SISTEMA DE TINCIóN ÁCIDO PERIóDICO-SCHIFF - Sigma
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1. SISTEMA DE TINCI N CIDO PERI DICO SCHIFF SIGMA ALDRICH akar A n mero 395 APLICACI N Los reactivos de cido peri dico Schiff PAS est n dise ados para uso diagn stico in vitro El procedimiento de tinci n PAS de Sigma Aldrich ofrece m todos est ndar y de microondas para la demostraci n de linfocitos y mucopolisac ridos El patr n de tinci n de los linfocitos es til para la toma de decisiones terap uticas en casos establecidos de leucemia linfoc tica La reacci n de PAS en los cortes de tejido es til para la demostraci n de mucopolisac ridos El procedimiento de digesti n con diastasa a amilasa seguido de la tinci n PAS es til como ayuda en el diagn stico de la enfermedad de almacenamiento de glic geno El procedimiento de tinci n PAS tambi n puede utilizarse para la demostraci n de organismos f ngicos en los cortes de tejidos Cuando se tratan con cido peri dico los glicoles se oxidan en aldeh dos Tras la reacci n con el reactivo Schiff una mezcla de pararosanilina y metabisulfito s dico se libera un aducto de pararosanilina que ti e los componentes celulares que contienen alicol Esta reacci n puede realizarse en frotis de sangre o m dula sea en improntas de tejidos o en cortes de tejidos Cuando se utiliza con frotis de sangre o m dula sea esta prueba puede ser til en el reconocimiento de algunos casos de eritroleucemia y leucemia linfobl stica aguda La digesti2. TISSUE TROL de Sigma n mero de cat logo P8814 deben utilizarse en cada proceso S LO EN PROCEDIMIENTOS CON MICROONDAS Horno microondas ACCUMATE tm H2100 n meros de cat logo A 9084 110 v o A 9209 220 v Vaso de Coplin con tapas con respiraderos Concentrado de Scott sustituto del agua corriente n mero de cat logo S5134 6x100ML a Amilasa s lo para el procedimiento de extracci n de diastasa NOTAS Si se utiliza el horno microondas H2100 de Sigma Aldrich v anse las instrucciones en el Manual del propietario Pueden utilizarse frotis de sangre procedentes de individuos cl nicamente sanos para fines de control Los leucocitos polimorfonucleares mostrar n una tinci n citopl smica de color rojo intenso Cada vez que se realiza una secuencia de tinci n deben incluirse cortes de tejido que se sepa que son PAS positivos y o que contienen glic geno Sigma Aldrich ofrece PAS TISSUE TROL n mero de cat logo P 8814 para este fin Los datos obtenidos mediante este procedimiento s lo sirven como ayuda en el diagn stico y deben ser revisados junto con otras pruebas cl nicas o informaci n de diagn stico PROCEDIMIENTO I PREPARACIONES DE SANGRE M DULA SEA O IMPRONTAS DE TEJIDOS Procedimiento est ndar 1 Fijar los frotis de sangre secados al aire durante 1 temperatura ambiente con soluci n fijadora de formol etanol 2 Aclarar los portaobjetos durante 1 minuto con agua corriente del grifo a chorro suave
3. ales En el reverso de la factura o del albar n se incluyen los t rminos adicionales y las condiciones de venta Procedimiento n mero 395 Revisi n anterior 2003 09 Revisi n 2011 03 AR MED Ltd Runnymede Malthouse Egham TW20 9BD Reino Unido C ec rer SIGMA ALDRICH CHEMIE GmbH P O 1120 89552 Steinheim Alemania 49 7329 970
4. ediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible Uso restringido a profesionales Evitar la exposici n solicitar instrucciones especiales antes de su uso La soluci n de hematoxilina Gill N 3 es PERJUDICIAL Muy t xica por inhalaci n Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada Organos a los que afecta h gado y ri ones 1 ES El alcohol reactivo es INFLAMABLE e IRRITANTE Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada El xileno es INFLAMABLE y PERJUDICIAL Posible riesgo de infertilidad Puede causar da os al feto Perjudicial por inhalaci n y por contacto con la piel Irritante para el sistema respiratorio y la piel Riesgo de da o grave para los ojos Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el ro
