ALTERNATIVAS MICROBIOLÓGICAS PARA EL MANEJO
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1. En el cuarto grupo de tratamientos no se detect la enfermedad AUDPC 0 y estuvo conformado por los tratamientos en donde no se inocul P cinnamomi T4 T Ts Ta Ti Tas Ta T4 En todos los tratamientos donde se realiz la inoculaci n con P cinnamomi Trichoderma sp y Pseudomonas sp se logr re aislar colonias de estos tres microorganismos adem s para los dos primeros se observaron estructuras t picas en muestras de ra ces tefiidas En contraste en los tratamientos no inoculados con estos microorganismos no se observaron las estructuras caracter sticas de estos En general las cepas de microorganismos aplicados en el presente trabajo con el objetivo de controlar el pat geno lograron reducir el nivel de enfermedad de manera similar o mejor que la mezcla de fungicidas Sin embargo al aplicarlos combinadamente no se obtuvo el efecto sin rgico reportado en la literatura para las especies de los mismos g neros 8 9 12 El aislamiento de Trichoderma sp T mostr la mayor reducci n de la enfermedad con nivel superior al tratamiento con fungicidas las especies pertenecientes a este g nero han sido ampliamente estudiadas por su capacidad de inhibir otros microorganismos 9 17 El g nero Trichoderma presenta mecanismos de competencia hidr lisis enzim tica e inducci n de respuestas de defensa en la planta entre otros lo que ha permitido Su uso como biocontrolador de pat genos como P cinnamomi 12 Se ha2. T4 Tio Tis y T4 los cuales fueron aplicaciones de mezclas de G fasciculatum con Trichoderma sp y Psudomonas sp a plantas en unos casos infectadas con el agente causal de la marchitez y en otros sin infectar En el cuarto grupo se ubicaron aquellos tratamientos sin aplicaci n del HMA G fasciculatum T T4 T Tj T4 T4 T y T Como era de esperarse estos tratamientos presentaron un valor de cero para porcentaje de colonizaci n micorrizica y por esta raz n no se muestran en la Figura 2B Los resultados sugieren que la cepa de Trichoderma sp aplicada incidi negativamente en la colonizaci n de la cepa de HMA Como se discuti antes el antagonismo en las especies del g nero Trichoderma hacia otros microorganismos se ha identificado extensamente lo que podr a explicar lo observado Este posible antagonismo se debe considerar cuidadosamente al momento de dise ar una estrategia de control biol gico de las enfermedades Por otra parte algunos estudios plantean que P cinnamomi afecta negativamente la colonizaci n micorr zica en aguacate 29 lo que explicar a la disminuci n en el porcentaje de colonizaci n presentado en el segundo grupo de significancia Para los tratamientos T y T ubicados en el segundo grupo de porcentaje de colonizaci n micorrizica se observaron los menores valores de AUDPC en las plantas con aplicaci n de HMA Para 25 la aplicaci n de microorganismos ben ficos solos o en mezclas en
3. microbiota del suelo consecuencia de su gran diversidad y de las distintas relaciones ecol gicas que lo gobiernan este trabajo estuvo encaminado a evaluar en condiciones de invernadero el efecto de cepas de Trichoderma sp Glomus fasciculatum y una cepa de Pseudomonas sp en el desarrollo de pl ntulas de P americana sin inocular e inoculadas con P cinnamomi Los resultados encontrados en este trabajo sugieren que G fasciculatum y Pseudomonas sp solos o en combinaci n favorecen el desarrollo de pl ntulas de aguacate mientras que Trichoderma sp present los mejores resultados en la reducci n del progreso de la enfermedad de marchitez en plantas inoculadas con P cinnamomi Los microorganismos del suelo presentan un enorme potencial para el desarrollo y protecci n contra pat genos en P americana pero se hace necesario entender todas las relaciones para poder potenciar su uso como biofertilizantes y agentes de biocontrol Palabras clave marchitez de aguacate microorganismos promotores de crecimiento INTRODUCCI N Las condiciones agroclim ticas que se encuentran en varias regiones de Colombia presentan caracter sticas favorables para el desarrollo del cultivo de aguacate 1 raz n por la cual seg n la FAO 2 Colombia reporta los m s altos rendimientos de la fruta en toneladas por hect rea A pesar de esto Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 octubre diciembre este frutal estuvo mucho tie
