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1. Conjugad Micropiastra rivestita Microplaque sensibilis e Beschichtete Mikrotiterplatte Microplaca revestida 4 Piastra ad aghi rivestita 4 Pinplate sensibilis e Beschichtete Pinplatte Pinplate revestida Tampone di lavaggio Tampon de Lavage Waschpuffer Soluc o de lavagem Tampone substrato Substrat Substratpu Substrato Reagente bloccante 4 Solution d Arr t Stopreagenz Soluc o de paragem Tampone campione Tampon Echantillons Probenpuffer 4 Diluente de amostra For in vitro diagnostic use Para uso diagn stico in vitro In Vitro AIOVVWOTIKO go 4 Cataloge number Num ro de cat logo Ap du g Trapayyekiag Lot Lote Xapaktnpicpi s Trapri ag EC Declaration of Conformity Declaraci n CE de Conformidad Eupwrtdikr ouupwvia 96 tests 96 pruebas 96 TTPOO IOPIONOI 4 See instructions for use Ver las instrucciones de uso AdBete uTr wn TIG odnyiec xP hons 4 Use by Utilizar antes de Xp on HExpi Store at 2 8 C 35 46 F Conservar a 2 8 C DUA OOETOI otoug 2 8 C Manufactured by Fabricado por KataoKeudZetai att Cut off Calibrator 4 Calibrador de cut off Op ak g op s Avri paori pio BaBduov unons Positive Control Control Positivo OETIKOG Op c E EVXOU Negative Control Control Negativo ApvnTIKOG opdc ehEyxou Calibrator Calibrador Avri poorijpio BaBuov unons2. Recovery Recuperado Av xtnon Coated microtiter plate Microplaca sensibilizada ETTIKOAUHJEVI HIKPOTTA KA 4 Coated pinplate 4 Pinplate sensibilizada EmkaAupnevn TA ka Pin Wash buffer Soluci n de lavado PUBJIIOTIKO I AUHO TTAJONG Substrate buffer Tamp n sustrato PUBJIIOTIKO I AUJJQ UTTOOTPWHATOG Stop solution Soluci n de parada AVTIBpOOTIJpIO IOKOTT G avTi paong Sample buffer Tamp n Muestras PUBHIIOTIKO I AUJJA ENVU TWV
3. Tamp n de Lavado 50x 1 vial 20 ml concentrado 50x tap n blanco soluci n verde Contiene Tris NaCl Tween 20 azida s dica lt 0 1 conservante Listo para el uso Control Negativo 1 vial 1 5 ml tap n verde soluci n incolora Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Control Positivo 1 vial 1 5 ml tap n rojo soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradore Cut off 1 vial 1 5 ml tap n azul soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradores 6 viales 1 5 ml cada uno 0 3 10 30 100 300 U ml el color aumenta con la concentraci n soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Conjugado 1 vial 15 ml IgA tap n rojo soluci n roja Contiene Inmunoglobulinas anti humanas conjugadas con peroxidasa Substrato TMB 1 vial 15 ml tap n negro Contiene TMB H202 estabilizado Soluci n de Paro 1 vial 15 ml tap n blanco soluci n incolora Contiene cido Clorh drico 1M Placa Microtiter 12x8 tiras rompibles de pocillos Revestimiento ver p rrafo 1 Material necesario pero no suministrado Filtro de lectura de 450 nm del lector de tiras microtiter y filtro de referencia opcional de 620 nm 600 690 nm Equipo de cristal cilindro 100 1000ml tubos de ensayo para disoluciones Mezclador espiral pipetas de pr
4. F para per odos m s largos P gina 3 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 7 Procedimiento del ensayo 7 1 Preparativos antes de dispensar Diluya los reactivos concentrados Diluya el tamp n de muestra concentrado a 1 5 con agua destilada p e 20 ml en 80 ml Diluya el tampon de lavado concentrado a 1 50 con agua destilada p e 20 ml en 980 ml Muestras Diluya las muestras de suero a 1 101 con tamp n de muestra 1x p e 1000 ul tamp n de muestra 1x 10 ul suero Mezcle bien la diluci n Lavado Prepare 20 ml de tamp n de lavado diluido 1x para 8 pocillos o 200 ml para 96 pocillos p e 4 ml de concentrado en 196 ml de agua destilada Lavado autom tico Tenga en cuenta los vol menes de exceso requeridos para purgar el instrumento y el volumen muerto en el dispensador del aparato Lavado manual Descarte el l quido de los pocillos invertiendo la placa Golpee vigorosamente el marco con los micropocillos sobre papel absorbente limpio manteniendo la placa invertida Dispense 300 ul de tamp n de lavado diluido dentro de cada pocillo y espere 20 segundos Repita el procedimiento entero dos veces m s Microplacas Calcule el n mero de pocillos necesarios para el ensayo Saque los pocillos no utlizados del marco p ngalos de nuevo en la bolsa de pl stico suministrada junto con el desecante y s llela bien 2 8 C 35 46 F 7 2 Esquema de trabajo Vea Anexo A para el esquema de dispensaci n vea Anexo B par
