Classical Swine Fever Virus (CSFV) Antibody Test Kit Kit de
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1. 4 IDEXX CSFV Ab Calculation Calculation of Negative Calculation of Positive Calculation for test samples Control mean NCx Control mean PCx Blocking percentage NCX 4 50 Sample Azs x 100 NCK NET Au NC2 A PCx PC1 Ago PC2 Ayo dA 450 2 2 SE Example Example sample result 1 219 NCx 1 280 1 300 1 290 pox 0 120 0 140 0 130 1 290 1 219 x 100 5 5 2 9 1 290 Interpretation of Results e The test sample is positive antibodies are present if it gives a blocking percentage gt 40 e The test sample is negative antibodies are absent if it gives a blocking percentage lt 30 e If the blocking percentage of the sample is gt 30 and lt 40 retest the animal at a later date If the sample is still doubtful after retesting the result can be confirmed by Serum Neutralization Test Please refer to the regulations currently in force in your country o Modification in the using instructions IDEXX CSFV Ab 5 Summarized Test Procedure IDEXX strongly recommends that you read the complete instructions carefully before using the test the first time Steps Action 1 Sample diluent distribution All reagents should equilibrate to 18 26 C before use Reagents should be mixed by gentle swirling or vortexing Add 50 ul of the Sample Diluent to all wells to be tested and to the control wells 2 Sample distribution Add 50 ul of the Positive Control and Negative Contro2. Stationsstrasse 12 3097 Liebefeld Bern Switzerland ou visitez www idexx com production contact IDEXX Technical Support 00 800 727 43399 IDEXX et Test With Confidence sont des marques de commerce ou des marques d pos es d IDEXX Laboratories Inc ou ses filiales aux tats Unis et ou dans d autres pays 12 IDEXX CSFV Ab Versao em Portugu s Kit para Detecc o de Anticorpos contra o Virus da Peste Suina Classica VPSC Para uso exclusivamente veterinario Nome e Indicag es IDEXX CSFV Ab um ensaio imunoenzim tico da IDEXX para detecc o de anticorpos do VPSC em soro ou plasma de su nos Informac es gerais O Virus da Peste Su na Classica VPSC o Virus da Diarr ia Viral Bovina BVDV e o Virus da Doen a da Fronteira BDV s o os 3 membros do g nero Pestivirus dentro da familia Flaviviridae O VPSC causa s rias perdas na ind stria suin cola pois altamente patog nico e pode causar mortalidade Os porcos infectados com cepas altamente virulentas do VPSC podem disseminar grandes quantidades de virus antes mesmo do surgimento dos sinais cl nicos da doenga Os animais que sobrevivem a uma infecc o aguda ou sub aguda desenvolvem anticorpos e nao mais espalhar o o v rus Cepas menos patog nicas moderadamente virulentas podem induzir a uma infec o cr nica fazendo com que os animais excretem o virus continuamente ou intermitantemente at a morte Os fetos de matrizes prenhes sucept veis expo
3. chantillons et des contr les en monochromatisme 450 nm ou en bichromatisme 450 650 nm Calculer la valeur moyenne de densit optique voir Calculs de chaque chantillon si test en double et des contr les positif et n gatif 10 IDEXX CSFV Ab R sultats Le test est valid si la densit optique du Contr le n gatif est sup rieure 0 500 La valeur du pourcentage de comp tition du Contr le positif doit tre sup rieure 50 Note IDEXX est en mesure de vous fournir mat riel et logiciel informatique pour le calcul des r sultats et l enregistrement des donn es Calculs Calcul de la valeur moyenne de Calcul de la valeur moyenne Calcul du pourcentage d inhibition densit optique du Contr le de densit optique du n gatif CNx Contr le positif CPX Pourcentage d inhibition CNX CN1 Asso CN2 Aug NCX Aen Echantillon Asso x 100 2 CPx CP1 Aen CP2 Aen NCX Ausg 2 Exemple Exemple Exemple DO chantillon 1 219 1 290 1 219 x 100 5 5 CNx 1 280 1 300 1 390 CPx 0 120 0 140 0 130 1 290 2 2 Interpr tation e L chantillon est positif pr sence d anticorps si la valeur du pourcentage d inhibition est sup rieure ou gale 4096 e L chantillon est n gatif absence d anticorps si la valeur du pourcentage d inhibition est inf rieure ou gale 3096 e Re tester les animaux dont la valeur du pourcentage d inhibition est sup rieur 30 et inf rieur
4. 4096 La gestion des chantillons douteux et ou positifs est soumise la l gislation sp cifique chacun des pays concern s o Modification majeure du mode IDEXX CSFV Ab 11 R sum du Mode op ratoire Avant la premi re mise en uvre du test il est vivement recommand de lire l ensemble du mode d emploi Etape Action 1 Pr paration des Porter tous les r actifs 18 26 C pendant une heure environ avant utilisation chantillons Distribuer 50 ul de Diluant d chantillons dans les puits appropri s de la microplaque sensibilis e conform ment au plan de plaque pr tabli 2 Distribution des 50 ul de Contr le positif et 50 ul de Contr le n gatif en double dans les puits appropri s chantillons 50 ul de s rum ou de plasma dans les puits disponibles adjacents Utiliser un embout de pipette diff rent pour chaque chantillon Homog n iser le contenu de la microplaque par agitation 3 Incubation des Incuber pendant 2 heures 5 min 18 26 C ou bien pendant une nuit 18 24 heures chantillons 18 26 C Quelle que soit l option choisie recouvrir les plaques d un film adh sif ou incuber en chambre humide avec couvre plaque s afin d viter toute vaporation ATTENTION Seul le protocole avec incubation longue 18 24 heures est agr en France 4 Lavage des plaques Vider le contenu de la plaque Laver 3 fois c
5. stico in vitro Diagn stico in vitro Temperature limitation Limite de temp rature Zulassiger Temperaturbereich Limite di temperatura Limite de temperatura Limite de temperatura Consult instructions for use Manuel de l utilisateur mode d emploi Gebrauchsinformation beachten Consultare le istruzioni per l uso Consultar las instrucciones de uso Consulte instrugdes para o uso mmm Best AAA Manufacturer IDEXX Switzerland AG Stationsstrasse 12 3097 Liebefeld Bern Switzerland EU Representative IDEXX Europe B V P O Box 1334 2130 EK Hoofddorp The Netherlands idexx com 34 IDEXX CSFV Ab
6. Incubar las placas durante 2 horas 5 min o toda la noche 12 18 horas a 18 26 C En muestras cualquier opci n de incubaci n las placas deben sellarse firmemente para evitar evaporaciones o incubarse con cubiertas en una c mara h meda 4 Lavado de la placa Aspire los contenidos l quidos de los pocillos en un recipiente de desechos apropiado Lave cada pocillo con aproximadamente 300 ul de Soluci n de Lavado tres veces Aspire los contenidos l quidos de todos los pocillos despu s de cada lavado Despu s de la aspiraci n final elimine el fluido de lavado residual de cada placa golpe ndola sobre material absorbente 5 Distribuci n del A adir 100 ul de Conjugado a cada pocillo conjugado 6 Incubaci n del conjugado Incubar las placas selladas con una hoja de pl stico o en una c mara h meda durante 30 2 min minutos a 18 26 C T Repetir la etapa 4 8 Distribuci n del substrato A adir 100 ul de Substrato TMB n 12 a cada pocillo 9 Incubaci n del substrato Incubar 10 minutos 1 min a 18 26 C y lejos de la luz directa Comenzar a cronometrar una vez llenado el primer pocillo 10 Frenado de la reacci n Parar la reacci n al cabo de 10 minutos a adiendo 100 ul de Soluci n de Frenado n 3 a cada pocillo A adir la Soluci n de Frenado n 3 en el mismo orden que se a adi el Substrato TMB n 12 en el paso 8 11 Medici n de la placa Medir la absorbancia de las muestras y controles a 450 nm o emplean
7. ml 5 Diluente de Amostra 15 ml 45 ml A Substrato TMB No 12 20 ml 60 ml B Solugao de Interrupgao No 3 20 ml 60 ml C Concentrado de Lavagem 10X 125 ml 480 ml NOTA veja a tabela na pagina 32 para descri o dos s mbolos internacionais usados nos r tulos dos kits Materiais Necessarios mas Nao Fornecidos e Pipetas de precis o ou pipetas multicanais capazes de pipetar de 10 a 1000 ul De acordo com o Protocolo do Teste os volumes exigidos para os reagentes requerem pipeta com precis o inferior ou igual a 596 Ponteiras de pipeta descart veis e Cilindro de 500 ml para diluir a solu o de lavagem Leitora de ELISA para placa de 96 cavidade equipada com filtro de 450 nm ou em duplo comprimento de onda de 450 nm e 650 nm gua Milli Q ou bi destilada e Dispositivo para distribui o e aspira o da solu o de lavagem Um dispositivo para reten o do aspirado e desinfec o C mera mida e coberturas de placa ou seladora de placas e Misturador Vortex e Centr fuga com tubos capacidade para 2000 x g 14 IDEXX CSFV Ab Precau es e Advert ncias aos Usu rios e Manipule todos os materiais biol gicos como potencialmente infectantes N o pipete com a boca N o coma beba ou fume nos locais onde est o sendo manuseadas as amostras ou reagentes do kit A solu o de substrato TMB irritante aos olhos sistema respirat rio e pele Evite contato com a pele e olhos e N o expor solu o TMB lu
