- STACLOT® PROTEIN S - Annar Diagnóstica Import
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1. AL STACLOT PROTEIN S Determinaci n cuantitativa de la actividad de la prote na S Contenido del kit 2 viales de Reactivo 1 Protein S Deficient Plasma 2 viales de Reactivo 2 PCa 2 viales de Reactivo 3 F Va REF 00746 Marzo 2012 wo CE Espa ol 6 1 UTILIZACI N DEL KIT El kit STA Staclot Protein S previsto para uso con analizadores de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos para la medici n cuantitativa del nivel de prote na S funcional basada en el principio de inhibici n del Factor Va 7 2 INFORMACI N SOBRE LA PROTE NA S Bioqu mica de la prote na S La prote na S es una prote na plasm tica vitamino K dependiente que no presenta funci n ester sica 1 Su peso molecular en el ser humano es de 70 000 10 y se presenta como una nica cadena polipept dica Contiene alrededor del 7 de hidratos de carbono y se encuentra en el plasma en una concentraci n cercana a 25 mg l 2 La prote na S se sintetiza en el h gado bajo la forma de un precursor inactivo Esta prote na se carboxila mediante la acci n de una carboxilasa vitamino K dependiente tras lo cual los residuos y carboxiglut micos pueden fijar el calcio 1 Fisiol gicamente la prote na S juega un papel anticoagulante esencial Es el cofactor de la prote na C activada con la cual forma un complejo estoquiom trico 1 En presencia de calcio este complejo se fija fuertemente a la2. Como ejemplo se analizaron 156 plasmas humanos presuntamente normales 94 hombres y 62 mujeres cuyas 7 fueron usuarias de anticonceptivos orales Los resultados fueron los siguientes hombres X 110 con una desviaci n est ndar de 16 5 mujeres X 89 con una desviaci n est ndar de 17 Durante el embarazo se observa una disminuci n del porcentaje de prote na S libre 5 Al nacer el porcentaje de prote na S funcional se aproxima al del adulto mientras que los porcentajes de prote na S libre y total son menores 5 13 CARACTER STICAS DEL M TODO e Intervalo de medici n L mite de detecci n En STA R y STA Compact la linealidad de la dosificaci n se observa hasta una actividad entre 10 y 150 de la prote na S el valor del l mite de detecci n es 10 Reproducibilidad Se han realizado estudios de reproducibilidad intra e inter series a partir de muestras normales y anormales Los resultados obtenidos en STA est n la diluci n 1 40 representa una cuarta parte del valor de ensayo indicado en la caja UC 14 4 Plasmas a analizar y controles En tubos de pl stico diluir los plasmas a probar y los controles al 1 10 en tamp n Owren Koller 14 5 Dosificaci n Se recomienda que todos los ensayos est ndares muestras pacientes y controles sean llevados a cabo en una sola y la misma corrida Cuando esto no sea posible el an lisis de las muestras se debe realizar inmediatamente despu s
3. de la calibraci n desarrollada en las mismas condiciones la secuencia de pipeteo tiempos de incubaci n mezclado luego de la adici n de reactivos etc En un tubo de pl stico a 37 0 5 C e Plasma patr n paciente o control 0 1 mil e Reactivo 1 0 1 ml ROA A anirai aa iio ei 0 1 ml EACIVO S ts ca ts e RA 0 1 ml e Mezclar e incubar a 37 C durante exactamente 120 s e Poniendo en marcha un cron metro a adir el STA CaCl 0 025 M prelncubado S IT voi io cia a id E n 0 1 ml Mezclar Anotar el tiempo de coagulaci n segundos 14 6 Resultados En papel milimetrado marcar en abscisas el procentaje de prote na S de los diferentes puntos de la gama de calibraci n y en ordenadas el tiempo de coagulaci n correspondiente Trazar la curva patr n y obtener el valor de la prote na S de las muestras analizadas Si el nivel de prote na S de un paciente es bajo lt 10 se recomienda analizar el plasma en una diluci n 1 5 En este caso el resultado de la prueba le do a partir de la l nea de calibraci n ser dividido por 2 Si por el contrario el nivel de prote na S de un paciente es mayor a 150 se recomienda analizar el plasma en una diluci n 1 20 En este ltimo caso el resultado de la prueba le do a partir de la l nea de calibraci n ser multiplicar por 2 Comprobar que los resultados obtenidos para los System Control N P se sit an en el intervalo indicado en la
