1.- objetivo 2.- alcance 3.- descripción de la operación
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1. Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis UNIVERSIDAD ez Ami AUT NOMA C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 1 de 19 Luz Ciencia y Verdad E Fecha de modificaci n 7 de Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 1 OBJETIVO Presentar las t cnicas utilizadas en el departamento de uroan lisis as como la manera de reportar los resultados obtenidos 2 ALCANCE Aplica a toda muestra de orina destinada al rea de uroan lisis para su an lisis 3 DESCRIPCI N DE LA OPERACI N POLITICAS PARA EL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS e No se recibir n muestras que no est n previamente etiquetadas en la recepci n ni muestras para la prueba del Examen Toxicol gico que no sean entregados por el qu mico que supervis la recolecci n de la muestra previamente etiquetada marcada con el n mero de solicitud junto con el formato de la cadena de custodia e En caso de que la muestra presente un cultivo deber ser procesada primero en el departamento de microbiolog a e La muestra a analizar deber ser la primera de la ma ana con previo aseo y recolectada por chorro medio e En el caso de personas que presente incontinencia la orina deber permanecer por lo menos 4 horas en la vejiga En el caso de los beb s las muestras pueden obtenerse en bolsas para recolecci n e En caso de muestras de 24 horas deber n ser mantenidas en refrigeraci n ha2. M todo Actualmente el equipo cobas integra realiza la diluci n de la orina por lo que solamente se le proporciona al departamento de bioqu mica cl nica el sobrenadante obtenido del Examen General de Orina Resultados El resultado obtenido de la cuantificaci n se divide entre 100 para la conversi n de mg dL a g L y se registra en el formato F FQUI LAC 09 y en el sistema de captura Cuando se trata de curvas de tolerancia a la glucosa se anota el resultado de las mediciones en el formato F FQUI LAC 09 y se indica el tiempo en que se realizo la medici n CUANTIFICACI N DE PROTE NAS EN ORINA Y PROTE NAS EN ORINA DE 24 HORAS La cuantificaci n se realiza cuando en el EGO o en la cuantificaci n de prote nas de 24 horas se observa un resultado de gt 500 mg dL en el Urisys 2400 En caso de que en la prueba de prote nas de 24 horas no se presente un resultado de lt 300 mg dL o lt 500 mg dL se realiza la prueba como una microalbuminuria En caso de resultados lt de 500 mg dL Urisys 2400 se procede a la confirmaci n de la presencia de las prote nas mediante la t cnica del anillo de Heller Introducci n La orina normal contiene una peque a cantidad de prote na aunque el glom rulo normal bloquea la mayor parte del paso de la alb mina y de las prote nas plasm ticas m s grandes Muy frecuentemente un aumento de 150 mg diarios en la proteinuria refleja un filtrado glomerular de prote na aumentado y producido por d
3. La glucosa los amino cidos y otras sustancias no filtrados se reabsorben en los t bulos proximales dejando la urea el cido rico los fosfatos y otras sustancias en el filtrado F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 e 0 Me 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis 2 VADY es Wn git i SENNIN UNIVERSIDAD OS DE YUCATAN C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 9 de 19 y a e Fecha de modificaci n 7 de Az Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 GLUCOSA EN ORINA CUANTITATIVA Introducci n La presencia de cantidades significativas de glucosa en la orina se denomina glucosuria o glicosuria La cantidad de glucosa que aparece en la orina depende del nivel de glucemia de la velocidad de filtraci n glomerular y del grado de reabsorci n tubular Por lo general no existe glucosa en la orina hasta que el nivel de glucosa en la sangre supere los 160 180 mg dL cifra que es el umbral renal normal para la glucosa Cuando el valor de la glucemia supera el umbral renal los t bulos no pueden reabsorber la glucosa filtrada y se produce glucosuria Su cuantificaci n se realiza cuando en el examen general de orina EGO o en una curva de tolerancia a la glucosa se observa un resultado en el rea de la tira reactiva mayor o igual a 300 mg dL Los resultados obtenidos por debajo de este valor son considerados para su reporte como HUELLAS
