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MINICAP HEMOGLOBIN(E) MINICAP

1. MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 0 Fracci n de la hemoglobina Hb A HbF Hb S Hb A2 Hb C Sangre A sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2 y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 97 1 97 2 97 1 1 2 9 2 8 2 9 SD 0 03 0 00 0 05 0 03 0 00 0 05 CV 0 03 0 0 0 1 1 0 0 0 1 7 Sangre B sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2 y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 62 0 61 2 61 9 34 6 35 4 34 7 3 4 3 4 3 4 SD 0 28 0 41 0 28 0 27 0 39 0 27 0 03 0 05 0 05 CV 0 5 0 7 0 5 0 8 1 1 0 8 0 9 1 4 1 4 I Sangre C sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2 y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 93 8 94 0 93 9 3 6 3 5 3 6 2 5 2 5 2 5 SD 0 09 0 10 0 06 0 09 0 08 0 08 0 05 0 05 0 05 I CV 0 1 0 1 0 1 2 4 2 2 2 2 1 9 1 8 1 9 Sangre E sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2 y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 97 4 97 4 97 2 2 6 2 6 2 8 sD 0 04 0 05 0 08 0 04 0 05 0 08 CV 0 05 0 1 0 1 1 7 1 9 3 0 Sangre F sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2 y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 93 2 93 1 93 0 H 6 8 6 9 7 0 sD 0 07 0 07 0 19 0 07 0 07 0 19 CV 0 1 0 1 0 2 1 0 1 0 2 7 Sangre G sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2
2. MINICAP HEMOGLOBIN E Ref 2207 Ref 2227 MINICAP 2013 01 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 MINICAP HEMOGLOBIN E EN EL MINICAP UTILIZACI N El kit MINICAP HEMOGLOBIN E permite la separaci n en medio alcalino pH 9 4 de las hemoglobinas normales de la sangre humana A F y A2 y la detecci n de las principales hemoglobinas anormales especialmente las hemoglobinas S C E y D mediante electroforesis capilar en el sistema autom tico MINICAP El sistema MINICAP permite realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtenci n del perfil de las hemoglobinas para el an lisis cualitativo o cuantitativo El an lisis puede realizarse en el hemolizado de gl bulos rojos sedimentados centrifugados o lavados a partir de sangre recogida con anticoagulante que contenga EDTA pot sico el lavado de los gl bulos rojos no es indispensable Las hemoglobinas separadas en capilares de s lice fundido son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante espectrofotometr a de absorbancia a 415 nm que es la longitud de onda de absorci n espec fica de las hemoglobinas Los perfiles electrofor ticos son analizados visualmente para detectar las anomal as La detecci n directa proporciona autom ticamente una cuantificaci n relativa precisa de cada fracci n individual de las hemoglobinas que presenta un inter s particular como la hemoglobina A2 en el diagn stico de las B tala
3. Hb S Hb Arya Hb Hasharon Sinai Hb Dhofar Yukuhashi Hb Shimonoseki Hikoshima Hb O Indonesia Buginese X Hb Ottawa Siam Hb Fort de France Hb Montgomery Hb G Copenhagen Hb S Antilles Hb Handsworth Hb S Oman pic 2 Hb Hamadan Hb Russ Hb Stanleyville Il variant de Hb A2 Lombard variant de Hb A2 Tatras variant de Hb A2 Cemenelum variant de Hb A2 Jackson variant de Hb A2 Hopkins II variant de Hb A2 J Broussais alpha 2 Hb O Arab d grad e Hb S Hb Arya Hb Hasharon Sinai Hb Dhofar Yukuhashi Hb Shimonoseki Hikoshima Hb O Indonesia Buginese X Hb Ottawa Siam Hb Fort de France Hb Montgomery Hb G Copenhagen Hb S Antilles Hb Handsworth Hb S Oman peak 2 Hb Hamadan Hb Russ Hb Stanleyville II Lombard Hb A2 variant Tatras Hb A2 variant Cemenelum Hb A2 variant Jackson Hb A2 variant Hopkins 1I Hb A2 variant J Broussais Hb A2 variant alpha 2 denatured Hb O Arab Z D Hb D Hb Memphis Hb Leiden Hb Muravera Hb D Bushman Hb G Norfolk Hb S Oman pic 1 Hb Matsue Oki Hb Osu Christiansborg Hb D Punjab D Los Angeles Hb G Waimanalo Aida Hb Muskegon Hb D Ibadan Hb Buenos Aires pic mineur Hb Q India Hb Lepore Lepore BW Hb Q Iran Hb Summer Hill Hb G Philadelphia Hb D Ouled Rabah Hb Yaizu Hb San Antonio Hb Watts Hb Ferrara Hb K ln Ube 1 Hb Fort Worth Hb Korle Bu G Accra Hb G Taipei Hb D Iran Hb St Luke s Hb G Coushatta G Saskatoon Hb Inkster
4. Hb Winnipeg Hb Z rich Hb G Pest Hb Queens Ogi Hb Setif Hb P Nilotic Hb Sunshine Seth Hb Titusville variant de Hb A2 Le Lamentin variant de Hb A2 J Meerut variant de Hb A2 J Rajappen variant de Hb A2 J Anatolia variant de Hb A2 J Oxford variant de Hb A2 Ube 2 variant de Hb A2 J Broussais alpha 1 variant de Hb A2 J Toronto variant de Hb A2 Mexico variant de Hb A2 J Tongariki variant de Hb A2 Neuilly sur Marne variant de Hb A2 J Paris I alpha 2 variant de Hb A2 J Habana variant de Hb A2 J Paris l alpha 1 variant de Hb A2 Wayne pic 2 Hb E d grad e Hb D Hb Memphis Hb Leiden Hb Muravera Hb D Bushman Hb G Norfolk Hb S Oman peak 1 Hb Matsue Oki Hb Osu Christiansborg Hb D Punjab D Los Angeles Hb G Waimanalo Aida Hb Muskegon Hb D lbadan Hb Buenos Aires minor peak Hb Q India Hb Lepore Lepore BW Hb Q lran Hb Summer Hill Hb G Philadelphia Hb D Ouled Rabah Hb Yaizu Hb San Antonio Hb Watts Hb Ferrara Hb K ln Ube 1 Hb Fort Worth Hb Korle Bu G Accra Hb G Taipei Hb D lran Hb St Luke s Hb G Coushatta G Saskatoon Hb Inkster Hb Winnipeg Hb Z rich Hb G Pest Hb Queens Ogi Hb Setif Hb P Nilotic Hb Sunshine Seth Hb Titusville Le Lamentin Hb A2 variant J Meerut Hb A2 variant J Rajappen Hb A2 variant J Anatolia Hb A2 variant J Oxford Hb A2 variant Ube 2 Hb A2 variant J Broussais Hb A2 variant alpha 1 J Toronto Hb A2 variant Mexi
5. lisis saque el carrusel para extraer los tubos ya analizados 12 Si es necesario quite con precauci n la caja que contiene las cubetas de reactivoz usadas ci rrela herm ticamente usando una de las tapas suministradas y des chela ATENCI N Manipule con precauci n las cajas que contengan las cubetas de reactivo usadas ya que pueden contener muestras biol gicas DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Lectura de los c digos de barras de los tubos primarios de muestra y del carrusel Diluci n de las sangres con la soluci n hemolizante con limpieza de la c nula de muestras entre cada diluci n Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura regulada por efecto Peltier durante unos 8 minutos Lectura a 415 nm y aparici n simult nea del perfil de las hemoglobinas en la pantalla del ordenador DANRONA NOTA Estas etapas se realizan consecutivamente para los 2 primeros tubos analizados los perfiles correspondientes a los tubos analizados se obtienen al cabo de unos 20 minutos Para los tubos siguientes las fases 1 y 2 lectura de los c digos de barras y hem lisis de las sangres se realizan durante el an lisis migraci n de los 2 tubos anteriores ll AN LISIS DE LOS RESULTADOS Desde el final del an lisis se realiza autom ticamente la cuantificaci n relativa de las fracciones y se pueden interpretar los perfiles obte
6. Figure 13 z15 Hb S Sang avec Hb A d grad e Hb A3 et Hb F faible Sang avec variant homozygote Hb S et Hb F Blood sample with degradated Hb A Hb A3 and faint Hb F Blood sample with Hb S homozygote variant and Hb F Figure 15 Z15 Sang avec variant Hb Lepore Bood sample with Hb Lepo re variant 629
7. Hb A2 variant Ottawa Hb A2 variant Shimonoseki Hb A2 variant Stanleyville II Hb A2 variant O Indonesia Hb A2 variant G Norfolk Hb A2 variant San Antonio Hb A2 variant Handsworth Hb A2 variant Matsue Oki Hb A2 variant Memphis Hb A2 variant Q lran Hb A2 variant G Waimanalo Hb A2 variant Russ Hb A2 variant Q India Hb A2 variant Montgomery Hb A2 variant Watts Hb A2 variant G Pest Hb A2 variant Winnipeg Hb A2 variant Queens Hb A2 variant Inkster Hb A2 variant Chapel Hill Hb A2 variant Q Thailand Hb A2 variant Park Ridge Hb A2 variant Z C Hb C Hb F Hull Hb F Texas I Hb Constant Spring Hb C Harlem C Georgetown variant de Hb A2 Boumerdes variant de Hb A2 Bassett variant de Hb A2 Tarrant variant de Hb A2 Manitoba variant de Hb A2 St Luke s variant de Hb A2 Setif variant de Hb A2 Sunshine Seth variant de Hb A2 Titusville variant de Hb A2 Swan River variant de Hb A2 Manitoba II variant de Hb A2 Val de Marne Hb C Hb F Hull Hb F Texas l Hb Constant Spring Hb C Harlem C Georgetown Boumerdes Hb A2 variant Bassett Hb A2 variant Tarrant Hb A2 variant Manitoba I Hb A2 variant St Luke s Hb A2 variant Setif Hb A2 variant Sunshine Seth Hb A2 variant Titusville Hb A2 variant Swan River Hb A2 variant Manitoba II Hb A2 variant Val de Marne Hb A2 variant Z A2 Hb A2 Hb Chad E Keelung Hb O Arab Hb E Saskatoon varia
8. N DEL AN LISIS ELECTROFOR TICO 1 Encienda el MINICAP y el ordenador de control 2 Para la inicializaci n del aparato coloque al menos una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia 3 Abra el programa de gesti n Phoresis y valide el nivel de los reactivos y desechos tras lo cual el aparato se iniciar autom ticamente 4 Use el kit MINICAP HEMOGLOBIN E con el programa de an lisis HEMOGLOBIN E Para seleccionar el programa de an lisis HEMOGLOBIN E y conectar el contenedor de tamp n MINICAP HEMOGLOBIN E en la posici n B2 del aparato lea detenidamente el manual de instrucciones del MINICAP y siga las instrucciones que aparecer n en pantalla 5 Ponga cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP correspondiente en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecer un mensaje de advertencia 6 Ponga una caja para cubetas usadas nueva en el MINICAP en el lugar previsto a este efecto 7 Compruebe el nivel de llenado de los diferentes contenedores de reactivo complete los vol menes si es necesario y vac e el contenedor de desechos En la ventana Verificar el nivel de los contenedores actualice los niveles de los reactivos mediante los cursores 8 El carrusel tiene 28 posiciones para tubos Ponga hasta 26 tubos primarios sin plasma en el carrusel posiciones 1 a 26 destapando cada tubo y de form