8. 0X temp rature ambiante et bien homog n iser pour assurer la dissolution compl te d ventuels cristaux La Solution de lavage concentr e 10X est diluer au 1 10 dans de l eau ultrapure Milli Q ou bidistill e Exemple Pour 300 ml de Solution de lavage distribuer 30 ml de Solution de lavage concentr e 10X 270 ml d eau ultrapure Milli Q ou bidistill e et bien homog n iser La Solution de lavage reconstitu e issue d une traitement sterile est stable pendant une semaine 2 8 C IDEXX CSFV Ab 9 Pr paration des chantillons Des chantillons de s rum ou de plasma frais r frig r s 8 jours maximum 2 8 C ou pr alablement congel s peuvent tre utilis s Mode Op ratoire ATTENTION Seul le protocole avec incubation longue 18 24 heures est agr en France Porter tous les r actifs 18 26 C avant utilisation et bien homog n iser par agitation douce ou au vortex Utiliser un embout de pipette diff rent pour chaque chantillon 1 a P D 10 11 12 Distribuer 50 ul de Diluant des chantillons dans les puits appropri s de la microplaque sensibilis e 50 ul de Contr le positif et 50 ul de Contr le n gatif dans les puits appropri s 50 ul de s rum ou de plasma dans les puits disponibles adjacents Homog n iser le contenu de la microplaque par agitation Incuber pendant 2 heures 5 min 18 26 C ou bien pendant une nuit 18 24 heures 18 26 C Quelle que
9. 0X should be brought to 18 26 C and mixed to ensure dissolution of any precipitated salts The Wash Concentrate 10X must be diluted 1 10 in ultrapure water Milli Q or double distilled When prepared under sterile conditions the reconstituted Wash Solution can be stored for one week at 2 8 C Example For 300 ml Wash Solution dilute 30 ml Wash Concentrate 10X with 270 ml ultrapure water Milli Q or double distilled and mix well Preparation of Samples Fresh refrigerated maximum of 8 days at 2 8 C or frozen serum or plasma can be tested IDEXX CSFV Ab 3 Test Procedure All reagents must be allowed to come to 18 26 C before use Reagents should be mixed by gentle swirling or vortexing Use a separate pipette tip for each sample 1 2 10 11 12 Add 50 ul of the Sample Diluent to all wells to be tested and to the control wells Add 50ul of the Positive Control and Negative Control to the appropriate wells Use a separate pipette tip for different control sera Add 50 pl of the serum or plasma sample to the remainder of the plate Use a separate pipette tip for each sample Mix the contents of the microwells by gently tapping the plate or use a shaker for microtiter plates Incubate for 2 hours 5 min or overnight 12 18 hours at 18 26 C With either option the plates should be tightly sealed or incubated in a humid chamber using plate covers to avoid any evaporation Wash each well w
10. 2 A adir 50 ul de Control Positivo y negativo a los pocillos apropiados No emplear la misma punta de pipeta para los diferentes sueros control 3 A adir 50 ul de la muestra de suero o plasma en el resto de la placa No emplear las mismas puntas de pipeta para muestras diferentes 4 Mezclar los contenidos de los micropocillos moviendo suavemente la placa o mediante el empleo de un agitador de placas de microtitulaci n 5 Incubar las placas durante 2 horas 5 min o toda la noche 12 18 horas a 18 26 C En cualquier opci n de incubaci n las placas deben sellarse firmemente para evitar evaporaciones o incubarse con cubiertas en una c mara h meda 6 Lave cada pocillo con aproximadamente 300 ul de Soluci n de Lavado tres veces Aspire los contenidos l quidos de todos los pocillos despu s de cada lavado Despu s de la aspiraci n final elimine el fluido de lavado residual de cada placa golpe ndola sobre material absorbente Evite que las placas se sequen entre los lavados y antes de a adir el reactivo siguiente 7 A adir 100 ul de Conjugado a cada pocillo Incubar las placas selladas con una hoja de pl stico 0 en una c mara h meda tapada con cubiertas para placas durante 30 minutos a 18 26 C 8 Lavarlos pocillos ver paso 6 9 A adir 100 ul de Substrato TMB n 12 a cada pocillo e incubar 10 minutos 1 min a 18 26 C lejos de la luz directa Comenzar a cronometrar una vez llenado el primer pocillo 10 Parar la
11. Classical Swine Fever Virus CSFV Antibody Test Kit Kit de d tection des anticorps du Virus de la Peste Porcine Classique CSFV Kit para Detecc o de Anticorpos contra o Virus da Peste Suina Classica VPSC USO VETERINARIO Kit para la deteccion de Anticuerpos frente al Virus de la Peste Porcina Clasica CSFV Testkit zum Nachweis von Antik rpern gegen das Virus der klassischen Schweinepest CSFV Die deutsche Fassung der Gebrauchsinformation ist entsprechend 17c TierSG zugelassen Test With Confidence IDEXX CSFV Ab TA 06 43230 06 E Eum VAN English version Classical Swine Fever Virus CSFV Antibody Test Kit For veterinary use only Name and Intended Use IDEXX CSFV Ab is IDEXX s enzyme immunoassay for the detection of CSFV specific antibodies in swine serum or plasma General Information Classical Swine Fever Virus CSFV Bovine Viral Diarrhoea Virus BVDV and Border Disease Virus BDV are the 3 members of the genus Pestivirus within the family Flaviviridae CSFV causes serious losses in the pig industry since it is highly pathogenic and can cause widespread deaths Pigs infected with highly virulent CSFV strains may shed a high amount of virus before showing clinical signs of the disease Animals that survive an acute or sub acute infection develop antibodies and will no longer spread the virus Moderately virulent less pathogenic strains may lead to chronic infection when pigs excrete the virus continuo
12. Distribui o do substrato Adicione 100 ul de Substrato TMB No 12 em cada cavidade 9 Incubac o do substrato Incube 10 minutos 1 min 18 26 C e no escuro Comece a contar o tempo ap s o preenchimento da primeira cavidade 10 Parando a rea o Pare a rea o aos 10 minutos adicionando 100 ul de Solu o de Interrup o No 3 em cada cavidade Adicione a Solu o de Interrup o na mesma ordem em que foi adicionada a Solu o de Substrato no passo 8 11 Leitura da placa Me a a absorb ncia das amostras e controles com aux lio de uma leitora de placas em comprimento de onda de 450 nm ou usando um duplo comprimento de onda de 450 nm e 650 nm Zerar a leitora com ar Calcule a m dia corrigida dos valores de absorb ncia veja C lculos para cada amostra e para os controles 12 Interpretac o lt 30 Negativo gt 30 a lt 40 Suspeito 24096 Positivo Amostras de soro plasma 18 IDEXX CSFV Ab Licenciado no Minist rio da Agricultura Pecuaria e Abastecimento sob n 6 825 em 23 03 99 PRODUTO IMPORTADO USO VETERINARIO Representante exclusivo no Brasil Importador e Distribuidor ABASE COM RCIO E REPRESENTAC ES LTDA Av Em lio Marconato 1000 Galp o B3 Jaguari na SP CEP 13820 000 Fone Fax 19 3847 9900 CNPJ 63 982 896 0001 71 Respons vel t cnico Edison Hideyo Baba CRMV SP 2967 Propriet rio Para assist ncia t cnica IDEXX Laborato
13. a hora antes do uso Adicione 50 ul de Diluente de Amostra em em cada cavidade que ser testada e nas cavidades dos controles Porcentagem de Bloqueio 2 Distribui o da Amostra Adicione 50 ul de Controle Positivo e Controle Negativo nas cavidades apropriadas Use uma ponteira separada para cada controle Adicione 50 ul de amostra de soro ou plasma nas cavidades restantes Use uma ponteira separada para cada amostra Bata levemente na lateral da placa para misturar o conte do das cavidades 3 Incubac o da Amostra Incube a placa por 2 horas 5 min ou alternativamente por uma noite 18 26 C Em qualquer opc o de incubac o as placas devem ser seladas firmemente ou incubadas com coberturas de placa numa c mara mida para evitar evaporac o 4 Lavagem da Placa Aspire o conte do l quido de todas as cavidades num reservat rio apropriado Lave cada cavidade com aproximadamente 300 ul de Solu o de Lavagem por 3 vezes Aspire o conte do l quido de todas as cavidades ap s cada lavagem Evite que a placa seque entre as lavagens e antes de adicionar o conjugado Ap s a aspira o final elimine o fluido de lavagem residual de cada placa batendo a firmemente em material absorvente 5 Distribui o do conjugado Adicione 100 ul de Conjugado em cada cavidade 6 Incubac o do Conjugado Incube por 30 minutos 2 min 18 26 C selado ou em c mara mida T Repita o etapa 4 8
