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PRT-712.02-092 V 0 Salmonella Bax
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1. Instituto d ero Salud P blica Fecha emisi n Ministerio de Salud 23 05 20 1 1 SALMONELLA EN ALIMENTOS M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 Revistonig MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO T Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 1 de 12 de Alimentos 1 OBJETIVO Detectar la presencia de Salmonella en muestras de alimentos mediante sistema molecular automatizado que utiliza la reacci n de polimerasa en cadena PCR Utilizar como m todo de screening luego de la etapa de enriquecimiento 2 CAMPO DE APLICACI N Y ALCANCE De acuerdo con la validaci n AOAC aplicar este procedimiento a una variedad de alimentos entre ellos salchichas carne cruda picada pollo crudo picado queso mozzarella pescado crudo congelado jugo de naranja leche al 2 crema de leche leche descremada huevo liquido pollo cocido Hot dog pimienta negra platos preparados chocolate entre otros De acuerdo con la validaci n AFNOR aplicar este procedimiento a todos los alimentos de consumo humano y muestras ambientales 3 FUNDAMENTO El sistema de detecci n BAX es un m todo automatizado para detecci n de microorganismos en muestras ambientales y de alimentos Fue el primer m todo de screening basado en PCR combina la tecnolog a de PCR con la detecci n por fluorescencia El ADN de la muestra se combina con ADN polimerasa nucle tidos y partidores espec ficos Esta
2. Las reacciones positivas muestran tres peak a 85 88 y 90 C La distancia entre el primer y tercer peak puede ser de aproximadamente 5 C Cuando los niveles de Salmonella en la muestra son muy altos los peak de 88 y 90 C se pueden combinar y se puede ver solamente dos Peak Cuando este Peak combinado es muy alto es posible que el Peak correspondiente al control interno sea muy peque o o desaparezca Peak de control El peak de control se produce entre 78 a 80 C este puede variar en altura dependiendo de la presencia o ausencia del microorganismo objetivo Salmonella En ausencia de Salmonella s lo se observa el peak de control 7 9 MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD 7 9 1 7 9 2 8 8 1 9 Se deben seguir las precauciones para organismos nivel de bioseguridad 2 El personal que manipule este debe leer y seguir las instrucciones de seguridad entregadas por los fabricantes de medios de cultivos reactivos y microorganismos usados en el an lisis REGISTROS Registro de resultados an lisis ANEXOS Anexo N 1 Diagrama de trabajo Anexo N 2 Preparaci n del computador Anexo N 3 Preparaci n del repetidor de volumen Salud P blica Fecha emisi n SALMONELLA EN ALIMENTOS sce METODO OFICIAL AOAC 2003 09 MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO AT Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 11 de 12 de Alimentos ANEXO N 1 DIAGRAMA D
3. solo se incluye un blanco En los m todos moleculares el control positivo es un control interno de reacci n el cual incluye un target especial y en el caso particular de BAX que es un sistema cerrado y patentado el control interno viene incluido en la pastilla de reacci n liofilizada por lo tanto no se necesita un segundo control solo el blanco para evidenciar que los reactivos no han sido contaminados en la manipulaci n El sistema est validado de esta forma Los resultados se registran en RG 712 00 072 como presuntivo positivo negativo o indeterminado a la espera de los an lisis de confirmativos CONFIRMACI N Todos los resultados positivos deben ser confirmados aislando el pat geno desde la muestra presuntiva positiva seg n Procedimiento Detecci n de Salmonella