LIAISON® Mycoplasma pneumoniae IgG (REF
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1. Cuando se obtiene un resultado negativo para IgG es necesario diferenciar entre ausencia de infecci n e infecci n aguda mediante una segunda recogida Cuando se obtiene un resultado positivo para IgG es necesario diferenciar entre infecci n pasada e infecci n aguda mediante una segunda recogida Un aumento significativo del orden de tres veces o m s de la concentraci n de IgG anti Mycoplasma pneumoniae entre dos recogidas sucesivas se considera indicativo de infecci n aguda o reinfecci n tambi n en ausencia de lgM Un valor estable o disminuido de la concentraci n de IgG anti Mycoplasma pneumoniae en ausencia de IgM o en presencia de niveles bajos de IgM puede indicar infecci n reciente o pasada Las siguientes diferencias entre ensayos de muestras en pares se consideran significativas Cuando como m nimo una de las muestras en pares se vuelve positiva para IgG Cuando las concentraciones de IgG aumentan como m nimo tres veces en recogidas sucesivas como sugieren los resultados cl nicos que figuran en el 815 5 13 3 Interpretaci n de los resultados combinados para IgG e IgM obtenidos en muestras individuales Resultado para IgG Resultado para IgM Interpretaci n de los resultados Ausencia de infecci n Un resultado negativo para anticuerpos IgM anti Mycoplasma pneumoniae indica generalmente que no se ha desarrollado una infecci n pero no negativo negativo excluye con seguridad la posibilidad de una2. fiables Cada laboratorio es responsable de adoptar l mites diferentes para cumplir exigencias espec ficas 3 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro Los controles no son espec ficos de un lote y pueden intercambiarse sin problema con lotes diferentes de integral de reactivos Todos los materiales utilizados para elaborar los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivos a la presencia de HBsAg anti VHC anti VIH 1 y anti VIH 2 Sin embargo dado que ning n m todo de an lisis puede garantizar totalmente la ausencia de agentes pat genos todo el material de origen humano deber considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal Adopte las precauciones necesarias para manipular los reactivos de laboratorio Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentaci n local 4 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo No utilice la pipeta con la boca Evite el contacto directo con todo material potencialmente infeccioso mediante el uso de indumentaria protectora como batas de laboratorio gafas protectoras y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite las salpicaduras y la formaci n de aerosoles El reactivo vertido debe limpiarse con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso Todas la
3. 2 1 6 0 13 2 Coeficiente de variaci n 8 1 10 3 9 2 11 5 8 0 Valor m nimo UA mL 2 7 2 1 20 0 39 0 147 0 Valor m ximo UA mL 3 6 3 0 27 0 61 0 200 0 LOTE Ne 03 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 2 8 2 3 24 8 58 2 187 0 Desviaci n est ndar UA mL 0 2 0 2 2 1 3 9 10 0 Coeficiente de variaci n 6 9 10 5 8 3 6 8 5 4 Valor m nimo UA mL 2 4 1 7 21 0 52 0 165 0 Valor m ximo UA mL 3 2 2 6 29 0 66 0 200 0 Coeficiente de variaci n entre lotes 4 5 6 0 4 7 7 2 6 5 Reproducibilidad Sitio 2 A B E C D LOTE Ne 01 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 2 8 2 3 22 6 49 2 156 3 Desviaci n est ndar UA mL 0 3 0 2 1 4 3 2 9 4 Coeficiente de variaci n 9 4 7 1 6 2 6 5 6 0 Valor m nimo UA mL 2 4 2 1 19 0 43 0 144 0 Valor m ximo UA mL 3 7 2 8 26 0 57 0 188 0 LOTE Ne 02 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 3 0 2 4 24 4 52 4 163 2 Desviaci n est ndar UA mL 0 3 0 1 1 0 1 9 5 3 Coeficiente de variaci n 1 4 4 2 4 0 3 6 3 2 Valor m nimo UA mL 2 7 2 2 23 0 48 0 151 0 Valor m ximo UA mL 4 3 2 6 26 0 55 0 173 0 LOTE Ne 03 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 3 2 2 6 27 9 63 2 191 4 Desviaci n est ndar UA mL 0 1 0 1 1 0 3 3 6 6 Coeficiente de variaci n 3 4 4 8 3 5 5 2 3 4 Valor m nimo UA mL 3 1 2 4 25 0 57 0 178 0 Valor m ximo UA mL 3 5 2 9 29 0 74 0 200 0 Coeficiente de variaci n entre lotes 4 0 1 2 1 0 1 4 1 2 Mycopl G e
4. Y PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro Todas las unidades de suero y plasma utilizadas para elaborar los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivas a la presencia de HBsAg anti VHC anti VIH 1 y anti VIH 2 Sin embargo dado que ning n m todo de an lisis puede garantizar totalmente la ausencia de agentes pat genos todo el material de origen humano deber considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal 6 NORMAS DE SEGURIDAD No coma beba fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo No utilice la pipeta con la boca Evite el contacto directo con todo material potencialmente infeccioso mediante el uso de indumentaria protectora como batas de laboratorio gafas protectoras y guantes desechables L vese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo Evite las salpicaduras y la formaci n de aerosoles El reactivo vertido debe limpiarse con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso Todas las muestras los reactivos biol gicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmisores de agentes infecciosos Por consiguiente su eliminaci n debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio as como con las leyes vigentes en cada pa s Asimismo es preciso incinerar los materiales des
