ELISA para HTLV I/II 3.0
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1. 13 Soluci n de hipoclorito s dico al 5 o lej a dom stica l quida NOA NnN co po PREPARACI N DE LOS REACTIVOS 1 CONJUGADO DETRABAJO El CONJUGADO DE TRABAJO debe estar reci n preparado Para preparar el conjugado diluido diluya a 1 500 el conjugado con el diluyente suministrado en el kit por ejemplo 10 ul de conjugado en 5ml de diluyente Utilice nicamente tubos o recipientes de polipropileno Se precisan 12 0 ml de soluci n del CONJUGADO DE TRABAJO para cada microplaca TABLA DE PREPARACI N DEL CONJUGADO N mero de pruebas Vol de conjugado ul Vol de diluyente ml 24 10 0 5 0 48 15 0 7 5 72 10 0 96 24 0 12 0 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO TAMP N DE LAVADO DILUIDO El TAMP N DE LAVADO DILUIDO debe estar reci n preparado Diluya 1 volumen de CONCENTRADO PARA EL LAVADO DE LA PLACA con 19 vol menes de agua destilada de calidad reactivo Mezcle bien Se necesitan aproximadamente 400 ml de tamp n de lavado para lavar 1 placa IMPORTANTE los inmunoensayos de este tipo son sensibles a la temperatura y al paso del tiempo El cumplimiento estricto del procedimiento del ensayo garantiza un rendimiento ptimo del mismo Cualquier modificaci n del procedimiento recomendado puede provocar resultados an malos ll Extraiga la microplaca de la bolsa de aluminio Agite la muestra y los viales de los controles antes de su uso Llene un recipiente para reactivos con el DILU2. Anticuerpo de cabra anti IgG vial viales viales humana marcado con peroxidasa de r bano Contenido 70 pl por vial Conservar a 2 C 8 C sues rms JA SUSTRATO 1 2 5 El tamp n contiene 3 3 5 5 frasco frascos frascos tetrametilbencidina TMB Conservar en la oscuridad a 2 C 8 C Contenido 12 5 ml por frasco soun storjen AN SOLUCI N DE PARADA 1 1 2 Soluci n de cido clorh drico 1 frasco frasco frascos N Conservar en la oscuridad a 2 C 8 C Contenido 30 ml por frasco TAPAS PARA PLACA 4 8 20 Tapas adhesivas para cubrir piezas piezas piezas la microplaca durante la incubaci n MANUAL DE 1 1 1 INSTRUCCIONES copia copia copia Bronidox es una marca registrada de Henkel Chemical Co ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro nicamente 2 Para uso exclusivo por profesionales 3 Consulte el prospecto del producto para obtener informaci n sobre los componentes potencialmente peligrosos INFORMACI N SANITARIA Y DE SEGURIDAD PRECAUCIONES Este kit contiene productos de origen humano Ning n m todo de an lisis A N permite ofrecer una garant a absoluta de que los hemoderivados humanos no transmitan una infecci n MANIPULE LAS MUESTRAS Y LOS CONTROLES REACTIVOS Y NO REACTIVOS DEL ENSAYO COMO SI FUERAN POTENCIALMENTE INFECCIOSOS Se recomienda manipular los componentes del ensayo y las muestras de conformidad con las pr cticas correctas de laboratorio A
3. En un kit de ensayo de este tipo pueden sospecharse resultados falsamente reactivos La proporci n de falsos reactivos depende de la sensibilidad y la especificidad del kit de ensayo En la mayor a de los ensayos de detecci n selectiva cuanto mayor sea la prevalencia de anticuerpos frente al HTLV 1 1l en una poblaci n menor ser la proporci n de muestras falsamente reactivas CL USULA DE EXENCI N DE RESPONSABILIDAD La nica garant a expresa que otorga el fabricante es que el kit de an lisis funcionar como ensayo diagn stico in vitro de acuerdo con las especificaciones y limitaciones descritas en el Manual de instrucciones del producto cuando se use de conformidad con las instrucciones citadas en el mismo El fabricante reh sa cualquier garant a expresa o impl cita incluida la garant a expresa o impl cita relativa a la comercializaci n adecuaci n para el uso o supuesta utilidad para otros fines El fabricante s lo se obliga a la sustituci n del producto o al reembolso del precio de compra del mismo El fabricante no ser responsable ante el comprador ni ante terceros de cualesquiera da os perjuicios o p rdidas econ micas provocados por la utilizaci n o la aplicaci n del producto PROBLEMAS T CNICOS Y RECLAMACIONES En caso de problemas t cnicos o si desea presentar una reclamaci n proceda de la siguiente manera 1 Anote el n mero de lote del kit y su fecha de caducidad 2 Conserve los kits