4. normalidad de los datos a lt 0 01 utilizando los criterios de Levene y Kolmogorov Smirnov respectivamente Los datos se sometieron a an lisis de varianza y las medias se compararon con la prueba de Tukey a lt 0 01 RESULTADOS Y DISCUSION DESARROLLO DE LA ENFERMEDAD Diez dias despu s de la aplicaci n las pl ntulas inoculadas con P cinnamomi presentaron s ntomas t picos de la enfermedad caracterizados por marchitez amarillamiento foliar retraso en el crecimiento y pudrici n de ra ces Figura 1A 1B y 1C Durante el tiempo de evaluaci n no se observ muerte total de las plantas Las diferencias significativas a lt 0 01 encontradas para los valores de AUDPC permitieron diferenciar los tratamientos en cuatro grupos Figura 2A En el primer grupo se ubic el control inoculado con el pat geno nicamente T el cual present el nivel m s alto de enfermedad En el segundo grupo con un nivel intermedio de enfermedad se encontraron los tratamientos inoculados con el microorganismo pat geno junto con otros microorganismos del suelo aplicados solos y en mezcla y el tratamiento inoculado con el pat geno m s la mezcla de fungicidas 22 octubre diciembre To T T Ta Tip Tis T47 En el tercer grupo se ubic el tratamiento inoculado con el pat geno y con una cepa del hongo Trichoderma sp T Este tratamiento mostr el nivel m s bajo de enfermedad entre los tratamientos en donde se inocul el pat geno
5. reportado la activaci n de la resistencia sist mica inducida ISR y adquirida SAR por parte de bacterias del grupo de las Pseudomonas sp y HMA 26 27 28 Esta activaci n podr a depender de diversos factores como el genotipo de la cepa utilizada el suelo los nutrientes disponibles el clima y el manejo del cultivo entre otros ya que en contraste con lo obtenido en el presente estudio en trabajos realizados por otros autores 29 no se encontr efecto de la inoculaci n micorrizal sobre los niveles de enfermedad inducida por P cinnamomi Considerando que en Colombia el manejo de la tristeza del aguacate se basa en un 68 en productos de origen qu mico como nica estrategia y los agroqu micos representan el 48 1 96 de los costos totales de producci n 3 5 el uso de los microorganismos para control de la enfermedad reportados en este trabajo podr an ser una alternativa viable la cual se debe evaluar en condiciones de cultivo Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 octubre diciembre T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 TIO Til TI2 T13 T14 TIS T16 T17 A T plantas control T plantas inoculadas con P cinnamomi T T harzianum P cinnamomi T T harzianum T P cinnamomi G fasciculatum T G fasciculatum T P cinnamomi Pseudomonas sp T Pseudomonas sp T Pseudomonas sp G fasciculatum P cinnamomi T Pseudomonas sp G fasciculatum B T4 P cinnamomi T harzianum G
6. y Raney D Two simple media for demonstration of pyocyanin and fluorescin Journal Laboratory Clinical Medical 1954 vol 44 pp 301 307 ISSN 0022 2143 15 Simon A y Ridge E H The use of ampicillin in a simplified selective Medium for the isolation of Fluorescent Pseudomonas Journal Applied Bacterial 1974 vol 37 pp 459 460 ISSN 1365 2672 DOI 10 1111 j 1365 2672 1974 tb00464 x 16 Patten C L y Glick B R Role of Pseudomonas putida indole acetic acid in development of host plant root system Applied environment microbiology 2002 vol 48 pp 3795 3801 ISSN 0099 2240 17 Khalili E Sadravi M Naeimi S y Khosravi V Biological control of rice brown spot with native isolates of three Trichoderma species Brazilian Journal of Microbiology 2012 vol 43 no 1 pp 297 305 ISSN 1517 8382 18 Porras M Barrau C y Romero F Effects of soil solarization and Trichoderma on strawberry production Crop Protection 2007 vol 26 pp 782 787 ISSN 0261 2194 19 Porter W The Most Probable Number method for ennumerating infective propagules of vesicular arbuscular micorrizal fungi in soil Australian Journal of Soil Research 1979 vol 17 pp 515 519 ISSN 0004 9573 20 Madden L V Hughes G y van den Bosch F The Study of Plant Disease Epidemics American Phytopathological Society 2007 650 pp ISSN 0031 949X C mo citar 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
