Kit S QuickGene de extracción de ADN en Tejidos (DT-S)
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1. www fujifilm de lt UK Ireland gt Fuji Photo Film U K Ltd Unit 12 St Martins way St Martins Business centre Bedford MK42 OLF U K Tel 44 1234 245291 Fax 44 1234 245293 E mail lifesciences fuji co uk URL http www fujifilm co uk lifesciences lt China gt Fuji Photo Film China Investment Co Ltd 31st floor Hong Kong New World Tower No 300 Huai Hai Zhong Road Shanghai P R China Tel 86 21 3302 4655 363 Fax 86 21 6384 3322 E mail wgxiang fujifilm com cn URL http www fujifilm com cn Distribuidores lt Australia New Zealand gt Berthold AUSTRALIA PTY Ltd 40 Clements Avenue BUNDOORA Victoria 3083 Australia Tel 61 3 9467 6277 1 300 300 865 in Australia Fax 61 3 9467 7493 E mail rafaelOberthold com au URL http berthold com au lt Korea gt Shinki Hi Tec GUNWHA Bldg 7 1 Yangjae 1 dong Secho gu Saoul 137 886 Korea Tel 82 2 572 1600 Fax 82 2 572 0058 E mail info skhitec co kr URL http www skhitec co kr lt Taiwan gt HUNG CHONG CORP No 38 Sec 6 Min Chuan E Road Taipei Taiwan Tel 886 2 2791 1188 Fax 886 2 2794 2248 E mail fuhsing mail hungchong com tw URL http www FUJIFILM COM TW 17 Ap ndice 1 El modo DNA TISSUE se configura con los siguientes par metros DNA TISSUE ADN en tejidos PARAMETRO VALOR BIND PEAK 120 WASH COUNT 3 WASH PEAK 110 WASH VOL1 750 WASH V2. 225ml Tubo de centr fuga peque o para CDT Tubo c nico BD Falcon 50ml Los tubos de centrifuga se usan con los Sistemas de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene como tubos contenedores del tamp n de lavado WDT con etanol y del tamp n de eluci n CDT Tabla 2 RNasa A recomendada para procesos opcionales Nombre del Producto Fabricante N Cat Preparaci n Ribonucleasa A Sigma R5125 1 2 Ribonucleasa A Sigma R5500 1 2 Ribonucleasa A Sigma R6513 1 Ribonucleasa A Sigma R4642 Ribonucleasa A MP Biomedicals 101076 1 2 RNasa A AMRESCO 0675 1 2 RNasa A QIAGEN 19101 RNasa A Invitrogen 12091 Preparaci n 1 Prepare una soluci n 100mg ml con 10mM Tris CLH pH 7 5 y 15mM CINa 2 Incubar a 100 C durante 15 min para desactivar DNasa 5 Advertencias sobre Seguridad Advertencia Para uso en investigaci n nicamente No recomendado ni dirigido a aplicaciones diagn sticas o cl nicas para humanos y animales Todos los reactivos y art culos del kit deber an considerarse qu mica y biol gicamente peligrosos Durante la realizaci n de los experimentos es altamente recomendable utilizar la vestimenta apropiada de laboratorio guantes y gafas de seguridad En caso de contacto de los reactivos con los ojos la piel o la vestimenta l vese inmediatamente con agua vea las recomendaciones espec ficas en la hoja de datos de Seguridad Material http www fujifilm co jp msds Prot
3. Si hay presentes agregados en el lisado ret relos por centrifugaci n 8 000xg o 10 000rpm 3min a temperatura ambiente o cambie el protocolo de acuerdo con la secci n de Resoluci n de Problemas Disuelva las muestras completamente agitando e incubando 2 Tratamiento con RNasa Opcional El ARN se puede purificar con ADN Gen mico sin tratamiento con RNasa Si el contaminante ARN tiene efectos negativos en los experimentos siguientes aplique el tratamiento con RNasa en este momento 2a Use la RNasa recomendada vea Secci n 4 Otros Materiales necesarios no incluidos en este kit Si usa la RNasa Invitrogen Cat 12091 a ada 60ul para cada muestra 20u1 de 100mg ml RNasa Sigma Cat R5125 pueden digerir completamente el ARN total de Smg de cola de rat n Balb c de 7 semanas de edad 2b Mezcle bien la RNasa y el lisado 2c Centrifugar completamente 3 Adici n de Reactivos 3a Mezcle completamente el Tamp n de Lisis LDT de 180 1 y 24011 etanol gt 99 antes de su uso 3b Mezcle completamente el Tampon de Lisis LDT y la soluci n de la muestra Si la mezcla no se completa con el Vortex Mixer utilice el pipeteo la inversi n etc 3c Si la soluci n se enturbiara despu s de a adir el etanol gt 99 debido a una baja temperatura de la habitaci n incube la soluci n de la muestra a 55 C Enfrie las muestras a temperatura ambiente antes del paso siguiente 3d Transfiera el lisado completo al cartucho del Sistema de
4. Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de QuickGene Tabla 3 Volumen del tamp n y n mero de muestras a colocar en el equipo QuickGene N mero de Muestras WDT con Etanol CDT 8 26 ml 8 ml 16 44 ml 11 ml 24 62 ml 13 ml 32 80 ml 15 ml 40 99 ml 17 ml 48 117 ml 19 ml 56 135 ml 21 ml 64 154 ml 22 ml 72 172 ml 24 ml 80 190 ml 26 ml 88 209 ml 28 ml 96 227 ml 30 ml 8 2 Preparaci n de Muestras B sicamente el kit S QuickGene de extracci n de ADN de tejido ha sido espec ficamente dise ado para el aislamiento de ADN gen mico de una muestra de tejido de 5mg Sin embargo ser a capaz de aislar el ADN gen mico de una muestra de 20 mg de cola de rat n hembra Balb c de 6 semanas El rendimiento y tiempo de preparaci n var a con el volumen de la muestra el tipo de tejido las condiciones de almacenamiento del tejido y las caracter sticas del lisado Se podr aislar el ADN gen mico de una muestra de 20mg de H gado de rat n hembra Balb c de 6 semanas sin tratamiento de RNasa En este caso puede que el cartucho del equipo QuickGene se obstruya o el tiempo de eluci n se dilate Cuando se use una muestra de m s de 5mg de h gado la digesti n de ARN puede resultar incompleta En este caso pruebe previamente las caracter sticas del tratamiento con RNasa Se podr aislar el ADN gen mico de una muestra de 10mg de Pulm n o Ri n de rat n hembra Balb c de 6 sem
5. inmediatamente 4 Aparici n de precipitados en los reactivos Posible Soluci n Almacenado a baja Conserve las soluciones entre 15 C y 28 C Temperatura Si hay presentes precipitados incube la botella de MDT en ba o de agua a 55 C y la botella de LDT a 37 C y mezcle invirtiendo la botella intermitentemente hasta que se disuelva el precipitado 5 Las soluciones se enturbiaron despu s de a adir etanol gt 99 en las Etapas de trabajo del tejido de mam feros o al a adir el tamp n LDT con etanol gt 99 en la mezcla de la preparaci n de las Etapas de trabajo de la secci n de la cola de rat n Causa Posible Soluci n Baja Temperatura Incube la soluci n de la muestra a 55 C para disolver y enfr e las muestras a temperatura ambiente antes del siguiente paso 6 Los tubos de recogida est n vac os despu s de la eluci n Causa Posible Soluci n Se ha olvidado realizar Coloque la bandeja de descarga y compruebe que los tubos de recogida y el la Descarga contenedor de cartuchos est n colocados en su posici n correcta Pulse el bot n DISCHARGE despu s de cerrar la puerta frontal del instrumento Consulte el Manual de Usuario del equipo de la serie QuickGene 10 Informaci n sobre pedidos Producto Cat Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico de la serie QuickGene Kit S para ADN en tejidos QuickGene DT S Kit de reactivos para aislar ADN g
6. la muestra y el per odo de almacenamiento Muestras no Sumerja inmediatamente 5mg de tejido seccionado en el Tamp n de Lisis de completamente Tejidos MDT con Proteinasa K disueltas Corte el tejido en peque os trozos Reactivos y tejidos a adidos en orden incorrecto Prolongue el tiempo de incubaci n en el paso correspondiente a la lisis Disuelva el tejido completamente agitando e incubando Prepare el volumen de muestra de 200ul antes de la adici n de LDT A ada los reactivos en los microtubos en el siguiente orden cuando prepare el lisado de los tejidos Lisado de Tejidos gt Tamp n de Lisis LDT Etanol gt 99 o lisado de cola de rat n gt Tamp n de Lisis LDT con mezcla de etanol gt 99 Demasiados tejidos Reduzca la cantidad de tejidos por debajo de la cantidad especificada Insuficiente homogenizaci n a continuacion de la adici n del Tamp n de Lisis LDT Mezcle por vortex suficientemente 15 segundos inmediatamente despu s de la adici n del Tamp n de Lisis LDT No se a adi el volumen requerido de etanol al Tamp n de Lavado Antes de comenzar compruebe siempre que se ha a adido el volumen requerido de etanol al Tamp n de Lavado WDT Se ha utilizado un Tamp n de Lavado WDT usado previamente incluido etanol El lisado no se ha aplicado completamente a los cartuchos CA Antes del uso examine visualmente el Tamp n de Lavado usado WDT incluido etanol e
