PLATELIA VZV IgM 48 PRUEBAS 72685 - Bio-Rad
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1. 6 1 2 VZC1 0 4 6 VZC2 1 8 16 VZC3 6 9 4 Ref 91079 BRD Espa ol 8 Precisi n en lotes Index Muestras Lote n 034 Lote n 035 Lote n 036 Media CV 6 Control Positivo 5 7 5 8 6 1 5 9 4 VZC1 0 3 0 4 0 4 0 4 16 VZC2 1 3 2 0 2 0 1 8 23 VZC3 4 9 6 2 6 5 5 9 15 16 GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS PROBLEMA POSSIBLES FUENTES DE ERROR PRUEBA U ACCIONES Serie no valida todos negativos Uno o m s reactivos no han sido a adidos o han sido a adidos en secuencia err nea Controlar de nuevo el procedimiento Controlar si hay disoluciones que no se hayan utilizado Placa no reactiva Controlar el c digo del envase de la placa ver punto 4 de la informaci n t cnica para el c digo correcto Controlar la presencia de humedad en la placa no utilizada El gel de s lice debe ser amarillo p lido Repetir el test Serie no v lida todos positivos Contaminaci n del sustrato Recoger una nueva al cuota de sustrato Lavado inadecuado Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Escasa precisi n Aspiraci n incompleta de los pocillos Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Aspiraci n inadecuada de los pocillos Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Error de pipeteado Controlar el funcionamiento de la pipeta Adici n de los reactivos demasiado lenta Evitar la sequedad de la placa despu s d2. CI PLATELIA VZV IgM 48 PRUEBAS 72685 KIT INMUNOENZIM TICO POR CAPTURA PARA LA DETERMINACI N CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM ANTI VARICELLA ZOSTER EN SUERO HUMANO Ref 91079 BRD Espafiol 1 Ref 91079 BRD RESUMO INDICACIONES DE USO RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST PRINCIPIODEL M TODO COMPONENTES DEL KIT Y PREPARACI N DEL REACTIVO CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS PRECAUCIONES DE USO TIPO DE MUESTRA Y CONSERVACION PROCEDIMIENTO DEL TEST ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO DEL TEST VALIDACI N DEL TEST INTERPRETACI N DE RESULTADOS LIMITACIONES DEL TEST ESPECIFICIDAD ANAL TICA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DIAGNOSTICAS PRECISI N GUIA DE RESOLUCION DE PROBLEMAS BIBLIOGRAF A Espa ol 2 1 INDICACIONES I KIT INMUNOENZIMATICO POR CAPTURA PARA LA DETERMINACION CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM ANTI VARICELLA ZOSTER EN SUERO HUMANO 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST Varicela y Herpes Zoster constituyen dos dos manifestaciones cl nicas resultantes de la infecci n de la infecci n del Virus de la Varicela Zoster VZV La Varicela es una enfermedad altamente contagiosa que procede generalmente desde la infecci n primaria con el VZV y afecta normalmente a los ni os La infecci n por VZV durante el embarazo puede causar enfermedades u malformaciones del feto mientras al t rmino de sta la infecci n puede conducir a la muerte del reci n nacido Herpes Zoster es una enfermedad que afecta principalme
3. ESPECIFICIDAD DE DIAGN STICO En una prueba cl nica externa se analizaron 154 muestras con el kit Platelia VZV IgM en comparaci n con el m todo de rutina utilizado en el laboratorio Los sueros se dividieron en 5 paneles diferentes Panel 1 56 muestras procedentes de pacientes con reci n infecci n de varicela Panel 2 10 muestras procedentes de pacientes con reinfecci n como demonstrado por la sueroconversi n u por aumento del t tulo del anticuerpo en CFT Panel 3 15 muestras procedentes de pacientes con reci n infecci n causada por Citomegalovirus contenente IgM anti CMV Panel 4 8 muestras positivas a la mononucleosis infecciosa caracterizadas por la presencia de IgG y de IgM anti VCA y por la ausencia de anticuerpos anti EBNA Panel 5 65 muestras procedentes de la popolaci n general 61 de los cuales conten an anticuerpos IgG anti Varicela Una comparaci n de la ejecuci n de los dos kits revela un acuerdo del 99 4 entre los dos 153 154 con una sesitividad de 10096 63 63 y una especificidad del 98 896 90 91 15 PRECISI N Precisi n intra ensayo Muestras VZC 1 VZC 2 VZC 3 Cut Off Control Negativo Cut Positivo gt Positivo id Off Cut Off Positivo n replicados 24 24 24 12 12 D O 0 115 0 511 1 769 0 292 1 755 CV 10 5 5 9 6 Precisi n en ensayoss Index Muestra D O Muestra D O Cut off Media CV Control Pos
4. MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS ncubador a 37 Lector de Microplacas longitud de onda 450 o 450 620 nm e 405 nm con linealidad hasta OD gt 2 000 Lavador de Microplacas no indispensable capaz de dispensar vol menes en la gama 225 375 uL Agua destilada o desionizada Material de laboratorio cubetas tubos de ensayo etc Micropipetas y puntales de precisi n para recoger 10 100 1000 yl de soluci n Guantes de un solo uso Cron metro Soluci n de hipoclorito de sodio 5 Envases para la colecci n de materiales potencialmente infecciosos Papel absorbente 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS Los reactivos deben ser conservados a 2 8C La fec ha de caducidad est impresa en cada uno de los componentes y en la etiqueta exterior de la caja Los reactivos tienen una estabilidad limitada despu s de la abertura y o de la preparaci n REACTIVO CONDICIONES MICROPLACA 5 SEMANAS 2 8T bolso de pl stico CONTROL 5 SEMANAS 2 8 CONJUGADO 5 SEMANAS 2 8 ANT GENO RECONSTITUIDO 5 d as 2 88 si reconstitui do con conjugado 20 si reconstituido con Wash Buffer Evitar de congelar deshelar repetidas veces ver precauciones anal ticas n 1 SUBSTRATO hasta la fecha de caducidad a 2 8C 1 se mana a 15 30 C en ambiente OSCUIO DILUYENTE MU ESTRAS hasta la fecha de caducidad a 2 8 C TAMPON DE LAVADO listo para su uso 2 semanas 2 8 C 5 d as 15 30 SOLUCI N BLOQUEANTE hasta
5. O de por lo menos 1 5 veces el valor del Cut off La relaci n entre Control Negativo y Cut off debe ser inferior a 0 6 La D O del Cut off debe ser gt 0 2 a 450 nm y gt 0 16 a 450 620 nm 11 INTERPRETACI N DEL TEST Resultados cualitativos Si la D O de la muestra es superior al Cut off la muestra resulta positiva por la presencia de IgM espec ficas Calcular la relaci n entre el valor de D O de la muestra y lo del Cut off INDEX La muestra se considera Inmune si la concentraci n es 1 2 Dudoso 2096 del Cut off No inmune si la concentraci n es 0 8 Si el resultado es dudoso repetir el test Si el resultado sigue siendo dudoso recoger una nueva muestra de sangre 12 LIMITACIONES Los resultados deben ser siempre interpretados junto con otros datos procedentes de evaluaci n cl nica y de diagn stico Ref 91079 BRD Espa ol 7 13 ESPECIFICIDAD ANAL TICA Se analizaron 63 muestras de suero con potenciales interferentes como Sueros procedentes de mujeres en embarazo n 12 Parvovirus IgM n 3 CMV IgM n 12 HSV IgM n 5 VCA IgM eter filos n 5 Rub ola IgM n 5 Factor Reumat ideo n 8 Anticuerpos eter filos n 5 Sarampi n IgM n 5 Paperas IgM n 5 Factor reumatoid o hasta 1080 Ul dl n 5 Bilirubina hasta 11 mg dl n 5 Trigliceridos hasta 1281 mg dl n 5 Muestras fuertemente hemolizados n 3 En ning n caso se observaron interferencias 14 SENSIBILIDAD Y
6. Y Bronidox 0 02 Preparaci n Listo para su uso El Inmunocomplejo tiene que prepararse 45 minutos antes de su uso Ref 91079 BRD Espa ol 3 IgM CONTROL NEGATIVO PF93900 1 x 1 6 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Suero humano diluido en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 196 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional WASH BUF 10x TAMP N DE LAVADO 10X PF93603 1 x 100 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Soluci n salina tamponada PBS concentrada 10 veces contiene Brij al 0 5 Preparaci n Diluir el volumen requerido 1 10 con agua destilada con el fin de obtener el tamp n de lavado listo para su uso Si hay cristales presentes disolverlos a 37 C antes de diluir SAMP DIL DILUYENTE 2 PF93611 1 x 100 mL Listo para su uso INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Para la diluci n de las muestras de suero Contenido Soluci n de prote nas en tamp n fosfato con zida s dica 0 09 con adici n de metilnaranja como conservante SUBS TMB SUBSTRATO PF93619 15 mL Listo para su uso INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Tetrametilbenzidina 0 26 mg mL y H202 0 01 estabilizados en tamp n citrato 0 05 mol L pH 3 8 H SO 0 3 M SOLUCI N BLOQUEANTE PF93602 1 x 16 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Soluci n de HSO 0 3 mol L lista para su uso CINTA ADHESIVA 2 BOLSA DE PL STICO 1
