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Instrucciones Sistema de Fluorescencia

1. Nota Cuando se utiliza un objetivo de la serie MPLN BD en la observaci n de campo oscuro con una fuente de luz de xen n la zona perif rica puede verse oscurecida con ciertas muestras 43 44 Importancia del nombre del objetivo ejempos M PL FL N 100 BD Plan E Ninguno Campo claro BD Campo oscuro BDP Campo claro o polarizado IR Luz IR Figura Aumento Ninguno UIS N UIS 2 Ninguno Acrom tico o correcci n de la aberraci n con dos longitudes de onda roja y azul FL Semiapocrom tico o correcci n de la aberraci n del color con longitudes de onda visuales morado azulado a rojo APO Apocrom tico o correcci n de la aberraci n del color con toda la longitud de onda del dominio visual morado a rojo PL Plano o correcci n de la imagen curvando la zona perif rica M Observaci n de metal sin cubierta LM Observaci n de metal de distancia de trabajo larga SLM Observaci n de metal de distancia de trabajo s per larga LC Observaci n sobre la placa de vidrio Glosario de t rminos utilizados en la tabla de caracter sticas pticas Distancia de trabajo WD N mero de apertura NA Resoluci n Profundidad del enfoque N mero de campo Campo de visi n La distancia desde la parte superior de la muestra y la lente delantera del objetivo Cifra importante que determina las caracter
2. e Filt i parara Di metro 25 01 0 2 mm grosor m x 6 mm e Filtro de excitaci n e Espejo dicroico 26 01 0 3 x 38 01 0 3 mm grosor 1 0 05 mm EE Filtro barrera disponible en el mercado Xx V Espejo dicroico disponible en el mercado Al sustituir el espejo dicroico tenga especial cuidado de no mancharlo con huellas dactilares etc Filtro de excitaci n Superficie de la pel cula de interferencia disponible en el mercado 32 Montaje de la l mpara de mercurio Figs 12 15 1 Afloje el tornillo de sujeci n del recept culo O utilizando el destornilla dor Allen 2 Sujete la secci n superior del portal mparas y tire de ella hacia arriba para extraer la secci n del recept culo x Para evitar funcionamientos incorrectos no sujete el portal mparas por los mandos de centrado 3 Coloque la secci n del recept culo boca abajo como se muestra en la Fig 13 OE portal mparas est equipado con el soporte para el transporte cuan do el producto se env a de f brica o con una l mpara vieja despu s de haber cambiado la l mpara Quite el soporte o la l mpara vieja aflojan do los dos tornillos de sujeci n de la l mpara 4 Acople el polo positivo de una l mpara de mercurio especificada O en el soporte fijo que hay en la parte superior y a continuaci n el polo negativo en el soporte de la parte inferior Aseg rese de utilizar la l mpara USH 1030L
3. Procedimiento de montaje del filtro 1 Retire el mando de la corredera del extremo opuesto al extremo en el que se encuentra grabada la inscripci n de la corredera y coloque la corredera del filtro de forma que la superficie con la inscripci n de la corredera quede mirando hacia abajo 2 Retire los anillos de soporte del filtro de las posiciones de inserci n de los filtros gir ndolos en sentido contrario a las agujas del reloj con la herramienta suministrada para los anillos de soporte La orientaci n de inserci n de los anillos de soporte deber cambiarse de acuerdo con el grosor de los filtros montados 3 Si entre los filtros montados se incluye un filtro excitador ins rtelo de forma que la inscripci n de la flecha quede mirando hacia abajo a N Y a Filtro con un grosor de 4 mm o m s X 4 X Coloque cada filtro de forma que quede ajustado en el anillo de soporte b N A b Filtro con un grosor de 4 mm o menos a 4 Coloque cada filtro de forma que no quede ajustado en el anillo de soporte Si realiza una observaci n de luz transmitida o no quiere utilizar un filtro monte las placas de protecci n contra la luz suministradas del mismo tama o del filtro en su posici n Si no hay nada montado la luz dispersa de la iluminaci n reflejada puede entrarle en los ojos o puede que se deteriore la visi n en las observacio nes de luz transmitida 4 Es necesario colocar una inscripci n con el tipo de filt
4. OCuando una imagen de fluorescencia obtenida por excitaci n m ltiple de U B G se observa con unidades de espejo de fluorescencia de doble o triple banda deber utilizar el compensador del excitador para seleccionar el balance entre las intensidades de la luz de excitaci n de los fluorocromos Tornillo de sujeci n Palanca de ajuste Procedimiento de instalaci n Fig 9 1 Mantenga la palanca de ajuste del compensador del excitador ver ticalmente e ins rtela en una de las ranuras de inserci n del filtro ND con el mismo n mero que la corredera en la parte izquierda del iluminador o en la que se encuentra cerca del panel posterior del iluminador La posici n de inserci n var a dependiendo del tipo de compensador del excitador e Independientemente del tipo de compensador del excitador ins rtelo siempre de forma que el tornillo de sujeci n quede mirando hacia usted 2 Apriete los tornillos de sujeci n utilizando el destornillador Allen U EXBABG EXBAUB Fig 9 Funcionamiento Observaci n de una muestra de doble tinci n 1 Prepare la observaci n de fluorescencia reflejada normal 2 Monte las unidades de espejo de fluorescencia para tinci n doble e interp ngalas en la trayectoria de luz OProductos est ndar Olympus x Debido a sus caracter sticas la excitaci n G tiene un rango de control de intensidad m s estrecho que la excitaci n U y B El rango de
5. U MRFPHQ DM565HQ BP530 555HQ BA570 625HQ Para RFP Significado del nombre de la unidad de espejo U MCFPHQ CFP GFP YFP RFP Unidad de espejo Universal Objetivos para distintos modos de observaci n Fluori nci Objetivo uorescencia de luz reflejada Diferencia de DIC de luz transmitida contraste de fase UPlanSApo 4X 10X 2 20X 20X0 40X 2 G0XW 60XO 100XO PlanApoN 60X0 UPlanFLN 4X 10X 2 20X 40X 40X0 60X 60XOI 100X02 100X012 00 O 000000 0 0000000 O 000000000 000100001 O Combinaci n recomendada O Ligeramente inferior en excitaci n U No utilizable o el objetivo aplicable no est disponible Se necesita un objetivo de contraste de fase Ph para la observaci n de contraste de fase 10 Fluorescencia de luz reflejada Diferencia de Objetivo contraste de Diegez U V BV B IB G IY fase transmitida UPlanApo 4X 10X 10XO 10XW 20X 20X03 40X 40X0I3 60X 60XW3 100XOI3 PlanApo 40X 60X03 100X03 UPlanFI 4X 10X 20X 40X 60X013 100X0 OIS 20X3 340 20XW3 340 40X3 340 40X013 340 40XW3 340 00000000000 00 00001001 Ol O O O O O O O O O O O O O O 2999 000001000001 O Combinaci n recomendada O Utilizable pero la imagen puede ser oscura en funci n de la NA No utilizable o el objetivo aplicable no est
6. disponible O Se necesita un objetivo de contraste de fase Ph para la observaci n de contraste de fase El objetivo Ph no est disponible para el UPlanFI100XOIS C mo encender la unidad de alimentaci n Ponga el interruptor principal en 1 ON El arco se estabilizar entre 5 y 10 minutos despu s del encendido OEn raras ocasiones es posible que una l mpara de mercurio de tipo descarga debido a sus caracter sticas no se encienda desde el principio En este caso ponga el interruptor principal en O OFP espere de 5 a 10 segundos y a continuaci n p ngalo de nuevo en 1 ON Para prolongar la vida til de la l mpara de mercurio no la apague durante los 15 minutos siguientes a su encendido x La l mpara de mercurio no se podr encender de nuevo hasta que el vapor del mercurio se haya enfriado y licuado Antes de volver a encender la l mpara de mercurio espere unos 10 minutos desde que la haya apagado por ltima vez O Por razones de seguridad la alimentaci n del portal mparas se interrumpe si ste se abre mientras la l mpara est encendida Si esto ocurre ponga el interruptor principal en O OFF espere m s de 10 minutos y a continuaci n p ngalo de nuevo en I ON No abra el portal mparas hasta que se haya enfriado lo suficiente x Para poner el reloj a cero mantenga pulsado el bot n de reinicio hasta que aparezca 000 0 11 Centrado del diafragma de campo
7. facilitar la observaci n E Y O 2 Analizador Filtro Lente de conversi n e U AN e U 25ND6 2 e U RCV e U AN360 3 e U 25ND25 2 e U 25ND50 2 E e U 25LBD Portal mparas e U 251F550 e Portal mparas de mercurio e U 25Y48 U LH100HG e U 25FR U LH100OHGAPO e U 25L42 e Portal mparas hal geno E gt U LH100 3 E a o ARAD U LH1OOL 3 S U ULH Modelo hal geno S 5 e Portal mparas de xenon SS w gt N U LH75XEAPO S Ta 0 S gt A g OLYMPU BX81 7 Polarizador Unidad de espejo a e Para campo claro U MBF3 e Para campo oscuro U MDF3 4 e Para DIC U MDIC3 Para campo claro Tubo de protecci n contra la luz con filtros ND incorporados U MBFL3 e Para fluorescencia cies Objetivo U MWGS3 e Objetivos de la serie UIS para muestras met licas Prisma DIC e U DICR e U DICRH e U DICRHC Cuando se utiliza la unidad de espejo U MDF3 se necesita la lente de conversi n U RCV Cuando se utiliza la unidad de espejo U MDIC3 o el polarizador U PO3 o U POTP3 deber combinar el filtro U 25L42 para evitar que la ptica de polarizaci n se deteriore con los rayos UV de una fuente de luz de alta intensidad que no sea una fuente de luz hal gena 36 OEste cap tulo se refiere solamente al montaje de los elementos que no se pueden montar del mismo modo que los m dulos de fluorescencia Montaje de la lente de conversi
8. AN iia Mando de enfoque de la uniforme y lo m s claro posible lente colectora P g 14 Ajuste el diafragma de campo Mando del diafragma de campo P g 12 Ajuste el diafragma de apertura Mando del diafragma de apertura P g 13 C Comience la observaci n D Para interrumpir la observaci n durante un corto per odo Mando del obturador P g 12 de tiempo interponga el obturador XA i S i Haga una fotocopia de las p ginas sobre el procedimiento de observaci n y p guela en un lugar pr ximo al microscopio UTILIZACI N DE LOS CONTROLES Precauciones generales para la observaci n 1 Compruebe que el voltaje y la frecuencia de la fuente de alimentaci n cumplen los requisitos inscritos en la placa de especificaciones 2 Aseg rese de que el cable de alimentaci n y los cables de conexi n est n bien conectados 3 Cuando vaya a realizar solamente observaciones de contraste de fase de luz transmitida u observaciones DIC de luz transmitida deje vac a una posici n en la torreta Esto permite la transmisi n de luz blanca La torreta debe ponerse siempre en una posici n de clic Si se desv a de una posici n de clic la cubierta podr a deformarse por el calor 4 Abra el diafragma de campo de forma que circunscriba el campo de visi n Si est
9. En este valor se dan por supuestos ciclos de luz de 2 horas de iluminaci n y 30 minutos de extinci n con la USH 1030D No la encienda y la apague en un ciclo m s corto que el mencionado ya que ello acortar la vida til de la l mpara 2 Antes de cambiar la l mpara espere al menos 10 minutos o has ta que la l mpara y el portal mparas se hayan enfriado despu s de apagar la l mpara Antes de quitar la l mpara compruebe que el interruptor principal de la unidad de alimentaci n est en la posici n O OFF y desenchufe el cable de conexi n del conector de salida de la unidad de alimentaci n Consulte la p gina 33 para obtener informaci n detallada sobre el procedi miento de sustituci n 3 Despu s de cambiar la l mpara ponga el reloj en 000 0 seg n se ha indicado anteriormente 34 Fig 17 Preparaci n de la unidad de alimentaci n Figs 16 y 17 A Los cables pueden resultar da ados f cilmente si se doblan o se retuercen No los someta a una fuerza excesiva A Aseg rese de que el interruptor principal est en O OFF antes de conectar el cable de alimentaci n A Utilice siempre el cable de alimentaci n suministrado por Olympus Si el cable no est incluido seleccione el cable adecuado consul tando SELECCI N DEL CABLE DE ALIMENTACI N ADECUADO que se encuentra al final de este manual de instrucciones 1 Compruebe que el voltaje y la frecuencia de la fuente de alimentaci