7. muestra a 55 C Enfrie las muestras a temperatura ambiente antes del paso siguiente 4d Transfiera el lisado completo al cartucho del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Realice el aislamiento en un per odo m ximo de 30 minutos despu s de la preparaci n del lisado 5 Preparaci n con equipo de la serie QuickGene 4a Transfiera el lisado completo al cartucho del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Realice el aislamiento en un per odo m ximo de 30 minutos despu s de la preparaci n del lisado 4b El volumen est ndar de eluci n por defecto es 2001 aunque se puede cambiar esta configuraci n a un valor inferior de volumen hasta un m nimo de 50ul En el caso de trabajar con una configuraci n de 50ul el rendimiento podr a bajar 10 lt Etapas de Trabajo para la preparaci n de muestras de secciones de tejido de cola de rat n gt 1 Lisis de Tejido Tubo de microcentrifuga de 2ml lt A ada la muestra de tejido seccionado de cola de rat n 5mg la lt A ada MDT 180ul 1b lt A ada EDT 20u1 1c Incubar durante toda una noche en el Agitador Rotativo a 55 C y disolver el tejido completamente 1d Centrifugar le Transfiera el sobrenadante a un micro tubo nuevo de 1 5ml 2 Tratamiento con RNasa Opcional lt A ada RNasa A 20ul 2a Tapone el tubo para mezclar la soluci n 2b Centrifugar 2c D jelo en
8. n 8 000xg o 10 000rpm 3min a temperatura ambiente o cambie el protocolo de acuerdo con la secci n de Resoluci n de Problemas Disuelva las muestras completamente agitando e incubando 2 Tratamiento con RNasa Opcional El ARN se puede purificar con ADN Gen mico sin tratamiento con RNasa Si el contaminante ARN tiene efectos negativos en los experimentos siguientes aplique el tratamiento con RNasa en este momento 2a Use la RNasa recomendada vea Secci n 4 Otros Materiales necesarios no incluidos en este kit Si usa la RNasa Invitrogen Cat 12091 a ada 60ul para cada muestra 20u1 de 100mg ml RNasa pueden digerir completamente el ARN total de 5mg de tejido de h gado 2b Mezcle bien la RNasa y el lisado 2c Centrifugar completamente 3 Adici n del Tamp n de Lisis 3a Mezcle completamente el Tamp n de Lisis LDT y la soluci n de la muestra Si la mezcla no se completa con el agitador Vortex Mixer mezcle por pipeteo tapping o inversi n 3b amp 3d Si la soluci n se enturbia al a adir el Tamp n de Lisis incube la soluci n de la muestra a 70 C 4 Adici n de Etanol 4a Utilice Etanol gt 99 4b Mezcle completamente la soluci n de la muestra y el etanol gt 99 Si la mezcla no se completa con el Vortex Mixer utilice el pipeteo el tapping la inversi n etc 4c Si la soluci n se enturbiara despu s de a adir el etanol gt 99 debido a una baja temperatura de la habitaci n incube la soluci n de la
9. A FUJIFILM MANUAL Kit S QuickGene de extracci n de ADN en Tejidos DT S Para aislamiento de ADN gen mico de muestras en tejidos INDICE NAAA A sv T EOE A csgucacduessaeettes Componentes del Mit scssssoss cssss cecsccscivescosescadsscussesseshcsosescsnsedsecdecbadcavessestocestasdesonetiescecdeseasascssbivesiessates Condiciones de Almacenamiento scsssccsssscsssccsssscsssccsscssssccssessssscsssassssssssscsssssssecsssssssosssssessees Otros materiales necesarios no incluidos en este kit Advertencias sobre Seguridad cscsssssssscsssssssssssscssssssescsssescessnesscsnescessessessessnessssncssessessossossoss A NR Controles de Calidad AAA A A A 1 2 3 4 5 6 7 8 PLOtOCOLOS