9. a temperatura ambiente cerca de una ventana o de una fuente de calor NO LO CONGELE IMPORTANTE Despu s de conservarlo a 2 8 C y antes de usarlo conviene dejar que el tamp n se atempere lo que requiere unas 3 horas si el contenedor de tamp n est lleno Si esta indicaci n no se respeta el funcionamiento de la t cnica puede verse afectado ATENCI N No caliente el tamp n al ba o mar a Un contenedor de tamp n empezado instalado en el MINICAP es estable un m ximo de 1 mes acumulado a temperatura ambiente de 15 a 30 C Despu s de cada uso el tamp n debe conservarse imperativamente en nevera 2 8 C lo antes posible siendo entonces estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial de tamp n IMPORTANTE El tiempo total acumulado que el tamp n puede estar a temperatura ambiente no debe exceder 1 mes Esta duraci n de conservaci n de 1 mes tiene en cuenta la duraci n de los tiempos de atemperamiento del tamp n Deseche el tamp n si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado o a part culas en suspensi n 2 SOLUCI N HEMOLIZANTE Preparaci n La soluci n hemolizante est lista para usar Contiene tamp n pH 8 7 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la diluci n y la hem lisis de los gl bulos rojos Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n hem
10. de la hemoglobina son debidas a mutaciones de algunos amino cidos que implican cargas de superficie diferentes en la hemoglobina y por consiguiente movilidades diferentes en la electroforesis Las anomal as de la hemoglobina son de dos tipos anomal as cualitativas o de estructura que se denominan hemoglobinopatias anomal as cuantitativas o de regulaci n que se denominan talasemias La electroforesis de las hemoglobinas de la sangre humana es un an lisis muy til en el laboratorio de an lisis cl nicos para investigar las anomal as cualitativas y cuantitativas de la hemoglobina Paralelamente a las t cnicas de electroforesis en diferentes soportes entre los que est el gel de agarosa se ha desarrollado la t cnica de la electroforesis capilar que ofrece las ventajas de una automatizaci n completa del an lisis separaciones r pidas y una excelente resoluci n Se define como una t cnica de separaci n electrocin tica efectuada en un tubo de di metro interno inferior a 100 um lleno de un tamp n compuesto por electrolitos Se considera una tecnolog a intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatograf a l quida El sistema MINICAP usa el principio de la electroforesis capilar en soluci n libre que representa la forma m s corriente de electroforesis capilar Permite la separaci n de mol culas cargadas en funci n de su movilidad electrofor tica propia en un tamp n de un pH dado y seg n el pH del elec
11. gama de concentraciones estudiadas entre 2 2 y 21 7 g dL y que los porcentajes de la fracci n Hb F son independientes de la concentraci n de hemoglobina total La t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E es perfectamente lineal en la gama de concentraciones de Hb F estudiadas hasta un m ximo del orden de 17 3 g dL entre 0 0 y 80 0 de Hb F Linealidad de Hb S El an lisis de una mezcla en proporciones variables de una muestra de sangre con Hb S con 11 8 g dL de hemoglobina y un 87 0 de Hb S y un 5 1 de Hb F con una sangre normal sin Hb S ha mostrado que el porcentaje de cada fracci n de hemoglobina estudiada Hb A Hb F Hb S y Hb A2 est perfectamente correlacionado con la proporci n de cada una de las fracciones en esta mezcla y que toda variaci n es detectada de forma lineal con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E La t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E es perfectamente lineal en la gama de concentraciones de Hb S estudiadas hasta un m ximo del orden de 10 3 g dL entre 0 0 y 87 0 de Hb S Exactitud Validaci n interna NOTA Las muestras usadas en los cuatro estudios de exactitud que aparecen a continuaci n han sido suministradas por 5 centros hospitalarios de los que 4 est n en Europa y 1 en Oriente Medio acompa adas de su diagn stico cl nico establecido usando HPLC Determinaci n cuantitativa de Hb A2 Se han analizado doscientas 200 muestras de sangre con valores normales o elevados de Hb A2 en paralelo con la t cnica MINI
12. la carga el ctrica global de la mol cula lo que permite detectarlas f cilmente por electroforesis Cinco hemoglobinas anormales principales presentan un inter s particular desde un punto de vista antropol gico y m dico S C E O Arab y D El kit MINICAP HEMOGLOBIN E est destinado a la detecci n de las hemoglobinopat as y las talasemias Hemoglobina S Es la anomal a m s frecuente y es debida a una sustituci n por mutaci n de un cido glut mico de la cadena B amino cido cido n 6 por una valina amino cido neutro presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH de an lisis esta hemoglobina migra en posici n cat dica respecto a la hemoglobina A En la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E en tamp n alcalino la hemoglobina S migra entre las fracciones A y A2 aproximadamente a 1 3 de la distancia A A2 al lado de la A2 Hemoglobina C La mutaci n es debida a un cido glut mico de la cadena B sustituido por una lisina amino cido b sico n 6 presenta pues un punto isoel ctrico aumentado respecto a la hemoglobina A Su carga negativa global est por tanto disminuida en el pH de an lisis esta hemoglobina migra m s r pidamente que las hemoglobinas A y A2 de la que est parcialmente separada lo que mejora netamente el diagn stico m dico Adem s las hemoglobinas C E y O Arab no se superponen en el perfil electrofor tico y
13. pueden por tanto ser distinguidas f cilmente Hemoglobina E Un cido glut mico de la cadena B n 26 est sustituido por una lisina En la tecnica MINICAP HEMOGLOBIN E la hemoglobina E migra justo despu s de la hemoglobina A2 de la que est totalmente separada En presencia de hemoglobina E la fracci n A2 puede por tanto ser cuantificada para detectar una B talasemia Hemoglobina O Arab Un cido glut mico de la cadena B n 121 est sustituido por una lisina En la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E la hemoglobina O Arab migra con la fracci n A2 En este caso la cuantificaci n de la hemoglobina A2 es imposible Cuando esta fracci n es superior a un 9 puede sospecharse la presencia de hemoglobina O Arab Esta ltima no puede ser confundida con las hemoglobinas C y E ya que est n separadas de la fracci n A2 Hemoglobina D Los Angeles Un cido glut mico de la cadena B n 121 est sustituido por una glutamina En la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E la hemoglobina D denominada D Punjab D Los Angeles D Chicago o D Portugal migra en posici n an dica respecto a la hemoglobina S lo que permite distinguirla de sta 2 Anomal as cuantitativas Talasemias Constituyen un grupo bastante heterog neo de afecciones gen ticas caracterizadas por la reducci n de la tasa de s ntesis de una o varias cadenas de la hemoglobina El mecanismo de esta reducci n a escala molecular todav a no es bien conocido Existen diferen
14. realizar el an lisis hematol gico como resultado complementario La migraci n de una variante de la hemoglobina con una movilidad muy cercana a la fracci n Hb A implica una subestimaci n de la fracci n Hb A y de la variante por lo que se produce una sobrestimaci n de la fracci n Hb A2 Para obtener una cuantificaci n correcta de la fracci n Hb A2 es necesario eliminar la integraci n de los picos de la variante y de la Hb A para integrar conjuntamente esos 2 picos a continuaci n Las muestras de algunos pacientes que presentan una hemoglobina S homozigota y son tratados con Hydrea hidroxicarbamida pueden presentar una hemoglobina F cuya s ntesis ha sido inducida por el tratamiento En la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E no se han observado diferencias netas de movilidad entre esta hemoglobina F inducida y la hemoglobina F nativa Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n no hay garant as en cuanto a la detecci n total de todas las variantes de la hemoglobina Resoluci n de problemas Contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de que el an lisis sea defectuoso Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA CARACTER STICAS T CNICAS Los resultados siguient
15. s de cada cambio de lote de tamp n de an lisis o de modo de trabajo o despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con CAPICLEAN y antes de iniciar una nueva serie de an lisis es necesario realizar dos series de an lisis con el Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 vea el cap tulo REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Tambi n se recomienda incluir una sangre control en cada serie de an lisis por ejemplo una muestra de control que contenga las hemoglobinas A F S y C como el Control Hb AFSC SEBIA referencia n 4792 o una sangre normal el Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 o el Control Hb A2 Patol gico SEBIA referencia n 4779 RESULTADOS Valores La detecci n directa en el capilar a 415 nm permite definir las concentraciones relativas porcentajes de cada fracci n Los valores normales de cada fracci n de hemoglobina han sido establecidos a partir de una poblaci n de 113 adultos hombres y mujeres en buen estado de salud que presentan valores normales en HPLC Hemoglobina A comprendida entre 96 8 y 97 8 Hemoglobina F lt 0 5 Hemoglobina A2 comprendida entre 2 2 y 3 2 Vea interferencias y limitaciones Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores normales NOTA Los valores normales han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado O e integraci n autom tica de las fracciones de hemoglobina con la t cnica H
16. son identificados en caso de imposibilidad del centrado del perfil aparece un s mbolo rojo de alerta y los picos de Hb F y de Hb A2 no son identificados en este caso contacte con el Servicio de Asistencia T cnica de SEBIA en caso de densidad ptica insuficiente en un perfil electrofor tico del control de migraci n obtenido con el Control Hb A2 Normal identificado con su etiqueta con c digo de barras y analizado en la posici n 28 del carrusel aparece un mensaje de advertencia que permite usar o descartar este an lisis para la determinaci n de la posici n del pico de Hb A Despu s aparece un s mbolo de advertencia violeta en la ventana de edici n y los picos de Hb A y Hb A2 no son identificados 147 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 En todos los casos las diferentes zonas de migraci n Z1 a 215 no aparecer n ni en pantalla ni en el informe de resultados En el perfil electrofor tico las curvas de las hemoglobinas A2 y C calculadas por triangulaci n son redibujadas o ajustadas y superpuestas a la curva nativa Esta representaci n permite la cuantificaci n de la fracci n Hb A2 en presencia de Hb C ATENCI N En algunos casos de hemoglobina C homozigosis o debido a un problema t cnico las fracciones de Hb A2 y Hb C no son ajustadas lo que implica una infravaloraci n de estas fracciones Se recomienda entonces cuantificar la fracci n Hb A2 usando otra t cnica LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONE
17. y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 49 3 50 2 49 9 21 3 20 9 21 0 19 9 19 4 19 6 3 0 2 9 2 8 6 6 6 6 6 8 SD 0 60 0 30 0 69 0 28 0 14 0 35 0 31 0 36 0 41 0 11 0 27 0 10 0 13 0 20 0 16 CV 1 2 0 6 1 4 1 3 0 7 1 7 1 6 1 8 2 1 3 7 9 3 3 7 2 0 3 0 2 3 Sangre H sistema n 1 y lote n 2 sistema n 2 y lote n 1 sistema n 3 y lote n 1 MEDIA 39 0 39 4 38 6 60 4 60 0 60 8 0 7 0 6 0 6 SD 0 53 0 54 0 62 0 57 0 53 0 63 0 05 0 05 0 04 CV 1 4 1 4 1 6 0 9 0 9 1 0 7 7 7 7 6 5 NOTA no se ha detectado ninguna discordancia en ninguna de las muestras Muestra con valor normal de Hb A2 todos los valores son normales Muestras con valores aumentados de Hb A2 todos los valores estan aumentados Muestras con hemoglobinas anormales se han detectado todas las hemoglobinas anormales Reproducibilidad interan lisis Se han analizado seis sangres diferentes con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E Estas sangres se han analizado 10 veces sucesivamente en 3 sistemas MINICAP con 2 lotes diferentes de kits MINICAP HEMOGLOBIN E Entre las muestras analizadas se encuentran 2 muestras con un valor normal de Hb A2 1 muestra con un valor de Hb A2 disminuido y 3 muestras con hemoglobinas anormales Hb F 6 Hb S 6 Hb C entre las que hay 1 sangre con Hb A2 aumentada Se han calculado las medias desviaciones ipicas SD y coefici
18. 9 1995 10 C Livingstone 1986 The hemoglobinopathies Edit London 11 M Maier Redelsberger R Girot 1989 Diagnostic biologique des maladies de I h moglobine Feuillets de biologie 170 12 Oda RP et al Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids Electrophoresis 18 1715 1723 1997 13 R G Schneider 1978 Methods for detection of hemoglobin variants and hemoglobinopathies in the routine clinical laboratory CRC Crit Rev Clin Lab Sci 9 243 271 14 L Vovan D Lara Russo A Orsini 1985 Diagnostic biologique des h moglobinoses Ann P diat 32 9 780 789 15 http globin cse psu edu hbvar menu html Hbvar A Database of Human Hemoglobin Variants and Thalassemias 16 F Boemer O Ketelslegers JM Minon V Bours R Schoops 2008 Newborn screening for sickle cell disease using tandem mass spectrometry Clin Chem 54 12 2036 2041 17 Lubin BH Witkowska HE Kleman K 1991 Laboratory diagnosis of hemoglobinopathies Clin Biochem 24 363 374 18 B Gulbis B Fontaine F Vertongen F Cotton 2003 The place of capillary electrophoresis techniques in screening for haemoglobinopathies Ann Clin Biochem 40 659 662 19 Aguilar Martinez P et al 2010 Arbres d cisionnels pour le diagnostic et la caract risation mol culaire des h moglobinopathies Ann Biol Clin 68 4 455 464 20 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistag
19. CAP HEMOGLOBIN E y con un sistema comercial de cuantificaci n de la hemoglobina A2 mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas con para la cuantificaci n de la hemoglobina A2 de las muestras que no presentan variantes de la hemoglobina una sensibilidad del 100 0 y una especificidad del 100 0 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de Hb A2 ha sido determinada usando herramientas estad sticas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP HEMOGLOBIN E se muestran en la tabla siguiente AS SS K S L mites de los valores en Fracci n Coeficiente de correlaci n Punto de corte en y Pendiente MINICAP HEMOGLOBIN E Hb A2 0 992 0 074 0 983 0 0 7 0 152 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 Determinaci n cuantitativa de Hb F Se han analizado noventa y dos 92 muestras de sangre con valores normales o elevados de Hb F en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y un sistema comercial para la cuantificaci n de la hemoglobina F mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas con para la cuantificaci n de la hemoglobina F de las muestras que no presentan variantes de la h
20. CLEAN diluida corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El CAPICLEAN debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO LO CONGELE Pueden observarse un precipitado o part culas agregadas en suspensi n fl culos en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea afectado No resuspenda el precipitado o las part culas Se recomienda pipetear s lo el sobrenadante Para un uso diferido ponga el tubo que contenga la soluci n diluida en nevera Debe usarse el mismo d a 4 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a con un 2 3 de cloro a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9 6 de cloro diluida hasta 1 litro volumen final con agua destilada o desionizada fr a Uso Para limpiar la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA mantenimiento semanal para eliminar cualquier prote na que se haya adsorbido a la c nula Vea el manual de instrucciones del MINICAP SEBIA Dispense 500 pL de soluci n de hipoclorito de sodio preparada anteriormente en un microtubo Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte identificado con una etiqueta con el c digo de barras es
21. EMOGLOBIN E ATENCI N Los valores normales valores de referencia s lo deben ser tenidos en cuenta en ausencia de variantes de la hemoglobina Interpretaci n Vea PERFILES ELECTROFORETICOS figuras 1 15 Las diferentes zonas de migraci n de las variantes identificadas como Z1 a 215 aparecen en la ventana de edici n de las curvas y en el informe de resultados Al pasar el cursor del rat n sobre el nombre de una zona aparece una burbuja informativa que indica las variantes posibles de la hemoglobina que migran en esa zona Para cada fracci n la posici n del m ximo define la zona de migraci n Vea la tabla que presenta las variantes potenciales de cada zona ATENCI N La graduaci n del eje de abscisas no puede en ning n caso usarse para la identificaci n de una variante de la hemoglobina 148 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 1 Anomal as cualitativas Hemoglobinopatias La mayor a son anomal as estructurales debidas a una sustituci n por mutaci n de un amino cido por otro en una de las cadenas Las consecuencias de la mutaci n var an en funci n de la posici n del amino cido mutado y del que le remplaza siendo particularmente necesaria la integridad de algunas partes de la mol cula para que sea viable y funcione correctamente Se han definido y descrito m s de 1400 variantes de la hemoglobina adulta Las primeras hemoglobinas anormales estudiadas y las m s numerosas son debidas a una modificaci n de
22. EMOGLOBIN E y un sistema comercial de an lisis de hemoglobinas mediante electroforesis capilar Todas las muestras han sido analizadas en paralelo en los 2 sistemas de an lisis y seg n las mismas recomendaciones Determinaci n cuantitativa de Hb A2 Cincuenta y siete 57 muestras de sangre con valores normales o elevados de Hb A2 han sido analizadas en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y un sistema comercial de cuantificaci n de la hemoglobina A2 mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas con respecto a la cuantificaci n de la hemoglobina A2 de las muestras que no presentan variantes de la hemoglobina una sensibilidad del 100 0 y una especificidad del 100 0 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de Hb A2 ha sido determinada usando herramientas estad sticas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP HEMOGLOBIN E se presentan en la tabla siguiente SC Coeficiente F L mites de los valores en Een de correlaci n Punto de cortelen y Pendiente MINICAP HEMOGLOBIN E Hb A2 0 998 0 083 1 085 0 0 6 1 Determinaci n cuantitativa de Hb F Veintis is 26 muestras de sangre con valores normales o elevados de Hb F han sido analizad
23. Hb C variant 626 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 SCHEMAS FIGURES PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 6 Figure 5 ER 19 Sang de b b avec Hb Bart s Sang de b b ag de 3 semaines Baby blood sample 3 weeks old Baby blood sample with Hb Bart s Figure 8 Figure 7 Z15 HbH D N Sang avec Hb H Sang avec Hb F jeune enfant Blood sample with Hb H Blood sample with Hb F young child 627 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 SCHEMAS FIGURES PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 10 Figure 9 z15 Zus Sang avec variant delta Hb A 2 Sang avec variant Hb D Punjab Blood sample with delta Hb A 2 variant Blood sample with Hb D Punjab variant Figure 12 Figure 11 Hb C Hb E LE Sang avec variant homozygote Hb E et fraction Hb F lev e Hb S HbF Hb A2 Sang avec variants h t rozygotes Hb S et Hb C Blood sample with Hb S amp Hb C heterozygote variants Blood sample with homozygote Hb E variant and elevated Hb F 628 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 SCHEMAS FIGURES PROFILS ELECTROPHORETIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 14
24. S DEL MINICAP lll FIN DE LA SECUENCIA DE AN LISIS El usuario debe realizar el procedimiento de extinci n al final de la sesi n de trabajo para conservar los capilares en condiciones ptimas IMPORTANTE Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP correspondiente en caso de ausencia de cubeta aparecer un mensaje de advertencia IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El aparato autom tico MINICAP permite una gesti n autom tica de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de reactivos La aparici n de la ventana de gesti n de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos colocar un nuevo contenedor de tamp n de an lisis y o llenar el contenedor de lavado con la soluci n de lavado reconstituida y o llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y o vaciar el contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP CONTROL DE CALIDAD Despu