4. lisis N UADY PEN UNIVERSIDAD A ae C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 7 de 19 y urady Vesta me Fecha de modificaci n 7 de Az Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 3 En el equipo de c mputo del rea se inicia el programa Sconect Una vez abierto luego de poner la contrase a se localiza el bot n del equipo Urisys 2400 y se le da conectar 4 En el equipo urisys 2400 se verifica que en la pantalla principal aparezca la frase On line De lo contrario se activa mediante el bot n condiciones de inicio y luego en el bot n host 5 Se presiona el bot n Iniciar en la pantalla principal del equipo urisys 2400 El software del equipo hace la transferencia hacia el programa Syslabs luego de haber terminado el procesamiento de las muestras y haber presionado el bot n Transferir Urisys 6 Para la captura final se realizan los cambios en los campos pertinentes color aspecto glucosa y prote nas y se completa la captura los campos faltantes ejemplo sedimento urinario En cada campo existe un submen que contiene las opciones de captura de los datos que se puede abrir presionando la tecla F1 7 Una vez finalizada la captura de los datos en el Syslabs y posteriormente a una revisi n se libera el resultado marcando la casilla verificado ubicado en el extremo superior derecho de la pantalla del programa de captura En caso de que no re
5. proceso 8 Se introducen los n meros de secuencia inicial y final de las muestras que se desean transmitir utilizando el teclado num rico y se presiona el bot n Enviar aparece una ventana y se confirma el env o mediante el bot n Aceptar NOTA Para poder realizar esta transferencia el equipo Urisys debe tener activado el Host y en la computadora del rea debe estar en funcionamiento el programa Sconect F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 e a 2 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis 55 UADY SHE FASI N O ue C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 8 de 19 A DI UCATAN y Luz Ciencia y Verdad Fecha de emisi n 5 enero 2009 Fecha de modificaci n 7 de septiembre de 2015 RECUENTO DE ADDIS Introducci n El recuento de Addis es un m todo para la investigaci n cuantitativa de elementos celulares El d a anterior a la prueba el paciente debe restringir la ingesta de l quidos para obtener una orina concentrada Asimismo la dieta debe ser acidificante basada en prote nas e hidratos de carbono Este r gimen se instituye para lograr una orina concentrada y cida condiciones ideales para asegurar la preservaci n de los elementos celulares de la orina Los recuentos pueden ser en muestras de orina 3 6 12 o 24 horas Procedimiento Se mide el volumen exacto de orina y se mezcla con cuidado por inversi n
6. se puede encontrar en casos de linfoma macroglobulinemia leucemia sarcoma osteog nico amiloidosis y en otras enfermedades malignas M todo precipitaci n con calor 1 Se coloca 5 mL de orina centrifugada en un tubo de ensayo y se acidifica hasta un pH de 5 5 o 5 con cido ac tico al 10 2 Calentar durante 15 min en ba o Mar a a 56 C o en ba o seco Si se forma un precipitado es indicativo de prote na de Bence Jones 3 Si ocurre precipitaci n colocar el tubo en agua hirviendo durante 3 minutos Si el precipitado disminuye se debe a la presencia de prote na de Bence Jones mientras que si aumenta se debe a que hay otras prote nas 4 Si se produce un aumento de la precipitaci n a 100 C filtrar la orina estando caliente para eliminar prote nas que puedan interferir La prote na de Bence Jones se encontrar en soluci n a esa temperatura y en consecuencia permanecer en el filtrado 5 Al enfriarse la orina el precipitado correspondiente a la prote na de Bence Jones reaparecer en el filtrado a aproximadamente 60 C y se disolver nuevamente por debajo de 40 C 6 El resultado se anotar en el formato Uroanalisis F FQUI LAC 09 como positivo o negativo seg n lo observado PRUEBA PARA EXAMEN TOXICOL GICO ANTIDOPING Introducci n Existe actualmente la posibilidad de determinar un gran n mero de f rmacos y drogas de abuso de manera r pida y sencilla El objetivo es determinar la presenci
