HIV 1+2 WL Check
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1. WL Check HIV I 2 Para la detecci n de anticuerpos anti HIV 1 anti HIV 1 grupo O y anti HIV 2 en suero plasma y sangre entera SIGNIFICACION CLINICA Los virus de la inmunodeficiencia humana HIV 1 y HIV 2 son los agentes causales del S ndrome de la Inmunodefi ciencia Adquirida SIDA Estos retrovirus son transmitidos por la exposici n a ciertos fluidos corporales infectados principalmente secreciones genitales y sangre o productos contaminados derivados de la sangre y por pasaje a trav s de la placenta En individuos infectados con estos virus apa recen anticuerpos como respuesta del sistema inmunitario a la invasi n viral La detecci n de dichos anticuerpos es utilizada como herramienta de diagn stico Los Centros para el Control y la Prevenci n de Enferme dades de EE UU CDC en su iniciativa Advancing HIV Prevention AHP destacan la importancia de la utilizaci n de pruebas r pidas de detecci n del HIV para facilitar el acceso al diagn stico precoz en zonas de alta prevalencia en individuos de alto riesgo o en zonas donde otros m todos de diagn stico como ELISA Western Blot o amplificaci n de cidos nucleicos no est n disponibles Tambi n son de gran utilidad en el momento del parto especialmente para el diagn stico de mujeres que no hayan sido controladas durante el embarazo Por otra parte estas pruebas r pidas constituyen una herramienta diagn stica que puede desempe ar un papel important2. Wiener lab por la Directiva Europea 98 79 CE de productos sanitarios Este producto cumple con los requerimientos previstos para el diagn stico in vitro EC REP Representante autorizado en la Comunidad Europea MD Uso diagn stico in vitro Y Contenido suficiente para lt n gt ensayos pa Fecha de caducidad 4 L mite de temperatura conservar a ES No congelar e Riesgo biol gico gt Volumen despu s de la reconstituci n Cont Contenido tor N mero de lote sal Elaborado por XI Nocivo En Corrosivo Ca stico X Irritante Un Consultar instrucciones de uso Calibr Calibrador fontra Control onmo w Control Positivo fonra Control Negativo REF N mero de cat logo ex Wiener Laboratorios S A I C Riobamba 2944 2000 Rosario Argentina http www wiener lab com ar Dir T c Viviana E C tola e n e r a C Bioqu mica Producto Autorizado A N M A T A 2000 Rosario Argentina Cert N 6661 11 864103000 00 p 6 12 UR120705
3. a la normativa vigente ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO El kit es estable a 2 30 C hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja No congelar En caso de almacenar refrigerado asegurarse que el sobre alcance temperatura ambiente antes de ser utilizado de lo contrario se favorecer la humectaci n del contenido El cassette debe permanecer en su sobre original sellado No abrir el envoltorio hasta el momento de usar MUESTRA Suero plasma y sangre entera obtenida por punci n venosa o punci n capilar a Recolecci n recoger las muestras as pticamente y de manera tal de evitar hem lisis Suero obtenido de sangre entera sin anticoagulantes Separar el suero del co gulo inmediatamente para evitar hem lisis Puede utilizarse suero obtenido en tubos con acelerador y gel separador Plasma utilizar plasma recogido con EDTA citrato o heparina Sangre entera punci n venosa utilizar sangre recogida con EDTA citrato o heparina Sangre entera punci n capilar utilizar sangre recogida con el dispositivo descartable s lo provisto en algunas pre sentaciones Realizar la prueba inmediatamente En caso de utilizar otro dispositivo es responsabilidad del usuario validar el dispositivo de toma de sangre entera capilar b Estabilidad y almacenamiento Suero y plasma conservar a 2 10 C En caso de no realizar la prueba dentro de los 5 d as conservar la muestra a 20 C No es recomendable reali