5. digo de barras orientada a la izquierda y espere 30 minutos antes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden por completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo LIAISON XL Analyzer LIAISONS XL Analyzer incorpora un dispositivo magn tico que favorece la dispersi n de las micropart culas antes de colocar un integral de reactivos en el rea de reactivos del analizador Consulte los detalles en el manual del usuario del analizador a Coloque el integral de reactivos en la ranura espec fica b Deje el integral de reactivos en el dispositivo magn tico durante al menos 30 segundos varios minutos como m ximo Si es necesario repita la operaci n Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta orientada a la izquierda y espere 15 minutos antes de utilizarlo Las part culas magn ticas se agitan autom ticamente y se resuspenden por completo en el analizador Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo CONTROLES Para preparar y manipular los controles correctamente consulte las instrucciones incluidas con el juego de controles LIAISON9 Mycoplasma pneumoniae IgG 8 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL REACTIVO Sellado Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad Abierto en el instrumento o a 2 8 C Estabilidad
6. ficos caracterizados por malestar general mialgia dolor de garganta cefalea y s ntomas en aumento en el aparato respiratorio durante un per odo de uno a cinco d as La tos es t picamente seca opresiva y algunas veces parox stica y puede convertirse en una caracter stica del cuadro cl nico Los signos f sicos como las crepitaciones pulmonares durante la inspiraci n a menudo no son aparentes hasta que los ex menes radiogr ficos evidencian la presencia de una neumon a El curso de la enfermedad es variable pero la tos y los s ntomas debidos al aparato respiratorio y las alteraciones radiogr ficas pueden persistir durante varias semanas Los ni os est n sujetos a infecciones m s frecuentes que los adultos el desarrollo de complicaciones tambi n est influido por la edad 3 La enfermedad generalmente se limita al aparato respiratorio Las manifestaciones extrapulmonares incluyen s ndrome de Stevens Johnson y otros eritemas artralgia meningitis o encefalitis y otras complicaciones neurol gicas miocarditis y pericarditis El Mycoplasma pneumoniae est provisto de una estructura especializada en una o en ambas extremidades mediante la cual los microorganismos se enganchan a la superficie de la mucosa del aparato respiratorio y se hacen completamente resistentes a los antibi ticos que act an sobre la s ntesis de la pared celular bacteriana como la penicilina La estructura del Mycoplasma pneumoniae se caracteriza por dos p
7. rangos esperados LIAISONP Analyzer Los valores de los calibradores est n almacenados en los c digos de barras de la etiqueta del integral LIA SONS XL Analyzer Los valores de los calibradores est n almacenados en la etiqueta de identificaci n por radiofrecuencia RFID 11 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Para obtener resultados correctos es preciso respetar estrictamente las instrucciones proporcionadas en el manual del analizador LIAISON Analyzer Cada par metro del test se identifica mediante el c digo de barras incluido en la etiqueta del integral de reactivos Si el c digo de barras no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISONS XL Analyzer Cada par metro del test se identifica mediante la informaci n codificada en la etiqueta de identificaci n por radiofrecuencia RFID del integral de reactivos Si la etiqueta no se puede leer no ser posible usar el integral y tendr que desecharse Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Las operaciones del analizador son las siguientes Dispensaci n de los calibradores los controles o las muestras en el m dulo de reacci n Distribuye el diluyente de muestras y las part culas magn ticas recubiertas Incubaci n Lavado con l quido de lavado l quido del sistema Dispen
8. 29 1 47 9 2 92 33 8 15 4 Efecto saturaci n con altas concentraciones Cuando se analizan muestras que contienen concentraciones de anticuerpos extremadamente elevadas se pueden obtener concentraciones inferiores a las reales por efecto de la saturaci n Sin embargo mediante un sistema bien optimizado con dos incubaciones se excluye la posibilidad de obtener resultados por debajo de su valor porque la se al anal tica permanece siempre elevada curva a saturaci n El an lisis de tres muestras positivas para IgG anti Mycoplasma pneumoniae de alta concentraci n permiti evaluar el efecto de saturaci n Todas las muestras arrojaron valores de concentraci n elevados conforme a lo previsto lo que indica que la clasificaci n de las muestras es correcta 15 5 Especificidad y sensibilidad diagn sticas La especificidad y la sensibilidad diagn sticas han sido evaluadas analizando 465 muestras pertenecientes a una poblaci n con signos y s ntomas de neumon a at pica precedentes de distintos laboratorios Las muestras tambi n han sido examinadas con un m todo ELISA de referencia y se han empleado la regla del consenso general y los datos serol gicos para establecer los resultados esperados respecto a las muestras discrepantes 46 465 Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Concordancia con el m todo de refe
