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1. Avri paorijpio Ba nov unong Recovery Recuperado Av xtnon 4 Coated microtiter plate Microplaca sensibilizada ETTIKAAUHUJEVI HIKPOTTA KA Coated pinplate Pinplate sensibilizada ETIKAAUH EVA TTA ka Pin Wash buffer Soluci n de lavado PUBHIIOTIKO I AUHJA TTAUoNG Substrate buffer Tamp n sustrato PUBHIIGTIKO I AUJJO UTTOOTPWHATOG Stop solution Soluci n de parada Avridpaot pro IQKOTT G avr paons Sample buffer Tamp n Muestras PuOLIIOTIK l Aupja dEIyHATWV2. 1 Preparativos antes de dispensar Diluya los reactivos concentrados Diluya el tamp n de muestra concentrado a 1 5 con agua destilada p e 20 ml en 80 ml Diluya el tamp n de lavado concentrado a 1 50 con agua destilada p e 20 ml en 980 ml Muestras Diluya las muestras de suero a 1 101 con tamp n de muestra 1x p e 1000 ul tamp n de muestra 1x 10 ul suero Mezcle bien la diluci n Lavado Prepare 20 ml de tamp n de lavado diluido 1x para 8 pocillos o 200 ml para 96 pocillos p e 4 ml de concentrado en 196 ml de agua destilada Lavado autom tico Tenga en cuenta los vol menes de exceso requeridos para purgar el instrumento y el volumen muerto en el dispensador del aparato Lavado manual Descarte el l quido de los pocillos invertiendo la placa Golpee vigorosamente el marco con los micropocillos sobre papel absorbente limpio manteniendo la placa invertida Dispense 300 ul de tamp n de lavado diluido dentro de cada pocillo y espere 20 segundos Repita el procedimiento entero dos veces m s Microplacas Calcule el n mero de pocillos necesarios para el ensayo Saque los pocillos no utlizados del marco p ngalos de nuevo en la bolsa de pl stico suministrada junto con el desecante y s llela bien 2 8 C 35 46 F 7 2 Esquema de trabajo Vea Anexo A para el esquema de dispensaci n vea Anexo B para el procedimiento Recomendamos la medici n de pipeta de las muestras y calibradores por duplicado El Calibrador
3. s dica lt 0 1 conservante Listo para el uso Control Negativo 1 vial 1 5 ml tap n verde soluci n incolora Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Control 10 ng 1 vial 1 5 ml 10 ng ml Tg tap n rojo soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Recuperaci n Tg 1 vial 3 0 ml tap n azul soluci n amarilla Contiene Tiroglobulina azida s dica lt 0 1 conservante Calibradores 5 viales 1 5 ml de cada de 3 75 7 5 15 30 60 ng ml color creciente con la concentraci n soluciones amarillas Contienen Tiroglobulina azida s dica lt 0 1 conservante Conjugado 1 vial 15 ml anti Tg tap n blanco soluci n verde Contiene anticuerpos anti Tg monoclonales conjugados con peroxidasa Substrato TMB 1 vial 15 ml tap n negro Contiene TMB H202 estabilizada Soluci n de Paro 1 vial 15 ml tap n blanco soluci n incolora Contiene cido clorh drico 1M Microplaca 12x8 tiras de pocillos rompibles Revestimiento ver p rrafo 1 Material necesario pero no suministrado Filtro de lectura de 450 nm del lector de tiras microtiter y filtro de referencia opcional de 620 nm 600 690 nm Equipo de cristal cilindro 100 1000ml tubos de ensayo para disoluciones Mezclador espiral pipetas de precisi n 10 100 200 500 1000 ul o pipeta m ltiple ajustable 100 1000ul Dispositivo de lavado de la microplaca pipet
4. y utilizar guantes desechables AVISO Los calibradores controles y agentes contienen zida de sodio NaN como conservante El NaN puede ser t xico si se ingiere o se absorbe por medio de la piel o de los ojos El NaN puede reaccionar con la fontaner a de plomo y de cobre y formar zida met lica muy explosiva Al tirar tirarla deje correr una gran cantidad de agua para evitar que la zida tome consistencia Por favor consulte los procesos de descontaminaci n del CDC u otras directrices locales o nacionales No fume coma o beba mientras manipule el equipo No pipetee con la boca Todo el material de fuente humana utilizado en algunos reactivos de este equipo por ejemplo con troles standards ha sido analizado a trav s de m todos aprobados y ha resultado ser negativo para HbsAg Hepatitis C y HIV 1 No obstante ning n test puede completamente garantizar la ausencia de agentes virales en ese tipo de material Por lo tanto manipule los controles standards y muestras de los pacientes como si se trataran de aut nticos transmisores de enfermedades infecciosas y seg n los requerimientos de manipulaci n de su pa s 5 2 Instrucciones generales para la utilizaci n No mezcle o sustituya reactivos o microplacas de n meros de lote diferentes Esto podr a llevar a una variaci n de los resultados Deje que todos los componentes alcancen la temperatura ambiente 20 32 C 68 89 6 F antes de uti lizarlos Ag telos bien y siga el