4. de la prueba Los niveles m s altos de heparina pueden hacer que se sobrestime el nivel de prote na S Interferencia del Factor VIII Los niveles de factor VIII de hasta 250 no afectan los resultados de la prueba 9 Interferencia de Cy BP En las condiciones de ensayo descritas no existe disociaci n in vitro del complejo de Prote na S y Cap BP 9 Interferencia de LA y o APA Se ha observado que los anticoagulantes l picos AL y o anticuerpos anti fosfol pidos APA si se encuentran en el plasma que se analiza pueden interferir en la prueba En caso de un nivel inexplicable de prote na S y seg n el estado cl nico puede ser til llevar a cabo pruebas de LA y o APA y determinar el nivel de prote na S libre antig nica Interferencia del inhibidor de trombina Los inhibidores de la trombina ej hirudina argatroban presentes en la muestra a analizar pueden llevar a una sobreestimaci n del nivel de prote na S para esta muestra 12 VALORES NORMALES Los porcentajes de prote na S total y libre son menores en las mujeres que en los hombres 9 Adem s en las mujeres se han observado variaciones en funci n del estado hormonal 11 Por lo tanto se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores normales en funci n de su poblaci n y determine los valores a partir de los cuales es necesario realizar m s investigaciones estudio de antecedentes individuales y familiares porcentaje de Cyp BP
5. hoja incluida en el kit Si los resultados estuvieran fuera del intervalo de valores es preciso asegurarse del buen funcionamiento de todo el sistema condiciones de ensayo reactivos plasmas en los que se efect a el test calibraci n etc Si es necesario repetir las muestras 14 7 Limitaciones Durante el ensayo respete el tiempo de incubaci n de 2 minutos 14 8 Caracter sticas del m todo La linealidad del ensayo observada para el nivel de prote na S entre 10 y 150 Los resultados de los estudios de reproducibilidad intra e inter series obtenidos en ST art est n indicados en las tablas siguientes indicados en las tablas siguientes Reproducibilidad intra serie Reproducibilidad inter serie Reproducibilidad intra serie Reproducibilidad inter serie Muestra Muestra a Muestra b Muestra c Muestra d Muestra Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 n 24 24 10 10 X 106 35 91 34 _n 21 21 10 10 SD 5 2 1 9 4 4 1 4 X 94 33 105 36 CV 4 9 5 3 4 8 4 2 SD 4 1 1 5 5 9 2 3 CV 4 4 4 5 5 6 6 4 BIBLIOGRAF A 14 VARIANTES 1 WALKER FJ Protein S and the regulation of activated protein C Semin Thromb Hemost Los cap tulos 1 2 3 4 5 6 11 y 12 precedentes son tambi n v lidos para la dosificaci n con el m todo semiautom tico o al ba o mar a 14 1 Preparaci n y conservaci n de los reactivos La preparaci
6. n de los Reactivos 1 2 y 3 es id ntica a la indicada en el cap tulo 7 del presente folleto Tras la reconstituci n los reactivos son estables 4 horas a 20 5 C y 4 horas a 2 8 C No se debe congelar 14 2 Reactivos y material auxiliares e STA Owren Koller REF 00360 e STA CaCl 0 025 M REF 00367 e Unicalibrator REF 00625 e System Control N P REF 00617 controles normal y anormal Instrumento como el ST art o ba o maria e Equipamiento habitual en los laboratorios de an lisis cl nicos cron metro 14 3 Calibraci n Construya una curva de calibraci n para cada ensayo de la prueba Para la elaboraci n de los est ndares utilice el tamp n Owren Koller para preparar en tubos de ensayo pl sticos diluciones de 1 10 3 40 1 20 y 1 40 del Unicalibrator UC Por definici n la diluci n 1 10 representa el valor del ensayo indicado en la caja UC la diluci n 3 40 representa las tres cuartas del valor de ensayo indicado en la caja UC la diluci n 1 20 representa la mitad del valor de ensayo indicado en la caja UC 10 131 138 1984 2 BERTINA R M Hereditary protein S deficiency Haemostasis 15 241 246 1985 GRIFFIN J H HEEB M J SCHWARZ H P Plasma protein S deficiency and thromboembolic disease Prog Hematol XV 39 49 1987 WEISS P SOFF G A HALKIN H SELIGSOHN U Decline of proteins C and S and factors Il VII IX and X during the initia
7. MPOSICI N DEL KIT Cada estuche de STA Staclot Protein S contiene una hoja con c digo de barras Este c digo de barras contiene las siguientes informaciones n mero de lote referencia del kit referencia de los reactivos fecha de caducidad e Reactivo 1 plasma humano liofilizado libre de prote na S e Reactivo 2 prote na C activada humana liofilizada e Reactivo 3 preparaci n con contenido de factor Va bovino liofilizada Los reactivos de este kit contienen productos de origen humano y o animal Cuando se ha utilizado plasma humano en la preparaci n de estos reactivos se excluye previamente la presencia del ant geno HBs de los anticuerpos anti HCV anti HIV 1 y anti HIV 2 con los correspondientes an lisis Sin embargo ning n test puede garantizar de manera absoluta la ausencia de agentes infecciosos Por eso estos reactivos de origen biol gico han de ser manipulados con las precauciones habituales ya que se trata de productos potencialmente infecciosos 5 PRECAUCIONES El estuche intacto se debe conservar a 2 8 C S lo para uso diagn stico in vitro Estos reactivos s lo deben ser utilizados por personal autorizado del laboratorio Utilizar nicamente reactivos de un mismo kit o de un mismo lote Los residuos se eliminar n con arreglo a la reglamentaci n local vigente El estuche STA Staclot Protein S esta dise ado especialmente para los aparatos de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos Antes