9. AISON Control Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317021 49 49 ES 200 007 940 02 2012 12
10. DiaSorin Ireland Ltd H Unit 13 14 Holly Avenue Stillorgan Industrial Park Blackrock B otr n Co Dublin Ireland C www diasorin com Modificaciones nueva direcci n de DiaSorin Ireland Ltd Supresiones LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 1 FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG emplea la tecnolog a de inmunoensayo quimioluminiscente CLIA para la determinaci n semicuantitativa de anticuerpos IgG espec ficos contra el Mycoplasma pneumoniae en muestras de suero o plasma humano El ensayo debe realizarse en la serie de analizadores LIAISON 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST Los micoplasmas son los organismos m s peque os que existen capaces de crecer en medios de cultivo acelulares Infectan a los hombres los animales las plantas los insectos y se observan en las aguas residuales El nombre micoplasma deriva de la apariencia fungiforme de los organismos y de la plasticidad de la membrana externa que causa pleomorfismo Las neumon as definidas tambi n como neumon as contra das en comunidad community acquired pneumonias CAP se dividen en t picas y at picas seg n los s ntomas y signos cl nicos El agente etiol gico de las primeras es el Streptococcus pneumoniae mientras que las ltimas pueden transmitirse por Mycoplasma pneumoniae Chlamydia pneumoniae o Legionella pneumophila 5 La infecci n es ubiquitaria y por lo general es end mica con signos inespec
11. aciones de analito espec fico Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad interna se analizaron veinte r plicas en la misma serie Repetibilidad A B E C D N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 2 2 4 8 18 5 47 0 168 4 Desviaci n est ndar UA mL 0 1 0 2 0 7 1 9 13 3 Coeficiente de variaci n 4 5 4 7 3 9 4 1 7 9 Valor m nimo UA mL 2 1 4 0 17 0 43 0 128 0 Valor m ximo UA mL 2 5 5 2 19 0 51 0 186 0 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte replicados en d as diferentes a lo sumo dos sesiones anal ticas al d a utilizando tres lotes diferentes de integral Las pruebas se realizaron en dos sitios internamente sitio 1 y en un laboratorio independiente sitio 2 con dos instrumentos diferentes Reproducibilidad Sitio 1 A B E C D LOTE Ne 01 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 3 0 2 56 22 7 52 1 171 4 Desviaci n est ndar UA mL 0 2 0 3 2 0 5 1 9 7 Coeficiente de variaci n 8 0 12 5 8 9 9 8 5 Valor m nimo UA mL 2 8 2 2 19 0 42 0 153 0 Valor m ximo UA mL 3 6 3 4 26 0 62 0 190 0 LOTE Ne 02 N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 2 9 2 4 23 2 51 0 164 9 Desviaci n est ndar UA mL 0 2 0 2
12. alb mina s rica bovina tamp n 2 5 mL fosfato EDTA detergentes 0 2 ProClin9 300 y un colorante azul inactivo Las concentraciones de los calibradores UA mL son calibradas contra una preparaci n interna de anticuerpos Diluyente de muestras 28 mL Alb mina s rica bovina tamp n fosfato 0 2 ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo Conjugado Anticuerpos monoclonales de rat n anti IgG humana conjugados con un derivado de isoluminol 13 5 mL alb mina s rica bovina tamp n fosfato 0 2 de ProClin 300 conservantes y colorante azul inactivo N mero de ensayos 50 Todos los reactivos se suministran listos para su uso El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos Materiales requeridos pero no suministrados LIAISON S XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISONS XL Cuvettes REF X0016 LIAISON Module REF 319130 LIAISONS XL Disposable Tips REF X0015 LIAISON XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Starter Kit REF 319102 o LIAISONY XL Starter Kit REF 319200 LIAISON Light Check REF 319101 LIAISON9 Wash System Liquid REF 319100 LIAISONS Wash System Liquid REF 319100 LIAISON9 XL Waste Bags REF X0025 LIAISON9 Waste Bags REF 450003 LIAISON Cleaning Kit REF 310990 Otros materiales requeridos Controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG negativo y positivo REF 317021 5 ADVERTENCIAS
13. ar la fiabilidad de los ensayos No se han establecido las caracter sticas del m todo de los controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG en relaci n con otros ensayos o plataformas de instrumentos LIAISON Analyzer En el certificado de an lisis se proporciona informaci n espec fica sobre el lote de los controles que debe introducirse manualmente en el software del analizador antes de colocar los frascos de los controles Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador LIAISON XL Analyzer Los c digos de barras del certificado de an lisis contienen informaci n espec fica sobre el lote de los controles Esta informaci n debe leerse con el lector manual de c digo de barras del LIAISON XL Analyzer antes de introducir los frascos de los controles Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador 2 MATERIALES SUMINISTRADOS Control negativo 2 x 0 5 mL Suero plasma humano no reactivo para anticuerpos IgG anti Mycoplasma pneumoniae 0 2 de ProClin 300 y conservantes Control positivo 2 x 0 5 mL Suero plasma humano reactivo para IgG anti Mycoplasma pneumoniae 0 2 ProClin 300 conservantes y un colorante amarillo inactivo Todos los reactivos se suministran listos para su uso El intervalo de las concentraciones para cada control est impreso en el certificado de an lisis e indica los l mites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test