5. 100 por ejemplo no hay factores presentes en el suero del paciente que interfieran con la determinaci n de Tg el resultado ser aproximadamente de 10 ng ml por emcima del nivel de Tg de la muestra original correspondiente Tomando en consideraci n las impresiciones en la dispensaci n se consideran v lidas recuperaciones entre el 70 y 130 Niveles de lt 70 o gt 130 son debidos a interferencia y el nivel de Tg de la muestra original pertinente ha de considerarse inv lido La concentraci n para Recuperaci n Tg Tg Recovery se incluye en el documento de control de cali dad adjunto y es aproximadamente de 10 ng Tg ml No utilice los datos de Control de Calidad para el c lculo Interpretaci n Los resultados positivos deben ser verificados teniendo en cuenta el status cl nico completo del paci ente Tambi n cada decisi n en cuanto a terapia debe ser tomada de forma individual Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos normales y patol gicos de Tg en suero 9 Datos t cnicos Muestra suero Volumen de muestra 100 ul de muestra no diluida Tiempo total de incubaci n 180 minutos a temperatura ambiente 20 26 C 64 78 8 F Rango de calibraci n 3 75 60 ng ml Sensibilidad anal tica 3 75 ng ml Almacenamiento a 2 8 C 35 46 F utilice solo los viales originales N mero de determinaciones 96 tests 10 Datos de funcionamiento 10 1 Sensibilidad funcional del ensayo La sensibilidad funcio
6. AESKULISA Tg REF 3402 Manual de Instrucciones Contenido 1 Utilizaci n Aplicaciones cl nicas y principio del ensayo Contenido del equipo Almacenamiento y caducidad Precauciones Toma de muestra manipulaci n y almacenamiento Procedimiento del ensayo Interpretaci n Cuantitativa Datos t cnicos Datos de funcionamiento Bibliografia Esquema de dispensaci n Procedimiento del test 002 2007 08 28 REF 3402 Tg 1 Utilizaci n AESKULISA Tg es un enzimoinmunoensayo en fase s lida para la detecci n cuantitativa de Tiroglo bulina Tg en suero humano El ensayo emplea anticuerpos monoclonales especificos y selecciona dos contra la tiroglobulina Tg humana El ensayo es una herramienta para el seguimiento y monitorizaci n del carcinoma de tiroides asi como para el diagn stico diferencial de las enfermedades tiroideas 2 Aplicaci n clinica y principio del ensayo La tiroglobulina Tg es una glicoproteina de elevado peso molecular 660kDa localizada dentro del coloide del foliculo tiroideo Juega un papel esencial en el almacenamiento de la yodina y act a como sustrato para la s ntesis de las hormonas toroideas yodinizadas tiroxina T4 y 3 5 3 triyodotironina T3 Concentraciones elevadas de tiroglobulina en el suero se han reportado en varias enfermedades tiro ideas como el hipertiroidismo el bocio no t xico la tiroiditis y en el carcinoma de tiroides diferen ciado La prin
7. Cut off es solamente para uso en las pruebas cualitativas Dispense 100 ul de cada suero diluido de paciente dentro del pocillo correspondiente Dispense 100 ul de los calibratores O calibradore cut off y controles positivo y negativo dentro de los pocillos designados Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de conjugado dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tampon de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de substrato TMB dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente 20 32 C 68 89 6 F protegido de la luz directa Dispense 100 ul de soluci n de paro dentro de cada pocillo siguiendo el mismo orden de pocillos que cuando dispenso el substrato Incube un minimo de 5 minutos Agite la placa cuidadosamente durante 5 segundos Lea la absorbancia a 450 nm opcionalmente a 450 620 nm dentro de los 30 minutos siguientes Pagina 4 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg 8 Interpretaci n cuantitativa Establezca la curva standard trazando la densidad ptica DO de cada calibrador eje y con respecto a los valores de concentraci n correspondientes en ng ml eje x Para unos mejores reult ados utilice una regresi n lineal con coordenadas log log para la densidad ptica y la concentraci n escala logaritmica para ambas A partir de la DO de cada m