5. resultados recomendamos coordenadas log lin y un ajuste a 4 PL Partiendo de la DO de cada muestra lea la correspondiente concentraci n de anticuerpo expresada en U ml Rango Normal Indeterminado Resultados Positivos lt 12 U ml 12 18 U ml gt 18 U ml Ejemplo de curva standard Recomendamos dispensar los calibradores en paralelo para cada tanda Calibradores IgA DO 450 620 nm CV Variaci n 0 U ml 0 059 3 U ml 0 182 30 U ml 0 667 100 U ml 1 316 10 Um 0 323 300 U ml 2 203 Ejemplo de calculo Paciente Replicado DO Media DO Resultado U ml 0 654 0 633 0 644 1 284 1 263 1 274 Para conocer los datos espec ficos de lote consulte el documento adjunto de control de calidad Los laboratorios deber an realizar un Control de Calidad interno utilizando controles propios y o un pool de sueros interno tal y como contemplan las regulaciones de la UE No utilice este ejemplo para interpretar resultados de los pacientes Cada laboratorio deber a establecer su rango normal propio basado en sus propias t cnicas contro les equipamiento y poblaci n seg n sus propios procedimientos establecidos Para la interpretaci n cualitativa lea la densidad ptica del calibrador cut off y la de las muestras de los pacientes Compare las DO de los pacientes con la DO del calibrador cut off Para la interpreta ci n cualitativa recomendamos que establezca un rango del 20 al rededor del valor del cut off c
6. 6 PELI 6Gh 9UOyg AuBULIOD Z Jury WNIOJONNIJA Wioysjopuem PETSS HAWH SIILSONDVIA AMSAV WIEN TIJLIJOSJJJUN JINLUSIG an 12 19 dD o myersdwo unq Nea gnu uonegnouj ISO AESSY Diagnosi in vitro 4 Pour diagnostic in vitro In Vitro Diagnostikum Para uso Diagn stico in vitro Numero d ordine Reference Catalogue Bestellnummer N mero de cat logo Descrizione lotto Lot Chargen Bezeichnung 4 Lote Conformit europea Declaration CE de Conformit Europ ische Konformit t Declarac o CE de Conformidade 96 determinazioni 96 tests 96 Bestimmungen 96 Testes Rispettare le istruzioni per l uso 4 Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten 4 Ver as instruc es de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de Conservare a 2 8 C Conserver a 2 8 C Lagerung bei 2 8 C Conservar entre 2 8 C Prodotto da Fabriqu par 4 Hergestellt von Fabricado por 4 Calibratore cut off Etalon Seuil Grenzwert Kalibrator 4 Calibrador de cut off 4 Controllo positivo 4 Contr le Positif Positiv Kontrolle Controlo positivo Controllo negativo Contr le N gatif Negativ Kontrolle 4 Controlo negativo 4 Calibratore Etalon Kalibrator 4 Calibrador Recupero Correlation Wiederfindung Recuperac o Coniugato Conjuge Konjugat
7. AESKULISA Glia A REF 3501 Manual de Instrucciones Contenido 1 Utilizaci n Aplicaciones cl nicas y principio del ensayo Contenido del equipo Almacenamiento y caducidad Precauciones Toma de muestra manipulaci n y almacenamiento Procedimiento del ensayo Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Datos t cnicos Datos de funcionamiento Bibliograf a Esquema de dispensaci n Procedimiento del test 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 1 Utilizaci n AESKULISA Glia A es un enzimoinmunoensayo en fase s lida que emplea alfa Gliadina elevada mente purificada para la detecci n cuantitativa y cualitativa de anticuerpos IgA contra gliadina en suero humano El ensayo es una herramienta en el diagn stico de la enfermedad celiaca enteropat a por sensibilidad al gluten 2 Aplicaci n cl nica y principio del ensayo La enteropat a por sensibilidad al gluten o enfermedad celiaca se caracteriza por la atrofia de las vellosidades del intestino delgado provocando la denominada mucosa lisa Est causada por una intolerancia patol gica a la Gliadina que es la fracci n soluble en alcohol del gluten en el trigo en el centeno y en la cebada Como la enfermedad celiaca est causada por la ingesta de gluten una dieta libre de gluten en consecuencia cura completamente la enfermedad y as debe ser mantenida toda la vida Si se reinicia el consumo de Gliadina se provoca el retorno de los s ntomas La enfermed