4. cat logo N mero de serie o Atenci n XA L mite de AN Consulte las temperatura Instrucciones de USO paal Fabricante Representante EC REP autorizado en la Comunidad NY Contenido suficiente EORR para lt n gt ensayos Conuiria C instrucciones de PRINCIPIOS QU MICOS Y BIOL GICOS DEL PROCEDIMIENTO Los pocillos de las tiras de las microplacas de poliestireno est n recubiertos con una mezcla de ant genos recombinantes del HTLV I y del HTLV II que corresponden a segmentos muy antig nicos de los virus HTLV I y HTLV II El suero o el plasma humanos diluidos en soluci n tamp n se incuban en estos pocillos recubiertos Cuando existen anticuerpos espec ficos anti HTLV I II dichos anticuerpos se unen a los ant genos inmovilizados en la fase s lida Los pocillos se lavan minuciosamente para eliminar todo el producto no ligado y despu s se les a ade anticuerpo de cabra anti lgG humana purificado por cromatograf a de afinidad y marcado con peroxidasa de r bano Este anticuerpo marcado se une a los complejos ant geno anticuerpo previamente formados los anticuerpos marcados no ligados sobrantes se eliminan mediante lavado A continuaci n se a ade a cada pocillo una soluci n sustrato con 3 3 5 5 tetrametilbencidina TMB Para detener la reacci n se a ade cido clorh drico La intensidad del producto de reacci n de color amarillo resultante se mide por espectrofotometr a a 450 nm y es proporcional a la cantidad de
5. DETENCI N en cada pocillo Mezcle suavemente mediante golpecitos en la placa 20 Determine la absorbancia de cada pocillo a 450nm Si se utiliza un dispositivo con filtro doble la longitud de onda de referencia debe ser de 620 nm NOTA La absorbancia deber a leerse en el plazo m ximo de 10 minutos tras la adici n de la SOLUCION DE PARADA CONTROL DE CALIDAD 1 El BLANCO y el CONTROL NO REACTIVO deben analizarse por duplicado y el CONTROL REACTIVO debe analizarse por triplicado en cada placa y en todas las series de muestras 2 Los valores de absorbancia del blanco deben ser de lt 0 100 3 Los valores de absorbancia del control no reactivo deben ser menores o iguales lt 0 100 tras restar el valor del blanco 4 Almenos dos de los tres valores del control reactivo deben tener una absorbancia gt 0 800 despu s de restar los valores del blanco Para el c lculo de la media del control reactivo XCR no debe usarse ning n valor que se salga de este intervalo 5 Si20 m s de los valores del control reactivo se desv an en m s del 30 de la MEDIA el an lisis NO ES VALIDO y habr que repetir la serie 6 Para que el ensayo sea v lido la diferencia entre las absorbancias medias del control reactivo y el control no reactivo XCR xCNR debe ser mayor o igual a 0 700 En caso contrario debe sospecharse un error en la t cnica y habr que repetir el ensayo Si la diferencia entre las absorbancias MEDIAS XCR
6. Ed Diagnostics ELISA para HTLV 1 11 3 0 CE 0123 FECHA DE REVISI N 11 05 MBN 0011 SPN 1 21080 096T kit de 96 an lisis 21080 192T kit de 192 an lisis 21080 480T kit de 480 an lisis Nota Cambios resaltados NOMBRE Y USO PREVISTO El ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MP Diagnostics MPD es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas dise ado para la detecci n de anticuerpos frente a los virus HTLV I y HTLV II en suero o plasma humanos Su uso previsto es como prueba de despistaje y es necesario volver a analizar las muestras inicialmente reactivas INTRODUCCI N Estudios epidemiol gicos recientes llevados a cabo en Estados Unidos y en Europa confirman la presencia de una prevalencia mixta del HTLV I y del HTLV II en distintas poblaciones de alto riesgo como los usuarios de drogas intravenosas y los receptores de transfusiones En funci n de la reactividad cruzada de los sueros anti HTLV y anti HTLV II con lisados viral los kits de an lisis de primera generaci n utilizaban para los ensayos de detecci n selectiva lisado viral de HTLV I mientras que los de segunda generaci n utilizaban lisado viral de HTLV I y ant genos recombinantes Sin embargo los inmunoensayos de detecci n selectiva de HTLV I II de primera y segunda generaci n basados en lisados v ricos disponibles en la actualidad carecen de sensibilidad para la determinaci n del HTLV II y presentan un elevado n mero de falsos p
