HCG-ELISA - DIAsource Immunoassays
Contents
1. EXTR SOLN conc WASH SOLN CONTROL N Used symbols Wash buffer Revision nr 130513 P I Number 1701000 S mbolos utilisados Producto sanitario para diagn stico in vitro Fabricante WASH SOLN cone 1251 CONC Ab 1251 conc ACETONITRILE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR SOLN ELU SOLN GEL PRE SOLN NEUTR SOLN TRACEUR BU HRP HRP HRP HRP CONJ BUF CHROM TMB conc CHROM TMB Concentrado de conjugado de biotina Concentrado avidina HRP Tamp n de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo espec fico Estreptavidina HRP Concentrado WASH SOLN Tamp n de lavado Revision nr 1305132. 0 03 Proclin 300 0 015 BND y 0 010 MIT como conservante Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 11 mL listo para usar Anticuerpo anti a subunit conjugado con la Peroxidasa de r bano Contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND y 0 010 MIT como conservante o gt El gt Ab P Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar 5 THE Tetrametilbencidina TMB 6 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar SOLN contiene 0 5M H2S0 Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane Bromonitrodioxano MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Metilisotiazolona Note Se puede solicitar el Soecimen Diluent para la diluci n de la muestra 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 nm 10 nm ej Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 C 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos mas alla de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 C 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abier
3. 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of hCG in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test up to 13 300 mIU mL of hCG 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national calibrators and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DIAsource 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequence
4. be stored for up to 5 days at 2 C 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest calibrator the specimens can be diluted with Specimen Diluent and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Specimen Diluent mix thoroughly b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Specimen Diluent mix thoroughly NOTE Sera of pregnant women must be diluted 1 100 in Specimen Diluent before starting the assay 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each calibrator control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption As a general rule t
5. by comparing the sample hCG levels with Specimen Diluent 0 mIU mL and Calibrator 2 50 mIU mL Patient samples are run in parallel with the Specimen Diluent 0 mIU mL and the 50 mIU mL Calibrator 2 The assay procedure is identical with the Quantitative Method but step 8 and 9 are omitted 6 4 Calculation of Results Quantitative 1 Calculate the average absorbance values for each set of calibrators controls and patient samples Using semi logarithmic graph paper construct a calibration curve by plotting the mean absorbance obtained from each calibrator against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the calibration curve 4 Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this calibration curve Samples with concentrations higher than that of the highest calibrator have to be further diluted or reported as gt 1000 mIU mL For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account 6 4 1 Example of Typical Calibration Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in pla
6. day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DIAsource directly 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 5 1000 mIU mL Catalogue Nr KAPD 1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Produced Colour Intensity Equivalent to HCG in Concentration serum mIU ml 300 mIU mL 200 mIU mL 80 mIU mL 75 IU mL 50 IU mL 25 pIU mL 200 mIU m
7. de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ningun error contactar con su distribuidor o con DlAsource ImmunoAssays S A directamente 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 5 1000 mIU mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media mas dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Specimen Diluent y result ser lt 5 mlU mL 9 4 Precision Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperacion Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 10 LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 10 1 Sustancias que pueden interferir Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de HCG en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo
8. hasta 13000 mlU mL de HCG 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DIAsource ImmunoAssays S A 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 113 Respo
9. of pregnancy serum hCG concentrations have a doubling time of approximately two days After delivery hCG levels fall rapidly and disappear completely after a few days Very low levels of hCG can be present in ectopic pregnancies see Braunstein G a o First trimester chorionic gonadotropin measurements as an aid in the diagnosis of early pregnancy disorders In American Journal of Obstetrics and Gynaecology V 131 No 1 pp 25 32 May 1978 St Louis while conditions like choriocarcinoma trophoblastic or nontrophoblastic neoplasms or hydatiform moles may result in very high hCG concentrations CAUTION 1 For the detection of pregnancy in serum a qualitative assay is used with a cutoff point of 50 mIU mL Negative or borderline results should be repeated on a fresh specimen obtained at least 48 hours after the first specimen 2 It has been shown that immunological pregnancy tests may yield false results in cases of several diseases such as rheumatoid arthritis or myelomas In such cases the interpretation of the pregnancy test should be done carefully 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to
10. recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DIAsource ImmunoAssays S A Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit Microtiterwells Placas multipocillo 12x8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti HCG monoclonal on Calibrador Calibrador 1 5 5 viales liofilizados 1 0 mL Concentraciones 5 50 200 500 1000 mIU mL Conversi n 1 pg mL 0 00916 mIU mL Los est ndares est n calibrados seg n el material de referencia Chorionic Gonadotropin Reference reagent 2001 NIBSC c digo 99 688 Ver Preparaci n de los Reactivos Contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND y 0 010 MIT como conservante 3 Specimen Diluent Soluci n para diluci n de la muestra 1 vial 10 mL listo para usar DIL SPE 0 mIU mL Contiene
11. 1 vial 10 mL ready to use The specimen diluent is also used as calibrator point 0 mIU mL Contains 0 03 Proclin 300 0 015 BND and 0 010 MIT as preservatives Ab Enzyme Conjugate 1 vial 11 mL Ready for use Monoclonal antibody against the alpha subunit conjugated to horseradish peroxidase Contains 0 03 Proclin 300 0 015 BND and 0 010 Mit as preservatives CHROM TMB Substrate Solution 1 vial 14 mL Ready for use Tetramethylbenzidine TMB SOLN Stop Solution 1 vial 14 mL Ready for use Contains 0 5 M H2SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns STOP BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Note Additional Soecimen Diluent for sample dilution is available upon request 4 2 4 3 Material required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450410 nm Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water Timer Semi logarithmic graph paper or software for data reduction Storage Conditions When stored at 2 C 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C 8 C Microtiter wells must be stored at 2 C 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Catalogue Nr KAPD 1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 4 4 Rea
12. 69 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 HCG ELISA KAPD1469 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DlAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 90 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DIAsource HCG ELISA proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del Gonadotropina cori nica HCG en suero Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DIAsource HCG ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio del s ndwich Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un nico foci antig nico en una mol cula de HCG Se incuba una al cuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene HCG end gena en los pocillos recubiertos con el enzima conjugado que es un anticuerpo monoclonal anti a subunit conjugado con la peroxidasa end gena Despu s de la incubaci n se lava el conjugado que no se ha unido La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la concentraci n de HCG en la muestra Cuando se a ade la soluci n del sustrato de la peroxidasa la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentraci n de HCG en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Para obtener informaci n de las sustancias
13. DA Ze CE HCG ELISA KAPD1469 DIAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium LOT 140127 1 HCG ELISA KAPD1469 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DlAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 90 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DiAsource HCG ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of of intact human chorionic gonadotropin hCG in serum 1 2 Summary and Explanation Chorionic Gonadotropin hCG is a glycoprotein hormone which is normally produced by the placenta during pregnancy After conception the hCG concentration increases rapidly to reach a peak near the end of the first trimester High concentrations are observed throughout pregnancy After delivery hCG levels fall rapidly and become undetectable after a few days Structurally intact hCG molecules are composed of an alpha and a beta subunit with a molucular weight of 38 4 kDa The alpha subunit is nearly identical to the alpha subunits of other glycoprotein hormones such as Thyroid Stimulating Hormone TSH Luteinizing Hormone LH and Follicle Stimulating Hormone FSH The differences in the beta subunit of the respective hormones account for their biological specificity and immunochemical distinctiveness Monoclonal antibodies recognizing unique sites on the beta chain of the hCG molecule are essential for different
14. L 50 mIU mL 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity was calculated by adding 2 standard deviations to the mean of 20 replicate analyses of Specimen Diluent and was found to be lt 5 mIU mL 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The within assay variability is shown below Mean mIU mL ido aa ar 1769 22 us 35 9 4 2 Inter Assay The between assay variability is shown below Mean sa ore 9 5 Recovery Samples have been spiked by adding hCG solutions with known concentrations in a 1 1 ratio The expected values were calculated by addition of half of the values determined for the undiluted samples and half of the values of the known solutions The Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expected values with 100 Added Conc Measured Conc Expected Conc Recovery 1 1 v v mIU mL mIU mL mIU mL 14 1 100 35 6 i 0 o pa 106 ye E i 83 139 dh Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 9 6 Linearity Mean Conc 88 86 90 96 90 86 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to
