Autoimmune EIA Anti-Cardiolipin IgG Test Manual de instrucciones
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1. ocococccnococoncnooonononnrnonoronncarnnononos 7 A rr ea 7 Pasos del an lisis ccccccsecsscssccseseescsecseseccansseseecansoesaesenseescanseessaesanseescausaeseaecanseeseatsanseasoas 7 Certificaci n trazabilidad respecto a material de referenCcia iiiiiiins 8 Requisitos del control de Calidad ooocoocccccoononocanoncnionncorcnononononnonnnonnnonnnnoorncronncnnnnons 8 Pautas para la interpretaci n de los resultados c ccccecescsscsrsssccsnsersesecsnseescansenseescausenseaeeaneeeseas 9 Limitaciones del procediMiento oococcoccnocccconncoocnonononocononnconononnnnrnnconnnonnnconononrnnooncnrnninnncnnos 10 Rango de valores esperados ccscccsscesscsesssesssressesesseesseresseesseneeseessenesseeeaseessersaseesseneeseeeaseesseneases 11 Caracter sticas de rendiMient0 ccccccccccsssccssssrsssecsnseesceecsrsescaeseeseecsnseeseaecanseeseaesonseaseaneenseaees 11 rr rr rr rr rr ll A 11 Sensibilidad oooooonconnconocanocanoconocoronorancnoncnnncnnnononononononoonnonn corn roo n roo none nrn ano a non nar nrarnnnnons 12 ro o o o on 12 Recuperaci n MAA 12 Informaci n de seguridad del PrOCUCtO cccccccscsecsecsssescceseescsecsrsescaesseseeecsuseesesesseseetcatenseaess 13 o o E A 14 L25200001ES00 Manual de instrucciones 1 INDICACIONES An lisis enzim tico inmunoabsorbente ELISA para la determinaci n semicuantitativa de2. 1 El an lisis puede realizarse con una curva de calibraci n de cuatro puntos calibradores 1 2 y 3 m s diluyente para muestras blanco de reactivo como calibrador 4 equivalente a O unidades GPL o con una calibraci n de un punto calibrador 3 Analice por duplicado los calibradores y los controles Tanto con el m todo de varios puntos como con el de un solo punto debe procesarse un control blanco de reactivo para lo que debe a adirse al pocillo diluyente para muestras sin suero Este pocillo se tratar igual que los controles y las muestras de pacientes en pasos posteriores del an lisis L25200001ES00 Manual de instrucciones 7 Retire de la gradilla todas las tiras de micropocillos que no se vayan a utilizar Almac nelas con el desecante en la bolsa de cierre herm tico suministrada A ada 100 uL de calibradores diluidos incluido el blanco de reactivo calibrador 4 controles y muestras de pacientes a los pocillos apropiados Incube de 30 a 40 minutos a temperatura ambiente Tras finalizar la incubaci n invierta con cuidado los micropocillos y retire el l quido de las muestras No permita que las muestras contaminen otros micropocillos Lave 4 veces con soluci n de lavado Durante cada lavado todos los pocillos deben llenarse con soluci n de lavado Invierta los micropocillos entre cada lavado para vaciarlos de l quido Utilice un movimiento brusco de la mu eca para expulsar el l quido de los pocillos La gradilla debe apretar
3. Los resultados se obtienen determinando la densidad ptica DO de cada pocillo con un espectrofot metro Se suministran sueros calibradores con las concentraciones de IgG aCL expresadas en unidades GPL Estas unidades son homologables con las preparaciones reconocidas internacionalmente del Phospholipid Standardization Laboratory de la Universidad de Louisville Una unidad GPL equivale a 1 pg mL de una muestra de IgG est ndar purificada por afinidad Para determinar la presencia o ausencia de anticuerpos IgG anticardiolipina en la muestra se ofrecen opciones de una curva de calibraci n de cuatro puntos y de una curva de calibraci n de un solo punto 2 Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test COMPONENTES DEL KIT El kit de Anti Cardiolipin IgG Test de Bio Rad contiene suministros para 96 pruebas Kit para 96 Componente Descripci n pruebas 425 2000 96 micropocillos divisibles recubiertos con cardiolipina estabilizada de coraz n bovino 196 MPLT E a ce 425 2001 difosfatidil glicerol conservados 12 x 8 pocillos ga herm ticamente en bolsas de papel metalizado con cierre herm tico y desecante Suero humano Consulte la IgG aCL concentraci n de anticuerpos en 196 1 Calibrador 1 TEPANA unidades GPL en la etiqueta del VE frasco Nocivo Suero humano Consulte la IgG aCL concentraci n de anticuerpos en CAL f Calibrador 2 AEG unidades GPL en la etiqueta del V fr
4. de las placas 3 Los valores medios de laboratorio de los controles de anticuerpos anticardiolipina deben estar dentro del rango aceptable correspondiente indicado en las etiquetas de los recipientes Peque as desviaciones ocasionales fuera de estos rangos son aceptables 4 Los valores de DO de los duplicados de los controles o de las muestras de pacientes deben estar a menos de un 20 del valor medio de la DO en las muestras con lecturas de absorbancia superiores a 0 200 5 Cada laboratorio debe determinar peri dicamente sus propios valores discriminadores normales para la poblaci n adecuada de pacientes Como ejemplo consulte el apartado Especificidad dentro de Caracter sticas de rendimiento Si no se cumple alguno de estos criterios los resultados no ser n v lidos y deber repetirse la prueba C lculo de los resultados Calibraci n de un punto 1 Calcule las DO medias de los duplicados de los calibradores los controles y las muestras de pacientes 2 Divida el valor de la concentraci n del calibrador 3 indicado en la etiqueta del frasco por la DO media de los duplicados del calibrador 3 para obtener el factor de conversi n 3 Multiplique la DO media de cada uno de los controles y las muestras de pacientes por el factor de conversi n para obtener un valor de concentraci n en unidades GPL Concentraci n de anticuerpos IgG anticardiolipina del calibrador 3 GPL Valor de absorbancia del calibrador 3 D