en Alimentos por m todo convencional PRT 712 03 012 A Salud P blica Fecha emisi n SALMONELLA EN ALIMENTOS sce M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 l MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 10 de 12 de Alimentos 7 7 2 La especificidad descrita para el sistema BAX es 0 5 de Falsos Positivos y 0 Falsos negativos 7 8 INTERPRETACION DE LA CURVA DE MELTING 7 8 1 La curva de melting muestra dos tipos de Peak Peak objetivo Salmonella y Peak de control INPC A veces el peak de control de Salmonella aparece como un doble peak Peak objetivo
4. 12 de Alimentos 4 4 Sitio web AFNOR http www afnor validation com 5 TERMINOLOG A 5 1 PCR Reacci n en Cadena de la Polimerasa 6 MATERIALES INSUMOS Y EQUIPOS 6 1 6 1 1 6 1 2 6 1 3 6 1 4 6 1 5 6 1 6 6 1 7 6 1 8 6 1 9 6 1 10 6 1 11 6 1 12 6 1 13 6 1 14 6 1 15 6 1 16 6 2 6 2 1 6 2 2 6 2 3 6 2 4 Materiales e Insumos Gradilla de enfriamiento a 4 C Guante de l tex libres de polvo Herramienta de trabajo para tubos de lisis color azul Herramienta de trabajo para tubos de reacci n color gris Micropipeta calibrada de 1 a 10 uL calibrada Micropipeta calibrada de 20 a 200 uL calibrada Micropipeta calibrada de 8 canales de 5 a 50 uL calibrada Plum n permanente punta fina para marcar tubos Puntas largas para micropipeta de 10 y 200 uL Punta tipo jeringa para repetidor Repetidor de volumen Tapas pticas para tubos de PCR Tijera de uso exclusivo para la t cnica Tubos de lisis con tapas y rack Tubos de PCR con tableta reactiva Bolsas Stomacher Medios de cultivo y reactivos Agua peptonada tamponada Buffer de lisis Caldo lactosado Caldo de preenriquecimiento universal Instituto d ero SaludP blica Fecha emisi n Es pg SALMONELLA EN ALIMENTOS z M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 l MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gin
5. 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 4 de 12 de Alimentos 7 1 2 2 Mezclar con 225 mL de Caldo de Pre enriquecimiento Universal agitar y luego reposar por 60 5 minutos a temperatura ambiente 7 1 2 3 No ajustar pH Incubar por 24 2 h a 35 C 1 C 7 1 2 4 Realizar enriquecimientosecundario 7 1 3 Enriquecimiento para pescado crudo o congelado 7 1 3 1 Pesar 25 g de la porci n en bolsa Stomacher o frasco est ril 7 1 3 2 Homogenizar en juguera por 2 minutos con 225 mL de Caldo Lactosado dejar reposar por 60 5 minutos a temperatura ambiente de ser necesario ajustar a pH 6 8 02 7 1 3 3 Incubar por 24 2 horas a 35 C 1 C 7 1 4 Enriquecimiento para huevo l quido 7 1 4 1 Pesar 25 g de la porci n bolsa stomacher o frasco est ril 7 1 4 2 Mezclar con 225 mL de agua Peptonada Tamponada 7 1 4 3 Incubar 22 26 h a 35 C 1 C 7 1 4 4 Realizar enriquecimientosecundario 7 1 5 Enriquecimiento para leche chocolatada 7 1 5 1 Pesar 25 g de la porci n bolsa stomacher o frasco est ril 7 1 5 2 Mezclar con 225 mL de reconstituyente para leche no grasa Dejar a temperatura ambiente por 60 5 minutos 7 1 5 3 Ajustar a pH 6 8 02 Agregar 0 45 mL de soluci n de verde brillante 7 1 5 4 Incubar 22 26 h a 35 C 1 C 7 1 5 5 Realizar enriquecimientosecundario 7 1 6 Enriquecimiento para leche descremada en polvo 7 1 6 1 Pesar 25 g de la porci n bolsa stomacher o frasco est ril 7 1 6 2 Mezclar con 225 mL