14. ae CSFV verursacht in der Schweineproduktion erhebliche Verluste da es hochgradig pathogen ist und zu hohen Todesziffern f hren kann Mit hochvirulenten St mmen infizierte Schweine k nnen bereits vor der Entwicklung klinischer Anzeichen der Erkrankung groBe Virusmengen ausscheiden Tiere die eine akute oder subakute Infektion berleben bilden Antik rper und sind dann keine Ausscheider mehr Weniger pathogene St mme verursachen chronische Infektionen hiervon betroffene Tiere scheiden das Virus lebenslang kontinuierlich oder intermittierend aus Infizierte Muttertiere k nnen die Erkrankung durch die Plazenta auf die F ten bertragen Eine kongenitale Infektion kann zu Aborten mumifizierten F ten schwachen oder totgeborenen W rfen oder MiBbildungen der Embryonen f hren Die h ufigste Folge kongenitaler Infektionen ist die Geburt persistierend infizierter Ferkel die aufgrund einer fehlenden Immunreaktion das Virus ohne klinische Anzeichen einer Erkrankung ausscheiden Die Tiere k nnen zus tzlich eine BVDV oder BDV Infektion aufweisen Diese Erkrankungen verlaufen bei Schweinen blicherweise ohne klinische Erscheinungen Dennoch ist es wichtig diese Virusinfektionen zuverl ssig von der Schweinepest zu unterscheiden Infektionen mit dem Virus des Klassischen Schweinepest CSFV sowie SFV Impftiter k nnen durch Tests auf CSFV Antik rper nachgewiesen werden 26 IDEXX CSFV Ab Beschreibung des Testprinzips Der IDEXX CSFV Ab dient d
15. as exposer la solution de substrat TMB a la lumi re directe du soleil ou aux agents oxydants Veiller a la propret de la verrerie et ou du mat riel de laboratoire en mati re plastique utilis s lors de sa manipulation Stocker tous les r actifs au r frig rateur 2 8 C Porter 18 26 C avant utilisation et remettre au r frig rateur 2 8 C apr s utilisation D contaminer l ensemble du mat riel intervenant dans la manipulation avant limination Eliminer l ensemble du mat riel selon les r glementations locales r gionales et nationales en vigueur Eviter la contamination des composants du kit Ne pas utiliser de kit au del de la date d expiration et viter de m langer des composants issus de lots de r actifs diff rents La qualit des r sultats d pend du respect des instructions tablies par le fournisseur ainsi que des bonnes pratiques de laboratoire Les contr les positif et n gatif doivent tre inclus dans chaque plaque Utiliser de l eau distill e ou d sionis e pour la pr paration des r actifs Les barrettes non utilis es doivent tre conserv es dans leur sachet plastique scell au r frig rateur 2 8 C R actifs r serv s l usage v t rinaire Pr paration des r actifs Les plaques sensibilis es les contr les positif et n gatif le conjugu la solution de substrat TMB et la solution d arr t sont pr ts l emploi Solution de lavage Porter la Solution de lavage concentr e 1
16. ch auf 18 26 C bringen und anschlieBend wieder bei 2 8 C aufbewahren e Das Testmaterial ist nach Abschluss des Testes als infekti s zu betrachten und darf nur inaktiviert entsorgt werden Die Entsorgung infekti ser Materialen sollte nach den lokalen regionalen und nationalen Bestimmungen erfolgen e Eine Kontamination der Kitbestandteile mit Bakterien oder Pilzen muss sorgf ltig vermieden werden Daher bei der Handhabung der Reagenzien mit gr ter Sauberkeit vorgehen e Testbestandteile nicht nach Ablauf des Verfalldatums verwenden und Testbestandteile und Testanweisungen nicht mit Bestandteilen aus anderen Chargen mischen e Optimale Ergebnisse erreicht man nur bei strenger Einhaltung der Testanweisung Pr zision und Genauigkeit werden durch sorgf ltiges Pipettieren und Waschen erzielt e Bei jeder Testserie die beiden Kontrollseren mitf hren e Zur Vorbereitung der Reagenzien nur destilliertes oder demineralisiertes Wasser verwenden Alle Anweisungen dieser Gebrauchsinformation sorgfaltig lesen und befolgen Nicht verwendete Teststreifen bei 2 8 C im verschlossenen Plastikbeutel lagern e Nur zum tier rztlichen Gebrauch 28 IDEXX CSFV Ab Vorbereitung der Reagenzien Die Mikrotiterstreifen die positive und negative Kontrolle das Konjugat die Substratl sung und die Stoppl sung sind gebrauchsfertig Waschl sung Das Waschkonzentrat 10X auf Raumtemperatur bringen und eventuell ausgef llte Salzkristalle durch Sch
17. conte do l quido de todas as cavidades ap s cada lavagem Evite que a placa seque entre os lavados e antes de adicionar o conjugado Ap s a aspirac o final elimine o fluido de lavagem residual de cada placa batendo a firmemente em material absorvente 7 Adicione 100 ul de Conjugado em cada cavidade Incube por 30 minutos 2 min 18 26 C ou em c mara mida com a placa coberta firmemente 8 Lave as placas veja passo 6 9 Adicione 100 pl de Substrato TMB No 12 em cada cavidade e incube 10 minutos 1 min a 18 26 C e no escuro Comece a contar o tempo ap s o preenchimento da primeira cavidade 10 Pare a reac o aos 10 minutos adicionando 100 pl de Soluc o de Interrup o No 3 em cada cavidade Adicione a Soluc o de Interrup o No 3 na mesma ordem em que foi adicionada a Soluc o de Substrato TMB No 12 no passo 9 11 Meca a absorb ncia das amostras e controles com aux lio de uma leitora de placas em comprimento de onda de 450 nm ou usando um duplo comprimento de onda de 450 nm e 650 nm Zerar a leitora com ar 12 Calcule a m dia dos valores de absorbancia veja C lculos para cada amostra e para os controles Resultados A Media do Controle Negativo OD450 deve ser maior do que 0 500 A porcentagem de bloqueio do Controle Positivo deve ser maior do que 5096 Para testes inv lidos deve se suspeitar da t cnica e o teste deve ser repetido ap s a revis o cuidadosa da bula do produto Nota IDEXX Laborato
18. dans l industrie porcine car il est hautement pathog ne et peut entra ner la mortalit Les porcs infect s par des souches hautement virulentes de virus CSFV peuvent excr ter de grandes quantit s de virus avant de pr senter des signes cliniques de l infection Les animaux qui survivent une infection aigu ou subaigu d veloppent des anticorps et n excr tent plus de virus Les souches mod r ment virulentes et moins pathog nes peuvent entrainer des infections chroniques et les animaux excr tent alors le virus de mani re continue ou intermittente jusqu leur mort Les fostus de truies sensibles peuvent s infecter in utero lors d exposition de la m re au virus de la CSFV L infection cong nitale peut entrainer des avortements des momifications foetales des mort n s et ou des porcelets faibles et des malformations fostales La cons quence la plus fr quemment observ e d une infection in utero par des souches faiblement virulentes est la naissance de porcelets infect s permanents qui excr tent le virus sans pr senter de sympt mes de l infection et ce en l absence de r ponse immunitaire Les porcs peuvent galement tre infect s par les virus BVDV ou BDV Bien que ces infections soient g n ralement b nignes chez le porc et qu elles s autolimitent il est important de les distinguer d une infection par le virus de la PPC CSFV Description et principe Le test IDEXX CSFV Ab est destin d tecter les anticorps sp cifiqu
