CUBETA DE ELECTROFORESIS VERTICAL VERTICAL
Contents
1. 11 ted leading to a too high current and overheating 6 RESOLUCI N DE PROBLEMAS ascii 12 t a constant voltage 7 MANTENIMIENTO Y LIMPIEZA oo cssscnsessensevnsensennennenesnenennnetne 13 The gel dye front is not straight Verify that the cell is level during electropho ANEXO T CERTIFICADO CE oca aaa 15 resis The gel may be overheated Reduce the volta 1 APLICACIONES DEL INSTRUMENTO ge or current Use chilled electrophoresis buffer La cubeta de electroforesis vertical de Nahita est dise ada para la separaci n de pro te nas y cidos nucleicos en geles de poliacrilamida El equipo viene completo con todos los accesorios necesarios para la preparaci n y electroforesis de geles de 82x82 mm Bands are distorted Samples may contain a excess of salt Dialyze or desalt before loading on gel Samples may be too concentrated Dilute sam ples or reduce voltage Samples may contain precipitate material 2 DESCRIPCION Y COMPONENTES Centrifuge or filter before loading on gel The upper surface of the resolving gel may not be flat Use water saturated n butanol to 1 Tanque externo 6 E overlay the gel solution rather than water or buf 2 Conectores tipo banana fer 3 Soporte para geles Sample wells may contain small fragments of 4 Cu a polyacrylamide Rinse wells thoroughly before 5 Tapa loading samples 6 Cables fijos Lanes are broader at the bottom This is normal if adjoin2. Soporte para geles en el mismo soporte se lleva a cabo la polimerizaci n y posterior elec troforesis de los geles minimizando su manipulaci n y facilitando y agilizando el trabajo El soporte incluye 2 cu as de pl stico para asegurar una buena fijaci n de los geles y elec trodos de platino puro resistentes a la corrosi n y a elevadas temperaturas Cu as de pl stico Dispositivo para preparaci n de geles es un dis positivo exclusivo que presenta una junta de Junta silicona en la base proporcionando un perfecto sellado para evitar fugas de poliacrilamida que constituyen un riesgo t xico para el usuario Presenta tambi n unas palancas laterales con dos posiciones para la preparaci n de geles de 1 0 y 1 5 mm grosor respectivamente silicona Palanca Placas de vidrio el equipo incluye 2 placas de vidrio planas y 2 placas formateadas y con espa ciadores fijos de 1 0 y 1 5 mm grosor para la pre paraci n y electroforesis de los geles Adem s el equipo incluye tambi n una placa de vidrio grueso para utilizar en caso de realizar la elec troforesis de un nico gel Placa formateada Placa plana 2 UW Pag 4 Manual de instrucciones 53001001 Revision 1 Mayo 07 ENGLISH NOTE acrylamide is a powerful neurotoxin Always wear gloves when handling solutions gels or equipment that has been in contact with this substance and strictly observe the safety regulations indicated for its mani pulation and
3. 5 FORMULAS PARA LA PREPARACION DE GELES Y TAMPONES Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerizaci n de la acrilamida por acci n de un agente entrecruzador la bis acrilamida en presencia de un iniciador y un cataliza dor Como iniciador se suele utilizar TEMED N N N N tetrametilnediamina y como catalizador el i n persulfato S 0Og que se a ade en forma de persulfato am nico La porosidad del gel viene determinada por las proporciones relativas de poliacrilami da y bis acrilamida siendo menor el poro cuanta m s bisacrilamida vs acrilamida se use Los geles se denominan habitualmente en funci n de acrilamida bisacrilamida que con tienen siendo este valor el que determina el rango de separaci n del gel La mayor a de las prote nas se separan bien en el rango de 5 a 10 un menor porcentaje mayor tama o de poro es mejor para separar prote nas de gran tama o Generalmente la electroforesis de prote nas se realiza en condiciones desnaturalizantes es decir las prote nas migran totalmente desnaturalizadas pierden su estructura tridi mensional De este modo la migraci n es proporcional a la carga y el tama o de la mol cula pero no a su forma El agente desnaturalizante m s com nmente empleado es el dodecilsulfato s dico SDS A continuaci n se detallan las f rmulas para la preparaci n de geles discontinuos para separaci n de prote nas en condiciones desnaturalizantes y del tamp n de e
4. ll velo a un punto de recogida para el reciclaje de aparatos el ctricos y electr nicos No contiene elementos peligrosos t xicos para el humano pero una eliminaci n no adecuada perjudicar a al medio ambiente Los materiales son reciclables tal como se indica en la marcaci n Al reciclar materia les u otras formas de reutilizaci n de aparatos antiguos esta Ud Haciendo una contri buci n importante a la protecci n del medio ambiente Por favor p ngase en contacto con la administraci n de su comunidad para que le ase soren sobre los puntos de recogida TA Y j P g 14 Manual de instrucciones 53001001 Revisi n 1 Mayo 07 ENGLISH ISO 9001 2000 DECLARACI N CE DE CONFORMIDAD CUBETA DE ELECTROFORESIS VERTICAL NAHITA de Auxilab S L a la Directiva de M quinas 89 392 CEE modificada y a las reglamentaciones adoptadas para su transposici n ba AUXILAB S L Fe ER 1015 1999 NOMBRE DEL FABRICANTE IMPORTADOR AUXILAB S L DIRECCI N Pol gono Morea Norte 8 31191 Beri in Navarra DECLARAMOS QUE CUBETA ELECTROFORESIS VERTICAL 53001001 Est n dise ados y fabricados de acuerdo a Directiva 89 392 CEE incluidas las modificaciones de la misma y las regla mentaciones nacionales que la transponen Directiva 89 336 CEE modificada sobre compatibilidad electromagn tica Directiva 73 23 CEE modificada sobre seguridad el ctrica Y que se han aplicado las siguientes normas armonizadas o parte de
5. To get the best results and a higher duration of the vertical electrophoresis cell it is essential to follow the processes of use Note All the processes of use mentioned below will not have any value unless you keep a continued and careful maintenance Please follow the processes of use of this manual This manual should be available for all users of this equipment Always use original components and supplies Other devices can be similar but they can damage the equipment Never autoclave or dry heat sterilize the apparatus or components Do not expose the apparatus or components to phenol benzene acetone halogenated hydrocarbon solvents or undiluted laboratory alcohols Avoid prolonged exposure of the apparatus or components to the UV light Periodically make a simple and routine inspection of the electrical components to ensu re both the safety and good performance of the equipment If the banana connectors of either the gel support or the power cords can be roc ked easily or present signs of corrosion replace them If power cords show any sign of wear and damage replace them immediately Cleaning After each use wash all components gently with water and non abrasive detergents and rinse well in deionized water Note be careful not to damage the electrode wire when cleaning the gel support Wipe dry with a soft cloth or allow to air dry Never use scourers or substances that can grate as they damage the electroph