6. Fecha revisi n dd 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 9 de 12 de Alimentos 7 5 13 7 5 14 7 5 15 7 5 16 7 5 17 7 6 7 6 1 7 6 2 7 6 3 7 6 4 7 7 7 7 1 Cerrar la bandeja del termociclador presionando desde el frente y hacer clic en next para iniciar la reacci n esta tendr una duraci n de 2 a 3 horas aproximadamente Una vez terminado el proceso hacer clic sobre finish para terminar Imprimir la hoja de resultados y guardar en archivador rotulado Registro de Lectura e Informe de Resultados Laboratorio de Enterobacterias N 348 ubicado en el laboratorio 348 Retirar los tubos de reacci n del termociclador y eliminarlos en soluci n de hipoclorito al 1 Apagar los equipos INTERPRETACI N DE RESULTADOS En la plantilla de resultados se observa con signo menos las muestras que resultan negativas para Salmonella y con un signo m s las que resultan positivas para Salmonella Un signo de interrogaci n indica que el resultado es indeterminado y este ocurre cuando el control positivo interno no alcanza el nivel necesario para ser considerado v lido y la cantidad de target espec fico no alcanza a ser detectada Un resultado indeterminado puede ser debido a los reactivos fallas en el sistema o error de operaci n El sistema cuenta con un control positivo interno INPC por lo cual no requiere incorporar controles positivos o negativos adicionales
7. de agua con de verde brillante 2 mL verde brillante 1 en 1 L de agua desionizada Dejar a temperatura ambiente por 60 5 minutos 7 1 6 3 Sin agitar ni ajustar a pH incubar 22 26 h a 35 C 1 C Instituto d ero Salud P blica Fecha emisi n Es Ministerio de Salud an 1 SALMONELLA EN ALIMENTOS sce 0 METODO OFICIAL AOAC 2003 09 l MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX O Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 5 de 12 de Alimentos 7 1 6 4 Realizar enriquecimientosecundario 7 1 7 Enriquecimiento para pimienta 7 1 7 1 Pesar 25 g de la porci n bolsa stomacher o frasco est ril 7 1 7 2 Mezclar con 225 mL de Caldo Soya Tripticase Dejar a temperatura ambiente por 60 5 minutos 7 1 7 3 Ajustar a pH 6 8 02 Incubar 22 26 h a 35 C 1 C 7 1 7 4 Realizar enriquecimientosecundario 7 2 ENRIQUECIMIENTO PRIMARIO VALIDACION AFNOR 7 2 1 Enriquecimiento para carne y pollo crudo 7 2 1 1 Pesar as pticamente la muestra en bolsa stomacher y mezclar en proporci n 1 10 en agua peptonada tamponada 7 2 1 2 Incubara 35 C 1 C por 16 a 20 horas E Enriquecimiento para productos l cteos excepto leche en polvo 7 2 2 1 Pesar as pticamente la muestra en bolsa stomacher y mezclar en proporci n 1 10 en agua peptonada tamponada con novobiocina 20mg L 7 2 2 2 Incubar a 42 C 1 C por 20 a 24 horas 7 2 3 Enriquecimiento para otros alimentos
8. palanca hacia la derecha Eliminar las tapas 713 7 Con pipeta multicanal introducir las puntas en los tubos de lisis que contienen el lisado homogenizar y medir 50 uL 7 5 8 Agregar el lisado sobre cada tubo de reacci n en la posici n correspondiente sin tocar la pastilla de reacci n 1 5 9 Colocar las tapas pticas con la ayuda de la herramienta gris 7 5 10 Llevar las muestras hasta el equipo Cuando en pantalla aparece la siguiente lectura Cycler has reached load temperatures El equipo ha alcanzado la temperatura de carga Hacer clic sobre Next y parece la siguiente lectura Ready for Rack load Listo para cargar Please carefully follow instructions Por favor siga las instrucciones cuidadosamente Open the sample drawer and insert your samples When the samples are in place close the drawer and press Next Abra la bandeja e inserte sus muestras Cuando las muestras est n en el lugar cierre la bandeja y presione Siguiente 7 5 11 Abrir la bandeja del termociclador presionando en la hendidura ubicada en frente a mano derecha del equipo 7 5 12 Introducir las muestras al termociclador con la plantilla met lica y ubicar en la posici n correcta es decir la misma ingresada en el PC Instituto d ero Salud P blica Fecha emisi n Ministerio de Salud 23 05 20 1 1 SALMONELLA EN ALIMENTOS M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO Revisi n 0 Gobierno de Chile
