Fer-color - Wiener lab.
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1. FUNDAMENTOS DEL METODO El hierro s rico se libera de su uni n con su prote na trans portadora espec fica la transferrina en buffer succinato de pH 3 7 y en presencia de un reductor el cido mercaptoac tico Posteriormente reacciona con el reactivo de color piridil bis fenil triazina sulfonato PBTS dando un complejo color magenta que se mide a 560 nm REACTIVOS PROVISTOS A Reactivo A buffer succinato 0 25 mol l para pH 3 7 B Reactivo B ampolla autorrompible conteniendo cido mercaptoac tico al 70 reductor C Reactivo C soluci n estabilizada de piridil bis fenil tria zina sulfonato PBTS 50 mmol l S Standard soluci n de iones Fe Ill equivalente a 100 ug dl REACTIVOS NO PROVISTOS Agua destilada INSTRUCCIONES PARA SU USO Reactivo C y Standard listos para usar Reactivo A B transferir el contenido de la ampolla del Reactivo B al Reactivo A verti ndolo directamente en el frasco de Reactivo A y mezclando por inversi n Anotar en el r tulo la fecha de preparaci n PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagn stico in vitro El Reactico B es corrosivo R36 38 irrita los ojos y la piel S24 25 evitar el contacto con los ojos y la piel S26 28 en caso de contacto con la piel y los ojos l vense inmediata y abundantemente con agua y ac dase a un m dico S37 usar guantes adecuados ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos son estables a temperatura am2. Fer color Para la determinaci n de hierro s rico SIGNIFICACION CLINICA El hierro se distribuye en el organismo de diferentes mane ras incluyendo hemoglobina hierro tisular y mioglobina El transporte de hierro de un rgano a otro se realiza mediante una prote na transportadora llamada apotransferrina El com plejo que forma con el hierro se conoce como transferrina La ferritina localizada en casi todas las c lulas del cuerpo constituye una reserva de hierro disponible para la forma ci n de la hemoglobina y otras prote nas que contienen el grupo hemo La absorci n de hierro ocurre principalmente en el duodeno Tanto la ferritina como la transferrina est n presentes en las c lulas de la mucosa intestinal y juntas regulan la absorci n de hierro Los mayores des rdenes del metabolismo de hierro se re lacionan con su deficiencia o exceso sin embargo se han observado alteraciones en muchas otras enfermedades in cluyendo anemia enfermedades cardiovasculares hepatitis cr nica enfermedades renales e infecciones La anemia por p rdida de hierro representa uno de los tras tornos org nicos m s frecuentes especialmente en ni os mujeres j venes embarazadas y ancianos Tambi n las lceras g stricas o duodenales y carcinomas de est mago constituyen causas de anemia ferrop nica Por el contrario el exceso de hierro se asocia con otros des rdenes como hemosiderosis hemocromatosis y ane mia siderobl stica
3. biente hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja Reactivo A B en refrigerador 2 10 C es estable durante un a o a partir de la fecha de su preparaci n Antes de usar llevar a 18 30 C INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS Variaciones en las lecturas de Blancos de Reactivos y o Standard indican contaminaciones ocasionales agua material de vidrio etc Un aumento en el valor de los Blancos indicar una conta minaci n con hierro MUESTRA Suero a Recolecci n debe usarse nicamente suero ya que los anticoagulantes interfieren en la reacci n El paciente debe estar en ayunas y las extracciones deben practicarse siem pre a la misma hora preferentemente de ma ana ya que las fluctuaciones fisiol gicas son significativas durante el d a b Aditivos no se requieren c Sustancias interferentes conocidas no se observa interferencia por hemoglobina hasta 70 mg dl hiperlipemia iones Cu hasta 200 ug dl y bilirrubina hasta 400 mg dl Si bien hem lisis ligeras no interfieren con este m todo el International Committee for Standardization in Hematology ICSH recomienda el uso de suero libre de hem lisis Referirse a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m todo d Estabilidad e instrucciones de almacenamiento el suero puede conservarse hasta una semana en refrigerador 2 10 C 870430000 00 p 1 6 MATERIAL REQUERIDO no provisto Espectrofot metro o