19. de onda a 450 nm y 650 nm e Vortex Tubos para centr fuga o microtubos IDEXX CSFV Ab 21 Precauciones y advertencias para los usuarios Maneje todo el material biol gico como material potencialmente infectado No use la boca para pipetear No coma beba ni fume en los lugares donde se est trabajando con las muestras o los reactivos del kit e La soluci n substrato TMB irrita los ojos las v as respiratorias y la piel Evite el contacto con la piel y los ojos e Lleve guantes prendas gafas m scara de protecci n No exponga la soluci n TMB a una luz intensa ni a agentes oxidantes Maneje dicha soluci n con material limpio de pl stico o vidrio e Almacene todos los reactivos 2 8 C Deje que adquieran 18 26 C antes de utilizarlos y refrig relos de nuevo a entre 2 8 C despu s del uso e Todo el material usado deber descontaminarse adecuadamente antes de su eliminaci n Eliminar el contenido en conformidad con las regulaciones locales regionales y nacionales Manipule con cuidado los componentes del kit para evitar contaminaciones No use componentes que hayan caducado y no mezcle componentes de diferentes lotes e Obtendr resultados ptimos si sigue escrupulosamente este protocolo Para mantener la precisi n y reproducibilidad es necesario un pipeteo correcto respetar los tiempos de incubaci n y un lavado adecuado Los dos controles deben usarse para cada serie de ensayos Utilice s lo agua
20. desionizada o destilada para la preparaci n de los reactivos que se empleen en el ensayo e Los pocillos que no se usen deber n almacenarse bien cerrados dentro de su bolsa de pl stico entre 2 8 C e S lo para uso veterinario Preparaci n de los reactivos Las microplacas tapizadas el diluyente de la muestra el control positivo el control negativo el conjugado la soluci n de substrato y la soluci n de frenado se suministran listas para su uso Soluci n de Lavado La Soluci n de Lavado Concentrada 10X debe dejarse que adquiera 18 26 C y agitarse para asegurar la disoluci n de posibles sales precipitadas El concentrado 10X debe ser diluido al 1 10 en agua ultrapura Milli Q o bidestilada Prepar ndose en condiciones est riles la Soluci n de Lavado puede almacenarse durante una semana entre 2 8 C Ejemplo Para 300 ml de Soluci n de Lavado diluir 30 ml de Soluci n de Lavado Concentrada 10X con 270 ml de agua ultrapura Milli Q o bidestilada y mezclar bien Preparaci n de las muestras Se puede utilizar con esta prueba suero o plasma fresco refrigerado no m s de 8 dias a 4 C o congelado 22 IDEXX CSFV Ab Protocolo del ensayo Todos los reactivos deben alcanzar 18 26 C antes de su uso Los reactivos deber n mezclarse invirti ndolos o agit ndolos en un v rtex suavemente 1 A adir 50 ul de Diluyente de la Muestra a todos los pocillos que se utilizar n en la prueba y a los pocillos control
21. do una longitud de onda dual de 450 nm y 650 nm en un lector de microplacas emplear aire como blanco Calcular la media de los valores de absorbancia ver C lculos para cada muestra desconocida analizada y para los Controles 12 Interpr taci n Muestras de suero lt 30 gt 30 a lt 40 24096 de Bloqueo plasma Negativo Dudoso Positivo Fabricado por IDEXX Switzerland AG Stationsstrasse 12 3097 Liebefeld Bern Switzerland Para asistencia t cnica N de registro 0336 RD contacte el representante local IDEXX 0 visite www idexx com production contact IDEXX US Technical Support 00 800 727 43399 DEXX y Test With Confidence son marcas o marcas registradas de IDEXX Laboratories Inc o sus filiales en los Estados Unidos de America y o en otros pa ses IDEXX CSFV Ab 25 Deutsche Version Testkit zum Nachweis von Antik rpern gegen das Virus der klassischen Schweinepest CSFV Gebrauchsinformation In vitro Diagnostikum Nur zum tierarztlichen Gebrauch Name und Verwendungszweck IDEXX CSFV Ab ist ein Markenzeichen von IDEXX f r einen Enzymimmunoassay zum Nachweis von CSFV spezifischen Antik rpern in Serum und Plasmaproben von Schweinen Allgemeine Informationen Das Virus der Klassischen Schweinepest Classical Swine Fever Virus CSFV geh rt wie das Virus der Bovinen Viralen Diarrhoe BVDV und das Virus der Border Disease BDV zum Genus der Pestiviren aus der Familie der Flavivirid
22. eden producir una infecci n cr nica y en este caso los cerdos excretan el virus continua o intermitentemente hasta su muerte Los fetos de las cerdas pre adas susceptibles cuando se exponen al CSFV pueden infectarse dentro de la placenta La infecci n cong nita puede producir aborto momificaci n fetal nacimientos prematuros y o el nacimiento de lechones d biles 0 malformaciones embrionarias El resultado m s frecuente de la infecci n cong nita con cepas de virulencia baja es el nacimiento de lechones persistentemente infectados que extienden el virus sin mostrar signos de la enfermedad y en ausencia de una respuesta inmunitaria Los cerdos se pueden tambi n infectar con BVDV o BDV Aunque estas infecciones en los cerdos son usualmente leves y autolimitantes es importante distinguirlas de una forma fiable de la infecci n por CSFV Descripci n y principios IDEXX CSFV Ab se ha dise ado para detectar en suero o plasma anticuerpos espec ficos frente a CSFV El ensayo es un ELISA de bloqueo que utiliza placas de microtitulaci n tapizadas con ant geno CSFV Los anticuerpos presentes en la muestra bloquean la uni n de la peroxidasa conjugada a los anticuerpos monoclonales espec ficos de CSFV El resultado se indica por el desarrollo de color La densidad ptica se mide con un lector de microplacas a una nica longitud de onda de 450 nm o a una longitud de onda dual de 450 nm y 650 nm EI desarrollo de color es d bil resultado positiv
23. em Nachweis von CSFV spezifischen Antik rpern in Serum und Plasmaproben von Schweinen Bei dem Test handelt es sich um einen kompetitiven ELISA unter Verwendung von Mikrotiterplatten deren Vertiefungen mit CSFV Antigen beschichtet wurden Die Probe wird in die beschichtete Vertiefung eingebracht wo die Antik rper in der Probe mit den CSFV spezifischen monoklonalen Antik rpern um die Antigen Bindestellen konkurrieren Ungebundenes Material wird durch einen Waschschritt ausgesp lt Die gebundenen monoklonalen Antik rper werden durch ein Meerrettichperoxidase Konjugat und ein mit dem Konjugat reagierendes Substrat nachgewiesen Das Ergebnis wird durch eine Farbreaktion angezeigt Die Farbintensit t wird mit einem Photometer bei einer einfachen Wellenl nge von 450 nm oder einer dualen Wellenl nge von 450 nm und 650 nm gemessen Enth lt die Probe CSFV spezifische Antik rper so tritt eine schwache Farbreaktion ein positives Ergebnis Liegen in der Probe keine spezifischen Antik rper vor so findet eine sehr starke Farbreaktion statt negatives Ergebnis Die prozentuale Hemmung durch die Probe wird auf der Grundlage der Optischen Dichte der Probe OD 450 und des negativen Kontrollserums errechnet Reagenzien Alle Reagenzien bei 2 8 C lagern Reagenzien Menge Menge 1 Mit CSFV Antigen beschichtete Testplatten inaktiviert 2 5 2 Positive Kontrolle ml ml 3 Negative Kontrolle 1ml iml 4 CSFV Antik rper Konjugat 25 ml 60 ml 5 Probenverd
24. es du CSFV partir du s rum ou du plasma Il s agit d un ELISA par comp tition qui utilise des plaques de microtitration sensibilis es avec l antig ne du virus CSFV Les anticorps pr sents dans l chantillon tester vont entrer en comp tition avec les anticorps monoclonaux mAb sp cifiques du CSFV conjugu s la p roxydase pour se lier l antig ne Le mat riel non li est limin par lavage La pr sence des anticorps monoclonaux est d tect e par une solution substrat TMB Le r sultat du test d pend de l intensit de la coloration obtenue La coloration est mesur e a l aide d un spectrophotom tre en monochromatisme 450 nm ou en bichromatisme 450 650 nm La coloration est peu intense r sultat positif quand des anticorps sp cifiques du CSFV sont pr sents dans l chantillon La coloration est maximale r sultat n gatif en l absence d anticorps sp cifiques dans l chantillon Le pourcentage de comp tition de chaque chantillon est fonction de la valeur de densit optique de l chantillon test et la densit optique du contr le n gatif IDEXX CSFV Ab 7 R actifs Stocker tous les r actifs 2 8 C R actifs Volume Volume 1 Plaques sensibilis es des antig nes CSFV 2 5 2 Contr le positif 1ml im 3 Contr le negatif 1ml iml 4 Conjugu anti CSFV HRPO 25 ml 60 ml 5 Diluant des chantillons 15 ml 45 ml A Substrat TMB N 12 20 ml 60 ml B Solution d arr t N 3 20 ml 60 ml C Solution de lava