5. n las pr cticas correctas de laboratorio 9 El apartado Informaci n de seguridad del producto contiene m s informaci n de seguridad y advertencias sobre los peligros qu micos 10 Los l quidos derramados deben limpiarse bien inmediatamente Desinfecte las zonas en las que se hayan derramado materiales biopeligrosos Deseche apropiadamente todo el material contaminado 11 No utilice el kit despu s de la fecha de caducidad La fecha est impresa en las cajas del kit 12 Este producto utiliza suero humano en la fabricaci n del calibrador y los controles Todas las unidades se han analizado con m todos aceptados por la FDA y se ha comprobado que no son reactivas a los virus VIH 1 y VIH 2 ni a los virus de la hepatitis B VHB la hepatitis C VHC y la s filis Ning n m todo anal tico puede garantizar con toda seguridad la ausencia de stos y de otros agentes infecciosos en productos que contengan material 4 Manual de instrucciones L25200001ES00 13 14 13 16 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test de origen humano De acuerdo con las pr cticas correctas de laboratorio todo el material de origen humano debe considerarse potencialmente infeccioso de todos los agentes infecciosos por lo tanto manipule el calibrador y los controles con las mismas precauciones empleadas con las muestras de pacientes Para asegurar el funcionamiento correcto de este producto es necesario seguir el protocolo especificado en
6. ElA Anti Cardiolipin IgG Test IgG Conjugate IgG Konjugat Conjugu d lgG Conjugado de IgG Coniugato IgG Conjugado de IgG IgG konjugat IgG konjugat 2UCUYEG IgG same Sample Diluent Probendiluent Diluant d chantillon Diluyente para muestras Diluente per campione Diluente de Amostras Provdiluent Provefortynder Apalwtik u Del yu twv iv Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test Indice P gina MACACOS ee ec nn ne en Th re ee ee 2 Resumen y explicaci n de la PrUCDA ccccccececcsessesssccsnseescsecsnseeccaeseeseeecsnseescaesensascansenseaecanseeseats 2 Principios del procedimiento oocccocccnocccoocnononcnonanonnnonnnononnononcononconnnonnnconnnonnncnnnnronnnonnncnnnnonnnos 2 Componentes del kit ooocconcccnoconononanoncnonononcnoncconnconnconncnrn ron nonononononononnnonn corn rornrna nr 00 nnnm nenn 3 Elementos adicionales MECO O miii aia 4 Precauciones y AGVEFTENCIAS ccccccsccssesssscesseceeecseeeessessaesesseseaeeeseesessecseeseseeecaeesseesessessaesesseentes 4 Notas del procedimiento scs GL0 rane nan enner nanan aaau ionadan 5 Recogida y manipulaci n de las muestras ccccccececcsssssscsecrsssecaessesesecsnseescauseeseaseanseuseaecanseeseass 6 Preparaci n y almacenamiento de los reaCtiVOS iiiiiiiiiiiiiiii 1020900900000000 0 00 naa 6 Indicaciones de inestabilidad o deterioro de los reactivos
7. PORTUGAL RUSSIA SINGAPORE SOUTH AFRICA SPAIN SWEDEN SWITZERLAND THAILAND UNITED KINGDOM Bio Rad aboratories Pty td Unit 7 Block Y 391 Park Road Regents Park NSW 2143 Phone 67 2 9914 2800 e Telefax 61 2 9914 2888 Bio Rad Laboratories Ges m b H Hummelgasse 88 3 6 A 1130 Vienna Phone 43 1 877 8901 e Telefax 43 1 876 5679 Bio Rad S A N V Begoniasiraal 5 B 9810 Nazareth Eke Phorie 32 9 385 5511 e Telefax 32 9 385 6554 Bio Rad do Brasil Rua dos Invalidos 212 5 Andar va CEP 20231 070 Rio de Janeiro Phone 5521 3461 5202 Telefax 5521 2221 6521 Bio Rad Laboratories Ltd 2403 Gu nette Montreal Qu bec H4R2E9 Phone 1 514 334 4372 e Telefax 1 514 934 4415 Bio Rad spel s r o Nad ostrovem 1119 14 00 Prague 4 Phone 420 2 41430532 Telefax 420 2 41421642 Bio Rad China imited 18F D Hai Ii Building No 88 Da Pu Road Shanghai 200023 Phone 86 21 6 3052245 Telefax 86 21 53964 5 Bio Rad Laboratories Gensratorvej 8 C 2720 Herlev Phone 45 4452 1000 e Telefax 45 4452 1001 Bio Rad Laboratories Pihalorma 1 A FIN 02240 Espoo Phone 358 3 804 22 09 e Telefax 358 9 804 11 10 Bio Rad S A 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Phone 32 1 4 95 6000 e Telefax 33 1 4 41 9133 Bio Rad Laboratories GmbH Hcidemannstrasss 164 D 80939 Munich Phone 49 3 378840 e Telefax 49 89 318 84100 Bio Rad Pacific Lla Unit 1101 11 E DCH Commercial Cenire 25 Wos lands Read Quarry Bay Phoric 852 2789 33
8. anticuerpos IgG anticardiolipina en suero o plasma humanos Para la detecci n y semicuantificaci n de anticuerpos anticardiolipina en personas con lupus eritematoso diseminado LED y trastornos seudol picos s ndrome antifosfolip dico Para uso diagn stico in vitro RESUMEN Y EXPLICACI N DE LA PRUEBA Los anticuerpos antifosfolipidos son autoanticuerpos que reaccionan con la mayor a de los fosfol pidos cargados negativamente incluida la cardiolipina CL Adem s se sabe que los anticuerpos antifosfolipidos prolongan las pruebas de coagulaci n in vitro dependientes de fosfol pidos y se han denominado tradicionalmente anticoagulante l pico Parad jicamente las personas con el anticoagulante l pico no presentan hemorragias anormales excepto en presencia de otras anormalidades hemost ticas Los anticuerpos anticardiolipina aCL suelen encontrarse frecuentemente en pacientes con lupus eritematoso diseminado LED Tambi n se encuentran en personas que padecen otras enfermedades autoinmunitarias as como en otras que no sufren ninguna enfermedad subyacente aparente Se han descrito concentraciones altas de anticuerpos aCL asociadas significativamente a la presencia de trombosis arterial y venosa trombocitopenia y p rdida fetal recurrente Para describir a las personas que presentan estas manifestaciones cl nicas junto con los anticuerpos aCL o el anticoagulante l pico se ha acu ado el t rmino s ndrome