7. XCNR da cifras bajas sistem ticamente debe sospecharse que los reactivos se han deteriorado RESULTADOS Cada microplaca debe considerarse por separado al calcular e interpretar los resultados del ensayo independientemente del n mero de placas que se hayan procesado a la vez LOS VALORES DE LA ABSORBANCIA MEDIA DEL BLANCO DEBEN RESTARSE DE TODOS LOS VALORES DE ABSORBANCIA DE LA PLACAANTES DE INTERPRETAR LOS RESULTADOS La presencia o ausencia de anticuerpos espec ficos frente a HTLV 1 1l se determina relacionando la absorbancia de las muestras con el VALOR LIMITE VL de la placa El VALOR L MITE se calcula como 0 45 unidades de absorbancia absorbancia media del CNR VALOR L MITE 0 45 XCNR C LCULO DE LOS RESULTADOS 1 C lculo de la absorbancia media del control no reactivo xCNR Ejemplo N de pocillo Absorbancia C1 0 020 D1 0 022 Total 0 042 Media 0 042 2 0 021 XCNR Los valores del control no reactivo individuales deber an ser lt 0 100 unidades Si uno de los valores del control no reactivo no cumple los dos criterios anteriores el ensayo no es v lido y habr que repetirlo 2 C lculo de la absorbancia media del control reactivo XCR Ejemplo N de pocillo Absorbancia E1 1 221 F1 1 144 G1 1 298 Total 3 663 Media 3 663 3 1 221 XCR Los valores del control reactivo individuales deber an ser gt 0 800 unidades Si uno de los valores del control re
8. YENTE Mediante un pipeteador multicanal a ada 200 ul de DILUYENTE en todos los pocillos 200 yl Los pocillos A1 y B1 son BLANCOS 20 ul NO A ADA MUESTRAS EN ESOS POCILLOS Vierta otros 20 ul de diluyente en esos pocillos A ada 20 ul de muestra al pocillo 20 ul asignado empezando por el pocillo H1 Con ello obtendr una diluci n final de la muestra de 1 11 NO DISPENSE MUESTRA EN UN POCILLO VAC O Tras haber dispensado la muestra 20 ul problema a ada 20 ul de CONTROL NO REACTIVO por pocillo a los pocillos C1 y D1 Dispense 20 pul de CONTROL REACTIVO por pocillo en los pocillos E1 F1 y G1 Mezcle bien mediante golpecitos suaves en todos los laterales de la microplaca asegur ndose de mantener la placa horizontal en la mesa de trabajo Cubra con cuidado la microplaca con una de las tapas suministradas para evitar la evaporaci n durante la incubaci n Incube durante 60 minutos a 37 C no use ba o Mar a a 37 C para la incubaci n Prepare el CONJUGADO DE TRABAJO tal y como se describe en PREPARACI N DE LOS REACTIVOS antes de lavar la microplaca Retire y deseche la tapa de la placa y lave la microplaca con el TAMP N DE LAVADO DILUIDO siguiendo uno de los dos m todos recomendados Lavado autom tico o semiautom tico de la microplaca lave seis 6 veces con al menos 300 ul por pocillo por lavado Lavado manual de la microplaca aspire la totalidad del contenido de todos los poci
9. activo no cumple los criterios anteriores se debe excluir como an malo En ese caso la media del control reactivo XCR debe volver a calcularse utilizando los valores individuales del control reactivo restantes Todos los valores individuales del control reactivo restantes deben cumplir los criterios anteriores de lo contrario el ensayo no es v lido y habr que repetirlo 3 C lculo de la diferencia entre XCR y xCNR Ejemplo XCNR 0 021 XCR 1 221 XCR xXCNR 1 221 0 021 1 200 Para que el ensayo sea v lido el valor XCR XCNR debe ser mayor o igual a 0 700 En caso contrario debe sospecharse un error en la t cnica o el deterioro de los reactivos y habr que repetir el ensayo 4 C lculo del valor L MITE Valor L MITE 0 450 XCNR Ejemplo XCNR 0 021 Valor L MITE 0 450 0 021 0 471 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS 1 El ensayo ELISA para HTLV III 3 0 de MPD considera no reactivas las muestras con valores de absorbancia menores que el valor L MITE 2 Las muestras con valores de absorbancia mayores o iguales que el valor UMBRAL se consideran inicialmente reactivos seg n el criterio del ensayo ELISA para HTLV 1 11 3 0 de MPD y deber an volver a analizarse por duplicado antes de su interpretaci n 3 El ensayo ELISA para ELISA para HTLV I II 3 0 de MPD considera que las muestras que resultan reactivas al repetir el an lisis pueden interpretarse como muestras con reactividad repetida para lo