25. a fracci n correspondiente a Hb E degradada en la zona Z D vea la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb S aparece una fracci n correspondiente a Hb S degradada en la zona de migraci n de la Hb F zona Z F vea la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb A aparece una fracci n correspondiente a Hb A degradada en posici n an dica respecto a la Hb A zona Z11 vea la tabla del p rrafo Interpretaci n En presencia de Hb F en el caso de sangres de reci n nacidos aparece una fracci n en la zona de migraci n de la Hb A zona Z A vea la tabla del p rrafo Interpretaci n como consecuencia de una degradaci n de la muestra Si la muestra se ha conservado m s de 10 d as en nevera se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Preparaci n de las muestras Deje sedimentar los gl bulos rojos de la sangre total durante varias horas en nevera 2 8 C o centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m Elimine con cuidado el m ximo de plasma en las muestras recogidas en heparina elimine los aglomerados viscosos presentes en la interfase plasma gl bulos rojos Agite en el vortex durante 5 segundos IMPORTANTE No use muestras que contengan una altura m xima de plasma residual superior a 3 mm si hay m s de 3 mm de plasma el an lisis puede verse afectado Caso
26. a que el c digo de barras de cada tubo quede orientado hacia la ventana de lectura del mismo IMPORTANTE Si el n mero de tubos que va a analizar es impar a ada un tubo con agua destilada o desionizada Dispense la soluci n hemolizante MINICAP HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis identificado con la etiqueta con el c digo de barras de la soluci n hemolizante sin que se formen burbujas de aire a raz n de 2 mL para el an lisis de 1 6 2 muestras o de 5 mL para el an lisis de 8 muestras Ponga ese tubo en la posici n 27 del carrusel del aparato autom tico posici n Diluyente Soluci n IMPORTANTE Compruebe que no haya espuma en el tubo de soluci n hemolizante antes de colocarlo en el carrusel Ponga el Control Hb A2 Normal en la posici n 28 del carrusel posici n Control y seleccione el n mero de an lisis a realizar seg n las indicaciones del p rrafo anterior Control Hb A2 Normal secci n Control de la migraci n IMPORTANTE En caso de ausencia de tubos en las posiciones 1 a 26 muestras 27 soluci n hemolizante y 28 sangre control el an lisis no puede comenzar y aparece un mensaje de advertencia NOTA Al usar una sangre control es indispensable usar la etiqueta con el c digo de barras espec fico prevista a este efecto 9 Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP 10 Cierre las puertas del MINICAP tras lo cual el an lisis comenzar autom ticamente 11 Despu s del an
27. as en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y un sistema comercial de cuantificaci n de la hemoglobina F mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas con respecto a la cuantificaci n de la hemoglobina F de las muestras que no presentaban variantes de la hemoglobina una sensibilidad del 100 0 y una especificidad del 100 0 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de Hb F ha sido determinada usando herramientas estad sticas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP HEMOGLOBIN E se presentan en la tabla siguiente ik Coeficiente e L mites de los valores en Fraccion de correlaci n Funto decora eriy Fengiente MINICAP HEMOGLOBIN E Hb F 0 999 0 147 1 006 0 2 40 7 153 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 Determinaci n cuantitativa de Hb S Catorce 14 muestras de sangre con una hemoglobina S han sido analizadas en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y un sistema comercial de cuantificaci n de la hemoglobina S mediante electroforesis capilar La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de Hb S ha sido determinada usando herramientas estad sticas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de
28. as que algunas presentan diferentes variantes de la hemoglobina como las hemoglobinas S C D y E se han analizado en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y con un sistema comercial de an lisis de las hemoglobinas mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas de an lisis con para la detecci n de hemoglobinas anormales una sensibilidad del 100 y una especificidad del 100 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 En efecto todas las hemoglobinas anormales as como los valores normales de hemoglobinas normales han sido detectados con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E coincidiendo con la t cnica comparada los resultados hospitalarios y el diagn stico cl nico No se ha detectado ninguna discordancia entre las t cnicas sea cual sea la muestra como la presencia de falsos positivos detecci n de una Hb anormal inexistente o de una Hb con valor normal detectada con un valor anormal Exactitud Validaci n externa NOTA Los resultados siguientes han sido obtenidos mediante un segundo estudio de correlaci n realizado en un laboratorio externo situado en Europa Cincuenta y siete 57 muestras de sangre diferentes entre las que hay 27 muestras con hemoglobinas normales como la Hb A Hb F y Hb A2 y 30 muestras con diferentes hemoglobinas anormales han sido analizadas en paralelo con la t cnica MINICAP H
29. b Minneapolis Laos Hb Owari Hb Rhode Island Southwark Hb Twin Peaks Hb Wood Hb Conakry Hb Coimbra Ingelheim Hb Link ping Meilahti Hb Templeuve Hb Alzette Hb Ty Gard Hb Gouda Hb Syracuse Hb Fort Dodge Hb Camperdown Hb Jura 10 Hb Nouakchott Hb Wayne pic 1 Hb M lwate M Kankakee Hb Camden Tokuchi Hb Hope Hb Nouakchott Hb Wayne peak 1 Hb M lwate M Kankakee Hb Camden Tokuchi Hb Hope 11 Hb Vaasa Hb Providence X Asn peak Hb Tacoma Hb Corsica Hb K Woolwich Hb Lombard Hb Andrew Minneapolis Hb Fannin Lubbock Hb Kaohsiung New York Hb Osler Fort Gordon Hb Himeji Hb Jackson Hb Tatras variant de Hb A2 I I Texas Hb Vaasa Hb Providence X Asn peak Hb Tacoma Hb Corsica Hb K Woolwich Hb Lombard Hb Andrew Minneapolis Hb Fannin Lubbock Hb Kaohsiung New York Hb Osler Fort Gordon Hb Himeji Hb Jackson Hb Tatras I I Texas Hb A2 variant 12 Hb Bart Hb Cemenelum Hb Wayne pic 2 Hb Hopkins Il Hb J Calabria J Bari Hb J Tongariki Hb Providence pic X Asp Hb J Meerut J Birmingham Hb J Broussais Tagawa l alpha 2 Hb J Rajappen Hb Grady Dakar Hb Le Lamentin Hb J Anatolia Hb Hikari Hb J Broussais Tagawa l alpha 1 Hb J Chicago Hb J Toronto Hb J Oxford I Interlaken Hb Ube 2 Hb J Meinung J Bangkok Hb Neuilly sur Marne Hb Mexico J Paris Il Hb J Paris l J Aljezur alpha 1 Hb J Habana Hb J Baltimore N New Haven Hb J Par
30. co Hb A2 variant J Tongariki Hb A2 variant Neuilly sur Marne Hb A2 variant J Paris I Hb A2 variant alpha 2 J Habana Hb A2 variant J Paris I Hb A2 variant alpha 1 Wayne Hb A2 variant peak 2 denatured Hb E 624 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 TABLEAU TABLE VARIANTS POTENTIELS PR SENTS DANS CHAQUE ZONE POTENTIAL VARIANTS LOCATED IN EACH ZONE Zone H moglobines Hemoglobins Hb z F Hb F Hb Willamette Hb Alabama Hb Chapel Hill Hb Park Ridge Hb Porto Alegre Hb Q Thailand G Taichung Hb Sabine Hb Bassett Hb Rampa Hb G San Jos Hb Barcelona Hb Geldrop Santa Anna Hb Richmond Hb Boumerdes Hb Swan River Hb Burke Hb Tarrant Hb Presbyterian Hb Manitoba II Hb Manitoba Hb Port Phillip variant de Hb A2 J Rovigo Hb S d grad e Hb D Punjab d grad e Hb E Hb Willamette Hb Alabama Hb Chapel Hill Hb Park Ridge Hb Porto Alegre Hb Q Thailand G Taichung Hb Sabine Hb Bassett Hb Rampa Hb G San Jos Hb Barcelona Hb Geldrop Santa Anna Hb Richmond Hb Boumerdes Hb Swan River Hb Burke Hb Tarrant Hb Presbyterian Hb Manitoba II Hb Manitoba I Hb Port Phillip J Rovigo Hb A2 variant denatured Hb S denatured Hb D Punjab Hb Lansing Hb Hinsdale Hb Ypsilanti Ypsi pic 1 Hb Alberta Hb Val de Marne Footscray Hb Kempsey Hb Shelby Hb Leslie Hb Atlanta Hb Ypsilanti Ypsi pic 2 Hb Rainier Hb Athens GA Waco Hb Debrousse Hb Lans
31. concentrada 1 vial de 25 mL 3 viales de 25 mL Cubetas desechables 1 bolsa de 125 3 bolsas de 125 Filtros 3 filtros 3 filtros Cajas para cubetas usadas 4 cajas 12 cajas Etiquetas con c digos de barras para la soluci n hemolizante 5 l minas de 4 etiquetas 15 l minas de 4 etiquetas MINICAP HEMOGLOBIN E MAXI KIT 141 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 Durante el transporte el kit puede permanecer a temperatura ambiente entre 15 y 30 C durante 15 dias sin que la calidad del test se vea afectada PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente y seg n las instrucciones suministradas LEA DETENIDAMENTE LAS HOJAS DE INSTRUCCIONES ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultra pura como el agua para inyecci n 1 TAMP N Preparaci n El tamp n est listo para usar Contiene tamp n pH 9 4 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Tamp n para el an lisis de las hemoglobinas mediante electroforesis capilar Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro El tamp n debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de tamp n No almacene el tamp n
32. correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP HEMOGLOBIN E se presentan en la tabla siguiente di Coeficiente g L mites de los valores en EIER de correlaci n Fumie corte en y Pendiente MINICAP HEMOGLOBIN E Hb S 1 000 1 249 0 988 3 0 89 8 Detecci n de hemoglobinas anormales Cincuenta y siete 57 muestras de sangre algunas con diferentes variantes de la hemoglobina como las hemoglobinas S C D y E han sido analizadas en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y un sistema comercial de an lisis de las hemoglobinas mediante electroforesis capilar Los resultados obtenidos han mostrado una correlaci n perfecta entre los dos sistemas de an lisis con respecto a la detecci n de las hemoglobinas anormales una sensibilidad del 100 y una especificidad del 100 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 En efecto todas las hemoglobinas anormales as como los valores normales de hemoglobinas normales se han detectado con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E en concordancia con la t cnica de comparaci n No se ha detectado ninguna discordancia entre las t cnicas sea cual sea la muestra como la presencia de falsos positivos detecci n de una Hb anormal inexistente o de una Hb con valor normal detectada como valor anormal 154 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 BIBLIOGRAHIE BIBLIOGRAPHY 1 J Bardakdjian Micha