seccsssssvecsessscscevdesvescssssceisestasesesvueesstessessssesaxsenccssvesesdbesseceessbesdascescovedecdscussaeeseasveuvcstecsssesessenes 8 1 Preparaci n de los Reactivos 8 2 Preparaci n de Muestras 8 3 Aislamiento de ADN Gen mico utilizando el Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene 0 ccccecesscesscecsecesccecsseeessecsecesssecueeeessecueeeeseeceseeeessecueeeesaeceseesesaeene 13 9 Resoluci n de Problemas 10 Informaci n sobre pedidos oommsmssssssso LO 11 COMICIOS sBacccssssssissesscesscecesessnecdsessnsssasicvesdeusseissecessssdsndsessensesseddacsssvbeasedensdsesbssssosssecdcesssasissececsdeeel 7 Appendice Livscsccsssavsssonassanasccwaseswasnswassasssnssns
10. Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Realice el aislamiento en un per odo m ximo de 30 minutos despu s de la preparaci n del lisado 4 Preparaci n con equipo de la serie QuickGene 4a Transfiera el lisado completo al cartucho del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Realice el aislamiento en un per odo m ximo de 30 minutos despu s de la preparaci n del lisado 4b El volumen est ndar de eluci n por defecto es 2001 aunque se puede cambiar esta configuraci n a un valor inferior de volumen hasta un m nimo de 50ul En el caso de trabajar con una configuraci n de SO0ul el rendimiento podr a bajar 12 8 3 Aislamiento de ADN Gen mico utilizando el Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico de la serie QuickGene Notas Configuraci n del sistema y operaciones b sicas Por favor lea el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene antes de su utilizaci n Antes de cada aislamiento realice la operaci n de Descarga en el Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene 1 Selecci n del modo de aislamiento Seleccione el modo DNA TISSUE para el aislamiento de ADN gen mico con el kit ver Ap ndice 1 2 Colocaci n de los cartuchos y los tubos Abra la puerta frontal del instrumento y coloque los tubos de recogida y desecho en el conten
11. OL2 750 WASH VOL3 750 WASH VOL4 750 WASH VOL5 750 WASH DIP TM 0 WAS2 WAIT T 0 WAS2 COUNT 0 WAS2 PEAK 110 WAS2 VOL1 750 WAS2 VOL2 750 WAS2 VOL3 750 WAS2 VOL4 750 WAS2 VOL5 750 ELUT VOL 200 ELUT PEAK 100 ELUT DIP TM 90 18
12. al tratamiento de los residuos l quidos y los consumibles Cuando utilice muestras potencialmente infecciosas para sus experimentos realice el tratamiento de los residuos de acuerdo con la normativa aplicable 6 Advertencias Consulte el MSDS hoja de datos de Seguridad Material para revisar las recomendaciones espec ficas de manipulaci n y propiedad Esta hoja de datos MSDS se puede obtener de la siguiente p gina web http lifescience fujifilm com Consulte el Manual de usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de QuickGene antes de utilizarlo 7 Controles de Calidad El Kit S QuickGene de extracci n de ADN en tejidos ha sido espec ficamente dise ado para aislamiento gen mico de ADN de una muestra de tejido de 5mg La estabilidad de los reactivos est garantizada por un a o desde la compra siempre que se haya almacenado a la temperatura especificada de 15 C a 28 C Como parte del riguroso programa de calidad en Fuji Photo Film Co LTD las prestaciones del kit S QuickGene ADN en tejidos se eval an rutinariamente asegurando la uniformidad de lote a lote Se ha verificado la no contaminaci n del kit S QuickGene ADN en tejidos con otros ADN DNasa o bacterias Se ha comprobado la calidad y el rendimiento de los ADN gen micos aislados por medio de la medida de la absorbancia a 260nm relaci n de absorbancia 260nm 280nm y amplificaci n PCR 8 Protocolos 8 1 Preparaci n de los React