8. Schuppan D Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease Nat Med 1997 3 797 801 2 Holtmeier W Caspary WF 1998 Antik rperdiagnostik bei Sprue Z liakie Z Gastroenerol 36 587 597 3 Caspary WF Holtmeier W 1999 Antik rperdiagnostik bei Sprue Deutsches rzteblatt 96 36 A 2213 2214 4 Catassi C et al 1994 Celiac disease in the year 2000 exploring the iceberg The Lancet 343 200 203 P gina 7 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A ANEXO A Esguema de dispensaci n Se sugiere dispensar los calibradores controles y muestras como sigue Para una interpretaci n cuantitativa utilice calibradores para establecer una curva standard Para una interpretaci n cualitativa utilice el calibradore cut off rr sa an va ne brators to establish a standard curve off calibrator 1 2 ja ja 5 je 7 ja jo jo jn 12 JA JGIB IE IE II JI en EH sea alma ojat e nu u Even Ba mama maassa masa mel emm li KKK aere Deas NE Pa SS ESE PESA DA O E EA CalA calibrator A CalB calibrator B CalC calibrator C CalD calibrator D CalE calibrator E CalF calibrator F PC positive control NC negative control CC Cut off calibrator P1 patient 1 P2 patient 2 P3 patient 3 P gina 8 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A Anexo B Procedimiento del test Samples 1 101 Controls P gina 9 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A LTLTI6 bELI 6h XBA OLTI
9. a el procedimiento Recomendamos la medici n de pipeta de las muestras y calibradores por duplicado El Calibrador Cut off es solamente para uso en las pruebas cualitativas Dispense 100 ul de cada suero diluido de paciente dentro del pocillo correspondiente Dispense 100 ul de los calibratores O calibradore cut off y controles positivo y negativo dentro de los pocillos designados Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de conjugado dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de substrato TMB dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente 20 32 C 68 89 6 F protegido de la luz directa Dispense 100 ul de soluci n de paro dentro de cada pocillo siguiendo el mismo orden de pocillos que cuando dispens el substrato Incube un m nimo de 5 minutos Agite la placa cuidadosamente durante 5 segundos Lea la absorbancia a 450 nm opcionalmente a 450 620 nm dentro de los 30 minutos siguientes P gina 4 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 8 Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Para una interpretaci n cuantitativa establezca la curva standard trazando la densidad ptica DO de cada calibrador eje y con respecto a los correspondientes valores de concentra ci n en U ml eje x Para unos mejores
10. ad est asociada a HLA gt 95 de los apcientes tienen DQ2 enREFd por DQA1 0501 y DQB1 0201 y se manifiesta a cualquier edad con un pico de inicio en la infancia temprana incluso en neonatos Los ratios de incidencia van de 1 de cada 4000 hasta 1 de cada 300 en los pa ses europeos El diagn stico de la enfermedad celiaca se realiza a trav s de biopsia del intestino delgado demostrando la mucosa lisa y se apoya a trav s de marcadores serol gicos Los anticuerpos contra Gliadina y Transglutaminasa tisular tTG son de gran significaci n La tTG ha sido identificada como el ant geno diana principal de los EMA que son los anticuerpos que se dirigen al endomisio constituyente extrace lular del m sculo liso en el test de inmunofluorescencia indirecta IFI el cual ha sido durante mucho tiempo una herramienta importante para el diagn stico de la enfermedad celiaca Los anticuerpos IgG y IgA circulantes anti Gliadina se encuentran en el suero de la mayor a pero no de todos los pacientes con enfermedad celiaca aunque la especificidad de estos anticuerpos es significativamente menor comparada a la de la tTG y los EMA La determinaci n de anticuerpos lgG anti Gliadina y o tTG es especialmente de gran valor ya que aproximadamente el 2 5 de los pacientes celiacos muestran una deficiencia de IgA y de ahi no ser diagnosticados a trav s de tests de detecci n de la subclase IgA Los anticuerpos anti Gliadina pueden ser el nico marcador sero