8. a de repetici n o microcanal de 300 ul o sistema automatizado papel absorbente Nuestras pruebas se han dise ado para el uso con agua destilada seg n la definici n de la farmaco pea de los Estados Unidos USP 26 NF 21 y la europea Eur Ph 45 ed 4 Almacenamiento y Caducidad Guarde todos los reactivos y la microplaca a 2 8 C 35 46 F en sus envases originales Una vez pre paradas las soluciones reconstituidas son estables durante 1 mes a 4 C por lo menos Los reacti vos y la microplaca deben ser utilizados solamente dentro del margen de caducidad indicado en cada componente Evite la exposici n de la soluci n TMB a la luz intensa Guarde las microplacas en su sobre correspondiente incluyendo el desecante y s llelo bien P gina 2 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg 5 Precauciones 5 1 Datos de riesgo para la salud ESTE PRODUCTO ES SOLO PARA EL USO EN DIAGN STICO IN VITRO Por lo tanto solamente el personal formado y especialmente asesorado en los m todos de diagn stico in vitro puede realizar el ensayo Aunque no se considera este producto como particularmente t xico o peligroso en condiciones de uso normales rem tase a lo siguiente para una m xima seguridad Recomendaciones y precauciones Este equipo contiene componentes potencialmente peligrosos Aunque los reactivos del equipo no est n clasificados como irritantes de los ojos y la piel recomendamos evitar el contacto de los mismos con los ojos y con la piel
9. cipal indicaci n de la determinaci n de Tg no obstante es la monitorizaci n post operatoria del carcinoma de tiroides diferenciado Su valor cl nico es la detecci n temprana y exclusi n de met stasis o recidiva tumoral y en el seguimiento de tratamientos con yodina radiactiva La Tg en el suero no es detectable en pacientes sometidos a tiroidectom a total incluyendo la ablaci n por yodina radiactiva y est n libres de met stasis y tumores Estos pacientes en remisi n completa y verdadera no mostrar n niveles de Tg incluso por estimulaci n de TSH end gena Consecuentemente los valores de Tg detectables en este grupo de pacientes son una indicaci n importante para una neoplasia a n existente o de nuevo desarrollo Particularmente si estos valores de Tg detectables se ven incrementados bajo un tratamiento de hormonas tiroideas supresor de TSH perfiles Tg En contraste los niveles de tiroglobulina en pacientes con carcinoma medular o tumores indeferencia dos permanecen dentro del rango normal Ya que los niveles de tiroglobulina podr an tambi n verse elevados en otras enfermedades de tiroides benignas este test no es un criterio para el diagn stico de tumores de tiroides malignos La determinaci n de tiroglobulina es de valor pron stico en los pacientes con enfermedad de Graves sometidos a terapia Niveles de Tg significativamente elevados al final de una terapia tirost tica son indicativos de un riesgo m s elevado de recid
10. esquema de incubaci n recomendado para una ptima realizaci n del ensayo Incubaci n se recomienda realizar las pruebas a 30 C 86 F para sistemas automatizados No exponga nunca los componentes a temperaturas m s altas de 37 C 98 6 F Pipetee siempre la soluci n de substrato con puntas nuevas Protega este reactivo de la luz Nunca pipetee el conjugado con puntas previamente utilizadas con otros reactivos Un diagn stico cl nico definitivo no debe estar basado solamente en los resultados del ensayo realizado Debe ser elaborado por el m dico despu s de haber evaluado todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio Es necesario verificar el diagn stico por medio de distintos m todos 6 Toma manipulaci n y almacenamiento de las muestras Utilice preferentemente muestras de suero reci n extra das La extracci n de sangre debe seguir los requerimientos de protocolo de su pa s No utilice muestras ict ricas lip micas hemolizadas o contaminadas por bacterias Los sueros con part culas deben ser purificados por centrifugaci n a baja velocidad lt 1000 x g Las muestras de sangre deben ser recogidas en tubos limpios secos y vac os Despu s de la separaci n las mues tras de suero deben ser utilizadas inmediatamente Pueden guardarse bien cerradas a 2 8 C 35 46 F hasta tres d as o congelarse a 20 C 4 F para per odos m s largos P gina 3 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg 1 Procedimiento del ensayo 7