13. anas sin tratamiento de RNasa Aunque puede que el cartucho del equipo QuickGene se obstruya o el tiempo de eluci n se dilate Una vez seccionado embeba inmediatamente los 5mg de secci n de tejido en el Tamp n de Lisis de Tejidos MDT Congele el lisado con Nitr geno L quido y almac nelo a 20 C 80 C si no va a preparar las muestras inmediatamente Si mantiene las muestras a temperatura ambiente por un largo per odo de tiempo y o congela y descongela repetidamente las muestras el ADN gen mico se degradar y se reducir el rendimiento de la extracci n Mida con precisi n el volumen de los tampones durante los experimentos lt Etapas de Trabajo para la preparaci n de muestras en tejidos de mamiferos gt 1 Lisis de Tejido Tubo de microcentrifuga de 2ml lt F A ada la muestra de tejido seccionado de mam fero Smg la lt A ada MDT 180ul 1b lt A ada EDT 20u1 1c Incubar durante toda una noche en el Agitador Rotativo a 55 C y disolver el tejido completamente 1d Centrifugar le Transfiera el sobrenadante a un micro tubo nuevo de 1 5ml 2 Tratamiento con RNasa Opcional lt A ada RNasa A 20ul 2a Tapone el tubo para mezclar la soluci n 2b Centrifugar 2c D jelo en reposo a temperatura ambiente por 2 minutos 3 Adici n del tamp n de Lisis lt A ada LDT 180u1 Mezcle completamente por vortex por 15 segundos 3a Centrifugar Incube a 70 C por 10 minutos 3b Centrifugar 4 Adici
14. ar con una configuraci n de SOul el rendimiento podria bajar 4 Descarga Coloque la bandeja de descarga y compruebe la correcta colocaci n del los tubos de recogida y del contenedor de cartuchos Pulse el bot n DISCHARGE despu s de haber cerrado la puerta frontal del instrumento Nota La operaci n de descarga previa a la extracci n resulta necesaria debido a que los tubos podr an contener algo de aire y esto podr a provocar una extracci n de volumen de reactivos incorrecta 5 Aplicaci n de las muestras preparadas Inserte el contenido de las muestras de lisado preparadas Ver 8 2 Preparaci n de las Muestras en cada cartucho CA utilizando micropipetas cualquier agregado presente en el lisado deber transferirse junto con el lisado al cartucho 6 Aislamiento Compruebe que est n bien colocados todos los materiales de trabajo Tamp n de Lavado WDT con etanol gt 99 Tamp n de Eluci n CDT Cartuchos CA con las muestras incluidas Tubos de Desecho WT y tubos de Recogida CT Cierre la puerta frontal del instrumento Confirme que se ha seleccionado el modo de operaci n apropiado en el panel de operaci n y pulse el bot n START 13 7 Recogida del ADN gen mico Una vez completado el proceso el resultado de la extracci n se indicar en el panel de operaci n como sigue Y Extracci n satisfactoria gui n Extracci n fallida _ subrayado No cartucho o No muestra Abra la puerta fr
15. edor de tubos de recogida e Utilice s lo los tubos especificados de recogida CT y los tubos especificados de desecho WT incluidos en el kit Monte el Contenedor de Cartuchos en el equipo y coloque de 1 a 8 cartuchos en el Contenedor de Cartuchos e Utilice s lo los Cartuchos especificados CA Notas Para detalles sobre el montaje de los tubos y cartuchos consulte el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Una colocaci n incorrecta de los cartuchos puede provocar un aislamiento incorrecto o un vertido no deseado de la soluci n Utilice siempre guantes durante los experimentos para evitar la contaminaci n con nucleasa 3 Colocaci n de los reactivos Prepare el volumen requerido ver 8 1 Preparaci n de los reactivos para el tubo del Tamp n de Lavado WDT con etanol gt 99 y para el tubo del Tamp n de Eluci n CDT col quelos en el contenedor correspondiente y ste en su posici n designada en el equipo Notas Utilice siempre guantes durante la manipulaci n de los reactivos para evitar la contaminaci n con nucleasa e Para detalles sobre la colocaci n de los reactivos consulte el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene El volumen est ndar de eluci n por defecto es 200ul aunque se puede cambiar esta configuraci n a un valor inferior de volumen hasta un m nimo de 50ul En el caso de trabaj
