 007
3. digo de barras Este c digo de barras contiene las siguientes informaciones n mero de lote referencia del kit referencia del reactivo fecha de caducidad e Reactivo 1 frasco con 5 ml de tamp n de glicina e Reactivo 2 frasco con 2 ml de suspensi n de micropart culas de l tex recubiertas con anticuerpos de conejo anti VWF y posteriormente estabilizadas con alb mina bovina e Reactivo 3 frasco con 4 ml La soluci n contiene glicina para la diluci n del reactivo de l tex Reactivo 2 Estos reactivos contienen azida s dica lt 1 g l como conservante Es preciso eliminar con precauci n los reactivos que contienen azida s dica Si estas soluciones se vierten en el desagile del lavabo enjuagar con abundante agua para evitar la formaci n de azidas met licas que si est n concentradas pueden provocar explosiones Algunos reactivos de este kit contienen productos de origen humano y o animal Cuando se ha utilizado plasma humano en la preparaci n de estos reactivos se excluye previamente la presencia del ant geno HBs de los anticuerpos anti HCV anti HIV 1 y anti HIV 2 con los correspondientes an lisis Sin embargo ning n test puede garantizar de manera absoluta la ausencia de agentes infecciosos Por eso estos reactivos de origen biol gico han de ser manipulados con las precauciones habituales ya que se trata de productos potencialmente infecciosos 5 PRECAUCIONES El estuche intacto se debe conservar a 2 8
4. las heparinas no fraccionadas y las heparinas de bajo peso molecular no interfieren con la determinaci n si sus concentraciones son inferiores respectivamente a 5 g l 150 mg l 2 Ul ml y 2 UI anti Xa ml 12 VALORES NORMALES El valor del VWF Ag en el plasma humano generalmente est comprendido en el adulto entre 50 y 160 1 3 Con la edad 6 y en ciertas situaciones embarazo uso de la p ldora anticonceptiva esfuerzo f sico estr s 8 se observa un aumento de los niveles del factor von Willebrand Por contrario en los sujetos del grupo O 8 se observa una disminuci n de los niveles de VWF Ag 13 CARACTER STICAS DEL M TODO e Umbral de detecci n Intervalo de linealidad El umbral de detecci n del STA Liatest VWF Ag en el STA es de 3 El procedimiento STA Liatest VWF Ag en el STA es lineal hasta el 105 e Efecto Hook Se ha de tener en cuenta la configuraci n de test si hay efecto hook e Reproducibilidad Se han realizado estudios de reproducibilidad a partir de diferentes plasmas normales y anormales los resultados obtenidos en STA est n indicados en las tablas siguientes Reproducibilidad intra serie Reproducibilidad inter serie Muestra Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 _n 21 21 10 10 X 89 33 87 40 SD 1 7 0 9 2 5 1 8 CV 1 9 2 7 2 9 4 4 BIBLIOGRAF A 1 HOLMBERG L BERNTORP E DONNER M NILSSON I M Von Willebrand s disease ch
5. 97 y el tap n perforado Estabilidad tras la reconstituci n con STA mini Reducer y el tap n perforado 15 d as en STA Compact y STA R Reactivo 2 Vierta todo el contenido de un vial de Reactivo 3 R3 en un vial de Reactivo 2 R2 del mismo kit Aseg rese de que se vierte todo el Reactivo 3 Agite el frasco de Reactivo 2 para mezclar bien sin crear burbujas Dejar que el Reactivo se estabilice durante 15 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Homogeneizar luego a adir un STA mini Reducer nuevo REF 00797 y el tap n perforado Estabilidad tras la reconstituci n con STA mini Reducer y el tap n perforado 15 d as en STA Compact y STA R e Reactivo 3 Reactivo 3 listo para emplear 8 REACTIVOS Y MATERIALES AUXILIARES e STA Owren Koller REF 00360 STAO VWF Ag Calibrator REF 00520 e STA Liatest Control N P REF 00526 controles normal y anormal e Instrumento de la l nea STA que puede utilizar estos reactivos e STA mini Reducer REF 00797 e Equipamiento habitual en los laboratorios de an lisis cl nicos 9 PROCEDIMIENTO 9 1 Calibraci n La calibraci n se lleva a cabo con la ayuda del estuche STA VWF Ag Calibrator Preparar STA VWF Ag Calibrator y transferir al aparato las informaciones contenidas en los c digos de barras de la hoja Los est ndares son preparados autom ticamente por el analizador diluyendo con tamp n Owren Koller de acuerdo a l