5. ivo Schiff dentro de un vaso de Coplin de pl stico Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 15 segundos Mezclar la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora y dejarla incubar durante 1 minuto Aclarar con agua corriente del grifo a chorro suave durante 5 minutos Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de hematoxilina Gill N 3 dentro de un vaso de Coplin de pl stico Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 10 segundos Aclarar con agua corriente del grifo durante 1 2 minutos y luego azular con concentrado de Scott sustituto del agua corriente a temperatura ambiente Aclarar con agua corriente del grifo Secar al aire Los portaobjetos pueden montarse en un medio con base de tolueno o xileno CORTES DE TEJIDOS Procedimiento est ndar iy 2 3 4 5 6 7 8 Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada Sumergir los portaobjetos en soluci n de cido peri dico n mero de cat logo 395 1 durante 5 minutos a temperatura ambiente 18 26 C Aclarar los portaobjetos varias veces con agua destilada cambiando el agua cada vez Sumergir los portaobjetos en reactivo Schiff n mero de cat logo 395 2 durante 15 minutos a temperatura ambiente 18 26 C Lavar los portaobjetos durante 5 minutos con agua corriente del grifo Contrate ir los portaobjetos con soluci n de hematoxilina Gill N 3 n mero de cat logo GHS 3 durante 90 segundos Aclarar los porta
6. jos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada El xileno es PERJUDICIAL Inflamable Perjudicial por inhalaci n y por contacto con la piel Irritante para la piel Evitar el contacto con los ojos PROCEDIMIENTO RECOGIDA DE LA MUESTRA Se recomienda que la recogida de la muestra se lleve a cabo de acuerdo con las directrices del documento M29 A2 de la NCCLS Ning n m todo de prueba puede garantizar la completa seguridad de que las muestras de sangre o tejido no transmitan infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre o muestras de tejido deben considerarse potencialmente infecciosos Se utilizan frotis de sangre total heparinizada o con EDTA o de m dula sea reci n preparados Fijar cuanto antes Para los polisac ridos puede utilizarse tejido fijado con formol tamponado neutro al 10 soluci n de Zenker o de Bouin Debe tenerse en cuenta que algunos carbohidratos son hidrosolubles Para la demostraci n de glic geno se recomienda l quido de Carnoy l quido de Gendre o formol alcoh lico cido El tiempo necesario para la extracci n de la diastasa puede ser m s largo cuando el tejido se fija en cido p crico con fijador Los cortes de tejido deben ser de 5 micras MATERIAL ESPECIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Soluci n de formaldeh do 37 Alcohol reactivo Papel de filtro Whatman N 4 Los portaobjetos de control PAS tales como PAS
7. minuto a gt No Sumergir los portaobjetos en soluci n de cido peri dico n mero de cat logo 395 1 durante 5 minutos a temperatura ambiente Aclarar los portaobjetos varias veces con agua destilada cambiando el agua cada vez Sumergir los portaobjetos en reactivo Schiff n mero de cat logo 395 2 durante 15 minutos a temperatura ambiente NOTA Inmediatamente despu s del uso tapar el reactivo Schiff y devolverlo al frigor fico 2 8 C Aclarar los portaobjetos durante 5 minutos con agua corriente del grifo Contrate ir los portaobjetos con soluci n de hematoxilina Gill N 3 n mero de cat logo GHS 3 durante 90 segundos Aclarar los portaobjetos en agua corriente del grifo durante 15 30 segundos secar al aire y examinar en el microscopio con una lente de inmersi n en aceite 900x Los portaobjetos pueden montarse en un medio con base de tolueno o xileno Procedimiento con microondas d 2 gt 8 9 10 11 12 13 Fijar los frotis secados al aire a temperatura ambiente durante 1 minuto con fijador de formol etanol Aclarar los portaobjetos durante 1 minuto con agua corriente del grifo a chorro suave Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de cido peri dico dentro de un vaso de Coplin de pl stico Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 10 segundos Aclarar bien varias veces con agua desionizada cambiando el agua cada vez Colocar los portaobjetos en 40 ml de react