14. cluye con seguridad la posibilidad de una infecci n aguda por Mycoplasma pneumoniae porque la infecci n puede estar en una fase muy precoz y el paciente puede no haber sintetizado todav a los anticuerpos espec ficos de clase IgG anti Mycoplasma pneumoniae o bien porque los niveles de anticuerpos no se pueden determinar Hay que se alar que las pruebas dan negativo durante las primeras semanas despu s de contraer la enfermedad Si se sospecha que el paciente haya estado expuesto a Mycoplasma pneumoniae aunque el ensayo de los anticuerpos sea negativo habr que recoger y analizar una segunda muestra para IgM e IgG dos o cuatro semanas m s tarde y ensayarla paralelamente a la primera muestra lt 10 negativo Probable infecci n aguda o pasada Un resultado positivo para anticuerpos IgG anti Mycoplasma pneumoniae indica generalmente una infecci n pasada Sin embargo una nica 10 positivo muestra s lo puede ayudar a valorar el estado serol gico del sujeto Analizar una segunda muestra para IgM e IgG recogida de dos a cuatro semanas m s tarde y ensayarla paralelamente a la primera muestra 13 2 Interpretaci n de los resultados obtenidos en muestras en pares Los niveles de IgM e IgG deben analizarse paralelamente Es necesario recoger y analizar una segunda muestra para IgM e IgG dos o cuatro semanas m s tarde con independencia del resultado obtenido para el ensayo de la IgG anti Mycoplasma pneumoniae En especial
15. do consideradas negativas en ambos ensayos ya que todas las muestras en pares han resultado negativas Dieciocho de 49 muestras en pares 36 7 han sido consideradas en ambos ensayos como infecci n en curso puesto que se ha observado un aumento de las concentraciones de IgG de como m nimo tres veces entre recogidas sucesivas intervalo de concentraciones de 3 3 a 210 AU mL media 33 AU mL y al menos una de las muestras en pares era positiva Siete de 49 muestras en pares 14 3 han sido consideradas en ambos ensayos como infecci n pasada ya que ambas muestras en pares eran positivas intervalo de concentraciones de 0 07 a 1 25 AU mL media 1 05 AU mL Una de 49 muestras en pares ha sido considerada negativa por el ensayo EIA y como infecci n pasada por el ensayo LIAISON ya que ambas muestras en pares eran positivas concentraci n 1 2 AU mL Ambos ensayos han clasificado el resultado como ausencia de infecci n Una de 49 muestras en pares ha sido considerada negativa por el ensayo LIAISON y como infecci n pasada por el ensayo EIA Ambos ensayos han clasificado el resultado como ausencia de infecci n Mycopl G es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 47 49 ES 200 007 940 02 2012 12 LIAISON Control Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317021 1 FINALIDAD DEL ENSAYO Los controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG negativo y positivo se utilizan en los inmunoensayos quimioluminiscentes CLIA para verific
16. echables y descontaminar los residuos l quidos con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 concentraci n final durante al menos media hora Los materiales que puedan volver a utilizarse tendr n que esterilizarse en autoclave empleando un procedimiento de extraordinaria capacidad descontaminante USP 24 2000 p 2143 Aunque la aplicaci n de un ciclo de descontaminaci n de una hora a 121 C suele considerarse adecuado el usuario debe verificar su eficacia mediante una prueba inicial y el uso peri dico de indicadores biol gicos Los reactivos que contienen ProClin 300 est n catalogados como sustancias irritantes en las Directivas Europeas pertinentes R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos Mycopl G es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 41 49 ES 200 007 940 02 2012 12 7 PREPARACI N DE LOS REACTIVOS INTEGRAL DE REACTIVOS Para manipular los reactivos es preciso adoptar una serie de precauciones importantes Resuspensi n de las part culas magn ticas Las part culas magn ticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento Realice los pasos indicados a continuaci n para garantizar la suspensi n completa de las part culas Antes de quitar el precinto gire la rueda peque a del compartiment
17. infecci n Los adultos que han sido infectados repetidamente durante un per odo de varios a os pueden no presentar una fuerte respuesta inmune de tipo IgM a los ant genos micopl smicos Analizar una segunda muestra recogida de dos a cuatro semanas m s tarde negativo o positivo positivo paralelamente a la primera muestra positivo negativo Analizar una segunda muestra recogida de dos a cuatro semanas m s tarde paralelamente a la primera muestra Mycopl G es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 44 49 ES 200 007 940 02 2012 12 14 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO No se han precisado las caracter sticas del m todo de ensayo para casos en los que la prueba de Mycoplasma pneumoniae LIAISON se utiliza junto con ensayos de otros fabricantes para detectar los marcadores serol gicos espec ficos del Mycoplasma pneumoniae En este caso los usuarios son responsables de establecer sus propias caracter sticas Para obtener resultados fiables es necesario utilizar una t cnica especializada y seguir estrictamente las instrucciones La contaminaci n bacteriana o la inactivaci n por calentamiento pueden repercutir en los resultados del test Este test es adecuado s lo para el an lisis de muestras individuales y no para pools combinaciones de muestras Los resultados del test se muestran de manera semicuantitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos IgG anti Mycoplasma p