11. gina 9 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg LTLT96 EL9 6b XPH OLTI6 PELI 6Gh 9Uoyg LULUN Z FUA UINIOJOMA WISUSJOPU3M PETSS HAWH SOLLSONOVIG AMSAV OWEN QpLIYOSISJuN aINyeus s Do IN LIS omyeJoduoL meg Nea i GNXUJ uonegnouj Isa Aessy Diagnosi in vitro 4 Pour diagnostic in vitro In Vitro Diagnostikum Para uso Diagn stico in vitro Numero d ordine Reference Catalogue Bestellnummer N mero de cat logo Descrizione lotto Lot Chargen Bezeichnung 4 Lote Conformit europea Declaration CE de Conformit Europ ische Konformit t Declarac o CE de Conformidade 96 determinazioni 96 tests 96 Bestimmungen 96 Testes Rispettare le istruzioni per l uso Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten 4 Ver as instruc es de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de Conservare a 2 8 C Conserver 2 8 C Lagerung bei 2 8 C Conservar entre 2 8 C Prodotto da Fabriqu par 4 Hergestellt von Fabricado por 4 Calibratore cut off Etalon Seuil Grenzwert Kalibrator 4 Calibrador de cut off 4 Controllo positivo Contr le Positif Positiv Kontrolle Controlo positivo 4 Controllo negativo Contr le N gatif Negativ Kontrolle 4 Controlo negativo Calibratore Etalon Kalibrator Calibrador Recupero Corr lation Wiederfindung Recuperac o Co
12. iva mientras que los pacientes con concentraciones de tiroglobulina continua mente bajas tienden a una recuperaci n continua Principio del test Las muestras de suero diluidas 1 101 se incuban en la microplaca reve stida con el ant geno espec fico Los anticuerpos de los pacientes si est n presentes en la muestra se unen al ant geno La fracci n no unida es eli minada por el lavado en el paso siguiente Despu s las inmunoglobulinas anti humanas conjudagas con peroxidasa conjugado se incuban y reac cionan con el complejo ant geno anticuerpo de las muestras dentro de la microplaca El conjugado no unido es retirado a trav s del lavado en el paso siguiente La adici n del substrato TMB genera una reacci n colorim trica azul enzim tica que se detiene a trav s de cido diluido el color cambia a amarillo La tasa de formaci n de color por parte del crom geno va en funci n de la cantidad de conjugado unido al complejo antigeno anticuerpo y esto es proporcional a la concentraci n inicial de los respectivos anti cuerpos en la muestra del paciente P gina 1 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg 3 Contenido del equipo Para ser reconstituido Tamp n de muestra 5x 1 vial 20 ml concentrado 5x tap n blanco soluci n amarilla Contiene Tris NaCl BSA azida s dica lt 0 1 conservante Tamp n de lavado 50x 1 vial 20 ml concentrado 50x tap n blanco soluci n verde Contiene Tris NaCl Tween 20 azida
13. nal de este equipo es de 3 75 ng ml 10 2 Especificidad y Sensibilidad La microplaca est revestida con anticuerpos monoclonales elevadamente espec ficos para la Tg No se encontraron reactividades cruzadas con otros ant genos 10 3 Linealidad Se han analizado con este equipo sueros seleccionados y se encontr que deb an diluirse lineal mente 10 4 Calibraci n AESKULISA Tg est calibrado contra el Material de Referencia Certificado CRM 457 de la BCR Bruselas para Tiroglobulina humana Los resultados se expresan en ng ml 10 5 Efecto High dose hook Concentraciones de hasta 100 000 ng Tg ml no producieron un efecto high dose hook 10 6 Interferencia con autoanticuerpos Se a adi Tg a algunos sueros seleccionados con varios niveles de anti Tg No se observ ning n efecto en los resultados De todos modos esto no significa que todos los sueros de pacientes sigan estos resultados De ah que el test de recuperaci n deba ser realizado siempre P gina 6 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg 11 Bibliograf a 1 Gebel F et al The site of leakage of intrafollicular thyroglobulin into the blood stream in simple human goiter J Clin Endocrinol Metab 1983 57 915 919 2 Uller R P and van Herle A J Effect of therapy on serum thyroglobulin levels in patients with Graves disease J Clin Endocrinol Metab 1978 46 747 755 3 Gardner et al Serum thyroglobulin in normal subjects and patients with hyper