8. de cualquier utilizaci n leer con atenci n el Manual del Operador del instrumento utilizado Tener cuidado en el manejo de estos reactivos y las muestras 6 OBTENCI N Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA La obtenci n de la muestra debe ajustarse a las recomendaciones para las pruebas de hemostasia e Obtenci n de sangre en soluci n de citrato tris dico 0 109 M 1 vol de citrato por 9 vol de sangre e Centrifugaci n 15 minutos a 2500 g e Conservaci n del plasma 4 horas a 20 5 C 1 mes a 20 C Atemperar la muestra a 37 C el tiempo necesario y suficiente para que la descongelaci n sea completa 7 PREPARACI N Y CONSERVACI N DE LOS REACTIVOS e Preparaci n Reconstituir el contenudo de cada vial de Reactivo 1 2 o 3 con exactamente 1 ml de agua destilada Dejar que la soluci n se estabilice durante 60 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Despu s homogeneizarlo antes de su us e Conservaci n Conservados a 2 8 C en su embalaje original los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche Estabilidad tras la reconstituci n 4 horas en STA R y STA Compact No se debe congelar 8 REACTIVOS Y MATERIALES AUXILIARES e STA Owren Koller REF 00360 STA CaCl 0 025 M REF 00367 e STA Unicalibrator REF 00675 STA System Control N P REF 00678 controles normal y anormal STA R o STA Compact e Equipamiento habitual en los laboratorios de an lis
9. es patol gicas o iatr genos Las deficiencias cong nitas de prote na S se clasifican en tres categor as 10 las deficiencias de tipo se caracterizan por una disminuci n del nivel antig nico de la prote na S total y libre las deficiencias de tipo Il se definen por una reducci n de la actividad de la prote na S asociada a niveles antig nicos normales de prote na S total y libre en las deficiencias de tipo IIl se observan niveles antig nico y funcional de la prote na S libre reducidos mientras que el nivel de prote na S total es normal Las deficiencias adquiridas de prote na S libre pueden estar asociadas a los siguientes estados cl nicos s ndromes inflamatorios debidos al aumento de la Cap BP trastornos hep ticos 6 s ndrome nefr tico 6 tratamientos con medicamentos anti vitamina K 4 anticonceptivos orales 11 y L asparaginasa 6 La deficiencia cong nita o adquirida de prote na S aumenta el riesgo tromboemb lico al disminuir el potencial anticoagulante de la sangre Puede conducir a episodios tromb ticos repetitivos 2 3 PRINCIPIO DEL TEST El principio de la prueba se basa en la actividad de cofactor de la prote na S que potencia la acci n anticoagulante de la prote na C activada Esta potenciaci n se refleja mediante la prolongaci n del tiempo de coagulaci n de un sistema enriquecido con el factor Va el cual es un sustrato fisiol gico para la prote na C activada 4 CO
10. is cl nicos 9 PROCEDIMIENTO 9 1 Calibraci n La calibraci n se lleva a cabo con la ayuda de los estuches STA Unicalibrator Preparar STA Unicalibrator y tranferir al aparato las informaciones contenidas en el c digo de barras de la hoja Los est ndares son preparados autom ticamente por el analizador diluyendo con tamp n Owren Koller de acuerdo a los par metros ingresados en el instrumento para la dosificaci n La curva de calibraci n se puede ver en la pantalla del instrumento con la ayuda del men Calibraci n ver el Manual del Operador 9 2 Plasmas a analizar Los plasmas a testar han de estar sin diluir Introducirlos en el instrumento ver el Manual del Operador del instrumento utilizado El instrumento realizar autom ticamente las diluciones en tamp n Owren Koller Seleccionar el los test s a efectuar en los plasma de pacientes 9 3 Controles Los controles son necesarios para verificar la exactitud y la reproducibilidad de los resultados Utilizar el kit STA System Control N P Preparar estos reactivos de control y transferir la informaci n contenida en el c digo de barras impreso en su respectivos inserts al instrumento Estos controles se utilizan han de estar sin diluir el instrumento realizar autom ticamente la diluci n en diluyente tamp n Owren Koller 9 4 Dosificaci n Para la realizaci n de la dosificaci n seguir los protocolos descritos en los Standard