7. cla substrato Cubrir los pocillos con la cinta protectora e incubar 45 minutos a 37 Lavar 4 veces dejando la soluci n de lavado en el pocillo 30 segundos cada ciclo 300 uL A adir 100 uL de imunocomplexo a cada pocillo ant genos anticuerpos monoclonales etiquetados e incubar de nuevo 45 minutos a 37 cubriendo los pozos con la cinta protectora Lavar la placa otra vez 4 veces como se describi anteriormente Finalmente distribuir el Substrato 100 uL pozo Despu s de 15 minutos a temperatura ambiente parar la reacci n enzim tica con 100 uL de Soluci n Bloqueante Leer la Absorbancia D O a 450 nm o 450 620 nm dentro de 30 min Ref 91079 BRD Espafiol 6 9 Procedimiento de la prueba para Platelia VZV IgM STEP 1 Poner 100 uL de la muestra diluida calibradores en los pocillos Incubar 45 min a 37C Lavar 4 veces 30 tiempo de remojo 300 yl STEP2 A adir 100 uL de imunocomplexo a cada pocillo Incubar 45 min a 37C Lavar 4 veces 30 tiempo de remojo 300 yl STEP 3 A adir 100 uL de Substrato a cada pocillo Incubar 15 min a T A STEP 4 A adir 100 uL de Soluci n Bloqueante Leer la D O a 450 nm dentro de 30 min 10 VALIDACI N DEL TEST Quitar el valor del blanco lt 0 150 a todas las otras lecturas Los valores en D O del suero de control Cut off deben ser dentro del 2596 del valor medio si testado en triple prueba Descartar cualquier valor anormal y recalcular la media El Control Positivo debe tener D
8. e el ensayo Evitar la contaminaci n cruzada entre reactivos Es importante usar pipetas exclusivas para cada reactivo Evitar de tocar el borde del pocillo con el conjugado No salpicar sobre las microplacas Ref 91079 BRD Espafiol 5 10 Las titulaciones inmunoenzim ticas de vez en cuando pueden presentar un particular efecto llamado edge effect efecto filo que debe reducirse al m nimo aumentando el valor de la humedad durante las fases de la incubaci n Las placas se deben cubrir con sus tapas y deben ser incubadas a 37 en un ba o de agua usando un soporte para placas o un incubador Alternativamente incubar las placas en un analizador aprobado Para m s informaci n consultar el manual de usuario del equipo No utilizar incubadores de CO 11 Asegurarse de que el fondo de la placa est limpio y seco y de que no haya burbujas presentes en la superficie del l quido antes de leer la placa 12 Puede ser fuente de error el uso de muestras altamente hemolizadas suero no coagulado en su totalidad plasma con fibrina o muestras que presentan contaminaci n micr biana 13 Leer el manual de usuario de cada equipo y en especial si desea obtener informaci n sobre los puntos siguientes instalaci n y requisitos espec ficos principios operativos instrucciones precauciones y riesgos especificaciones del fabricante y rendimiento del equipo mantenimiento y servicio t cnico 7 TIPO DE MUESTRA Y CONSERVACI N El tipo d
9. e muestra es suero recogido normalmente de sangre venosa y manipulado con las apropiadas precauciones requeridas en la buena pr ctica de laboratorio El suero fresco se puede conservar durante 4 d as a 2 8C Para conservaciones m s largas congelar a 20 C Se puede descongelar un m ximo de 3 veces Agitar con cuidado las muestras descongeladas antes de la titulaci n La inactivaci n al calor puede proveer resultados err neos La calidad de la muestra puede ser seriamente afectada por la contaminaci n micr bica que conduce a resultados err neos No utilizar muestras muy lip micas ict ricas hemolizadas o contaminadas El test no se puede aplicar a plasma humano 8 PROCEDIMIENTO Preparar el n mero requerido de tiras Preparar el tamp n de lavado diluyendo el Wash Buffer 10x 100 mL 900 mL H20 Preparar el ant geno reconstituyendo el li filo con el conjugado volumen indicado en etiqueta u en caso de menor gasto del Ag con Wash Buffer listo para su uso 1 10 del volumen indicado en etiqueta y despu s 1 11 en el conjugado Diluir las muestras 1 101 poniendo 10 uL de suero en 1 mL de diluyente dispensar 100 uL de cada muestra diluida para cada pocillo se recomienda efectuar una doble prueba Colocar los controles SIN DILUIR en una tira 100 uL para cada pocillo El requisito m nimo indispensable es 1 negativo 2 cut off y 1 positivo Dejar un pocillo libre para efectuar el blanco utilizando s lo 100 uL de la mez