14. niugato Conjug Konjugat Conjugado 4 Micropiastra rivestita Microplaque sensibilis e Beschichtete Mikrotiterplatte Microplaca revestida 4 Piastra ad aghi rivestita 4 Pinplate sensibilis e Beschichtete Pinplatte Pinplate revestida Tampone di lavaggio Tampon de Lavage Waschpuffer Soluc o de lavagem Tampone substrato Substrat Substratpu Substrato Reagente bloccante Solution d Arr t Stopreagenz Soluc o de paragem Tampone campione Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra For in vitro diagnostic use Para uso diagn stico in vitro In Vitro AiayvwoTik go Cataloge number Numero de cat logo Ap du g Trapayyekiag Lot 4 Lote Xapaktnpicu s Trapridag EC Declaration of Conformity Declaraci n CE de Conformidad Eupwfrraikr ouupwvia 96 tests 96 pruebas 96 TTPOO IOPIONOI 4 See instructions for use Ver las instrucciones de uso A Bere UTTOWN TIG o nyieg Xpriong Use by Utilizar antes de Xp on p xpl Store at 2 8 C 35 46 F Conservar a 2 8 C amp uA ooeral oToug 2 8 C Manufactured by Fabricado por KataoKeudZetai att Cut off Calibrator 4 Calibrador de cut off Oplak g opdc Avr paotnpio Baduov unong Positive Control Control Positivo OETIK G op g E EVXOU Negative Control Control Negativo ApvnTIKOG op g E EVXOU Calibrator Calibrador
15. thyroidism due to Graves disease effects of 13 iodine 131J and antithyroid drugs Clin Endocr Oxf 1979 11 585 594 4 Kawamura S et al Serum thyroglobulin changes in patients with Graves disease treated with long term antithyroid drug therapy J Clin Endocrinol Metab 1983 56 507 512 5 Czernichow P et al Plasma thyroglobulin measurements help determine the type of thyroid defect in congential hypothyrodism J Clin Endocrinol Metab 1983 56 242 245 P gina 7 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg ANEXO A Esquema de dispensaci n Se sugiere dispensar los calibradores controles y muestras como sigue Para una interpretaci n cuantitativa utilice calibradores para establecer una curva standard Para una interpretaci n cualitativa utilice el calibradore cut off 1 la ja ja js J r ja ja jo jn 1 MAA O E TA N A A O AO A O A CalB control P3 SB P3 RC SB A A A A sm CalB control SB a HE Mee ey W 1 1 N N EI N CalA calibrator A CalB calibrator B CalC calibrator C CalD calibrator D CalE calibrator E NC negative control SB sample buffer RC Recovery P1 patient 1 P2 patient 2 P3 patient 3 10 ng control 50ul 10 ng control plus 50 ul SB P1 SB 50 ul patient s sample plus 50ul sample buffer P1 RC 50ul patient s sample plus 50ul recovery P gina 8 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg Anexo B Procedimiento del test Samples 1 101 Controls P
16. uestra lea las concentraciones de Tg correspondientes expresadas en ng ml Ejemplo de curva standard Recomendamos dispensar calibradores en paralelo para cada tanda Calibradores Tg DO 450 620 nm CV 3 75 ng ml 0 232 7 5 ng ml 0 440 15 0 ng ml 0 805 30 0 ng ml 1 436 60 0 ng ml 2 444 Para conocer los datos espec ficos de lote consulte el documento de control de calidad adjunto Los laboratorios deber an realizar un Control de Calidad interno utilizando controles propios y o un pool de sueros interno tal y como contemplan las regulaciones de la UE No utilice este ejemplo para interpretar resultados de los pacientes Test de recuperaci n Los anticuerpos anti Tg o efectos inespec ficos de un suero de paciente pueden interferir con los ensayos de tiroglobulina en suero En consecuencia los sueros deben ser analizados para esas interferencias llevando a cabo un test de recuperaci n del siguiente modo En paralelo a la muestra de paciente original a ada 50 ul de Recuperaci n Tg Tg Recovery a 50 ul del suero en investigaci n La recuperaci n en en la muestra de paciente se calcula del siguiente modo ng Tg ml PR1 ng Tg ml P1 x 100 Recuperaci n ng Tg ml C P1 Resultado del paciente sin recuperaci n Tg Tg recovery PR1 Resultado del paciente con recuperaci n Tg Tg recovery C Control 10 ng P gina 5 de 9 002 2007 08 28 REF 3402 Tg Si se da una recuperaci n intacta
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