6. ellas UNE 292 1 2 2 A1 UNE EN 1050 UNE EN 614 1 UNE EN 1037 UNE EN 1088 UNE EN 547 UNE EN 953 UNE EN 294 UNE EN 418 UNE EN 894 1 UNE EN 894 2 UNE EN 954 1 UNE EN 60204 1 UNE 61010 1 A2 UNE EN61010 2 051 BERIAIN a 04 de JUNIO 2007 Fdo ALFONSO AINCIBURU SANZ DIRECTOR GERENTE Pol gono Morea Norte 8 31191 Beriain Navarra Spain Tel 948 310 513 Fax 948 312 071 Internet www auxilab es Email correo auxilab es Revision 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 Pag 15 yi 7
7. fixed power leads with banana connector to be plugged to a power supply Gel support gel casting and electrophoresis are performed at the same support mini mizing gel manipulation and speeding up and making work easier The support includes 2 plastic wedges to hold the gel assembly and pure platinum electrodes resistant to corro sion and high temperatures Cu as de pl stico Gel casting device it is an exclusive device that presents a silicon rubber cushion on its Rubber base allowing a perfect sealing to avoid pol cushion yacrylamide leaks that constitute a toxic risk for the user It also presents two white handles with two positions for casting gels of 1 0 and 1 5 mm thick respectively Crank Glass plates the equipment includes 2 flat glass plates and 2 notched plates with fixed spa cers of 1 0 and 1 5 mm thick for casting and elec trophoresis of gels The equipment also includes a thick glass plate to use in case of carrying out a single gel electrophoresis placa formateada placa plana Sey ran Page 18 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 CASTELLANO Determinados reactivos indicados en este manual son peligrosos El usuario deber observar estrictamente las normas de seguridad indicadas para dichos productos El usuario deber as mismo seguir las normas de seguridad espec ficas para los equi pos utilizados en el procedimiento indicado en este manual p ej fuentes de alimenta ci n
8. in the form of ammonium persulphate as the catalytic agent Gel porosity depends on the relative proportions of polyacrylamide and bis acrylami de a higher bis acrylamide vs acrylamide proportion generates a smaller pore Usually gels are designated with the acrylamide bisacrylamide that contain thus this value determinates the separation range of the gel Most of proteins are well separated in 5 10 gels a lower percentage larger pore is better to separate larger proteins Protein electrophoresis is usually performed in denaturalizing conditions it means proteins lose their three dimensional structure and migrate completely denaturalized Migration is therefore proportional to the charge and size of the molecule but not to its shape The most commonly used denaturalizing agent is the sodium dodecyl sulphate SDS The formulas for preparation of electrophoresis buffer and discontinuous denaturing gels for protein separation are shown below TA Fis j Page 24 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 CASTELLANO Peines el equipo se suministra con un con junto de 8 peines de 1 0 y 1 5 mm de grosor y Canna con 10 6 15 dientes 3 ESPECIFICACIONES TECNICAS Referencia 53001001 N geles 162 Dimensiones gel 82x82 mm Dimensiones placa vidrio 102x82 mm N muestras 10 15 por gel Grosor peines 1y15mm Volumen sol tamp n aprox 500 mL Condiciones trabajo 0 40 C y lt 80 HR Voltaje
9. mM SDS 0 1 p v 6 RESOLUCION DE PROBLEMAS PROBLEMA COMENTARIOS La placas de vidrio se rompen La cu a para sujetar el gel esta demasiado apretada El voltaje o la corriente son demasiado eleva dos produciendo un sobrecalentamiento El tamp n de electroforesis est demasiado concentrado haciendo que la corriente sea dema siado alta a un voltaje constante y produciendo sobrecalentamiento Compruebe que la cubeta est bien nivelada durante la electroforesis El gel puede estar sobrecalentado Reduzca el voltaje o la corriente Utilice tamp n de electrofo resis previamente enfriado El frente del gel no es recto Y j P g 12 Manual de instrucciones 53001001 Revisi n 1 Mayo 07 ENGLISH INDEX OF CONTENTS 1 USES OF THE INSTRUMENT 3 TECHNICAL SPECIFICATIONS 4 OPERATING MODE 1 USES OF THE INSTRUMENT Nahita horizontal electrophoresis cell is specially designed for separating proteins and nucleic acids in polyacrylamide gels The equipment is provided complete with all the necessary accessories for preparation and electrophoresis of 82x82 mm gels 2 DESCRIPTION AND COMPONENTS 1 Tanque externo 2 Conectores tipo banana 3 Soporte para geles 4 Cu a 5 Tapa 6 Cables fijos Version 1 May 07 Instruction manual 53001001 Page 17 y ENGLISH Thank you for choosing this equipment We sincerely wish that you enjoy your Nahita vertical electrophoresis cell We highly
10. ENGLISH ANEX I CE CERTIFICATE AENOR ISO 9001 2000 is AUXILAB S L E as CE DECLARATION OF CONFORMITY HORIZONTAL ELECTROFORESIS CELL of Auxilab S L for the Directive of machi nes 89 392 CEE modified and the regulations adopted for its transposition NAME OF THE MANUFACTURER IMPORTER AUXILAB S L ADDRESS Pol gono Morea Norte 8 31191 Beri in Navarra WE STATE THAT HORIZONTAL ELECTROFORESIS CELL 53001001 Are designed and manufactured according to Directive 89 392 CEE including the modifications and the national regulations that transpose them Directive 73 23 CEE modified over the electric security Directive 89 336 CEE modified over the electromagnetic compatibility And that the following harmonized rules have applied or part of them UNE 292 1 2 2 A1 UNE EN 1050 UNE EN 614 1 UNE EN 1037 UNE EN 1088 UNE EN 547 UNE EN 953 UNE EN 294 UNE EN 418 UNE EN 894 1 UNE EN 894 2 UNE EN 954 1 UNE EN 60204 1 UNE 61010 1 A2 UNE EN61010 2 051 BERIAIN 04th JUNE 2007 Signed by ALFONSO AINCIBURU SANZ DIRECTOR MANAGER Poligono Morea Norte 8 31191 Beriain Navarra Spain Tel 948 310 513 Fax 948 312 071 Internet www auxilab es Email correo auxilab es TA Ta Page 28 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 ai O J CUBETA DE ELECTROFORESIS VERTICAL VERTICAL ELECTROFORESIS CELL Este manual es parte inseparable del aparato por lo que debe estar disponible a todos los usuarios d
