Inserto - Inmuno-Mex
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1. Por ejemplo si se diluye una muestra 1 10 la concentraci n obtenida deber multiplicarse por 10 Es necesario tener en cuenta que en cualquier an lisis para medir un anticuerpo lo que se determina no es la concentraci n de ste sino su actividad en la muestra Esta se ve afectada por diversos par metros como la avidez del anticuerpo Tabla 1 Calibradores del Anti dsDNA Calibradores Ul ml Calibradores Ul ml S0 0 3 150 SI 10 S4 300 52 50 12 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA Figura 1 Curva Tipica de Calibradores 1 8 1 6 K 1 4 1 2 1 0 0 8 A550 0 6 ra 0 4 F 0 2 pe 0 0 5 10 20 50 150 300 Anti dsDNA Ul ml LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 1 Aunque la presencia de altos titulos de anticuerpos contra el antigeno dsDNA es indicativa de lupus eritematoso sist mico es necesario considerar los datos a la luz de otros hallazgos clinicos y de laboratorio 2 Algunos individuos pueden tener altos niveles de anticuerpos anti dsDNA con poca o ninguna evidencia de enfermedad clinica En contraste algunos pacientes con LES pueden tener niveles no detectables de estos anticuerpos 3 Las muestras de suero o plasma que contengan niveles muy altos del anticuerpo pueden dar absorbancias mayores que el est ndar superior Dichas muestras deber n diluirse m s con diluyente de muestras y volverse a analizar 4 Aunque en el lupus eritemato2. Bio Rad Laboratories Ltd 37 A14 Leningradsky Pr 125167 Moscow Phone 7 095 721 14 00 Telefax 7 095 721 14 12 SINGAPORE Bio Rad Laboratories Singapore Pto Ltd 27 International Business Park 1101 02 609924 Phone 65 6415 3188 e lelefax 65 0415 3189 SOUTH AFRICA Bio Rad aboratories Pty td 34 Bolton Road Parkwood Johannesburg 7193 Phone 27 11 442 85 08 Telefax 27 11 442 85 25 SPAIN Bio Rad Laboratories S A Minipare Il Edificio M C Calendula 95 El Soto de la Moraleja 78109 Madrid Phone 34 91 590 5700 Telefax 34 91 590 5711 SWEDEN Bio Rad Laboratories A B Vintergatan 1 Box 1097 S 172 22 Sundbyberg Phone 46 8 555 127 00 Telefax 46 8 555 127 80 SWITZERLAND Bio Rad Laboratories Nenzlingerweg CH 4163 Reinach BL Phone 41 61 717 95 55 Telefax 41 61 717 95 50 THAILAND Bio Rad Laboratories Ltd 1st amp 2nd Floor Lumpini Bldg 239 2 Rajdamri Rd Lumpini Pathumwan Bangkok 10330 Phone 662 651 8311 Telefax 662 651 8912 UNITED KINGDOM Bio Rad Laboratories Ltd Bio Rad House Maylands Ave Hemel Hempstead Herts HP2 7TD Phone 44 208 328 2000 Telefax 44 208 328 2050 Effective Date octubre 2004 August 2004
3. Rad S A N V Bagoniastraat 5 B 9810 Nazareth Cke Phone 32 9 385 5511 Telefax 32 9 385 6554 BRAZIL Bio Rad do Brasil Rua dos Invalidos 212 5 Andar Lapa CEP 20231 020 Rio de Janeiro 4000 Alfred Nobel Drive Phone 5521 3461 5202 Telefax 5521 2224 6524 Hercules California 94547 CANADA Bio Rad Laboratories Ltd 2403 Gu nette Montreal Qu bec H4R2E9 Telephone 510 724 7000 Phone 1 514 334 4372 Telelax 1 514 334 4415 FAX 510 741 5824 CZECH REPUBLIC Bio Rad spol s ro Nad ostrovem 1119 7 147 00 Prague 4 Phone 420 2 41430532 lelefax 420 2 41431642 adom CHINA Bio Rad China limited 18F D Hai li Building No 88 Da Pu Road Shanghai 200023 Phone 86 21 63052255 Tolofax 86 21 53964775 DENMARK Bio Rad Laboratories Generatorvej 8 C 2730 Herlev Phone 45 4452 1000 Telefax 45 4452 1001 FINLAND Bio Rad Laboratories Pihatorma 1 A FIN 02240 Espoo Phone 358 9 804 22 00 Telefax 358 9 804 11 10 FRANCE Bio Rad S A 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnas la Coquetta Phone 33 1 4795 6000 Telefax 33 1 4741 9133 GERMANY Bio Rad Laboratories GmbH Heidemannstrasse 164 D 80939 Munich Phone 49 89 318840 Talatax 49 89 3 18 84 100 HONG KONG Bio Rad Pacific Ltd Unit 1101 11 F OCH Commercial Centre 25 Westlands Road Quarry Bay Phone 852 2789 3300 Tele ax 892 2 89 120 INDIA Bio Rad Laboratorias India Pte Ltd B amp B1 Enkay Towars Vanijya Nikunj Udhyog Vihar Phase V Gurgaon 122016 Haryana Phone 91 124 6398112 Telefax 91
