ES HT100.qxd - Sigma
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1. N DE CIDO PERI DICO n mero de cat logo HT100 1 Acido peri dico 1 g dl en agua desionizada SOLUCI N DE BORAX n mero de cat logo HT100 2 Borax 5 g dl en agua desionizada REACTIVO DE METENAMINA DE PLATA n mero de cat logo HT100 3 Metenamina de plata 110 mg vial SOLUCI N DE CLORURO DE ORO n mero de cat logo HT100 4 Cloruro de oro 200 mg dl en agua desionizada SOLUCI N DE TIOSULFATO S DICO n mero de cat logo HT100 5 Tiosulfato s dico 2 g dl en agua desionizada ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacenar refrigerados 2 8 C la soluci n de cido peri dico el reactivo de metenamina de plata la soluci n de cloruro de oro y la soluci n de tiosulfato s dico Almacenar la soluci n de borax a temperatura ambiente 18 26 C NOTA El borax puede formar precipitado durante la refrigeraci n Estabilizar a temperatura ambiente y volver a disolverlo antes de su uso Las etiquetas de los reactivos indican la fecha de caducidad PREPARACI N Preparar la soluci n de trabajo de metenamina de plata mezclando 8 ml de soluci n de borax 100 ml de agua desionizada y el contenido del vial del reactivo metenamina de plata Mezclar hasta su total disoluci n Utilizar una sola vez y desecharlo NOTA Para aumentar las pruebas por vial a dos la metenamina de plata puede disolverse en 100 ml de agua desionizada y almacenarse herm ticamente cerrada En refrigeraci n 2 8 C es estable durante 1 mes En el mome2. TINCI N DE PLATA GMS MODIFICADO SIGMA ALDRICH Procedimiento n mero HT100 APLICACI N El kit de tinci n de plata de Sigma Aldrich se utiliza para la demostraci n histol gica de hongos membrana basal y algunos microorganismos oportunistas El kit de tinci n de plata ACCUSTAIN es para uso diagn stico in vitro Los procedimientos de metenamina borato de plata est n bien documentados y generalmente requieren una elaborada preparaci n de la soluci n antes de realizar la prueba La estabilidad de la soluci n es limitada y los resultados var an sustancialmente debido a la naturaleza caprichosa de la impregnaci n met lica y del desarrollo fotogr fico Sigma Aldrich ahora ofrece una tinci n de plata que incluye una sal de metenamina de plata estable con tamp n reactivo de tinci n y revelador Este producto proporciona al laboratorio un medio nico para visualizar hongos la membrana basal y microorganismos oportunistas como Pneumocystis carinii Tambi n se incluyen t cnicas de tinci n de plata r pidas para hornos microondas En resumen la pared de la c lula microbiana y los polisac ridos de la membrana basal se oxidan en aldeh dos mediante tratamiento con cido peri dico El grupo de aldeh dos a pH alcalino reduce el ion de plata a plata met lica El aclarado con sales de oro forma un complejo de oro m s estable y el exceso de plata se elimina mediante un lavado con tiosulfato REACTIVOS SOLUCI
3. cambi ndola 6 veces 9 Colocar los portaobjetos en soluci n de tiosulfato de sodio n mero de cat logo HT100 5 durante 2 minutos a temperatura ambiente 10 Lavar bien con agua corriente del grifo 11 Contrate ir seg n las preferencias personales con Fast Green FCF Light Green SF amarillento o tartrazina o soluciones de hematoxilina o eosina Y 12 Deshidratar en alcohol aclarar en xileno montar y examinar con el microscopio CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO Hongos de marr n p rpura a negro P carinii de marr n p rpura a negro Membrana basal negro Fondo seg n la contratinci n Si los resultados observados var an de los esperados p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Sigma Aldrich REFERENCIAS 1 Sheehan DC Hrapchak BB Theory and Practice of Histotechnology 2nd ed CV Mosby Co St Louis MO 1980 2 Koski JP Silver methenamine borate SMB Cost reduction with technical improvement in silver nitrate gold chloride impregnations J Histotechnol 4 115 1981 3 Churukian CJ Schenk EA Clark G Dilute ammoniacal silver as a substitute for methenamine silver to demonstrate Pneumocystis carinii and fungi Lab Med 17 87 1986 4 Musto L Flanigan M Elbadawi A Ten minute silver stain for Pneumocystis carinii and fungi in tissue sections Arch Pathol Lab Med 106 292 1982 5 Tseng CH New stain for fungi and basement membrane Arch Pathol Lab Med 109 196 1985 6 Leong AS Y Milios J Rapid immuno