9. muestras de suero de 94 donantes de sangre sanos se estableci el siguiente rango normal media 2 DE e lt 23 GPL Prevalencia esperada LED Se utiliz el kit para analizar 149 muestras de suero de personas con LED Treinta y una de las muestras 21 dieron positivo en anticuerpos IgG anticardiolipina No se encontr ninguna relaci n entre las concentraciones de anticuerpos anticardiolipina y las de anticuerpos anti ADNbc o la actividad de la enfermedad Se ha observado que los anticuerpos monoclonales anti ADNbc y anti ADNmc no reaccionan con los micropocillos recubiertos de cardiolipina del an lisis Otros estados patol gicos Se utiliz la prueba para analizar veinticuatro muestras de suero de personas con osteoartritis DA S lo una dio positivo en anticuerpos IgG aCL Se utiliz la prueba para analizar noventa y tres muestras de suero de personas con esclerosis m ltiple progresiva EMP Doce de las muestras 13 dieron positivo en IgG aCL A n se est investigando la importancia cl nica de los resultados positivos en otros estados patol gicos aparte del LED CARACTER STICAS DE RENDIMIENTO Especificidad Muestras normales Se analizaron muestras de suero de 94 donantes de sangre sanos para comprobar la presencia de anticuerpos IgG aCL El valor discriminador normal calculado fue la concentraci n media de anticuerpos en unidades GPL m s dos desviaciones est ndar El valor calculado para IgG es 23 GPL Utiliz
10. 00 e Toicfax 852 2789 1257 Bio Rad aboratones India Pte td B amp R1 Frkay Towers Vanilya Nikunj Udhyog Vihar Phase Y Gurgaon 122016 Haryana Phone 97 124 6398112 lalelax 91 124 6398114 Bio Rad Laboratories Ltd 14 Homa Street New Industrial Arca Rishon Le Zion 75655 Phone 972 3 9514127 e Telefax 972 3 9514129 Bio Rad Laboralories S r l Via Cellini 18 A 20090 Segraie Milan Phoric 39 02 21509 e Telefax 39 02 21609 298 Nippon Bio Rad Laboratories 7 18 Higashi Nippori 5 chome Arekaws xu Tokyo 116 0014 Phone 81 3 5811 6290 lalelax 81 3 5811 6282 Bio Rad Korea Ltd B1 Cambridge Building 1461 15 Scocho Dong Seocho Gu Scoul 137 070 Phone 82 2 3473 4460 e Telefax 82 2 3472 7003 Bio Rad Lalin America 14100 Palmetto Eronlage Road Suile 101 Miami Lakes Florida 33016 Phoric 305 894 5950 e Telefax 305 894 5960 Bio Rad Laboratorios Mexico S A de C V Adoifo Prieto No 1653 Colonia Del Vaile 03100 Mexico D F Phone 255 5634 2582 e lelelax 5255 5524 5555 Bio Rad Laboratories BV Fokkerstraat 10 3905 KV Veenendaal Phone 31 318 540666 e Telefax 31 318 542216 Bio Rad Now Zealand 189 Bush Road Albany Auckland Phoric 64 9 4 15 2280 e Telefax 64 9 4 15 2284 Bio Rad Laboratories Johan Scharffenbergs vei 91 N 0694 Oslo Phone 17 23 38 41 30 e lelelax 17 23 38 41 39 Bio Rad Polska Sp z 0 0 Nakiciska Str 3 01 106 Warsaw Phone 48 22 3319999 e Telefax 48 22 3319988 Bio Rad Laboratories Rua do Entreposto Indu
11. C e Anti Cardiolipin IgG Test Manual de instrucciones Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test Kit 96 Tests CE al Fr Bio Rad Laboratories Inc Hercules CA 94547 USA FRANCE Bio Rad Marnes la Coquette CD en varios idiomas Este kit incluye un CD ROM en los siguientes idiomas ingl s alem n franc s espa ol italiano portugu s sueco dan s y griego S mbolos de la Directiva 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro C European Conformity EG Konformit t Conformit europ enne Conforme a la normativa europea Conformita Europea Conformidade com as normas europeias Uppfyller EU direktiv CE meerkning ZUUUOP WON Je TOUG Eupwmatkotc KAVOVLOO G LOT Lot Number Chargenbezeichnung Num ro de lot Numero de lote Numero di lotto Numero do lote Batchnummer Lotnummer Api8u c traptidac Temperature Limit Temperaturgrenze Limite de temp rature L mite de temperatura Limite di temperatura Limite de temperatura Temperaturgr nser Temperaturomr de Oplo Bepuokpac ac Manufactured For Hergestellt f r Fabriqu pour Fabricado para Prodotto per Fabricado para Tillverkas f r Produceret for KatTaokeu letal yra AoyapLaou TNG Manual de instrucciones Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Produttore Fabricante Tillverkare Producent KataokeuaoT g Use by Haltbar bis Utiliser avant Fecha de caducidad Scadenza Utilizar at Anv n
12. O Factor de conversi n La concentraci n de anticuerpos anticardiolipina de la muestra Factor de conversi n X Absorbancia de la muestra DO 4 El factor de conversi n debe calcularse para cada tanda anal tica Si se utiliza un factor de conversi n de otro an lisis los resultados no ser n v lidos 5 Las muestras con valores de anticuerpos anticardiolipina superiores a 100 GPL pueden clasificarse como superiores a 100 GPL o pueden diluirse con diluyente para muestras y volverse a analizar para obtener una estimaci n m s precisa de la concentraci n de anticuerpos anticardiolipina Los resultados del segundo an lisis de estas muestras deben multiplicarse por el factor de diluci n para obtener el valor final de anticuerpos anticardiolipina L25200001ES00 Manual de instrucciones 9 6 Aseg rese de que se han cumplido todos los par metros de control de calidad consulte el apartado Control de calidad antes de comunicar los resultados de la prueba Calibraci n con curva de varios puntos 1 Calcule las DO medias de los duplicados de los calibradores los controles y las muestras de pacientes 2 Realice un an lisis de regresi n lineal con los valores de los cuatro calibradores consulte la concentraci n en unidades GPL indicada en las etiquetas de los frascos el calibrador 4 diluyente para muestras es igual a O GPL respecto a las DO medias de cada calibrador 3 La curva de los calibradores puede traz
