Monoclonal Mouse
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1. Uso previsto Sin nimos del ant geno Resumen y explicaci n Reactivo suministrado Inmun geno Especificidad Precauciones Almacenamiento Preparaci n de las muestras incluido material necesario pero no suministrado 117472 001 C FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD15 Clon Carb 3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus N de cat logo 1S062 Para uso en diagn stico in vitro Se prev el uso de FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD15 Clon Carb 3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus Este anticuerpo es til para identificar granulocitos maduros c lulas de Hodgkin mononucleares y c lulas de Reed Sternberg en el linfoma de Hodgkin 1 La interpretaci n cl nica de los resultados de cualquier tinci n o su ausencia debe complementarse con estudios morfol gicos con controles adecuados y debe evaluarla un pat logo calificado dentro del contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas Ant geno Lewis X Le 2 3 3 fucosil N acetil lactosamina 3 FL 4 hapteno X 3 5 ant geno embri nico espec fico a la etapa 1 SSEA 1 2 3 lacto N fucopentaosa III LNFP III 3 CD15 se expresa en las c lulas de Reed Sternberg de la enfermedad de Hodgkin y en otros tipos diversos de c lulas como las mieloides y las epiteliales 3 6 Los anticuerpos contra la2. Real Carpinteria California 93013 USA REF N mero de cat logo IVD Producto sanitario para diagn stico in vitro Ec REP Dako Denmark A S Produktionsvej 42 Fabricant abricante DK 2600 Glostrup Denmark LOT C digo de lote Contenido suficiente para lt n gt ensayos Tel 805 566 6655 Fax 805 566 6688 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 Tel 45 4485 9500 Fecha de caducidad Consulte las instrucciones de uso Fax 45 4485 9595 Representante autorizado en la Comunidad Europea www dako com PT0020 Rev C Edici n 09 07 117472 001 307140ES_001 p 3 3
3. explosivas Una vez desechado el producto deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 3 Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel La soluci n que no se utilice deber desecharse de acuerdo con las normativas locales provinciales y nacionales o e Almacenar a 2 8 C No utilizar despu s de la fecha de caducidad impresa en el vial Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas el usuario deber comprobar dichas condiciones No existen signos evidentes que indiquen inestabilidad de este producto Por lo tanto los controles positivo y negativo deber n analizarse de manera simult nea con las muestras del paciente En caso de observarse una coloraci n inesperada que no puede ser explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospeche un problema con el anticuerpo comun quese con la asistencia t cnica de Dako El anticuerpo se puede utilizar para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Las muestras de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 um Se requiere el tratamiento previo con recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER Se consiguen resultados ptimos al tratar los tejidos previamente
4. CD15 reconocen una secuencia pentasac rida presente en la lacto N fucopentaosa lll ceramida tambi n denominada hapteno X de Le que se encuentra en los glucol pidos y glucoprote nas superiores 2 5 Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHQ para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Interpretaci n de la tinci n y 9 Limitaciones generales El anticuerpo monoclonal de rat n listo para usar se suministra en forma l quida en una soluci n tamp n que contiene prote na estabilizante y 0 015 de mol L NaNs Clon Carb 3 Isotipo IgM kappa Fragmento oligopept dico hapteno X aislado por afinidad procedente de c lulas leuc micas mielomonoc ticas En transferencias de Western de lisados de c lulas HL6O0 el anticuerpo marca una banda principal de 220 kDa correspondiente al peso molecular esperado de CD15 7 1 Para usuarios profesionales 2 Este producto contiene azida de sodio NaNz un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura Aunque a las concentraciones presentes en el producto no est clasificada como peligrosa la azida de sodio puede reaccionar con ca er as de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas met licas altamente