10. anticuerpos presentes en la muestra COMPONENTES DEL KIT Descripci n del componente Cantidad suministrada MICROPLATE MICROPLACA DE HTLV 1PLACA 2PLACAS 5PLACAS Doce tiras de 8 pocillos por placa 96 an lisis 192 an lisis 480 an lisis Los pocillos de las microplacas contienen prote nas de HTLV I y HTLV II recombinantes adsorbidas Conservara 2 C 8 C A CONTROL NO REACTIVO 1 2 3 Suero humano normal no vial viales viales reactivo para HCV HIV 1 2 HTLV I II ni para el ant geno de superficie de la hepatitis B HBsAg Contiene timerosal y azida s dica como conservantes Contenido 280 pl por vial Conservar a 2 C 8 C A CONTROL REACTIVO 1 2 4 Suero humano normal inactivado vial viales viales con una concentraci n elevada de anticuerpos espec ficos frente a HTLV 1 Il y no reactivo para HCV HIV 1 2 ni HBsAg Contiene timerosal y azida s dica como conservantes Contenido 300 pl por vial Conservar a 2 C 8C A DILUYENTE 1 1 2 Soluci n Tris NaCl con suero de frasco frasco frascos cabra normal termotratado seroalb mina bovina y estabilizantes Contiene Bronidox como conservante Contenido 100 ml por frasco Conservar a 2 C 8C A CONCENTRADO PARA EL 1 1 2 LAVADO DE LA PLACA 20X frasco frasco frascos Soluci n salina tamponada con fosfato con Tween 20 Contiene cloroacetamida como conservante Contenido 120 ml por frasco Conservara 2 C 8 C CONJUGADO 1 2 3
11. as u otras lesiones de la piel 9 El cido clorh drico puede provocar quemaduras EVITE EL CONTACTO Si entra en contacto con la piel l vese minuciosamente con agua 10 Evite el contacto del cido clorh drico con metales o agentes oxidantes 11 No exponga a la luz intensa el comprimido sustrato ni el tamp n Utilice pinzas que no sean met licas para manipular el comprimido de OPD 12 Nunca a ada agua a la soluci n de parada 13 Limpie de inmediato los vertidos de material potencialmente infeccioso con un papel absorbente y lave la zona contaminada con una soluci n de hipoclorito s dico al 1 antes de reanudar el trabajo El hipoclorito s dico no debe utilizarse para vertidos de cido contaminantes a menos que se seque la zona previamente con papel absorbente Para su eliminaci n el material utilizado incluidos los guantes desechables debe tratarse como material potencialmente biopeligroso No utilice el autoclave para el material que contenga hipoclorito s dico 14 Esterilice en autoclave todos los materiales usados y contaminados a 121 C y 15 psi durante 30 minutos antes de desecharlos Otra opci n consiste en descontaminar los materiales con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 durante 30 60 minutos antes de desecharlos en bolsas para residuos biopeligrosos 15 Descontamine todos los productos qu micos y reactivos usados a adi ndoles un volumen de hipoclorito s dico suficiente como para conse
12. borde de los pocillos ni el l quido de los mismos con los dedos ni con las puntas de pipeta 7 Se aconseja lavar el material de vidrio que se vaya a utilizar para los reactivos con cido clorh drico 2 M y aclararlo bien con agua destilada o desionizada antes de usarlo 8 Para obtener mejores resultados permita que todos los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente 25 C 3C antes de usarlos Inmediatamente despu s del uso vu lvalos a conservar a 2 C 8 C 9 Utilice s lo agua destilada o desionizada de calidad reactivo para diluir los reactivos 10 Todos los reactivos deben mezclarse bien antes de su uso 11 La soluci n del conjugado de trabajo y el tamp n de lavado diluido deben estar reci n preparados 12 No exponga los reactivos ni realice los an lisis en un rea en la que exista un nivel elevado de vapores de desinfectantes qu micos p ej vapores de hipoclorito durante las etapas de almacenamiento y de incubaci n ya que el contacto con los mismos inhibe la reacci n colorim trica Los reactivos tampoco deben exponerse a la luz intensa 13 Deje las microplacas en su bolsa de almacenamiento hasta el momento inmediatamente anterior a su uso Las tiras abiertas que no se hayan utilizado deben conservarse a 2 C 8 C dentro de su bolsa de almacenamiento y con el desecante suministrado 14 Los controles del kit deben analizarse al mismo tiempo que las muestras cl nicas en cada s