7. 10 11 12 13 Tratamientos E 2500 2000 1500 1000 Area foliar cm Un e 123 4 5 67 8 9 1011 D 13 Tratamientos 14 15 16 17 cd 14 15 16 17 14 15 16 17 Colonizaci n micorrizal Altura cm Biomasa seca g 5 6 9 10 11 12 15 16 Tratamientos D as de evaluaci n 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Tratamientos A porcentaje de colonizaci n micorrizal B rea foliar C biomasa seca D altura de las plantas E viabilidad de ra ces F valores con letras diferentes muestran diferencias significativas con base en la prueba Tukey 99 T plantas control T plantas inoculadas con P cinnamomi T T harzianum P cinnamomi T T harzianum T P cinnamomi G fasciculatum T G fasciculatum T P cinnamomi Pseudomonas sp T Pseudomonas sp T Pseudomonas sp G fasciculatum P cinnamomi T Pseudomonas sp G fasciculatum B de izquierda a derecha T P cinnamomi T harzianum G fasciculatum T T harzianum G fasciculatum T P cinnamomi T harzianum Pseudomonas sp T T harzianum Pseudomonas sp T P cinnamomi T harzianum G fasciculatum Pseudomonas sp T T harzianum G fasciculatum Pseudomonas sp T 16 17 metalaxyl mancozeb fosfito de potasio P cinnamomi Figura 2 rea bajo la curva del progreso de la enfermedad AUDPC 24 Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 octub
8. 28 936 ISSN 1983 2052 8 Etebu E y Osborn A A Review of Indicators of Healthy Agricultural Soils with Pea Footrot Disease Suppression Potentials Sustainable Agriculture Research 2012 vol 1 no 2 pp 10 35 ISSN 1044 0046 9 Jena N Pseudomonas and Trichoderma The most effective bio control agents against damping off pathogens of vegetable crops Asian Journal of Microbiology Biotechnology and Environmental Sciences 2012 vol 14 no 2 pp 295 298 ISSN 0972 3005 10 Yang C Crowley D y Menge J 16S rDNAengerprinting of rhizosphere bacterial communities associated with healthy and Phytophthora infected avocado roots Microbiology Ecology 2001 vol 35 pp 129 136 ISSN 0095 3628 Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 11 Costa J Menge J y Casale W Biological control of Phytophthora root rot of avocado with microorganisms grown in organic mulches Brazilian Journal of Microbiology 2000 vol 31 pp 239 246 ISSN 1517 8382 12 Chambers S y Scott E n vitro antagonism of Phytophthora cinnamomi and P citricola by isolates of Trichoderma sp and Gliocladium virens Journal of Phytopathology 1995 vol 143 pp 471 477 ISSN 0931 1785 13 Orozco Vargas C Cabezas M y Cuervo J Colonizaci n micorricica en plantas de aguacate Persea americana L Revista U D C A Actualidad y Divulgaci n Cient fica 2010 vol 13 no 2 pp 51 60 ISSN 0123 4226 14 14 King E Ward M
9. 31 octubre diciembre Giovannetti M y Mosse M An evaluation of techniques for measuring vesicular arbuscular mycorrhizal infection in roots New Phytologist 1980 vol 84 pp 489 500 ISSN 1469 8137 Phillips J M y Hayman D S Improves procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assesment of infection Transaction British Mycological Society 1970 vol 55 pp 158 161 ISSN 0007 1536 Brundrett M C y Abbott L K Mycorrhizal fungus propagules in the jarrah forest Il Spatial variability in inoculum levels New Phytologist 1995 vol 131 pp 461 469 ISSN 1469 8137 Kormanik P P Mcgraw A C y Shultz R C Procedures and equipment for staining large number of plant roots for endomycorrhizal assay Canadian Journal of Microbiology 1980 vol 26 pp 536 538 ISSN 0008 4166 Phillips D Grant B y Weste G Histological changes in the roots of an avocado cultivar Duke 7 infected with Phytophthora cinnamomi Phytopathology 1987 vol 77 pp 691 698 ISSN 0031 949X Lugtenberg B y Kamilova F Plant Growth Promoting Rhizobacteria Annual Review of Microbiology 2009 vol 63 pp 541 556 Garc a L Romero D Zeriouh H Cazorla F Torres D Vicente A y P rez A Isolation and selection of plant growth promoting rhizobacteria as inducers of systemic resistance in melon P ant Soil 2012 vol 358 pp 201 212 ISSN 1573 5036 Jung
10. C Es posible que un incremento en las ra ces viables pueda mejorar la capacidad de soportar la infecci n por P cinnamomi y disminuir los s ntomas visibles de la enfermedad Los materiales de P americana que se han categorizado como tolerantes a este pat geno presentan mayor cantidad de ra ces viables lo que apoya esta hip tesis 6 25 10 VARIABLES BIOM TRICAS DE LAS PLANTAS Durante los primeros 30 d as despu s de la aplicaci n de los tratamientos no se observaron diferencias notables en las variables altura rea foliar y biomasa seca entre los diferentes tratamientos aplicados a las plantas de aguacate Figura 2D 2E y 2F A partir del d a 30 en adelante se percibieron las diferencias entre tratamientos notablemente se observ una marcada reducci n del crecimiento y desarrollo de las plantas inoculadas con P cinnamomi T hasta finalizar el estudio Esta tendencia en la variedad de aguacate Hass es similar a la reportada para la variedad Mexicola en la cual se redujo un 25 la altura 18 el di metro del tallo 90 el n mero de hojas y 49 el rea foliar 30 A partir del d a 30 Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 y hasta el final de la evaluaci n en los tratamientos sin inoculaci n de P cinnamomi pero con aplicaci n de los otros microorganismos T G fasciculatum T Pseudomonas sp T Pseudomonas sp G fasciculatum y T Trichoderma sp G fasciculatum Pse