10. de USHIO Inc o HBO103W 2 de OSRAM A Evite dejar huellas o contaminantes sobre la l mpara de mercurio De lo contrario existe un riesgo de explosi n debido a la distor si n del vidrio causada por las manchas Si la l mpara est conta minada limpiela suavemente con una gasa ligeramente humede cida con alcohol absoluto 5 Acople la secci n del recept culo a la l mpara en la posici n original y apriete el tomillo de sujeci n O x Alinee los bordes exteriores del portal mparas con los de la sec ci n del recept culo y empuje el portal mparas en l nea recta ha cia abajo Fig 15 Puesta a cero del reloj de la l mpara 1 Presione la secci n central del bot n de puesta a cero del panel delantero de la unidad de alimentaci n para poner la lectura del reloj en 000 0 OEl reloj muestra el tiempo transcurrido en horas La vida til de una l mpara es de 300 horas Por razones de seguridad sustituya la l mpa ra cuando el reloj marque 300 0 horas A Sustituci n de la l mpara de mercurio 1 Para no poner en peligro la seguridad del equipo cambie la l m para cuando se haya utilizado durante 300 horas La l mpara puede romperse si se supera la vida til especificada Cuando se acerca el final de la vida til de la l mpara es proba ble que el parpadeo aumente Por tanto le aconsejamos que cambie la l mpara seg n el prop sito de la observaci n
11. n de entrada cumplen los requisitos inscritos en la placa de especifica ciones Los sistemas de 100 V pueden utilizarse con voltajes de entre 100 y 120 V y los sistemas de 200 V pueden utilizarse con voltajes de entre 220 y 240 V ambos con frecuencias de 50 60 Hz 2 Enchufe de forma segura el cable de conexi n del portal mparas en el conector de la unidad de alimentaci n 3 Enchufe el cable de alimentaci n de la unidad de alimentaci n en su conector de entrada de corriente O a continuaci n introduzca el en chufe en la toma de la pared O A Aseg rese de suministrar la corriente desde una toma de corrien te con conexi n a tierra de tres conductores y utilizando el cable de alimentaci n adecuado En caso de que la toma de corriente no est bien conectada a tierra Olympus no puede seguir garanti zando el funcionamiento seguro del equipo 35 Jl CONFIGURACI N DEL SISTEMA DE OBSERVACI N REFLEJADA El iluminador universal BX URA2 puede utilizarse en diversas observaciones de campo claro en la observaci n de campo oscuro la observaci n DIC y la observaci n polarizada simplificada bajo iluminaci n reflejada cuando se utiliza en combina ci n con un objetivo UIS para muestras met licas la unidad de espejo de campo claro U MBF3 la unidad de espejo de campo oscuro U MDF3 etc OSustituya la platina est ndar por la platina para muestras metal rgicas o el portamuestras por la placa de la platina para
12. n del filtro y o O Inserte los filtros ND U 25ND6 2 y o U 25ND25 2 U 25ND50 2 con la cara que contiene indicaciones mirando hacia el observador Los filtros ND deben insertarse con la orientaci n correcta De lo con trario los filtros ND pueden resultar da ados e Despu s de insertar un filtro oir dos clics El primer clic indica que el filtro est en una posici n vac a el segundo clic indica que el filtro entra en la trayectoria de luz A Tenga en cuenta que el marco met lico del filtro se calentar mu cho si deja el filtro insertado con la l mpara de mercurio encendi da durante mucho tiempo No deje las posiciones de inserci n del filtro en otras posiciones que no sean las posiciones de clic durante un per odo prolonga do 41 OBSERVACIONES DE FLUORESCENCIA SIMULT NEAS 16 OCombinando adecuadamente los equipos este sistema se puede utilizar en la observaci n de campo claro de luz transmitida la observaci n de contraste de fase transmitida y la observaci n DIC de luz transmitida adem s de la observaci n de fluorescencia reflejada Con muestras que se decoloran r pidamente la decoloraci n se puede minimizar utilizando inicialmente la observaci n DIC de luz transmitida o la observaci n de contraste de fase de luz transmitida para el posicionamiento La observaci n de fluorescencia reflejada tambi n se puede realizar simult neamente con la observaci n DIC o con la de contraste de fase con lo
13. n U RCV Fig 18 OAseg rese de utilizar esta lente de conversi n cuando emplee la uni dad de espejo U MDF3 para la observaci n de campo oscuro e Inserte la lente de conversi n O entre el iluminador reflejado y el portal mparas x Con la observaci n de campo ultra amplio la iluminaci n ambien te puede resultar insuficiente para ciertos tipos de muestras Montaje del tubo de protecci n contra la luz Fig 19 OEI tubo de protecci n contra la luz debe utilizarse con la observaci n de campo oscuro utilizando la unidad de espejo DP 1 Retire la torreta 2 Coloque el tubo de protecci n contra la luz en el iluminador reflejado de forma que el collar de posicionamiento del tubo quede a la derecha Fig 19 Centrado del diafragma de campo Fig 20 1 Gire la torreta para interponer la unidad de espejo BF en la trayectoria de luz y a continuaci n abra el obturador O 2 Gire el rev lver portaobjetivos para interponer el objetivo de 10X y a continuaci n coloque la muestra sobre la platina y enfoque la imagen de forma aproximada 3 Tire del mando del diafragma de campo Y del iluminador reflejado hasta que el di metro del diafragma sea lo m s peque o posible 37 4 Introduzca los destomilladores Allen incluidos con el pie del microsco pio en los dos tomillos de centrado del diafragma de campo Y y aj stelos de modo que la imagen del campo del diafragma quede en el centro del campo d
14. 0 75 200X 5 2 11 0 42 500X 13 0 44 0 37 1000X 0 73 0 22 0 37 1500X 0 6 015 2 24 50X 59 44 1 34 100X 18 22 0 84 200X 61 11 0 45 500X 1 4 0 44 0 37 1000X 0 22 2 58 50X 70 44 1 34 100X 18 22 0 84 200X 61 11 0 67 500X 25 0 44 0 42 1000X 0 22 2 58 50X 70 44 1 34 100X 18 22 0 84 200X 61 11 0 67 500X 25 0 44 0 42 1000X 0 22 0 56 200X 11 0 35 500X 0 44 0 35 1000X 0 22 4 2 1 OJOJOO MPLN BD Acro MPlanN BD m tico plano de campo claro campo oscuro FN 22 MPLFLN MPlanFLN Semiapocrom tico plano FN26 5 125X FN22 4 2 1 OJOO 1 1 OJo MPLFLN BD MPlanFLN BD Semiapocrom tico plano de campo Cl O aro campo scuro FN26 5 r fojojojo MPLFLN BDP MPlanFLN BDP Semiapocrom tico plano de luz polarizada reflejada FN26 5 LMPLAN Semi LMPlanFLN apocrom tico plano de distancia de trabajo larga FN26 5 LMPLALN BD Semi LMPlanFLN BD apocrom tico plano de campo claro campo oscuro de distancia de trabajo larga FN265 MPlanApo MPlanApo Apocrom tico plano PlanApo BD Apocro MPlanApo BD m tico plano de campo 0 37 1000X 0 22 claro campo oscuro SLMPlan Acrom tico SLMPlan 0 96 200X 11 plano de distancia de trabajo s per 0 75 500X 0 44 larga FN26 5 1 OJOO 1 1 ojojo ejojojojojo
15. 550 eloduro de propidio ADN BP480 550 e RFP BP530 550 BA575IF BP545 580 BA610IF Rojo Texas Anticuerpo fluorescente Combinaciones de filtros separadores de colores Para observar solamente el tinte de exci U MNUA2 BP360 370 BA420 460 taci n U cuando se utiliza el tinte de ex citaci n U junto con el FITC U MWIBA3 BP460 495 Para observar solamente el tinte de excita BA510 550 ci n B cuando se utiliza el tinte de excita U MNIBA3 BP470 495 ci n B junto con el TRITC o el rojo Texas U MWIGA3 BP530 550 Para observar solamente el tinte de exci BA575 625 taci n G cuando se utiliza el tinte de U MNIGAS BP540 550 excitaci n G junto con Cy5 Significado del nombre de la unidad de espejo U MNIBA2 N mero de modelo 2 3 Para la separaci n de colores Excitaci n U V BV B IB G IG o IY Ancho de banda SW Banda s per ancha W Banda ancha N Banda estrecha Unidad de espejo Universal Exclusivamente para prote nas fluorescentes M todo de excitaci n Unidad de espejo Espejo dicroico Filtro de excitaci n Filtro barrera Fluorocromos CFP U MCFPHQ DM450HQ BP425 445HQ BA460 510HQ Para ECFP GFP U MGFPHQ DM485HQ BP460 480HQ BA495 540HQ Para EGFP YFP U MYFPHQ DM505HQ BP490 500HQ BA515 560HQ Para EYFP RFP
16. C en disminuci n lineal pasando por 70 a 34 C 60 a 37 C hasta 50 de humedad relativa a 40 C e Variaciones del voltaje de alimentaci n no superar un 10 del voltaje normal e Grado de contaminaci n 2 seg n la norma IEC60664 e Instalaci n Categor a de sobretensi n Il seg n la norma IEC60664 23 25 M DULOS OPCIONALES La capacidad de deslizamiento de la corredera del filtro U RSL6 o U RSL6RM puede disminuir cuando se haya movido hacia adelante y hacia atr s 2000 o m s veces En este caso retire la suciedad y la contaminaci n de la superficie de deslizamiento Si espera mover hacia adelante y hacia atr s la corredera m s de 2000 veces aplique una capa fina de lubricante como grasa sobre la superficie de deslizamiento Corredera del filtro de 6 posiciones U RSL6 OEsta corredera del filtro se utiliza con el iluminador BX URA2 o BX RFA y acomoda un total de seis filtros ND y de excitaci n Est dise ada para evitar la desviaci n del centrado entre los ejes pticos de los filtros de excitaci n cuando se emplean m ltiples unidades de espejo de excitaci n y se pasa de unas a otras Mando de la corredera Posici n de la etiqueta de inscripci n Di metro 8 mm profundidad 1 mm Posici n de la protecci n contra la luz Posiciones de inserci n del filtro x 6 Di metro 25 mm grosor de 2 a 6 mm Placa de protecci n contra la luz Engranaje motor del anillo de soporte
17. Fig 1 1 Cierre la trayectoria de luz deslizando el mando del obturador a la posici n marcada 0 2 Interponga la unidad de espejo B o IB en la trayectoria de luz girando la torreta Si estas unidades de espejo no est n disponibles interponga otra uni dad de espejo de fluorescencia en la trayectoria de luz 3 Abra la trayectoria de luz deslizando el mando del obturador a la posi ci n marcada O 4 Interponga el objetivo de 10X en la trayectoria de luz coloque la mues tra sobre la platina y enfoque la imagen de forma aproximada 5 Tire del mando del diafragma de campo Y para minimizar el di metro del campo 6 Coloque la llave Allen suministrada con el pie del microscopio en los dos tornillos de centrado del campo 0 y realice el ajuste de modo que la imagen quede en el centro del campo de visi n 7 Mientras empuja el mando del diafragma de campo Q ampl e el diafragma de campo hasta que la imagen de campo inscriba el campo de visi n Si despu s de esto no est centrado int ntelo de nuevo 8 Ampl e el diafragma hasta que la imagen alcance pr cticamente el mis mo tama o que el campo de visi n es decir que lo circunscriba Efectos del diafragma de campo El diafragma de campo restringe el di metro del haz de luz que entra en el objetivo y de este modo excluye la luz exterior mejorando el contraste de la imagen El diafragma de campo tambi n sirve para evitar el desvanecimiento del