33. dientes de la concentraci n de hemoglobina total Linealidad de Hb A2 El an lisis de una mezcla en proporciones variables de dos muestras diferentes de sangre una con 14 3 g dL de hemoglobina y un 0 0 de Hb A2 y la otra con 13 7 g dL de hemoglobina y un 10 0 de Hb A2 ha mostrado que el porcentaje de cada fracci n de la hemoglobina estudiada Hb A y Hb A2 est perfectamente correlacionado con la proporci n de cada una de las fracciones de esa mezcla y que toda variaci n es detectada de forma lineal con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E La t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E es perfectamente lineal en la gama de concentraciones de Hb A2 estudiadas hasta un m ximo del orden de 1 4 g dL entre 0 0 y 10 0 de Hb A2 Linealidad de Hb F El an lisis de una mezcla en proporciones variables de una muestra de sangre de cord n umbilical con 6 6 g dL de hemoglobina y un 80 8 de Hb F con una sangre normal con 13 6 g dL de hemoglobina y un 0 0 de Hb F ha mostrado que el porcentaje de cada fracci n de la hemoglobina estudiada Hb A Hb A2 y Hb F est perfectamente correlacionado con la proporci n de cada una de las fracciones en esa mezcla y que toda variaci n es detectada de forma lineal con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E Adem s el an lisis de una segunda sangre de cord n con 21 7 g dL de hemoglobina y un 79 9 de Hb F diluida serialmente con salina ha mostrado que la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E es perfectamente lineal en la
34. e Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat 1986 Sept 93 97 623 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 TABLEAU TABLE VARIANTS POTENTIELS PR SENTS DANS CHAQUE ZONE POTENTIAL VARIANTS LOCATED IN EACH ZONE Zone H moglobines Hemoglobins Hb zi Hb Santa Ana chaine libre alpha Hb Mizuho pic mineur Hb delta A 2 Hb alpha A2 Hb T Cambodia variant de Hb A2 Savaria variant de Hb A2 Chad variant de Hb A2 Arya variant de Hb A2 Hasharon variant de Hb A2 Fort de France variant de Hb A2 Ottawa variant de Hb A2 Shimonoseki variant de Hb A2 Stanleyville II variant de Hb A2 O Indonesia variant de Hb A2 G Norfolk variant de Hb A2 San Antonio variant de Hb A2 Handsworth variant de Hb A2 Matsue Oki variant de Hb A2 Memphis variant de Hb A2 Q Iran variant de Hb A2 G Waimanalo variant de Hb A2 Russ variant de Hb A2 Q India variant de Hb A2 Montgomery variant de Hb A2 Watts variant de Hb A2 G Pest variant de Hb A2 Winnipeg variant de Hb A2 Queens variant de Hb A2 Inkster variant de Hb A2 Chapel Hill variant de Hb A2 Q Thailand variant de Hb A2 Park Ridge Hb Santa Ana free alpha chain Hb Mizuho minor peak Hb delta A 2 Hb alpha A2 Hb T Cambodia Savaria Hb A2 variant Chad Hb A2 variant Arya Hb A2 variant Hasharon Hb A2 variant Fort de France
35. e una actualizaci n del programa o despu s de una activaci n de los capilares 3 an lisis antes de usar por primera vez el programa de an lisis HEMOGLOBIN E en el instrumento para electroforesis MINICAP o despu s de una parada prolongada m s de una semana Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el an lisis de los resultados IMPORTANTE El pico de hemoglobina A del Control Hb A2 Normal debe presentar una densidad ptica DO m nima de 0 10 Por debajo de este valor el centrado del perfil electrofor tico no se puede hacer correctamente Durante el an lisis de las muestras la identificaci n de las fracciones de la hemoglobina Hb A Hb F Hb A2 y Hb C as como la determinaci n de la zona de migraci n de otras variantes corren el riesgo de ser imposibles o err neas vea el p rrafo AN LISIS DE LOS RESULTADOS IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contiene el Control Hb A2 corte el tap n del microtubo antes de usarlo Despu s de la instalaci n del aparato autom tico MINICAP al realizar la primera serie de an lisis de sangres aparecer un s mbolo de alerta rojo en caso de ausencia de hemoglobina A en una de las muestras que indica que no es posible centrar el perfil vea el p rrafo An lisis de los res
36. e variaci n n 6 para Hb A y Hb A2 yn 3 para Hb S 151 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 0 FRACCI N Hb MEDIA SD CV CV MEDIO Hb A 48 9 98 2 0 04 0 73 0 05 1 4 0 7 Hb A2 1 8 3 2 0 04 0 18 1 77 6 1 2 9 Hb F 21 1 0 40 1 9 1 9 Hb S 20 2 41 5 0 43 0 68 1 5 2 1 1 8 Hb C 7 0 0 23 3 2 3 2 NOTE No se ha detectado ninguna discordancia en ninguna de las muestras analizadas en la reproducibilidad interan lisis intersistemas e interlotes Muestra con valor normal de Hb A2 todos los valores son normales Muestra con valor aumentado de Hb A2 todos los valores est n aumentados Muestras con hemoglobinas anormales se han detectado todas las hemoglobinas anormales Linealidad Los an lisis de varias mezclas de dos muestras diferentes en proporciones variables han mostrado que el porcentaje de cada fracci n de la hemoglobina estudiada Hb A Hb F Hb S y Hb A2 est perfectamente correlacionado con la proporci n de cada una de las fracciones en estas mezclas y que toda variaci n es detectada de forma lineal con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E Adem s los an lisis de tres sangres caracter sticas diferentes diluidas serialmente con salina han mostrado que la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E es perfectamente lineal en la gama de concentraciones estudiadas entre 1 5 y 21 7 g dL de hemoglobina total y que los porcentajes de las fracciones de la hemoglobina son indepen
37. econstituido en un microtubo Corte el tap n de este microtubo Ponga el microtubo colocado en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte e identificado con la etiqueta con el c digo de barras del Control Hb A2 Normal en la posici n 28 de un carrusel del MINICAP prevista a este efecto posici n Control Dispense 5 mL de soluci n hemolizante MINICAP HEMOGLOBIN E en un tubo de hem lisis identificado con la etiqueta con el c digo de barras de la soluci n hemolizante sin que se formen burbujas de aire y coloque este tubo en la posici n 27 del carrusel posici n Diluyente Soluci n en caso de ausencia de tubo o de soluci n hemolizante aparecer un mensaje de advertencia IMPORTANTE Compruebe la ausencia de espuma en el tubo de soluci n hemolizante antes de colocarlo en el carrusel Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP tras lo cual el an lisis comenzar autom ticamente Seleccione en la ventana que aparecer en pantalla el n mero de an lisis del Control Hb A2 Normal que quiera realizar seg n las indicaciones siguientes y valide Es necesario realizar 1 an lisis del Control Hb A2 Normal antes de iniciar una nueva serie de an lisis Es necesario realizar 2 an lisis tras cada cambio del contenedor de tamp n de an lisis incluso si el lote es el mismo o de modo de trabajo despu s de un ciclo de limpieza de los capilares con CAPICLEAN despu s d
38. emoglobina una sensibilidad del 100 0 y una especificidad del 100 0 respecto a la t cnica de referencia calculadas seg n el m todo recomendado Wendling 1986 La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de Hb F ha sido determinada usando herramientas estad sticas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP HEMOGLOBIN E se muestran en la tabla siguiente da dni di i L mites de los valores en Fracci n Coeficiente de correlaci n Punto de corte en y Pendiente MINICAP HEMOGLOBIN E Hb F 1 000 0 099 1 000 0 0 82 7 Determinaci n cuantitativa de Hb S Se han analizado setenta y seis 76 muestras de sangre con hemoglobina S en paralelo con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E y un sistema comercial de cuantificaci n de la hemoglobina S mediante electroforesis capilar La correlaci n entre estas dos t cnicas respecto al valor de Hb S ha sido determinada usando herramientas estad sticas media y coeficiente de regresi n lineal Los par metros de correlaci n entre estos 2 sistemas de an lisis y MINICAP HEMOGLOBIN E se muestran en la tabla siguiente e S Se 8 L mites de los valores en Fracci n Coeficiente de correlaci n Punto de corte en y Pendiente MINICAP HEMOGLOBIN E Hb S 0 999 0 144 0 998 3 7 92 4 Detecci n de hemoglobinas anormales Doscientas 200 muestras de sangre de l
39. entes de variaci n CV n 10 de cada muestra cada fracci n de la hemoglobina y cada sistema MINICAP La tabla siguiente presenta los l mites de los valores medios SD y CV obtenidos para cada fracci n de hemoglobina de las 6 muestras analizadas en los 3 sistemas con los 2 lotes de kits y un coeficiente de variaci n medio calculado a partir de todos los coeficientes de variaci n n 15 FRACCI N Hb MEDIA sD CV CV MEDIO Hb A 48 1 98 2 0 00 0 42 0 0 0 9 0 3 Hb A2 1 8 3 3 0 00 0 11 0 0 3 8 15 Hb F 20 7 21 4 0 19 0 36 0 9 1 7 1 3 Hb S 19 8 42 3 0 14 0 34 0 3 1 7 0 9 Hb C 6 7 7 2 0 06 0 10 0 9 1 5 1 2 Reproducibilidad intersistemas e interlotes Se han analizado seis sangres diferentes id nticas a las del estudio de reproducibilidad interan lisis con la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E Estas sangres se han analizado 10 veces sucesivamente en 3 sistemas MINICAP con 2 lotes diferentes de kits MINICAP HEMOGLOBIN E Se han calculado las medias desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV n 30 de cada muestra cada fracci n de hemoglobina y del conjunto de los 3 sistemas MINICAP La tabla siguiente presenta los l mites de los valores medios SD y CV obtenidos para cada fracci n de hemoglobina de las 6 muestras analizadas en los 3 sistemas con los 2 lotes de kits y un coeficiente de variaci n medio calculado a partir de todos los coeficientes d
