HT10 - Sigma
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1. ONDA Aclarar bien con agua corriente del grifo O Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de tinci n tricr mica LG o AB dentro de un vaso de Coplin de pl stico 11 Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 15 segundos Agitar cuidadosamente la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora Dejar incubar durante 1 minuto 12 Aclarar r pidamente con agua del grifo 13 Sumergir los portaobjetos en cido ac tico al 1 de 30 segundos a 1 minuto a temperatura ambiente 14 Aclarar los portaobjetos deshidratar en alcohol aclarar en xileno y montar CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO N cleos De azul a negro Col geno Verde LG o azul AB Citoplasma muscular Rojo Si los resultados observados var an de los esperados p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Sigma Aldrich REFERENCIAS 1 HJ Conn s Biological Stains Edited by RD Lillie 9th ed Williams and Wilkins Baltimore MD 1977 2 Theory and Practice of Histotechnology Edited by DC Sheehan and BB Hrapchak 2nd ed Mosby St Louis MO 1980 3 Lillie RD Further experiments with the Masson trichrome modification of Mallory s connective tissue stain Stain Technol 15 17 1940 4 Gomori G A rapid one step trichrome stain Am J Clin Pathol 20 661 1950 5 Leong AS Y Milios J Rapid immunoperoxidase staining of lymphocyte antigens using microwave irradiation J Pathol 148 183 1986 6 Brinn NT Rapid metallic histolog2. SIGMA ALDRICH TNCIONES TRICR MICAS GOMORI Procedimiento n mero HT10 APLICACI N Las tinciones tricr micas Gomori de Sigma Aldrich se utilizan para el estudio del tejido conectivo m sculo y fibras col genas Los reactivos de tinci n tricr mica son para uso diagn stico in vitro Las tinciones tricr micas se utilizan principalmente para diferenciar las fibras col genas del tejido muscular Generalmente son tintes nucleares col genos y citopl smicos en mordientes tales como cido fosfot ngstico o tostomol bdico Hist ricamente el primer sistema tricr mico se atribuye a Mallory Otras modificaciones fueron introducidas por Masson Foot y Gomori El procedimiento descrito en este prospecto se basa en el trabajo de Gomori se trata de un sistema de un solo paso que combina la tinci n de los tejidos citopl smico y conectivo con una soluci n de cido fosfot ngstico cido ac tico Las secciones de tejidos se tratan con soluci n de Bouin para intensificar la coloraci n final A continuaci n los n cleos se ti en con hematoxilina f rrica de Weigert seguida de tinci n con cromotropo R2 se ti en las fibras citopl smicas y musculares y Fast Green FCF o azul anilina se ti en las fibras de col geno Su lavado en cido ac tico despu s de la tinci n hace que los tonos sean m s delicados y transparentes Se incluye una t cnica de tinci n tricr mica de Gomori para la tinci n r pida en hornos mi
3. cat logo T8800 o TTRO12 deben utilizarse en cada proceso Soluci n de cido ac tico 1N Soluci n de Bouin n mero de cat logo HT10132 1L o HT101128 4L cido p crico acuoso saturado 71 formaldeh do 24 y cido ac tico 5 S LO PARA PROCEDIMIENTOS EST NDAR Soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert n mero de cat logo HT1079 Soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert Parte A n mero de cat logo HT107 500 ml hematoxilina 1 certificada en etanol Soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert Parte B n mero de cat logo HT109 500 ml cloruro f rrico 1 2 p v y cido clorh drico 1 v v S LO PARA PROCEDIMIENTOS CON MICROONDAS SOLUCI N DE HEMATOXILINA DE GILL N 3 n mero de cat logo GHS3 100 ml Concentrado de Scott sustituto del agua corriente n mero de cat logo S5134 6 x 100ml Horno microondas NOTAS Si se utiliza el horno microondas v anse las instrucciones en el Manual del propietario Los datos obtenidos mediante este procedimiento s lo sirven como ayuda en el diagn stico y deben ser revisados junto con otras pruebas cl nicas o informaci n de diagn stico PROCEDIMIENTO EST NDAR 1 Preparar la soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert seg n las instrucciones indicadas en la etiqueta 2 Desparafinar e hidratar los portaobjetos con agua desionizada w Colocar los portaobjetos en soluci n de Bouin precalentada at 56 C durante 15 minutos o a temperatura ambiente durante la no