4. le N gatif Contr le Positif S rum de R f rence Diluant concentr pour Control negativo Control positivo Control de Referencia chantillons A Controllo negativo Controllo positivo Controllo di Riferimento Diluyente de Muestras Controlo Negativo Controlo Positivo Controlo de Refer ncia Concentrado A Negativ kontroll Positiv kontroll Referenskontroll Diluente Concentrato per e Negativ kontrol Positiv kontrol e Referencekontrol Campioni A e Apvntik c OETIK G M ptupa avapop s Concentrado A de Diluente Haptupac H ptUpas para Amostras e Provdiluentkoncentrat A Provefortynderkoncentrat A Zupn kvwpa A aparwTt ko SELyHaTwWV MPLT STOP SUBS WSH BUF CONC Microplate Stop Solution Substrate Wash Buffer Concentrate Mikrotiterplatte Stoppl sung e Substrat e Waschpufferkonzentrat Microplaque Solution d arr t Substrat Solution de lavage Microplaca e Soluci n de parada Sustrato concentr e Micropiastra Soluzione bloccante Substrato Tamp n de Lavado Microplaca Solu o de Paragem Substrato Concentrado Mikroplatta Stoppl sning Substrat Tampone di Lavaggio Mikroplade Stopoplosning Substrat Concentrato e Mikpord xa AVaOXETIK Yr ctpoya Concentrado de tamp o de S Mupa lavagem Tv ttbuffertkoncentrat e Vaskebufferkoncentrat e 2Zupri kvoa PUBLLOTLKOU LaA paATOG MAUONG L50325601ES00
5. logo e Calibrador 0 Calibrador 1 e Consulte las Katalognummer e Kalibrator 0 Kalibrator 1 instrucciones de uso Katalognummer e Kalibratorer 0 Kalibratorer 1 Fare riferimento alle BaB8uovounTc O BaBiovounmc 1 Api8i r katad you Istruzioni per l uso Consulte as instru es de utiliza o Se bruksanvisning f re anv ndande Se brugsvejledningen ZUBOU EUTE TE TIG odnyies xeriong ii Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA cat 2 ca 3 caL 4 CONJ Calibrator 2 Calibrator 3 e Calibrator 4 Conjugate e Kalibrator 2 e Kalibrator 3 e Kalibrator 4 Konjugat Calibrateur 2 e Calibrateur 3 e Calibrateur 4 e Conjugu Calibrador 2 e Calibrador 3 e Calibrador 4 Conjugado Calibratore 2 e Calibratore 3 e Calibratore 4 e Coniugato Calibrador 2 Calibrador 3 e Calibrador 4 e Conjugado e Kalibrator 2 e Kalibrator 3 e Kalibrator 4 Konjugat Kalibratorer 2 Kalibratorer 3 e Kalibratorer 4 Konjugat BaBovoun Ts 2 e BaBovounma 3 BaBjiovounTg 4 e ZuZuy c CONTROL CONTROL CONTROL RF samp pit conc a e Negative Control Positive Control Reference Control Sample Diluent Concentrate A Negativkontrolle Positivkontrolle Referenzkontrolle e Probendiluentkonzentrat A Contr
6. primordial en el diagn stico diferencial de enfermedades autoinmunes tales como el lupus eritematoso sist mico LES la artritis reumatoidea AR y la enfermedad mixta del tejido conectivo EMTC 1 2 Los anticuerpos contra el dsDNA son muy espec ficos para el LES y se detectan con mucha frecuencia en pacientes no tratados que presentan la enfermedad en su forma activa 3 La Asociaci n Americana de Reumatismo ha incluido la presencia de anticuerpos contra dsDNA en el LES como uno de los criterios de clasificaci n de esta enfermedad 4 M s a n varios investigadores han informado acerca de la existencia de una correlaci n entre la actividad de la enfermedad y las fluctuaciones en los niveles de anticuerpos 5 6 Por consiguiente se considera que la observaci n de la actividad del dsDNA es til en el manejo de los pacientes con LES 7 Las pruebas ELISA son f ciles de realizar sensibles reproducibles y objetivas en comparaci n con otros m todos M s a n se pueden normalizar con base en la norma de referencia W o 80 establecida por la Organizaci n Mundial de la Salud OMS para el anticuerpo anti dsDNA 9 PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO Los micropozos est n recubiertos con una preparaci n de DNA de timo de ternero Durante la primera incubaci n los autoanticuerpos espec ficos presentes en el suero o plasma diluido se unen al reves timiento antig nico Luego se lavan los micropozos para eliminar los componentes s
7. 124 6398115 ISRAEL Bio Rad Laboratories Lid 14 Homa Street New Industrial Area Rishon Le Zion 5605 Phone 972 3 9514127 Telefax 972 3 9514129 ITALY Bio Rad Laboratories S r l Via Cellini 18 A 20090 Segrate Milan Phone 39 02 216091 Telefax 39 02 21609 398 JAPAN Nippon Bio Rad Laboratories 7 18 Higashi Nippori chome Arakawa ku Tokyo 116 0014 Phone 81 3 5811 6290 lelefax 81 3 5811 6282 KOREA Bio Rad Korea I to B1 Cambridge Building 1461 15 Seocho Dong Seocho Gu Seoul 137 070 Phone 82 2 3473 4460 Tolofax 82 2 3472 7003 LATIN AMERICA Bio Rad Latin America 14100 Palmetto Frontage Road Suite 101 Miami Lakes Horida 33016 Phone 305 894 5950 Telefax 305 894 5960 MEXICO Bio Rad Laboratorios Mexico S A de C V Adolfo Prieto No 1653 Colonia Del Valle 03100 Mexico D F Phone 5255 5534 2552 Telefax 5255 5524 5555 THE NETHERLANDS Bio Rad Laboratories BV Fokkerstraat 10 3905 KV Vaanendaal Phone 31 318 540668 Telefax 31 318 542216 NEW ZEALAND Bio Rad New Zealand 189 Bush Road Albary Auckland Phone 64 9 4 15 2280 Talafax 64 9 415 2284 NORWAY Bio Rad Laboratories Johan Scharffenbergs vei 91 N 0694 Oslo Phone 4 23 38 41 30 Telefax 4 23 38 41 39 POLAND Bio Rad Laboratories Nakielska Str 3 01106 Warsaw Phone 48 22 331 99 99 Teletax 48 22 331 99 98 PORTUGAL Bio Rad Laboratories Rua do Entreposto Industrial 3 1 Esq 2 24 813 Amadora Phone 351 21 472 7700 Telefax 351 21 472 7777 RUSSIA