13. erie de an lisis 15 Debe evitarse tocar o salpicar el borde del pocillo con el conjugado No exprima la micropipeta Se aconseja el pipeteo invertido siempre que sea posible 16 El uso de muestras muy hemolizadas sueros no totalmente coagulados muestras de plasma con fibrina o muestras con contaminaci n microbiana puede causar resultados err neos 17 NO INCUBE LAS PLACAS AL BA O MAR A 18 No deben usarse incubadoras de CO 19 Durante la incubaci n a 37 C es necesario evitar la evaporaci n Cubra las placas con las tapas adhesivas suministradas a tal fin 20 Evite abrir y cerrar repetidamente la puerta del incubador durante las etapas de incubaci n 21 No almacene la soluci n de detenci n en una placa plana ni la devuelva a un frasco de reserva despu s de usarla 22 Aseg rese de que el fondo de la placa est limpio y seco y que la superficie del l quido no presente burbujas antes de leer la placa Elimine todas las burbujas del pocillo por ejemplo mediante golpecitos suaves 23 Aseg rese de que el equipo automatizado haya sido validado antes de su uso 24 Para evitar la contaminaci n por arrastre de muestras muy reactivas a muestras no reactivas es muy recomendable realizar el mantenimiento sistem tico del sistema de aspiraci n y lavado INSTRUCCIONES DE CONSERVACI N 1 Conserve el kit del ensayo ELISA para HTLV III 3 0 de MPD y sus componentes a 2 C 8 C cuando no se est ut
14. guir una concentraci n final de al menos el 1 D jelos en reposo durante 30 minutos para lograr una descontaminaci n eficaz PRECAUCIONES ANAL TICAS 1 Se pueden utilizar muestras de suero o plasma con EDTA heparina o citrato s dico Antes de guardar las muestras verifique que se hayan separado por centrifugaci n los co gulos o las c lulas sangu neas 2 Para obtener un rendimiento ptimo del ensayo es necesario un CUMPLIMIENTO ESTRICTO del procedimiento descrito en el presente Manual de instrucciones Cualquier modificaci n del procedimiento puede provocar resultados an malos 3 NO CAMBIE NI SUSTITUYA LOS REACTIVOS DE UN LOTE DEL KIT POR LOS DE OTRO Los controles el conjugado y las microplacas est n ajustados para un rendimiento ptimo Use s lo los reactivos que se suministran con el kit 4 No utilice los componentes del kit despu s de la fecha de caducidad que figura en la caja 5 Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos al abrirlos y al extraer partes al cuotas de los viales o frascos originales ya que ello reducir a de forma prematura el periodo de validez de los kits y dar a lugar a resultados err neos Al extraer partes al cuotas de los viales utilice t cnicas as pticas como pipetas o puntas de pipeta desechables 6 Para evitar la contaminaci n cruzada use una punta de pipeta nueva para cada al cuota que se extraiga de la muestra y no toque el borde ni el fondo de las tiras el
15. ilizando 2 Todos los reactivos y tiras de an lisis en estado Cerrado o sin abrir si se conservan a una temperatura entre 2 C y 8 C son estables hasta la fecha de caducidad que figura en el kit No congele los reactivos 3 La estabilidad del kit una vez abierto por primera vez es de 12 meses En cualquier caso la caducidad del kit coincidir con la primera fecha que se alcance ya sea en el estado Cerrado fecha que figura en el kit o Abierto 12 meses a partir de la apertura 4 Lasmicroplacas abiertas que no se hayan utilizado deben conservarse a 2 C 8 C en una bolsa cerrada y con el desecante suministrado 5 Cuando el concentrado para el lavado de la placa 20x se conserva a 2 C 8 C pueden formarse cristales que deben disolverse por calentamiento a 37 C antes de su USO 6 Cuando el diluyente se conserva a 2 C 8 C puede precipitar ello no afecta al rendimiento del kit RECOGIDA TRANSPORTE Y CONSERVACI N DE LAS MUESTRAS Se pueden utilizar muestras de suero o plasma con EDTA heparina o citrato s dico Antes de guardar las muestras verifique que se hayan separado por centrifugaci n los co gulos O las c lulas sangu neas Las muestras deben conservarse a 2 C 8 C si el an lisis se va a llevar a cabo en los 7 d as posteriores a la extracci n O congelarse a una temperatura de al menos 20 C si el an lisis se va a retrasar m s de 7 d as Es preferible utilizar muestras transparen
16. l vese inmediata y abundantemente con agua El concentrado para el lavado de la placa 20X contiene un 2 de cloroacetamida clasificada como irritante Xi por las directivas de la Comunidad Econ mica Europea CEE que son de aplicaci n A continuaci n figuran las frases correspondientes a los riesgos R y la seguridad S R22 43 Nocivo por ingesti n Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S22 36 37 45 No respirar el polvo Use indumentaria y guantes de protecci n adecuados En caso de accidente o malestar acuda inmediatamente al m dico si es posible mu strele la etiqueta 1 Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos al abrirlos y al extraer partes al cuotas de los viales o frascos originales 2 No pipetee con la boca Manipule las muestras las microplacas y los controles reactivos y no reactivos como si fueran agentes potencialmente infecciosos 4 Use bata de laboratorio y guantes desechables mientras realiza el ensayo Deseche los guantes en bolsas para residuos biopeligrosos L vese bien las manos al finalizar 5 Es muy recomendable que este ensayo se lleve a cabo en una c mara de bioseguridad 6 Mantenga el material alejado de bebidas y alimentos En caso de accidente o contacto con los ojos l vense inmediata y abundantemente con agua y acuda a un m dico 8 Acuda a un m dico de inmediato si ingiere material contaminado o si ste entra en contacto con heridas abiert