25. estra es negativa no contiene anticuerpos si da un porcentaje de bloqueo menor o igual al 3096 e Siel porcentaje de bloqueo de la muestra est entre el 30 y el 40 volver a analizar al animal en una fecha posterior Si el resultado vuelve a ser dudoso se puede verificar el resultado con un test de neutralizaci n del suero Por favor consultar la reglamentaci n legal de cada pa s o Modificaci n en el manual de instrucciones 24 IDEXX CSFV Ab Resumen del protocolo del test Se recomienda antes de la realizaci n del test por primera vez realizar una lectura completa del manual de instrucciones Paso Acci n 1 Distribuci n del Diluyente Todos los reactivos deben alcanzar 18 26 C antes de su uso Para ello se les dejar en de la Muestra reposo en el lugar donde se trabajar durante al menos una hora antes de ser utilizados A adir 50 ul de Diluyente de la Muestra a todos los pocillos que se utilizar n en la prueba y a los pocillos control 2 Distribuci n de las A adir 50 ul de Control Positivo y Control Negativo a los pocillos apropiados Emplear una muestras punta de pipeta para cada control A adir 50 ul de la muestra de suero o plasma en el resto de la placa Emplear una punta de pipeta para cada muestra Mezclar los contenidos de los micropocillos moviendo suavemente la placa o mediante el empleo de un agitador para placas de microtitulaci n 3 Incubaci n de las
26. g waschen Den fl ssigen Inhalt aus jeder Vertiefung nach jedem Waschen entfernen Nach dem letzten Waschschritt vorsichtig aber fest die Reste der Waschl sung aus den Vertiefungen auf ein St ck Saugpapier klopfen Ein Austrocknen der Vertiefungen zwischen den einzelnen Waschschritten und vor Zugabe der n chsten Reagenzien ist zu vermeiden 7 In jede Vertiefung 100 ul Konjugat einbringen und 30 Minuten 2 Min sorgf ltig abgedeckt oder abgedeckt in einer feuchten Kammer bei 18 26 C inkubieren 8 Platten bzw Streifen waschen siehe Schritt 6 9 In jede Vertiefung 100 ul TMB Substrat Nr 12 geben und 10 Minuten 1 Min bei 18 26 C nicht in direktem Tageslicht inkubieren Mit der Zeitmessung nach dem F llen der ersten Vertiefung beginnen 10 Nach 10 Minuten in jede Vertiefung 100 ul Stoppl sung Nr 3 einbringen um die Reaktion zu beenden Die Stoppl sung ist in der gleichen Reihenfolge zuzugeben wie die Substratl sung siehe Schritt 9 11 Die Extinktionswerte der Proben und Kontrollen mit dem Photometer bei 450 nm oder f r duale Wellenl nge bei 450 nm und 650 nm messen Vorher einen Nullabgleich des Instruments gegen Luft vornehmen 12 Die korrigierte mittlere Extinktion f r die Proben und Kontrollen ermitteln siehe Abschnitt Berechnungen IDEXX CSFV Ab 29 Ergebnisse Der Test ist g ltig wenn der OD450 Wert der negativen Kontrolle gr er als 0 500 ist Weiterhin muss die Hemmung durch die positive Kontrol
27. ge concentr e 10X 125 ml 480 ml REMARQUE voir le tableau page 32 pour la description des symboles internationaux utilis s sur les tiquettes du kit Mat riel n cessaire mais non fourni e Pipettes de pr cision ou pipettes multicanaux capables de distribuer des volumes de 10 ul 1000 pl La pr cision requise pour la mesure des volumes indiqu s au Mode Op ratoire doit tre inf rieure ou gale 596 C nes de pipettes usage unique Eprouvette gradu e de 500 ml pour la pr paration de la solution de lavage Lecteur de microplaques quip d un filtre 450 nm ou 450 650 nm Eau Milli Q ou bidistill e Syst me de lavage manuel semi automatique ou automatique Systeme pour la collecte des solutions biologiques souill es Chambre humide et couvre plaques ou films plastique adh sifs pour microplaques e Centrifugeuse 2000 x g et microtubes ou tubes centrifuger e Vortex 8 IDEXX CSFV Ab Mises en garde et pr cautions d emploi Manipuler tous les r actifs et les chantillons comme une source potentielle de contamination Ne pas pipeter a la bouche Ne pas manger boire ou fumer dans la zone de manipulation des chantillons et des r actifs La solution de substrat est irritante pour les yeux le syst me respiratoire et la peau Eviter tout contact avec les yeux et la peau Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage Ne p
28. h leichtes Sch tteln mischen 50 ul Probenverd nner in jede ben tigte Vertiefung geben 2 Probenverteilung In die entsprechenden Vertiefungen 50 ul positive Kontrolle bzw 50 ul negative Kontrolle geben F r verschiedene Kontrollseren jeweils separate Pipettenspitzen verwenden In die verbleibenden Vertiefungen je 50 ul der Serum oder Plasmaproben einbringen F r jede Probe eine neue Pipettenspitze verwenden Den Inhalt durch vorsichtiges Klopfen an die Mikrotiterplatte mischen oder einen Sch ttler f r Mikrotiterplatten verwenden 3 Probeninkubation Die Mikrotiterplatten sorgfaltig abgedeckt oder abgedeckt in einer feuchten Kammer 2 Stunden 5 Min oder ber Nacht 12 18 Stunden bei 18 26 C inkubieren 4 Waschen der Platte Den fl ssigen Inhalt aus jeder Vertiefung entfernen Jede Vertiefung dreimal mit etwa 300 ul Waschl sung waschen Den fl ssigen nhalt aus jeder Vertiefung nach jedem Waschen entfernen Nach dem letzten Waschschritt vorsichtig aber fest die Reste der Waschl sung aus den Vertiefungen auf ein St ck Saugpapier klopfen 5 Konjugatverteilung n jede Vertiefung 100 ul Konjugat einbringen 6 Konjugatinkubation 30 Minuten 2 2 Min sorgf ltig abgedeckt oder abgedeckt in einer feuchten Kammer bei 18 26 C inkubieren T Schritt 4 wiederholen 8 Substratverteilung n jede Vertiefung 100 ul TMB Substrat Nr 12 geben 9 Substratinkubation 10 Minuten 1 Min bei 18 26 C nich
29. haque puits avec environ 300 ul de Solution de lavage Aspirer la Solution de avage contenue dans la plaque entre chaque lavage Apr s la derni re aspiration cons cutive au dernier lavage liminer l eau r siduelle contenue dans les puits par retournement et apotement de la plaque sur du papier absorbant 5 Distribution du Distribuer 100 ul de Conjugu dans chaque puits conjugu 6 Incubation du conjugu Incuber la plaque 18 26 C pendant 30 minutes 2 min en chambre humide avec couple plaque ou recouverte d un film adh sif T R p ter l tape 4 8 Distribution du substrat Distribuer 100 ul de Substrat TMB N 12 dans chaque puits 9 Incubation du substrat ncuber 10 minutes 1 min 18 26 C l abri de la lumi re Commencer d compter le emps d s le remplissage du premier puits 10 Arr t de la r action Distribuer 100 ul de Solution d arr t N 3 dans chaque puits Ajouter la solution d arr t dans e m me ordre que celui de la solution substrat TMB Faire le blanc du spectrophotom tre sur l air 11 Lecture de la plaque Lire les densit s optiques des chantillons et des contr les en monochromatisme 450 nm ou en bichromatisme 450 650 nm Calculer la valeur moyenne de densit optique 12 Interpretation 96 inhibition S rum ou Plasma 3096 gt 30 lt 40 gt 40 N gatif Douteux Positif Fabricant Pour plus d information DEXX Switzerland AG Contactez votre repr sentant local IDEXX
30. in the same order as the substrate solution was added in step 8 11 Measure the plate easure the absorbance of the samples and controls at 450 nm or using a dual wavelength of 450 nm and 650 nm on a microplate reader use air as blank Calculate the results 12 Interpretation Serum Plasma lt 30 gt 30 to lt 40 gt 40 Negative Suspect Positive Manufactured by DEXX Switzerland AG Stationsstrasse 12 3097 Liebefeld Bern Switzerland For technical assistance Contact your IDEXX area manager or distributor or visit www idexx com production contact IDEXX Technical Support 00 800 727 43399 DEXX and Test With Confidence are trademarks or registered trademarks of IDEXX Laboratories Inc or its affiliates in the United States and or other countries 6 IDEXX CSFV Ab Version Frangaise Kit de d tection des anticorps du Virus de la Peste Porcine Classique CSFV R serv l usage v t rinaire D finition et application IDEXX CSFV Ab est un test immunoenzymatique pour la d tection des anticorps sp cifiques du Virus de la Peste Porcine Classique CSFV partir de s rum ou de plasma porcin Informations G n rales Le virus de la Peste Porcine Classique CSFV le virus de la Maladie des Muqueuses BVDV et le virus de la Pestivirose BDV appartiennent au genre Pestivirus famille des Flaviviridae Le virus de la CSFV est responsable de pertes importantes