8. Manual de instrucciones iii KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA TABLA DE MATERIAS Pagina Uso al que est destinado neern Portada Resumen Y explicaciones ciencia 2 Principios del procedimiento ooonnonccnnnnacccnncnonannnononannrnnn nro ncnnrrnnnnn 2 Informaci n del prod UCtO vecinita clics 3 Advertencias y precauciones cooooocccconcnncnnnnonnnnnonanan cnn rnnnn o nn rnnnn nan 5 Recolecci n de muestras y preparaci n conccnncciocinccionorinocnnoranconnonos 6 Procedimi iO sis ssssicatntassntaoausegussedaatunaaianca Dcdo ai aiaiai aeiiae 7 C ntokd calida dornan na d 10 RESUNAGOS visiirisi raa R A a 11 Limitaciones del procedimiento ooooccccnonococnccconannccnnnanncncnananananinnnos 13 Valores esperados Srnie ibid cai 14 Caracter sticas espec ficas del funciona miento s 17 Resumen del procedimiento ooocooonocccnonocancconanan ono nanan cnn n nano na na rannno 19 Reena a 20 L50325601ES00 Manual de instrucciones 1 RESUMEN Y EXPLICACION La prueba anti dsDNA es til para el diagn stico del lupus eritematoso sist mico y tambi n puede emplearse para observar los niveles de anticuerpos contra dsDNA en pacientes individuales durante per odos de tratamiento y de remisi n de la enfermedad Una caracter stica general de las enfermedades reum ticas sist micas es la presencia de anticuerpos circulantes contra una variedad de ant genos celulares La detecci n de dichos autoanticuerpos juega un papel
9. Zupp ppwon pe m Representante Autorizado da TOUG Eupwnaiko c Uni o Europeia Auktoriserad EU representant Autoriseret repr sentant i EU Esouotodomu voc AVTLTIPOOWNOG OMV Evupwraikr Evwon KaVOVLOIO G LOT be XY Lot Number e Use by e Temperature Limit For In Vitro Diagnostic Use Chargenbezeichnung e Haltbar bis Temperaturgrenze e In vitro Diagnostikum Num ro de lot e Utiliser avant e Limite de temp rature e Utilisation comme test de N mero de lote e Fecha de caducidad L mite de temperatura diagnostic in vitro Numero di lotto e Scadenza e Limite di temperatura e Para uso en diagn stico in vitro N mero do lote Utilizar at Limite de temperatura Per uso diagnostico in vitro e Batchnummer e Anv ndes fore e Temperaturgr nser e Para uso em diagn stico in e Lotnummer e Udlobsdato Temperaturomr de vitro Api8pi s naptidac e Huepounv a AnEns e Opto Bepuokpaciac F r in vitro diagnostiskt bruk Til in vitro diagnostisk brug Tia in vitro StayvworuKn xenon ME REF ca o caL Consult Instructions for Catalog Number e Calibrator 0 e Calibrator 1 Use Katalognummer Kalibrator 0 e Kalibrator 1 Gebrauchsanleitung R f rence e Calibrateur 0 e Calibrateur 1 beachten N mero de cat logo e Calibrador 0 e Calibrador 1 Consulter la notice Numero di catalogo Calibratore 0 e Calibratore 1 d utilisation N mero de cat
10. a gt i 31008 KALLESTAD L50325601ES00 Anti dsDNA Microplate EIA Manual de instrucciones Para la detecci n cuantitativa o cualitativa de autoanticuerpos contra DNA de doble cadena ds por sus siglas en ingl s en suero 0 plasma humanos por enzimoinmunoensayo indirecto CE mal M d For Bio Rad Laboratories Inc Hercules CA 94547 USA UK Bio Rad Laboratories Europe Ltd Perth BIO CD en varios idiomas Este kit incluye un CD ROM en los siguientes idiomas ingl s alem n franc s espa ol italiano portugu s sueco dan s y griego Simbolos de la Directiva 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro CE ul me European Conformity e Manufacturer e Manufacturered for e Authorized Representative in e EG Konformitat Hersteller Hergestellt f r the European Union Conformit europ enne e Fabricant Fabriqu pour Autorisierter Vertreter in der Conforme a la e Fabricante e Fabricado para Europaischen Union normativa europea Produttore Prodotto per Repr sentant agr pour Conformit Europea e Fabricante e Fabricado para l Union Europ enne Conformidade com as Tillverkare Tillverkas for e Representante Autorizado en la normas europeias Producent Produceret for Uni n Europea Uppfyller EU direktiv e KataoKeuaoti s e KataokeudZetat Rappresentante autorizzato per CE m rkning yta Aoyap aop l Unione Europea e