17. llos bajando la punta del aspirador lentamente hasta el fondo de cada pocillo TENGA CUIDADO DE NO ROZAR LA SUPERFICIE INTERIOR DEL POCILLO Llene la placa completa con al menos 300 ul pocillo y a continuaci n aspire inmediatamente en el mismo orden Repita este ciclo seis 6 veces Invierta la microplaca y presi nela con firmeza sobre papel absorbente para secarla El papel absorbente debe eliminar cualquier resto del tamp n de lavado que quede en la placa ya que ste puede inhibir la aparici n de color durante la incubaci n del sustrato Llene un recipiente para reactivos con el CONJUGADO DE TRABAJO Mediante la pipeta multicanal dispense 100 ul de CONJUGADO DE TRABAJO en cada pocillo Ponga otra tapa para placa Incube la microplaca durante 30 minutos a 37 C no use ba o Mar a a 37 C para la incubaci n Retire y deseche la tapa de la placa Repita el procedimiento de lavado descrito en los pasos 11 y 12 20 pl 60 minutos 300 ul por pocillo por lavado 100 ul 30 minutos 16 Rellene un recipiente de reactivo con 100 ul SUSTRATO Mediante un pipeteador multicanal dispense 100 ul de SOLUCI N SUSTRATO DE TRABAJO en cada pocillo Ponga una tapa para placa 17 Incube durante 15 minutos en la 15 minutos oscuridad a 37 C No use ba o Mar a a 37 C para la incubaci n 18 Retire y deseche la tapa de la placa 19 Mediante la pipeta multicanal dispense 100 ul 100 ul de SOLUCI N DE
18. ositivos con sueros de personas no infectadas Para detectar tanto los anticuerpos frente al HTLV 1 Il como los anticuerpos frente al HTLV II es necesario utilizar un ensayo ELISA para HTLV 1 1l muy sensible y espec fico El ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MP Diagnostics utiliza exclusivamente una combinaci n de ant genos recombinantes Esta clase de an lisis garantiza la detecci n tanto del HTLV I como del HTLV II por ep topos espec ficos El ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MP Diagnostics ha sido dise ado como ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas cualitativo para la detecci n de anticuerpos frente a los virus HTLV I y HTLV II en suero o plasma humanos Su uso previsto es como prueba de despistaje y es preciso volver a analizar las muestras inicialmente reactivas y confirmar el resultado de las muestras repetidamente reactivas con ensayos complementarios como el ensayo de transferencia Western BLOT 2 4 para HTLV 1 Il 2 4 de MPD DESCRIPCI N DE LOS S MBOLOS A continuaci n figuran los signos gr ficos que aparecen en los envases y productos de MP Diagnostics y que son los que se incluyen con m s frecuencia en los dispositivos m dicos y sus envases Se explican con mayor detalle en la Norma brit nica y europea BS EN 980 2003 D uso No reutilizar Usar antes de Dispositivo OS Sin nimos IVD m dico para Fecha de caducidad diagn stico in vitro C digo de serie Lor Sin nimos N mero de N mero de lote
19. pecific epitope within the HTLV I transmembrane glycoprotein Blood 1995 68 4 392 1399 9 Varma M Rudolph D Knuchel M Switzer W Hadlock K G Velligan M Chan L Foung S K H and Lal R B Enhanced specificity of truncated transmembrane protein for serologic confirmation of HTLV I and HTLV II infection by Western Blot assay containing recombinant envelope olycoproteins J Clin Micro 1995 33 12 3239 3244 se aer MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Singapur 118259 Tel 65 6775 0008 Fax 65 6775 4536 Correo electr nico enquiry_ap O mpbio com Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Correo electr nico info mt procons com Oficinas regionales MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport Apartado de correos 1015 1211 Ginebra 5 Suiza Tel 4122 788 1908 Fax 4122 788 1986 Correo electr nico mpbiosuisse mpbio com Patente en Australia 613350 667189 690540 Patente en Estados 5 066 579 5 614 366 Unidos 5 763 572 5 814 441 5 871 933 5 643 714 Patente en Canad 1337799 Patente en Europa 0395634 Patente en Jap n 2559482 El nombre y el logotipo de Genelabs cuentan con licencia de Genelabs Technologies Inc