31. ipciones de los s mbolos Descrig es do s mbolos LOT Batch Code Lot Num ro de lot Chargenbezeichnung Ch B Codice del lotto partita C digo de lote Lote N mero de Partida Lote Serial Number Num ro de s rie Seriennummer Numero di serie N mero de serie N mero de s rie REF Catalog Number Num ro de catalogue Katalognummer Numero di catalogo N mero de cat logo N mero de cat logo CONTROL ES CONTROL Use by date utiliser avant la date Verwendbar bis Usare entro Usar antes de Data de Vencimento Control positive Contr le positif Positive Kontrolle Controllo Positivo Control Positivo Controle Positivo Control negative Contr le n gatif Negative Kontrolle Controllo Negativo Control Negativo Controle Negativo Date of manufacture Date de fabrication Herstellungsdatum Data di produzione Fecha de fabricaci n Data de Fabrica o ECIREP Manufacturer Fabricant Hersteller Ditta produttrice Fabricante Fabricante Authorized Representative in the European Community Repr sentant agr pour la Communaut europ enne Autorisierte EG Vertretung Rappresentante autorizzato nella Comunita Europea Representante autorizado na Comunidade Europ ia Representante autorizado en 32 IDEXX CSFV Ab In vitro diagnostic Diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Diagnostico in vitro Diagn
32. ith approximately 300 ul of Wash Solution three times Aspirate liquid contents of all wells after each wash Following the final aspiration firmly tap residual wash fluid from each plate onto absorbent material Avoid plate drying between washes and prior to the addition of the next reagent Add 100 pl of conjugate to each well Incubate 30 minutes 2 min at 18 26 C sealed or in a humid chamber using plate covers Repeat Step 6 Add 100 ul of TMB Substrate N 12 to each well and incubate 10 minutes 1 min at 18 26 C away from direct light Begin timing after the first well is filled Stop the reaction at 10 minutes by adding 100 ul of Stop Solution N 3 to each well Add the stop solution in the same order as the substrate solution was added in step 9 Measure the absorbance of the samples and controls at 450 nm or using a dual wavelength of 450 nm and 650 nm on a microplate reader use air as blank Calculate the mean absorbance values see Calculations for each test sample and for the controls Results For the assay to be valid the Negative Control mean OD450 should be greater than 0 500 The blocking percentage of the Positive Control should be greater than 5096 For invalid assays technique may be suspect and the assay should be repeated following a thorough review of the package insert NOTE IDEXX has instrument and software systems available which calculate means and blocking and provide data summaries
33. l to the appropriate wells Use a separate pipette tip for different control sera Add 50 ul of the serum or plasma sample to the remainder of the plate Use a separate pipette tip for each sample Mix the contents of the microwells by gently tapping the plate or use a shaker for Microtiter plates 3 Sample incubation Incubate for 2 hours 5 min or overnight 12 18 hours at 18 26 C With either option the plates should be tightly sealed or incubated in a humid chamber using plate covers to avoid any evaporation 4 Washing the plate Aspirate liquid contents of all wells into an appropriate waste reservoir Wash each well with approximately 300 ul of Wash Solution three times Aspirate liquid contents of all wells after each wash Following the final aspiration firmly tap residual wash fluid from each plate onto absorbent material 5 Conjugate Distribution Add 100 ul of Conjugate to each well 6 Conjugate Incubation Incubate 30 2 min minutes at 18 26 C sealed or in a humid chamber using plate covers 7 Repeat step 4 8 Substrate distribution Add 100 ul of TMB Substrate N 12 into each we 9 Substrate incubation Incubate 10 minutes 1 min at 18 26 C away from direct light Begin timing after the first well is filled 10 Stopping the reaction Stop the reaction at 10 minutes by adding 100 ul of Stop Solution N 3 to each well Add the stop solution
34. le ber 5096 betragen Hinweis IDEXX bietet auch Instrumente und Software zur Berechnung der Mittel und Hemmwerte an Berechnungen Berechnung des Mittelwertes der Berechnung des Mittelwertes der Berechnung der prozentualen negativen Kontrolle NKx positiven Kontrolle PKx Hemmung NKx NK1 Au NK2 Au PKx PK1 A450 PK2 A450 NKX Aen Probe Aus x 100 96 2 2 NKX Asso Beispiel Beispiel NK 1 280 1 300 1 290 PKx 0 120 0 140 0 130 Beispiel Probenwert 1 219 2 2 1 290 1 219 x 100 5 596 1 290 Interpretation der Ergebnisse Das Ergebnis gilt als positiv d h die Probe enth lt Antik rper wenn die Hemmung durch die Probe ber 40 liegt Das Ergebnis gilt als negativ d h in der Probe liegen keine Antik rper vor wenn die Hemmung durch die Probe unter 3096 liegt Wenn der Wert f r die Hemmung durch die Probe zwischen 30 und 40 betr gt sollte der Test f r dieses Tier wiederholt werden Liegt die Probe auch in der Wiederholungsuntersuchung im fraglichen Bereich sollte die Probe im Serumneutralisationstest untersucht werden o Wichtige Ver nderung der Gebrauchsinformation Protokoll Validationskriterien oder Auswertung 30 IDEXX CSFV Ab Kurzbeschreibung Es ist empfehlenswert vor dem ersten Gebrauch des Testkits die gesamte Anleitung durchzulesen Schritt Handlung 1 Probenverd nner Alle Reagenzien m ssen vor Gebrauch auf 18 26 C gebracht werden Die Reagenzien durc
35. nk or smoke where specimens or kit reagents are being handled e The substrate solution is irritating to the eyes respiratory system and skin Avoid contact with skin and eyes Wear protective gloves protective clothing eye protection face protection e Do not expose TMB solution to strong light or any oxidizing agents Handle TMB solution with clean glass or plasticware e Store all reagents at 2 8 C Bring the reagents to 18 26 C prior to use and return to 2 8 C following use All wastes should be properly decontaminated prior to disposal Dispose of contents in accordance with local regional and national regulations e Care should be taken to prevent the contamination of kit components Do not use components past their expiration dates and do not mix components from different serials Optimal results will be obtained by strict adherence to this protocol Careful pipetting timing and washing throughout this procedure are necessary to maintain precision and accuracy The two controls must be used for each test series e Use only distilled or deionized water for preparation of the reagents used in the test Unused microtiter wells should be stored sealed within the enclosed plastic bag at 2 8 C e For veterinary use only Preparation of Reagents Coated microtiter plates sample diluent positive control negative control conjugate substrate solution and stop solution are ready to use Wash Solution The Wash Concentrate 1
36. nner 15 ml 45 ml A TMB Substrat Nr 12 20 ml 60 ml B Stoppl sung Nr 3 20 ml 60 ml C Waschkonzentrat 10X 125 ml 480 ml Hinweis Die Tabelle auf Seite 32 mit den Beschreibungen der auf den Testkit Etiketten gebrauchten Symbole beachten IDEXX CSFV Ab 27 Notwendiges Material das nicht mitgeliefert wird Pr zisionspipetten 10 ul bis 1000 pl die erforderliche Messgenauigkeit muss f r samtliche angegebenen Mengen weniger oder gleich 5 betragen e Einweg Pipettenspitzen e Messzylinder 500 ml f r die Waschl sung e Photometer mit 450 nm oder duale Wellenl nge mit 450 und 650 nm Filtern f r Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen e Milli Q oder doppelt destilliertes Wasser e Ger t zur Abgabe und Aufnahme von Waschl sung e Ein Beh lter zur Aufnahme des abgesaugten Materials e Feuchte Kammer oder Plattenabdeckung e Vortex Mischer Zentrifugen oder Mikrozentrifugenr hrchen Vorsichtsma nahmen und Warnhinweise Das Testmaterial als potentiell infekti s behandeln e Nicht mit dem Mund pipettieren Wo mit Proben oder Reagenzien gearbeitet wird darf nicht gegessen getrunken oder geraucht werden Die Substratl sung ruft Augen Atemwegs und Hautreizungen hervor Einatmen Haut und Augenkontakt ist zu vermeiden e Schutzhandschuhe Schutzkleidung Augenschutz Gesichtsschutz tragen Die TMB Substratl sung nicht starkem Licht oder oxidierenden Substanzen aussetzen Die Reagenzien bei 2 8 C lagern vor Gebrau