7. en mechero o mediante la agregaci n de lcalis al sedimento NaOH o KOH a cualquier concentraci n Cristales de orinas alcalinas Los fosfatos amorfos son los cristales que dificultan la observaci n y se pueden disolver agregando cido ac tico en cualquier concentraci n al sedimento Eritrocitos o Leucocitos Se utiliza lisante de estas c lulas para su ruptura leucocitos o acido ac tico al 2 eritrocitos Tejido mucoide Se puede utilizar cido ac tico para disolverlo Otros elementos c lulas o bacterias se adiciona 0 5 mL sobrenadante de la orina para diluirla Actualmente se puede realizar captura de los resultados de manera manual o utilizando la interface del software Sconnect y el programa de registro Syslabs Para realizar la transferencia de datos del equipo Urisys 2400 a trav s del software sconect y syslabs se realizan los siguientes pasos 1 Al tubo Kova o de vidrio se pega una etiqueta con c digo de barras procurando que se coloque de manera que el c digo de barras quede a la altura del c digo de barras que tienen los racks del equipo 2 Se puede comprobar la lectura del c digo de barras siguiendo la ruta men herramientas comb c digo de barras Para realizar esto el equipo debe estar en standby En caso de que no se reconozcan las etiquetas se introduce el ID de la muestra de forma manual F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 2 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan
8. lulas contadas x 7 5 donde el promedio se obtiene al dividir el total de c lulas por el n mero de ret culos contados 11 Se reporta en la hoja de trabajo Uroan lisis F QUI LAC 09 siguiendo el orden previamente establecido en el m todo manual para la lectura del sedimento y posteriormente se registra en el sistema de captura Se reportan n meros enteros y en caso de que se presenten decimales se redondear al n mero entero superior si se obtiene un valor de 5 o al inferior si se presenta un valor menor o igual de 4 Para el caso de los leucocitos si el valor observado se encuentra por debajo del observado en la tira reactiva se adiciona la siguiente nota Se observ positividad a esterasas leucocitarias equivalentes a XXX leucos uL adicionando el valor obtenido en la tira reactiva Para adicionar la nota se utilizar la siguiente escala si Lectura visual igual a la mencionada anteriormente Urisys 2400 sedimento 25 leucos uL lt 10 leucos uL 100 leucos uL lt 25 leucos uL 500 leucos uL lt 100 leucos uL 12 Se captura en el sistema de registro de datos y se firman las hojas de trabajo para entregar a la responsable de recepci n Si el sedimento presenta elementos que pueden imposibilitar la observaci n se procede de acuerdo al elemento que impide la visualizaci n Cristales de orinas cidas los cristales que mayormente se observan son los de uratos amorfos Se pueden disolver mediante calentamiento a 60 C
9. posteriormente en el sistema de captura de datos ver anexo Al finalizar el trabajo se firman las hojas de trabajo para entregar a la responsable de la recepci n Resultados Las caracter sticas f sicas se anotan de acuerdo a los siguientes datos Volumen puede ser observado y o medido En algunos casos los recipientes presentan una escala Si el frasco no presenta la escala se puede anotar un volumen de la orina aproximado Color el que sea observado y puede ir desde amarillo pajizo hasta rojo negro etc Olor normal amoniacal y f tido Aspecto se anota como claro ligeramente turbio turbio o muy turbio de acuerdo a lo observado a contraluz Sedimento debe correlacionar con el aspecto observado es decir si el aspecto es claro o ligeramente turbio el sedimento ser escaso pero si el aspecto es turbio o muy turbio se reportar como aumentado Los resultados obtenidos del an lisis con la tira reactiva se anotan de acuerdo a estos valores Glucosa visual puede ir desde negativa hasta huellas menor de 300 mg dL En caso de ser mayor o igual de 300 mg dL se procede a la cuantificaci n report ndose el valor obtenido en g L Urisys 2400 Se anota los valores obtenidos en la medici n del equipo En caso de obtener valores de 300 mg dL se procede a su cuantificaci n reportando el valor obtenido en g L Prote nas visual Negativa Se confirma la presencia de prote nas en orina mediante la prueba del anillo de Helle