4. m ximo de 2 a 3 minutos colocar los portaobjetos en agua desionizada caliente y comprobar el desarrollo con el miscroscopio Si los microorganismos no est n suficientemente desarrollados volver a poner los portaobjetos en la soluci n de metenamina de plata y dejarlos all de 30 segundos a 1 minuto N a SIGMA ALDRICH INC 3050 Spruce Street St Louis MO 63103 EE UU 1 314 771 5765 Servicio T cnico a cobro revertido al 1 314 771 3122 o por correo electr nico a clintech sial com Para realizar pedidos a cobro revertido al 1 314 771 5750 www sigma aldrich com 2 ES NOTA Tiempos de desarrollo sugeridos para los siguientes organismos f ngicos Blastomices 2 minutos Neumocistes 2 3 minutos Aspergillus 2 3 minutos b Para la membrana basal utilizar el microondas a 600 vatios durante 35 segundos Agitar con cuidado la soluci n Dejar incubar los portaobjetos durante 5 minutos Ponerlos por segunda vez en el horno microondas a 600 vatios durante 10 segundos Dejar incubar los portaobjetos durante 2 minutos Comprobar los portaobjetos con el microscopio Si los portaobjetos no est n suficientemente desarrollados repetir el ltimo paso hasta conseguir el tono deseado 6 Aclarar los portaobjetos en agua desionizada cambi ndola 6 veces 7 Te ir los portaobjetos con soluci n de cloruro de oro n mero de cat logo HT100 4 durante 30 segundos a temperatura ambiente 8 Aclarar los portaobjetos en agua desionizada
5. n Provoca quemaduras Evidencia escasa de efectos carcin genos Puede causar sensibilizaci n por inhalaci n y contacto con la piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible La soluci n de cloruro de oro es IRRITANTE Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa y guantes protectores adecuados Soluci n de tiosulfato s dico Evitar el contacto con la piel y los ojos El alcohol reactivo es ALTAMENTE INFLAMABLE e IRRITANTE Altamente inflamable Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada El xileno es PERJUDICIAL Inflamable Perjudicial por inhalaci n y por contacto con la piel Irritante para la piel Evitar el contacto con los ojos El formol tamponado neutro al 10 es PERJUDICIAL Perjudicial por inhalaci n por contacto con la piel y en caso de ingesti n Evidencia escasa de efectos carcin genos Puede causar sensibilizaci n por contacto co
6. a soluci n de trabajo de metenamina de plata precalentada Examinar en el microscopio despu s de 20 minutos Los hongos y los microorganismos oportunistas deben ser de color marr n oscuro contra un fondo amarillo p lido Para la demostraci n de la membrana basal colocar los portaobjetos en la soluci n de trabajo de metenamina de plata precalentada Examinar en el microscopio despu s de 30 minutos La membrana basal debe ser negra contra un fondo entre amarillo oscuro y marr n NOTA Mientras se incuban los cortes a 62 C colocar un vaso de Coplin con agua desionizada en un ba o de agua a 62 C Utilizar este agua para el aclarado antes de la evaluaci n del paso 5 Examinar los cortes en el microscopio para comprobar la tinci n adecuada a los intervalos establecidos Devolver los portaobjetos a la soluci n de metenamina de plata caliente hasta que se obtenga la intensidad deseada 6 Extraer los portaobjetos de la soluci n de trabajo de metenamina de plata una vez se haya obtenido la tinci n estructural adecuada y aclarar 6 veces con agua desionizada a temperatura ambiente 7 Te ir las secciones con soluci n de cloruro de oro n mero de cat logo HT100 4 durante 30 segundos Aclarar 6 veces con agua desionizada a temperatura ambiente 9 Colocar los cortes en soluci n de tiosulfato s dico n mero de cat logo HT100 5 durante 2 minutos 10 Lavar bien con agua corriente del grifo 11 Contrate ir seg n las pr