11. Las calles son m s anchas en la Esto es normal si las calles adyacentes no se parte inferior que en la parte superior cargan con muestras similares Es tambi n nor del gel mal en geles de gradiente de acrilamida La migraci n del colorante del fren El tamp n de electroforesis est demasiado te del gel es m s lenta de lo esperado concentrado Compruebe el procedimiento para la preparaci n del tamp n Si la concentraci n es elevada a corriente constante el voltaje ser menor del esperado Compruebe los par metros voltaje y corrien te de la fuente de alimentaci n Compruebe las conexiones de los cables y de la tapa La migraci n del colorante del fren El tamp n de electroforesis est demasiado te del gel es m s r pida de lo espera diluido Compruebe el procedimiento para la do preparaci n del tamp n Compruebe los par metros voltaje y corrien te de la fuente de alimentaci n 7 MANTENIMIENTO Y LIMPIEZA Para un adecuado funcionamiento de la cubeta de electroforesis vertical es necesario seguir algunas recomendaciones Nota Todas las normas de utilizaci n citadas anteriormente carecer n de valor si no se realiza una continua labor de mantenimiento Revisi n 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 P g 13 Y 7 CASTELLANO Siga las instrucciones y advertencias relativas a este manual Tenga este manual siempre a mano para que cualquier persona pueda consultarlo Utilice sie
12. are not covered by the product s warranty The warranty neither covers piece s deterioration due to the course of time Please make sure you keep the invoice either for having the right to claim or asking for warranty coverage In case you have to send the equipment to Nahita Technical Assistance Department you should enclose the original invoice or a copy as guarantee Please do not forget filling the warranty certificate and send it before 15 days after the date of purchase Manufacturer reserves the right to modify or improve the manual or equipment DISINFECTED THEY WOULD NOT BE ALLOWED TO REPAIR BY OUR TECHNICAL SERVICE t ATTENTION IF EQUIPMENTS ARE NOT PROPERLY CLEAN AND INDEX OF LANGUAGES Spanish 2 15 PP E E E E E E E 16 28 TAk ou Page 16 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 A O J CASTELLANO Las bandas estan distorsionadas Las muestras contienen un exceso de sal Dialice o reduzca la concentraci n de sal en las muestras antes de cargarlas en los pocillos Las muestras est n demasiado concentradas Dil yalas o reduzca el voltaje Las muestras contienen precipitados Centrifugue o filtre las muestras antes de la carga del gel El l mite superior del gel resolutivo no es plano Utilice n butanol saturado en agua para cubrir el l mite superior del gel en lugar de agua o tamp n Los pocillos contienen restos de poliacrilami da Lave bien los pocillos antes de cargar las muestras
13. combs 2 combs 1 0 mm thick and with 10 teeth 2 combs 1 0 mm thick and with 15 teeth 2 combs 1 5 mm thick and with 10 teeth 2 combs 1 5 mm thick and with 15 teeth Warranty User s manual We will only accept any equipment return within 15 days after delivery and provided it comes in its original wrapping 4 2 Operating mode Note the equipment is exclusively designed for laboratory purposes ambient tempera te must be 0 40 C and relative humidity must not exceed the 80 Prior to use put the electrophoresis cell on a plane smooth and vibration free surface Assembly for gel casting Make sure that the flat glass plates the notched glass plates the combs the wedges and the gel support are perfectly clean and dry before assembling the different components Put a notched glass plate on a flat plate so as the fixed spacers stay between both plates The edges of both plates must be perfectly aligned to get this put the plates vertically on a plane surface and make sure that the lateral edges are aligned Put both plates into a compartment of the gel support so as the notched plate faces inside Holding the plates insert a plastic wedge the flan side is in contact with the glass plates and push it downwards to perfectly hold the glass plates Notched glass plate Glass plate Gel casting support Wedge Note if a single gel electrophoresis is going to be performed put the thick glass plate into the other
14. compartment of the gel support and hold it with the other plastic wedge In case of a double gel electrophoresis proceed as previously indicated to prepare the second gel pe ran Page 20 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 CASTELLANO Gire las palancas del dispositivo para la preparaci n de los geles hasta su posi ci n inicial Retire el soporte con los geles del dispositivo e introd zcalo en el tanque de electroforesis Nota el dise o especial del tanque y del soporte para geles solamente per mite que el soporte sea colocado en la posici n correcta Retire cuidadosamente el peine tirando de l verticalmente y acl relo con abun dante agua desionizada Llene la parte central del soporte para geles con unos 150 mL de tamp n de electroforesis Aseg rese de que los pocillos est n completamente cubiertos de tamp n de electroforesis Lave los pocillos con agua desionizada o con tamp n de electroforesis para eli minar posibles burbujas formadas o restos de acrilamida Para ello ay dese con una pipe ta o jeringuilla Con ayuda de una pipeta cargue las muestras en los pocillos El volumen de muestra que se puede cargar en cada pocillo dependiendo del grosor del gel se muestra en la tabla 2 Nota las muestras deben tener la cantidad suficiente de glicerol para hacer que la muestra sea m s densa que la soluci n de electroforesis y as caiga hacia el fondo del pocillo La visualizaci n de los pocillos pued