13. O deben medirse durante los 30 minutos posteriores a la adici n de la soluci n de parada Certificaci n trazabilidad respecto a material de referencia Las concentraciones de IgG expresadas en unidades GPL de los calibradores de IgG aCL suministrados con este kit se indican en las etiquetas de los frascos Estas unidades son homologables con las preparaciones reconocidas internacionalmente del Phospholipid Standardization Laboratory de la Universidad de Louisville Una unidad GPL equivale a 1 ug mL de una muestra de IgG est ndar purificada por afinidad Requisitos del control de calidad Cada vez que se realice la prueba deber n incluirse un calibrador de IgG aCL un control positivo de IgG aCL un control negativo de IgG aCL y diluyente para muestras blanco de reactivo 8 Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test PAUTAS PARA LA INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS Control de calidad Para que una prueba sea v lida deben cumplirse todos los siguientes criterios 1 La DO media del calibrador 3 debe ser al menos 0 400 para asegurar que el kit est funcionando correctamente Las lecturas de DO del calibrador 3 inferiores a 0 400 pueden indicar que el kit ya no est en condiciones para seguir utiliz ndose 2 La DO media del calibrador 4 o el blanco de reactivo debe ser inferior a 0 050 Las lecturas superiores a 0 050 pueden indicar una posible contaminaci n del reactivo o un lavado inadecuado
14. ando este valor discriminador el an lisis es espec fico en un 97 para los anticuerpos IgG Controles patol gicos Se utiliz la prueba para analizar muestras de suero de 14 personas con LED o un trastorno seudol pico sin antecedentes de trombosis ni otras caracter sticas del s ndrome antifosfolip dico Ninguna de las muestras dio positivo en anticuerpos IgG aCL La especificidad global del an lisis en esta poblaci n de muestras fue del 100 L25200001ES00 Manual de instrucciones 11 Sensibilidad Se utiliz la prueba para analizar muestras de suero de 18 personas con LED o un trastorno seudol pico de las que se sab a que hab an tenido al menos un episodio tromb tico Diez de las muestras dieron positivo en anticuerpos IgG aCL lo que arroja una sensibilidad de un 56 en esta poblaci n de muestras Precisi n Se analizaron dos muestras con valores GPL conocidos uno bajo y otro alto en 28 repeticiones en 3 ocasiones diferentes Los coeficientes de variaci n CV intraan lisis e interan lisis se presentan en la tabla siguiente El coeficiente de variaci n intraan lisis indicado es la media de los tres CV intraan lisis Muestra conc de aCL CV intraan lisis CV interan lisis Baja 20 1 GPL 1 1 11 9 Alta 48 8 GPL 9 4 13 2 Recuperaci n Dos muestras con valores de concentraci n GPL conocidos uno bajo LS y uno alto HS se diluyeron a una proporci n 1 1 con est ndares que conten an cantidades cono
15. antifosfolipidico APS El kit de Autoimmune EIA Anti Cardiolipin Test de Bio Rad utiliza un conocido formato de ELISA para detectar anticuerpos aCL en suero o plasma humanos Los inmunoan lisis de fase s lida se consideran generalmente m s sensibles y m s espec ficos que los an lisis de coagulaci n para detectar anticuerpos aCL El kit de Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test de Bio Rad ofrece resultados r pidos altamente reproducibles precisos y objetivos en unidades homologables con una preparaci n de referencia internacionalmente reconocida Los valores de anticuerpos IgG aCL se expresan en unidades GPL IgG antifosfolipidos PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO La prueba se realiza como un ELISA indirecto Las muestras diluidas de suero los sueros calibradores y los controles se incuban en micropocillos recubiertos de cardiolipina lo que permite que los anticuerpos aCL presentes en las muestras reaccionen con el ant geno inmovilizado Despu s de eliminar las prote nas s ricas no unidas mediante lavado se a aden anticuerpos anti IgG humana marcados con peroxidasa de r bano picante HRP que forman complejos con los anticuerpos unidos a la cardiolipina Tras otro paso de lavado el conjugado enzima unida anticuerpo se analiza a adiendo tetrametilbencidina TMB y agua oxigenada H202 como sustrato crom geno El color se desarrolla en los pocillos a una intensidad proporcional a la concentraci n s rica de anticuerpos aCL
