FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Myeloperoxidase
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1. azurof licos de los granulocitos neutr filos y tambi n se encuentra en los lisosomas de los monocitos In vivo la MPO cataliza la formaci n de agentes oxidantes y halogenantes antimicrobianos por ejemplo el cido hipocl rico a partir del per xido de hidr geno y los iones cloruro 1 5 La MPO es un marcador importante de las c lulas mieloides desde la fase promieloc tica hasta las formas maduras 1 Los m todos de visualizaci n inmunocitoqu micos sensibles combinados con t cnicas eficientes de revelaci n de ep topos han mostrado que el 17 23 de las leucemias linfobl sticas agudas de c lulas B precursoras tambi n expresan la MPO raz n por la cual es muy importante usar el anti MPO junto con anticuerpos contra por ejemplo CD3 CD79a y la desoxinucleotidil transferasa terminal TdT en la evaluaci n inmunohistoqu mica de leucemias agudas 2 3 Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHQ para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Interpretaci n de la tinci n y 9 Limitaciones generales El anticuerpo policlonal de conejo listo para su uso se suministra en forma l quida en un tamp n que contiene prote na estabilizadora y 0 015 mol L2. de Nana Mieloperoxidasa aislada de leucocitos polimorfonucleares humanos El anticuerpo reacciona con mieloperoxidasa humana En inmunoelectroforesis cruzada usando 12 5 uL de anticuerpo concentrado por cm de rea de gel frente a 2 uL de mieloperoxidasa s lo aparece un precipitado correspondiente a la mieloperoxidasa Tinci n Tinci n espec fica para peroxidasa Con 2 uL de plasma humano no aparece ning n precipitado Tinci n Coomassie Brilliant Blue Como es de esperar en am gdala humana fijada con formol e incluida en parafina cuando se utiliza un sistema de visualizaci n sensible basado en estreptavidina biotina el anticuerpo s lo marca escasos granulocitos neutr filos 1 Para usuarios profesionales 2 Este producto contiene azida de sodio NaNs un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura Aunque a las concentraciones presentes en el producto no est clasificada como peligrosa la azida de sodio puede reaccionar con ca er as de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado el producto deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 3 Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 5 La soluci n que no se utilice debe
3. sido preprogramados en el software de los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus utilizando los siguientes protocolos Plantilla del protocolo FLEXRTU2 volumen de dispensado de 200 uL o FLEXRTU3 volumen de dispensado de 300 uL Autoprograma Myelop sin contratinci n o MyelopH con contratinci n El paso Auxiliar debe configurarse a tamp n de enjuague en sesiones de tinci n con lt 10 portaobjetos Para sesiones de tinci n con gt 10 portaobjetos el paso Auxiliar debe configurarse a ninguno Esto garantiza tiempos de lavado similares Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Consulte el Manual del usuario para m s detalles sobre el instrumento correspondiente Si todav a no est n disponibles los protocolos en la plataforma Dako Autostainer utilizada comun quese con el servicio t cnico de Dako Las condiciones ptimas pueden variar seg n la muestra y el m todo de preparaci n y deber n determinarse individualmente en cada laboratorio Si el pat logo encargado de la evaluaci n desea otra intensidad de tinci n se puede solicitar informaci n a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio t cnico para reprogramar el protocolo Verifique que el rendimiento del protocolo ajustado siga siendo v lido confirmando que el patr n de tinci n sea id ntico al descrito en Caracter sticas de resultados Se recomienda la contratinci n en hematoxic
4. cesario pero no suministrado Interpretaci n de la tinci n Caracter sticas de resultados Referencias bibliogr ficas Explicaci n de los s mbolos Cortes incluidos en parafina se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido fijados en formol e incluidos en parafina siguiendo el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 para Dako PT Link Siga el procedimiento previo al tratamiento explicado en el prospecto de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8010 K8004 Nota Despu s de la tinci n se deben deshidratar enjuagar y montar los cortes usando un medio de montaje permanente Cortes desparafinados se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados fijados en formol e incluidos en parafina usando Dako PT Link y siguiendo el mismo procedimiento descrito para los cortes incluidos en parafina Tras la tinci n los portaobjetos deben montarse utilizando un medio de montaje acuoso o permanente Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda el uso de FLEX IHC Microscope Slides n de cat logo K8020 El sistema de visualizaci n recomendado es EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8010 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han