11. C Mart nez A L pez A y Pozo A Mycorrhiza Induced Resistance and Priming of Plant Defenses Journal Chemical Ecology 2012 vol 38 pp 651 664 ISSN 0098 0331 Davis R M Menge I A y Zentmyer G A Influence of vesicular arbuscular mycorrhizae on Phytophthora root rot of three crop plant Phytopathology 1978 vol 68 pp 1614 161 ISSN 0031 949X Besoain X Arenas C Salgado E y Latorre B A Efecto del Periodo de Inundaci n en el Desarrollo de la Tristeza del Palto Persea americana Causada por Phytophthora cinnamomi Ciencia e Investigaci n Agraria 2005 vol 32 no 2 pp 97 103 ISSN 0718 1620 Parniske M Arbuscular mycorrhiza the mother of plant root endosymbioses Nature Reviews Microbiology 2008 vol 6 pp 763 775 ISSN 1740 1526 Recibido 14 de abril de 2013 Aceptado 27 de septiembre de 2013 Ram rez Gil Joaqu n G Casta eda S nchez Dar o A y Morales Osorio Juan G Alternativas microbiol gicas para el manejo de Phytophthora cinnamomi Rands en Persea americana Mill bajo condiciones de casa malla en l nea Cultivos Tropicales vol 35 no 4 pp 19 27 ISSN 1819 4087 Consultado 27
12. Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 octubre diciembre ISSN impreso 0258 5936 ISSN digital 1819 4087 INCA Ministerio de Educaci n Superior Cuba Instituto Nacional de Ciencias Agr colas http ediciones inca edu cu ALTERNATIVAS MICROBIOL GICAS PARA EL MANEJO DE Phytophthora cinnamomi Rands EN Persea americana Mill BAJO CONDICIONES DE CASA MALLA Microbiological alternatives for Phytophthora cinnamomi Rands management in Persea americana Mill under greenhouse conditions Joaqu n G Ram rez Gil Dar o A Casta eda S nchez y Juan G Morales Osorio ABSTRACT Avocado crop production in Colombia requires establishing environmentally friendly and inexpensive measures for wilt disease management whose main causal agent is Soil microorganisms use is an option for improving nutrition and health in Persea americana looking to be more competitive in order to face the free trade agreements and to exploit the full export potential for this fruit Understanding the complexity of the soil microbiota system due to its great diversity and different ecological relationships that govern it this study was designed to evaluate under greenhouse conditions the effect of Trichoderma sp Glomus fasciculatum and Pseudomonas sp isolates on P americana seedling development inoculated and non inoculated with P cinnamomi Results found in this work suggest that G fasciculatum and Pseudomonas sp alone or in combinat
13. MicROORGANISMOS Se utiliz un aislamiento de P cinnamomi CIB 35 proveniente de la colecci n de cepas de la Corporaci n para Investigaciones Biol gicas Medell n Colombia CIB virulento sobre Persea americana var Hass Se seleccion la cepa de G fasciculatum de la colecci n de microorganismos del suelo de la Universidad Nacional de Colombia sede Medell n que mostr los mejores resultados a nivel de desarrollo de P americana La cepa de Pseudomonas sp se aisl de la rizosfera de un rbol de aguacate sembrado en un lote altamente afectado por P cinnamomi La muestra de suelo se disolvi en agua destilada est ril y se prepararon diluciones 10 y 10 de las cuales se sembraron 100 uL en medio King B KB 14 suplementado con ampicilina 50 mg L y cloranfenicol 12 5 mg L 15 Las colonias que produjeron pigmentos fluorescentes bajo luz ultravioleta 260 nm se re aislaron en el mismo medio 15 A partir de las colonias puras obtenidas se realizaron pruebas cualitativas y cuantitativas para producci n de ndoles totales usando la soluci n indicadora Salkoswki modificada para su uso en sobrenadantes de cultivos bacterianos y se seleccion la colonia que present la mayor producci n de esta fitohormona para las pruebas 16 Para la selecci n de la cepa de Trichoderma sp se realizaron pruebas de reducci n del di metro radial in vitro 17 usando cepas comerciales de Trichoderma sp y T asperellum Bio