15. disposal of wastes 1 Resolving gel CHART 3 To prepare 10 mL of acrylamide solutions of different percentages Component Volume mL according to acrylamide 7 5 10 12 5 15 Acrylamide stock solution 29 2 5 3 3 4 2 4 0 w v acrylamide 1 w v bisacry lamide in deionized water 1 5 M Tris HCl pH 8 8 2 5 2 5 2 5 2 5 10 w v SDS 0 1 0 1 0 1 0 1 Deionized water 4 8 4 0 3 1 2 3 10 w v ammonium persulphate 0 1 0 1 0 1 0 1 TEMED 0 01 0 01 0 01 0 01 2 Stacking gel CHART 4 To prepare 10 mL of 4 acrylamide solution Component Volume mL Acrylamide stock solution 29 w v acrylamide 1 3 1 w v bisacrylamide in deionized water 1 5 M Tris HCl pH 8 8 2 5 10 w v SDS 0 1 Deionized water 6 0 10 w v ammonium persulphate 0 1 TEMED 0 001 3 Electrophoresis buffer CHART 5 Final concentration of the different components of the electrophoresis buffer Final pH must be 8 3 Component Final concentration Tris base 24 8 M Glycine 192 mM SDS 0 1 w v Version 1 May 07 Instruction manual 53001001 Page 25 4 7 ENGLISH red to one of the glass plates Transfer the gel to a proper container for further staining or electroblotting Note for electroblotting please refer to Nahita Transfer Module ref 53001501 user s manual Clean the tank and all the accessories with deionized water Allow to air dry Security The vertical electrophoresis cell mus
16. e estar disponible para todos los usuarios del equipo Debe manipularse siempre con cuidado evitando los movimientos bruscos golpes cai das de objetos pesados o punzantes Cualquier duda puede ser aclarada por su distribuidor instalaci n modo de uso fun cionamiento Usted puede tambi n mandarnos sus dudas o sugerencias a la siguiente direcci n de correo del Servicio T cnico Nahita asistencia auxilab es o bien llamando al Tel 807117040 0 30 Euros min Este equipo est amparado por la Ley de garant as y bienes de consumo 10 2003 No se consideran en garant a las revisiones del equipo Los accesorios as como su p rdida no est n cubiertos por dicha garant a Tampoco estar n cubiertos por el periodo de garant a las piezas en su desgaste por uso natural Aseg rese de guardar la factura de compra para tener derecho de reclamaci n o pres taci n de la garant a En caso de enviar el equipo al Servicio T cnico adjunte factura o copia de la misma como documento de garant a Rellene y env e la garant a antes de los 15 d as despu s de la compra El fabricante se reserva los derechos a posibles modificaciones y mejoras sobre este manual y equipo A ATENCI N NO SE ADMITIR NING N APARATO PARA REPA RAR QUE NO EST DEBIDAMENTE LIMPIO Y DESINFECTADO INDICE DE IDIOMAS Castellano 2 15 E P g 2 Manual de instrucciones 53001001 Revisi n 1 Mayo 07 ENGLISH 7 MAINTENANCE AND CLEANING
17. e que vengan completos en su embalaje original 4 2 Modo de uso Nota el equipo est dise ado exclusivamente para su uso en el laboratorio la tempe ratura ambiente debe ser de 0 40 C y la humedad relativa no debe exceder del 80 Para su utilizaci n coloque la cubeta de electroforesis en una superficie plana lisa y libre de vibraciones Montaje para preparaci n del gel Aseg rese de que las placas de vidrio planas las placas formateadas los peines las cu as y el soporte para geles est n perfectamente limpios y secos antes de proceder al montaje Superponga sobre una placa de vidrio plana una placa de vidrio formateada de mane ra que los espaciadores fijos queden entre ambas placas Ambas placas deben estar per fectamente alineadas en sus bordes para ello col quelas verticalmente sobre una super ficie plana y aseg rese de que los bordes laterales est n alineados Inserte las placas colocadas de esta manera en uno de los compartimentos del soporte para geles de manera que la placa formateada quede hacia el interior Sin soltar las placas inserte una de las cu as la parte plana queda en contacto con las placas de vidrio y emp jela hacia abajo para que las placas de vidrio queden bien sujetas placa formateada placa plana soporte para geles cu a a ran Pag 6 Manual de instrucciones 53001001 Revision 1 Mayo 07 ENGLISH must have enough glycerol to be denser than the electrophoresis buffer Well vis
18. e ser dif cil para facilitar su localizaci n puede uti lizar dos m todos a Antes de introducir el soporte con los geles en el tanque de electroforesis y con el peine todav a colocado marque con un rotulador permanente los l mites de los pocillos sobre la placa de vidrio no formateada b Ilumine la zona de trabajo con una fuente de luz situada justo detr s de la cubeta de electroforesis TABLA 2 Volumen m ximo de muestra en funci n del tipo de peine y del grosor del gel Grosor gel mm N dientes Vol pocillo H L 1 0 10 50 15 30 1 5 10 75 15 45 Nota los vol menes indicados son aproximados Nota Para asegurar unos buenos resultados y una migraci n uniforme del frente del gel no deje ning n pocillo vac o en aquellos pocillos que queden libres a ada tamp n de carga Llene el tanque con unos 250 mL de tamp n de electroforesis El nivel de tamp n no debe sobrepasar la altura a la que est n los pocillos Revisi n 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 P g 9 ki CASTELLANO Electroforesis Coloque la tapa sobre el tanque de electroforesis Nota El dise o especial de la tapa nicamente permite colocarla en una posici n asegurando siempre que el cable negro est conectado al electrodo negro y el cable rojo al electrodo rojo Conecte los cables con la fuente de alimentaci n Encienda la fuente de alimentaci n y seleccione los par metros deseados La electroforesis de geles e
19. ectrophoresis voltage 200 V Running time 45 60 min Cell dimensions LxWxH 100x140x150 mm 4 OPERATING MODE 4 1 Preliminary inspection Unwrap the vertical electrophoresis cell take off all protections and make sure it does not present any damage because of the shipment In case it presents any damage tell it immediately to your transport agent or dealer so that they can make the claims in the correct time limit Please keep the original wrapping you will always need it for returns enclosed with all the accessories supplied Please check that all the accessories are enclosed with the equipment 1 External tank 1 Lid with fixed leads 1 Gel support 2 plastic wedges 1 Gel casting device 2 Silicon rubber cushions Set of glass plates 4 flat glass plates 2 flat and notched glass plates with 1 0 mm thick fixed spacers 2 flat and notched glass plates with 1 5 mm thick fixed spacers Version 1 May 07 Instruction manual 53001001 Page 19 4 ENGLISH Components Nahita vertical electrophoresis cell is supplied together with all the necessary compo nents for preparation and electrophoresis of polyacrylamide gels 82x82 mm External tank made of a unique seamless high quality acrylic material piece to avoid leakage and breakage It is a durable and transparent device resistant to chemical agents and high pressure and temperatures Lid it is also made of a high quality and resistant material It presents two