5. foma o leucemia linfobl sticas leucemia linfoc tica cr nica leucemia de c lulas peludas linfoma no Hodgkin o de c lulas T o B ni enfermedad de Hodgkin 1 1 Pinkus GS Pinkus Jl Myeloperoxidase A specific marker for myeloid cells in paraffin sections Mod Pathol 1991 4 733 2 Arber DA Snyder DS Fine M Dagis A Niland J Slovak ML Myeloperoxidase immunoreactivity in adult acute lymphoblastic leukemia Am J Clin Pathol 2001 116 25 33 3 Kimura S Ikeda Saito M Human myeloperoxidase and thyroid peroxidase two enzymes with separate and distinct physiological functions are evolutionarily related members of the same gene family Proteins 1988 3 113 20 4 Weil SC Rosner GL Reid MS Chisholm RL Lemons RS Swanson MS et al Translocation and rearrangement of myeloperoxidase gene in acute promyelocytic leukemia Science 1988 240 790 2 5 Lanza F Clinical manifestation of myeloperoxidase deficiency J Mol Med 1998 76 676 81 O Ai C Limitaci n de temperatura Fecha de caducidad ao m dico para occ eps suficiente para lt n gt Fabricante _ diagn stico n vitro in vitro ensayos Al 118213 002 18511 ES MN1 2009 12 04 p g 2 2 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
6. ilina usando EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus K8018 Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente Los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente El control positivo de tejido debe incluir am gdala e h gado y las c lulas estructuras deben exhibir patrones de reacci n como se describe para este tejido en Caracter sticas de resultados en todas las muestras positivas El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo 15600 El patr n de tinci n celular es citoplasm tico Tejidos normales El anticuerpo marca fuertemente las c lulas mieloides en todas las etapas madurativas Las c lulas de derivaci n monoc tica revelan reactividad variable y t picamente muestran una reacci n positiva d bil o nula Los precursores eritroides los megacariocitos las c lulas linfoides las c lulas plasm ticas las c lulas dendr ticas del ret culo los mastocitos y los vasos sangu neos son negativos Algunos histiocitos se marcan posiblemente debido a material fagocitado 1 Tejidos anormales El anti mieloperoxidasa marca los mieloblastos y las c lulas mieloides inmaduras de leucemia miel gena aguda leucemia progranuloc tica leucemia monomieloc tica eritroleucemia y mieloblastoma 1 Este anticuerpo no marca c lulas de lin
7. r desecharse de acuerdo con las normativas locales provinciales y nacionales S Almacenar a 2 8 C No utilizar despu s de la fecha de caducidad impresa en el vial Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas el usuario deber comprobar dichas condiciones No existen signos evidentes que indiquen inestabilidad de este producto Por lo tanto los controles positivo y negativo deber n analizarse de manera simult nea con las muestras del paciente En caso de observarse una coloraci n inesperada que no puede ser explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospeche un problema con el anticuerpo comun quese con la asistencia t cnica de Dako El anticuerpo puede utilizarse para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Las muestras de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 um Se requiere el tratamiento previo con recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER usando Dako PT Link n de cat logo PT100 PT101 Para m s detalles consulte la Gu a del usuario de PT Link Se obtienen resultados ptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8010 K8004 18511 ES MN1 2009 12 04 p g 1 2 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Procedimiento de tinci n incluido material ne
8. y Uso previsto Resumen y explicaci n Reactivo suministrado Inmun geno Especificidad Precauciones Almacenamiento Preparaci n de las muestras incluido material necesario pero no suministrado 118213 002 C FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human Myeloperoxidase Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus N de cat logo 18511 Para uso en diagn stico in vitro FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human Myeloperoxidase Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est indicado para su uso en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus El anticuerpo marca las c lulas positivas para mieloperoxidasa en tejidos normales y neopl sicos y es til para diferenciar trastornos linfoides de trastornos mieloides Un resultado positivo ayuda en la clasificaci n de tejido neopl sico p ej mieloblastos y c lulas mieloides inmaduras de leucemia miel gena aguda leucemia progranuloc tica leucemia monomieloc tica eritroleucemia y mieloblastoma 1 La interpretaci n cl nica de los resultados de cualquier tinci n o su ausencia debe complementarse con estudios morfol gicos con controles adecuados y debe evaluarla un pat logo calificado dentro del contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas La mieloperoxidasa MPO est compuesta por dos subunidades de 55 60 kDa y dos de 10 15 kDa 3 Es un componente importante de los gr nulos
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