11. anto en AESKULISA 7501 como en AESKULISA 3501 con 53 sueros El an lisis de regresi n lineal de los dos productos mostr que ambos son equivalentes En estos sueros est incluidos los sueros 29 cerca del l mite Glia A comparison 30 15 15 vs 30 30 30 30 15 15 U ml y 1 018 x 2 154 R 0 991 0 100 200 300 400 500 30 15 15 U ml Pagina 6 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 10 3 Linealidad Se han analizado con este equipo sueros seleccionados y se encontr que deb an diluirse linealmente No obstante debido a la naturaleza heterog nea de los autoanticuerpos humanos pueden haber mue stras que no sigan esta regla concentraci n concentraci n Factor de medida esperada Recuperaci n diluci n U ml U ml 1 1 100 51 6 53 0 97 3 Tr bum om 265 ess 1 400 12 4 13 3 93 2 10 4 Precisi n Para determinar la precisi n del ensayo se valor la variabilidad intra e inter ensayo a traves del an lisis de su reproducibilidad en tres muestras de suero Estas muestras fueron seleccionadas para representar un rango por encima de la curva standard Intra Ensayo hesse l inter ensayo gt Muestra Media Muestra Media N U ml N U ml da 10 5 Calibraci n Debido a la no existencia de una calibraci n de referencia internacional este ensayo est calibrado en unidades arbitrarias U ml 11 Bibliograf a 1 Dietrich W Ehnis T Bauer M Donner P Volta U Riecken EO
12. ecisi n 10 100 200 500 1000 ul o pipeta m ltiple ajustable 100 1000ul Dispositivo de lavado de la microplaca pipeta de repetici n o microcanal de 300 ul o sistema automatizado papel absorbente Nuestras pruebas se han dise ado para el uso con agua destilada seg n la definici n de la farmaco pea de los Estados Unidos USP 26 NF 21 y la europea Eur Ph 45 ed 4 Almacenamiento y Caducidad Guarde todos los reactivos y la microplaca a 2 8 C 35 46 F en sus envases originales Una vez prepa radas las soluciones reconstituidas son estables durante 1 mes a 4 C por lo menos Los reactivos y la microplaca deben ser utilizados solamente dentro del margen de caducidad indicado en cada componente Evite la exposici n de la soluci n TMB a la luz intensa Guarde las microplacas en su sobre correspondiente incluyendo el desecante y s llelo bien P gina 2 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 5 Precauciones 5 1 Datos de riesgo para la salud ESTE PRODUCTO ES SOLO PARA EL USO EN DIAGN STICO IN VITRO Por lo tanto solamente el personal formado y especialmente asesorado en los m todos de diagn stico in vitro puede realizar el ensayo Aunque no se considera este producto como particularmente t xico o peligroso en condiciones de uso normales rem tase a lo siguiente para una m xima seguridad Recomendaciones y precauciones Este equipo contiene componentes potencialmente peligrosos Aunque los reactivos del equipo no es
13. l gico en neonatos ya que los autoanticuerpos anti tTG y EMA no est n presentes a esas edades En consecuencia los anticuerpos anti Gliadina son el marcador serol gico m s temprano para los pediatras en el diagn stico de la enfermedad celiaca Principio del test Las muestras de suero diluidas 1 101 se incuban en la microplaca reve stida con el ant geno espec fico Los anticuerpos de los pacientes si est n presentes en la muestra se unen al ant geno La fracci n no unida es eli minada por el lavado en el paso siguiente Despu s las inmunoglobulinas anti humanas conjudagas con peroxidasa conjugado se incuban y reac cionan con el complejo ant geno anticuerpo de las muestras dentro de la microplaca El conjugado no unido es retirado a trav s del lavado en el paso siguiente La adici n del substrato TMB genera una reacci n colorim trica azul enzim tica que se detiene a trav s de cido diluido el color cambia a amarillo La tasa de formaci n de color por parte del crom geno va en funci n de la cantidad de conjugado unido al complejo antigeno anticuerpo y esto es proporcional a la concentraci n inicial de los respectivos anti cuerpos en la muestra del paciente P gina 1 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 3 Contenido del eguipo Para ser reconstituido Tamp n de Muestra 5x 1 vial 20 ml concentrado 5x tap n blanco soluci n amarilla Contiene Tris NaCl BSA azida s dica lt 0 1 conservante