16. einasa K EDT Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Tampon de Lisis de Tejidos MDT Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Tamp n de Lisis LDT No ingerir Producto venenoso Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Utilice la vestimenta apropiada de laboratorio guantes y gafas de seguridad Tamp n de Lavado WDT Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Tamp n de Eluci n CDT Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua e Manipule el Tamp n de Lisis LDT en una zona bien ventilada y mant ngalo lejos de fuentes de calor chispas o llamas Mantenga el contenedor firmemente cerrado Su inhalaci n podr a ser nociva No lo mezcle con desinfectantes como la lej a e En cuanto
17. en mico en tejidos para QuickGene Kit S para ADN en sangre total QuickGene DB S Kit de reactivos para aislar ADN gen mico en sangre total para QuickGene Kit S para ARN en tejidos QuickGene RT S Kit de reactivos para purificar el ARN total en tejidos para QuickGene Kit S para ARN en c lulas en cultivo QuickGene RC S Kit de reactivos para purificar el ARN total en c lulas en cultivo para QuickGene Kit S ADN en Pl smidos para QuickGene PL S Kit de reactivos para extraer el ADN en pl smidos para QuickGene Marca Registrada Falcon TM Becton Dickinson and Company La Reacci n en Cadena de la Polimerasa PCR est patentada por Roche Molecular Systems y F Hoffmann La Roche Ltd 16 11 Contactos http lifescience fujifilm com Fuji Photo Film Co Ltd LIFE SCIENCE PRODUCTS DIVISION 26 30 Nishiazabu 2 Chome Minato ku TOKYO 106 8620 JAPAN Tel 81 3 3406 2201 Fax 81 3 3406 2158 E mail sginfo tokyo fujifilm co jp Filiales lt United States Canada Mexico gt Fujifilm Medical System U S A Inc 419 West Avenue Stamford CT 06902 U S A Tel 1 203 324 2000 ext 6112 1 800 431 1850 ext 6112 in the U S Fax 1 203 351 4713 E mail SSG fujimed com URL http lifescience fujifilm com lt Europe excl UK and Ireland gt Fuji Photo Film Europe GmbH Heesenstr 31 40549 Dusseldorf Germany Tel 49 21 1 5089 174 Fax 49 211 5089 139 E mail lifescience fujifilmeurope de URL http
18. ivos Proteinasa K EDT Temperatura de almacenamiento para Proteinasa K EDT una vez abierto el kit S ADN en tejidos QuickGene de 2 C a 8 C recomendado para mantener su actividad Tamp n de Lisis de Tejidos MDT Si hay precipitados en el Tampon de Lisis de Tejidos incube la botella en un ba o de agua a 55 C y mezcle invirtiendo la botella intermitentemente hasta que el precipitado se haya disuelto Una vez disuelto el Tamp n de Lisis de Tejidos enfr e la botella a temperatura ambiente antes de su uso Tamp n de Lisis LDT Mezcle muy bien antes de usar Si hay precipitados en el Tamp n de Lisis incube la botella en un ba o de agua a 37 C y mezcle invirtiendo la botella intermitentemente hasta que el precipitado se haya disuelto Una vez disuelto el Tamp n de Lisis enfr e la botella a temperatura ambiente antes de su uso Tamp n de Lavado WDT A ada 160ml de etanol gt 99 en la botella y mezcle invirtiendo la botella suavemente antes de su primer uso Requerimientos para el Tampon de Lavado WDT con etanol gt 99 y el Tampon de Eluci n CDT Prepare los vol menes de muestra requeridos para la preparaci n del Tamp n de Lavado WDT con etanol gt 99 y del Tamp n de Eluci n CDT de acuerdo con el n mero de muestras para la extracci n siga la tabla siguiente Coloque los tampones en cada tubo y coloque los tubos en el Contenedor de Tubos del equipo QuickGene Consulte el Manual de Usuario del