40. es obtenidos con el kit MINICAP HEMOGLOBIN E en el sistema MINICAP por an lisis cuantitativo indican una muy buena repetibilidad y reproducibilidad del kit MINICAP HEMOGLOBIN E en todos los aspectos probados con un coeficiente de variaci n medio del orden del 1 4 en los porcentajes de cada fracci n de hemoglobina estudiada Adem s los perfiles electrofor ticos han sido interpretados cualitativamente a simple vista Los porcentajes de las diferentes fracciones han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 0 e integraci n autom tica de las fracciones de hemoglobina con la t cnica HEMOGLOBIN E Repetibilidad intraserial e interan lisis Se han analizado siete sangres diferentes sangres A y E normales sangre B con Hb S sangres C y H con Hb F sangre F con Hb A2 aumentada y sangre G con Hb A F S y C en paralelo en tres sistemas MINICAP con 2 lotes diferentes de kits MINICAP HEMOGLOBIN E Cada sangre ha sido analizada 5 veces simult neamente en los 2 capilares de cada sistema MINICAP Se han calculado las medias desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV n 10 de cada muestra y cada sistema MINICAP La tabla siguiente presenta los valores medios en desviaciones t picas SD y coeficientes de variaci n CV obtenidos para cada fracci n de hemoglobina de las 7 sangres analizadas en los 3 sistemas MINICAP 150
41. ing Hb Hinsdale Hb Ypsilanti Ypsi peak 1 Hb Alberta Hb Val de Marne Footscray Hb Kempsey Hb Shelby Hb Leslie Hb Atlanta Hb Ypsilanti Ypsi peak 2 Hb Rainier Hb Athens GA Waco Hb Debrousse Z A Hb A Hb Olympia Hb Gorwihl Hinchingbrooke Hb Phnom Penh Hb Silver Springs Hb La Coruna Hb Bougardirey Mali Hb Dallas Hb Toulon Hb Austin Hb Bonn Hb Buenos Aires Bryn Mawr pic majeur Hb Chicago Hb Okayama Hb Fontainebleau Hb Raleigh Hb Hekinan Hb Mosella Hb Aztec Hb Little Rock Hb Frankfurt Hb Bethesda Hb M Boston M Osaka Hb Brisbane Great Lakes Hb Mizuho Hb Grange Blanche Hb San Diego Hb M Saskatoon pic majeur Hb Malm Hb Minneapolis Laos Hb Owari Hb Rhode Island Southwark Hb Twin Peaks Hb Wood Hb Conakry Hb Coimbra Ingelheim Hb Link ping Meilahti Hb Templeuve Hb Alzette Hb Ty Gard Hb Gouda Hb Syracuse Hb Fort Dodge Hb Camperdown Hb Jura Hb A Hb Olympia Hb Gorwihl Hinchingbrooke Hb Phnom Penh Hb Silver Springs Hb La Coruna Hb Bougardirey Mali Hb Dallas Hb Toulon Hb Austin Hb Bonn Hb Buenos Aires Bryn Mawr major peak Hb Chicago Hb Okayama Hb Fontainebleau Hb Raleigh Hb Hekinan Hb Mosella Hb Aztec Hb Little Rock Hb Frankfurt Hb Bethesda Hb M Boston M Osaka Hb Brisbane Great Lakes Hb Mizuho Hb Grange Blanche Hb San Diego Hb M Saskatoon main peak Hb Malm H
42. is I J Aljezur alpha 2 Hb K Ibadan Hb Bart s Hb Cemenelum Hb Wayne peak 2 Hb Hopkins Il Hb J Calabria J Bari Hb J Tongariki Hb Providence X Asp peak Hb J Meerut J Birmingham Hb J Broussais Tagawa l alpha 2 Hb J Rajappen Hb Grady Dakar Hb Le Lamentin Hb J Anatolia Hb Hikari Hb J Broussais Tagawa l alpha 1 Hb J Chicago Hb J Toronto Hb J Oxford I Interlaken Hb Ube 2 Hb J Meinung J Bangkok Hb Neuilly sur Marne Hb Mexico J Paris Il Hb J Paris I J Aljezur alpha 1 Hb J Habana Hb J Baltimore N New Haven Hb J Paris I J Aljezur alpha 2 Hb K lbadan 13 Hb N Baltimore Hopkins Hb J Rovigo Hb J Norfolk Kagoshima Hb J Kaohsiung J Honolulu Hb N Baltimore Hopkins l Hb J Rovigo Hb J Norfolk Kagoshima Hb J Kaohsiung J Honolulu 14 Hb N Seattle Hb N Seattle 15 Hb I Texas Hb I I Texas Pic non visible Hidden peak 625 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 SCHEMAS FIGURES PROFILS LECTROPHOR TIQUES ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 2 Figure 1 Sang b ta thalass mique Sang normal Blood sample with beta thalassemia Normal blood sample Figure 4 Figure 3 Sang avec variant h t rozygote Hb S Sang avec variant Hb C Blood sample with Hb S heterozygote variant Blood sample with
43. itar que se contamine o desnaturalice Despu s de analizar el Control Hb A2 Normal en el MINICAP como control de la migraci n o como control de calidad debe volver a conservarse en nevera 2 8 C lo antes posible Puede congelarse en al cuotas y conservarse como m ximo 6 meses a 20 C IMPORTANTE Despu s de conservarlo en nevera 2 8 C o a 20 C homogenice el Control Hb A2 Normal reconstituido antes de analizarlo en el MINICAP NOTA Para un uso ptimo en el MINICAP se recomienda repartir al cuotas del Control en microtubos antes de congelarlo El Control Hb A2 Normal descongelado debe conservarse en nevera 2 8 C y usarse ese mismo dia No congele y descongele el Control m s de 15 veces NOTA Durante el transporte el Control Hb A2 Normal liofilizado puede permanecer a temperatura ambiente entre 15 y 30 C durante 15 d as sin que la calidad del test se vea afectada ATENCI N Como ninguna prueba de an lisis puede probar la ausencia de los virus VIH virus de la hepatitis B virus de la hepatitis C o de cualquier otro agente infeccioso el Control Hb A2 Normal debe ser manipulado con las precauciones habituales para evitar contaminarse Esta sangre de control analizada usando las t cnicas aceptadas por las autoridades competentes FDA ANSM es negativa para la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B para la presencia de anticuerpos anti VHC para la presencia de anticuerpo
44. mplo en una sangre que contenga una concentraci n elevada de Hb F gt 60 es necesario realizar an lisis complementarios para confirmar la presencia de Hb A En los reci n nacidos hasta la edad de 6 9 meses se recomienda analizar varias muestras por ejemplo obtenidas mensualmente para controlar la concentraci n de Hb F Esto permitir comprobar la disminuci n de Hb F y la eventual presencia de una variante En caso de duda se aconseja confirmar el resultado con una t cnica complementaria y realizar un an lisis a los padres Al analizar sangres de pacientes con drepanocitosis anemia falciforme que hayan recibido transfusiones y que presenten un porcentaje bajo de Hb A lt 10 la fracci n Hb S puede aparecer desplazada de la zona Z S hacia la zona Z D Es indispensable confrontar este resultado con el an lisis hematol gico y realizar an lisis complementarios para confirmar la presencia de Hb S Al analizar sangres de pacientes con drepanocitosis antes de una transfusi n puede observarse una variaci n del porcentaje de la fracci n Hb S en los an lisis de un mismo paciente debido a la falta de homogeneidad de este tipo de muestra Se recomienda homogenizar bien este tipo de muestra de sangre antes de analizarla Casos en que la hemoglobina E Hb F puede estar aumentada excepto en los reci n nacidos en caso de embarazo pacientes con drepanocitosis con m s de 2 a os de edad tratados con Hydrea hid
45. na soluci n alcalina pH 12 Uso Para lavar los capilares del MINICAP IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar el cuello del contenedor el conector y el tubo con agua en abundancia para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 6 SOLUCI N SALINA Preparaci n Soluci n de NaCl 0 15 M 9 g L en agua destilada o desionizada Uso Para lavar los gl bulos rojos antes de conservarlos a 80 C si es necesario Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n salina puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera Deseche la soluci n despu s de 3 meses o si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana Para una conservaci n prolongada a ada 1 g L de azida s dica NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 n
46. nidos Los picos de hemoglobina A Hb A F Hb F A2 Hb A2 y C Hb C son identificados de forma autom tica y el pico de Hb A es situado en el centro de la ventana de edici n de las curvas Los perfiles electrofor ticos obtenidos deben ser analizados visualmente para detectar las anomal as Las posiciones potenciales de las diferentes variantes de la hemoglobina identificadas por las zonas Z1 a 215 se muestran en la ventana de edici n y aparecen en el informe de resultados La tabla del p rrafo Interpretaci n presenta las variantes conocidas que pueden estar presentes en cada zona Cuando el programa identifica una fracci n de hemoglobina en una zona determinada el nombre de esa zona es enmarcado Los perfiles son centrados autom ticamente respecto al pico de Hb A para facilitar su interpretaci n en caso de ausencia de detecci n de los picos de Hb A y o Hb A2 en un perfil aparece un s mbolo amarillo de alerta y el centrado del perfil se realiza entonces respecto a la posici n del pico de Hb A en los dos ltimos perfiles obtenidos anteriormente en el mismo capilar y ning n pico es identificado excepto cuando de detecta Hb C en este caso los picos de Hb A2 y de Hb C son identificados en caso de presencia de Hb F en un perfil sin detecci n de Hb A el s mbolo amarillo de alerta no aparece y el centrado del perfil se realiza entonces respecto a la posici n del pico de Hb F y los picos de Hb F y o de Hb A y o de Hb A2
47. no sedimentadas No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la hem lisis autom tica de las muestras puede ser perturbada por la presencia de aglomerados viscosos entre los gl bulos rojos el perfil electrofor tico puede tambi n ser afectado por los productos de degradaci n de las hemoglobinas o artefactos PROCEDIMIENTO El sistema MINICAP es un instrumento multiparam trico autom tico que permite realizar el an lisis de las hemoglobinas en 2 capilares en paralelo seg n las etapas siguientes lectura de los c digos de barras de los tubos primarios hasta 26 y del carrusel hem lisis y diluci n de las muestras en las cubetas de reactivo desechables a partir de los tubos primarios sin plasma lavado de los capilares inyecci n de las muestras hemolizadas separaci n y detecci n directa de las hemoglobinas en los capilares Las etapas manuales son las siguientes colocaci n de los tubos primarios destapados en el carrusel en las posiciones 1 a 26 colocaci n del tubo de la soluci n hemolizante en la posici n 27 del carrusel colocaci n del Control Hb A2 Normal en la posici n 28 del carrusel introducci n del carrusel cargado en el sistema MINICAP recuperaci n de los tubos despu s del an lisis recuperaci n y cierre de las cajas para cubetas usadas LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP 146 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 I PREPARACI