11. a o el envase Elim nense el producto y su recipiente como residu os peligrosos Evitese su liberaci n al medio ambiente _ Rec bense instrucciones espec ficas de la ficha de datos de seguridad resultados falsos positivos 6 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA PROCEDIMIENTO Material suministrado R1 R2 R3 Microplaca para Concentrado de Diluyente de M uestras A B fer de Lavado Concentra do S0 S4 Calibradores CQ GL C2 R4 R5 R6 Control N egativo Control de Referencia Control Positivo Conjugado IgG IgM Substrato Soluci n de Parada Portatiras de micropocillos Bolsa sellada con desecante Material necesario pero no suministrado 1 O 0 J 0 Ul fs wn Lector de placa o tira de 96 pocillos con filtro de 550 nm Los filtros en el rango 540 565 nm proporcionan resultados aceptables Pipetas de precisi n capaces de administrar 10 ul 100 pl y 1 0 ml Pipeta autom tica de 100 ul Lavador de placas autom tico o pipeta autom tica de 200 ul Cron metro para determinar intervalos de 30 y 60 minutos Probetas de pl stico o de vidrio de 100 y 400 ml Toallas de papel absorbente Agua destilada o desionizada Recipientes o tubos adecuados 1 ml para la diluci n de las muestras Opcional Una lectura de longitud de onda dual puede realizarse con un filtro de 550 nm y un filtro de referencia en el rango 620 630 nm Co
12. dentificaci n de las muestras de los pacientes y de los controles o los calibradores Utilizando la pipeta coloque por duplicado en los micropozos apropiados a 100 pl de control de referencia para la prueba cualitativa b 100 ul de cada calibrador S0 S4 para la prueba cuantitativa Utilizando la pipeta coloque 100 ul de cada muestra de paciente prediluida y los controles positivos y negativos en los pozos restantes Incube durante 60 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Aspire o invierta la placa sobre un lavabo adecuado para desechar materiales biol gicos Si invierte la placa golp ela firmemente sobre papel absorbente varias veces para eliminar el exceso de l quido Lave las placas 3 veces con una pipeta autom tica o con un lavador de placas utilizando un m nimo de 200 ul de soluci n tamp n de lavado diluida por cada pozo Aspire o decante el l quido invirtiendo r pidamente la placa sobre el lavabo Si invierte la placa golp ela firmemente sobre papel absorbente varias veces para eliminar el exceso de l quido Agregue 100 ul de conjugado a cada pozo Incube durante 30 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Repita el paso 9 Repita el paso 10 Agregue 100 ul de sustrato a cada pozo utilizando las mismassecuencias de pipeteo que en el paso 11 Incube durante 30 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C A adir 100 ul de la Soluci n de Parada a cada pocillo siguiendo la mis
13. e evite la contaminaci n microbiana CO Control Negativo 1 x 130 pl Plasma humano con lt 0 1 c v azida s dica Diluir 1 al 100 del mismo modo que las muestras de los pacientes por ejemplo 10 pla 1 0 ml de Diluyente de Muestras diluido C1 Control de Referencia 1 x 1 5 ml Plasma humano en b fer con lt 0 1 c v azida s dica LISTO PARA SU USO NO NECESITA DILUIRSE C2 Control Positivo 1 x 230 pl xn Plasma humano con 0 1 c v azida s dica Diluir 1 al 100 del mismo modo que las muestras de los pacientes por ejemplo 10 ul hasta 1 0 ml de Diluyente de Muestras diluido SO Calibrador 0 1 x 1 0 ml Alb mina s rica bovina BSA en b fer con 0 1 c v azida sddi ca que contiene 0 IU ml ISTO PARA SU USO NO NECE SITA DILUIRSE S1 S4 Calibradores 1 4 1 0 ml de cada uno Plasma humano en b fer con lt 0 1 c v azida s dica que con tiene 10 50 150 y 300 IU ml LISTO PARA SU USO NO NECESITA DILUIRSE R4 Conjugado IgG IgM 1 x 15 ml Anticuerpo monoclonal de murina marcado con fosfatasa alcalina a IgG e IgM humana en b fer Tris con alb mina s rica bovina BSA y lt 0 1 c v azida s dica R5 Substrato 1 x 15 ml xi l n magnesio 2 como cofactor enzim tico monofosfato de fenolftale na PMP y Bronidox al 10 en soluci n b fer No exponer a la luz durante el almacenamiento El sustrato debe tener un color amarillo p lido El color rosa indica contaminaci n y hay que desechar el reac
14. e recomienda que los usuarios de la prueba anti dsDNA de Kallestad establezcan m rgenes para las poblaciones que acuden a sus laboratorios 14 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA Tabla 2 Valores esperados Margen de anti dsDN A Interpretaci n Ul ml lt 30 Valores negativos para anticuerpos contra dsDNA 30 50 Valores lim trofes para anticuerpos contra dsDN A Es posible que haya lupus eritematoso sist mico u otra enfermedad del tejido conectivo Considere otras pruebas para hacer el diagn stico diferencial v g an lisis anti Sm de Kallestad y repita las de anti dsDNA en una muestra subsiguiente gt 50 300 Valores positivos para anticuerpos contra dsDNA Es probable que haya lupus eritematoso sist mico gt 300 Valores muy positivos para anticuerpos contra dsDNA Altamente diagn sticos de lupus eritematoso sist mico Muestras Normales Se examinaron ciento noventa y dos 192 muestras s ricas de individ uos asintom ticos con la prueba anti dsDNA de Kallestad El valor de corte negativo se defini como el valor promedio m s dos desviaciones est ndar y se calcul en 30 Ul ml Ciento noventa 190 muestras el 99 fueron negativas para los anticuerpos contra dsDNA utilizan do este valor Muestras de LES Se obtuvieron doscientas cincuenta y siete 257 muestras de suero de pacientes con LES cl nicamente comprobado De e