19. kit incluye los reactivos necesarios para 96 conjuntos de aislamiento de ADN gen mico O Proteinasa K EDT a Tamp n de Lisis de Tejidos MDT a Tamp n de Lisis LDT a Tamp n de Lavado WDT Q Tampon de Eluci n CDT Q Cartuchos CA Q Tubos de recogida CT a Tapones CAP Tubos de desecho WT 3 Condiciones de Almacenamiento Temperatura de almacenamiento para todos los reactivos de 15 C a 28 C Temperatura de almacenamiento para Proteinasa K EDT una vez abierto el kit S ADN en tejidos QuickGene de 2 C a 8 C recomendado para mantener su actividad 4 Otros materiales necesarios no incluidos en este kit Reactivos e Etanol gt 99 e RNasaA opcional Instrumentos y Equipamiento e Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico de la serie QuickGene Tubos de centrigufa de 2ml Tubos de Centrifuga ver Tabla 1 Micropipetas y puntas Agitador Vortex Mixer Microcentrifuga c a 5 000xg Contenedor de tubos Agitador rotativo con calentamiento Tabla 1 Tubos de Centr fuga recomendados Tama o del Contenedor Tipo de tubo de centr fuga Nombre del producto de tubos de centr fuga de ejemplos la serie QuickGene Est ndar Tubo de centrifuga grande para WDT Tubo c nico BD Falcon 50ml Tubo de centr fuga peque o para CDT Tubo c nico BD Falcon 15ml Grande Tubo de centrifuga grande para WDT Tubo c nico BD Falcon 175ml Tubo c nico BD Falcon
20. l cual ha podido utilizarse durante un d a o m s en el instrumento Si hay presentes agregados en el lisado apl quelos en los cartuchos junto con el lisado Se han usado una cantidad insuficiente de reactivos Aseg rese de que hay suficiente cantidad de reactivo en las botellas de reactivo Aparici n de precipitados en los reactivos Vea Secci n 4 2 Obstrucci n del Cartucho Causa Posible Soluci n excesiva de tejido Se ha usado una cantidad Reduzca la cantidad de tejidos a una cantidad por debajo de la especificada Insuficiente homogenizaci n a continuaci n de la adici n del Tamp n de Lisis LDT Mezcle por vortex suficientemente 15 segundos inmediatamente despu s de la adici n del Tamp n de Lisis LDT disueltas insoluble Muestras no completamente Obstrucci n del cartucho con Vea Secci n 1 Retire el insoluble centrifugando antes de a adir el Tamp n de Lisis LDT 15 3 Experimentos subsiguientes por ejemplo PCR insatisfactorios Causa Posible Soluci n Cantidad inapropiada de Determinar la concentraci n basada en la absorbancia a 260nm ADN usada para experimentos subsiguientes Degradaci n del ADN Sumerja inmediatamente los 5mg de tejido seccionado en el Tamp n de gen mico Lisis de Tejidos MDT o bien congele el lisado con nitr geno l quido y almacene a 20 C o a 80 C si no va a preparar las muestras
21. n de Etanol lt KF A ada Etanol gt 99 240u1 4a Mezcle completamente por vortex por 15 segundos 4b Centrifugar 4c 4d 5 Preparaci n con equipo de la serie QuickGene Transfiera el lisado completo al cartucho del Sistema Autom tico de Aislamiento de cido Nucleico QuickGene 5a Seleccione el modo DNA TISSUE Pulse el bot n START Sb Volumen de la eluci n por defecto 200u1 Notas 1 Lisis de Tejido la Mantenga estrictamente la cantidad de la muestra en Smg durante los experimentos Es recomendable cortar el tejido en peque os trozos para una r pida disoluci n Si mantiene las muestras a temperatura ambiente durante un largo per odo de tiempo el ADN gen mico se degradar y se reducir el rendimiento de la extracci n 1b Cuando las muestras est n congeladas descong lelas a temperatura ambiente antes de su uso y sum rjalas en el Tamp n de Lisis de Tejidos MDT inmediatamente Cuando las muestras son frescas sumerja 5mg de secci n de tejido en el Tamp n de Lisis de Tejidos MDT inmediatamente 1c La temperatura recomendada de almacenamiento para Proteinasa K EDT una vez abierto el kit S ADN en tejidos QuickGene es entre 2 C a 8 C recomendado para mantener su actividad 1d El tiempo de incubaci n puede cambiar dependiendo de las condiciones y caracter sticas de las muestras Disuelva el tejido completamente le Si hay presentes agregados en el lisado ret relos por centrifugaci