8. n con diastasa 0 amilasa puede utilizarse como ayuda en el diagn stico de la enfermedad de almacenamiento de glic geno La diastasa hidroliza el almid n el glic geno y los productos de degradaci n que tienen su origen en estos polisac ridos presentes en el tejido Los productos derivados resultantes del proceso de digesti n se desechan mediante lavado antes de la tinci n PAS Los procedimientos de Sigma Aldrich incluyen t cnicas PAS para una tinci n r pida en hornos microondas REACTIVOS SOLUCI N DE CIDO PERI DICO n mero de cat logo 395 1 Acido peri dico 1 g dl REACTIVO SCHIFF n mero de cat logo 395 2 Pararosanilina HCI 1 y metabisulfito s dico 4 en cido clorh drico 0 25 mol l SOLUCI N DE HEMATOXILINA GILL N 3 n mero de cat logo GHS 3 Hematoxilina certificada 6 g l yodato s dico 0 6 g l sulfato de aluminio 52 8 g l y estabilizante ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacenar la soluci n de cido peri dico y el reactivo Schiff en el frigor fico 2 8 C Almacenar la soluci n de hematoxilina Gill N 3 a temperatura ambiente 18 26 C Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas La formaci n de un precipitado en el reactivo de Schiff n mero de cat logo 395 2 no afecta al rendimiento DETERIORO Desechar la soluci n de hematoxilina Gill N 3 si se vuelve marr n sobreoxidaci n por aire o p rpura p rdida de acidez o cuando el tiem
9. objetos con agua corriente del grifo Deshidratar aclarar y montar los cortes en un medio con base de tolueno o xileno Procedimiento con microondas para digesti n con diastasa a Amilasa 1 N Utilizar portaobjetos de prueba duplicados Etiquetar uno para la digesti n con diastasa y el otro s lo para la tinci n PAS NOTA Se recomienda utilizar los portaobjetos recubiertos con adhesivo de tejido No utilizar celoidina con los cortes al realizar la digesti n con diastasa Desparafinar e hidratar los portaobjetos con agua desionizada Preparar la soluci n de trabajo de diastasa amilasa disolviendo 0 2 g de a amilasa n mero de cat logo A 3176 en 40 ml de agua desionizada Mezclar bien y colocar en un vaso de Coplin de pl stico Preparar inmediatamente antes de su uso Poner en el horno microondas a 600 vatios durante 25 segundos Extraer los portaobjetos del vaso de Coplin y aclarar el portaobjetos digerido con agua corriente del grifo durante 5 minutos Utilizando ambos portaobjetos el digerido y el no digerido siga con el procedimiento del horno microondas para el tejido paso 2 SIGMA ALDRICH INC 3050 Spruce Street St Louis MO 63103 EE UU 1 314 771 5765 Servicio T cnico a cobro revertido al 1 314 771 3122 O por correo electr nico a clintech Osial com Para pedidos a cobro revertido al 1 314 771 5750 www sigma aldrich com 2 ES Procedimiento con microondas 1 Desparafinar e hidratar con agua de
10. po requerido para obtener la tinci n adecuada supere en m s de 5 minutos el tiempo recomendado en el procedimiento PREPARACI N La soluci n de cido peri dico el reactivo Schiff y la soluci n de hematoxilina Gill N 3 se suministran listos para su uso La SOLUCI N FIJADORA DE FORMOL ETANOL se prepara mezclando 5 ml de formaldeh do con 45 ml de etanol al 95 alcohol reactivo Las preparaciones deben ser del d a y deben guardarse bien cerradas PRECAUCIONES Se deben seguir las precauciones normales ejercidas en el manejo de reactivos de laboratorio Deshacerse de los desechos observando todas las normativas locales regionales y nacionales Consultar la Hoja de datos de seguridad del material para obtener cualquier informaci n actualizada sobre riesgos peligros o seguridad Los portaobjetos de control PAS TISSUE TROL son tejidos humanos embebidos en parafina con PAS y deben ser considerados como potencialmente infecciosos Declaraci n de riesgos y seguridad EE UU La soluci n de cido peri dico es CORROSIVA Provoca quemaduras En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Desprenderse inmediatamente de todas las ropas contaminadas Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro El reactivo Schiff es TOXICO Perjudicial en caso de ingesti n Provoca quemaduras Puede causar c ncer En caso de contacto con los ojos enjuagar inm