4. causan tes de reacciones inespec ficas para el ensayo WL Check HIV 1 2 Estas condiciones incluyen mujeres embarazadas pacientes hemodializados pacientes con enfermedades autoinmunes o enfermedades infecciosas diferentes a HIV Chagas HTLV Hepatitis C Hepatitis B S filis otras Para 864103000 00 p 4 12 esta poblaci n la especificidad fue de 98 18 con un IC sy 96 45 99 08 c Precisi n Se evalu la precisi n del test siguiendo el protocolo EP5 A recomendado por el CLSI ex NCCLS Los ensayos fueron realizados con 4 muestras positivas con diferentes niveles Muestra positiva 1 12 36 e Ps o s a o s oso de reactividad y con 1 muestra negativa Se realizaron 2 ensayos diarios evaluando cada muestra por duplicado por el transcurso de 20 d as Los resultados fueron le dos a los 20 minutos en un lector inmunocromatogr fico y en forma visual Las muestras positivas siempre dieron un resultado reactivo y la muestra negativa siempre dio un resultado no reactivo Intraensayo Total 14 36 9 69 11 61 Muestra positiva 2 20 88 24 23 11 22 12 61 Muestra positiva 3 16 40 18 02 9 94 10 80 Muestra positiva 4 en diluci n 35 79 35 36 11 11 12 59 Muestra negativa NC N 80 no reactivo por lectura visual NC no corresponde PRESENTACION 25 determinaciones C d 1690019 25 determinaciones c disp descartables C d 1690020 BIBLIOGR
5. AFIA Centro Nacional de referencia para el SIDA http www cnrsida org ar Centers for Disease Control and Prevention Rapid HIV Tes ting http www cdc gov hiv topics testing rapid index htm Greenwald JL Burstein GR Pincus J Branson B A rapid review of rapid HIV antibody tests Curr Infect Dis Rep 8 2 125 2006 Centers for Disease Control and Prevention Advancing HIV Prevention New Strategies for a Changing Epidemic United States 2003 MMWR 2003 52 329 332 http NC 12 34 17 61 www cdc gov mmwr preview mmwrhtml mm5215a1 htm Centers for Disease Control and Prevention Notice to Readers Protocols for Confirmation of Reactive Rapid HIV Tests MMWR 2004 53 221 222 http www cdc gov mmwr preview mmwrhtml mm5310a7 htm Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline EP5 A Vol 19 N 2 NCCLS User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performan ce Approved Guideline EP12 A Vol 22 N 14 NCCLS Procedures and Devices for the Collection of Diagnostic Capillary Blood Specimens Approved Standard 5 Edici n H4 A5 Vol 24 N 21 CLSI ex NCCLS Evaluation of Stability of In Vitro Diagnostic Reagents Approved Guideline EP 25A Vol 29 N 20 CLSI ex NCCLS 864103000 00 p 5 12 EXPLICACION DE LOS SIMBOLOS Dispositivos descartables Los siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de
6. Ambos duplicados Negativos por WL Check HIV 1 2 por WL Check HIV 1 2 POSITIVO Realizar otra prueba ej ELISA y confirmar por Western Blot NEGATIVO NEGATIVO Nota tener en cuenta las normativas espec ficas de cada pa s para el diagn stico de infecci n por HIV LIMITACIONES DEL METODO WL Check HIV 1 2 es una prueba complementaria en el diagn stico del HIV Cualquier resultado obtenido con esta prueba debe ser cotejado con los datos cl nicos del paciente antes de realizar el diagn stico definitivo Un resultado negativo no excluye la posibilidad de infecci n por HIV Se puede obtener un resultado falso negativo en las siguientes circunstancias Niveles bajos de anticuerpos anti HIV en estadios tem pranos de la infecci n Infecci n con una variante del virus que no se detecta con esta prueba Por estas razones se debe tener cuidado al interpretar un resultado negativo especialmente en pacientes con pre sencia de s ntomas cl nicos y factores de riesgo En este caso se recomienda analizar una nueva muestra obtenida con posterioridad Muestras positivas por WL Check HIV 1 2 indican la presencia de anticuerpos anti HIV 1 y anti HIV 2 Estas muestras deben ser repetidas utilizando otro m todo como ELISA y confirmadas por Western Blot El diagn stico puede ser establecido solamente luego de interpretar los resultados junto con los datos cl nicos del paciente Para un resultado positivo la intensida
7. CION DE LOS RESULTADOS POSITIVO NEGATIVO INVALIDO olle lo 0190 Resultado Positivo 2 l neas se observan 2 l neas de color rosa rojo p rpura una en la zona de prueba T y otra en la zona de control C La intensidad de color de la l nea T depender de la muestra en estudio Cualquier color rosado visible aunque sea muy tenue debe ser interpretado como positivo El resultado es positivo aunque las intensidades del color de las l neas T y C sean diferentes Resultado Negativo 1 l nea se observa solamente una l nea de color rojo rosa p rpura en la zona de control C No aparece l nea de color en la zona de prueba T Resultado Inv lido la ausencia de la l nea de color rosa rojo p rpura en la zona de control C invalida el resultado aunque est o no presente la l nea de color rosa rojo p rpura en la zona de prueba T Un resultado inv lido general mente indica un error en la realizaci n del procedimiento o un problema con la muestra Con determinadas muestras pueden aparecer dificultades como migraci n incompleta muestra muy viscosa o presencia de fibrina En cualquier caso revisar el procedimiento centrifugar nuevamente la muestra y repetir el ensayo utilizando un nuevo cassette Algoritmo de interpretaci n Muestra original Resultado Positivo por Resultado Negativo por WL Check HIV 1 2 WL Check HIV 1 2 Repetir por duplicado Uno o ambos duplicados Positivos