14. ban durante 15 min 1 Despu s de la desinfestaci n se aplic un pre tratamiento para acelerar la germinaci n el cual consisti en la remoci n de la testa corte basal de 2 a 4 mm y corte apical de 10 a 20 mm 1 Las semillas se sembraron en cuarzo tamizado en malla de 2 mm a los 60 dias se trasplantaron a potes pl sticos de 2 kg de capacidad Con el fin de observar resultados en forma temprana se removieron los cotiledones de las pl ntulas al momento del trasplante Las plantas se mantuvieron en condiciones de casa malla fertilizadas con la soluci n nutritiva Hoagland manteniendo las condiciones de 50 de la m xima capacidad de retenci n de humedad del suelo TRATAMIENTOS EVALUADOS En la tabla se presentan resumidos todos los tratamientos evaluados en el presente estudio Las inoculaciones de los microorganismos del suelo se hicieron en forma individual y en mezclas tanto a plantas de aguacate inoculadas y no inoculadas con P cinnamomi octubre diciembre INOCULACION DE MICROORGANISMOS Para evaluar el efecto de G fasciculatum se inocul el suelo con 35 g de in culo crudo kg de suelo 45 prop gulos infectivos de G fasciculatum g de suelo 19 La inoculaci n con Trichoderma sp se realiz preparando una soluci n ajustada a una concentraci n de10 UFC g de suelo 9 La bacteria Pseudomonas sp se inocul a una concentraci n de 1 x 10 UFC g de suelo 9 Un mes despu s de aplicados los t
15. fasciculatum T T harzianum G fasciculatum T P cinnamomi T harzianum Pseudomonas sp T T harzianum Pseudomonas sp T P cinnamomi T harzianum G fasciculatum Pseudomonas sp T T harzianum G fasciculatum Pseudomonas sp T metalaxyl mancozeb fosfito de potasio P cinnamomi T plantas inoculadas con P cinnamomi T plantas control C T plantas control T plantas inoculadas con P cinnamomi T T harzianum P cinnamomi T T harzianum T P cinnamomi G fasciculatum T G fasciculatum T P cinnamomi Pseudomonas sp T Pseudomonas sp T Pseudomonas sp G fasciculatum P cinnamomi T Pseudomonas sp G fasciculatum B de izquierda a derecha T P cinnamomi T harzianum G fasciculatum T T harzianum G fasciculatum T P cinnamomi T harzianum Pseudomonas sp T T harzianum Pseudomonas sp T P cinnamomi T harzianum G fasciculatum Pseudomonas sp T T harzianum G fasciculatum Pseudomonas sp T metalaxyl mancozeb fosfito de potasio P cinnamomi Figura 1 Detalle de plantas representativas de cada tratamiento al final del trabajo 120 d as 23 H Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 octubre diciembre A 140 120 100 AUDPC 1234567 8 9 10 HU 12 13 Tratamientos ab cd ef fg ef gh fgh gh Ra ces viables t2 to A un e o o e 12 345678 9
16. grupo estudiado de Pseudomonas sp increment el porcentaje de ra ces viables posiblemente por la producci n observada de auxinas lo que aumentar a la capacidad de absorci n de agua y nutrientes 9 26 Las plantas con mejor condici n fisiol gica y ra ces saludables podr an soportar mejor las condiciones de estr s abi tico y bi tico como el ocasionado por el pat geno P cinnamomi 25 como se encontr en el presente trabajo Es importante evaluar los microorganismos ben ficos en rboles establecidos en condiciones de campo y durante per odos de tiempo prolongados para determinar su utilidad durante todas las fases del cultivo y la duraci n de los efectos positivos encontrados CONCLUSIONES EI tratamiento con Trichoderma sp mostr el mejor control de la enfermedad denominada marchitez en plantas de aguacate Las cepas usadas de G fasciculatum y Pseudomonas sp promovieron el crecimiento el rea foliar y la formaci n de ra ces 26 octubre diciembre viables en plantas de P americana y alcanzaron un nivel de control de marchitez similar al de los productos qu micos fungicidas aplicados AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen al profesor Nelson Walter Osorio director del grupo de investigaci n en Microbiolog a del Suelo de la Universidad Nacional de Colombia por su colaboraci n y apoyo y a Laura Osorno por la ayuda en el procesamiento de las ra ces para la evaluaci n de colonizaci n micorriza