11. rlo con el portaobjetos de control positivo de glic geno no digerido Si los resultados observados var an de los esperados p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Sigma Aldrich REFERENCIAS 1 Hotchkiss RD A microchemical reaction resulting in the staining of polysaccharide structures in fixed tissue preparations Arch Biochem 16 131 1948 2 Sheehan DC Hrapchak BB Theory and Practice Histotechnology 2nd ed CV Mosby St Louis MO pp 52 164 167 1980 3 Culling CFA Allison RT Barr WT Cellular Pathology Technique 4th ed Butterworths pp 216 220 1985 4 Davey FR Nelson DA Periodic Acid Schiff PAS Stain IN Hematology 2nd ed WJ Williams E Buetler AJ Erslev RW Rundles McGraw Hill New York pp 1630 1632 1977 5 Thompson SW Selected Histochemical and Histopathological Methods CC Thomas Springfield IL pp 520 539 1966 6 Leong AS Y Milios J Rapid immunoperoxidase staining of lymphocyte antigens using microwave irradiation J Pathol 148 183 1986 7 Brinn NT Rapid metallic histologic staining using the microwave oven J Histotechnol 6 125 1983 8 Valle S Special stains in the microwave oven J Histotechnol 9 237 1986 Sigma Aldrich Inc garantiza que sus productos concuerdan con la informaci n contenida en sta y otras publicaciones de Sigma Aldrich El comprador debe determinar la idoneidad de los productos para su uso particular Es posible que deban aplicarse t rminos y condiciones adicion
12. sionizada 2 Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de cido peri dico dentro de un vaso de Coplin de pl stico Tapar el vaso sin apretar la tapa o utilice tapas con agujeros 3 Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 10 segundos 4 Aclarar bien varias veces con agua desionizada cambiando el agua cada vez 5 Colocar los portaobjetos en 40 ml de reactivo Schiff dentro de un vaso de Coplin de pl stico 6 Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 15 segundos Mezclar la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora y dejarla incubar durante 1 minuto 7 Aclarar con agua corriente del grifo a chorro suave durante 5 minutos 8 Colocar los portaobjetos en hematoxilina Gill N 3 o en soluci n verde claro dentro de un vaso de Coplin de pl stico 9 Poner en el horno microondas a 800 vatios durante 10 segundos a Si se utiliza hematoxilina Gill aclarar con agua corriente del grifo durante 1 2 minutos y luego azular con concentrado de Scott sustituto del agua corriente a temperatura ambiente Aclarar con agua corriente del grifo Deshidratar aclarar y montar b Si se utiliza soluci n verde claro aclarar con agua desionizada y deshidratar r pidamente aclarar y montar pa o CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO Las sustancias PAS positivas ti en en rojo y el n cleo en azul El portaobjetos de extracci n de diastasa 0 amilasa no tendr ninguna tinci n PAS visible de glic geno al compara
13. stro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible Declaraci n de riesgos y seguridad U E La soluci n de cido peri dico es CORROSIVA Provoca quemaduras En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Desprenderse inmediatamente de todas las ropas contaminadas Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro El reactivo Schift es T XICO Provoca quemaduras Puede causar c ncer En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible Uso restringido a profesionales Evitar la exposici n solicitar instrucciones especiales antes de su uso La soluci n de hematoxilina Gill N 3 es PERJUDICIAL Muy t xica por inhalaci n Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada El alcohol reactivo es ALTAMENTE INFLAMABLE e IRRITANTE Altamente inflamable Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los o
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