11. ized Operating Procedures del instrumento La determinaci n de la prote na S en el plasma por valorar se procesa autom ticamente por el analizador tan pronto se cargan las muestras Es obligatorio que el ensayo de la muestra de pacientes se comience inmediatamente despu s de realizar la calibraci n Si cualquiera de los resultados del paciente queda fuera del rango de trabajo de la dosificaci n el instrumento revalora autom ticamente la muestra en seg n una diluci n apropiada siempre que esta opci n haya sido introducida en la configuraci n de la prueba ver el Manual del Operador 10 RESULTADOS El nivel de prote na S de las muestras analizadas aparece en tiempo real en la pantalla del aparato ver el Manual del Operador El resultado debe interpretarse en funci n del estado cl nico y biol gico del paciente Si el aparato se ala que los resultados obtenidos para los controles se sit an fuera del intervalo de valores indicado en las hojas de estos controles es preciso asegurarse del buen funcionamiento de todo el sistema condiciones de ensayo reactivos calibraci n plasmas en los que se efect a el test etc Si es necesario repetir las muestras 11 LIMITACIONES e Recolecci n de muestras Utilice siempre la relaci n correcta entre el volumen de sangre y el anticoagulante Interferencia de heparina UFH y LMWH Los niveles de heparina hasta 1 Ul ml no afectan los resultados
12. s of sex and oral contraceptives on the reference ranges of protein and protein C Haemostasis 30 suppl 1 127 2000 Lad o Los cambios significativos son indicados por las l neas punteadas en el margen DIAGNOSTICA STAGO S A S Las informaciones y o las im genes contenidas en este 9 rue des Fr res Chausson documento est n protegidas por copyright y otros derechos de 92600 Asni res sur Seine France propiedad intelectual 2012 Diagnostica Stago todos derechos 33 0 1 46 88 20 20 reservados Los logotipos y o los nombres de los productos de webmaster Gstago com Diagnostica Stago son marcas registradas Espa ol
13. s superficies fosfolip dicas Regula entonces las v as pro coaguladoras degradando por prote lisis los factores V y VIII activados por la trombina 3 La prote na S amplifica de forma considerable el papel anticoagulante de la prote na C probablemente aumentando la afinidad de esta ltima por las membranas fosfolip dicas 8 La regi n sensible a la trombina de la prote na S puede estar sometida a una prote lisis parcial por la trombina La prote na S conserva entonces su afinidad por los fosfol pidos pero pierde su papel anticoagulante como cofactor de la prote na C activada 8 La bioqu mica de la prote na S es complicada por el hecho de que est en equilibrio din mico con la prote na que fija el C4 del complemento la Cay binding protein Cay BP presente en el plasma en dos formas 8 una de bajo peso molecular un 20 del total sin afinidad por la prote na S y una de alto peso molecular un 80 del total que s puede fijar la prote na S La prote na S forma un complejo equimolecular con esta ltima forma En estado fisiol gico se alcanza un equilibrio La prote na S se encuentra bajo dos formas la forma libre que representa un 40 del total de prote na S Es esta forma libre la que ocupa la funci n de cofactor de la prote na C activada la forma unida a la C4 BP de alto peso molecular Representa un 60 del total Esta forma no presenta actividad como cofactor de la prote na C activada 8 Variacion
14. tion of warfarin therapy Thromb Res 45 6 783 790 1987 5 FERNANDEZ J A ESTELLES A GILABERT J ESPANA F AZNAR J Functional and immunologic protein S in normal pregnant women and in full term newborns Thromb Haemostasis 61 3 474 478 1989 6 TAKAHASHI H TATEWAKI W WADA K SHIBATA A Plasma protein S in disseminated intravascular coagulation liver disease collagen disease diabetes mellitus and under oral anticoagulant therapy Clin Chim Acta 182 195 208 1989 7 WOLF M BOYER NEUMANN C MARTINOLI J L LEROY MATHERON C AMIRAL J MEYER D LARRIEU M J A new functional assay for human protein S activity using activated factor V as substrate Thromb Haemostasis 62 1144 1145 1989 DAHLBACK B Protein S and Cay binding protein components involved in the regulation of the protein C anticoagulant system Thromb Haemostasis 66 1 49 61 1991 9 WOLF M BOYER NEUMANN C LEROY MATHERON C MARTINOLI J L CONTANT G AMIRAL J MEYER D LARRIEU M J Functional assay of protein S in 70 patients with congenital and acquired disorders Blood Coag Fibrinolysis 2 6 705 712 1991 10 LANE D A MANNUCCI P M BAUER K A BERTINA R M BOCHKOV N P BOULYJENKOV V CHANDY M DAHLBACK B GINTER E K MILETICH J ROSENDAAL F R SELIGSOHN U Inherited thrombophilia Part 1 Thromb Haemosta 76 5 651 662 1996 11 BEECK H HELLSTERN P HUBBUCH A Effect
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