18. U 25ND6 2 Filtro de densidad neutra Para ajustar el brillo de la ilumina ci n Transmitancia 6 U 25L42 Para evitar que el polarizador se queme cuando se utiliza una fuente de luz de alta intensidad 39 4 2 Observaci n de contraste de interferencia diferencial DIC Nomarski de luz reflejada xEl rendimiento del polarizador puede deteriorarse cuando haya estado expuesto a la luz durante un per odo prolongado unas 2000 horas seguidas Si esto ocurre sustituya el polarizador x Cuando utilice la fuente de luz de alta intensidad aseg rese de utilizar el filtro U 25L42 para evitar que se queme el polarizador OCuando realice una observaci n de un color sensible utilizando la corredera DIC U DICRH combine el polarizador U POTPS Selecci n de la trayectoria de luz Fig 24 para la observaci n 1 Gire la torreta para interponer la unidad de espejo BF O en la trayecto ria de luz espejo DIC Nomarski de luz BF umes __ ronejada DIC U MDIC3 Analizador polarizador incorporado Fig 24 OCuando monte la unidad de espejo DIC U MDIC3 en la torreta inter ponga la unidad de espejo DIC en la trayectoria de luz El polarizador y el analizador se encuentran en la posici n de Nicol cruzados por lo que no es necesario el ajuste 2 Interponga el analizador U AN360 3 y el polarizador U PO3 en la tra yectoria de luz 3 Gire la rueda del analizador hasta que se ob
19. de fluorescencia Para reducir la intensidad de la luz de excitaci n utilice filtros ND o el diafragma de apertura siempre que la observa ci n no resulte afectada o utilice el obturador para limitar la exposici n de la muestra a la luz estrictamente necesaria El agente protector contra el desvanecimiento del color disponible en el mercado DABCO etc tambi n puede retrasar el desvanecimiento del color de las muestras El uso de un agente protector contra el desvanecimiento del color est especialmente recomendado cuando se realizan frecuentemente observaciones con un gran aumento x Recuerde que los agentes protectores contra el desvanecimiento del color no pueden utilizarse con algunos tipos de muestras Selecci n de la unidad de espejo de fluorescencia Seleccione la unidad de espejo de fluorescencia adecuada para el fluorocromo utilizado x Nunca monte ni utilice la unidad de espejo de campo claro U MBF3 con una unidad de espejo de fluorescen cia La U MBF3 es excesivamente brillante y pueden producirse lesiones en los ojos Si se va a utilizar este tipo de unidad de espejo junto con una unidad de espejo de fluorescencia utilice la unidad de espejo U MBFL3 equipada con un filtro ND incorporado o a ada un filtro ND del 3 a la U MBFS3 O Uso de acuerdo con la longitud de onda de excitaci n Olympus ha preparado algunos conjuntos de unidad de espejo de fluorescencia en combinaci n con los filtros apropiados que var an dependiendo
20. descentrado c ntrelo utilizando el destornillador Allen 5 Utilice siempre el aceite de inmersi n para los objetivos de inmersi n 6 Si utiliza un objetivo con collar de correcci n como el UPlanSApo40X el UPlanFLN60X el UPlanApo40X o el PlanApo40X podr corregir las variaciones del grosor del cubreobjetos ajustando el collar de correcci n Procedimiento de correcci n Si conoce el grosor del cubreobjetos ajuste el collar de correcci n para el grosor del cubreobjetos utilizando la escala del collar suministrada Si no conoce el grosor gire el collar de correcci n y ajuste el mando de ajuste fino hasta conseguir una imagen con la m xima definici n posible 7 Para interrumpir la observaci n durante un corto per odo de tiempo interponga el obturador Si enciende y apaga la l mpara de mercurio repetidamente reducir su vida til considerablemente 8 Desvanecimiento del color de las muestras Este sistema emplea luz de excitaci n de alta intensidad para permitir una observaci n clara de las muestras con fluorescencia oscura Como consecuencia tras per odos de observaci n prolongados utilizando objetivos de alta potencia los colores de las muestras se desvanecer n m s r pido de lo normal provocando el deterioro de la visi n contraste de im genes fluorescentes En este caso reduzca ligeramente la intensidad de la luz de excitaci n para ralentizar el desvanecimiento del color y mejorar las im genes
21. golpes fuertes o repentinos 3 No utilice el sistema en un lugar en el que reciba la luz solar directamente est sometido a altas temperaturas y humedad polvo o vibraciones 4 Para permitir que se disipe bien el calor de la unidad deje un espacio de 10 cm como m nimo entre el portal mparas y la unidad de alimentaci n 5 El cable de alimentaci n tambi n se puede utilizar para cortar el suministro de corriente en caso de emergencia Para que esto sea posible coloque la unidad de alimentaci n de modo que en caso de emergencia se pueda acceder f cilmente al conector del cable de alimentaci n en la parte trasera de la unidad de alimentaci n o a la toma de la pared para desenchufarlos Mantenimiento y almacenamiento 1 Para limpiar las lentes y otros componentes de vidrio basta con que elimine la suciedad utilizando un ventilador disponible en el mercado y limpie suavemente con un trozo de papel limpiador o una gasa limpia Si la lente est manchada con huellas dactilares o manchas grasas l mpiela con una gasa ligeramente humedecida en alcohol absoluto disponible en el mercado A Dado que el alcohol absoluto es altamente inflamable deber manejarse con cuidado Aseg rese de mante nerlo alejado de llamas abiertas o fuentes potenciales de chispa el ctrica como equipos el ctricos que se est n encendiendo o apagando Recuerde tambi n que deber utilizarse siempre en una habitaci n bien ventilada 2 Cuando se ensuc
22. k uo 0 2 o 5 S oR o 33 Sfm 5 S gt o a m es 2 Ra E i o cS O fes i 9 E z s18 A i O t 2 E o Lo Ss OJ LO 2 12 o E j az D Y Y D 3 Y E Q o E a o 2 2 2 o y 2 3 55 o 2 5 o Ss 2 gt S S a 4 S S c Se i O TE O Go 2 E A a a a a N O O 2 o a o o BIODUEHUUISUBI 2 epuLeyusSuUeLIL A 2 epueyusueLeIL N o y b agi S o o S S pom D i 2 Ha A E w E f D i s fak 3 183 p o 5 lt Lo e laa o o 2 lt 298 2 oc g pal o o o o gt Q o 0 B o al 9 3 ol 1 b D j o peie 3 e lp 2 Pl 2 q LO 2 G a De m DES 5 sa 32 o Q Z3 2 e 9 fo O S ES O O o o o 2 9 epuLeyUsSuUeLIL Y 2 epuLeyUsSuUeLIL LO epueyusueLIL Longitud de onda nm Longitud de onda nm 20 19 Excitaci n G para separaci n de colores banda ancha U MWIGA3 100 BP530 550 y S E O S E 72 1l c S BA575 625 i 0 400 600 800 Longitud de onda nm 20 Excitaci n G para separaci n de colores banda estrecha U MNIGAS 100 P BP540 550 M Transmitancia BA575 625 7 400 600 800 Longitud de onda nm 21 Para prote na fluorescente cian CFP U MCFPHQ 100 DM450HQ 4 BA460 510HQ Transmitancia T 400 450 500 550 600 Longitud de onda nm 22 Para prote na fluorescente verde GFP U MGFPHQ 100
23. n recomendado Utilice el aceite de inmersi n suministra do El tubo de protecci n contra la luz no est montado onte el tubo de protecci n contra la luz e Un lado de la imagen est borroso La muestra est inclinada Coloque la muestra correctamente sobre la platina y aseg rela con el porta muestras El rev lver portaobjetivos no est bien mon tado Monte correctamente el rev lver porta objetivos El objetivo no est bien interpuesto en la trayectoria de luz Interponga el objetivo correctamente en la trayectoria de luz 45 NN SELECCI N DEL CABLE DE ALIMENTACI N ADECUADO Si el cable de alimentaci n no est incluido seleccione el cable de alimentaci n adecuado para el equipo Para ello consulte Especificaciones y Cable certificado a continuaci n PRECAUCI N En caso de que no se utilice el cable de alimentaci n aprobado para los productos Olympus Olympus no puede seguir garantizando la seguridad a nivel el ctrico del equipo Especificaciones Tensi n 125V CA para zonas de 100 120V CA o 250V CA para zonas de 220 240V CA Corriente M nimo 6A Temperatura M nimo 60 C Longitud M ximo 3 05 m Configuraci n de las Tap n del enchufe del accesorio para la conexi n a tierra El lado opuesto termina conexiones en el acoplamiento del dispositivo de configuraci n IEC amoldado Tabla 1 Cable certificado El cable de alime
24. siguiente vez que sta se sustituya Centrado preciso de la imagen del arco del espejo OLa posici n de la imagen del arco del espejo viene ajustada y fijada de f brica Realice el centrado de la imagen del arco del espejo una vez completado el centrado de la l mpara de mercurio y solamente cuan do desee realizar ajustes muy exactos y precisos Tenga en cuenta que una vez que se haya realizado este ajuste el espejo nunca podr regresar a la posici n en la que estaba cuando se envi de f brica 1 Con unas pinzas etc despegue las dos selladuras ciegas que se encuentran en la parte trasera del portal mparas 2 Afloje los tornillos que se encuentran bajo las selladuras utilizando el destomillador Allen El espejo queda suelto cuando se aflojan estos dos tornillos 3 A continuaci n despegue otras dos selladuras ciegas De este modo quedar n expuestos los agujeros de centrado de la imagen del arco del espejo 4 Ajuste el centrado de la imagen del arco del espejo colocando el destornillador Allen en estos agujeros a Montaje de los filtros ND OEl desvanecimiento del color de la muestra se puede retardar atenuan do la intensidad de la luz de excitaci n con filtros ND Utilice los filtros ND siempre que no perturben la observaci n e Cuando resulte necesario se pueden insertar hasta dos filtros ND con ND de 6 y 25 individualmente en las posiciones de inserci
25. sticas del objetivo resoluci n profundidad focal y brillo Resoluci n ma Aumenta en proporci n a la NA Profundidad focal Disminuye en proporci n a la NA Brillo Proporcional al cuadrado de la NA comparaci n bajo el mismo aumento El l mite al que un objetivo puede identificar las im genes de dos puntos que est n cerca nos entre ellos expresado como la distancia entre los dos puntos sobre la muestra La profundidad m xima de la muestra a la que se puede enfocar simult neamente la muestra entera Este valor aumenta cuando el diafragma de apertura se estrecha y des ciende cuando la NA del objetivo se aumenta El di metro de la superficie de la imagen que se puede observar a trav s de los oculares expresado en mm El di metro del rea observable sobre la muestra expresado en mil metros GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS Modos de observaci n de luz reflejada Problema Causa Soluci n a La bombilla funciona pero el campo de visi n sigue oscuro La l mpara de luz reflejada no est encen dida Encienda la l mpara Los diafragmas de apertura y de campo no est n abiertos lo suficiente Ampl elos hasta los tama os correctos La unidad de espejo no est montada Monte la unidad de espejo La unidad de espejo no est bien interpuesta en la trayectoria de luz Interponga la unidad de espejo correcta mente en la trayectori