4. che Enfriar los portaobjetos en agua del grifo 18 26 C dentro de un vaso de Coplin Lavar los portaobjetos con agua corriente del grifo para eliminar el amarillo de los cortes Te ir en soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert durante 5 minutos Lavar durante 5 minutos con agua corriente del grifo Te ir con soluci n de tinci n tricr mica LG o AB durante 5 minutos Colocar en cido ac tico al 0 5 durante 1 minuto 10 Aclarar los portaobjetos deshidratar en alcohol aclarar en xileno y montar FBOCEDTIENTO CON MICROONDAS Desparafinar e hidratar los portaobjetos con agua desionizada a Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de Bouin dentro de un vaso de Coplin de pl stico Tapar el vaso sin apretar la tapa o utilizar tapas con agujeros 3 Poner en el horno microondas a 600 vatios durante 25 segundos Agitar la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora y dejarla incubar durante 5 minutos debajo de una campana extractora o en una zona con buena ventilaci n 4 Aclarar con agua corriente del grifo hasta que desaparezca el color amarillo 5 Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de hematoxilina de Gill N 3 dentro de un vaso de Coplin de pl stico 6 Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 5 segundos 7 Aclarar bien con agua corriente del grifo de 30 segundos a 1 minuto 8 Azular en concentrado de Scott sustituto del agua corriente a temperatura ambiente 9 1
5. croondas REACTIVOS SOLUCI N DE TINCI N TRICR MICA LG n mero de cat logo HT10316 500 ml Cromotropo 2R 0 6 p v Fast Green FCF certificado 0 1 p v cido fosfot ngstico 0 8 p v y cido ac tico 1 0 v v El reactivo ti e el col geno en verde SOLUCI N DE TINCI N TRICR MICA AB n mero de cat logo HT10516 500 ml Cromotropo 2R 0 6 p v azul anilina certificado 0 3 p v cido fosfot ngstico 0 8 p v y cido ac tico 1 0 v v El reactivo ti e el col geno en azul ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacenar las soluciones de tinci n tricr mica soluci n de Bouin hematoxilina f rrica de Weigert TISSUE TROL tricr mico soluci n de cido ac tico y concentrado de Scott sustituto del agua corriente y la soluci n de trabajo a temperatura ambiente 18 26 C Las soluciones de tinci n tricr mica soluci n de Bouin hematoxilina f rrica de Weigert Partes A y B TISSUE TROL tricr mico soluci n de cido ac tico y concentrado de Scott sustituto del agua corriente y la soluci n de trabajo son estables hasta la fecha de caducidad Debe prepararse una nueva soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert para cada uso PREPARACI N Las soluciones de tinci n tricr mica LG y AB y la soluci n de Bouin est n listas para su uso La soluci n de hematoxilina f rrica de Weigert se prepara mezclando las soluciones A y B a partes iguales El sustituto del agua corriente Scott se pre
6. ic staining using the microwave oven J Histotechnol 6 125 1983 7 Valle S Special stains in the microwave oven J Histotechnol 9 237 1986 8 Histotechnology A Self Instructional Text Carson ASCP Press Chicago 1990 9 Kok and Boon Microwave Cookbook for Microscopists Couloomb Press Leyden Leyden 1992 10 Davis Mary The Joy of Microwaving NSH 1995 Symposium Buffalo NY TISSUE TROL es marca comercial de Sigma Aldrich Co LLC Sigma Aldrich Inc garantiza que sus productos concuerdan con la informaci n contenida en sta y otras publicaciones de Sigma Aldrich El comprador debe determinar la idoneidad de los productos para su uso particular Es posible que deban aplicarse t rminos y condiciones adicionales En el reverso de la factura o del albar n se incluyen los t rminos adicionales y las condiciones de venta Procedimiento n mero HT10 Revisi n anterior 2003 09 Revisi n 2013 02 AR MED a division of Quintiles Ltd EC REP Runnymede Malthouse Off Hummer Road Egham Surrey TW20 9BD United Kingdom SIGMA ALDRICH INC 3050 Spruce Street St Louis MO 63103 EE UU 1 314 771 5765 Servicio T cnico a cobro revertido al 1 314 771 5750 o por correo electr nico a clintechOsial com Para realizar pedidos a cobro revertido al 1 314 771 5750 www sigma aldrich com SIGMA ALDRICH INTERNATIONAL GmbH Wassergasse 7 900 St Gallen Switzerland 41 71 242 8000
7. para mezclando 1 parte de concentrado de Scott sustituto del agua corriente con 9 partes de agua desionizada Preparar cido ac tico al 0 5 diluyendo 4 4 ml de cido ac tico 1N con 45 6 ml de agua Preparar cido ac tico al 1 diluyendo 8 8 ml de cido ac tico 1N con 41 2 ml de agua PRECAUCIONES Se deben seguir las precauciones normales ejercidas en el manejo de reactivos de laboratorio Deshacerse de los desechos observando todas las normativas locales regionales y nacionales Consultar la Hoja de datos de seguridad del material para obtener cualquier informaci n actualizada sobre riesgos peligros o seguridad Los portaobjetos de control TISSUE TROL tricr mico son de tejido humano embebido en parafina con tejido de col geno y muscular y deben ser considerados como potencialmente infecciosos PROCEDIMIENTO RECOGIDA DE LA MUESTRA Se recomienda que la recogida de la muestra se lleve a cabo de acuerdo con las directrices del documento M29 A3 de la CLSI Ning n m todo de prueba puede garantizar la completa seguridad de que las muestras de sangre o tejido no transmitan infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre o muestras de tejido deben considerarse potencialmente infecciosos Puede utilizarse cualquier secci n cortada con un grosor de 5 micras o menos bien fijada con parafina MATERIAL ESPECIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Los portaobjetos de control positivo tal como TISSUE TROL tricr mico n mero de
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