15. e referencia es lt 0 1 unidades de absorbancia el ensayo no ser v lido y no se dar n por v lidos los resultados obtenidos con las muestras de los pacientes Ensayo Cuantitativo Cada ensayo de Anti dsDNA de Kallestad deber considerarse por separado al calcular e interpretar los resultados 1 La concentraci n del control negativo lt 30 Ul ml 2 El rango esperado aceptable para el Control Positivo debe estar comprendido entre los valores impresos en la etiqueta del vial Conservantes con azida de sodio al 0 1 p v por lo que no afectar a los resultados de las muestras 10 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA RESULTADOS Ensayo Cualitativo Debe calcularse el indice de unidad de absorbancia densidad ptica para cada muestra de la siguiente manera Ind de absorbancia Valor de absorbancia de la muestra Valor de absorbancia del Control de Referencia Se recomienda a los usuarios del Anti dsDNA de Kallestad que deter minen un valor de ratio para su poblaci n de pacientes que propor cione una discriminaci n ptima entre las muestras negativas y positivas Conciente de absorbancia Interpretaci n de los resultados lt 0 95 Negativos 0 95a1 0 Resultado en los limites Se recomienda reptir el ensayo Si el resultado es todavia equivoco despu s de repetir el ensayo se debera obtener una nueva muestra despu s de un intervalo de tiempo adecuado g
16. itante Irritante Contiene Bronidox Contiene carbonato de sodio sal R36 525 26 36 37 39 tetrasodio EDTA e hidr xido s dico R36 38 S25 26 36 37 39 45 60 L50325601ES00 Manual de instrucciones 5 Xn C2 CONTROL POSITIVO Nocivo Contiene azida s dica R22 S36 R22 R36 R36 38 R52 53 25 26 36 36 37 39 45 S46 S60 S61 RECOLECCION DE MUESTRAS Y PREPARACION El suero o plasma son las muestras recomendadas No utilice muestras lip micas hemolizadas o turbias Las muestras se pueden almacenar a 2 8 C hasta 5 d as o hasta 4 semanas a 20 C Mezcle completa mente las muestras descongeladas antes de hacer el an lisis y evite congelarlas y descongelarlas en forma repetida No se deben someter al proceso de inactivaci n t rmica ya que esto puede producir Nocivo por ingesti n Irrita los ojos Irrita los ojos y la piel Nocivo para los organismos acu ticos puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acu tico Ev tese el contacto con los ojos En caso de contacto con los ojos l vense inmedia ta y abundantemente con agua y ac dase a un m dico Usese indumentaria protectora adecuada Usense indumentaria y guantes adecuados y pro tecci n para los ojos la cara En caso de accidente o malestar ac dase inmedi atamente al m dico si es posible mu stresele la etiqueta En caso de ingesti n ac dase inmediatamente al m dico y mu stresele la etiquet
17. la etiqueta si se almacenan en las condiciones recomendadas 2 8 C La turbidez o precipitaci n de cualquier componente del kit es se al de inestabilidad y no se debe uti lizar el componente R1 Microplaca 12 x 8 tiras de micropocillos Recubiertos con ant geno dsDNA DNA de timo de ternero cerradas herm ticamente en un envase de aluminio con desecante Los pozos individuales pueden separarse de cada banda de microtitulaci n Guardar las tiras de micropocillos no usadas en una bolsa sellada con desecante dentro y almacenar a 2 8 C R2 Concentrado de Diluyente de Muestras A 5X 1 x 25 ml Xn xi B fer fosfatado alb mina s rica bovina BSA Triton X 100 y 0 5 c v azida s dica Diluir vertiendo el contenido de un vial en un recipiente limpio y a adiendo 100 ml de agua destilada o desionizada El diluyente de muestras diluido es estable hasta 6 meses a 2 8 C o hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta del vial la que sea inferior siempre que se evite la cont aminaci n microbiana L50325601ES00 Manual de instrucciones 3 R3 Bufer de Lavado Concentrada 16X 2 x 25 ml xn B fer boratado Triton X 100 y 0 8 c v azida s dica Diluir ver tiendo el contenido de un vial en un recipiente limpio y a adir 375 ml de agua destilada o desionizada El tampon de lavado diluido es estable hasta 6 meses a 2 8 C o hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta del vial la que sea inferior siempre que s