26. transmitida para ajustar el contraste de la imagen DIC 9 Interponga la unidad de espejo correspondiente a la excitaci n deseada en la trayectoria de luz y abra el obturador 10 Ajuste la luz transmitida para obtener un brillo ptimo de la imagen DIC y de fluorescencia OPara m s informaci n sobre la observaci n DIC de luz transmitida consulte el manual de instrucciones suministrado con el con densador universal de luz transmitida U UCDE8 Notas OLe recomendamos el uso de la corredera del analizador U ANH muy resistente al deterioro en lugar del analizador U AN cuando pase con frecuencia de la observaci n de fluorescencia reflejada a la observaci n DIC Nomarski de luz transmitida y necesite utilizar ambas observaciones simult neamente No obstante si pasa con frecuencia de la observaci n de fluorescencia reflejada a la observaci n DIC Nomarski de luz transmitida pero no necesita emplear ambas simult neamente entonces ser m s conveniente que utilice la unidad de espejo M DICT3 en lugar de un analizador U AN o U ANH Esto facilita la operaci n de cambio porque el analizador entra simult neamente en la trayectoria de luz cuando la unidad de espejo de fluorescencia se cambia a la unidad de espejo DIC GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS En determinadas condiciones el rendimiento del equipo puede verse afectado de manera adversa por una serie de factores que no son defectos de f br
27. 1 condensador universal U UCD8 2 corredera DIC de luz transmitida U DICT U DICTS U DICTHR o U DICTHO 2 analizador U AN o U AN360 3 rev lver portaobjetivos de 6 7 posiciones para DIC U D6RE o U D7RE OPara que la fluorescencia reflejada sea efectiva en la observaci n simult nea inserte el analizador U AN o U AN360 3 en la ranura de inserci n del analizador que se encuentra sobre el espejo dicroico del iluminador No inserte el analizador U ANT en la corredera DIC de luz transmitida dado que se oscurecer la imagen de la observaci n de fluorescencia y provocar que el analizador se queme 1 Interponga la falsa unidad de espejo o una posici n vac a de la torreta en la trayectoria de luz 2 Ajuste el polarizador del condensador universal en la condici n de Nicol cruzados extinci n completa 3 Inserte la corredera DIC de luz transmitida en la posici n provista en el portaobjetivos 4 Gire la torreta del condensador universal para seleccionar el prisma Nomarski que resulte adecuado para el objetivo que se vaya a utilizar para la observaci n 5 Interponga el objetivo que vaya a utilizar en la trayectoria de luz 6 Coloque la muestra sobre la platina y enf quela 7 Ajuste el diafragma de campo de la unidad de iluminaci n de luz transmitida incorporado en la base del microscopio y el diafragma de apertura del condensador universal 8 Gire el mando de desplazamiento del prisma de la corredera DIC de luz
28. B banda ancha U MWB2 100 BA5201F Transmitancia 400 600 800 Longitud de onda nm 10 Excitaci n IB banda estrecha 7 Excitaci n B banda estrecha U MNIB3 U MNB2 LL o Lo lt aa 100 100 o gt gt N 5 o 09 elioueyusue eroUeyusuel 600 800 Longitud de onda nm 400 11 Excitaci n G banda ancha Longitud de onda nm 8 Excitaci n B banda s per ancha U MWG2 U MSWB2 100 100 U DM500 o ze gt A Q co eroueyuIsuea epueywusueIL 600 800 Longitud de onda nm 400 800 600 Longitud de onda nm 12 Excitaci n G banda estrecha 9 Excitaci n IB banda ancha U MNG2 U MWIB3 100 100 Ya o pi o o aa PIOUEYUuUISsUueA BA510IF PIOUEYuIsueA 800 600 Longitud de onda nm 400 800 600 Longitud de onda nm 400 19 separaci n de colores banda 16 Excitaci n U 13 Excitaci n G banda s per ancha MNUA2 U estrecha U MSWG2 2 z O O 8 S a 2 o o 5 o z 0 o o O gt m 7 2 1 Si Q 3 g ci 3 2 3 O i o 2 OO i g o EB TT 2 E S amp a
29. BP460 480HQ JUN DM485HQ 2 i 3 O c E BA495 540HQ N c o E 0 a 400 450 500 550 600 Longitud de onda nm 23 Para prote na fluorescente amarilla YFP U MYFPHQ 100 BP490 500H0 A f ES s O 3 E BA515 560HQ N E 0 D 400 450 500 550 600 Longitud de onda nm 24 Para prote na fluorescente roja RFP U MRFPHQ 100 BP535 555HQ xs s O 3 1 E o i c 1 3 i z 0 i l L Longitud de onda nm 22 Ejemplo t pico del espectro de emisi n de la l mpara de mercurio de ultravacio 365 366 100 312 6 313 2 46 1 50 546 577 0 579 1 Brillo 300 400 500 600 700 800 Longitud de onda nm Para la emisi n de fluorocromos se selecciona un haz de luz que tenga una longitud de onda espec fica de un amplio espectro de longitudes de onda Los cinco picos de luminancia principales est n en longitudes de onda de 365 366 404 7 435 5461 y 5770 5791 nm Asimismo los haces de luz con longitudes de onda de 334 2 y 490 nm con una luminancia bastante baja tambi n son aplicables para la emisi n de fluorocromos J ESPECIFICACIONES Elemento Especificaci n lluminadores verticales Iluminador reflejado Iluminador de fluorescencia BX URA2 BX RFA e Sistema ptico UIS2 UIS Sistema Infinito Universal de correcci n infinita e Aumento 1X Campo superamplio NA 26 5 e Camb
30. OLYMPUS BX URA2 BX RFA U LH1OOHGAPO U LH100HG Unidad de alimentaci n U 25ND6 2 U 25ND25 2 U 25ND50 2 U RSL6 U RSLGEM BX RFSS U EXBABG U EXBAUG INSTRUCCION ES SISTEMA DE FLUORESCENCIA REFLEJADA Este es el manual de instrucciones del Sistema de Fluorescencia Reflejada de Olympus Para garantizar la seguridad obtener un rendimiento ptimo y familiarizarse totalmente con el uso de este sistema le recomendamos que estudie detenidamente este manual antes de manejar el microscopio Conserve este manual de instrucciones en un lugar pr ximo a su mesa de trabajo y f cilmente accesible para poder consultarlo en el futuro Esta publicaci n ha sido impresa en papel 100 reciclado NDICE Un montaje y unos ajustes adecuados resultan indispensables para que el sistema de fluorescencia reflejada alcance el m ximo rendimiento Si va a montar el sistema de fluorescencia reflejada usted mismo lea con atenci n la secci n 9 MONTAJE p ginas 30 a 35 IMPORTANTE No olvide leer esta secci n para utilizar el equipo de manera segura 1 3 I OBSERVACI N DE FLUORESCENCIA REFLEJADA 1 NOMENCLATURA 11 2 PROCEDIMIENTO DE OBSERVACI N DE FLUORESCENCIA REFLEJADA 6 7 3 UTILIZACI N DE LOS CONTROLES 8 15 Precauciones generales para la ODSeIVaci nN co 8 Selecci n de la unidad de espejo de fluorescencia nn 8 10 Objetivos para distintos modos de ObSeIvaci N ooo 10 11 E C mo encender la unidad d
31. PT ICAS Serie UIS2 UIS para la observaci n de luz reflejada Los objetivos de la serie UIS que no se mencionan debajo tambi n se pueden montar en este microscopio La siguiente tabla muestra las caracter sticas pticas de las diferen aumento Serie del objetivo tes combinaciones de oculares y objetivos Las especificaciones de los objetivos est n marcadas en los objetivos como se muestra en el diagrama de la derecha Consulte el cat logo m s reciente o a Olympus para obtener infor maci n actualizada sobre los objetivos y oculares que se pueden Grosor delcubreobjetos combinar con esta unidad Puede utilizarse con o sin cubreobjetos O Utilizado sin cubreobjetos PL plano Marca UIS NA Apertura num rica Aplicaci n de campo claro campo oscuro FN N mero de campo Caracter sticas Grosor Ocular pticas del Resolu WHN10X FN22 SWH10X FN26 5 2 cubre ci n Profund Campo e dad del raj objetos Aumento dad de Aumento dad del a El total enfoque visi n total enfoque Serie mm um mm a MPLN 3 36 50X 98 44 Acrom tico 1 34 100X 18 22 plano 0 84 200X 61 11 FN 22 0 45 500X 1 4 0 4 0 37 1000X 0 73 0 2 3 36 50X 98 4 4 1 34 100X 18 22 0 84 200X 61 11 0 45 500X 1 4 0 4 0 37 1000X 0 73 0 2 8 39 125X 870 176 419 25X 220 88 2 24 50X 59 4 4 112 100X 15 22 0 75 200X 5 2 11 0 42 500X 13 0 44 0 37 1000X 0 73 0 22 2 24 BOX 59 44 112 100X 15 22
32. Utilice la unidad de espejo de fluores cencia adecuada para la muestra c El campo de visi n est oscurecido o no est iluminado de forma uniforme El objetivo no est bien interpuesto en trayectoria de luz Aseg rese de que el rev lver porta objetivos haga clic y se coloque en su sitio correctamente La unidad de espejo de fluorescencia no est bien interpuesta en la trayectoria de luz Interponga la unidad de espejo de fluores cencia correctamente en la trayectoria de luz El diafragma de campo est demasiado cerrado Abra totalmente el diafragma de campo La corredera ND no est colocada en una posici n de clic Aseg rese de que la corredera ND haga clic y quede colocada en su posici n correcta La l mpara de mercurio no est centrada o el enfoque es defectuoso Centre la l mpara de mercurio o ajuste el enfoque d El campo contiene zonas oscuras que parecen manchas Hay suciedad o polvo en la l mpara o en el lado de la l mpara de la lente colectora L mpielas 2 Sistema el ctrico a No se puede encender el sistema con el interruptor principal El cable de alimentaci n no est bien conectado Con ctelo de forma segura b Se puede encender el sistema con el interruptor principal pero la l mpara de mercurio no se enciende Los conectores no est n bien conectados Con ctelos de forma segura La l mpara de mercurio no est ins
33. a de luz La unidad de espejo ptima para la obser vaci n no est interpuesta en la trayectoria de luz Ajuste la torreta de modo que la unidad de espejo ptima para la observaci n est interpuesta en la trayectoria de luz b El campo de visi n est oscurecido o no est iluminado de forma uniforme El diafragma de campo no est centrado Centre el diafragma de campo El diafragma de campo est demasiado ce rrado Abra el diafragma de campo hasta que circunscriba el campo de visi n La l mpara de mercurio no est bien cen trada Centre la l mpara de mercurio El filtro mate no est interpuesto en la tra yectoria de luz Interponga el filtro mate en la trayectoria de luz El filtro no est en una posici n de clic Empuje el filtro hasta que haga clic que dando colocado en su posici n c Reflejos en la imagen El diafragma de apertura est demasiado cerrado Abra el diafragma de apertura d La visibilidad es mala e La imagen no es n tida e El contraste es escaso e No se aprecian los detalles Se est utilizando un objetivo que no es UIS Utilice nicamente objetivos de la serie UIS con este microscopio La lente delantera del objetivo est sucia Limpie el objetivo No se est usando aceite de inmersi n con un objetivo de inmersi n en aceite Utilice aceite de inmersi n No se est utilizando el aceite de inmersi
34. color de la luz fluorescente en otra parte diferente a la zona observada Para excluir un exceso de luz ajuste el mando del diafragma de cam po del iluminador de fluorescencia de acuerdo con la potencia del objetivo para que la imagen del diafragma de campo circunscriba el campo de visi n 12 i g Centrado del diafragma de apertura Fig 2 1 Cierre la trayectoria de luz deslizando el mando del obturador a la posici n marcada 0 2 Interponga la unidad de espejo B o IB en la trayectoria de luz girando la torreta Si estas unidades de espejo no est n disponibles interponga otra unidad de espejo de fluorescencia en la trayectoria de luz 3 Interponga el objetivo de 10X en la trayectoria de luz y coloque el blan co de centrado U CST sobre la platina 4 Abra la trayectoria de luz deslizando el mando del obturador a la posi ci n marcada O 5 Mueva la superficie blanca con l neas cruzadas del U CST hasta que las l neas cruzadas queden superpuestas en el centro del campo 6 Gire el rev lver portaobjetivos para interponer la posici n vac a deber retirar la funda del objetivo en la trayectoria de luz 7 Tire del mando del diafragma de apertura Y para minimizar el di me tro de apertura 8 Tire del mando del diafragma de campo para minimizar el diafragma de campo Ahora la imagen de apertura deber resultar visible en el U CST 9 Introduzca la llave Allen en los dos tornillos de centrado de ap