20. ra ambos tipos de sustrato gt 99 9 Sensibilidad 420 muestras reactivas positivas en ensayo ELISA y o ensayo de Western blot se estudiaron en tres evaluaciones independientes realizadas en tres lugares distintos internamente en Suecia y en Australia El estudio sueco n 163 indica una sensibilidad equiparable a la de una prueba Elisa de referencia Mientras que la evaluaci n australiana n 155 arroj una sensibilidad del 100 la valoraci n interna basada en muestras comerciales y en el panel comercial de t tulo variado PRP206 mostr una sensibilidad del 99 105 106 La nica muestra negativa detectada con el ensayo ELISA para HTLV III 3 0 de MPD en la evaluaci n interna dio tambi n negativo en un ensayo ELISA de la competencia y arroj un resultado indeterminado en el ensayo de Western blot con una presencia de bandas d biles GD21 y p19 Las tres evaluaciones indicaron una sensibilidad global superior al 99 7 Especificidad Se analiz un total de 5 300 muestras que inclu an donantes de sangre aleatorios 5 000 muestras cl nicas 200 y muestras que pod an interferir potencialmente 100 en el estudio La especificidad de diagn stico en los grupos de donantes de sangre aleatorios de muestras cl nicas y de grupos que pod an interferir potencialmente fue del 99 8 98 y 97 respectivamente El ensayo ELISA para HTLV III 3 0 de MPD demostr una alta especificidad superior al 99 en los tres lotes de muest
21. ras analizados Reproducibilidad La reproducibilidad interlote e intralote del ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MPD se evalu internamente con los controles del kit una muestra positiva para el HTLV I una muestra negativa para el HTLV 1 1l y con ACCURUN 24 un ensayo confirmatorio multimarcador de BBI Interlote se analizaron dos lotes de microplacas en cuatro ocasiones distintas con tres duplicados de cada control de kit y 8 duplicados de las muestras restantes en cada ocasi n Intralote se analiz un lote de microplacas con 8 duplicados de cada muestra dos veces el mismo d a y se realizaron los controles del kit de cada ensayo en cuatro d as distintos Los resultados indicaron que el coeficiente de variaci n CV en as muestras analizadas se situaba entre el 3 y el 8 LIMITACIONES DEL M TODO Un resultado de reactividad repetida con el ensayo ELISA para HTLV 1 11 3 0 de MPD indica presunci n de anticuerpos frente a HTLV I II en la muestra Un resultado NO REACTIVO con el ensayo ELISA para HTLV VII 3 0 de MPD indica la probable ausencia de anticuerpos frente a HTLV 1 Il detectables en la muestra Sin embargo no existen datos suficientes para descartar la transmisi n de HTLV 1 Il en muestras de sangre en las que se ha determinado la no reactividad con el ensayo ELISA para HTLV III 3 0 de MPD Por lo tanto un resultado NEGATIVO no descarta la posibilidad de exposici n a HTLV I II ni de infecci n por estos virus
22. s anticuerpos frente a HTLV 1 II 4 El ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MPD considera que las muestras que son inicialmente reactivas y resultan no reactivas al repetir el an lisis son negativas 5 Las muestras con reactividad repetida en el ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MPD deben analizarse con m todos adicionales m s espec ficos como el ensayo HTLV BLOT 2 4 de MPD CARACTER STICAS ESPEC FICAS DEL ENSAYO El ensayo ELISA para HTLV III 3 0 de MPD versi n TMB equivale al ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MPD versi n OPD Desde los puntos de vista t cnico y biol gico comparten similitudes en condiciones de uso especificaciones propiedades dise o m todos de aplicaci n principios de funcionamiento y materiales en contacto con los mismos fluidos corporales Los ensayos difieren en cuanto a el sustrato utilizado OPD frente a TMB e eltipo y volumen de soluci n de detenci n necesario cido sulf rico frente a cido clorh drico y la longitud de onda en la que se ha le do el ensayo 492 frente a 450 nm Por tanto se evalu el ensayo ELISA para HTLV I II 3 0 de MPD para detectar anticuerpos frente al HTLV I y el HTLV II mediante la versi n OPD Las caracter sticas del ensayo obtenidas como se indica a continuaci n se extrapolaron a la versi n TMB NOTA el estudio australiano se realiz con los sistemas del sustrato OPD y TMB y se descubri que concordaba 155 155 pa