9. y muestras ambientales 7 2 3 1 Pesar as pticamente la muestra en bolsa stomacher y mezclar en proporci n 1 10 en agua peptonada tamponada 7 2 3 2 Incubar a 37 C 1 C por 16 a 20 horas 7 2 4 Enriquecimiento carne cruda incluida la carne con especias y carne congelada 7 2 4 1 Pesar as pticamente la muestra en bolsa Stomacher y mezclar en proporci n 1 10 con caldo de enriquecimiento MP 7 2 4 2 Incubar a 42 C 1 C por 24 horas Instituto d ero Salud P blica Fecha emisi n Es SALMONELLA EN ALIMENTOS sce METODO OFICIAL AOAC 2003 09 MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 6 de 12 de Alimentos 1 2 5 Fatal 7 2 5 2 7 3 7 3 1 7 4 7 4 1 7 4 2 7 4 3 7 4 4 7 4 5 7 4 6 7 4 7 7 4 8 7 4 9 Enriquecimiento ternera cruda incluida ternera con especias y ternera congelada Pesar as pticamente la muestra en bolsa Stomacher y mezclar en proporci n 1 10 con caldo de enriquecimiento MP Incubar a 42 C 1 C por 9a24 horas ENRIQUECIMIENTO SECUNDARIO Despu s de las 24 2 horas de incubaci n transferir 10 uL del cultivo a 500 uL de Caldo cerebro coraz n para todos los alimentos excepto carne pollo pescado alimentos marinos Incubar a 37 C 1 C por tres horas LISIS Encender las placas calefactoras y regularlas a 37 y 95 C 1 C Colocar las gradillas de en
10. E TRABAJO ENRIQUECIMIENTO PRIMARIO Diluci n 1 10 Eppendorf con 0 5 mL de ENRIQUECIMIENTO SECUNDARIO Caldo Cerebro Coraz n 10 uL en 0 5 mL de CCC en tubo Eppendorf Incubaci n por 3 horas a 37 C Tubos de reacci n con tableta Xx N N 50 uL demuestra lisada en tubo de reacci n 12 mL de buffer de lisis m s 150 uL de proteasa Agregar 200 uL LISIS DE LA MUESTRA 5 uL en 200 uL de buffer de lisis 20 minutos por tubo i a 37 C 10 minutos a 95 C y 5 minutos a 4 C en rack de enfriamiento MA Saud P blica Fecha emisi n j SALMONELLA EN ALIMENTOS z cso M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 i MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX Fecha revision 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 12 de 12 de Alimentos ANEXO N 2 PREPARACI N DEL COMPUTADOR e Encender el computador anexo al equipo y hacer clic sobre el icono Launch Bax System e Ingresar la clave de uso del personal autorizado para el uso del equipo e Crear un archivo para el an lisis que se va realizar Hacer clic en el icono File y luego Save as en la barra File name ingresar el nombre que se dar al archivo y presionar save e Seleccionar con el mouse las celdas que ser n utilizadas e ingresar informaci n solicitada por el sistema en Target la opci n Listeria monocytogenes en Kit Lot Number ingresar el n mero del kit que se utilizar en descripci n ingresar informaci n c
11. a 3 de 12 de Alimentos 6 2 5 Caldo cerebro coraz n 6 2 6 Etanol al 70 6 2 7 Proteasa 6 2 8 Soluci n de hipoclorito de sodio de uso dom stico al 1 en agua destilada 6 3 Equipos 6 3 1 Balanza de precisi n con sensibilidad 0 1 g 6 3 2 Computador en l nea con el termociclador y de uso exclusivo 6 3 3 Cron metro 6 3 4 Impresora en l nea con el termociclador y de uso exclusivo 6 3 5 Incubadora a 35 1 C 6 3 6 Incubadora a 37 C 1 C 6 3 7 Placa calefactora regulada a 37 1 C con su respectivo term metro 6 3 8 Placa calefactora regulada a 95 C 1 C con su respectivo term metro 6 3 9 Regulador de voltaje 6 3 10 Stomacher 400 6 3 11 Termociclador Applied Biosystem BAX System Q7 6 3 12 Vortex 7 DESARROLLO 7 1 7 1 1 7 1 1 1 7 1 1 2 7 1 1 3 TZ 7 1 2 1 ENRIQUECIMIENTO PRIMARIO Enriquecimiento para carnes de vacuno carnes de pollo queso natural y queso Mozzarella Pesar 25 g de la porci n bolsa Stomacher o frasco est ril Homogenizar en juguera por 2 minutos con 225 mL de agua Peptonada Tamponada Incubar 20 24 h a 35 C 1 C Enriquecimiento para jugo de naranja Pesar 25 g de la porci n en bolsa Stomacher Instituto d ero SaludP blica Fecha emisi n Es Ministerio de Salud 23 05 20 1 1 SALMONELLA EN ALIMENTOS M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 AORTA MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n