8. cesaria una buena fuente de luz para la lectura de los resultados No mezclar reactivos de diferentes lotes No utilizar reactivos de otro origen No tocar la membrana de nitrocelulosa con los dedos Seguir las pr cticas de seguridad biol gica al utilizar muestras y reactivos 864103000 00 p 1 12 Manipular todas las muestras de pacientes como poten cialmente infecciosas Utilizar guantes guardapolvo y protecci n ocular No pipetear con la boca No comer beber fumar utilizar maquillaje ni manejar lentes de contacto en los lugares donde se trabaje con estos materiales Limpiar y desinfectar las salpicaduras de muestra o reac tivos usando hipoclorito s dico concentraci n final 5 u otro desinfectante adecuado Para inactivar el material empleado autoclavar durante 1 hora a 121 C Evitar la formaci n de burbujas en el pocillo de muestra S tanto al colocar la muestra como el Reactivo B Al dispensar el Reactivo B descartar cualquier gota con burbuja Durante la realizaci n de la prueba colocar el cassette sobre una superficie limpia plana y sin vibraciones No agitar el cassette durante la realizaci n del ensayo El cassette y el dispositivo son descartables no reutilizar Desechar en recipientes destinados a residuos con riesgo biol gico El Reactivo B posee azida s dica en bajas concentraciones como conservante Los reactivos y las muestras deben ser descartados de acuerdo
9. control de procedimiento la prueba incluye una zona de control C de color celeste que cambia a color rosa rojo p rpura tras el paso de la muestra La ausencia de esta l nea invalida los resultados MATERIAL PROVISTO A Reactivo A cassette pl stico compuesto por una membrana de nitrocelulosa sensibilizada con ant genos recombinantes espec ficos para HIV 1 y HIV 2 y conjugado de ant genos recombinantes Listo para usar B Reactivo B buffer borato de sodio 15 mM azida 0 95 g L agente tensioactivo pH 9 1 Listo para usar INSTRUCCIONES PARA SU USO El material provisto es listo para usar MATERIAL REQUERIDO no provisto Micropipeta autom tica para medir los vol menes indicados Dispositivo de 20 uL descartable para toma de sangre entera capilar s lo provista en algunas presentaciones Tips descartables Reloj alarma o cron metro Material para extracci n de muestra Guantes descartables guardapolvo protecci n ocular Contenedor para el descarte de residuos biol gicos Hipoclorito de sodio PRECAUCIONES Leer el manual de instrucciones de manera completa antes de realizar el ensayo y seguir las instrucciones cuidadosamente No realizar la prueba si el envase est da ado No utilizar los reactivos despu s de la fecha de vencimiento indicada en el envase Los reactivos son para uso diagn stico in vitro Esta prueba proporciona un resultado cualitativo y visual Es ne
10. ctivas PP 0409 Panel de Performance para HIV Q Panel Brasil se detectaron 16 de las 16 muestras reactivas Sensibilidad Cl nica en Paneles de Seroconversi n En un estudio realizado sobre diferentes paneles comerciales internacionales de seroconversi n Sera Care Life Scien ces USA BBI Diagnostics se obtuvieron los siguientes resultados Tiempo d as en el cual Dias desde el la muestra es reactiva primersangrado WL check Western Blot HIV 1 2 datos Sera Care Nombre del panel PRB 904 D 0 21 49 92 99 92 92 PRB 912 L 0 9 14 16 28 30 0 9 PRB 916 P 0 4 9 15 30 35 30 30 PRB 919 S 0 9 11 9 9 0 2 8 10 26 33 PRB 924 X Ao 33 35 Indet PRB 925 Y 0 10 18 22 44 49 44 44 Indet PRB 929 AD 4 i aia 25 25 Indet PRB 930 AE 0 3 7 10 7 10 Indet PRB 944 AT 0 2 7 9 14 16 14 14 Indet PRB 947 AW 0 9 11 20 9 9 Indet PRB 949 AY 0 6 9 18 20 20 20 Indet PRB 951 BA 0 2 8 11 15 19 19 Negativo hasta 19 d as PRB 952 BB 0 7 10 14 17 21 17 14 Indet PRB 953 BC 0 3 7 10 10 Negativa hasta 10 d as 0 2 20 22 30 35 Negativo hasta PRE 39 37 44 48 51 48 51 d as Indet indeterminadas Sensibilidad Cl nica en Paneles de muestras reactivas En un estudio de 68 muestras reactivas inclu das 4 muestras HIV 1 grupo O provenientes de una instituci n hospitalaria se detectaron las 68 muestras En otr