23. simismo deben desecharse siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos El control reactivo y el control no reactivo contienen timerosal y azida s dica La azida s dica puede reaccionar con el cobre y el plomo que se utilizan en ciertas tuber as y formar sales explosivas Aunque las cantidades que se usan en este kit son peque as los materiales que contienen azida deben eliminarse con vol menes relativamente grandes de agua para evitar la acumulaci n de azidas met licas en las tuber as A continuaci n figuran las frases correspondientes a los riesgos R y la seguridad S R20 21 22 Nocivo por inhalaci n por ingesti n y en contacto con la piel R32 En contacto con cidos libera gases muy t xicos S7 32 Mantener en recipiente bien cerrado No respirar los vapores S35 Elimine los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles S36 Use indumentaria protectora adecuada S46 En caso de ingesti n acuda inmediatamente al m dico y mu strele la etiqueta o el envase El Diluyente contiene Bronidox y Tris clasificados como irritantes Xi por las directivas de la Comunidad Econ mica Europea CEE que son de aplicaci n A continuaci n figuran las frases correspondientes a los riesgos R y la seguridad S R36 38 Irrita los ojos y la piel S26 28 En caso de contacto con los ojos l velos inmediata y abundantemente con agua y acuda a un m dico En caso de contacto con la piel
24. tes y no hemolizadas Las muestras lip micas ict ricas o contaminadas por part culas deben filtrarse 0 45 um o centrifugarse antes del ensayo El suero de los pacientes puede estar inactivado pero no es un requisito indispensable para el rendimiento ptimo del an lisis Para efectuar la inactivaci n 1 Afloje las tapas de los recipientes con el suero 2 Caliente el suero a 56 C durante 30 minutos al ba o Mar a 3 Deje enfriar el suero antes de volver a ajustar las tapas 4 El suero puede conservarse congelado hasta el an lisis Recomendamos que el suero de los pacientes no se someta a ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n MATERIAL ADICIONAL NECESARIO NO SUMINISTRADO bh Papel absorbente desechable para el banco de trabajo y toallas de papel Recipientes o tubos de polipropileno Pipetas graduadas 5 ml 10 ml Pipeta multicanal capaz de dispensar 50 ul 100 ul y 200 pl Pipeta capaz de dispensar 1 1000 pl Puntas de pipeta desechables Recipientes para reactivos cubetas con capacidad para 25 ml Agua destilada o desionizada de calidad reactivo Matraces 500 mi 1 litro 10 Lavador de microplacas ELISA Otra posibilidad consiste en realizar el lavado manualmente con un pipeteador multicanal capaz de dispensar vol menes de 0 3 ml y un dispositivo aspirador 11 Incubador a 37 1 C 12 Lector de placas para microensayos de longitud de onda doble A459742 O sencilla A
25. y los resultados obtenidos 3 P ngase en contacto con la oficina de MP Biomedicals m s cercana o con su distribuidor local BIBLIOGRAF A 1 Poisez B J etal Detection and isolation of type C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T cell lymphoma Proc Natl Acad Sci USA 1980 77 7145 7419 2 Kalyanaraman V S et al A new subtype of human T cell leukemia virus HTLV II associated with a T cell variant of hairy cell leukemia Science 1982 218 571 573 3 Williams A E et al Seroprevalence and epidemiological correlates of HTLV I infection in U S blood donors Science 1988 240 643 646 4 Lipka J J et al 1990 Enhancing the sensitivity of HTLV immunoassays in Human Retrovirology HTLV Edt W A Blattner Raven Press NY pp 409 475 5 Lee H et al High rate of HTLV II infection in seropositive IV drug abusers in New Orleans Science 1989 244 471 475 6 Lipka J J et al Modified Western Blot Assay for confirmation and differentiation of Human T cell Lymphotropic Virus Type l and ll J Infect Dis 1991 164 400 403 7 LipkaJ J et al Segregation of Human T Cell Lymphotropic Virus Type l and Il infections by Antibody Reactivity to Unique Viral Epitopes J Infect Dis 1992 165 268 272 8 Hadlock K G Goh C J Bradshaw P A Perkins S Lo J Habbas R K Kaplan L and Foung S K H Delineation of an Immunodominant and highly HTLV s
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