7. cial por inhalaci n y por contacto con la piel Irritante para el sistema respiratorio y la piel Riesgo de da o grave para los ojos Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible El formol tamponado neutro al 10 es PERJUDICIAL Perjudicial por inhalaci n por contacto con la piel y en caso de ingesti n Perjudicial posible riesgo de efectos irreversibles por inhalaci n por contacto con la piel y en caso de ingesti n Puede causar sensibilizaci n por inhalaci n y contacto con la piel No inhalar los vapores Usar ropa y guantes protectores adecuados En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible Declaraci n de riesgos y seguridad U E La soluci n de cido peri dico es CORROSIVA Provoca quemaduras En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Desprenderse inmediatamente de todas las ropas contaminadas Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro Soluci n de borax Evitar el contacto con la piel y los ojos El reactivo metenamina de plata es CORROSIVO Perjudicial en caso de ingesti
8. eferencias personales con soluci n de tartrazina Fast Green FCF Light Green SF amarillento soluci n de hematoxilina de Harris o soluci n de eosina Y 12 Deshidratar en alcohol aclarar en xileno montar y examinar con el microscopio PROCEDIMIENTO CON MICROONDAS ACCUMATE H2100 1 Desparafinar e hidratar los portaobjetos con agua desionizada 2 Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de cido peri dico n mero de cat logo HT100 1 dentro de un vaso de Coplin de pl stico Tapar el vaso de Coplin sin apretar la tapa antes de colocarlo en el horno microondas o utilice vasos de Coplin con agujeros en las tapas Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 10 segundos La soluci n de cido peri dico puede volver a utilizarse s lo si se ha usado a temperatura ambiente durante 5 minutos en lugar de usar el microondas Para las membranas basales el tiempo de incubaci n de la soluci n de cido peri dico es de 11 minutos a temperatura ambiente 3 Extraer los portaobjetos de la soluci n de cido peri dico y aclararlos con agua desionizada realizando 6 cambios 4 Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de trabajo de metenamina de plata dentro de un vaso de Coplin de pl stico 5 a Para microorganismos f ngicos utilizar el microondas a 600 vatios durante 35 segundos Mezclar cuidadosamente la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora Dejarla incubar durante 2 3 minutos Tras un
9. en caso de ingesti n Provoca quemaduras Evidencia escasa de efectos carcin genos Puede causar sensibilizaci n por inhalaci n y contacto con la piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible rganos a los que afecta ri ones y ojos 1 ES La soluci n de cloruro de oro es IRRITANTE Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa y guantes protectores adecuados La soluci n de tiosulfato s dico es IRRITANTE Irritante para los ojos y la piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar guantes adecuados y protecci n para los ojos y el rostro El alcohol reactivo es INFLAMABLE e IRRITANTE Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada rganos a los que afecta nervios e h gado El xileno es INFLAMABLE y PERJUDICIAL Posible riesgo de infertilidad Puede causar da os al feto Perjudi
10. n la piel Usar ropa y guantes protectores adecuados PROCEDIMIENTO RECOGIDA DE LA MUESTRA Se recomienda que la recogida de la muestra se lleve a cabo de acuerdo con las directrices del documento M29 A2 de la NCCLS Ning n m todo de prueba puede garantizar la completa seguridad de que las muestras de sangre o tejido no transmitan infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre o muestras de tejido deben considerarse potencialmente infecciosos Hongos y microorganismos oportunistas como P carinii Fijar en formol tamponado neutro al 10 o en soluci n de Bouin embebidos en parafina y realizar cortes de 5 micras Membrana basal Fijar en formol tamponado neutro al 10 o en soluci n de Bouin o de Zenker y realizar cortes en parafina de 1 4 micras MATERIAL ESPECIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO F rceps de pl stico o de metal recubiertos con parafina Los portaobjetos de control tales como los de hongos TISSUE TROL n mero de cat logo F 0766 o los de neumocistes TISSUE TROL n mero de cat logo P 2418 de Sigma deben incluirse en cada proceso S LO PARA PROCEDIMIENTOS EST NDAR Ba o de agua a 62 C S LO PARA PROCEDIMIENTOS CON MICROONDAS Vasos de Coplin de pl stico con tapas Horno microondas Accumate H2100 n mero de cat logo A 9084 110 voltios o n mero de cat logo A 9209 220 voltios NOTAS 1 Los platos de tinci n deben lavarse con concentrado de limpiador l quido de laboratori