6. aracterized by increased ristocetin sensitivity and the presence of all von Willebrand factor multimers in plasma Blood 68 3 668 672 1986 2 VERWEIJ C L Biosynthesis of human von Willebrand factor Haemostasis 18 224 245 1988 3 NISHINO M GIRMA J P ROTHSCHILD C FRESSINAUD E MEYER D New variant of von Willebrand disease with defective binding to factor VIII Blood 74 5 1591 1599 1989 4 JAKWAY J L Acquired von Willebrand s disease Hematol Oncol Clin Nort Am 6 6 1409 1419 1992 5 BLANN A Von Willebrand factor and the endothelium in vascular disease Br J Biomed Sci 50 125 134 1993 6 CONLAN M G FOLSOM A R FINCH A DAVIS C E SORLIE P MARCUCCI G WU K K Associations of factor VIII and von Willebrand factor with age race sex and risk factors for atherosclerosis Thromb Haemostasis 70 3 380 385 1993 7 SADLER J E A revised classification of von Willebrand disease Thromb Haemostasis 71 4 520 525 1994 8 FRESSINAUD E MEYER D La maladie de Willebrand du diagnostic au traitement H matologie 3 199 208 1995 9 LIP G Y H BLANN A D Von Willebrand factor and its relevance to cardiovascular disorders Br Heart J 74 580 583 1995 10 RIBBA A S LAVERGNE J M GIRMA J P MEYER D Bases mol culaires de la maladie de Willebrand H matologie 3 191 198 1995 Los cambios significativ
7. gulaci n el VWF interviene como prote na portadora del factor VIII factor antihemof lico A al que protege contra la degradaci n 3 e Enfermedad de Willebrand La enfermedad de Willebrand es la anomal a constitucional m s frecuente de la hemostasia Desde el punto de vista cl nico se caracteriza principalmente por hemorragias mucosas y cut neas 8 Se diferencian tres grandes tipos de enfermedad de Willebrand 7 10 el tipo 1 corresponde a un d ficit cuantitativo de VWF y su transmisi n es autos mica dominante es el tipo m s frecuente 70 a 80 de los casos de enfermedad de Willebrand el tipo 2 agrupa las anomal as cualitativas del VWF y normalmente la anomal as est relacionada con la estructura multim rica en ese caso la transmisi n es autos mica dominante o recesiva el tipo 3 se caracteriza por la ausencia casi completa de VWF en el plasma y en los compartimentos celulares su transmisi n es autos mica recesiva Test Tipo 1 Tipo 2A Tipo 2B Tipo 2N Tipo 3 VWF Ag J y H Normal Ausente VWF Rco y Ill JodJ Normal Ausente Agregaci n con ristocetina Dosis alta Normal J44 o Normal Normal Ausente ol ausente Dosis baja Ausente Ausente Presente Ausente Ausente Normal Normal Normal 00 un Factor VIII ohl oak o l VWF Rco actividad cofactor de la ristocetina del factor von Willebrand En el sujeto normal no se produce agregaci
8. n plaquetaria en presencia de una dosis baja de ristocetina Principales tipos de enfermedad de Willebrand 8 e Adem s los d ficits en VWF pueden estar asociados a diversos estados cl nicos mieloma linfoma lupus eritematoso diseminado hipotiroidismo etc En estos casos se habla de enfermedad de Willebrand adquirida 4 El VWF es una prote na de la inflamaci n por lo que sus valores aumentan cuando el endotelio vascular est afectado periodo postoperatorio infecci n c ncer afecci n hep tica o renal etc 5 As mismo ciertos estudios demuestran que los niveles altos de VWF est n asociados a alteraciones cardiovasculares en especial a ciertos tipos de infarto de miocardio 9 3 PRINCIPIO DEL TEST Esta determinaci n se basa en el aumento de la turbidez de una suspensi n de micropart culas de l tex medida mediante fotometr a Cuando las microesferas de l tex sobre cuya superficie se han fijado por covalentemente anticuerpos espec ficos del VWF se mezcla con el plasma cuyo nivel de VWF se desea estudiar la reacci n ant genoanticuerpo que ocurre provoca la aglutinaci n de las microesferas Este fen meno conduce al aumento de la turbidez de la mezcla de reacci n y por lo tanto a un aumento de la absorbancia del medio La magnitud de este aumento es funci n de la cantidad del VWF contenida en el plasma en estudio 4 COMPOSICI N DEL KIT Cada estuche de STA Liatest VWF Ag contiene una hoja con c