12. cada al costado derecho y verificar que no hay muestras en el rack Hacer clic sobre next aparecer la siguiente lectura Preparing for Rack load Preparando para cargar el Rack Please carefully follow instructions Por favor siga las instrucciones cuidadosamente Preparing the cycler for loading Preparando para cargar Do not load cycler yet No cargue a n Instituto d ero Salud P blica Fecha emisi n Ministerio de Salud 23 05 20 1 1 SALMONELLA EN ALIMENTOS h Revisi n 0 METODO OFICIAL AOAC 2003 09 MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO AT Gobierno de Chile BAXO Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 8 de 12 de Alimentos 7 5 3 Mientras espera que el equipo est listo para cargar colocar los tubos de reacci n en un rack de enfriamiento que contenga la plantilla met lica de color negro del termociclador 7 5 4 Marcar el primer tubo de cada hilera de los tubos de reacci n para no confundir la posici n 7 5 5 Con ayuda de la herramienta azul retirar las tapas de los tubos de lisis que se encuentran en el rack de enfriamiento 7 5 6 Con ayuda de la herramienta gris retirar cuidadosamente las tapas de los tubos de reacci n y eliminarlas movimientos bruscos pueden ocasionar la perdida de la tableta de PCR Tomar la herramienta gris colocando el dedo pulgar hacia la parte m s corta deslizar la herramienta sobre las tapas y hacer
13. friamiento en el refrigerador Sanitizar superficies de trabajo herramientas de trabajo micropipetas y repetidor utilizando papel absorbente humedecido con las soluciones de primero hipoclorito al 1 segundo alcohol 70 y tercero agua destilada Determinar el n mero de muestras que se requiere analizar En un tubo est ril preparar el buffer de lisis de acuerdo al n mero de muestras que se va ha analizar mas un volumen para blanco considerar que se requiere agregar 200 uL de la mezcla de lisis por muestra Mantener la proporci n recomendada por el fabricante Ejemplo 12 mL de buffer de lisis m s 150 uL de proteasa 6 mL de buffer de lisis m s 75 uL de proteasa o 3 mL de buffer de lisis m s 37 5 uL de proteasa Mezclar suavemente en forma de 8 para evitar la producci n de espuma Dosificar en vol menes de 200 uL por tubo Este puede ser almacenado en refrigeraci n hasta por 15 d as Colocar las muestras en una gradilla ordenadas en hileras de 8 Colocar los tubos de lisis conteniendo 200 uL de buffer de lisis en el mismo orden que las muestras Rotular el primer tubo de cada hilera para evitar confundir la posici n Si los tubos fueron almacenados a 4 C verificar que se encuentran vigentes para el uso Instituto d ero Salud P blica Fecha emisi n Ministerio de Salud 23 05 20 1 1 SALMONELLA EN ALIMENTOS M TODO OFICIAL AOAC 2003 09 MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO Revisi n 0 Gobier
14. mezcla es sometida a una serie de ciclos de calentamiento y enfriamiento Al calentar se desnatura el ADN por consiguiente la doble hebra de ADN se abre luego al enfriar los partidores que son fragmento de ADN especificos para Salmonella reconocen la zona de enlace luego la enzima usa los nucle tidos extendiendo la nuevas hebras de ADN y as sucesivamente hasta lograr en corto tiempo crear millones de copia del ADN buscado si es que este se encuentra presente en la muestra Cada vez que se produce la amplificaci n el colorante fluorog nico incluido en la tableta de PCR se intercala en la doble