18. limine las burbujas de aire que pueda haber antes del ensayo Si el ensayo se lleva a cabo dentro de los ocho d as sucesivos a la recogida las muestras se pueden conservar a 2 8 C En caso contrario se deben subdividir en al cuotas congeladas a 20 C o a temperaturas inferiores Si las muestras han sido descongeladas ag telas con cuidado antes de realizar el ensayo Diez muestras de diferente reactividad se han guardado durante ocho d as a 2 8 C y diez muestras se han sometido a cinco ciclos de congelaci n y descongelaci n Los resultados no han presentado diferencias significativas El volumen m nimo de muestra necesario para una determinaci n es 170 uL 20 uL de muestra 150 uL de volumen muerto Mycopl G es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 42 49 ES 200 007 940 02 2012 12 10 CALIBRACI N La prueba de los calibradores espec ficos del ensayo permite utilizar los valores RLU unidades relativas de luz detectados para ajustar la curva maestra asignada Con cada soluci n de los calibradores se pueden realizar cuatro calibraciones La calibraci n debe realizarse por triplicado cada vez que se verifique al menos una de las siguientes condiciones Se usa un nuevo lote de reactivos Starter La calibraci n anterior fue realizada m s de cuatro semanas antes Se usa un nuevo lote de integral reactivo El analizador ha recibido asistencia t cnica Los valores de control est n fuera de los
19. m nima seis semanas Si los controles permanecen dentro de los rangos previstos se puede seguir usando el integral despu s de este intervalo de tiempo Use siempre el mismo LIAISON Analyzer con el integral de reactivos abierto Use las gradillas suministradas con el LIAISON Analyzer para mantener el integral en posici n vertical No lo congele Mantenga el integral reactivo en posici n vertical mientras est guardado para garantizar una adecuada resuspensi n de las part culas magn ticas Evite su exposici n a luz directa 9 RECOGIDA Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano incluido el suero recogido con tubos para la separaci n del suero Se pueden utilizar anticoagulantes como el citrato s dico el EDTA pot sico y la heparina s dica En el ensayo es fundamental utilizar el tipo adecuado de muestra Recoja la sangre de forma as ptica mediante punci n venosa d jela coagular y separe el suero del co gulo lo antes posible Al utilizar recipientes para la recogida y la separaci n del plasma con gel siga al pie de la letra las instrucciones del fabricante Antes del ensayo clarifique por filtraci n o centrifugaci n las muestras que presenten material en suspensi n opalescencia lipemia o residuos eritrocitarios No use muestras fuertemente hemolizadas o lip micas ni muestras que contengan part culas o presenten contaminaci n microbiana evidente E
20. n sido infectados repetidamente durante un per odo de varios a os pueden no presentar una fuerte respuesta inmune de tipo IgM a los ant genos micopl smicos 9 En estos casos la reinfecci n origina directamente una respuesta de tipo IgG por lo tanto encontrar un ensayo negativo para IgM no excluye con seguridad una infecci n aguda Cuando se observa una respuesta de tipo IgM sta puede persistir durante meses o a os despu s de la infecci n En estos casos el hallazgo de un ensayo positivo para IgM no significa necesariamente una infecci n en curso o reciente Se ha demostrado que la determinaci n de los anticuerpos IgG es necesaria puesto que los pacientes pueden no presentar una respuesta inmunitaria de tipo IgM o IgA 11 La respuesta de tipo IgG es la ltima en el tiempo y los niveles de IgG permanecen elevados durante como m nimo un a o despu s de la infecci n 3 PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO El m todo de determinaci n semicuantitativa de anticuerpos IgG espec ficos frente al Mycoplasma pneumoniae es el inmunoensayo indirecto mediante quimioluminiscencia CLIA de tipo s ndwich Un ant geno recombinante de elevada especificidad y sensibilidad se usa para recubrir las part culas magn ticas fase s lida y un anticuerpo monoclonal de rat n anti IgG humana est enlazado a un derivado del isoluminol conjugado anticuerpo isoluminol Si est n presentes en los calibradores en las muestras o en los controles los anticuerpos c