22. ontal y retire el Tubo de Recogida CT de su alojamiento Ya que el ADN gen mico es elu do de los Cartuchos CA si se ha utilizado un volumen de 200ul de Tamp n de Eluci n CDT se recuperar una soluci n de ADN de 200y1 Tapone correctamente los Tubos de Recogida CT que contienen el ADN gen mico aislado con los Tapones de tubo CAP 8 Recogida de Materiales Retire los Tubos de Desecho WT y desh gase del l quido de desecho de acuerdo con la normativa aplicable Retire el contenedor de cartuchos y desh gase de los cartuchos CA Advertencia En cuanto al tratamiento de los residuos l quidos y los consumibles Cuando utilice muestras potencialmente infecciosas para sus experimentos realice el tratamiento de los residuos de acuerdo con la normativa aplicable 14 9 Resolucion de Problemas Revise la informaci n que se da a continuaci n para resolver posibles problemas durante la realizaci n de los experimentos con el kit S de tejidos de QuickGene Para problemas relacionados con el sistema esto es cuando aparezca un mensaje de error en el equipo QuickGene consulte el Manual de Usuario del equipo de la serie QuickGene 1 Bajo rendimiento o no obtenci n de ADN Causa Posible Soluci n Condiciones de Almacenamiento de Las condiciones de almacenamiento incorrectas inducen un bajo rendimiento Pruebe a almacenar las muestras en diferentes condiciones incluso variando el la muestra volumen de
23. reposo a temperatura ambiente por 2 minutos 3 Adici n de Reactivos lt A ada el tamp n premezclado LDT 180ul con etanol gt 99 240u1 420u1 3a Mezcle completamente por vortex por 15 segundos 3b Centrifugar 3c 5 Preparaci n con equipo de la serie QuickGene Transfiera el lisado completo al cartucho del Sistema Autom tico de Aislamiento de Acido Nucleico QuickGene 4a Seleccione el modo DNA TISSUE Pulse el bot n START 4b Volumen de la eluci n por defecto 200u1 11 Notas 1 Lisis de Tejido la Mantenga estrictamente el volumen de la muestra de cola de rat n en 5mg durante los experimentos unos 5mm dependiendo del animal Si mantiene las muestras a temperatura ambiente durante un largo per odo de tiempo el ADN gen mico se degradar y se reducir el rendimiento de la extracci n 1b Cuando las muestras est n congeladas descongelarlas a temperatura ambiente antes de su uso y sum rjalas en el Tamp n de Lisis de Tejidos MDT inmediatamente Cuando las muestras son frescas sumerja 5mg de secci n de tejido en el Tamp n de Lisis de Tejidos MDT inmediatamente lc La temperatura recomendada de almacenamiento para Proteinasa K EDT una vez abierto el kit S ADN en tejidos QuickGene es entre 2 C a 8 C recomendado para mantener su actividad 1d El tiempo de incubaci n puede cambiar dependiendo de las condiciones y caracter sticas de las muestras Disuelva el tejido completamente le
24. sdossnsssduasassasseudessusssdeassovaseseassowaseseastavaseseassanssussoossedsascesesoonescesescen LO 1 Introduccion Fuji Photo Film Co LTD desarroll y patent una revolucionaria membrana porosa para inmovilizar cido nucleico Debido a su gran rea superficial espec fica y a su porosidad fina y uniforme QuickGene a sla satisfactoriamente ADN gen mico con alto rendimiento y m s a n con la utilizaci n de su membrana elimina la mayor a de los contaminantes QuickGene utiliza la t cnica de filtraci n a presi n la cual no puede utilizarse satisfactoriamente con membranas t picas de fibra de vidrio utilizando la t cnica de filtraci n a presi n se puede usar con gran xito una nueva instrumentaci n compacta y automatizada para la purificaci n r pida de cido nucleico Utilizando el kit S de QuickGene para extracci n de ADN en tejidos junto con la serie de Sistemas Autom ticos de Aislamiento de cido Nucleico QuickGene se podr aislar y tambi n purificar ADN gen mico de muestras en tejidos con muy alta calidad y rendimiento Adicionalmente se pueden extraer 8 muestras lisadas de tejidos simult neamente en s lo 13 minutos El ADN gen mico de alta calidad purificado se puede utilizar para aplicaciones con PCR digesti n con enzimas de restricci n Southern Blotting y otras aplicaciones Por favor aseg rese de leer cuidadosamente este manual antes de la utilizaci n del kit 2 Componentes del kit El
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