18. llas 142 el 55 fueron positivas con la prueba anti dsDNA de Kallestad La figura 2 ilustra la frecuencia global de distribuci n de los anticuerpos anti dsDN A en estos pacientes con LES L50325601ES00 Manual de instrucciones 15 Figura 2 de pacientes con LES _ 40 74 30 20 10 4 0 4 lt 30 30 50 51 300 gt 300 Anti dsDNA Ul ml Muestras de otras enfermedades diferentes a LES Se midieron los niveles de anticuerpos anti dsDNA en una variedad de enfermedades diferentes al lupus eritematoso sist mico Los datos obtenidos se esbozan a continuaci n Tabla 3 Muestras de pacientes con otras enfermedades Enfermedad Negativas Positivas d biles Positivas 0 30 Ul ml gt 30 50 Ul ml gt 51 300 Ul m Artritis Reumatoidea 32 2 1 Polimiositis 22 1 S ndrome de Sj gren 25 1 Infecciones virales 27 1 Hipergamma globulinemia 6 1 16 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Recuperacion Se analizaron cuatro diluciones de cuatro muestras de pacientes en tres an lisis separados de anti dsDNA Kallestad utilizando 3 lotes diferentes La Tabla 4 muestra los valores promedio obtenidos en Ul ml as como el porcentaje de recuperaci n Tabla 4 Caracter sticas de diluci n M uestra Diluci n Valo
19. ma secuencia que se sigui en el paso 12 Golpear la placa suavemente para mezclar bien los contenidos de cada pocillo Leer los pocillos con un lector de placas antes de una hora L50325601ES00 Manual de instrucciones 9 CONTROL DE CALIDAD Para asegurar la validez de los resultados en cada analisis cada laboratorio deber incluir Controles Positivo y Negativo en cada placa Cuando los controles no cumplan las especificaciones descritas el an lisis no es v lido y los resultados de las muestras de los pacientes no deben ser comunicados El la usuario a puede decidir si repite el an lisis en caso de haber revisado el procedimiento que sigui o bien puede contactar con el disfabricante Si se llevara a cabo una repetici n del an lisis deber prepararse una nueva diluci n de cada control Ensayo Cualitativo Debe incluirse el Control de Referencia Anti dsDN A que se suministra listo para su utilizaci n en todos los ensayos Se recomienda ensayar el Control de Referencia por duplicado 1 El ndice de la media Valor de aborbancia del Control N egativo Valor de absorbancia del Control de Referencia debe ser inferior a 0 95 2 El ndice de la media Valor de aborbancia del Control Positivo Valor de absorbancia del Control de Referencia debe ser el fijado en la etiqueta del Control Positivo 3 La densidad ptica del control de referencia debe ser 0 1 unidades de absorbancia Si la densidad ptica del control d
20. mentarios sobre el procedimiento 1 Con el fin de obtener resultados fiables y coherentes ajustarse estrictamente a las instrucciones de este documento No modificar las condiciones de almacenaje y de manejo de los reactivos del kit ni de las muestras de los pacientes L50325601ES00 Manual de instrucciones 7 2 6 No mezclar las tiras recubiertas o los reactivos de diferentes numeros de lote No utilizar los reactivos fuera de la fecha de caducidad indicada Debe evitarse la contaminaci n de los reactivos Utilizar una punta de pipeta desechable limpia y nueva para la manipulaci n de cada reactivo o muestra de paciente Asegurarse de que todas las tiras se encuentran bien sujetas al portatiras de pocillos Guardar el portatiras de pocillos para usos posteriores Las muestras de los pacientes Controles y Calibradores deben adicionarse de forma continua El tiempo que dure el proceso de adici n de principio a fin no debe exceder de 15 minutos Para obtener resultados ptimos utilizar pipetas de repetici n o pipetas multicanal para la adici n de los reactivos corrientes NO CONGELAR LOS KITS Procedimiento T 8 Como m nimo 30 minutos antes de utilizarlos Ilevar todos los reactivos y los envases de aluminio de las microplacas a temperatura ambiente 18 25 C Mezclar los reactivos invirti ndolos suavemente Calcule el n mero de bandas de vasos necesario para el an lisis y col quelas en el so