35. control de intensidad tambi n es variable de pendiendo del estado de la muestra y de las unidades de espejo Pueden observarse irregularidades de ilumina ci n en los bordes superior e inferior del cam Compensador Unidad de espejo de fluorescencia del excitador Unidades de espejo de Unidades de espejo de fluorescencia para doble fluorescencia para triple tinci n tinci n U EXBABG e U DM FI TR2 e U DM FI PI2 e U DM F1 1X2 eU DM DA FI TR2 U EXBAUB e U DM DA FI2 U DM DA F PI2 po debido a los ngulos de rotaci n de los i eU DM eU DM DA FI TX2 ATENE Poren G filtros y a la variaci n de las caracter sticas de e U DM DA TX2 las unidades de espejo No obstante estas irre gularidades de iluminaci n no afectan a la zona fotografiada 28 i 3 Pulse la palanca de ajuste de la corredera del compensador que vaya a utilizar para interponer el filtro en la trayectoria de luz OE ngulo de cada palanca de ajuste se puede ajustar en el rango que se indica a continuaci n solamente cuando la palanca est pulsada 4 Mientras realiza la observaci n de fluorescencia incline la palanca de ajuste del compensador del excitador que se encuentre en la trayectoria de luz en ese momento para ajustarla e Con el U EXBABG si se pone la palanca en 0 mejorar la fluorescencia de las longitudes de onda m s largas cercano al rojo y en 45 mejorar la fluorescencia de las longitudes de on
36. da m s cortas cercano al verde e Con el U EXBAUB si se pone la palanca en 0 mejorar la fluorescencia de las longitudes de onda m s cortas cercano al azul y en 45 mejorar la fluorescencia de las longitudes de onda m s largas cercano al verde e Con el U EXBAUG si se pone la palanca en 0 mejorar la fluorescencia de las longitudes de onda m s largas cercano al rojo y en 45 mejorar la fluorescencia de las longitudes de onda m s cortas cercano al azul Observaci n de una muestra de triple tinci n OB sicamente la operaci n es similar a la que se realiza con las muestras de doble tinci n pero deber n utilizarse las unidades de espejo de fluorescencia para tinci n triple Los compensadores del excitador que se utilizar n ser n el U EXBAUB ranura delantera y U EXBAUG ranura posterior e Mientras realiza la observaci n de fluorescencia ajuste las intensidades de las tres luces de fluorescencia inclinando las dos palancas de ajuste NOTAS 1 Cuando la palanca de ajuste de un compensador del excitador se mantiene verticalmente pueden producirse deste llos f cilmente debido a los reflejos repetidos sobre la superficie del filtro Aseg rese de retirar el compensador del excitador de la trayectoria de luz cuando no est en uso 2 Aseg rese de mantener la palanca de ajuste verticalmente cuando retire el filtro de la trayectoria de luz o cuando retire el compensador de
37. das de los oculares tire del mando del diafragma de apertura Y de forma que la imagen de aper tura se pueda ver en el campo 4 Introduzca los destomilladores Allen incluidos con el pie del microsco pio en los dos tornillos de centrado del diafragma de apertura y aj stelos de modo que la imagen de apertura del diafragma est cen trada en el campo de visi n Efectos del diafragma de apertura O Observaci n de campo claro de luz reflejada En general se puede realizar una observaci n favorable si se fija la aper tura del sistema de iluminaci n en el 70 80 de la NA del objetivo xLos efectos del diafragma de apertura no se pueden obtener con objetivos de 150X y 250X O Observaci n de campo oscuro de luz reflejada 70 80 30 20 Mantenga siempre pulsado el mando del diafragma de apertura Y para dejar el diafragma abierto Con ciertas muestras y en algunas ocasiones una apertura menor puede ofrecer im genes con un mejor contraste y menos destellos Le reco mendamos que pruebe tambi n dicha configuraci n 38 i A OBSERVACIONES 4 1 Observaciones de campo claro campo oscuro de luz reflejada N Mono Fig 23 4 Selecci n de la trayectoria de luz para la observaci n Fig 22 Gire la torreta para interponer la unidad de espejo adecuada para el m todo de observaci n necesario en la trayectoria de luz Inscripci n Unidad de espe
38. de las posiciones en las que desea montar unidades de espejo aflojando el tornillo de sujeci n de cada unidad de espejo con el destornillador Allen 3 Sujete la unidad de espejo de fluorescencia que vaya a montar de forma que la inscripci n con el nombre del modelo del lateral quede boca abajo alin ela con la cola de milano de montaje e ins rtela has ta el fondo en la posici n de inserci n Apriete el tomillo de sujeci n O con firmeza xSi el tornillo de sujeci n est flojo resultar imposible girar la torreta debido a la interferencia con la cubierta 4 Compruebe el n mero de la cola de milano de montaje O y coloque la placa de inscripci n de la unidad de espejo de fluorescencia montada en el recept culo de inscripci n con el mismo n mero en la parte delantera de la torreta 5 Monte otras unidades de espejo de fluorescencia necesarias repitien do los pasos anteriores para cada una de ellas 6 Coloque la torreta en la posici n original y apriete el tornillo de sujeci n al tiempo que empuja la torreta 31 Fabricaci n de una unidad de espejo de fluorescencia opcional OTambi n puede fabricar unidades de espejo de fluorescencia opcionales colocando un filtro barrera un filtro de excitaci n o un espejo dicroico todos ellos disponibles en el mercado en el marco para la unidad de espejo U MF2 Dimensiones de las piezas pticas
39. de las longitudes de onda Normalmente se utiliza el conjunto de banda ancha W No obstante puede haber casos en los que resulten reco mendables los conjuntos de banda s per ancha SW o de banda estrecha N OBrillo de fluorescencia extremadamente gt Utilice la banda s per ancha SW d bil Excitaci n B y G solamente O Con la SWB una gran autofluorescencia puede reducir el contraste de la imagen QMuestras que emiten una gran autofluores Utilice la banda estrecha N cencia O El brillo de fluorescencia se ve ligeramente reducido Espejo dicroico y configuraciones del filtro de las unidades de espejo de fluorescencia M todo de Unidad de Espejo Filtro de excitaci n espejo dicroico excitaci n Filtro barrera Fluorocromos U MWU2 BP330 385 e Observaci n de autofluorescencia DM400 e DAPI tinci n de ADN U MNU2 BP360 370 e Hoechest 33258 33342 Cromosoma e Catecolamina U MNV2 BP400 410 e Serotonina e Tetracilina Huesos dientes U MWBV2 BP400 440 e Quinacrina mostaza de quinacrina Cromosoma eTioflavina S Linfocito BP420 440 e Acriflavina cido nucleico e ECFP BP460 490 e FITC Anticuerpo fluorescente BP470 490 BAS20IF Naranja de acridina ADN ARN e Auramina Bacilo tuberculoso BP420 480 e EGFP S65T RSGFP BP460 495 BP470 495 BAS1OIF BP510 550 e Rodamina TRITC Anticuerpo fluores cente BP530
40. e alimentaci n nnnnnmmmmm 11 Centrado del diafragma de campo GU Centrado del diafragma de apertura Centrado de la l mpara de MerCUHO vo 14 15 E Montaje de los filtros ND one 15 4 OBSERVACIONES DE FLUORESCENCIA SIMULT NEAS 16 Observaciones de contraste de fase y de fluorescencia reflejada simultaneas nenea ererern 16 Observaciones de contraste de interferencia diferencial DIC Nomarski de luz transmitida y de fluorescencia reflejada simult neas u 16 5 GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS 17 6 CARACTER STICAS ESPECTRALES DE LOS FILTROS 18 22 7 ESPECIFICACIONES 23 8 M DULOS OPCIONALES 24 29 Corredera del filtro de 6 posiciones URSLB o 24 25 Corredera del filtro barrera de 6 posiciones U RSL6EM uvu 26 Tope de campo rectangular BX RFSS para uso exclusivo con el BX REA rarte 27 Compensadores del excitador U EXBABG EXBAUB EXBAUG para uso exclusivo con el BX REA urearen 28 29 9 MONTAJE Consulte esta secci n para la sustituci n de la bombilla 30 35 9 1 Diagrama de Montaje sisi ii Ai 30 9 2 Procedimientos de montaje detallados strstr 31 35 II OBSERVACIONES REFLEJADAS BX URA2 solamente 1 CONFIGURACI N DEL SISTEMA DE OBSERVACI N REFLEJADA 36 2 MONTAJE 37 3 AJUSTES DE LOS DIAFRAGMAS DE CAMPO Y DE APERTURA 37 38 4 OBSERVACIONES 39 42 4 1 Observaciones de campo claro campo oscuro de luz reflejada 39 4 2 Observaci n de contraste de interferencia di
41. e visi n 5 Para comprobar el centrado ampl e el diafragma empujando el mando del diafragma de campo Y hasta que la imagen del diafragma entre en contacto con el per metro del campo de visi n Si la imagen no est centrada de forma precisa c ntrela de nuevo Campo de visi n del ocular 6 Ampl e nuevamente el diafragma hasta que la imagen circunscriba de forma precisa el campo de visi n Imagen de campo Efectos del diafragma de campo O Observaciones de luz polarizada simplificada DIC y de campo cla ro de luz reflejada Para obtener un buen contraste de la imagen ajuste el di metro del rayo de iluminaci n de acuerdo con el objetivo en uso Utilizando el mando del diafragma de campo del iluminador refleja do ajuste el diafragma de forma que el campo de visi n est circuns crito por el diafragma de campo para eliminar la luz par sita O Observaci n de campo oscuro de luz reflejada Mantenga siempre pulsado el mando del diafragma de campo Y para dejar el diafragma abierto Centrado del diafragma de apertura Fig 21 1 Interponga la unidad de espejo BF en la trayectoria de luz girando la torreta y a continuaci n abra el obturador 2 Gire el rev lver portaobjetivos para interponer el objetivo de 10X y a continuaci n coloque una muestra muy plana como un espejo sobre la platina y enfoque la imagen de forma aproximada 3 Retire el ocular Mientras mira por las fun
42. ertura y aj stelos de forma que la imagen de apertura coincida con las l neas cruzadas Efectos del diafragma de apertura El diafragma de apertura ayuda a ajustar el brillo de la imagen observa da y a mejorar el contraste Para realizar una observaci n de fluorescencia normal ampl e el diafragma de apertura empujando el mando del diafragma de apertura O O Si los colores de la muestra tienden a desvanecerse por un exceso de luz de excitaci n de alta intensidad primero utilice filtros ND para re ducir el brillo y en caso de que no sea suficiente con estos filtros cierre un poco el diafragma de apertura No cierre demasiado el diafragma de apertura No lo utilice como sustituto del obturador 13 14 Centrado de la l mpara de mercurio OPonga el interruptor principal en la posici n P ON y antes de pro ceder con el centrado de la l mpara de mercurio espere 5 10 minutos hasta que el arco se estabilice 1 Cierre la trayectoria de luz deslizando el mando del obturador O a la posici n marcada 0 2 Interponga la unidad de espejo B o IB en la trayectoria de luz giran do la torreta Si estas unidades de espejo no est n disponibles interponga otra unidad de espejo de fluorescencia en la trayectoria de luz Tenga tambi n en cuenta que cuando utilice una unidad de espejo de fluorescencia de excitaci n U deber asegurarse de observar la muestra a trav s de una placa de c