11. d de color de la l nea T no necesariamente se correlaciona con la concentra ci n de anticuerpos anti HIV espec ficos en la muestra Pueden obtenerse resultados falsos positivos en las si guientes situaciones enfermedades autoinmunes tubercu losis lupus eritematoso sist mico embarazo vacunaci n contra hepatitis B y otras inmunizaciones hemodi lisis enfermedad hep tica y otras enfermedades WL Check HIV 1 2 ha sido dise ado para la detecci n de anticuerpos contra HIV 1 y HIV 2 en suero plasma y sangre entera humana No utilizar otros fluidos biol gicos como saliva l quido cefalorraqu deo u orina Pueden obtenerse resultados err neos con muestras de suero o plasma con aspecto turbio debido a contaminaci n bacteriana o por haber sido sometidas a varios ciclos de 864103000 00 p 3 12 congelaci n y descongelaci n La utilizaci n de muestras inactivadas por calor puede proporcionar resultados incorrectos No utilizar pooles de muestras o muestras diluidas Ver sustancias interferentes en MUESTRA PERFORMANCE a Sensibilidad Sensibilidad Cl nica en Paneles de Performance En un estudio realizado sobre diferentes paneles comerciales internacionales se obtuvieron los siguientes resultados PRB 108 Anti HIV 1 Low Titer Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 13 de las 14 muestras reactivas PRB 109 Anti HIV 1 Low Titer Performance Panel Sera Ca
12. e en campa as de prevenci n y diagn stico en entornos cl nicos y no cl nicos facilitando de esta manera la detecci n precoz de la infecci n WL Check HIV 1 2 es una prueba r pida que detecta con juntamente la presencia de anticuerpos anti HIV 1 anti HIV 1 grupo O y anti HIV 2 FUNDAMENTOS DEL METODO WL Check HIV 1 2 es un ensayo inmunocromatogr fico in vitro de lectura visual para la detecci n cualitativa de anticuerpos contra los virus HIV 1 y HIV 2 en suero plasma y sangre entera La prueba consta de un cassette pl stico que contiene una membrana de nitrocelulosa sensibilizada con ant ge nos recombinantes para HIV 1 gp41 y HIV 2 gp36 en la zona de prueba T un parche impregnado con ant genos recombinantes espec ficos para HIV 1 gp41 y HIV 2 gp36 conjugados a oro coloidal La muestra y el buffer se agregan en el pocillo de muestra S solubilizando y mezcl ndose con el conjugado de ant genos recombinantes Seguidamente esta mezcla migra por capilaridad a trav s de la membrana de nitrocelulosa Si la muestra es reactiva los anticuerpos anti HIV 1 y HIV 2 presentes formar n un complejo con los ant genos conju gados a oro coloidal Este complejo se unir posteriormente a los ant genos inmovilizados en la zona de prueba T de la membrana de nitrocelulosa formando as una l nea de color rosa rojo p rpura La ausencia de dicha l nea indica un resultado negativo Como
13. o estudio se suplementaron 30 sangres enteras con 30 sueros positivos para HIV y se evaluaron en paralelo las sangres enteras suplementadas y los respectivos sueros Se detectaron la totalidad de las muestras sangres enteras y sueros En otro estudio se evaluaron en paralelo 15 muestras reactivas de suero y plasma obtenidas del mismo paciente y para 10 de estas muestras tambi n se evalu sangre entera obtenida por punci n capilar Con todos los tipos de muestras se tuvieron resultados positivos b Especificidad En un estudio realizado sobre 1122 muestras de sueros plasmas y sangres enteras provenientes de tres centros de salud diferentes se encontr una especificidad de 99 91 con un IC s 99 49 99 98 En otro estudio realizado sobre 417 muestras de banco de sangre la especificidad obtenida fue de 99 76 con un ICs 98 65 99 96 Para 100 muestras de las 417 se evaluaron en forma paralela muestras de suero y plasma del mismo paciente y para 40 de estas 100 muestras tambi n se evalu sangre entera obtenida por punci n capilar Con todos los tipos de muestras se tuvieron resultados negativos En otro estudio de 393 muestras de sueros y plasmas de tres centros de salud diferentes se encontr una especificidad de 99 24 con un IC s 97 78 99 74 Tambi n se estudi la posible aparici n de reactividades cru zadas ensayando muestras provenientes de 440 individuos con diferentes condiciones cl nicas que pueden ser