21. neumoniae Sin embargo el diagn stico de una enfermedad infecciosa no debe basarse en el resultado de un solo ensayo sino que debe estar respaldado por otras pruebas cl nicas otros procedimientos diagn sticos y la opini n del m dico Las muestras de los pacientes tratados con preparados de anticuerpos monoclonales de rat n para terapia o diagn stico pueden contener anticuerpos humanos anti rat n HAMA Como estas muestras pueden interferir en un ensayo inmunol gico basado en el uso de anticuerpos monoclonales sus resultados deben examinarse minuciosamente Los integrales no deben utilizarse con los dos tipos de analizadores LIAISON Y y LIAISON XL Una vez que se ha usado un integral con un tipo de analizador concreto debe seguir us ndose en ese analizador hasta que se termine Por motivos de trazabilidad relacionados con lo antes expuesto es necesario terminar el seguimiento de los pacientes con el mismo tipo de analizador Los seguimientos deben realizarse un nico tipo de analizador LIAISONY o LIAISON XL 15 PRESTACIONES METODOL GICAS DEL KIT 15 1 Especificidad anal tica La especificidad anal tica se define como la capacidad del ensayo para detectar analitos espec ficos en presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra por ejemplo anticoagulantes hemolisis efectos de tratamientos de la muestra o de anticuerpos de reactividad cruzada Interferencia Estudios controlados sobre los fact
22. o de part culas magn ticas hasta que la suspensi n adopte un color marr n Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para facilitar la suspensi n de las part culas magn ticas evite la formaci n de espuma Controle visualmente el fondo del contenedor de las part culas magn ticas para cerciorarse de que no hayan quedado part culas magn ticas sedimentadas Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el l quido residual Si es necesario repita el procedimiento hasta que las part culas magn ticas est n completamente resuspendidas Formaci n de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral se recomienda evitar la formaci n de espuma en los reactivos Respete las recomendaciones siguientes Antes de usar el integral controle visualmente los reactivos y en especial los calibradores segunda y tercera posici n despu s del contenedor de part culas magn ticas para asegurarse de que no se ha formado espuma Si se observa la presencia de espuma tras la resuspensi n de las part culas magn ticas coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma El integral est listo para el uso una vez que se ha disuelto la espuma que ha permanecido en el instrumento y que se ha agitado Instalaci n del integral en el rea de reactivos LIAISON Analyzer Coloque el integral en el rea de reactivos del analizador con la etiqueta de c
23. ontra el Mycoplasma pneumoniae se unen a la fase s lida durante la primera incubaci n Durante la segunda incubaci n el anticuerpo conjugado reacciona con cualquier anticuerpo IgG humano al Mycoplasma pneumoniae unido a la fase s lida El material no unido se elimina mediante un ciclo de lavado despu s de cada incubaci n A continuaci n se a aden los reactivos Starter que inducen una reacci n de quimioluminiscencia instant nea La se al luminosa y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo isoluminol se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz RLU e indica la presencia o la ausencia de anticuerpos IgG contra el Mycoplasma pneumoniae en los calibradores las muestras o los controles Mycopl G es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 40 49 ES 200 007 940 02 2012 12 4 MATERIALES SUMINISTRADOS Integral de reactivos Part culas magn ticas 1 6 mL Part culas magn ticas recubiertas con p ptido P1 obtenido en E coli alb mina s rica bovina tamp n PBS lt 0 1 de azida s dica Calibrador 1 Suero plasma humano no reactivo para IgG anti Mycoplasma pneumoniae alb mina s rica bovina tamp n 2 5 mL fosfato EDTA detergentes 0 2 ProClin 300 y un colorante amarillo inactivo Las concentraciones de los calibradores UA mL son calibradas contra una preparaci n interna de anticuerpos Calibrador 2 Suero plasma humano reactivo para IgG anti Mycoplasma pneumoniae
24. ores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones del test no est n influenciadas por anticoagulantes citrato s dico EDTA pot sico heparina s dica hemolisis hasta 1000 mg dL de hemoglobina lipemia hasta 3000 mg dL de triglic ridos bilirrubinemia hasta 20 mg dL de bilirrubina alobuminemia hasta 5 0 g dL de alb mina Los resultados no se modifican tras cinco ciclos de congelaci n y descongelaci n de las muestras Reacciones cruzadas Las reacciones cruzadas del ensayo LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG se estudiaron para evaluar las interferencias potenciales por parte de anticuerpos dirigidos contra otros organismos que pueden causar s ntomas cl nicos similares a los de una infecci n por Mycoplasma pneumoniae adenovirus virus de la gripe A y B virus de la parainfluenza virus respiratorio sincitial Bordetella pertussis Chlamydia pneumoniae Legionella pneumophila por parte de anticuerpos dirigidos contra otros organismos vectores de enfermedades infecciosas hCMV parvovirus B19 VZV Toxoplasma gondii Treponema pallidum as como tambi n por parte de otras condiciones que derivan de una actividad at pica del sistema inmunitario autoanticuerpos anti nucleares factor reumatoide anticuerpos humanos anti rat n HAMA human anti mouse antibodies Las muestras utilizadas en estos estudios se seleccionaron previamente mediante el uso de otro ensayo de IgG anti Mycoplasma pneumoniae comercializado Las m