10. el lavado A adir los reactivos inmediatamente Presencia de burbujas Evitar la formaci n de burbujas mientras se pipetea Sistema ptico no limpio Controlar la fuente de luz y el detector para la presencia de suciedad Limpiar el fondo de la placa con papel suave Desarrollo escaso del color Tiempo o temperatura de incubaci n incorrectos Verificar el control de la temperatura y el tiempo de incubaci n Seguir cuidadosamente las instrucciones Volumen inadecuado de substrato a adido a la placa Controlar el funcionamiento de la pipeta 7 REFERENCIAS 1 1 E H Wasmuth and W J Miller J Med Virology 32 189 1990 2 M L Landry S D Cohen D Mayo C Fong W Andiman J Clin Microbiology 25 832 1987 3 P Larussa S Steinberg et al J Clin Microbiology 25 2059 1987 Ref 91079 BRD Espa ol 9 The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in co
11. l volumen indicado en etiqueta con el Tamp n de Lavado listo para su uso ej Volumen indicado en etiqueta es 3 ml reconstituir con 0 3 ml de Tamp n de Lavado Retirar la cantidad necesaria de ant geno para uso inmediato y mezlclar con 10 partes de conjugado Dispensar y congelar el ant geno no utilizado En el momento del uso descongelar y mezclar con 10 partes de conjugado Poner todos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente 18 308 antes de su uso Inmediatamente despu s del uso poner los reactivos a la temperatura de conservaci n recomendada Es importante trabajar a la temperatura correcta Compruebe que el termostato no est por debajo de 35 por encima de 39 C No usar los reactivos despu s de la fecha de caducidad La contaminaci n microbiol gica de los reactivos debe ser evitada ya que esta puede acortar la vida del producto y causar resultados err neos No modificar el m todo ni reemplazar los reactivos con los de otros fabricantes o de otros lotes a no ser que est espec ficamente indicado que el reactivo es intercambiable No reducir los tiempos de incubaci n recomendados Lavar con cido hidrocl rico 2M todos los materiales de laboratorio que se utilizan en las pruebas y aclarar con agua destilada o desionizada No exponer los reactivos a fuerte iluminaci n ni a humos de hipoclorito durante la conservaci n o las fases de incubaci n Evitar que los pocillos se sequen durant
12. la fecha de caducidad a 2 8 C Ref 91079 BRD Espafiol 4 6 PRECAUCIONES DE USO SOLAMENTE PARA USO EN DIAGN STICO IN VITRO CONSERVAR A 2 8C Cuidado Este kit contiene materiales de origen humano que han sido testados y dieron resultados negativos en las pruebas aprobadas por la FDA para la presencia de HbsAg y de los anticuerpos anti VIH 1 anti VIH 2 y anti HCV Dado que ninguna prueba diagn stica puede ofrecer una completa garant a sobre la ausencia de agentes infecciosos cualquier material de origen humano debe ser considerado potencialmente infeccioso Todos los materiales de origen humano deben manipularse seg n las pr cticas de seguridad com nmente adoptadas en la pr ctica diaria de laboratorio Informaciones de Salud y Seguridad 1 2 No pipetear por via oral Usar los guantes de un solo uso y la protecci n para los ojos al manejar las muestras y durante la prueba Lavar las manos a fondo despu s de terminar el test Los reactivos siguientes contienen baja concentraci n de sustancias da inas o irritantes a Eltamp n de lavado contiene detergentes b Elconjugado contiene fenol c Elsubstrato es cido d Los reactivos contienen Azida S dica 0 0996 que puede reaccionar con cobre y plomo y formar zidas met licas potencialmente explosivas Para eliminarla diluir con mucha agua Si cualquier reactivo entra en contacto con la piel u ojos lavar con mucha agua Los aparatos no desechables se deben esteriliza
13. nformit con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De vrige sprog som kr ves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverander Oi urTr orTTEG y u oog mou qQTrqITO VTOI am rnv Eupurraiki Oony a iat evrai oTov TOTTIK avrimp curro Bio Rad Bio Rad C 3 boulevard Raymond Poincar 05 2012 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 M Fax 33 0 1 47 41 91 33 Ref 91079 BRD Espafiol 10