17. ion increase avocado seedling development meanwhile Trichoderma sp showed the best results in reducing the wilt disease progress on P cinnamomi inoculated plants Soil microorganisms have a large potential for P Americana development and pathogen protection but it is necessary to understand all possible relationships in order to strengthen their use as biofertilizers and biocontrol agents Key words avocado wilt plant growth promoting microorganisms Ms C Joaqu n G Ram rez Laboratorio Fitotecnia Tropical Dr C Dar o A Casta eda S nchez M ster en Geomorfolog a y Suelo Dr C Juan G Morales Osorio M ster en Bioqu mica Universidad Nacional de Colombia Sede Medell n Departamento de Ciencias Agron micas Campus El Volador Bloque 11 A A 1779 Bloque 19A lab 306 Medell n Colombia 2 jeramireg unal edu co dacasta4 unal edu co jgmoraleso unal edu co RESUMEN Para la producci n de aguacate en Colombia es necesario establecer alternativas de manejo amigables con el medio ambiente y de bajo costo para el control de la enfermedad conocida como marchitez cuyo principal agente causal es Phytophthora cinnamomi El uso de microorganismos del suelo es una opci n viable para mejorar la nutrici n y sanidad en Persea americana buscando ser m s competitivos en aras de afrontar los tratados de libre comercio y poder aprovechar el potencial exportador que presenta este frutal Entendiendo la complejidad del sistema de la
18. l y la medici n del f sforo foliar REFERENCIAS 1 Bernal A y Cipriano A Generalidades del cultivo de Aguacate En Tecnolog a para el cultivo de aguacate Manual T cnico 5 CORPOICA Centro de Investigaci n La Selva Rionegro Antioquia 2008 pp 11 80 ISBN 978 958 8311 74 6 2 FAO Anuario estad stico FOASTAT 2010 Consultado 17 septiembre 2012 Disponible en lt http www fao org gt 3 Aproare Sat L nea base o diagn stico de campo Informativo el aguacate 2009 vol 2 no 1 pp 5 7 4 Ram rez J G Casta eda D A y Morales J G Estudios etiol gicos de la marchitez del aguacate en Antioquia Colombia Revista Ceres 2014 vol 61 no 1 pp 050 061 ISSN 0034 737X 5 V squez L R os G Londo o M y Torres M Caracterizaci n biof sica y socioecon mica del sistema de producci n de aguacate cv Hass en los departamentos de Antioquia Caldas Risaralda y Quind o Corporaci n Colombiana de investigaci n CORPOICA Centro de investigaci n la selva Rionegro Antioquia 2011 54 pp ISBN 978 958 740 074 8 6 Perez M Significant Avocado Diseases Caused by Fungi and Oomycetes The European Journal of Plant Science and Biotechnology 2008 vol 2 no 1 pp 1 24 ISSN 1749 0472 7 Dobrowolski M Shearer B Colquhoun O Brien P y Hardy G Selection for decreased sensitivity to phosphite in Phytophthora cinnamomi with prolonged use of fungicide Plant Pathology 2008 vol 57 pp 9
19. los cultivos de aguacate en campo se deben realizar trabajos adicionales considerando las diferentes variables que inciden en el resultado final de control de la enfermedad VIABILIDAD DE RA CES Los valores m s altos en los porcentajes de ra ces viables se encontraron en los tratamientos T Pseudomonas sp y T G fasciculatum Pseudomonas sp seguido por T G fasciculatum y T Trichoderma sp G fasciculatum Pseudomonas sp Figura 2C Los resultados indican un mayor efecto de promoci n de crecimiento de ra ces por la cepa usada de Pseudomonas sp solo o en combinaci n con el HMA Para la cepa usada de Pseudomonas sp se encontr producci n de la fitohormona cido indol ac tico AIA la cual incrementar a la proliferaci n de ra ces viables Figura 2C como se observ para los tratamientos T y T con valores de 90 92 3 respectivamente Todos los tratamientos que involucraron infecci n con P cinnamomi mostraron valores m s bajos de ra ces viables que los no inoculados con el pat geno confirmando su efecto detrimental sobre las ra ces En los tratamientos T T y T se encontraron valores mayores de ra ces viables que en el tratamiento que us la mezcla de fungicidas nicamente T Para estos tratamientos se obtuvieron valores similares de AUDPC con un mejor nivel de control de la enfermedad que el observado en el control inoculado nicamente con el pat geno T Figuras 2A y 2
20. monas al hospedante el micoparasitismo la antibiosis la competencia entre otros 8 9 Los estudios realizados en aguacate demuestran que la din mica microbiana del suelo muestra una influencia en el desarrollo de P cinnamomi 10 11 Se han identificado algunos grupos de microorganismos con efecto de supresi n en P cinnamomi y que mejoran el crecimiento de P americana como bacterias clasificadas dentro del g nero Pseudomonas 10 11 hongos del g nero Trichoderma 11 12 y hongos micorr zicos 13 Este trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto de los microorganismos Trichoderma sp G fasciculatum y una cepa de Pseudomonas sp en el desarrollo de plantas de P americana inoculadas con P cinnamomi MATERIALES Y M TODOS Este trabajo se realiz en el laboratorio de Fitotecnia Tropical de la Universidad Nacional de Colombia sede Medell n 6 15N 75 35 W 1495 m s n m El suelo utilizado fue un Andisol proveniente del Pe ol Antioquia Colombia previamente esterilizado en autoclave a 1 02 atm y 121 C por dos ciclos consecutivos de una hora cada uno Se realiz an lisis del suelo curva de 20 incubaci n de cal isoterma de absorci n de fosfato y m xima capacidad de retenci n de humedad con el fin de suministrar las condiciones adecuadas para el desarrollo de las plantas y microorganismos pH 5 6 0 02 ppm de P en soluci n y humedad al 50 de la m xima capacidad de retenci n del suelo