21. porte para bandas Si solamente se necesita un vaso o menos de 8 vasos puede sacarse la cantidad exacta de vasos retirando la banda de pl stico del soporte para placas Retire la banda de vasos del soporte para bandas de pl stico tirando de la parte inferior de los vasos Puede arrancarse la canti dad necesaria de vasos y volverse a colocar en la banda de pl sti co Vuelva a colocar la banda de pl stico en el soporte para placas de microtitulaci n abisagrando primero el orificio rectangu lar en el borde inferior fila H de la ranura del soporte y ase gur ndose de que el orificio cuadrado que tiene la muesca en el lateral izquierdo est bien sujeto en el borde superior fila A Devuelva el material no utilizado a la bolsa resellable con dese cante y devuelva sta a la bolsa de papel metalizado Cons rvelo a entre 2 y 8 C Diluya la soluci n de lavado concentrada y el diluyente concentra da de muestras Mezcle completa mente Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Diluir las muestras experimentales y los Controles Positivo y Negativo del 1 al 100 por ejemplo dispensar 1 0 ml de Diluyente de Muestras diluido en un envase adecuado y a adir 10 ul de la muestra Mezclar bien Todas las diluciones de las muestras deben realizarse inmediatamente antes de su utilizaci n en el ensayo Marque los micropozos para permitir la i
22. r promedio Recuperaci n UI ml 1 A 171 3 100 A 2 79 5 93 A 4 39 8 93 A 8 19 7 92 2 A 486 6 100 A 2 210 9 87 A 4 116 3 96 A 8 57 6 95 3 A 146 4 100 A 2 67 1 92 A 4 33 3 91 A 8 18 1 99 4 A 153 9 100 A 2 89 1 116 A 4 44 6 116 A 8 26 5 137 Precisi n Se determin la precisi n intraensayo analizando 3 controles iferentes con reproducci n de 12 L50325601ES00 Manual de instrucciones 17 Tabla 5 Precisi n Intraensayo Control Valor Promedio CV Ul ml 1 22 4 6 0 2 66 9 4 6 3 104 6 4 5 Se determin la precisi n interensayo analizando 3 controles diferentes en un total de 50 an lisis Los resultados fueron obtenidos por cinco t cnicos diferentes con tres lotes diferentes de an lisis Kallestad de anti dsDN A Tabla 6 Precisi n Interensayo Control Valor Promedio CV Ul ml 1 22 2 8 7 2 65 3 9 1 3 105 2 8 1 Correlation Se hicieron an lisis paralelos en un grupo de 338 sueros 100 muestras normales y 238 de pacientes con LES confirmado utilizando el an lisis Kallestad de anti dsDNA y otra prueba ELISA Prueba A Para el an lisis Kallestad se emple un valor de corte de 50 Ul ml y para la Prueba A uno de 80 Ul ml excluyendo los positivos d biles seg n fueran definidos por ambas pruebas Se obtuvo una buena correlaci n entre el an lisis anti dsDNA de Kallestad y tanto el radioinmunoan lisis de Farr como el an lisis de inmunofl
23. ricos o plasm ticos no unidos Un conjugado de anticuerpos monoclonales contra IgG e IgM humanas marcados con enzimas se fija a los anticuerpos unidos a la superficie durante la segunda incubaci n Despu s de otro paso de lavado se identifican los anticuerpos espec ficos mediante la incubaci n con el sustrato La 2 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate ElA adici n de la soluci n de parada termina la reacci n y proporciona el pH adecuado para que se revele el color La cantidad de conjugado unido se mide en t rminos de unidades de absorbancia En el protocolo cuantitativo se calcula la concentraci n de anticuerpo anti dsDNA de una muestra desconocida haciendo una interpolaci n a partir de una curva de respuesta a la dosis que se basa en calibradores normalizados contra la Preparaci n de Referencia OMS Wo 80 Los resultados se registran como unidades internacionales UI por mililitro En el protocolo cualitativo se compara la cantidad de conjugado que se une en presencia de la muestra desconocida con la que se une en presencia de una concentraci n conocida de anticuerpo anti dsDNA en el control de referencia INFORMACION DEL PRODUCTO 96 determinaciones Todos los reactivos excepto el Tamp n Concentrado de Lavado del Diluyente Concentrado de la Muestra y Control Negativo y Control Positivo vienen listos para usar Todos los reactivos son estables hasta de caducidad que se indica en
24. so sist mico predominan los anticuerpos IgG anti DNA se pueden encontrar anticuerpos IgM junto con los IgG en algunas muestras Es posible que las muestras que contengan altos niveles de IgM y bajos niveles de IgG no produzcan resultados positivos en las pruebas que miden nicamente anticuerpos IgG 11 El an lisis Kallestad de anti dsDNA ha sido dise ado para detectar tanto IgG como IgM contra dsDN A L50325601ES00 Manual de instrucciones 13 5 Cuando se utiliza el an lisis Anti dsDNA de Kallestad para examinar los niveles de anticuerpos es aconsejable emplear el mismo tipo de muestra suero o plasma a lo largo de todo el per odo de estudio VALORES ESPERADOS Ensayo Cualitativo Se recomienda a los usuarios del Anti dsDNA de Kallestad que determinen un valor de ratio para su poblaci n de pacientes que proporcione una discriminaci n ptima entre las muestras negativas y positivas Conciente de absorbancia Interpretaci n de los resultados lt 0 95 Negativos 0 95 1 0 Resultado en los limites Se recomienda reptir el ensayo Si el resultado es todavia equivoco despu s de repetir el ensayo se deber obtener una nueva muestra despu s de un intervalo de tiempo adecuado gt 1 0 Positivo Se recomienda volver a analizar los ensayos que den un resultado posi tivo utilizando el protocolo cuantitativo Ensayo Cuantitativo La tabla siguiente debe emplearse nicamente como gu a de interpretaci n S