43. ferencial DIC Nomarski de luz reflejada 0 ii 4 3 Observaci n de luz polarizada simple con luz reflejada 5 CARACTER STICAS PTICAS Serie UIS2 UIS para la observaci n de luz reflejada 43 44 6 GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS 44 M SELECCI N DEL CABLE DE ALIMENTACI N ADECUADO 46 47 IMPORTANTE Este sistema incorpora un dise o ptico UIS2 UIS Sistema Infinito Universal y s lo debe utilizarse con microscopios oculares objetivos y condensadores UIS2 UIS para la serie BX2 Tambi n pueden utili zarse algunos de los m dulos dise ados para la serie BX y los objetivos oculares para la serie UIS Para obtener informaci n detallada consulte los cat logos o p ngase directamente en contacto con Olympus En caso de utilizar accesorios inadecuados no se alcanzar el rendimiento ptimo El uso de un iluminador de fluorescencia reflejada universal ha permitido la instalaci n de las unidades de espejo de fluorescencia necesarias Al combinar las t cnicas de microscopia que se indican a continuaci n este sistema puede utilizarse de forma eficaz para detectar emisiones de fluorescencia en cualquier zona de las c lulas 1 Observaci n de fluorescencia reflejada observaci n de contraste de fase de luz transmitida 2 Observaci n de fluorescencia reflejada observaci n de contraste de interferencia diferencial DIC Nomarski transmitida 3 Observaci n de fluorescencia reflejada observaci n de luz transmitida A
44. ica Si tuviese alg n problema revise la lista siguiente y tome las medidas adecua das para solucionarlo Si despu s de haber revisado la lista no puede resolver el problema p ngase en contacto con su representante local de Olympus para recibir asistencia t cnica Problema Causa Soluci n 1 Sistema ptico a La l mpara est encendida pero no se ve luz desde el ocular o se ve oscuro El obturador est cerrado Abra el obturador El filtro ND est interpuesto en la trayectori de luz Retire el filtro ND cuando sea necesario La unidad de espejo de fluorescencia no est bien interpuesta en la trayectoria de luz Interp ngala correctamente Los diafragmas de apertura y de campo no est n totalmente abiertos Abra totalmente el diafragma de apertura y ampl e el diafragma de campo hasta que circunscriba el campo de visi n La unidad de espejo de fluorescencia n es la adecuada para la muestra Utilice la unidad de espejo de fluores cencia adecuada para la muestra b La imagen es de baja calidad no est definida o tiene poco contraste Polvo suciedad en el objetivo o filtro L mpielos a fondo Los diafragmas de apertura y de campo n est n correctamente abiertos Abra totalmente el diafragma de apertura y ampl e el diafragma de campo hasta que circunscriba el campo de visi n La unidad de espejo de fluorescencia n es la adecuada para la muestra
45. idad de alimentaci n ya que contiene piezas de alta tensi n en su interior 7 Utilice siempre el cable de alimentaci n suministrado por Olympus Si el cable no est incluido seleccione el cable adecuado consultando la secci n SELECCI N DEL CABLE DE ALIMENTACI N ADECUADO que se encuentra al final de este manual de instrucciones Si no utiliza el cable correcto la seguridad y rendimiento del producto no est n garantizados Antes de enchufar el cable de alimentaci n en la toma de la pared aseg rese de que el interruptor principal de la unidad de alimentaci n est en la posici n O OFP 8 Para garantizar la seguridad aseg rese de conectar a tierra la unidad de alimentaci n De lo contrario Olympus no podr seguir garantizando la seguridad a nivel el ctrico del sistema 9 Antes de abrir el portal mparas para sustituir la l mpara o cualquier otra pieza interna ponga el interruptor principal en O OFF desenchufe el cable de conexi n del portal mparas de la unidad de alimentaci n y espere m s de 10 minutos hasta que el portal mparas se enfr e 10 El panel superior del portal mparas se calienta mucho durante el funcionamiento Para prevenir el riesgo de incendio no bloquee la ventilaci n del panel superior S mbolos de seguridad En el microscopio se pueden encontrar los s mbolos siguientes Estudie su significado y utilice siempre el equipo de la forma m s segura posible S mbol
46. ie cualquier pieza del sistema que no sea un componente de vidrio no utilice disolventes org nicos L mpiela con un pa o limpio Si la pieza est extremadamente sucia utilice un trapo suave que no suelte pelusa ligeramente humedecido con un detergente neutro diluido 3 No desmonte ninguna pieza del sistema Esto podr a provocar una aver a o un menor rendimiento 4 La vida til de una l mpara de mercurio es de 300 USH 1030L HBO103W 2 horas Cuando el reloj que hay sobre la unidad de alimentaci n indique este valor ponga el interruptor principal en la posici n O OFF y espere m s de 10 minutos antes de sustituir la l mpara de mercurio P gina 33 A diferencia de las bombillas el ctricas la l mpara de mercurio contiene gas altamente presurizado en su interior Si contin a utiliz ndose transcurrida su vida til el tubo de vidrio podr a explotar finalmente debido a la distorsi n acumulada 5 Cuando no utilice el microscopio aseg rese de poner el interruptor principal en O apagado Despu s de confirmar que el portal mparas se ha enfriado lo suficiente cubra el microscopio con la funda protectora contra el polvo para su almacenamiento 6 Cuando deseche el microscopio compruebe los reglamentos y las normas de su gobierno local y aseg rese de cumplirlos Precauci n Si se utiliza el sistema de forma diferente a la descrita en este manual la seguridad del usuario podr a verse amena zada Adem s el equ
47. io del modo de observaci n Torreta de unidades de espejo para un m ximo de 6 unidades e Diagrama de campo y diafragma de apertura ambos centrables Extra bles con el BX RFA e Obturador incluido e Ranura de inserci n de la corredera Corredera del filtro barrera de 6 posiciones Corredera del filtro barrera de 6 posiciones analizador analizador Y Corredera del filtro de 6 posiciones Y Corredera del filtro de 6 posiciones polarizador O Filtros ND O Filtros ND Corredera del filtro de 6 posiciones e Modos de observaci n disponibles O Hluorescencia reflejada O Fluorescencia reflejada O Fluorescencia reflejada DIC transmitida Y Fluorescencia reflejada DIC transmitida E Fluorescencia reflejada contraste de fase Y Fluorescencia reflejada contraste de fase Campo claro de luz reflejada Luz transmitida 6 Campo oscuro de luz reflejada O DIC de luz reflejada OPolarizaci n simplificada de luz reflejada Luz transmitida e Accesorios opcionales MExcitador compensador Y Tope de campo rectangular Portal mparas de mercurio e Portal mparas de mercurio de 100 W U LH100HG e Portal mparas de mercurio Apo de 100 W U LH100HGAPO e L mpara de mercurio USH 1030L USHIO o HBO103W 2 OSRAM Condiciones ambientales de utilizaci n e Uso en interiores e Altitud M x 2000 metros e Temperatura ambiente 5 a 40 C e Humedad relativa m xima 80 para temperaturas de hasta 31
48. ipo del sistema tambi n podr a resultar da ado Utilice siempre el sistema como se indica en este manual de instrucciones En este manual de instrucciones se han utilizado los siguientes s mbolos para resaltar el texto amp Indica que el incumplimiento de las instrucciones de advertencia podr a causar da os f sicos i al usuario y o da os al equipo incluidos los objetos cercanos al equipo 1 Indica que si no se siguen las instrucciones el equipo podr a resultar da ado Indica un comentario para facilitar el uso y mantenimiento 0 J NOMENCLATURA Iluminador reflejado BX URA2 Portal mparas de mercurio Apo de 100W U LH100HGAPO Iluminador de fluorescencia BX RFA Portal mparas de mercurio de 100W U LH100HG Nota El diagrama muestra el BX RFA Las pie zas marcadas con no se suministran con el BX URA2 Tomillos de centrado del diafragma de campo P gina 12 x2 tomillos Mando de enfoque de la lente colectora P gina 14 Mandos de centrado de la l mpara P gina 14 Tomillo de enfoque del espejo P gina 15 7 En la parte posterior del portal mparas Torreta de la unidad de espejo Recept culo de la ins cripci n de la unidad de espejo P gina 31 Tornillos de centrado del dia fragma de apertura P gina 13 x2 tornillos Mando del obturador P gina 12 O Obturador fuera OUT 6 Obt
49. jo Apertura Campo claro de luz reflejada BF U MBF3 Ajustar seg n sea necesario Campo oscuro de luz reflejada DF Aplicaciones de los filtros U MDF3 Debe estar abierto Fig 23 Cuando resulte necesario se pueden insertar hasta dos filtros individual mente en las posiciones de inserci n del filtro y Y Inserte cada filtro con la cara que contiene indicaciones mirando hacia el observador Despu s de insertar un filtro oir dos clics El primer clic indica que el filtro est en una posici n vac a entra en la trayectoria de luz Filtros utilizables el segundo clic indica que el filtro Aplicaciones U 25FR Filtro mate Para eliminar la iluminaci n no uni forme U 25LBD Filtro de conversi n de la temperatura del color Para convertir la temperatura del color de la fuente a la temperatura del color de la luz natural Utilizado para una observaci n c moda y cuando se van a hacer fotograf as en color U 251F550 Filtro verde Para aumentar el contraste durante una observaci n monocroma Utili zado cuando se toman fotograf as monocromas U 25Y48 Filtro amarillo Para conseguir un buen contraste para l minas semiconductoras U 25ND50 2 Filtro de densidad neutra Para ajustar el brillo de la iluminaci n Transmitancia 50 U 25ND25 2 Filtro de densidad neutra Para ajustar el brillo de la ilumina ci n Transmitancia 25
50. juste se pueden guardar en las ranuras superiores de los tornillos de ajuste Procedimiento de instalaci n Fig 8 1 Utilizando el destornillador Allen afloje y extraiga el tomillo de sujeci n del diafragma de campo O del BX RFA 2 Retire el diafragma de campo tirando del mismo hacia usted 3 Inserte el tope de campo rectangular BX RFSS en la posici n del diafragma de campo y apriete el tornillo de sujeci n O Funcionamiento 1 Inserte los dos mandos de ajuste suministrados en los dos agujeros de los tornillos de ajuste que se encuentran junto al panel delantero y mueva los dos lados del rect ngulo hasta la posici n deseada girando los mandos 2 Inserte los mandos de ajuste en los dos agujeros de los tornillos de ajuste que se encuentran junto al panel posterior y mueva los otros dos lados del rect ngulo girando los mandos 3 Una vez obtenida la forma deseada moviendo los lados retire los mandos de ajuste O rea rectangular Un rect ngulo que circunscribe el campo con un n mero 22 el centro del rect ngulo deber encon trarse en el centro del campo El diafragma rectangular no se puede girar NOTA No se puede montar ni desmontar el iluminador de fluorescencia BX RFA mientras el BX RFSS est instalado Si quiere instalar el BX RFA retire el BX RFSS de forma provisional 21 Compensadores del excitador U EXBABG EXBAUB EXBAUG para uso exclusivo con el BX RFA
51. l excitador De lo contrario podr an provocarse da os 3 Para utilizar los filtros ND cuando el compensador ya est en uso inserte los filtros ND en la ranura de inserci n del filtro de seis posiciones que se encuentra cerca del panel delantero es decir a la izquierda 29 9 1 Diagrama de montaje En el diagrama siguiente se muestra la secuencia de montaje de los diversos m dulos Los n meros indican el orden de montaje Los n meros de los m dulos mostrados en el siguiente diagrama son simplemente los ejemplos t picos Para los m dulos en los cuales no se dan n meros consulte a su representante de Olympus o los cat logos x Cuando monte el microscopio aseg rese de que todas las piezas est n limpias y sin polvo y evite rallar las piezas o tocar las superficies de vidrio Los pasos de montaje que aparecen en se detallan en las p ginas siguientes OTodas las operaciones de montaje se pueden realizar utilizando el destornillador Allen 05 suministrado con el microscopio La llave Allen q suministrada con el iluminador se utiliza solamente para sujetar los tornillos dentro del iluminador Para mantener el rendimiento enc rguele esta tarea a su representante de Olympus NOTAS Las piezas marcadas con e solamente se pueden montar en el iluminador universal BX URA2 e Aseg rese de insertar las correderas en las orientaciones indicadas en el diagrama De lo contrario no podr n colocarse en