5. cal citoplasm tico 1 3 epitelio glandular 20 citoplasm tico 0 3 0 3 1 3 epitelio mucoso 20 apical citoplasm tico 3 3 c lulas mieloides 100 citoplasm tico 3 3 mucosa g strica 100 citoplasm tico 0 3 2 3 corp sculos de Hassall 100 no celular 0 2 2 3 epitelio escamoso superior 50 100 citoplasm tico 2 2 epitelio glandular 15 75 citoplasm tico Tejidos anormales En una revisi n de Arber y col se ha documentado que los anticuerpos contra la CD15 muestran una tinci n positiva en el 87 de los casos de enfermedad de Hodgkin de los tipos esclerosante nodular de celularidad mixta y con p rdida linfocitaria mientras que la variante con predominancia de linfocitos presenta una menor tasa de positividad 37 Entre los linfomas no Hodgkin el 13 expresan la CD15 incluido un 4 1 de los tipos de c lulas B 21 de los tipos de c lulas T y un 17 de los tipos de c lulas nulas Asimismo se ha observado expresi n de CD15 en casos de leucemia mieloide aguda 65 y de leucemia miel gena cr nica 96 de fase cr nica y 54 fase bl stica Se ha documentado un nivel de expresi n de CD15 relativamente bajo asociado con la leucemia linfobl stica aguda 5 7 en total con positividad en el 7 7 de los tipos de c lulas B comunes o precursoras 0 de los tipos de c lulas B 7 7 de los tipos de c lulas T y 17 3 de los tipos de c lulas nulas De igual forma se ha observado que los carcinomas derivados de
6. con EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8010 K8014 307140ES_001 p 1 3 Procedimiento de tinci n incluido material necesario pero no suministrado Interpretaci n de la tinci n Caracter sticas de resultados 117472 001 Cortes desparafinados Se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados fijados en formol e incluidos en parafina usando Dako PT Link n de cat logo PT100 PT101 Para m s detalles consulte la Gu a del usuario de PT Link Siga el procedimiento de tratamiento previo indicado en el prospecto para EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8010 K8014 Se deben aplicar los siguientes par metros para PT Link temperatura de precalentamiento 65 C temperatura y tiempo de recuperaci n del ep topo 97 C durante 20 1 minutos enfriar a 65 C Enjuagar los cortes con EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8010 diluido a temperatura ambiente Cortes incluidos en parafina Como m todo alternativo de preparaci n de una muestra tanto el desparafinado como la recuperaci n del ep topo se pueden realizar en el PT Link con un procedimiento modificado Ver instrucciones en la Gu a del usuario de PT Link Despu s de finalizado el procedimiento de tinci n se deben deshidratar enjuagar y mo
7. diversos rganos son positivos para la CD15 56 incluidos adenocarcinomas carcinomas de c lulas escamosas y carcinomas no diferenciados de c lulas peque as y grandes 5 Pileri SA Ascani S Leoncini L Sabattini E Zinzani PL Piccaluga PP Pileri A Jr Giunti M Falini B Bolis GB Stein H Hodgkin s lymphoma the pathologist s viewpoint J Clin Pathol 2002 55 162 176 2 Ball ED CD15 cluster workshop report In Schlossman SF Boumsell L Gilks W Harlan JM Kishimoto T Morimoto C Ritz J Shaw S Silverstein R Springer T Tedder TF Todd RF eds Leucocyte Typing V White cell differentiation antigens Oxford Oxford Univ Press 1993 1 790 805 3 Kannagi R CD15 Workshop Panel report In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEGK Goyert SM Mason DY Miyasaka M Moretta L Okumura K Shaw S Springer TA Sugamura K Zola H eds Leucocyte Typing VI White Cell Differentiation Antigens Garland Publishing Inc New York 1998 348 51 4 Gocht A Struckhoff G L hler J Invited review CD15 containing glycoconjugates in the central nervous system Histol Histopathol 1996 11 1007 28 5 Arber DA Weiss LM CD15 a review Applied Immunohistochem 1993 1 1 17 30 6 Kornstein MJ Bonner H Gee B Cohen R Brooks JJ Leu M1 and S100 in Hodgkin s disease and non Hodokin s lymphomas AJCP 1986 85 4 433 7 7 Unpublished Dako Referencias 1 bibliogr ficas Limite de temperatura Dako North America Inc 6392 Via