14. omo zona indeterminada Todas las muestras que tengan DO superior a este rango se consideran positivas y las muestras con valores de DO inferiores a este rango se consideran negativas Negativo DO paciente s 0 8 x DO cut off Indeterminado 0 8 x DOcut of lt DO patient lt 1 2 x DOcut of Positivo DO paciente gt 1 2 X DO cut off P gina 5 de 9 002 2007 08 28 REF 3501 Glia A 9 Datos Tecnicos Muestra suero Volumen de muestra 10 ul de muestra diluida a 1 101 con tamp n de muestra 1x Tiempo total de incubaci n 90 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Rango de calibraci n 0 300 U ml Sensibilidad anal tica 1 0 U ml Almacenamiento a 2 8 C 35 46 F utilice solo los viales originales N mero de determinaciones 96 tests 10 Datos de funcionamiento 10 1 Sensibilidad anal tica La prueba del agente de muestra 30 veces en AESKULISA Glia A 7501 produjo una sensibilidad anal tica de 1 0 U ml 10 2 Especificidad y Sensibilidad Las microplacas est n revestidas con alfa gliadina elevadamente purificada No se han encontrado reactividades cruzadas con otros autoant genos La positividad en anticuerpos IgG e IgA anti gliadina da una especificidad diagn stica del 96 97 para la enfermedad celiaca La sensibilidad diagn stica para los anticuerpos IgG e IgA anti gliadina var a entre el 96 y el 100 Los datos se obtuvieron con AESKULISA Glia A 7501 La correlaci n La equivalencia de estos datos se evalu t
15. t n clasificados como irritantes de los ojos y la piel recomendamos evitar el contacto de los mismos con los ojos y con la piel y utilizar guantes desechables AVISO Los calibradores controles y agentes contienen zida de sodio NaN como conservante El NaN puede ser t xico si se ingiere o se absorbe por medio de la piel o de los ojos El NaN puede reaccionar con la fontaner a de plomo y de cobre y formar zida met lica muy explosiva Al tirar tirarla deje correr una gran cantidad de agua para evitar que la zida tome consistencia Por favor consulte los procesos de descontaminaci n del CDC u otras directrices locales o nacionales No fume coma o beba mientras manipule el equipo No pipetee con la boca Todo el material de fuente humana utilizado en algunos reactivos de este equipo por ejemplo con troles standards ha sido analizado a trav s de m todos aprobados y ha resultado ser negativo para HbsAg Hepatitis C y HIV 1 No obstante ning n test puede completamente garantizar la ausencia de agentes virales en ese tipo de material Por lo tanto manipule los controles standards y muestras de los pacientes como si se trataran de aut nticos transmisores de enfermedades infecciosas y seg n los requerimientos de manipulaci n de su pa s 5 2 Instrucciones generales para la utilizaci n No mezcle o sustituya reactivos o microplacas de n meros de lote diferentes Esto podr a llevar a una variaci n de los resultados Deje q
16. ue todos los componentes alcancen la temperatura 20 32 C 68 89 6 F antes de utilizarlos Ag telos bien y siga el esquema de incubaci n recomendado para una ptima realizaci n del ensayo Incubaci n se recomienda realizar las pruebas a 30 C 86 F para sistemas automatizados No exponga nunca los componentes a temperaturas m s altas de 37 C 98 6 F Pipetee siempre la soluci n de substrato con puntas nuevas Protega este reactivo de la luz Nunca pipetee el conjugado con puntas previamente utilizadas con otros reactivos Un diagn stico cl nico definitivo no debe estar basado solamente en los resultados del ensayo realizado Debe ser elaborado por el m dico despu s de haber evaluado todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio Es necesario verificar el diagn stico por medio de distintos m todos 6 Toma manipulaci n y almacenamiento de las muestras Utilice preferentemente muestras de suero reci n extra das La extracci n de sangre debe seguir los requerimientos de protocolo de su pa s No utilice muestras ictericas lip micas hemolizadas o contaminadas por bacterias Los sueros con part culas deben ser purificados por centrifugaci n a baja velocidad lt 1000 x g Las muestras de sangre deben ser recogidas en tubos limpios secos y vac os Despu s de la separaci n las mues tras de suero deben ser utilizadas inmediatamente Pueden guardarse bien cerradas a 2 8 C 35 46 F hasta tres d as o congelarse a 20 C 4
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