11. nto de utilizarlo a ada 4 ml de soluci n de borax a 50 ml de soluci n de metenamina de plata Devolver la soluci n de metenamina de plata sobrante al frigor fico Estabilizar todos los reactivos a temperatura ambiente antes de su uso PRECAUCIONES Se deben seguir las precauciones normales ejercidas en el manejo de reactivos de laboratorio Deshacerse de los desechos observando todas las normativas locales regionales y nacionales En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro Consultar la Hoja de datos de seguridad del material para obtener cualquier informaci n actualizada sobre riesgos peligros o seguridad Los portaobjetos de control de hongos y neumocistes TISSUE TROL son tejidos humanos embebidos en parafina con hongos neumocistes y deben considerarse como potencialmente infecciosos Declaraci n de riesgos y seguridad EE UU La soluci n de cido peri dico es CORROSIVA Provoca quemaduras En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Desprenderse inmediatamente de todas las ropas contaminadas Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro Soluci n de borax Precauci n Sustancia en proceso de prueba Evitar el contacto y la inhalaci n El reactivo metenamina de plata es CORROSIVO Perjudicial
12. o SIGMACLEAN M n mero de cat logo S 4107 y con soluci n blanqueadora deben aclararse bien con agua del grifo y luego con agua desionizada realizando al menos 6 cambios 2 Los portaobjetos de control adecuados como los de hongos TISSUE TROL n mero de cat logo F 0766 o los de neumocistes TISSUE TROL n mero de cat logo P 2418 de Sigma deben incluirse en cada proceso 3 Si se utiliza el horno microondas H2100 de Sigma Aldrich v anse las instrucciones en el Manual del propietario 4 Los datos obtenidos mediante este procedimiento s lo sirven como ayuda en el diagn stico y deben ser revisados junto con otras pruebas cl nicas o informaci n de diagn stico PROCEDIMIENTO EST NDAR 1 Preparar la soluci n de trabajo de metenamina de plata tal como se describe en la secci n Preparaci n y colocarla en un ba o de agua a 62 C NOTA No dejar que la soluci n de metenamina de plata entre en contacto con metales Comprobar que la temperatura de la soluci n sea de al menos 62 C Desparafinar los cortes de tejido y rehidratar con agua desionizada 3 Colocar los cortes rehidratados en soluci n de cido peri dico n mero de cat logo HT100 1 durante 5 minutos para hongos y microorganismos oportunistas u 11 minutos para la membrana basal Extraer los portaobjetos y aclararlos con agua desionizada realizando 6 cambios Para la demostraci n de hongos y microorganismos oportunistas colocar los portaobjetos en l
13. peroxidase staining of lymphocyte antigens using microwave irradiation J Pathol 148 183 1986 7 Brinn NT Rapid metallic histologic staining using the microwave oven J Histotechnol 6 125 1983 8 Valle S Special stains in microwave oven J Histotechnol 9 237 1986 9 Carson Frieda Histotechnology A Self Instructional Text ASCP Press Chicago 1990 10 Kok and Boon Microwave Cookbook for Microscopits Coulomb Press Leydon Leidon 1992 Sigma Aldrich Inc garantiza que sus productos concuerdan con la informaci n contenida en sta y otras publicaciones de Sigma Aldrich El comprador debe determinar la idoneidad de los productos para su uso particular Es posible que deban aplicarse t rminos y condiciones adicionales En el reverso de la factura o del albar n se incluyen los t rminos adicionales y las condiciones de venta Procedimiento n mero HT100 Revisi n anterior 2003 04 Revisi n 2003 09 AR MED Ltd Runnymede Malthouse Egham TW20 9BD Reino Unido C ec rer SIGMA ALDRICH CHEMIE GmbH P O 1120 89552 Steinheim Alemania 49 7329 970
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