16. arse autom ticamente mediante un programa inform tico validado o manualmente en papel milimetrado Al generar la l nea de regresi n se recomienda utilizar una intersecci n de cero para evitar los valores negativos Si no se dispone de esta opci n todos los valores negativos se considerar n iguales a cero Al generar la curva manualmente dibuje la l nea de mejor ajuste a trav s de los puntos marcados con una intersecci n de cero 4 Determine los valores de los controles y las muestras de pacientes a partir de la curva de calibraci n Calibraci n de un punto 30 40 Unidades Utilizando la curva de calibraci n de ejemplo suministrada a una muestra con una DO de 1 000 a 450 nm le corresponder a un valor calculado de 26 2 unidades La curva de calibraci n suministrada es solamente un ejemplo y no debe utilizarse para calcular resultados de pacientes En cada tanda anal tica deber generarse una nueva curva de calibraci n LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los valores de las concentraciones de anticuerpos anticardiolipina obtenidos con este an lisis son solamente una ayuda para el diagn stico Cada m dico debe interpretar estos resultados considerando los antecedentes del paciente los datos obtenidos en la exploraci n f sica y otros procedimientos diagn sticos Si los signos cl nicos sugieren la presencia de anticuerpos antifosfolipidos y el paciente es negativo para anticuerpos anticardiolipina algunos investigadores re
17. asco Nocivo Suero humano Consulte la IgG aCL concentraci n de anticuerpos en co 3 Calibrador 3 SAORA unidades GPL en la etiqueta del Ja E frasco Nocivo IgG aCL Suero humano Consulte el rango IgG CONTROL 425 2005 esperado en unidades GPL en la 0 25 mL ER Ponto positiva etiqueta del frasco Nocivo IgG aCL Suero humano Consulte el rango IgG CONTROL Carol ii 425 2006 esperado en unidades GPL en la 10 25 mL t cd etiqueta del frasco Nocivo Soluci n de anticuerpos anti IgG humana de cabra conjugados con IgG CONJ Conjugado de IgG 425 2007 HAP azul PNA ene 15 mL contiene timerosal y sulfato de gentamicina al 0 01 como conservantes Tamp n fosfato salino PBS con Diluyente para azida s dica al 0 1 soluci n SAMP DIL muestras 2972006 verde Contiene suero bovino eum Nocivo Tetrametilbencidina TMB y agua Sustrato 425 2009 oxigenada H202 preparada para 15 mL SU USO STOP Soluci n de parada 425 2010 cido sulf rico 0 36 N 15 mL t f ae ee 425 2011 Tamp n fosfato salino PBS 33X 12 x 30 mL PRECAUCION Contiene lt 0 1 sodium azide L25200001ES00 Manual de instrucciones ELEMENTOS ADICIONALES NECESARIOS Agua para reactivos para preparar soluci n de lavado PBS 2L Probeta graduada 30 mL Pipetas de precisi n capaces de suministrar entre 5 y 1000 uL con puntas apropiadas Instrumentos de cristal apropiados para la manipulaci n de vol menes peque os Mat
18. cidas de anticuerpos IgG anticardiolipina Los valores calculados observados y de recuperaci n se presentan en la tabla siguiente Los valores de concentraci n de anticuerpos anticardiolipina se indican en unidades GPL Concentraci n GPL Muestra Calculada Observada Recuperaci n LS 11 0 LS 6 3 8 7 8 8 101 LS 12 5 11 8 10 6 89 9 LS 25 18 0 17 0 94 2 LS 50 30 5 25 6 83 8 HS 35 9 HS 6 3 21 1 24 7 115 HS 12 5 24 2 27 1 115 HS 25 30 0 31 8 104 HS 50 43 0 39 8 92 6 12 Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test INFORMACI N DE SEGURIDAD DEL PRODUCTO Diluyente para muestras calibradores de IgG 1 3 control positivo de IgG y control negativo de IgG R22 S36 Nocivo R22 Nocivo por ingesti n S36 sese indumentaria protectora adecuada Conjugado de IgG anticardiolipina Advertencia Este producto contiene sustancias qu micas que el estado de California sabe causantes de defectos de nacimiento u otros da os relacionados con la reproducci n Contiene sulfato de gentamicina y timerosal al lt 0 1 L25200001ES00 Manual de instrucciones 13 REFERENCIAS 1 10 11 12 13 14 14 Harris E N Gharavi A E Hughes G R V Anti Phospholipid Antibodies Clin Rheum Dis 1985 11 3 591 Gharavi A E Harris E N Asherson R A Hughes G R V Anti Cardiolipin Antibodies Isotype Distribution and Phospholip
19. comiendan hacer una prueba de anticoagulante l pico para confirmar el resultado negativo Se considera que un paciente es positivo para anticuerpos antifosfolipidos si es positivo en al menos una de las pruebas Los pacientes que tengan o hayan tenido una infecci n sifil tica pueden obtener resultados positivos en la prueba Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test de Bio Rad sin que haya un mayor riesgo de trombosis En un estudio de 23 pacientes con s filis confirmada positivos en la prueba de FTA Abs nueve de las muestras 10 Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test 39 dieron positivo en la prueba Anti Cardiolipin IgG Test de Bio Rad Si los antecedentes de un paciente apuntan a un posible diagn stico de infecci n sifil tica el diagn stico debe confirmarse o descartarse mediante un an lisis espec fico de anticuerpos antitrepon micos Los anticuerpos anticardiolipina pueden aparecer temporalmente a bajas concentraciones durante muchas infecciones Si un paciente da positivo en una primera prueba mientras hay signos cl nicos de infecci n la prueba debe repetirse despu s de seis meses La cuesti n de la interferencia de los anticuerpos reumatoideos factor reumatoideo debe tratarse con cuidado A n es necesario realizar m s estudios para determinar la importancia cl nica exacta si la hay de los anticuerpos aCL en la artritis reumatoide RANGO DE VALORES ESPERADOS Tras analizar