14. nte a los adultos y que parece ser causada por una reactivaci n del virus que puede permanecer latente para largo tiempo en los ganglios sensorios espinales que siguen de la infecci n primaria La infecci n causa erupciones cut neas dolorosas a lo largo de la distribuci n de los nervios afectados Los m todos serol gicos son los que generalmente se usan para la determinaci n del estado inmunitario en personas a riesgo sobretodo los imunodeprimidos y la di gnosis sea pre u post natal de personas infectadas por VZV 3 PRINCIPIO DEL M TODO La prueba para la titulaci n de IgM anti Varicela se basa sobre el principio de la captura de estas inmunoglobulinas por los anticuerpos monoclonales anti IgM humanos en la fase s lida Una subsecuente incubaci n con el ant geno de la Varicela en un complejo con los anticuerpos monoclonal conjugado a peroxidasa de r bano selecciona los anticuerpos espec ficos para el ant geno y est revelado por adici n del substrato peroxidasa Cuando la reacci n enzim tica est parada por la adici n de una soluci n de cido solf rico el color se vuelve amarillo El color que es proporcional a la cantidad de anticuerpos espec ficos presentes en el suero puede ser le do en un lector para microplacas ELISA 4 COMPONENTES DEL KIT Y PREPARACI N DEL REACTIVO Reactivos suficientes para 48 determinaciones Poner los reactivos a temperatura ambiente antes de su uso MT PLATE MICROPLACA 3x2 tiras rec
15. r despu s su uso El m todo preferido es autoclavar durante 1 h a 121 C los materiales desechables deb en ser autoclavados o incinerados El cido sulf rico contenido en la Soluci n Bloqueante y el cido clorh drico usado para limpiar la cristaler a son corrosivos utilizar estos materiales con cuidado En caso de contacto con la piel u ojos limpiar con mucha agua Los cidos neutralizados y la otros residuos l quidos se deben disinfectar a adiendo hipoclorito de sodio en un volumen suficiente para obtener una concentraci n final por lo menos del 1 096 Se requier una exposici n al hipoclorito de sodio al 1 durante 30 minutos para garantizar una disinfecci n eficaz El derrame de materiales potencialmente infecciosos se debe eliminar inmediatamente con papel absorbente y el rea contaminada tendr que ser limpiada por ejemplo con hipoclorito de sodio al 1 096 antes de se que se contin e el trabajo El hipoclorito de sodio no se debe utilizar en derrames que contengan cido antes de que la zona sea limpiada Todos los materiales utilizados para limpiar derrames inclu dos los guantes se deben desechar como residuos potencialmente infecciosos No autoclavar materiales que contengan hipoclorito de sodio Precauciones anal ticas 1 El ant geno reconstituido con el conjugado no es estable despu s de congelar En caso de un consumo limitado del ant geno proceder como sigue Reconstituir el ant geno en 1 10 de
16. ubiertas de anticuerpos humanos monoclonales anti IgM humanos Uso Abrir el envase de la placa desde el lado opuesto del c digo M seguido por el n mero de lote que sirve para su identificaci n retirar el soporte y las tiras necesarias Colocar las tiras no utilizadas en la bolsa de pl stico con el gel de s lice extraer el aire y cerrar fuertemente CONTROL CONTROL POSITIVO 1 6 mL Contenido Suero humano con anticuerpos anti Varicela Zoster IgM diluido en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 1 96 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional Color el color es proporcional al t tulo del anticuerpo CONTROL CUT OFF CUT OFF 2 5 mL Contenido Suero humano con anticuerpos anti Varicela Zoster IgM diluido en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 1 96 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional Color El color es proporcional al t tulo del anticuerpo Ag ANT GENO Polvo liofilizado x 3 frascos Contenido Varicela Zoster Virus parcialmente purificado y no infectivo debido a un tratamiento con beta propiolactone en tamp n fosfato 0 04 mol L pH 7 2 y lactosa Preparaci n Reconstituir con el volumen de conjugado indicado en etiqueta mezclando por inversi n CONJ CONJUGADO 10 mL Contenido anticuerpos monoclonales marcados anti Varicela con peroxidasa en una soluci n fosfato tamponada conteniendo fenol 0 05
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