10. GO 06 Cambio de la figura 1 4 de noviembre de 2012 Adici n del m todo de tira reactiva para albumina Todo el Se modific el formato del documento documento F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 2 pg Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis BN UADY ATAN UNIVERSIDAD eN pe AUTONOMA C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 19 de 19 A USA ificaci n SAL Las Cancia y Verdad Fecha de emisi n 5 enero 2009 a ea Tade Secci n 3 Se modific la descripci n del EGO 9 de julio de 2013 07 Se modific el nombre del responsable sanitario Secci n 5 Se adicion el F FQUI LAC80 08 Secci n 3 Se modific la descripci n del examen toxicol gico 14 de agosto de 2013 Secci n 7 Cambio de director de la Facultad de Qu mica Secci n 3 Se modificaron las pol ticas y la descripci n del examen 12 de noviembre de 2013 09 general de orina Secci n 7 Se modific el nombre del responsable sanitario Secci n 3 Se realizaron modificaciones a la descripci n de las pruebas 22 de agosto de 2014 1 0 realizadas en el rea Secci n 5 Se adicion el F FQUI LAC 52 Secci n 3 Se adicionaron los criterios de rechazo de las muestras 25 de Marzo de 2015 1 1 Se adicionaron los elementos de medici n utilizados en el laboratorio Se menciona el uso de rpm para la centrifugaci n Se anex la manera en la cual se rotulan los reactivos y soluciones preparadas Se
11. Muestras con coloraciones debidas a ingesta de medicamentos por ejemplo fenazopiridina e Muestras en las que se observan abundantes n cleos de c lula epitelial escamosa desnudos o desprovistos de citoplasma que acompa ados por bacterias de morfolog a bacilar demuestran una contaminaci n vaginal de la muestra e Las muestras que contengan contaminaci n fecal fibras de alimento pigmentos etc no deben descartarse sin consultar al m dico o al usuario por la posibilidad de presentarse una f stula ELEMENTOS DE MEDICI N PUNTAS DE PIPETAS DE 1000 uL AZULES puntas de pipeta de 1 200 uL amarillas pipetas KOVA adiciona 6 6 uL a cada camara KOVA camara de lectura KOVA ver inserto de fabricante para medias Pipetas de transferencia de 1 mL y 3 mL EXAMEN GENERAL DE ORINA M TODO TRADICIONAL 1 Se anota en el formato de Uroan lisis F FQUI LAC 09 el n mero de orden de la muestra biol gica as como el nombre del usuario y su n mero de ID 2 Los tubos de ensayo se marcan con el n mero de orden de la muestra correspondiente Si se dispone se puede utilizar una etiqueta con el c digo de barras si se va a utilizar el equipo urisys 2400 3 Se observan las caracter sticas f sicas de la muestra biol gica a estudiar volumen de la muestra color y olor 4 Se homogeniza la orina por medio de inversiones y posteriormente se vierte en un tubo de ensayo Este tubo se utilizar para la lectura del sediment
12. REPARACI N DE REACTIVOS PREPARACI N DEL REACTIVO DE EXTON Reactivo de Exton cido sulfosalic lico 50g Sulfato de sodio 10g cristalizado Agua destilada c s p 1000 mL Filtrar Este reactivo es estable durante 1 a o si se mantiene en refrigeraci n o hasta que aparezca un precipitado color blanco Se conserva en un frasco color mbar rotul ndose con el nombre del reactivo su fecha de preparaci n y fecha de caducidad SOLUCI N TESTIGO DE ALBUMINA 0 1 mL de soluci n de alb mina bovina al 30 en agua destilada se lleva a 100 mL con agua destilada en matraz aforado Cada mL corresponde a 0 0003 gramos de alb mina Este reactivo es estable por 6 meses si se mantiene en refrigeraci n o hasta que aparezca un precipitado color blanco Se puede conservar en un frasco transparente el cual se rotula con el nombre del reactivo su fecha de preparaci n y fecha de caducidad F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 z YE Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis my UADY h IENS UNIVERSIDAD ASA AUT NOMA C digo FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 15 de 19 3 A nmm mm Y Luz Ciencia y Verdad ET Fecha de modificaci n 7 de Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 PREPARACI N DEL COLORANTE DE STERNHEINER MALBIN SM Colorante Soluci n 1 Soluci n 2 Cristal violeta 3g Safranina O 0 25g Alcohol de 95 20 mL Alcohol