37. o cuando hay presencia de anticuerpos espec ficos CSFV en la muestra El desarrollo de color es m ximo resultado negativo cuando hay ausencia de anticuerpos espec ficos El porcentaje de bloqueo de la muestra se calcula a partir de la densidad ptica 0D450 obtenida con la muestra y la OD450 del control negativo 20 IDEXX CSFV Ab Reactivos Conserve todos los reactivos a 2 8 C Reactivos Volumen Volumen 1 Placas tapizadas con Antigeno CSFV 2 5 2 Control Positivo iml 1ml 3 Control Negativo 1ml 1ml 4 Conjugado anti CSFV HRPO 25 ml 60 ml 5 Diluyente de la Muestra 15 ml 45 ml A Substrato TMB n 12 20 ml 60 ml B Soluci n de Frenado n 3 20 ml 60 ml C Soluci n de Lavado Concentrada 10X 125 ml 480 ml NOTA Ver tabla en la p gina 32 para las explicaciones de los s mbolos internacionales utilizados en las etiquetas del kit Materiales necesarios que no se suministran e Pipetas de precisi n monocanal o multicanal apropiadas para distribuir de 10 a 1000 ul Los vol menes de los reactivos descritos en el apartado Protocolo del ensayo requieren una pipeta con una precisi n inferior o igual al 596 Puntas de pipeta desechables e Recipiente graduado de 500 ml para la soluci n de lavado Agua bidestilada o agua de Milli Q e Sistema de recogida del aspirado y del desinfectante C mara h meda y cubiertas de pl stico o selladores de placas Lector de microplacas provisto de filtro de 450 nm o usando doble longitud
38. reacci n al cabo de 10 minutos a adiendo 100 ul de Soluci n de Frenado n 3 a cada pocillo A adir la Soluci n de Frenado n 3 en el mismo orden que se a adi el Substrato TMB n 12 en el paso 9 11 Medir la absorbancia de las muestras y controles a 450 nm o empleando una longitud de onda dual de 450 nm y 650 nm en un lector de microplacas emplear aire como blanco 12 Calcular la media de los valores de absorbancia ver C lculos para cada muestra desconocida analizada a la prueba y para los controles Resultados La media del valor OD450 del Control Negativo debe tener una densidad ptica superior a 0 500 EI Control Positivo debe presentar un porcentaje de bloqueo mayor del 50 NOTA IDEXX tiene a disposici n instrumentos y sistemas de software para el c lculo de valores medios y de bloqueo y la elaboraci n de res menes de datos IDEXX CSFV Ab 23 Calculos C lculo de la media del Control C lculo de la media del C lculo del resultado de las R muestras analizadas Negativo CNx Control Positivo CPX CNK CN Asso CN2 Aso CPx CP1 Asso CP2 Asso SE 2 2 CNX Auso Muestra Asso x 100 76 Ejemplo Ejemplo CNX Auso CNX 1 280 1 300 1 290 CPx 0 120 0 140 0 130 El resultado de la muestra 1 219 gt 1 290 1219 x 100 5 5 1 290 Interpretaci n de los resultados e La muestra es positiva contiene anticuerpos si da un porcentaje de bloqueo mayor o igual al 40 e La mu
39. ries Inc Contacte o representante local IDEXX One Idexx Drive Westbrook Maine ou visite www idexx com production contact 04092 EUA IDEXX Technical Support 00 800 727 43399 Fabricante IDEXX Switzerland AG Stationsstrasse 12 CH 3097 Liebefeld Bern Su ca DEXX e Test With Confidence s o marcas ou marcas registradas de IDEXX Laboratories Inc ou de suas filiais nos Estados Unidos e ou em outros pa ses IDEXX CSFV Ab 19 Versi n Espa ola Kit para la detecci n de Anticuerpos frente al Virus de la Peste Porcina Clasica CSFV Para uso veterinario exclusivo Nombre y uso propuesto IDEXX CSFV Ab es un ensayo inmunoenzim tico de IDEXX para la detecci n de anticuerpos espec ficos frente a CSFV en suero y plasma de porcino Informaci n general Los virus de la Peste Porcina Cl sica CSFV la Diarrea Virica Bovina BVDV y la Enfermedad de la Frntera Border Disease BDV son miembros del g nero Pestivirus dentro de la familia Flaviviridae El CSFV produce p rdidas importantes en la industria porcina debido a su elevada patogenicidad y a que puede producer mortalidad elevada Los cerdos infectados con cepas altamente virulentas pueden eliminar un gran n mero de virus antes de mostrar los primeros s ntomas cl nicos de la enfermedad Los animales que sobreviven a una infecci n aguda o subaguda desarrollan anticuerpos y no excretan el virus en lo sucesivo Las cepas moderadamente virulentas y menos patog nicas pu
40. ries Inc t m instrumentos e software disponiveis para o c lculo de raz es das m dias e raz es A P e elabora o de resumo de dados 16 IDEXX CSFV Ab Calculos M dia dos controle negativos CNx CNx CN1 Asso CN2 Ago 2 Exemplo CNx 1 280 1 300 1 290 2 M dia dos controles positivos CPx CPx CP1 Aen CP2 Aug 2 Exemplo CPx 0 120 0 140 0 130 2 Interpretagao de Resultados Calculo para amostras Percentagem de bloqueio CNX Asso Amostra Au x 100 96 CNX Auso Exemplo Amostra 1 290 1 290 1 219 x 100 5 5 1 290 e As amostras s o positivas anticorpos presentes se a porcentagem de bloqueio for maior ou igual a 40 e As amostras s o negativas anticorpos ausentes se a porcentagem de bloqueio for menor ou igual a 30 e Sea porcentagem de bloqueio de uma amostra estiver entre 30 40 reteste o animal Se a amostra continuar duvidosa ap s o reteste o resultado pode ser confirmado por Soro Neutraliza o Por favor notifique o servi o oficial de seu pa s o Modifica es nas instru es de uso IDEXX CSFV Ab 17 Resumo do procedimento do teste Recomenda se enfaticamente ler as instru es completas cuidadosamente antes de realizar o teste Etapa Ac o 1 Distribuig o do Diluente de Amostra Todos os reagentes devem atingir 18 26 C antes do uso Deixe os reagentes descansarem 18 26 C por no m nimo um
41. rmitir a dissoluc o de qualquer sal precipitado O Concentrado de Lavagem 10X dilu do 1 10 em gua ultrapura Milli Q ou bi destilada Exemplo Para 300 ml de Soluc o de Lavagem dilua 30 ml de concentrado 10x com 270 de agua ultrapura Milli Q ou bi destilada e misture bem Quando preparada em condic es est reis a soluc o de lavagem pode ser estocada por 1 semana a 2 8 C Preparo dos amostras Amostras de soro ou plasma frescos refrigerados m ximo 8 dias 2 8 C ou congelados podem ser testados IDEXX CSFV Ab 15 Protocolo do teste Os reagentes devem estar 18 26 C antes do uso ent o misturados atrav s de invers o e movimentos circulares suaves 1 Adicione 50 ul de Diluente de Amostra em cada cavidade que utilizada para as amostras teste e nas cavidades dos controles 2 Adicione 50 ul de Controle Positivo e Controle Negativo nas cavidades apropriadas Use uma ponteira para cada controle 3 Adicione 50 ul de amostra de soro ou plasma nas cavidades restantes Use uma ponteira para cada amostra 4 Bata levemente na lateral da placa para misturar o conte do das cavidades 5 Incube a placa por 2 horas 5 min ou alternativamente por uma noite 4 18 26 C Em qualquer opc o de incubac o as placas devem ser seladas firmemente ou incubadas com coberturas de placa em uma c mara mida para evitar evaporac o 6 Lave cada cavidade com aproximadamente 300 ul de Solu o de Lavagem por 3 vezes Aspire o
42. s The blocking percentage of the sample is calculated from the optical density 0D450 obtained with the test sample and the 0D450 of the negative control IDEXX CSFV Ab 1 Reagents Store all reagents at 2 8 C Reagents Volume Volume 1 CSFV Antigen Coated Plates 2 5 2 Positive Control iml 1ml 3 Negative Control ml iml 4 Anti CSFV HRPO Conjugate 25 ml 60 ml 5 Sample Diluent 15 ml 45 ml A TMB Substrate N 12 20 ml 60 ml B Stop solution N 3 20 ml 60 ml C Wash concentrate 10X 125 ml 480 ml NOTE see table on page 32 for the description of international symbols used on the kit labels Materials Required but Not Provided e Precision pipettes or multiple delivery pipetting devices suitable for delivering 10 to 1000 ul Reagents volumes listed in the Test Procedure require pipette precision less than or equal to 5 e Disposable pipette tips 500 ml graduated cylinder for wash solution e 96 well Microplate reader equipped with a single wavelength filter of 450 nm or a dual wavelength of 450 nm and 650 nm e Ultrapure water Milli Q or double distilled Device for the delivery and aspiration of wash solution A trap for retaining aspirate and disinfectant Humid chamber and plate covers or plate sealers Vortex mixer e Centrifuge tubes or micro tubes 2 IDEXX CSFV Ab Precautions and Warnings for Users Handle all biological material as potentially infectious Do not pipette by mouth Do not eat dri