25. os Mycopl G es fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 43 49 ES 200 007 940 02 2012 12 13 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS El analizador calcula autom ticamente los niveles de IgG contra el Mycoplasma pneumoniae expresados en unidades arbitrarias AU mL y clasifica los resultados Para obtener informaci n detallada consulte el manual del analizador Aunque los calibradores y los controles pueden generar resultados de RLU o dosis distintos en LIAISON y LIAISONY XL los resultados de los pacientes son equivalentes Intervalo del ensayo De 0 1 a 200 AU mL de IgG anti Mycoplasma pneumoniae 13 1 Interpretaci n de los resultados obtenidos en muestras individuales El ensayo de IgG e IgM es indispensable para una interpretaci n fiable de los resultados El valor de corte que discrimina entre la presencia y la ausencia de anticuerpos IgG anti Mycoplasma pneumoniae es 10 AU mL Los resultados de las muestras deben interpretarse como sigue Las muestras con concentraciones de IgG anti Mycoplasma pneumoniae por debajo de 10 AU mL se deben considerar negativas Las muestras con concentraciones de IgG anti Mycoplasma pneumoniae iguales o por encima de 10 UA mL se deben considerar positivas IgG UA mL Clasificaci n Interpretaci n de los resultados Ausencia de infecci n Un resultado negativo para anticuerpos IgG anti Mycoplasma pneumoniae indica generalmente que no se ha desarrollado una infecci n pero no ex
26. rencia Concordancia para los resultados positivos 92 3 96 104 intervalo de confianza al 95 85 4 96 6 Concordancia para los resultados negativos 89 5 323 361 intervalo de confianza al 95 85 8 92 4 Concordancia general 90 1 419 465 intervalo de confianza al 95 87 0 92 7 Resultados despu s de consenso En la poblaci n presumiblemente negativa estudiada cuatro muestras han resultado positivas y 323 muestras han resultado negativas especificidad diagn stica 98 8 323 327 intervalo de confianza al 95 95 5 98 6 En la poblaci n presumiblemente positiva estudiada ocho muestras han resultado negativas y 130 muestras han resultado positivas sensibilidad diagn stica 94 2 130 138 intervalo de confianza al 95 88 9 97 4 Resultados para muestras en pares Adem s se han analizado 49 muestras en pares recogidas con un lapso de tiempo de como m nimo dos semanas de pacientes con infecciones recientes de Mycoplasma pneumoniae Las muestras se han clasificado usando LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG y un m todo EIA comercializado para la detecci n de IgG anti Mycoplasma pneumoniae La concordancia diagn stica en muestras en pares ha sido del 95 9 47 49 intervalo de confianza al 95 86 0 99 5 Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Catorce de 49 muestras en pares 28 6 han si
27. rote nas de superficie principales P1 adesina de 170 kD y p30 que parece directamente implicada en la uni n a los receptores Como los adultos presentan una fuerte respuesta inmune a la P1 durante la infecci n el gen de la P1 presenta variabilidad antig nica 6 12 Recientemente se ha observado una elevada antigenicidad de la porci n C terminal de la prote na P1 de la cepa FH de Mycoplasma pneumoniae que se utiliza en ambos ensayos LIAISON9 La presencia de anticuerpos espec ficos anti Mycoplasma pneumoniae es el principal indicador para el diagn stico preciso de la enfermedad respiratoria aguda por Mycoplasma pneumoniae Despu s de la infecci n inicial el sistema inmunitario normal responde con la s ntesis r pida de anticuerpos que alcanzan un m ximo entre tres y seis semanas despu s y en seguida disminuyen gradualmente durante meses o a os Como el per odo de incubaci n es largo la respuesta de los anticuerpos a menudo ya es evidente cuando aparece la sintomatolog a 10 El aumento aislado de los niveles de IgM espec fica anti Mycoplasma pneumoniae a menudo puede indicar infecci n aguda dado que los anticuerpos IgM aparecen dentro de una semana despu s de la infecci n inicial y aproximadamente dos semanas antes que los anticuerpos IgG 7 Sin embargo la presencia de IgM se considera significativa sobre todo en la poblaci n pedi trica en la que son menores las ocasiones de infecciones de repetici n Los adultos que ha
28. s fm LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 46 49 ES 200 007 940 02 2012 12 15 3 Precisi n con LIAISON XL Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se emplearon varias muestras con diferentes concentraciones de analito espec fico Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros Repetibilidad Para evaluar la repetibilidad interna se analizaron veinte r plicas en la misma serie pb Control Control Repetibilidad 1 2 3 negativo positivo N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 5 97 19 9 41 7 2 55 28 5 Desviaci n est ndar 0 39 1 2 2 0 0 19 1 2 Coeficiente de variaci n 6 6 6 1 4 3 7 5 4 2 Valor m nimo UA mL 5 32 17 5 37 7 2 27 26 0 Valor m ximo UA mL 6 72 21 9 44 5 3 02 30 1 Reproducibilidad Para evaluar la reproducibilidad interna se han analizado veinte r plicas con un lote de integral en d as diferentes una o dos sesiones anal ticas al d a Di Control Control Reproducibilidad 4 5 6 negativo positivo N mero de determinaciones 20 20 20 20 20 Media UA mL 7 83 23 6 41 6 2 00 25 4 Desviaci n est ndar 0 69 2 7 2 9 0 29 2 9 Coeficiente de variaci n 8 9 11 3 7 0 14 7 11 3 Valor m nimo UA mL 6 50 18 7 37 2 1 54 21 3 Valor m ximo UA mL 8 77