48. nt de Hb A2 Dallas variant de Hb A2 Toulon variant de Hb A2 Bonn variant de Hb A2 Chicago variant de Hb A2 Fontainebleau variant de Hb A2 Hekinan variant de Hb A2 Mosella variant de Hb A2 Aztec variant de Hb A2 Frankturt variant de Hb A2 M Boston variant de Hb A2 Owari variant de Hb A2 Twin Peaks variant de Hb A2 Conakry variant de Hb A2 Gouda Hb A2 variant de Hb A2 Jura variant de Hb A2 Nouakchott Hb A2 Hb Chad E Keelung Hb O Arab Hb E Saskatoon Dallas Hb A2 variant Toulon Hb A2 variant Bonn Hb A2 variant Chicago Hb A2 variant Fontainebleau Hb A2 variant Hekinan Hb A2 variant Mosella Hb A2 variant Aztec Hb A2 variant Frankfurt Hb A2 variant M Boston Hb A2 variant Owari Hb A2 variant Twin Peaks Hb A2 variant Conakry Hb A2 variant Gouda Hb A2 variant Jura Hb A2 variant Nouakchott Hb A2 variant Z E Hb E Hb Seal Rock Hb K ln Ube 1 Hb Buenos Aires pic mineur Hb M Saskatoon pic mineur Hb A2 Babinga Hb G Siriraj Hb Agenogi Hb Sabine Hb Santa Ana Hb Savaria variant de Hb A2 M Iwate variant de Hb A2 Wayne pic 1 Hb C d grad e Hb E Hb Seal Rock Hb K ln Ube 1 Hb Buenos Aires minor peak Hb M Saskatoon minor peak Hb A2 Babinga Hb G Siriraj Hb Agenogi Hb Sabine Hb Santa Ana Hb Savaria M lwate Hb A2 variant Wayne Hb A2 variant peak 1 denatured Hb C z S
49. o tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 ym y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema de electroforesis capilar MINICAP SEBIA referencia n 1230 2 Carrusel suministrado con el sistema MINICAP 3 Contenedores de pl stico suministrados con el sistema MINICAP contenedor para la limpieza de los capilares debe llenarse con agua destilada o desionizada y contenedor de desechos 4 Cubetas de reactivo desechables MINICAP SEBIA 250 unidades referencia n 2280 Tapas para cubetas desechables de MINICAP usadas 12 ud referencia n 2286 tapas destinadas a cerrar las cajas para cubetas usadas 6 Tubo de hem lisis di metro de 8 a 16 mm y altura de 50 a 100 mm Si MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y conservaci n de las muestras El an lisis se hace en muestras de sangre frescas recogidas con anticoagulante que contenga EDTA pot sico No use anticoagulantes que contengan yodoacetato Las sangres deben ser obtenidas seg n los m todos establecidos de uso en el laboratorio cl nico Las sangres pueden conservarse un m ximo de siete dias en nevera entre 2 y 8 C Para conservaciones prolongadas congele r pidamente las muestras a 80 C como m ximo durante las 8 horas siguientes a su ob
50. observada en una zona de migraci n comprendida entre la hemoglobina F y la hemoglobina AA variante de la A2 incluso dentro de las zonas de migraci n habituales de las hemoglobinas Los porcentajes de la hemoglobina A2 normal y de la variante son casi id nticos en caso de un paciente heterozigoto Si est presente una variante de la hemoglobina A2 5A 2 o cualquier otra variante de la A2 se recomienda sumar el porcentaje de esta variante al de la hemoglobina A2 para un mejor diagn stico de las beta talasemias Algunas variantes de la hemoglobina Hb Camperdown y Hb Okayama por ejemplo migran muy cerca de la Hb A y pueden ser confundidas con esta ltima Algunas variantes de la hemoglobina Hb Porto Alegre y Hb S degradada migran muy cerca de la Hb F y pueden ser confundidas con esta ltima Las fracciones d biles que migran en la zona Z12 son a veces mal integradas Hb Bart demasiado asim tricas por ejemplo Es necesario entonces suprimir la integraci n autom tica e integrarlas manualmente 149 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 Al analizar sangres de reci n nacidos las muestras que contengan Hb F en concentraci n elevada pueden presentar una fracci n Hb A alterada especialmente a causa de la migraci n de Hb F degradada en esta zona El porcentaje de Hb A indicado por el programa puede estar entonces sobreestimado Adem s en caso de presencia de variantes de la hemoglobina gt 4 S C E 6 D Punjab por eje
51. olizante debe conservarse en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de soluci n hemolizante No conserve la soluci n hemolizante a temperatura ambiente cerca de una ventana o de una fuente de calor NO LA CONGELE Deseche la soluci n hemolizante si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana a un precipitado a part culas en suspensi n IMPORTANTE Despu s de cada uso cierre herm ticamente el vial de soluci n hemolizante y cons rvelo inmediatamente en nevera NOTA La soluci n hemolisante puede presentar una coloraci n amarillenta o anaranjada m s o menos intensa sin ning n efecto adverso en su funcionamiento 3 SOLUCI N DE LAVADO Preparaci n El vial de soluci n de lavado concentrada debe completarse hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene una soluci n alcalina pH 12 Uso Para el lavado de los capilares despu s de la separaci n electrofor tica de las hemoglobinas IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para e
52. pec fico de la soluci n de hipoclorito de sodio en la posici n 1 del carrusel de MINICAP Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto en caso de ausencia de cubetas aparece un mensaje de advertencia 144 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP Cierre las puertas del MINICAP y el ciclo de limpieza comenzar autom ticamente IMPORTANTE Para un uso ptimo de la soluci n de hipoclorito de sodio en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de los rayos solares y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de los cidos y del amoniaco 5 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS MINICAP Preparaci n Cada vial de soluci n de lavado concentrada CAPILLARYS MINICAP SEBIA referencia n 2052 2 viales de 75 mL debe completarse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada Para el MINICAP se recomienda diluir s lo 25 mL de la soluci n concentrada hasta 250 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene u
53. roxicarbamida y o transfusionados y o que presenten naturalmente una cantidad incrementada de Hb F debido a un fen meno de compensaci n pacientes con m s de 2 a os de edad con el desorden PHHF persistencia hereditaria de Hb F hay entre un 20 y un 40 de Hb F en los heterozigotos pacientes con m s de 2 a os de edad que presenten leucemia de cualquier tipo anemia hemol tica hereditaria diabetes enfermedad tiroidea hiperactividad de la m dula sea mieloma m ltiple o un c ncer en fase de met stasis Si desea obtener m s informaci n visite la p gina web http www answers com topic fetal hemoglobin test Interferencias y limitaciones Vea MUESTRAS PARA EL AN LISIS No use muestras de sangre total o muestras no sedimentadas No use muestras de sangre antiguas o mal conservadas ya que la presencia de hemoglobinas degradadas puede observarse en el perfil electrofor tico en forma de artefactos m s o menos numerosos despu s de 7 d as de conservaci n Si las muestras se han conservado m s de 10 dias se observa la presencia de aglomerados viscosos en los gl bulos rojos es indispensable eliminarlos antes de realizar el an lisis Cuando se detecta la presencia de una hemoglobina anormal se recomienda usar otras t cnicas de identificaci n por ejemplo electroforesis de las cadenas de globina o consultar a un laboratorio especializado para un tipado preciso de la variante IMPORTANTE Es indispensable
54. s anti VIH 1 y anti VIH 2 2 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Uso Para la limpieza de los capilares del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um Renueve el agua cada dia para evitar contaminaciones microbianas En caso de conservaci n prolongada a ada 350 pL L de CLEAN PROTECT SEBIA referencia n 2059 1 vial de 5 mL IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 3 CAPICLEAN Presentaci n El vial de la soluci n enzim tica concentrada CAPICLEAN SEBIA referencia n 2058 1 vial de 25 mL contiene enzimas proteoliticos surfactantes y aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la limpieza de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar MINICAP SEBIA durante el ciclo de limpieza CAPICLEAN IMPORTANTE Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN como m nimo una vez por semana y como m ximo una vez al d a o cada 500 an lisis cuando se realicen en menos de una semana Vea las instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE Para un uso ptimo del CAPICLEAN en el MINICAP es indispensable usar una etiqueta con un c digo de barras cuya funci n es identificar el tubo de hem lisis que sirve de soporte al microtubo que contiene la soluci n CAPI
55. s especiales An lisis de muestras sin Hb A 6 Hb A2 estas muestras pueden ser cuantificadas pero no caracterizadas mediante las zonas de identificaci n Para identificar las fracciones de hemoglobina presentes en una muestra sin hemoglobina A o hemoglobina A2 se recomienda preparar la muestra seg n el m todo siguiente En un microtubo mezcle un volumen 80 LL de gl bulos rojos de la muestra a analizar y un volumen de Control Hb A2 Normal 80 pL Agite en el v rtex durante 5 segundos Corte el tap n del microtubo Ponga el microtubo en un tubo de hem lisis nuevo que servir de soporte en el carrusel del MINICAP Realice el an lisis de la muestra siguiendo el procedimiento habitual Los resultados obtenidos son entonces tenidos en cuenta autom ticamente por el programa para el tratamiento de los datos IMPORTANTE En una muestra sin Hb A Hb A2 preparada seg n este m todo la cuantificaci n de las fracciones indicada en el perfil electrofor tico no tiene ning n significado y los valores obtenidos no deben ser tenidos en cuenta este procedimiento s lo permite la identificaci n de la o las variantes presentes en la muestra mediante las zonas de identificaci n gracias a que migrar n en la zona correcta La cuantificaci n de las fracciones se obtiene en este caso analizando la muestra inicial no mezclada antes de diluirla con la sangre control Muestras a descartar No use muestras de sangre total o muestras
56. semias Adem s la buena separaci n de las diferentes fracciones permite detectar variantes de la hemoglobina y en particular diferenciar la hemoglobina S de la hemoglobina D y la hemoglobina E de la hemoglobina C La cuantificaci n de la hemoglobina A2 tambi n se puede realizar en presencia de hemoglobina E Para uso en diagn stico In Vitro PRINCIPIO DEL TEST La hemoglobina es una mol cula compleja compuesta por cuatro cadenas polipept dicas id nticas dos a dos estando cada cadena ligada al hemo que es un n cleo tetrapirr lico porfirina ligado a un tomo de hierro El hemo es com n a todas las hemoglobinas La parte proteica responsable del tipo de hemoglobina se denomina globina Se conocen principalmente las cadenas polipeptidicas a P y y En humanos podemos encontrar las hemoglobinas normales siguientes Hemoglobina A Hemoglobina A2 Hemoglobina fetal F La cadena o es com n a estas tres hemoglobinas La estructura espacial de la hemoglobina como la de todas las prote nas depende de la naturaleza y la secuencia de los amino cidos que forman las cadenas Las uniones que se forman entre los diferentes amino cidos son responsables de la forma de la mol cula de su estabilidad y de sus propiedades Situadas en un campo el ctrico las hemoglobinas se desplazan en funci n de su carga del tama o de la mol cula de la fuerza i nica del pH del tamp n y de la naturaleza del soporte empleado Las variantes