25. t 1 0 Positivo Se recomienda volver a analizar los ensayos que den un resultado posi tivo utilizando el protocolo cuantitativo Ensayo Cuantitativo Se recomienda que los usarios de Anti dsDNA de Kallestad establez can m rgenes normales para la poblaci n que acude a sus laboratorios Cada ensayo de Anti dsDNA de Kallestad deber considerarse por separado al calcular e interpretar los resultados Calcule el valor medio de absorbancia de cada calibrador ver Tabla 1 y tr celo en un gr fico como funci n de la concentraci n del calibrador log 10 en papel milimetrado De esta manera es posible leer las con centraciones de las muestras a partir de la curva de los calibradores La Figura 1 muestra un gr fico t pico La Figura 1 s lo sirve de referencia y no debe utilizarse para interpretar los resultados L50325601ES00 Manual de instrucciones 11 Una alternativa consiste en utilizar un programa adecuado de orde nador para dise o de curvas Se pueden emplear por ejemplo los dis e os de curvas log sticas de 4 par metros o log logit Las muestras con absorvancias superior del calibrador est n fuera del rango del ensayo y deben ser consideradas como gt 300 Ul ml Dichas muestras pueden diluirse seg n una diluci n adicional de 1 10 se recomienda Al calcular los resultados para cualquier muestra que haya sido diluida adicionalmente es necesario corregir la concentraci n obtenida por dicho factor de diluci n
26. tivo 4 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA R6 Soluci n de Parada 1 x 15 ml Xi B fer con 5 de hidr xido de sodio 0 4N sal de tetrasodio x EDTA y carbonato de sodio pH gt 10 Portatiras de micropocillos 1 Bolsa sellada con desecante 1 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1 Para diagn stico in vitro 2 Material biologico de origen humano usados en la preparaci n de los reactivos han sido testados y encontrados no reactivos a antigeno de superficie de la hepatitis B HBsAg anticuerpos frente al virus de la hepatitis C HCV y anticuerpos frente al virus de la inmunodeficiencia humana HIV 1 y HIV 2 Considerando que en la actualidad no existen m todos anal ticos que garanticen la ausencia absoluta de agentes infecciosos se recomienda manipular los reactivos as como las muestras de pacientes consider ndolos transmisores potenciales de enfermedades infecciosas 12 3 La azida s dica puede reaccionar con las tuber as de plomo y cobre y formar azidas met licas muy explosivas Al desechar los l quidos a adir agua en abundancia para evitar la acumulaci n de azida 13 4 PRODUCTOS PELIGROSOS Xn Xi R2CONCENTRADO DE Xn R3 BUFER DE LAVADO x DILUYEN TE DE MUESTRAS A 5X x 16X Nocivo Irritante Nocivo Contiene azida s dica Contiene azida s dica R22 36 52 53 526 36 37 39 46 61 R22 52 53 S26 36 37 39 46 61 Xi R5 SUBSTRATO Xi R6 SOLUCI N DE PARADA Irr
27. uorescencia con Crithidia luciliae 18 Manual de instrucciones L50325601ES00 KALLESTAD Anti dsDNA Microplate EIA Tabla 7 Correlaci n con el EIA Kallestad de anti dsDNA en Microplacas EIA Kallestad de anti dsDNA en microplacas Total 93 12 105 Prueba A 7 226 233 Total 100 238 338 Concordancia general 94 RESUMEN DEL PROCEDIMIENTO m 1 oO ON DN HWP A adir 100 ul Control de Reference y o Calibradores por duplicado A adir 100 ul de la muestra diluida Controles Positivos y Negativos diluidos a los micropocillos numerados de la tiras de pocillos Incubar a temperatura ambiente durante 60 5 minutos Lavar las tiras de pocillos 3 veces A adir 100 ul de Conjugado a cada pocillo Incubar a temperatura ambiente durante 30 5 minutos Lavar las tiras de pocillos 3 veces A adir 100 pl de Soluci n Substrato a cada pocillo Incubar las tiras a temperatura ambiente durante 30 5 minutos A adir 100 pl de Soluci n de Parada a cada pocillo Leer la absorbancia a 550 nm L50325601ES00 Manual de instrucciones 19 BIO RAD Miss Laboratories Clinical AUSTRALIA Bio Rad Laboratories Pty Ltd Unit 1 Block Y 391 Park Road Regents Park NSW 2143 A A Phone 61 2 9914 2800 Talafax 6 1 2 9914 2888 Diagnostics AUSTRIA Bio Rad Laboratories Ges m b H Hummelgasse 88 3 6 A 1130 Vienna Phone 43 1 8 8901 Telefax 43 1 8 6 5629 Gr oup BELGIUM Bio
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