20. el equipo Le recomendamos leer atentamente el presente manual y seguir rigurosamente los proce dimientos de uso para obtener las maximas prestaciones y una mayor duraci n del mismo This manual should be available for all users of these equipments To get the best results and a higher duration of this equipment it is advisable to read carefully this manual and follow the processes of use Revisi n 1 Mayo 2007 Manual de instrucciones 53001001 P g 1 Y CASTELLANO Gracias por haber adquirido este equipo Deseamos sinceramente que disfrute de la cubeta de electroforesis vertical Nahita Le recomendamos que cuide el equipo conforme a lo expuesto en este manual Nahita desarrolla sus productos seg n las directrices del marcado CE y haciendo hin capi en la ergonom a y seguridad del usuario La calidad de los materiales empleados en la fabricaci n y el correcto proceder le per mitir n disfrutar del equipo por muchos a os El uso incorrecto o indebido del equipo puede dar lugar a accidentes descargas el ctri cas cortocircuitos fuegos lesiones etc Lea el punto de Mantenimiento donde se recogen aspectos de seguridad LEA DETALLADAMENTE ESTE MANUAL DE INSTRUCCIONES ANTES DE OPERAR CON ESTE EQUIPO CON EL FIN DE OBTENER LAS M XIMAS PRES TACIONES Y UNA MAYOR DURACI N DEL MISMO Tenga especialmente presente lo siguiente Este manual es parte inseparable de la cubeta de electroforesis vertical Nahita por lo que deb
21. electroforesis 200 V Tiempo de electroforesis 45 60 min Dimensiones cubeta LxAxH 100x140x150 mm 4 MODOS DE USO 4 1 Inspecci n preliminar Desembale la cubeta de electroforesis vertical retire todas las protecciones y aseg rese de que no presenta ning n da o debido al transporte De ser as comuniquelo inmedia tamente a su transportista o suministrador para que pueda hacer las debidas reclamacio nes en el plazo establecido Guarde el embalaje ya que siempre se deben realizar las devoluciones en su embalaje original con todos los accesorios suministrados Compruebe los accesorios que usted debe recibir junto al equipo 1 Tanque externo 1 Tapa con cables fijos 1 Soporte para geles 2 Cu as de pl stico 1 Dispositivo para preparaci n de geles 2 Almohadillas de silicona Juego de placas de vidrio 4 placas de vidrio planas 2 placas de vidrio planas y formateadas con espaciadores fijos de 1 0 Revisi n 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 P g 5 Le CASTELLANO 2 placas de vidrio planas y formateadas con espaciadores fijos de 1 5 mm 1 placa de vidrio gruesa para electroforesis de 1 unico gel Juego de peines 2 peines de 1 0 mm grosor y 10 dientes 2 peines de 1 0 mm grosor y 15 dientes 2 peines de 1 5 mm grosor y 10 dientes 2 peines de 1 5 mm grosor y 15 dientes Garantia Manual de instrucciones Solo aceptamos devoluciones de equipos en los 15 dias posteriores al envio y siem pr
22. en electrophoresis is complete the marker dye front has reached the bottom of the gel turn the power supply off and disconnect the leads After electrophoresis Remove the lid Gently pull out the wedge that holds the gel it may be slippery in detergent containing solutions Take the gel support out from the electrophoresis tank Properly discard the electrophoresis buffer Do not reuse the buffer Take the glass plate assembly with the gel out from the gel support and put them on a paper towel Use a thin spatula or similar to separate the glass plates The gel will be adhe Version 1 May 07 Instruction manual 53001001 Page 23 4 ENGLISH Gel thickness Acrylamide volume 1 gel 2 gels Discontinuous Continuous Discontinuous Continuous 1 0 mm 3 4 mL 6 7 mL 6 7 mL 13 5 mL 15mm 5mL 10 mL 10 mL 20 mL Carefully pipet the resolving acrylamide gel filling the space between both glass plates until 1 or 2 mm above the desired level Overlay the solution with a few drops of water saturated n butanol to eliminate bubbles and separate the gel from the air oxy gen inhibitor of polymerization Wait until the gel polymerizes 15 30 min polymerization is faster at 4 C Note keep the assembly vertical while the acrylamide polymerizes After the resolving gel has polymerized pour off any unpolymerized solution and n butanol Rinse the top of the gel with deionized water and drain thoroughly Add the stacking gel s
23. grosor del gel cada palanca presenta marcas con indicaci n 1 5 6 1 0 que hacen referencia al grosor del gel si est preparando geles de 1 5 mm grosor deber girar las palancas hasta que las fle chas se alen las marcas con la anotaci n 1 5 Preparaci n del gel Nota no toque las palancas del dispositivo durante todo el proceso de preparaci n del gel ya que se podr a aflojar el montaje produciendo fugas de las soluciones de acrilami da L Sistema tamp n discontinuo Este sistema es especialmente adecuado para analizar muestras diluidas sin perder resoluci n La preparaci n del gel se debe realizar con dos tampones distintos De esta manera el primer tamp n primera parte del gel stacking gel asegura la migraci n de todas las prote nas en el frente de migraci n produci ndose la acumulaci n de todas las prote nas cargadas en el pocillo Cuando el frente de migraci n llega al segundo tamp n gel resolutivo o de separaci n comienza realmente la separaci n de las prote nas UE Revisi n 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 P g 7 yi 7 CASTELLANO El primer gel stacking es de mayor poro menor porcentaje de acrilamida bisacrila mida y tiene un pH m s cido que el segundo gel que es el que realmente separa las pro te nas Para la preparaci n de este tipo de geles proceda de la siguiente manera Prepare el volumen de soluci n de acrilamida seg n el grosor del gel Tabla 1 TABLA 1 Vo