20. des f re Udl bsdato Huepounv a A ENG Catalog Number Katalognummer R f rence N mero de cat logo Numero di catalogo N mero de cat logo Katalognummer Katalognummer Api8u c katad you L25200001ES00 Authorized Representative in the European Union Autorisierter Vertreter in der Europaischen Union Repr sentant agr pour l Union Europ enne Representante Autorizado en la Uni n Europea Rappresentante autorizzato per l Unione Europea Representante Autorizado da Uni o Europeia Auktoriserad EU representant Autoriseret repreesentant i EU EgoucLodOTnu voc AVTLTPOGWTMOC OTHV Eupwnaik Evwon For In Vitro Diagnostic Use In vitro Diagnostikum Utilisation comme test de diagnostic in vitro Para uso en diagn stico in vitro Per uso diagnostico in vitro Para uso em diagn stico in vitro For in vitro diagnostiskt bruk Til in vitro diagnostisk brug Mia in vitro OLAYVWwOTLK xenon Uli Consult Instructions for Use Gebrauchsanleitung beachten Consulter la notice d utilisation Consulte las instrucciones de uso Fare riferimento alle Istruzioni per l uso Consulte as instru es de utiliza o Se bruksanvisning fore anvandande Se brugsvejledningen DUUBOUAEUTELTE TLS Odnyiec xp on IgG Calibrator 1 IgG Kalibrator 1 Calibrateur d IgG 1 Calibrador de IgG 1 Calibratore 1 per IgG Calibrador IgG 1 IgG kalibrator 1 IgG kalibrator 1 Ba uovountic IgG 1 we conrrot IgG Negative Control IgG Negat
21. entrifugaci n a 1500 g durante 10 minutos El sobrenadante debe retirarse con cuidado despu s de la centrifugaci n para evitar la contaminaci n con plaquetas puede ser conveniente repetir los pasos de centrifugaci n y separaci n para reducir al m nimo la contaminaci n con plaquetas Las plaquetas descompuestas o envejecidas pueden reaccionar con los anticuerpos antifosfol pidos lo que producir a resultados aberrantes riesgo de obtener resultados falsos negativos PRECAUCI N No utilice suero ni plasma hemolizados ict ricos o lip micos ya que podr an obtenerse resultados aberrantes Las muestras que contengan part culas visibles deben clarificarse mediante centrifugaci n antes de analizarlas PREPARACI N Y ALMACENAMIENTO DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del kit deben conservarse a entre 2 y 8 C y pueden emplearse hasta la fecha de caducidad impresa en las etiquetas No la congele e Recoja todos los reactivos las muestras y las diluciones necesarios antes de comenzar el an lisis e Asigne y registre los pocillos de los controles y las muestras 6 Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test Soluci n de lavado Mida 30 mL de concentrado de lavado PBS 33X y dil yalo con agua para reactivos hasta obtener 1 litro El pH de la soluci n final debe ser 7 35 0 1 Tape y almacene la soluci n de lavado no utilizada en el refrigerador a entre 2 y 8 C Deseche la soluci n si mue
22. estas instrucciones Nunca mezcle el contenido de diferentes frascos del mismo reactivo ya que el reactivo podr a resultar contaminado y comprometer el funcionamiento del producto Unos 30 minutos antes de comenzar el an lisis extraiga el kit de la c mara de refrigeraci n entre 2 y 8 C y permita que los componentes del kit alcancen la temperatura ambiente entre 18 y 26 C Antes de utilizar los reactivos m zclelos bien girando suavemente el recipiente varias veces Despu s de utilizar el material cons rvelo a entre 2 y 8 C No intercambie reactivos entre lotes del kit NOTAS DEL PROCEDIMIENTO 1 Lleve las muestras de suero y los reactivos del kit a la temperatura ambiente entre 18 y 26 C y m zclelos bien antes de utilizarlos evite la formaci n de espuma Vuelva a guardar todas las muestras y reactivos no utilizados en un almacenamiento refrigerado tan pronto como sea posible Todas las diluciones de calibradores controles y sueros de prueba deben hacerse justo antes de utilizarlas en el an lisis El lector de placas debe programarse a cero utilizando un pocillo blanco con aire Para obtener un rendimiento ptimo del an lisis es esencial una buena t cnica de lavado La mejor forma de conseguir un lavado adecuado consiste en dirigir al fondo de los micropocillos un chorro a presi n de soluci n de lavado apretando una botella de pl stico de punta grande La soluci n de lavado que haya en el pocillo blanco c
23. id Specificity Ann Rheum Dis 1987 46 1 Espinoza L R Hartman R C Significance of the Lupus Anticoagulant Am J Hematol 1986 22 331 Elias M Eldor A Thromboembolism in Patients with the Lupus Type Circulating Anticoagulant Arch Intern Med 1984 144 510 Fields R A Toubbeh H Searles R P Bankhurst A D The Prevalence of Anti Cardiolipin Antibodies in a Healthy Elderly Population and Its Association with Antinuclear Antibodies J Rheumatol 1989 16 623 Buchanan R R C Wardlaw J R Riglar A G Littlejohn G O Miller M H Anti Phospholipid Antibodies in Connective Tissue Diseases Their Relation to the Anti phospholipid Syndrome and Forme Fruste Disease J Rheumatol 1989 16 757 Hughes G R V Harris E N Gharavi A E The Anticardiolipin Syndrome J Rheumatol 1986 13 3 486 Asherson R A Harris E N Anticardiolipin Antibodies Clinical Associations Postgrad Med J 1986 62 1081 Asherson R A Antibodies to Phospholipid and the Anti Phospholipid Syndrome mmunology Updates 1989 7 2 1 Harris E N Gharavi A E Boey M L Patel B M Mackworth Young C G Loizou S Hughes 6 R V Anti cardiolipin Antibodies Detection by Radioimmunoassay and Association with Thrombosis in Systemic Lupus Erythematosus Lancet 1983 ii 1211 Triplett D A Brandt J T Kaczor D Schaeffer J Laboratory Diagnosis of L