43. soit l option choisie recouvrir les plaques d un film adh sif ou incuber en chambre humide avec couvre plaque s afin d viter toute vaporation ATTENTION Seul le protocole avec incubation longue 18 24 heures est agr en France Bien homog n iser le contenu de la microplaque sensibilis e en tapant doucement le c t de la plaque ou en utilisant un vortex Laver 3 fois chaque puits avec environ 300 ul de Solution de lavage Aspirer la Solution de lavage contenue dans la plaque entre chaque lavage Apr s la derni re aspiration cons cutive au dernier lavage liminer l eau r siduelle contenue dans les puits par retournement et tapotement de la plaque sur du papier absorbant Eviter la dessiccation des puits de la microplaque entre les lavages et pr alablement la distribution du prochain r actif Distribuer 100 ul de Conjugu dans chaque puits Incuber la plaque 18 26 C pendant 30 minutes 2 min en chambre humide avec couvre plaque ou recouverte d un film adh sif Laver les plaques comme indiqu au point 6 Distribuer 100 ul de Substrat TMB N 12 dans chaque puits et incuber 10 minutes 1 min 18 26 C l abri de la lumi re Commencer d compter le temps des le remplissage du premier puits Distribuer 100 ul de Solution d arr t N 3 dans chaque puits Ajouter la solution d arr t dans le m me ordre que celui du substrat TMB Faire le blanc du spectrophotom tre sur l air Lire les densit s optiques des
44. stos ao VPSC podem infectar se atrav s da placenta A infec o cong nita pode resultar em aborto mumificac o fetal natimortos e ou leit es fracos ou mal formagao embrion ria O resultado mais frequente de infecc o cong nita com cepas de baixa virul ncia o nascimento de leit es com infecc o persistente que disseminam o virus sem mostrarem sinais da doen a na aus ncia de resposta imune Os su nos tamb m podem se infectar com BVDV ou BDV Apesar destas infec es em su nos serem suaves e auto limitantes importante distingui las das infec es por VPSC Descri o e Princ pios IDEXX CSFV Ab designado para detectar anticorpos do VPSC em soro ou plasma O teste um ELISA de bloqueio que utiliza placas microcavit rias impregnadas com antigeno do VPSC Anticorpos presentes na amostra teste ir o bloquear a liga o do conjugado especifico monoclonal anti VPSC O anticorpo monoclonal ligado ser detectado por um substrato que reage com a peroxidase O resultado indicado por desenvolvimento de cor A densidade ptica medida atrav s de um leitor de placas em um comprimento de onda simples de 450 nm ou em um comprimento de onda duplo de 450 nm e 650 nm IDEXX CSFV Ab 13 Reagentes Armazene todos os reagentes entre 2 8 C Reagentes Volume Volume 1 Placa impregnada com antigeno do VPSC 2 5 2 Controle positivo 1ml iml 3 Controle negativo 1ml iml 4 Conjugado HRPO Peroxidase de Raiz Forte Anti VPSC 25 ml 60
45. t in direktem Tageslicht inkubieren Mit der Zeitmessung nach dem F llen der ersten Vertiefung beginnen 10 Stoppen der Reaktion ach 10 Minuten in jede Vertiefung 100 ul Stoppl sung Nr 3 einbringen um die Reaktion zu beenden Die Stoppl sung ist in der gleichen Reihenfolge zuzugeben wie die Substratl sung siehe Schritt 8 11 Messen der Platte Die Extinktionswerte der Proben und Kontrollen mit dem Photometer bei 450 nm oder f r duale Wellenl nge bei 450 nm und 650 nm messen Vorher einen ullabgleich des Instruments gegen Luft vornehmen Die korrigierte mittlere Extinktion f r die Proben und Kontrollen ermitteln siehe Abschnitt Berechnungen 12 Interpretation Hemmung Serum Plasma 3096 gt 30 bis lt 40 gt 40 negativ fraglich positiv Produziert durch F r technische Unterst tzung IDEXX Switzerland AG Kontaktieren Sie Ihren lokalen IDEXX Vertreter Stationsstrasse 12 oder besuchen Sie unsere Webseite 3097 Liebefeld Bern Switzerland www idexx com production contact IDEXX Technical Support 00 800 727 43399 Zul Nr BFAV KSP D113 98 IDEXX und Test With Confidence sind Schutzmarken oder eingetragene Schutzmarken von IDEXX Laboratories Inc oder eines Tochterunternehmens von IDEXX in den Vereinigten Staaten und oder in anderen L ndern IDEXX CSFV Ab 31 Symbol Descriptions Descriptions des symboles Symbol Beschreibungen Descrizione dei simboli Descr
46. tteln der Flasche in L sung bringen Das Waschkonzentrat 10X muss 1 10 mit ultrapurifiziertem Wasser Milli Q oder Aqua bidest verd nnt werden Bei steriler Behandlung kann die Waschl sung eine Woche bei 2 8 C aufbewahrt werden Zubereitungsbeispiel 30 ml Waschkonzentrat 10X 270 ml ultrapurifiziertes Wasser Milli Q oder Aqua bidest 300 ml gebrauchsfertige Waschl sung Gut mischen Vortex Vorbereitung der Proben F r den Test eignen sich Serum oder Plasmaproben die frisch bzw nach gek hlter bis zu 8 Tage bei 2 8 C oder tiefgek hlter Lagerung analysiert werden k nnen Testanweisung Alle Reagenzien m ssen vor Gebrauch auf 18 26 C gebracht werden Die Reagenzien durch leichtes Sch tteln mischen 1 50 ul Probenverd nner in jede ben tigte Vertiefung geben 2 In die entsprechenden Vertiefungen 50 pl positive Kontrolle bzw 50 ul negative Kontrolle geben F r verschiedene Kontrollseren jeweils separate Pipettenspitzen verwenden 3 In die verbleibenden Vertiefungen je 50 ul der Serum oder Plasmaproben einbringen F r jede Probe eine neue Pipettenspitze verwenden 4 Den Inhalt durch vorsichtiges Klopfen an die Mikrotiterplatte mischen oder einen Sch ttler f r Mikrotiterplatten verwenden 5 Die Mikrotiterplatten sorgf ltig abgedeckt oder abgedeckt in einer feuchten Kammer 2 Stunden 5 Min oder ber Nacht 12 18 Stunden bei 18 26 C inkubieren 6 Jede Vertiefung dreimal mit etwa 300 ul Waschl sun
47. usly or intermittently until death Fetuses of susceptible pregnant sows exposed to CSFV might become infected through the placenta Congenital infection can result in abortion fetal mummification stillborn and or weak piglets or embryonic malformations The most frequent outcome of congenital infection with low virulent Strains is the birth of persistently infected piglets spreading the virus without signs of the disease in the absence of immune response Pigs may also be infected with BVDV or BDV Although these infections in pigs are usually mild and self limiting it is important to reliably distinguish them from the CSFV infection Descriptions and Principles IDEXX CSFV Ab is IDEXX s enzyme immunoassay for the detection of CSFV specific antibodies in swine serum or plasma The assay is a blocking ELISA which utilizes microplates coated with CSFV antigen Antibodies present in the test sample will block the binding of Horseradish Peroxidase conjugated CSFV specific monoclonal antibodies The bound monoclonal antibodies are detected by a substrate reactive with Horseradish Peroxidase The result is indicated by color development The optical density is measured by a microplate reader at a single wavelength of 450 nm or dual wavelengths of 450 nm and 650 nm Color development is weak positive result when CSFV specific antibodies are present in the test sample Color development is maximal negative result in the absence of specific antibodie
48. z forte ou a quaisquer agentes oxidantes Manipule a solu o TMB com materiais de pl stico ou vidro limpos e Usar luvas avental m scara para proteger o rosto e culos protetores Armazene todos os reagentes entre 2 8 C Deixar em 18 26 C antes do uso e retornar a 2 8 C ap s o uso Todos os res duos devem ser adequadamente descontaminados antes de serem eliminados Descarte o material conforme regulamentac es locais regionais e nacionais Deve se tomar cuidado para prevenir contamina o dos componentes do kit N o use componentes com prazo de validade vencido e n o misture componentes de kits de diferentes n meros de lote Resultados timos ser o obtidos seguindo se rigorosamente o protocolo deste teste Pipetagem cuidadosa observac o do tempo e lavagens corretas durante todo o procedimento s o necess rios para manter a precis o e acur cia Os dois controles devem ser usados para cada bateria de testes Use somente gua destilada ou deionizada para o preparo dos reagentes usados no teste e Cavidades n o usadas devem ser armazenadas seladas dentro da bolsa pl stica a 2 8 C Somente para uso veterin rio Preparo dos reagentes Placa com microcavidades diluente de amostra Controle Positivo Controle Negativo conjugado Soluc o Substrato e Soluc o de Interrupc o sao prontos para o uso Soluc o de Lavagem O Concentrado de Lavagem 10X deve ser trazido 18 26 C e homogeneizado para pe
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