24. ing lanes are not loa than the top ded with similar samples It is also normal for polyacrylamyde gradient gels Dye migration is slower than expec The electrophoresis buffer may be too concen ted trated Check buffer preparation procedure If the concentration is high at constant current the vol tage will be lower than usual Check voltage or current settings on power supply Check for secure connections of lid and power cords Dye migration is slower than expec The electrophoresis buffer may be too diluted ted Check buffer preparation procedure Check voltage or current settings on power 1 supply u ae Th ki Page 26 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 Revision 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 Pag 3 Y j cf CASTELLANO Componentes La cubeta de electroforesis vertical de Nahita se suministra junto con todos los compo nentes necesarios para la preparaci n y electroforesis de geles de poliacrilamida de 82x82 mm Tanque externo fabricado en material acr lico de alta calidad y en una sola pieza sin jun turas que evita las fugas de l quido y las roturas Es un dispositivo duradero y transpa rente resistente a la acci n de agentes qu micos y presi n y temperaturas elevadas Tapa al igual que el tanque est fabricada con un material de elevada calidad y resis tencia Presenta dos cables fijos de alimentaci n con conector tipo banana para conectar a la fuente de alimentaci n
25. lectroforesis NOTA la acrilamida es una potente neurotoxina Lleve guantes en todo momento cuando manipule soluciones geles o equipos que hayan estado en contacto con esta sustancia y observe estrictamente las normas de seguridad indicadas para su manipulaci n y eliminaci n de residuos 1 Gel resolutivo TABLA 3 F rmula para preparar 10 mL de soluci n de acrilamida de distinto Componente Volumen mL seg n el acrilamida 7 5 10 12 5 15 Soluci n stock de acrilamida 29 2 5 3 3 4 2 4 0 p v acrilamida 1 p v bisacrila mida en agua desionizada 1 5 M Tris HCl pH 8 8 2 5 2 5 2 5 2 5 10 p v SDS 0 1 0 1 0 1 0 1 Agua desionizada 4 8 4 0 3 1 2 3 10 p v Persulfato am nico 0 1 0 1 0 1 0 1 TEMED 0 01 0 01 0 01 0 01 Revisi n 1 Mayo 07 Manual de instrucciones 53001001 P g 11 Y CASTELLANO 2 Gel de acumulaci n stacking gel TABLA 4 F rmula para preparar 10 mL de soluci n de acrilamida al 4 Componente Volumen mL Soluci n stock de acrilamida 29 p v acrilamida 1 3 1 p v bisacrilamida en agua des ionizada 1 5 M Tris HCl pH 8 8 2 5 10 p v SDS 0 1 Agua desionizada 6 0 10 p v Persulfato am nico 0 1 TEMED 0 001 3 Tamp n de electroforesis TABLA 5 Concentraci n final de los distintos componentes del tamp n de electrofore sis El pH final debe ser de 8 3 Componente Concentraci n final Tris base 24 8 M Glicina 192
26. lumen de soluci n de acrilamida en funci n del grosor del gel En los geles discontinuos el volumen indicado hace referencia al volumen de soluci n que hay que preparar para cada tipo de gel stacking o resolutivo Grosor gel Volumen acrilamida 1 gel 2 geles Discontinuo Continuo Discontinuo Continuo 1 0 mm 3 4 mL 6 7 mL 6 7 mL 13 5 mL 15mm 5mL 10 mL 10 mL 20 mL Pipetee cuidadosamente la soluci n de gel resolutivo de acrilamida llenando el espacio entre las dos placas de vidrio hasta 1 6 2 mm por encima del nivel deseado Cubra el borde del gel con unas gotas de n butanol saturado en agua para eliminar posibles burbujas y separar el gel del oxigeno del aire inhibidor de la polimerizaci n Espere hasta que el gel polimerice 15 30 min la polimerizaci n es m s r pida a 4 C Nota mantenga siempre el montaje en posici n vertical durante la polimerizaci n Cuando el gel resolutivo haya polimerizado retire los restos de n butanol y acrilamida sin polimerizar Lave la parte superior del gel con agua desionizada y retire completa mente el agua de lavado A ada con una pipeta la soluci n de gel de apilamiento stacking gel hasta unos 2 mm por debajo del borde de la placa formateada Elimine cualquier burbuja que se haya formado Inserte totalmente el peine poniendo especial cuidado en que no queden atrapadas bur bujas entre y bajo los dientes del peine Deje que el gel polimerice totalmente 2 Sistema tamp n co
27. mpre componentes y repuestos originales Puede ser que otros dispositivos sean parecidos pero su empleo puede da ar el equipo Nunca esterilice mediante autoclave o calor los distintos componentes de la cubeta No exponga el aparato a productos como fenol benceno acetona solventes hidrocar bonatos halogenados o alcoholes de laboratorio no diluidos Evite la exposici n prolongada del equipo o sus componentes a la luz UV Realice peri dicamente una sencilla inspecci n de los componentes el ctricos para ase gurar un buen funcionamiento del equipo y garantizar la seguridad del usuario Si los conectores tipo banana del soporte para geles o de los cables se mueven o balancean o si muestran signos de corrosi n deber reemplazarlos Si los cables est n da ados o muestran signos de desgaste deber reemplazar los Limpieza Despu s de cada uso limpie los distintos componentes del equipo suavemente con agua y detergentes no abrasivos y acl relos con agua desionizada Nota ponga especial cuidado en no da ar el cable de los electrodos cuando limpie el soporte para geles Seque los componentes con un trapo suave o d jelos secar al aire Nunca utilice productos abrasivos estropajos o productos que puedan rayar ya que deterioran el equipo limitando su vida til INSTRUCCIONES SOBRE PROTECCI N DEL MEDIO AMBIENTE No se deshaga de este equipo tir ndolo a la basura ordinaria cuando haya terminado su ciclo de vida
28. nding on the gel thickness each handle presents marks with 1 5 or 1 0 indications that refer to the gel thickness if a 1 5 mm thick gel is going to be cast handles should be turned until the arrows point at the 1 5 marks Gel casting Note Do not move the handles of the gel casting device during gel casting process since the assembly could be loosened resulting in acrylamide leaks 1 Discontinuous buffer system gels This system is specially recommended to analyze diluted samples without resolution lost Gel casting must be performed with two different buffers The first buffer stacking gel assures the accumulation of all proteins loaded in each well at the migration front When the migration front reaches the second buffer resolving gel the separation of the different proteins begins The first gel stacking gel presents a larger pore lower acryla mide bisacrylamide percentage and presents a more acid pH than the resolving gel For casting this type of gels procceed as fllows Prepare the volume of acrylamide solution depending on gel thickness Chart 1 CHART 1 Volume of acrylamide solution that must be prepared depending on gel thick ness In discontinuous gels the indicated volume refers to the volume of solution that must be prepared for each type of gel stacking or resolving gel Version 1 May 07 Instruction manual 53001001 Page 21 4 ENGLISH 1 thick glass plate for single gel electrophoresis Set of