24. ivkontrolle Contr le n gatif d IgG Control negativo de IgG Controllo negativo per IgG Controlo Negativo IgG IgG negativ kontroll IgG negativ kontrol Apwntik c u ptupa IgG Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione bloccante Soluc o de Paragem Stoppl sning Stopoplgsning Avaoxetik r uua IgG Calibrator 2 IgG Kalibrator 2 Calibrateur d IgG 2 Calibrador de IgG 2 Calibratore 2 per IgG Calibrador IgG 2 IgG kalibrator 2 IgG kalibrator 2 BaB8uovoun Ts IgG 2 i cowrmor IgG Positive Control IgG Positivkontrolle Contr le positif d IgG Control positivo de IgG Controllo positivo per IgG Controlo Positivo IgG IgG positiv kontroll IgG positiv kontrol OETLK G u pTupaG IgG Substrate Substrat Substrat Sustrato Substrato Substrato Substrat Substrat Yn otpwua IgG Calibrator 3 IgG Kalibrator 3 Calibrateur d IgG 3 Calibrador de IgG 3 Calibratore 3 per IgG Calibrador IgG 3 IgG kalibrator 3 IgG kalibrator 3 Ba uovountie IgG 3 1o mP IgG Microplate IgG Mikrotiterplatte Microplaque IgG Microplaca de IgG Micropiastra per IgG Microplaca IgG IgG mikroplatta IgG mikroplade Mixporrd xa IgG e Wash Concentrate e Waschkonzentrat Solution de lavage concentr e Concentrado de lavado Soluzione di lavaggio concentrata Concentrado de Lavagem e Tvattkoncentrat Vaskekoncentrat 2upri kvo a TAUONG L25200001ES00 Manual de instrucciones Autoimmune
25. on aire no interferir en el procedimiento Tambi n puede utilizarse un sistema de lavado automatizado para placas de microvaloraci n IMPORTANTE Si no se elimina bien los restos de PBS la soluci n de sustrato puede desarrollar un color inadecuado Cuando sea posible utilice una pipeta multicanal capaz de transferir l quidos a 8 pocillos simult neamente Esto agiliza el proceso y ofrece una incubaci n y unos tiempos de reacci n m s uniformes en todos los pocillos Es esencial que todos los pasos se realicen a su debido tiempo Todos los calibradores los controles y las muestras deben a adirse en un per odo de cinco minutos El tama o de los lotes de muestras no debe ser superior a la cantidad que pueda a adirse en dicho per odo de tiempo En todas las incubaciones el per odo de incubaci n empieza al terminar de a adir los reactivos o las muestras Se recomiendan per odos de incubaci n de 30 minutos aunque con este formato pueden utilizarse per odos de incubaci n de hasta 40 minutos L25200001ES00 Manual de instrucciones 5 9 La adici n de todas las muestras y los reactivos debe realizarse a la misma velocidad y en la misma secuencia 10 Las temperaturas de incubaci n superiores o inferiores a la temperatura ambiente normal entre 18 y 26 C pueden producir resultados inexactos 11 Evite la contaminaci n de los reactivos al abrir los frascos primarios y durante la extracci n 12 No utilice Tween 20 ni otr
26. os detergentes en este an lisis ya que la presencia de restos de dichas sustancias puede afectar negativamente a la precisi n del an lisis 13 No utilice los componentes del kit despu s de la fecha de caducidad RECOGIDA Y MANIPULACI N DE LAS MUESTRAS Tipo de muestra La matriz de muestras preferida es el suero aunque tambi n puede utilizarse plasma consulte el apartado Muestras de plasma m s abajo Precauci n en la recogida de muestras Cualquier material de origen humano debe considerarse infeccioso y manipularse utilizando los procedimientos de bioseguridad habituales Aditivos y conservantes de las muestras El plasma puede recogerse con la mayor a de los anticoagulantes excepto heparina Tratamiento previo y almacenamiento de las muestras Muestras de suero La sangre debe recogerse mediante venopunci n y el suero debe separarse de las c lulas mediante centrifugaci n despu s de la formaci n de co gulos Si no se analizan inmediatamente las muestras deben almacenarse a entre 2 y 8 C Si las muestras tienen que almacenarse durante mas de 72 horas deber n congelarse a 20 C o a una temperatura inferior Evite las congelaciones y descongelaciones repetidas Muestras de plasma Si el an lisis se realiza inmediatamente puede utilizarse plasma recogido con la mayor a de los anticoagulantes excepto heparina La sangre debe recogerse mediante venopunci n y el plasma debe separarse de las c lulas mediante c
27. raz o botella de 1L Botellas de lavado preferiblemente con la punta parcialmente cortada hacia atr s para permitir un flujo amplio o un sistema de lavado semiautomatizado Guantes desechables Espectr metro lector de placas capaz de leer la absorbancia a 450 nm con una referencia de 620 nm si se dispone de ella Pipetas multicanal capaces de transferir l quidos a 8 pocillos simult neamente Cron metro de cuenta atr s Pehachimetro PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS 1 Cualquier material de origen humano debe considerarse infeccioso y manipularse utilizando los procedimientos de bioseguridad habituales 2 No fume coma ni beba en las zonas en las que se manipulen las muestras de pacientes y los reactivos del kit 3 No pipetee con la boca 4 Utilice equipo de protecci n personal al manipular todos los reactivos y las muestras y al emplear el lavador y el lector 5 Deseche todos los residuos de acuerdo con las normativas nacionales y locales aplicables 6 Algunos reactivos contienen azida s dica que puede reaccionar con el plomo y el cobre de las tuber as y formar azidas met licas explosivas Tenga cuidado al desechar estos reactivos Si se desechan en un desague deje correr una gran cantidad de agua para evitar la acumulaci n de azidas 7 El material de desecho que contenga muestras de pacientes o productos biol gicos debe considerarse biopeligroso al desecharse o tratarse 8 Los reactivos qu micos deben manipularse seg