52. l girar el mando de control del prisma del prisma DIC U DICR cambiar cons tantemente el color de interferencia del fondo pasar de un color sensible al gris a un color sensible al magenta de 100 a 600 nm Seleccione el color de interferencia que ofrezca un contraste ptimo para cada muestra Si el color de fondo es gris se puede llevar a cabo una observaci n de tipo tridimensional con un buen contraste en los colores m s sensibles al gris e Si el color de fondo es magenta sensible incluso un retardo ptico menor podr observarse como un cambio de color U DICRH 1 Gire el mando de control del prisma para que el prisma DIC ajuste el con traste de fondo como se indica a continuaci n 2 Al girar el mando de control del prisma del prisma DIC U DICRH cambiar constantemente el color de interferencia de fondo de 100 a 100 nm Seleccio ne el retardo que ofrezca un contraste ptimo e Si el color de fondo es gris se puede llevar a cabo una observaci n de tipo tridimensional con un buen contraste en los colores m s sensibles al gris e Si el color de fondo es magenta sensible incluso un retardo ptico menor podr observarse como un cambio de color Para utilizar el magenta sensible como color de fondo utilice el polarizador U POTP3 Coloque el polarizador de forma que el s mbolo pueda verse des de la parte delantera cuando el polarizador est insertado en la ranura de inserci n x Hay q
53. l mercado que tenga un di metro no superior a 8 mm y col quela en la posici n especificada Aseg rese de que la pegatina no se salga de la zona circular especificada De lo contrario la corredera podr a atascarse al moverse 4 Inserte con cuidado la corredera del filtro desde la derecha de la ranura de inserci n del analizador que se encuentra en el iluminador y monte el mando de la corredera que hab a desmontado anteriormente 5 Utilice la placa de uni n si quiere bloquear esta corredera del filtro con la corredera del filtro U RSL6 Para el m todo de montaje consulte la descripci n correspondiente a la U RSL6 NOTAS e Aseg rese de insertar cada filtro en la orientaci n especificada De lo contrario los filtros no se podr n colocar en las posiciones correctas e Por razones de seguridad inserte las placas de protecci n contra la luz suministradas en las posiciones del filtro no utilizadas Tope de campo rectangular BX RFSS para uso exclusivo con el BX RFA OCuando las im genes de fluorescencia se graban con la c mara de TV para la observaci n o el procesamiento de im genes esta unidad proyecta una imagen del diafragma rectangular con un tama o variable dependiendo del tama o de la imagen capturada Con esto se evita la decoloraci n de las muestras provocada por razones que no est n relacionadas con la captura de las im genes Mandos de ajuste x 2 OlLos mandos de a
54. las posiciones de clic ni interponerse correctamente en la trayectoria de luz L mpara de Ocular mercurio P Tubo de USH 1030L WS cr Observaci n HBO103W 2 p Compensador del LE excitador z Filtros ND U EXBABG U 25ND6 2 U EXBAUB U 25ND25 2 U EXBAUG Tornillo de Tornillos de Sonia U 25ND50 2 Im a sujeci n del A sujeci n del portal mparas E r y Mo MA lt y Portal mparas 209 C z A Ss de mercurio Corredera del filtro de po U LH100HG U LH100HGAPO 6 posiciones U RSL6 Y A E Iluminador vertical BX URA2 Unidad de alimentaci n para l mpara de mercurio de 100 W Tope de campo rectangular vd BX RFSS ih Corredera del filtro de 6 posiciones U RSL6 Placa de corte de UV Unidad de espejo de fluorescencia Pie del microscopio QU BX51TRF P Objetivos rev lver Polarizador portaobjetivos U PO3 244 Corredera del filtro barrera de 6 posiciones U RSLGEM Analizador se U AN Placas de protecci n U AN360 3 contra la luz 9 2 Procedimientos de montaje detallados 2 Montaje de las unidades de espejo de fluorescencia ee e 1 Con el destornillador Allen afloje el tomillo de sujeci n que se en cuentra en el lado derecho del iluminador vertical 2 Saque la torreta y col quela boca abajo Las falsas unidades de espejo Y est n montadas en las posiciones de la unidad de espejo Retire las falsas unidades de espejo
55. lida principal Encendido ON O Apagado OFF Filtros ND Blanco de centrado U 25ND6 2 U 25ND25 2 U 25ND50 2 U CST B Y P PROCEDIMIENTO DE OBSERVACI N DE FLUORESCENCIA REFLEJADA OSI necesita la observaci n simult nea de fluorescencia reflejada y la de contraste de fase o la de contraste de interferencia diferencial DIC Nomarski de luz transmitida le rogamos que consulte el Cap tulo 4 OBSERVACI N DE FLUORESCENCIA SIMULT NEA P gina 16 Controles utilizados P gina Preparaci n e Monte la unidad de espejo de fluorescencia y el objetivo adecuados para el m todo de observaci n P ginas 8 a 11 e Centre la l mpara de mercurio P gina 14 15 Ponga el interruptor principal en la posici n 1 ON y espere a que el arco se estabilice Coloque la muestra en la platina aora q p 3 Mandos de los ejes X Y E NS E O Interruptor principal P g 11 Interponga la unidad de espejo de fluorescencia adecuada para la muestra en la trayectoria de luz v Interponga el objetivo en la trayectoria de luz y enfoque la muestra E E O Torreta de la unidad de espejo Pia e e RES O Rev lver portaobjetivos Mandos de ajuste grueso fino Interponga el filtro ND en la trayec toria de la luz seg n corresponda O FIMOSIND P g 15 Ajuste hasta que todo el campo est
56. nta un filtro de tipo interferencia o de vidrio de color en la misma ormus la pel cula de interferencia del filtro puede despegarse o el vidrio de color puede resultar da ado e Aseg rese de que la corredera del filtro de seis posiciones est en una posici n de clic e Por razones de seguridad inserte las placas de protecci n contra la luz suministradas en las posiciones del filtro no utilizadas Fig 7 25 26 Corredera del filtro barrera de 6 posiciones U RSLGEM O Esta corredera del filtro se utiliza con el iluminador BX URA2 o BX RFA y acomoda un total de seis filtros barrera Mando de la corredera Placa de protecci n contra la luz x 4 Placa de uni n Posici n de la etiqueta de inscripci n Di metro 8 mm profundidad 1 mm Posici n de la protecci n contra la luz Posiciones de inserci n del filtro barrera x 6 Di metro 25 mm grosor m x 5 mm Procedimiento de montaje del filtro 1 Retire el mando de la corredera del extremo opuesto al extremo en el que est grabada la inscripci n de la corredera 2 Coloque suavemente los filtros barrera en las posiciones de inserci n de los filtros x Inserte los filtros de forma que las inscripciones de la flecha del lateral queden mirando hacia abajo 3 Si fuera necesario colocar una inscripci n con el tipo de filtro insertado escriba el tipo de filtro en una pegatina redonda disponible en e
57. ntaci n deber a estar certificado por una de las agencias que se recogen en la Tabla 1 o compuesto de un hilo conductor marcado con el sello de una agencia de la Tabla 1 o marcado seg n la Tabla 2 Los accesorios deber n estar marcados con el sello de al menos una de las agencias de la Tabla 1 En caso de que no pueda comprar un cable equivalente en su pa s aprobado por una de las agencias mencionadas en la Tabla 1 utilice piezas de recambio aprobadas por cualquier otra agencia equivalente y autorizada de su pa s Marca de R Marca de Pals Agencia certificaci n Pa s Agencia certificaci n Alemania VDE Francia UTE Argentina IRAM Irlanda NSAI D Australia SAA Ny Italia IMQ 59 Austria OVE T Jap n mAN l y a B lgica CEBEC Noruega NEMKO N Canad CSA Q Pa ses Bajos KEMA KENGA Dinamarca DEMKO Reino Unido ASTA BSI D Y EE UU UL Suecia SEMKO Espa a AEE Q Suiza SEV 0 Finlandia FEI Tabla 2 Cable flexible HAR ORGANIZACIONES DE HOMOLOGACI N Y M TODOS DE MARCAJE ARMONIZADO PARA EL CORDAJE Organizaci n homologadora Marcaje de armonizaci n impresa o grabada Ubica da en la sobrecubierta o en el material aislante de la ins Marcaje alternativo utilizan do cable negro rojo amari llo longitud en mm de la secci n de color talaci n el ctrica interna negro rojo amarillo Comi
58. o Explicaci n Indica la presencia de alto voltaje 1KV o m s Tenga cuidado con las descargas el ctricas Indica que la superficie se calienta y que no se deber a tocar sin protecci n Lea detenidamente el manual de instrucciones antes de utilizar el equipo Un uso inadecua do podr a provocar lesiones personales al usuario y o da os al equipo Indica que el interruptor principal est encendido ON Indica que el interruptor principal est apagado OFF Indicaciones de advertencia Las indicaciones de advertencia est n situadas en aquellas piezas con las que hay que tener un cuidado especial a la hora de manejar y utilizar el sistema Preste siempre atenci n a las advertencias e Portal mparas de mercurio Advertencia de Posici n de la in U LH100HG U LH100HGAPO altas temperaturas e Unidad de alimentaci n para l mpara de mercurio de 100 W Advertencia de e Filtros ND alto voltaje U 25ND6 U 25ND25 U 25ND50 dicaci n de adver tencia Preparaci n 1 Este manual se refiere s lo al sistema de fluorescencia reflejada Antes de utilizar este sistema junto con el microsco pio BX2 y las opciones asociadas aseg rese de haber le do detenidamente y comprendido sus manuales as como de haber entendido c mo debe utilizarse el sistema en conjunto 2 El sistema de fluorescencia reflejada est compuesto por instrumentos de precisi n Man jelo con cuidado y evite someterlo a
59. oltaje La marca CE indica que cumple las directivas 4 eg OLYMPUS OLYMPUS CORPORATION Shinjuku Monolith 3 1 Nishi Shinjuku 2 chome Shinjuku ku Tokyo Japan OLYMPUS LIFE AND MATERIAL SCIENCE EUROPA GMBH Wendenstr 14 18 D 20097 Hamburg Germany Phone 49 40 23 77 30 Fax 49 40 23 77 36 47 E mail microscopy olympus europa com OLYMPUS OPTICAL ESPANA S A Via Augusta 158 E 08006 Barcelona Spain Phone 34 93 2 00 67 11 Fax 34 93 2 00 95 80 E mail informacion micro olympus europa com El dise o del producto est sometido a un permanente proceso de perfeccionamiento a mismo tiempo que no se escatiman esfuerzos por mantener actualizado el manual de instrucciones Bajo reserva a modificar especificaciones y equipamiento sin previo aviso Impreso en papel blanqueado sin cloro 700039 Printed in Germany 03 07
60. orte de UV 3 Interponga el objetivo de 10X en la trayectoria de luz coloque el blanco de centrado U CST en la platina y ajuste el centrado del centro de las l neas cruzadas sobre la superficie blanca del U CST con respecto al centro del campo de visi n 4 Gire el rev lver portaobjetivos para interponer la posici n vac a de ber retirar la funda del objetivo en la trayectoria de luz 5 Tire del mando del diafragma de campo O para minimizarlo y em puje el mando del diafragma de apertura Y para ampliarlo 6 Abra el obturador poniendo el mando del obturador en la posi ci n marcada O 7 Proyecte la imagen del arco sobre el U CST girando el mando de enfoque de la lente colectora O A Si no se proyecta la imagen del arco ajuste los mandos de centra do de la l mpara 8 Coloque la imagen del arco en el centro de la mitad izquierda o derecha del campo girando los mandos de centrado de la l mpara B 9 Enfoque la imagen del arco del espejo ajustando el tornillo de enfo que del espejo O Fig 4 de la parte posterior del portal mparas utilizando el destornillador Allen C 10 Superponga la imagen del arco con la imagen del arco del espejo girando los mandos de centrado de la l mpara O D ODurante la observaci n ajuste el mando de enfoque de la lente colectora para que el campo observado sea uniforme OPosteriormente no ser necesario ajustar el centrado de la l mpara de mercurio hasta la