4. dad Standatrol S E 2 niveles con concentraciones conocidas de hierro con cada determinaci n donde f VALORES TEORICOS Hombres 65 a 175 ug dl 11 6 31 3 umol Mujeres 50 a 170 ug dl 9 30 4 umol l VALORES DE REFERENCIA En un grupo de 20 mujeres y 20 varones sanos con edades oscilando entre los 18 y 51 a os se hall un rango de 55 a 175 ug dl con los siguientes promedios Hombres 114 6 ug dl 20 5 umol l Mujeres 103 3 ug dl 18 5 umol l Valores de referencia extraidos de archivos de Wiener lab Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI Hierro ug dl x 0 179 Hierro umol l LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Valores de Blanco aceptables la determinaci n de oli goelementos implica prevenir celosamente las posibles contaminaciones del agua y los reactivos El Blanco de Reactivos ejecutado de acuerdo al Manual de Instrucciones no debe ser superior a 0 150 D O debiendo ser adem s despre ciable la contribuci n del agua en dicho Blanco Para controlar esto ltimo se recomienda leer un Blanco de Reactivos 2 ml de Reactivo A B 0 5 ml de agua 1 gota de Reactivo C contra un Blanco de Reactivo A 2 5 ml de Reactivo A B 1 gota de Reactivo C la lectura del Blanco de Reactivos debe ser menor o igual que la del Blanco de Reactivo A Caso contrario reemplazar el agua destilada en uso por una de calidad comprobada conductiv
5. fotocolor metro Micropipetas y pipetas para medir los vol menes indicados Tubos o cubetas espectrofotom tricas CONDICIONES DE REACCION Longitud de onda 560 nm en espectrofot metro o 540 560 nm en fotocolor metro con filtro verde Temperatura de reacci n temperatura ambiente Tiempo de reacci n 10 minutos Volumen de muestra 500 ul Volumen total de reacci n 2 5 ml PROCEDIMIENTO En tres tubos o cubetas marcados B Blanco de Reacti vos S Standard y D Desconocido colocar B S D Agua bidestilada 500 ul Standard 500 ul Suero 500 ul Reactivo A B 2ml 2ml 2ml Mezclar Leer la absorbancia del tubo D Blanco de Suero BS en espectrofot metro a 560 nm o en fotocolor metro con filtro verde 540 560 nm llevando a cero el aparato con agua Agregar manteniendo el frasco gotero en po sici n vertical 1 gota de Reactivo C a cada tubo Mezclar inmediatamente cada tubo y leer todos los tubos a 560 nm entre 6 y 20 minutos llevando el aparato a cero con agua ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL Los tubos deben ser le dos entre 6 y 20 minutos luego de completados los pasos del procedimiento CALCULO DE LOS RESULTADOS Corregir las lecturas de S y D rest ndoles los Blancos correspondientes S B S corregida D B BS D corregida Fe ug dl D corregida x f 100 ug dl S corregida METODO DE CONTROL DE CALIDAD Procesar 2 niveles de un material de control de cali
6. idad menor de 0 02 uOhms Por otra parte si la lectura del Blanco de Reactivo A es superior a 0 150 D O es indicio de contaminaci n grosera de los reactivos los cuales deber n desecharse Efectuar este control peri dicamente Mezclado los tubos pueden ser mezclados con la varilla o por agitaci n suave No invertir para evitar contaminaciones Limpieza del material todo el material de laboratorio em pleado debe estar libre de hierro para lo cual debe ser sumergido durante 6 horas en HCI p a 10 15 eliminando la acidez con numerosos lavados con agua libre de hierro Secar el material preferentemente a no m s de 80 C en cestillas de acero inoxidable o revestidos con pl sticos Todo el material debe ser empleado exclusivamente para la determinaci n de hierro PERFORMANCE a Reproducibilidad procesando la misma muestra en 10 d as diferentes se obtuvo un coeficiente de variaci n del 4 2 para un nivel de Fe s rico de 129 ug dl b Recuperaci n agregando cantidades conocidas de Fe II a al cuotas de un mismo suero se recuper entre 90 y 103 c Linealidad la reacci n es lineal hasta 500 ug dl PRESENTACION 100 determinaciones C d 1492001 BIBLIOGRAFIA Dixon K Ann Clin Biochem 10 5 127 1973 1 C S H Am J Clin Path 56 4 543 1971 Zak B Baginski E S Epstein E y Wiener L M Clin Toxicol 4 4 621 1971 Rojk n M L Olgu n de Mariani M C Drappo G A y Albarrac
7. n A IIl Congreso Argentino de Bioqu mica Buenos Aires 1975 Young D S Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests AACC Press 4 ed 2001 870430000 00 p 2 6 S mbolos Los siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab CE EC REP IVD Legna Cont Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98 79 CE de productos sanitarios para el diagn stico in vitro Representante autorizado en la Comunidad Europea Uso diagn stico in vitro Contenido suficiente para lt n gt ensayos Fecha de caducidad L mite de temperatura conservar a No congelar Riesgo biol gico Volumen despu s de la reconstituci n Contenido N mero de lote E Xn Ty x li Calibr CONTROL CONTROL CONTROL sal Wiener Laboratorios S A I C Riobamba 2944 2000 Rosario Argentina http www wiener lab com ar Dir T c Viviana E C tola Bioqu mica Producto Autorizado A N M A T Disp N 1287 77 198 00 870430000 00 p 3 6 Elaborado por Nocivo Corrosivo Ca stico Irritante Consultar instrucciones de uso Calibrador Control Control Positivo Control Negativo N mero de cat logo W Wiener lab 2000 Rosario Argentina UR111125
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