hebra de ADN y emite una se al fluorescente Luego en la fase de detecci n esta se al es medida Durante la detecci n la temperatura es llevada al punto en donde las hebras de ADN se separan liberando el colorante y bajando la se al Este cambio en la fluorescencia es trazado contra la temperatura generando la curva de meeting la cual es interpretada por el software del sistema BAX 4 REFERENCIAS 4 1 AOAC 2005 Microbiological Methods Chapter 17 p 186 4 2 Manual de usuario DuPont Qualicon BAX System 4 3 Sitio web AOAC http www aoac org testkits testedmethods html Instituto d ero SaludP blica Fecha emisi n Es SALMONELLA EN ALIMENTOS sce METODO OFICIAL AOAC 2003 09 MEDIANTE SISTEMA AUTOMATIZADO ET Gobierno de Chile BAX Fecha revisi n 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 2 de
15. no de Chile Fecha revisi n dd 23 05 2011 Secci n Microbiolog a PRT 712 02 092 P gina 7 de 12 de Alimentos 7 4 10 7 4 11 7 4 12 7 4 13 7 4 14 7 4 15 7 4 16 7 5 7 5 1 1 5 2 Retirar las tapas con la herramienta azul desplazar la herramienta sobre las tapas haciendo presi n sobre ellas y palanquear de derecha a izquierda y viceversa Vortear el cultivo y agregar 5 uL de cultivo a cada tubo de lisis Colocar las tapas a los tubos de lisis utilizando la herramienta azul presionar la palanca met lica para retirar la herramienta sin retirar las tapas y luego presionar con el lomo de la herramienta Llevar los tubos a la placa calefactora regulada a 37 C durante 20 minutos para realizar la lisis Transcurridos los 20 minutos trasladar los tubos a la placa calefactora regulada a 95 C durante 10 minutos Transcurridos los 10 minutos trasladar los tubos a la gradilla de enfriamiento por 5 minutos En esta etapa se puede detener el sistema y dejar en refrigeraci n hasta por 3 d as o congelado a 20 C hasta por 20 dias Dejar todo limpio y sanitizado utilizando las soluciones de hipoclorito de sodio al 1 etanol 70 y agua destilada PCR Una vez terminada la lisis encender el termociclador para precalentar Una vez que al costado izquierdo del equipo se observa destacado con luz la palabra POWER hacer un clic sobre el icono term metro Abrir la bandeja presionando en la hendidura ubi
16. omo por ejemplo el tipo de muestra luego hacer clic sobre Apply e Hacer clic en el pocillo y luego clic en Sample Id ingresar el n mero de muestra presionar Enter y as sucesivamente para ingresar el n mero de cada una de las muestras a analizar Incluir una muestra blanco e Luego en Sample Id ingresar pocillo por pocillo el n mero interno asociado a la muestra se va a procesar en esa posici n Se debe hacer clic sobre la barra Enter para que se almacene la informaci n ANEXO N 3 PREPARACI N DEL REPETIDOR DE VOLUMEN e Utilizar punta tipo jeringa de 500 uL Observar la tabla que viene inscrita en el repetidor e De acuerdo al volumen requerido en este caso 200 uL seleccionar el canal 2 e Subir la palanca para bajar el mbolo En condiciones as pticas abrir la punta tipo jeringa Introducir el tope del embolo en el diente debe quedar bien ajustado sino el mbolo no se desplazar e Introducir la jeringa en la soluci n de lisis Bajar suavemente la palanca para subir el mbolo y aspirar la soluci n sin producir espuma e Descartar las dos primeras descargas en la soluci n de lisis y luego dosificar en los tubos de lisis que sean necesarios e Colocar as pticamente las tapas con la ayuda de la herramienta azul presionar las tapas y presionar la palanca met lica con el dedo pulgar para retirar la herramienta sin retirar las tapas e Verificar el llenado si hay tubos con menor volumen estos deben ser descartado
17. s
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