15. ce of data generations at the time of assay Calibrator Optical Units 450 nm Calibrator 1_ 5 mIU mL Calibrator 2_ 50 mIU mL Calibrator 3_ 200 mIU mL Calibrator 4_ 500 mIU mL Calibrator 5_ 1000 mIU mL 6 5 Qualitative Results For a qualitative analysis of the hCG level the color development of the specimen is compared with the color of the Specimen Diluent 0 mIU mL and Calibrator 2 50 mIU mL If the blue color is less intense than the color of the 50 mlU mL Calibrator the sample is considered as negative If the blue color is more intense than or equal to the color of the 50 mlU mL Calibrator the sample is considered as positive 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests Catalogue Nr KAPD 1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 7 1 Normal healthy adults non pregnant In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DIAsource HCG ELISA the following values are observed Population Age Valid N hCG mIU mL years men z5 z5 women E 7 2 Normal serum hCG levels during pregnancy ooo 0 ww pk 2000 190000 18 4500 50000 po 18500 205000 wo 3300 4000 o ta 1400 125000 During the first six weeks
16. e los ensayos inmunol gicos de embarazo pueden dar falsos resultados en casos de varias enfermedades como artritis reumatoide y mielomas En esos casos la interpretaci n de los ensayos de embarazo han de realizarse cuidadosamente Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones
17. e wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 C to26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected 10 Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes 11 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results 13 Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation 14 Donot use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels 15 All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers DN Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 16 17 18 19 20 21 4 1 Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding charac
18. esiduales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado 6 Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo T Incubar durante 10 minutes a temperatura ambiente 8 Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 50 uL de Stop Solution a cada pocillo 9 Leer la OD a 450110 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution 6 3 Procedimiento de ensayo M todo Cualitativo Este procedimiento diferencia entre muestras positivas embarazada y negativas mediante la comparaci n de los niveles de hCG de la muestra con el diluyente de las muestras 0 mIU mL y el calibrador 2 50 mIU mL Las muestras de pacientes se corren en paralelo con el diluyente de las muestras 0 mIU mL y el calibrador 2 50 mIU mL El procedimiento de ensayo es id ntico con el M todo cuantitativo pero se omiten los pasos 8 y 9 6 4 C lculo de los Resultados Cuantitativo Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de calibradores controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada calibrador frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n corres
19. gents Preparation Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use Calibrators Reconstitute the lyophilized contents of the calibrator vial with 1 0 mL Aqua dest Note The reconstituted calibrators are stable for 2 months at 2 C 8 C For longer storage freeze at 20 C 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DIAsource has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may
20. gulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 dias a 2 C 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el calibrador mas concentrado ha de diluirse con Specimen Diluent y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Specimen Diluent mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Specimen Diluent mezclar totalmente NOTA El suero de las mujeres embarazadas debe diluirse 1 100 en el diluyente de las muestras antes de comenzar el ensayo 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los paso
21. hain of hCG conjugated with horseradish peroxidase After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase is proportional to the concentration of hCG in the sample Having added the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentration of hCG in the patient sample 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS 1 This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV III HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal 3 Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood 4 The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided 5 Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step 6 Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur Mix the contents of the microplat
22. he enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature 6 2 Test Procedure Each run must include a calibration curve NOTE Sera of pregnant women must be diluted 1 100 in Specimen Diluent before starting the assay s 5 3 Catalogue Nr KAPD 1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 25 uL of each Calibrator Control and samples with new disposable tips into appropriate wells 3 Dispense 100 uL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step 4 Incubate for 30 minutes at room temperature 5 Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 5 times with distilled water 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 10 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 50 L of Stop Solution to each well E et 10 Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution 6 3 Test Procedure Qualitative Method This procedure differentiates positive pregnant from negative samples
23. iation between hCG and LH FSH and TSH HCG Assays are used for the early detection of pregnancy 1 In addition to the elevated hCG levels during pregnancy high concentrations of hCG may be associated with neoplasms of trophoblastic and nontrophoblastic origin such as hydatiform mole chorionepithelioma embryonal cell carcinoma and many others 2 HCG is commonly elevated in different testicular tumors and is thus used as a tumormarker for testicular tumors in combination with AFP There is a good correlation between changes in hCG levels and response to therapy 3 Extragonadal germ cell cancers in the absence of clinically or ultrasonographically detectable testicular abnormalities have beein observed as well Over 50 of patients with malignant insulinomas have elevated hCG levels the hormone is not detected in association with benign adenomas Ectopic secretion of hCG also have been found in a small percentage of patients with adenocarcinoma of the ovary pancreas and stomach hepatomas and islet cell carcinomas 2 PRINCIPLE OF TEST The DlAsource HCG ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal mouse antibody directed towards a unique antigenic site on ahCG molecule An aliquot of patient sample containing endogenous hCG is incubated in the coated well with enzyme conjugate which is a monoclonal antibody directed against the alpha c
24. nsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS Consultar el manual de usuario en ingl s Fecha de revisi n 2014 01 27 Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 P I Number 1701000 Ag 1251 Ab 1251 Ag 1251 Ab 1251 CONC INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL NEUTR SOLN TRACEUR BUF
25. oratorio determine sus valores normales e inusuales 7 1 Adultos normales sanos no embarazadas En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DIASOURCE IMMUNOASSAYS S A HCG ELISA se observaron los siguientes valores Poblaci n Edad a os hCG mIU mL lt 5 Hombres lt 5 z5 Hombres z5 7 2 Niveles normales de hCG en suero durante el embarazo o 6 zomo 7000 64000 o e 280 100 ts f 4600 50000 A gt t8500 205000 19 3300 40000 A 145002 26000 Durante las primeras seis semanas de embarazo las concentraciones de hCG en suero se doblan aproximadamente de dos d as Despu s del parto los niveles de hCG caen r pidamente y desaparecen completamente a los pocos dias Niveles muy bajos de hCG pueden presentarse en embarazos ect picos ver Braunstein G a o First trimester chorionic gonadotropin measurements as an aid in the diagnosis of early pregnancy disorders In American Journal of Obstetrics and Gynaecology V 131 No 1 pp 25 32 May 1978 St Louis mientras que condiciones como coriocarcinoma neoplasmas trofoblasticos o no trofoblasticos o mola hidatiforme pueden mostrar concentraciones muy elevadas de hCG PRECAUCI N 1 Para la detecci n del embarazo en suero se utiliza un ensayo cualitativo con un punto limite de 50 mIU mL Deben repetirse los resultados negativos o dudosos con una muestra fresca obtenida al menos 48 horas tras la primera muestra 2 Se ha visto qu
26. peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se
27. pondiente a partir de la curva est ndar 4 M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 6 4 1 Ejemplo de una Curva Est ndar T pica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Calibrador Unidades pticas 450 nm Calibrador 1_ 5 mIU mL Calibrador 2_ 50 mIU mL Calibrador 3_ 200 mIU mL Calibrador 4 500 mIU mL Calibrador 5_ 1000 mIU mL 6 5 Resultados Cualitativos Para un an lisis cualitativo de los niveles de hCG el desarrollo del color de la muestra se compara con el color del diluyente de las muestras 0 mIU mL y del calibrador 2 50 mIU mL Si el color azul es menos intenso que el color del calibrador 2 50 mIU mL la muestra se considera negativa Si el color azul es mas intenso que el color del calibrador 2 50 mlU mL la muestra se considera positiva 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada lab
28. s be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Catalogue Nr KAPD 1469 P I Number 1701234 en Revision Nr 140127 1 12 REFERENCES 1 Thomas Labor und Diagnose 5 Auflage Mann K Hormann R und pp 996 ff 2 Mann K Saller B Hoermann R Related Articles Clinical use of HCG and hCG beta determinations Scand J Clin Lab Invest Suppl 1993 216 97 104 3 Braunstein GD Vaitukaitis JL Carbone PP and Ross GT Ectopic production of human chorionic gonadotropin by neoplasms Ann Intern Med 1973 78 39 45 4 Cacciatore B Tiitinen A Stenman UH Ylostalo P Related Articles Normal early pregnancy serum hCG levels and vaginal ultrasonography findings Br J Obstet Gynaecol 1990 Oct 97 10 899 903 Revision date 2014 01 27 Catalogue Nr KAPD 14
29. s sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 6 2 Procedimiento de ensayo M todo Cuantitativo Cada uno debe incluir una curva de est ndares NOTA El suero de las mujeres embarazadas debe diluirse 1 100 en el diluyente de las muestras antes de comenzar el ensayo ver 5 3 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 25 uL de cada Calibrador Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados 3 Dispensar 100 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso 4 Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente 5 Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 5 veces con agua destilada 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas r
30. teristics of the plates may result slightly different Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2S0 It may cause skin irritation and burns Some reagents contain Proclin 300 BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DlAsource REAGENTS Reagents provided Microtiterwells 12 x 8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti B HCG monoclonal antibody CAL EN HCG Calibrators N 1 to 5 5 vials lyophilized 1 mL Concentrations 5 50 200 500 1000 mIU mL Conversion 1 pg mL 0 00916 mlU mL The concentrations of the DIAsource HCG Kit calibrators match the International Reference material Chorionic Gonadotropin Reference reagent 2001 NIBSC Code number 99 688 See Preparation of Reagents Contain 0 03 Proclin 300 0 015 BND and 0 010 MIT as preservatives SLR ae Specimen Diluent
31. tos conservan su actividad durante si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Calibradores Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los calibradores con 1 0 mL de agua destilada Nota Los est ndares reconstituidos son estables durante 2 meses a 2 C 8 C Para per odos m s largos congelar a 20 C 45 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto 4 6 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DlAsource ImmunoAssays S A no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Catalogue Nr KAPD1469 P I Number 1701234 es Revision Nr 140127 1 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette 02 1388 001 permitir coa
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