29. ntinuo Prepare el volumen de soluci n de acrilamida necesario seg n el grosor del gel Tabla 1 Pipeteando cuidadosamente llene con soluci n de acrilamida el espacio entre las dos placas de vidrio hasta unos 2 mm por debajo del borde de la placa formateada Elimine cualquier burbuja que se haya formado Inserte totalmente el peine poniendo especial cuidado en que no queden atrapadas bur bujas entre y bajo los dientes del peine Deje que el gel polimerice totalmente Montaje para electroforesis del gel y carga de muestras La electroforesis del gel se realiza en el mismo soporte en el que ha sido preparado minimizando su manipulaci n y agilizando enormemente el proceso Proceda de la siguiente manera pe Uy Pag 8 Manual de instrucciones 53001001 Revision 1 Mayo 07 Take the exclusive gel casting device 5 and put on its base a silicon rubber cushion l pocoo Note The cushion must be perfectly clean and dry After gel casting remove the silicon rubber cushion rinse it with water and allow to air dry Do not use any other method to clean the silicon cushion Put the gel support into the gel cas ting device The base of the gel support must be perfectly sealed with the silicon rubber cus hion to avoid acrylamide solution leaks Press inwards the white handles placed on each side of the gel casting device turn them simultaneously until the arrows point at the correct position depe
30. olution to within 2 mm of the top of the notched plate Eliminate any bubble formed Insert completely the comb Be careful not to trap bubbles under and between the comb teeth Allow the acrylamide solution to polymerize completely 2 Continuous buffer system gels Prepare the volume of acrylamide solution depending on gel thickness Chart 1 Carefully pipet the acrylamide solution filling the space between both glass pla tes to within 2 mm of the top of the notched plate Eliminate any bubble formed Insert completely the comb Be careful not to trap bubbles under and between the comb teeth Allow the acrylamide solution to polymerize completely Assembly for gel electrophoresis and sample loading Gel electrophoresis is performed on the same support in which it has been cast mini mizing gel manipulation and speeding up and making work easier Proceed as follows Turn the handles of the gel casting device to their original position Take off the support with the polymerized gels from the gel casting device and put it into the electrophoresis tank Note the special design of the tank and the gel sup port allows to fit them at the correct position Carefully remove the comb by pulling it vertically and rinse with deionized water Fill the central part of the gel support with approximately 150 mL of electro phoresis buffer Make sure that the wells are completely covered with buffer Carefully rinse the well
31. oresis cell and produce an early ageing of the equipment ATTENTION IF EQUIPMENTS ARE NOT PROPERLY CLEAN AND DISINFECTED THEY WOULD NOT BE ALLOWED TO REPAIR BY OUR TECHNICAL SERVICE INSTRUCTIONS ON ENVIRONMENT PROTECTION At the end of its life cycle please do not dispose of this equipment by throwing it in the usual garbage hand it over a collection point for the recycling of electrical and electronic appliances It does not contain dangerous or toxic products for humans but a non adequate disposal would damage the environment The materials are recyclable as mentioned in its marking By recycling material or by other forms of re utilization of old appliances you are making an important contribu tion to protect our environment Please inquire at the community administration for the authorized disposal location N N E H Version 1 May 07 Instruction manual 53001001 Page ENGLISH CASTELLANO 6 TROUBLESHOOTING INDICE DE CONTENIDOS PROBLEM COMMENTS 1 APLICACIONES DEL INSTRUMENTO wooo ccccsssscsesecstsscstssestssestsatssseeneses 3 The glass plates crack The wedge to hold the gel is too tight 2 DESCRIPCION Y COMPONENTES TN 3 The voltage or current setting may be too 3 ESPECIFICACIONES TECNICAS deccccccinoconinocnncnocnncnonnnconnnenonnnncnenncnnnnnnnnennernar nacen 5 high causing overheating 4 MODO DE USO M 5 Electrophoresis buffer may be too concentra 5 F RMULAS PARA LA PREPARACI N DE GELES Y TAMPONES
32. quipo y su manejo mediante el manual de uso Coloque la cubeta de electroforesis sobre una mesa horizontal plana y estable No coloque la cubeta de electroforesis en zonas pr ximas a fuentes de calor mecheros sopletes Evite las vibraciones en el lugar de trabajo e La cubeta de electroforesis vertical est preparada para ser conectada a una fuente de alimentaci n de CA Una manipulaci n no adecuada puede resultar en quemaduras heri das y da os a la instalaci n el ctrica Nunca conecte la cubeta de electroforesis a la fuente de alimentaci n antes de comen zar el experimento La corriente el ctrica proporcionada por la fuente de alimentaci n se transmite a la cubeta a trav s de los cables y la conexi n de la tapa Nunca intente utilizar la cubeta de electroforesis sin la tapa puesta Apague siempre la fuente de alimentaci n antes de abrir la cubeta y retirar la tapa Nunca utilice equipos da ados rotos o con fugas de l quido Tbe i ae gt E P g 10 Manual de instrucciones 53001001 Revisi n 1 Mayo 07 ENGLISH Combs the equipment is supplied with a set of 8 combs of 1 0 and 1 5 mm thick and with 10 Can or 15 teeth 3 TECHNICAL SPECIFICATIONS Code 53001001 N gels lor2 Gel dimensions 82x82 mm Glass plate dimensions 102x85 mm N samples 10 or 15 per gel Comb thickness l and 1 5 mm Buffer volume approx 500 mL Working conditions 0 40 C and lt 80 RH El
33. recommend looking after this equipment accor ding to what is stated in this manual Nahita develops its products according to the CE marking regulations as well as emphasizing the ergonomics and security for its user The correct using of the equipment and its good quality will permit you to enjoy this equipment for years The improper use of the equipment can cause accidents and electric discharges circuit breakers fires damages etc Please read the point of Maintenance where we expose the security notes TO GET THE BEST RESULTS AND A HIGHER DURATION OF THE EQUIP MENT IT IS ADVISABLE TO READ THOROUGHLY THIS MANUAL BEFORE OPERATING WITH THE EQUIPMENT Please bear in mind the following This manual is inseparable from the Nahita vertical electrophoresis cell so it should be available for all the users of this equipment You should carefully handle the electrophoresis cell avoiding sudden movements knocks free fall of heavy sharp objects on it If you have any doubt about setting up installation or functioning do not hesitate in contacting your wholesaler You can also tell us any doubts or suggestions you have by contacting Nahita Technical Assistance Department by email to asistencia auxilab es or by telephone 34 807 117 040 0 30 Euros min This equipment is protected under the Warranties and consumer goods regulation 10 2003 Overhaul is not covered by the equipment warranty Accessories including their loss