9. os par metros ingresados en el instrumento para la disificaci n El tamp n Owren Koller sol representa 0 de los puntos La curva de calibraci n se puede ver en la pantalla del instrumento con la ayuda del men Calibraci n ver el Manual del Operador 9 2 Plasmas a analizar Los plasmas a testar han de estar sin diluir Introducirlos en el instrumento ver el Manual del Operador del instrumento utilizado El instrumento realizar autom ticamente las diluciones en tamp n Owren Koller Seleccionar el los test s a efectuar en los plasma de pacientes 9 3 Controles Los controles son necesarios para verificar la exactitud y la reproducibilidad de los resultados Utilizar el estuche STA Liatest Control N P Preparar estos reactivos de control y transferir la informaci n contenida en los c digos de barras impreso en su respectivo inserto al instrumento Estos controles se utilizan han de estar sin diluir el instrumento realizar autom ticamente la diluci n en tamp n Owren Koller 9 4 Dosificaci n Para la realizaci n de la dosificaci n seguir los protocolos descritos en los Standardized Operating Procedures del instrumento La determinaci n del VWF Ag en el plasma por valorar se procesa autom ticamente por el analizador a 540 nm tan pronto se cargan las muestras Si cualquiera de los resultados del paciente queda fuera del rango de trabajo de la dosificaci n el instrumento revalora autom
10. os son indicados por las l neas punteadas en el margen DIAGNOSTICA STAGO S A S Las informaciones y o las im genes contenidas en este 9 rue des Fr res Chausson documento est n protegidas por copyright y otros derechos de 92600 Asni res sur Seine France propiedad intelectual 2011 Diagnostica Stago todos derechos 33 0 1 46 88 20 20 Stago reservados Los logotipos y o los nombres de los productos de webmaster stago com Diagnostica Stago son marcas registradas Espa ol
11. ticamente la muestra en seg n una diluci n apropiada siempre que esta opci n haya sido introducida en la configuraci n de la prueba ver el Manual del Operador 10 RESULTADOS El nivel de VWF Ag de las muestras analizadas aparece en tiempo real en la pantalla del aparato ver el Manual del Operador El resultado debe interpretarse en funci n del estado cl nico y biol gico del paciente Si el aparato se ala que los resultados obtenidos para los controles se sit an fuera del intervalo de valores indicado en la hoja incluida en el estuche es preciso asegurarse del buen funcionamiento de todo el sistema condiciones de ensayo reactivos plasmas en los que se efect a el test etc Si es necesario repetir las muestras 11 LIMITACIONES e Es posible que se subestime el nivel de VWF Ag de los plasmas especialmente turbios el valor de la absorbancia a 540 nm del plasma diluido al 1 10 en STA Owren Koller debe ser inferior a 0 80 e La presencia del factor reumatoide lleva a una sobreestimaci n del nivel de VWF Ag e La presencia de anticuerpos anti alb mina bovina y o anti conejo en ciertos sujetos puede hacer que se sobrestime el nivel de VWF Ag e Como todos los tests ant genos el an lisis de VWF Ag llevado a cabo con el kit STA Liatestd VWF Ag no puede detectar las variantes inusuales de tipo 2 cuyo nivel de VWF Ag sea normal e Se ha demostrado que la hemoglobina la bilirrubina
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