29. s muestras los reactivos biol gicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmisores de agentes infecciosos Por consiguiente su eliminaci n debe efectuarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicci n sobre el laboratorio as como con las leyes vigentes en cada pa s Los reactivos que contienen ProClin 300 est n catalogados como sustancias irritantes en las Directivas Europeas pertinentes R 43 Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 24 Ev tese el contacto con la piel S 37 Usense guantes adecuados S 60 Elim nense el producto y su recipiente como residuos peligrosos 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD Cuando se reciben los controles se deben mantener a 2 8 C en posici n vertical para evitar el contacto de la soluci n con la tapa del frasco No lo congele Si se guardan sin abrir a temperatura de 2 8 C y en posici n vertical los controles permanecen estables hasta la fecha de caducidad Despu s de la apertura los controles son estables durante seis semanas si se conservan refrigerados a 2 8 C entre dos usos sucesivos Evite la contaminaci n bacteriana de los controles Los controles no deben utilizarse despu s de la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos 6 PREPARACI N DE LOS REACTIVOS Coloque los frascos de los controles en las gradillas C del LIAISON Analyzer Con una soluci n de con
30. saci n del conjugado en el m dulo de reacci n Incubaci n Lavado con l quido de lavado l quido del sistema Dispensaci n de los reactivos Starter y medici n de la luz emitida o DOr Oa 12 CONTROL DE CALIDAD Los controles LIAISON deben analizarse individualmente para determinar la eficacia del ensayo En el control de calidad es preciso utilizar los controles LIAISON Mycoplasma pneumoniae IgG a por lo menos una vez cada d a de uso b cuando se usa un nuevo integral de reactivos c cuando se calibra el kit d cuando se usa un nuevo lote de reactivos Starter e para determinar la eficacia del integral reactivo abierto despu s de m s de seis semanas o conforme a lo estipulado en las normas y los requisitos de los reglamentos locales o los organismos acreditados Los valores de control deben permanecer dentro de los rangos previstos Cada vez que el valor de uno o ambos controles no coincida con el rango esperado habr que repetir la calibraci n y evaluar de nuevo los controles Si los valores siguen fuera de rango tras una calibraci n satisfactoria ser preciso repetir la prueba usando un frasco de control sin abrir Los resultados no deben notificarse si los valores de control est n fuera del rango previsto Antes de utilizar otros controles es preciso evaluar su compatibilidad con este ensayo as como establecer los intervalos de valores que se van a aplicar a todos los materiales de control de calidad utilizad
31. trol se pueden realizar al menos 20 pruebas El volumen m nimo de control necesario es 420 uL 20 uL de control 400 uL de volumen muerto En el momento del uso espere hasta que los controles se estabilicen a temperatura ambiente 20 25 C antes de abrir los frascos y d jelos en el instrumento s lo durante el tiempo requerido para realizar la prueba de control de calidad Despu s del uso tape los frascos lo antes posible y mant ngalos a 2 8 C en posici n vertical Durante la manipulaci n de los controles adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminaci n microbiana 7 MANIPULACI N H gase referencia al manual operativo del instrumento para la manipulaci n correcta Mycopl G es fm LIAISON Control Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317021 48 49 ES 200 007 940 02 2012 12 8 VALORES ESPERADOS En el certificado de an lisis se indican los intervalos y valores esperados de concentraci n de IgG anti Mycoplasma pneumoniae en los controles Estos se han establecido considerando la variabilidad de las series anal ticas respecto de la curva maestra del fabricante a fin de garantizar la precisi n de los resultados anal ticos y de obtener indicaciones sobre la estabilidad o el deterioro de los reactivos Si los valores experimentales de los controles est n repetidamente fuera de los intervalos predefinidos con mucha probabilidad el ensayo se ha llevado a cabo de forma incorrecta Mycopl G es fm LI
32. uestras que son negativas para anticuerpos IgG anti Mycoplasma pneumoniae se emplearon en el estudio de reactividad cruzada Para detectar la presencia de reactivos cruzados en las muestras se usaron ensayos que llevan la marca CE Los resultados se refieren a los grupos de muestras analizadas y su precisi n no est garantizada dado que pueden existir diferencias entre laboratorios y centros p i LIAISON resultados Estado cl nico N mero de os negativas entes ta Anticuerpos IgG anti hCMV 6 0 Anticuerpos IgG anti VZV 10 0 Anticuerpos IgG anti parvovirus B19 15 0 Anticuerpos anti adenovirus 9 0 Anticuerpos anti virus de la gripe A y B 9 0 Anticuerpos anti virus de la parainfluenza 4 0 Anticuerpos IgG anti virus respiratorio sincitial RSV 4 0 Anticuerpos IgG anti Bordetella pertussis 7 0 Anticuerpos IgG anti Chlamydia pneumoniae 5 0 Anticuerpos IgG anti Legionella pneumophila 9 0 Anticuerpos IgG anti Toxoplasma gondii 7 0 Anticuerpos anti Treponema pallidum 5 0 Factor reumatoide inmunoglobulinas anti Fc 5 0 Autoanticuerpos anti nucleares ANA 5 0 Anticuerpos humanos anti rat n HAMA 5 0 Total 105 0 Mycopl G es fm LIAISONS Mycoplasma pneumoniae IgG REF 317020 45 49 ES 200 007 940 02 2012 12 15 2 Precisi n con LIAISON Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo es decir las variaciones intra ensayo e inter ensayo se utilizaron muestras con diferentes concentr
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