61. que resulta m s f cil averiguar qu porci n de la muestra emite fluorescencia Observaciones de contraste de fase y de fluorescencia reflejada simult neas Para la observaci n de contraste de fase se precisa un condensador de contraste de fase U PCD2 o un condensador universal U UCDE8 y un objetivo Ph 1 Interponga una falsa unidad de espejo o una posici n vac a de la torreta en la trayectoria de luz 2 Gire la torreta de contraste de fase de forma que muestre el mismo n mero que el n mero de Ph indicado en el objetivo 3 Ajuste el eje ptico entre la ranura del anillo y la placa de fase centr ndolas 4 Interponga la unidad de espejo correspondiente a la excitaci n deseada en la trayectoria de luz y abra el obturador 5 Ajuste la luz transmitida para obtener el mejor equilibrio de brillo de contraste de fase y fluorescencia y estar listo para la observa ci n OUtilice filtros ND o la palanca de control de intensidad de luz de la base del microscopio para ajustar la intensidad de la luz transmitida OPara m s informaci n sobre el uso de la observaci n de contraste de fase consulte el manual de instrucciones suministrado con el condensador de contraste de fase o el condensador universal 2 Observaciones de contraste de interferencia diferencial DIC Nomarski de luz transmitida y de fluorescencia reflejada simult neas Para la observaci n DIC Nomarski de luz transmitida se precisan los siguientes accesorios
62. ro coloque una pegatina como se describe en la pr xima secci n sobre la corredera del filtro U RSL6EM 5 Inserte la corredera del filtro desde la derecha de la ranura de inserci n de la corredera del filtro de seis posiciones en el iluminador de forma que la inscripci n U RSL6 quede al fondo y a continuaci n monte el mando de la corredera que hab a desmontado anteriormente 24 Utilizaci n de las placas de uni n Las placas de uni n se pueden montar y fijar entre el mando de la corredera y la corredera como se indica en la figura Las placas de uni n deber an montarse en ambos extremos de la corredera del filtro Al bloquear con las placas de uni n podr cambiar el filtro barrera y el de excitaci n juntos como un conjunto e Cuando inserte la corredera del filtro de seis posiciones en la corredera del filtro de seis posiciones que se encuentra junto al panel posterior ins rtela desde la izquierda de forma que la inscripci n U RSL6 que de al fondo De lo contrario los filtros no se podr n colocar en las posiciones correctas e Cuando se utiliza la corredera del filtro de seis posiciones que se en cuentra junto al panel posterior evite utilizar los filtros de tipo interferen cia o de vidrio de color Esto se debe a que la corredera del filtro de seis posiciones que se encuentra junto al panel posterior es una de las posiciones donde se concentra la energ a de la fuente de luz Cuando se mo
63. simismo tambi n se pueden realizar las siguientes observaciones si se instala una unidad de observaci n de luz reflejada general BX URA2 solamente 1 Observaciones de campo claro campo oscuro reflejada 2 Observaci n DIC Nomarski reflejada 3 Observaci n de luz polarizada simplificada reflejada En este manual se describen las instrucciones para l Observaciones de Fluorescencia Reflejada en la primera parte y para ll Observaciones de Luz Reflejada en la segunda parte Busque las p ginas que le faciliten las instrucciones apropiadas para la observaci n que vaya a realizar AN PRECAUCIONES DE SEGURIDAD 1 Este sistema est compuesto por instrumentos de precisi n Man jelo con cuidado y evite someterlo a golpes fuertes o repentinos 2 La l mpara de mercurio de presi n ultra alta utilizada deber ser la l mpara CC USH 1030L fabricada por USHIO Inc o la l mpara HBO103W 2 fabricada por OSRAM que Olympus suministra 3 Aseg rese de que la l mpara de mercurio est montada y que los cables est n conectados correctamente 4 El interior del portal mparas se calienta mucho y resulta peligroso cuando la l mpara est encendida y durante unos 10 minutos despu s de apagarla No abra el portal mparas durante este per odo P gina 11 5 No aplique una fuerza excesiva a los topes que se suministran para algunas funciones De lo contrario el tope o el equipo podr a resultar da ado 6 No intente abrir ni desmontar la un
64. t Electrotechnique Belge CEBEC CEBEC lt HAR gt 10 30 10 Verband Deutscher Elektrotechniker VDE eV Pr fstelle VDB gt lt HAR gt 30 10 10 Union Technique d Eletricit UTE UTE HAR gt 30 10 30 Instituto Italiano del Marchio die Qualita IMQ IMQ lt HAR gt 10 30 50 British Approvals Service for Electric Cables BASEC BASEC lt HAR gt 10 10 30 NV KEMA KEMA KEUR HAR gt 10 30 30 SEMKO AB Svenska Elektriska Materialkontrollanstalter SEMKO lt HAR gt 10 10 50 Osterreichischer Verband f r Elektrotechnik OVE OVE gt HAR gt 30 10 50 Danmarks Elektriske Materielkontrol DEMKO DEMKO lt HAR gt 30 10 30 National Standards Authority of Ireland NSAI NSA HAR 30 30 50 Norges Elektriske Materiellkontroll NEMKO NEMKO lt HAR gt 10 10 70 Asociacion Electrotecnica Y Electronica Espanola AEE lt AEE gt lt HAR gt 30 10 70 Hellenic Organization for Standardization ELOT ELOT HAR gt 30 30 70 Insituto Portugues da Qualidade IPQ IPQ HAR gt 10 10 90 Schweizerischer Elektrotechnischer Verein SEV SEV lt HAR gt 10 30 90 Elektriske Inspektoratet SETI lt HAR gt 10 30 90 Underwriters Laboratories Inc UL Canadian Standards Association CSA SV SVT SJ o SJT 3X18AWG SV SVT SJ o SJT 3X18AWG mencionadas Este dispositivo cumple los requisitos tanto de la directiva 89 336 CEE relativa a la compatibilidad electromagn tica como de la directiva 73 23 CEE relativa a los l mites de v
65. talada Monte la l mpara de mercurio El dispositivo de seguridad del porta l mparas est activo Ajuste el portal mparas correctamente El encendido autom tico no funciona correctamente Ponga el interruptor principal de la unidad de alimentaci n en O OFF y despu s en P ON nuevamente OFF ON se puede repetir c La l mpara de mercurio parpadea o est oscura Ha pasado poco tiempo desde el encendido Espere 10 minutos o m s despu s del encendido La vida til de la l mpara ha vencido Si el reloj indica 300 horas USH 1030L HBO103W 2 sustituya la l mpara de mercurio La l mpara est desviada del eje ptico Centre la l mpara de mercurio 18 1 Excitaci n U banda ancha U MWU2 100 Transmitancia 400 600 Longitud de onda nm 2 Excitaci n U banda estrecha U MNU2 100 Transmitancia 400 600 Longitud de onda nm 3 Excitaci n V banda estrecha U MNV2 100 BP400 410 Transmitancia 400 600 Longitud de onda nm 6 CARACTER STICAS ESPECTRALES DE LOS FILTROS 800 800 800 4 Excitaci n BV banda ancha U MWBV2 100 BP400 440 Transmitancia 400 600 800 Longitud de onda nm 5 Excitaci n BV banda estrecha U MNBV2 100 BP420 440 Transmitancia 400 600 800 Longitud de onda nm 6 Excitaci n
66. tenga la extinci n comple ta posici n de Nicol cruzados Instalaci n del prisma Nomarski Fig 25 1 Afloje el mando de sujeci n DIC O de la parte delantera del rev lver portaobjetivos DIC e inserte el prisma DIC Y con la inscripci n miran do hacia arriba 2 Con la corredera de interferencia U DICR ajuste la palanca de desliza miento de acuerdo con el objetivo en uso Objetivos aplicables Pulsada Serie MPLFLN MPLFLN BD Serie UMPlanF UMPlanFI BD MPlanApo20X 100X MPlanApot00XBD Sin pulsar Serie LMPLFLN LMPLFLN BD Serie LMPlanH LMPlanFI BD Serie LMPlanApo LMPlanApo BD 3 Con la corredera U DICRH o U DICRHC que no tiene la palanca de des lizamiento los objetivos aplicables son los siguientes Corredera DIC Objetivos aplicables U DICRH Serie MPLFLN MPLFLN BD Serie UMPlanF UMPlanFI BD Serie MPlanH BD MPlanApo20X 100X U DICRHC Serie LMPLELN LMPLEFLN BD Serie LMPlanF LMPlanFI BD Serie LMPlanApo LMPlanApo BD Procedimiento de observaci n 1 Coloque la muestra en la platina y mueva la platina hasta enfocar la muestra 2 Ajuste el diafragma de campo hasta que circunscriba el campo de visi n 3 Al cerrar el diafragma de apertura se puede aumentar ligeramente el contraste U DICR U DICRHC 1 Gire el mando de control del prisma para que el prisma DIC ajuste el con traste de fondo como se indica a continuaci n 2 A
67. ue procurar que la superficie de la muestra est limpia ya que se podr ver incluso una contaminaci n m nima en la superficie debido a la sensibilidad excepcionalmente alta del m todo DIC ODado que la sensibilidad de detecci n var a dependiendo de la orientaci n se recomienda utilizar una platina giratoria f 41 4 Conmutaci n entre la observaci n de campo claro y de campo oscuro 1 Afloje el tomillo de sujeci n DIC de la parte delantera del rev lver portaobjetivos e inserte suavemente el prisma DIC Y hasta que oiga un clic Apriete el tornillo de sujeci n de nuevo 2 Gire la torreta para retirar la unidad de espejo DIC U MDIC3 de la tra yectoria de luz O bien deslice el analizador polarizador para retirarla de la trayectoria de luz OPara prepararse para la observaci n de luz polarizada simple utilizando el iluminador reflejado lleve a cabo las opera ciones indicadas en el p rrafo Selecci n de la trayectoria de luz en la secci n 4 2 Observaci n DIC Nomarski de luz reflejada en la p gina 40 Procedimiento de observaci n 1 Coloque la muestra en la platina y mueva la platina hasta enfocar la muestra Ahora puede realizar la observaci n de luz polarizada simple 2 Ajuste el diafragma de campo hasta que la apertura del diafragma circunscriba el campo de visi n 3 Al cerrar el diafragma de apertura se puede aumentar ligeramente el contraste 42 CARACT ER STICAS
68. urador dentro IN Mando del diafragma de campo P gina 12 Mando del diafragma de apertura P gina 13 Ranura de inserci n de la corredera del filtro de 6 posiciones P gina 24 Ranura de inserci n de la corredera del filtro barrera de 6 posiciones analizador P gina 26 Ranura de inserci n del compensador del excitador filtro ND P ginas 15 y 28 Ranura de la corredera del filtro de 6 posiciones P gina 24 Unidades de espejo de fluorescencia En el BX RFA o BX URA2 se pueden montar hasta seis unida U MWUZ2 etc 24 modelos en total des de espejo de fluorescencia Cada unidad del filtro incluye un espejo dicroico un filtro barrera y un filtro de excitaci n que han sido combinados de acuerdo con el m todo de excitaci n B sicamente no se recomienda abrir una unidad de espejo de fluorescen cia O Le recomendamos que utilice la falsa unidad del filtro U MF2 que no contiene un filtro cuando fabrique su unidad de fluo LD rescencia original P gina 32 lt gt LO Las placas indicadoras en blanco incluidas con el iluminador o oo se pueden utilizar para escribir los nombres de las unidades Placas indicadoras AS de espejo de fluorescencia originales Unidad de alimentaci n para l mpara de mercurio de 100 W LED indicador de l mpara en cendida ON Recept culo de entrada Conector Interruptor de sa

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