57. tenci n despu s de haber lavado los gl bulos rojos seg n el procedimiento siguiente centrifugue la sangre total durante 5 minutos a 5 000 r p m elimine el plasma lave 2 veces los gl bulos rojos con 10 vol menes de salina centrifugue despu s de cada lavado y elimine el exceso de salina de la superficie del co gulo globular lavado agite en el v rtex antes de congelarlo Las sangres congeladas a 80 C son estables un m ximo de 3 meses IMPORTANTE Para una conservaci n ptima de las muestras no las conserve a 20 C sino a 80 C vea la BIBLIOGRAF A J Bardakdjian Michau et al 2003 NOTA No conserve las sangres a temperatura ambiente Las hemoglobinas Hb de las muestras conservadas entre 2 y 8 C se degradan progresivamente 145 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 En una muestra conservada m s de 7 d as en nevera como consecuencia de la degradaci n de la muestra aparece una fracci n d bil correspondiente a la metahemoglobina en la zona de migraci n de la Hb S en presencia de Hb C aparece una fracci n correspondiente a Hb C degradada en posici n an dica respecto a la Hb A2 pero sin ninguna interferencia con sta zona Z E vea la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb O Arab aparece una fracci n correspondiente a Hb O Arab degradada en la zona de migraci n de la Hb S zona Z S vea la tabla del p rrafo Interpretaci n en presencia de Hb E aparece un
58. tes s ndromes talas micos Alfa talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas a afectando por consiguiente a la s ntesis de las 3 hemoglobinas fisiol gicas El exceso de s ntesis de las cadenas B y y respecto a las cadenas o provoca la formaci n de tetr meros sin cadena a Hemoglobina Bart y 4 Hemoglobina H B 4 La hemoglobina H posee un punto isoel ctrico relativamente bajo En la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E migra en una posici n mucho m s an dica que la hemoglobina A y puede estar presente en forma de una o varias fracciones Beta talasemias Se caracterizan por la disminuci n de la s ntesis de las cadenas B S lo se ve afectada la s ntesis de la hemoglobina A Los porcentajes de las hemoglobinas F y A2 est n por tanto aumentados respecto a la hemoglobina A En la t cnica MINICAP HEMOGLOBIN E los valores de las diferentes hemoglobinas normales obtenidos permiten detectar los casos de beta talasemias 3 Notas En caso de ausencia de la hemoglobina A se puede observar una fracci n d bil en la zona de migraci n de esta ltima Se trata de una hemoglobina F acetilada que representa del 15 al 25 de la hemoglobina F El sistema MINICAP est programado autom ticamente para evitar confundir esta fracci n acetilada con la hemoglobina A Puede sospecharse la presencia de una variante de la hemoglobina A2 si una fracci n que presenta un porcentaje bajo de 0 5 3 es
59. tom tica de las cubetas de reactivo usadas en el MINICAP Deben colocarse en el MINICAP en el emplazamiento previsto a tal efecto ATENCI N Manipule con precauci n las cajas que contengan cubetas de reactivo usadas ya que pueden contener muestras biol gicas 7 ETIQUETAS CON C DIGOS DE BARRAS PARA LA SOLUCI N HEMOLIZANTE Uso Etiquetas con c digos de barras destinadas a identificar el tubo de la soluci n hemolizante SOLUCI N HEMOLIZANTE HEMOGLOBIN E REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 CONTROL Hb A2 NORMAL Composici n El Control Hb A2 Normal SEBIA referencia n 4778 se obtiene a partir de una mezcla de sangres humanas normales Un procedimiento de estabilizaci n permite conservar el Control Hb A2 Normal en forma liofilizada Aplicaci n El Control Hb A2 Normal est destinado antes de iniciar una nueva serie de an lisis al control de la migraci n as como al control de calidad del m todo de determinaci n de la hemoglobina humana A2 mediante la t cnica electrofor tica MINICAP HEMOGLOBIN E Reconstituya cada vial liofilizado de Control Hb A2 Normal con exactamente el volumen de agua destilada o desionizada indicado en las instrucciones del Control Hb A2 Normal Deje reposar 30 minutos y agite suavemente evite la formaci n de espuma Control de la migraci n El Control Hb A2 Normal debe usarse de la siguiente manera Dispense el Control Hb A2 Normal r
60. trolito de un flujo electroendosm tico m s o menos importante El sistema MINICAP posee 2 capilares en paralelo permitiendo realizar 2 an lisis simult neos En este sistema la inyecci n en los capilares de las muestras diluidas con la soluci n hemolizante se realiza en el nodo por aspiraci n La separaci n se realiza a continuaci n aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar La detecci n directa de las hemoglobinas se efect a a 415 nm en el lado cat dico Los capilares se lavan antes de cada an lisis con una soluci n de lavado y luego con el tamp n de an lisis Con el tamp n usado de pH alcalino el orden de migraci n de las principales hemoglobinas normales y anormales es el siguiente del c todo al nodo 5A 2 variante de A2 C A2 0 Arab E S D G Filadelfia F A Hope Bart J N Baltimore y H Hay que tener en cuenta que la anhidrasa carb nica no se detecta en el perfil electrofor tico de las hemoglobinas en la electroforesis capilar lo que permite identificar algunas variantes de la hemoglobina A2 en su zona de migraci n REACTIVOS SUMINISTRADOS EN LOS KITS MINICAP HEMOGLOBIN E ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad COMPONENTES REF N 2207 REF N 2227 Tampon listo para usar 2 viales de 250 mL 6 viales de 250 mL Soluci n hemolizante lista para usar 1 vial de 225 mL 3 viales de 225 mL Soluci n de lavado soluci n
61. u J L Dhondt R Ducrocq F Galact ros A Guyard F X Huchet A Lahary D Lena Russo P Maboudou M L North C Prehu A M Soummer M Verschelde H Wajcman 2003 Bonnes pratiques de l tude de l h moglobine Ann Biol Clin 61 401 409 V F Fairbanks ed 1980 Hemoglobinopathies and thalassemia Laboratory methods and case studies Brian C Decker New York F Galacteros 1986 Thalass mie dr panocytose et autres h moglobinopathies Techniques et Biologie 3 174 178 JM Hempe JN Granger and RD Craver 1997 Capillary isoelectric focusing of hemoglobin variants Electrophoresis 18 1785 1795 T H J Huisman and J H P Jonxis 1977 The hemoglobinopathies techniques of identification Marcel Dekker New York Jellum E et al Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis J Chromatogr B 689 155 164 1997 Joutovsky A Hadzi Nesic J and Nardi MA 2004 HPLC retention time as a diagnostic tool for hemoglobin variants and hemoglobinopathies a study of 60 000 samples in a clinical diagnostic laboratories Clin Chem 50 10 1736 1747 8 J S Krauss PA Drew M H Jonah M Trinh S Shell L Black and C R Baisden 1986 Densitometry and microchromatography compared for determination of the hemoglobin C and A2 proportions in hemoglobin C and hemoglobin SC disease and in hemoglobin C trait Clin Chem 32 5 860 863 9 Landers JP Clinical Capillary Electrophoresis Clin Chem 41 495 50
62. ultados Se aconseja entonces analizar una muestra que contenga hemoglobina A en el capilar afectado y volver a analizar la muestra sin hemoglobina A coloc ndola en un capilar que ya haya detectado la presencia de hemoglobina A Control de calidad El Control Hb A2 Normal debe ser usado como una sangre humana normal Despu s de la reconstituci n use directamente el Control Hb A2 Normal como una muestra de sangre a analizar o como control de la migraci n en la posici n 28 del carrusel vea el p rrafo anterior Ser tratado autom ticamente con la soluci n hemolizante Se recomienda incluir el Control Hb A2 Normal en cada serie de an lisis Los valores obtenidos deben estar comprendidos entre los valores espec ficos de cada lote 143 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 IMPORTANTE Para un uso ptimo del Control Hb A2 Normal colocado en una posici n cualquiera del carrusel posiciones 1 a 26 es indispensable usar una etiqueta con c digo de barras destinada a identificar el tubo de hem lisis que servir de soporte al microtubo que contenga el Control Hb A2 corte el tap n del microtubo antes de usarlo Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro Antes de la reconstituci n el Control Hb A2 Normal debe conservarse en nevera 2 8 C hasta la fecha de caducidad indicada en los viales o en la caja El Control Hb A2 Normal reconstituido debe conservarse en nevera 2 8 C y usarse en el plazo de una semana para ev
63. vitar la evaporaci n La soluci n concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de soluci n de lavado La soluci n diluida es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminaci n microbiana 4 CUBETAS DE REACTIVO DESECHABLES Uso Cubetas de un solo uso para la diluci n y la migraci n de las muestras de sangre en el aparato autom tico Deben colocarse en el cargador espec fico del MINICAP Una cubeta est destinada al an lisis de 2 muestras ATENCI N Manipule con precauci n las cubetas de reactivo que contengan muestras biol gicas 5 FILTROS Uso Filtros de un solo uso para el filtrado del tamp n de la soluci n de lavado reconstituida y del agua destilada o desionizada usada para la limpieza de los capilares IMPORTANTE Cambie sistem ticamente los filtros al empezar un nuevo kit 142 MINICAP HEMOGLOBIN E 2013 01 Enrosque un filtro al final del tubo que cuelga de los tapones de los contenedores de tamp n de soluci n de lavado y de agua destilada o desionizada Al cambiar los filtros lave los conectores y los tubos con agua destilada o desionizada Conservaci n Antes de usar los filtros deben conservarse en su embalaje original herm ticamente cerrado en un lugar seco y a temperatura ambiente o en nevera 6 CAJAS PARA CUBETAS USADAS Uso Cajas destinadas a la recuperaci n au

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