34. s with deionized water or electrophoresis buffer to eli minate bubbles or acrylamide fragments Use a syringe or pipette Load the samples into the wells with a micropipette The sample volume that can be loaded in each well depending on gel thickness is shown in chart 2 Note samples pe ran Page 22 Instruction manual 53001001 Version 1 May 07 CASTELLANO Nota si se va a realizar la electroforesis de un nico gel en el otro compartimento del soporte para geles inserte la aplaca de vidrio gruesa y a continuaci n la cu a Si se van a utilizar dos geles proceda de la manera anteriormente indicada para la preparaci n del segundo gel Coja el dispositivo para la preparaci n del a D gel y coloque en su base la almohadilla de pon l silicona Nota La almohadilla debe estar En La perfectamente limpia y seca Despu s de la preparaci n del gel retire la junta de silico na l vela con agua y d jela secar al aire No F al utilice ning n otro m todo para la limpieza de la junta Coloque el soporte en el dispositivo para preparaci n de geles La base del soporte debe quedar perfectamente sellada con la junta de silicona para evitar fugas a la hora de a adir la soluci n de acrilamida Presione hacia adentro las palancas blan cas situadas a cada lado del dispositivo de preparaci n de geles g relas simult nea mente hasta que las flechas se alen la posi ci n adecuada seg n el
35. st ndar en presencia de SDS se lleva a cabo a un voltaje constante de 125 200 V durante 45 min 1 h Nota La primera vez que realice la electroforesis para un determinado tipo de gel vigile frecuentemente el proceso de migraci n Cuando la electroforesis se haya completado el colorante del frente de migra ci n alcanza la parte inferior del gel apague la fuente de alimentaci n y desconecte los cables de la tapa Despu s de la electroforesis Retire la tapa Suavemente retire la cu a que sujeta el gel en el soporte en soluciones que con tengan detergente puede estar resbaladiza Saque el soporte para geles del tanque de elec troforesis Vac e el tanque en el recipiente de desechos adecuado No reutilice la soluci n tamp n Saque las placas de vidrio con el gel del soporte para geles y col quelas sobre un papel Utilice una esp tula o similar para separar ambas placas de vidrio El gel per manecer adherido a una de las placas de vidrio Pase el gel a una cubeta con colorante o a un soporte adecuado para una pos terior transferencia de las mol culas a una membrana Nota para una posterior transfe rencia por favor consulte el manual de instrucciones del M dulo de Transferencia Nahita ref 53001501 Limpie el tanque y todos los accesorios con agua desionizada Deje secar al aire Seguridad La cubeta de electroforesis vertical debe ser utilizada por personal cualificado previa mente que conozca el e
36. t be used by previously qualified staff that knows how the equipment works thanks to the user manual Put the electrophoresis cell on top of a horizontal plane and stable table Do not put the electrophoresis cell near any warm supply burners blowlamps Avoid vibrations Vertical electrophoresis cell is intended to use with a DC power supply An inadequate manipulation may cause burns hurts and damages to the electrical installation Never connect the electrophoresis cell to the power supply before starting the experi ment The electrical current supplied by the power supply is transmitted to the cell through the leads and the lid assembly Never use the electrophoresis cell without the lid Always turn off the power supply before opening and removing the lid Never operate damaged or leaking equipment Certain reagents indicated for use in this manual are of a hazardous nature User should strictly observe the safety regulations indicated for such products The equipments used in these procedures e g power supplies should be used follo wing the manufacturer safety recommendations 5 FORMULATION FOR GELS AND ELECTROPHORESIS BUFFER Polyacrylamide gels are generated by polymerization of acrylamide as a effect of a cross linking agent the bis acrylamide and in the presence of an initiator and a catalytic agent Usually TEMED N N N N tetramethylenediamine is used as the initiator and the persulphate ion S 0Og added
37. ualization may be difficult to facilitate localization of wells you can use two methods a Before putting the gel support into the tank and with the comb still placed bet ween both glass plates outline the wells with a water resistant marking pen on the non notched glass plate b Illuminate the bench area with a light source placed directly behind the elec trophoresis cell CHART 2 Maximum volume of sample depending on the type of comb and the gel thick ness Gel thickness mm N teeth Vol well U L 1 0 10 50 15 30 1 5 10 75 15 45 Note volumes given are approximate Note To obtain the best results and promote a uniform running of the stacking front load sample buffer in all the wells whether or not they contain samples Fill the tank with approximately 250 mL of electrophoresis buffer Buffer level must not exceed the wells Electrophoresis Cover the electrophoresis tank with the lid Note The lid is especially designed to fit in a unique position thus assuring that the black lead is always connected to the black electrode and the red lead to the red electrode Plug the power leads to a power supply Switch the power supply on and set the desired parameters Standard SDS gel electrophoresis is conveniently performed 125 to 200 V constant voltage for 45 min to 1 h Note The first time the apparatus is used for particular type of gel monitor the pro gress of electrophoresis frequently Wh
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