28. se por las partes centrales inferior y superior para retener los m dulos de micropocillos durante el lavado Utilice papel absorbente para retirar el l quido de lavado residual No permita que los pocillos se sequen entre un paso y otro A ada 100 uL de soluci n de anticuerpos anti IgG humana conjugados con HRP azul a los pocillos correspondientes al calibrador IgG los controles el blanco de reactivo y las muestras de pacientes Incube entre 30 y 40 minutos a temperatura ambiente Tras finalizar la incubaci n invierta con cuidado los micropocillos y retire la soluci n de conjugado Lave 4 veces con soluci n de lavado como en el paso 5 Utilice un movimiento brusco para expulsar el l quido y utilice papel absorbente para secar los micropocillos despu s del lavado final No permita que los pocillos se sequen A ada 100 uL de soluci n de sustrato a cada pocillo e incube de 30 a 40 minutos a temperatura ambiente A ada sustrato a los pocillos a una velocidad constante En los pocillos con muestras positivas se desarrollar un color azul A ada 100 uL de soluci n de parada cido sulf rico 0 36 N a cada pocillo para detener la reacci n enzim tica Aseg rese de a adir soluci n de parada a los pocillos en el mismo orden y a la misma velocidad con los que se a adi el sustrato La soluci n de sustrato azul se volver amarilla y la soluci n incolora permanecer incolora Lea la DO de cada pocillo a 450 nm Los valores de D
29. stra signos de crecimiento microbiano contaminaci n cruzada o decoloraci n Microplaca de IgG aCL 1 Preparados para su uso 2 Tras abrir la bolsa los pocillos son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta si se vuelven a introducir inmediatamente en la bolsa de papel metalizado con desecante y sta se vuelve a cerrar herm ticamente y se almacena a entre 2 y 8 C 3 Guarde la gradilla para utilizarla en el futuro Diluyente para muestras 1 Preparados para su uso 2 Deje que el diluyente para muestras alcance la temperatura ambiente antes de utilizarlo 3 Me zclelo bien 4 Evite la contaminaci n innecesaria Conjugado sustrato y soluci n de parada e Preparados para su uso Soluciones de trabajo 1 50 Prep relas de la forma siguiente 1 Diluya 10 uL de muestra de paciente en 490 uL de diluyente para muestras Diluya 10 uL de cada calibrador de IgG aCL en 490 uL de diluyente para muestras Diluya 10 uL de control positivo de IgG aCL en 490 uL de diluyente para muestras Diluya 10 uL de control negativo de IgG aCL en 490 uL de diluyente para muestras Deseche las soluciones de trabajo restantes despu s del uso O O N INDICACIONES DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS No utilice reactivos que muestren se ales de fugas Deseche la soluci n de lavado si muestra signos de crecimiento microbiano contaminaci n cruzada o decoloraci n PROCEDIMIENTO Pasos del an lisis
30. strial 2 1 Esq 2724 513 Amadora Phone 351 21 472 7700 Telefax 351 21 472 7777 Bio Rad Laboratories Ltd 37 A14 Leningradsky Pr 125167 Moscow Phone 7 095 721 14 00 leletax 7 095 721 14 12 Bio Rad Laboratorios Singapore Pte Ltd 27 International Business Park 401 02 609924 Phone 65 5415 3188 Telefax 65 6415 3189 Bio Rad Laboratories Pty Ltd 34 Bolton Road Parkwood Johannesburg 2193 Phono 27 11 442 85 08 e Telefax 27 11 442 85 25 Bio Rad Laboratories S A Miniparc ll Edificio M C Calendula 95 El Soto de la Moraleja 26109 Madrid Phone 34 91 590 5200 leletax 34 91 590 5211 Bio Rad Laboratories A B Vintergatan 1 Box 1097 S 172 22 Sundbyberg Phone 46 8 555 127 00 e Telefax 46 8 555 127 80 Bio Rad Laboratories Nenzlingeweg 2 CH 4153 Reinach BL Phonic 41 61 717 95 55 e Tolofax 41 61 717 95 50 Bio Rad Laboratories Ltd 1st amp 2nd Floor Lumpini Bldg 239 2 Rajdamri Rd Lumpini Pathumwan Bangkok 10330 Phone 662 657 8311 Telefax 662 651 8312 Bio Rad Laboratories Ltd Bio Rad louse Maylands Ave Iemel lempstcad Herts LIP2 7TD Phone 44 208 328 2090 Telefax 44 208 328 2550 Effective Date Febrero 2006
31. upus Inhibitors A Comparison of the Tissue Thromboplastin Inhibition Procedure with a New Platelet Neutralization Procedure Am J Clin Pathol 1983 79 678 Harris E N Gharavi A E Patel S P Hughes G R V Evaluation of the Anticardiolipin Antibody Test Report of an International Workshop Held 4 April 1986 Clin Exp Immunol 1987 68 215 Harris E N Solid Phase Anti Cardiolipin Test Revisited Am J Med 1988 85 599 Moore J E Mohr C F Biologically False Positive Serologic Tests for Syphilis Type Incidence and Cause JAMA 1952 150 5 467 Manual de instrucciones L25200001ES00 Autoimmune EIA Anti Cardiolipin IgG Test L25200001ES00 Manual de instrucciones 15 Contactos para obtener informaci n t cnica Bio Rad ofrece una l nea telef nica gratuita de asistencia t cnica disponible 24 horas al d a 7 d as a la semana En Estados Unidos y Puerto Rico llame al n mero gratuito 1 800 2BIORAD 224 6723 Fuera de EE UU p ngase en contacto con la oficina regional de Bio Rad si necesita ayuda BIO RAD Clinical Diagnostics Group 4000 Alfred Nobel Drive Hercules California 9454 Telephone 510 724 7000 FAX 510 741 5824 www bio rad com diagnostics Bio Rad Laboratories AUSTRALIA AUSTRIA BELGIUM BRAZIL CANADA CZECH REPUBLIC CHINA DENMARK FINLAND FRANCE GERMANY HONG KONG INDIA ISRAEL ITALY JAPAN KOREA LATIN AMERICA MEXICO THE NETHERLANDS NEW ZEALAND NORWAY POLAND
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