21. mpo relegado a pocas regiones del pa s donde la siembra no se realizaba comercialmente Las necesidades de satisfacer una demanda interna y las perspectivas de exportaci n han incrementado las plantaciones notablemente durante la ltima d cada ocupando actualmente el tercer lugar en rea sembrada de frutales 3 El incremento r pido en el rea sembrada implica generar paquetes tecnol gicos de manejo para mantener la competitividad y la sostenibilidad del cultivo La marchitez es la principal enfermedad registrada en el cultivo de aguacate en Colombia 4 5 Este problema puede ser ocasionado por factores bi ticos y abi ticos destac ndose el Oomycete P cinnamomi el cual com nmente se conoce como tristeza 4 6 Para el manejo de esta enfermedad se aplican principalmente productos de origen qu mico 5 El uso permanente de mol culas sint ticas para el manejo de P cinnamomi ejercen una fuerte presi n de selecci n de las poblaciones generando en algunos casos resistencia o disminuci n de la sensibilidad a las mol culas qu micas utilizadas 7 Como una alternativa al control qu mico de enfermedades se han realizado intensas investigaciones sobre microorganismos que pueden contribuir al manejo de los problemas fitosanitarios Los mecanismos por medio de los cuales ejercen control de las enfermedades son variados e incluyen desde el antagonismo la inducci n de resistencia el suministro de nutrimentos y de fitohor
22. ratamientos se realiz la inoculaci n con P cinnamomi en aquellos que lo incluyeron para lo cual se multiplic el in culo en PDA y se ajust a una concentraci n de 105 prop gulos mL El in culo de P cinnamomi se introdujo en el suelo de la riz sfera repartido homog neamente en la maceta Para el tratamiento de manejo tradicional con productos qu micos a base de los compuestos metalaxyl mancozeb y fosfito de potasio se utilizaron las dosis recomendadas en otros estudios 4 realizando su aplicaci n mediante aspersi n al suelo VARIABLES EVALUADAS Para la evaluaci n de la severidad de la enfermedad se utiliz la escala reportada para plantas j venes 30 Los s ntomas y desarrollo de la enfermedad se registraron cada ocho d as durante un per odo de 90 d as despu s de la inoculaci n con Tabla Resumen de tratamientos aplicados en pl ntulas de aguacate Tratamiento P cinnamomi T harzianum Microorganismo Inoculado G fasciculatum Fungicidas Pseudomonas sp Q TIO T2 T3 T4 T5 T6 T7 E T8 T9 T10 T11 T12 sE T13 T14 TIS T16 T17 1 Mezcla de los fungicidas metalaxyl mancozeb y fosfito de aluminio 2 Plantas no inoculadas con el respectivo microorganismo o no aplicaci n de fungicidas 9 Plantas inoculadas con el respectivo microorganismo o aplicaci n de la mezcla de fungicidas 21 Cultivo
23. re diciembre COLONIZACI N MICORR ZICA En la observaci n microsc pica las estructuras predominantes encontradas fueron de tipo micelio interno externo ves culas y arb sculos coincidiendo con lo reportado en la literatura para HMA 13 El porcentaje de colonizaci n oscil entre el 7 y 54 6 resultados similares a lo reportado por algunos autores quienes encontraron valores de colonizaci n para plantas sanas entre 57 y 77 con G fasciculatum Otros trabajos han encontrado valores de colonizaci n micorr zica superiores al 77 utilizando cepas de los g neros Glomus sp y Acaulospora sp 13 El porcentaje de colonizaci n micorrizica depende de numerosos factores como el f sforo presente en el suelo el porcentaje de materia org nica el genotipo de la HMA y de la planta y la disponibilidad de otros nutrientes entre otros Los valores obtenidos para porcentaje de colonizaci n micorr zica permitieron agrupar los tratamientos en cuatro grupos significativamente diferentes a lt 0 01 Figura 2B En el primer grupo con el valor m s alto se ubicaron los tratamientos inoculados con micorriza y sin microorganismo pat geno T G fasciculatum y T G fasciculatum Pseudomonas sp En el segundo grupo se encontraron los tratamientos a plantas inoculadas con P cinnamomi y con G fasciculatum T y con P cinnamomi y G fasciculatum Pseudomonas sp T En el tercer grupo se identificaron los tratamientos