14. pipeta autom tica Esperar 10 a 15 segundos hasta que se absorba la muestra Agregar 3 gotas 100 uL de Reactivo B en el pocillo de muestra S Iniciar el cron metro Nota en caso de utilizar sangre entera capilar usar el dispositivo de 20 uL descartable s lo provisto en algunas presentaciones 5 En cualquiera de los casos leer los resultados entre los 20 y 30 minutos No leer pasado los 30 minutos ya que pueden obtenerse resultados err neos Algunas muestras positivas reaccionan inmediatamente mientras que otras lo hacen m s lentamente dentro del tiempo de lectura indicado Debido a caracter sticas particulares de algu nas muestras el color de fondo de la membrana puede quedar ligeramente rosado sin afectar la interpretaci n de los resultados CRITERIOS DE VALIDACION DE LA PRUEBA El cassette cuenta con una l nea de color celeste en la zona de control C que permite identificar la determinaci n WL 864103000 00 p 2 12 Check HIV 1 2 e indica que los componentes de la prueba est n presentes y activos Al realizar el ensayo la l nea de color celeste debe cambiar a color rosa rojo p rpura Este cambio de color confirma que se ha agregado el volumen adecuado de muestra que su migraci n fue apropiada y que la realizaci n del procedimiento fue correcta Es responsabilidad del usuario efectuar el Control de Cali dad del equipo de acuerdo a las normas locales vigentes INTERPRETA
15. re Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 15 de las 19 muestras reactivas PRB 204 Anti HIV 1 Mixed Titer Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 23 de las 23 muestras reactivas WWRB303 Worldwide HIV Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 13 de las 14 muestras reactivas para HIV 1 grupo M subtipos A B C D F y G HIV 1 grupo O y HIV 2 WWRB350 Worldwide HIV Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 18 de las 18 muestras reactivas para HIV 1 grupo M subtipos A CRF02_AG B C D CRFO1_AE F G y H PRB 601 HIV 1 Incidence Prevalence Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 15 de las 15 muestras reactivas para HIV 1 correspondientes a infecciones recientes y de larga duraci n PRZ 204 Anti HIV 1 2 Combo Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 14 de las 14 muestras reactivas para HIV 1 y HIV 2 PRZ 205 Anti HIV 1 2 Combo Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 14 de las 14 muestras reactivas para HIV 1 y HIV 2 PRZ 207 Anti HIV 1 2 Combo Performance Panel Sera Care Life Sciences USA BBI Diagnostics se detectaron 14 de las 14 muestras reactivas para HIV 1 y HIV 2 PP 0508 Panel de Performance para HIV Q Panel Brasil se detectaron 16 de las 16 muestras rea
16. zar m ltiples ciclos de congela miento y descongelamiento Esto puede generar resultados err neos En caso de usar muestras congeladas stas deben ser homogeneizadas y centrifugadas antes de usar Sangre punci n venosa puede almacenarse hasta 3 d as a 2 10 C No congelar Sangre punci n capilar utilizar inmediatamente No congelar c Sustancias Interferentes en sueros y plasmas enrique cidos no se ha observado interferencia por Hem lisis hasta 1 1 g dL de hemoglobina Lipemia hasta un equivalente de triglic ridos de 1500 mg dL tras enriquecer con Intralipid Bilirrubina hasta 30 mg dL cido asc rbico hasta 50 mg dL d Transporte si las muestras deben ser transportadas embalar de acuerdo a las especificaciones legales relativas al env o de material infeccioso PROCEDIMIENTO 1 Los reactivos y las muestras deben estar a temperatura ambiente 18 30 C antes de utilizar 2 Extraer el cassette de su sobre sellado inmediatamente antes de utilizar 3 Colocar el cassette sobre una superficie limpia plana y sin vibraciones 4 Agregar la muestra sobre la superficie absorbente del pocillo de muestra S PARA SUERO O PLASMA Colocar 10 uL con micropipeta autom tica Esperar 10 a 15 segundos hasta que se absorba la muestra Agregar 3 gotas 100 uL de Reactivo B en el pocillo de muestra S Iniciar el cron metro PARA SANGRE ENTERA Colocar 20 uL con micro
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