8. l 100 citoplasm tico 2 3 mielocitos 100 citoplasm tico 1 3 todas las c lulas 100 citoplasm tico Suprarrenal 3 M dula sea 3 Mama 2 Enc falo cerebelo 3 Enc falo cerebro 3 Cuello uterino 2 Colon 2 Es fago 2 Coraz n 3 Ri n 3 H gado 3 2 2 epitelio ductal 25 100 citoplasm tico 3 3 materia blanca materia gris 100 difuso 3 3 materia blanca materia gris 100 difuso 0 2 1 2 epitelio glandular mucoso 50 punteado apical citoplasm tico 1 2 epitelio mucoso 20 apical citoplasm tico 2 2 epitelio escamoso no basal 100 citoplasm tico 0 3 3 3 epitelio tubular cortical 100 citoplasm tico 2 3 endotelio cortical y medular 100 citoplasm tico 1 3 endotelio sinusoidal 40 citoplasm tico 307140ES_001 p 2 3 Pulm n 3 C lulas mesoteliales 3 Nervio 3 Ovario 3 P ncreas 3 Paratiroides 3 Hip fisis 3 Pr stata 2 Gl ndula salival 3 M sculo esquel tico 3 Piel 3 Intestino delgado 3 Bazo 3 Est mago 3 Test culos 3 Timo 3 Tiroides 2 Am gdala 3 Utero 2 0 3 2 3 c lulas mesoteliales 100 citoplasm tico 0 3 0 3 2 3 c lulas acinares 25 50 citoplasm tico 0 3 3 3 c lulas endocrinas de la adenohip fisis 75 100 citoplasm tico 2 3 neur filos de la neurohip fisis 75 100 difuso 1 2 epitelio glandular 50 citoplasm tico 1 3 epitelio ductal 100 api
9. ntar los cortes usando un medio de montaje permanente Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda el uso de Dako Silanized Slides n de cat logo S3003 El sistema de visualizaci n recomendado es EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8010 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han sido preprogramados en el software de los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus usando los siguientes protocolos Plantilla del protocolo FLEXRTU2 volumen de aplicaci n 200 uL o FLEXRTU3 volumen de aplicaci n 300 uL Autoprogram sin contratinci n CD15 o Autoprogram con contratinci n CD15H El paso Auxiliar debe configurarse como tamp n de enjuague en sesiones de tinci n con lt 10 portaobjetos En el caso de sesiones de tinci n con gt 10 portaobjetos el paso Auxiliar debe configurarse como ninguno De esta manera se aseguran tiempos de lavado semejantes Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Consulte el Manual del usuario para m s detalles sobre el instrumento correspondiente Si todav a no est n disponibles los protocolos en el instrumento Dako Autostainer utilizado comun quese con el servicio t cnico de Dako Las condiciones ptimas pueden variar seg n la mue
10. stra y el m todo de preparaci n y deber n determinarse individualmente en cada laboratorio Si el pat logo encargado de la evaluaci n desea otra intensidad de tinci n se puede solicitar informaci n a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio t cnico para reprogramar el protocolo Verifique que los resultados del protocolo ajustado sigan siendo v lidos confirmando que el patr n de tinci n sea id ntico al descrito en Caracter sticas de resultados Se recomienda la contratinci n en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8018 Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente Los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente El tejido de control positivo debe incluir neutr filos eosin filos y macr fagos centrales germinales y las c lulas estructuras deben exhibir patrones de reacci n como se describe para este tejido en Caracter sticas de resultados en todas las muestras positivas El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo 15750 El patr n de tinci n celular es citoplasm tico y o membranoso 1 5 Tejidos normales Tipo de tejido n analizado Elementos tisulares con tinci n positiva 3 3 c lulas endocrinas de la corteza suprarrena
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