24. s Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 P cinnamomi Con los datos obtenidos se calcul el rea bajo la curva del progreso de la enfermedad AUDPC por sus siglas en ingl s 20 La altura y el di metro de la base del tallo de las plantas se midieron cada 15 d as despu s de iniciados los tratamientos Al final del experimento 120 d as se midieron las siguientes variables biomasa seca de ra z y a rea rea foliar viabilidad de ra ces muestreando en tres lugares distintos de la maceta mediante la utilizaci n de un cilindro biselado 100 cm Adem s se realiz el re aislamiento de P cinnamomi a partir de ra ces de todas las plantas inoculadas El porcentaje de colonizaci n micorr zica se realiz mediante la t cnica de l neas de intercepci n 21 Se tomaron ra ces se lavaron con agua corriente y se procedi a su decoloraci n con KOH 10 por 24 h 22 Luego se decoloraron en inmersi n alcalina 0 5 NH40H y 0 5 H O v v en soluci n acuosa por 30 minutos 23 Las micorrizas se visualizaron con azul de tripano 0 025 en agua 24 En las ra ces te idas se procedi simult neamente a identificar la presencia de Trichoderma sp y P cinamomi A partir de muestras tomadas de la rizosfera se realiz el re aislamiento de Trichoderma sp y Pseudomonas sp AN LISIS ESTAD STICO Se utiliz un dise o completamente al azar con tres replicas por tratamiento Se analiz la homocedasticidad y
25. tropical y tres cepas de Trichoderma sp aisladas en PDA suplementado con 0 5 de Igepal Sigma St Louis USA 18 a partir de muestras colectadas del suelo ubicado alrededor del tronco en un metro de di metro a partir de la base del tallo de rboles de aguacate afectados con este pat geno Se seleccion la cepa que present mayor reducci n del crecimiento radial de P cinnamomi sobre PDA la cual se identific como Trichoderma sp c digo TAF22 PLANTAS Se utilizaron semillas de P americana con un peso de 40 50 g provenientes de rboles sanos con Montoya B y Osorio W Mycorrhizal dependency of avocado at different levels of soil solution phosphorus En Memorias del III Congreso Latinoamericano del Aguacate Medell n Colombia 2009 pp 19 31 Ram rez C A Patino L F Rodr guez P A Bustamante E y P rez J C Aislamiento y evaluaci n de rizobacterias potenciales promotoras de crecimiento en banano y pl tano XVII Reuni n Internacional de la ACORBAT 2006 pp 12 22 Cultivos Tropicales 2014 vol 35 no 4 pp 19 27 elfin de disminuir la variabilidad en las plantas La desinfecci n superficial se realiz mediante lavado en soluci n acuosa de hipoclorito de sodio 3 96 v v por un minuto lavado en agua tratamiento hidrot rmico a 48 50 C por 30 min seguido de tratamiento por inmersi n en mezcla acuosa de fungicida carbox n captan vitabax insecticida clorpirifos Lors
26. udomonas sp se observ un mayor valor para los par metros rea foliar biomasa y altura de las plantas respecto a los otros tratamientos Para los tratamientos inoculados adicionalmente con P cinnamomi Ta T T T se encontr una velocidad menor de crecimiento respecto a aquellos no inoculados con el pat geno Figura 2D Los menores valores para rea foliar biomasa seca y altura se presentaron para el tratamiento inoculado nicamente con P cinnamomi T Figuras 2 D 2E y 2F Los valores medidos para todas las variables analizadas en este estudio muestran que el aislamiento usado de P cinnamomi fue virulento y caus un efecto perjudicial sobre las plantas 4 30 Durante la etapa de establecimiento en vivero y el transplante al campo las plantas de aguacate son muy vulnerables al ataque por pat genos principalmente P cinnamomi 4 6 Los microorganismos G fasciculatum T y la bacteria Pseudomonas sp T solos o combinados T mostraron utilidad potencial para ser usados en las fases de germinaci n y establecimiento de plantas de aguacate var Hass El efecto positivo de los microorganismos no patog nicos usados en este trabajo sobre plantas de aguacate podr a atribuirse a varios mecanismos reportados previamente para cepas de estas mismas especies 13 29 La especie P americana no posee pelos radiculares por lo que los HMA podr an actuar aumentando el volumen de exploraci n del suelo 1 31 y el
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