13. a o glomerular de cualquier naturaleza El grado de proteinuria var a con el tipo de enfermedad renal y con el grado de seriedad del proceso morboso La medici n de la cantidad de prote na puede se til en el diagn stico y en el curso ulterior de la enfermedad F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 S ta A 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis e nl UADY k AIA C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 10 de 19 ES Luz Ciencia y Verdad idn Fecha de modificaci n 7 de Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 Ko M todo Exton Se basa en la precipitaci n de las prote nas por la acci n del cido sulfosalic lico y la comparaci n turbidim trica con soluciones testigo de alb mina Se realiza una diluci n 1 2 con 1 mL de la orina centrifugada y 1 mL de agua destilada Luego se prosigue como lo demuestra el siguiente esquema Est ndar alb mina Blanco de muestra Muestra Orina 1 mL 1 mL Agua destilada 5 5 mL 11 5 mL 9 0 mL Prote na Exton 2 5 mL 2 5 mL Est ndar de alb mina 4 5 mL Se homogeniza y se deja reposar 7 min a resguardo de la luz Posteriormente se realiza la medici n del est ndar de alb mina contra un blanco de agua y de la muestra biol gica contra el blanco de la muestra a 405 nm Se realizan los c lculos de acuerdo con esta formula D O muestra D O est ndar x 0 9
14. a la prueba utilizando un nuevo frasco recolector Reporte de resultados Los resultados se reportan en el formato F FQUI LAC 95 Formato para examen toxicol gico previamente llenado con los datos generales del usuario especificando cada uno de los mensurandos que se determinan en esta prueba COC AMP MET THC OPI BZO etc como Positivo o Negativo Una vez finalizado el estudio se debe firmar el formato por el Qu mico que realiz la F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 O My 2 E Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis a UA DY f SIS UNIVERSIDAD E E E C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 14 de 19 ES y tencia y Verdad idn Fecha de modificaci n 7 de Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 prueba En caso de que una muestra sea encontrada como Positiva deber informar al responsable sanitario y conservar la muestra en refrigeraci n 2 8 C o en congelaci n 20 C en caso de que el usuario decida realizar otra prueba En caso de que una muestra resulte positiva y el usuario se encuentre bajo tratamiento con alg n medicamento controlado se le puede adicionar la siguiente nota previa comprobaci n que alg n m dico lo haya recetado NOTA El usuario se encuentra bajo medicaci n con el medicamento nombre del medicamento cuyo principio activo es nombre del principio activo ANEXOS DE PRUEBAS R PIDAS Y P
15. a o ausencia de drogas de abuso y nicamente en algunas situaciones particulares su cuantificaci n El tipo de muestra que se utiliza con mayor frecuencia para la identificaci n del consumo de drogas de abuso es la orina F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 z q Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis 5 UADY NIE UNIVERSIDAD RA AUTONOMA C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 13 de 19 WI O e as T Fecha de modificaci n 7 de Az Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 Procedimiento Esta prueba es una prueba de screening r pida que utiliza anticuerpos monoclonales para la detecci n selectiva de niveles elevados de ciertos metabolitos de drogas Para la realizaci n de esta prueba debe seguir lo establecido en la cadena de custodia del laboratorio donde debe observar de manera visual la recolecci n de la orina y una vez finalizada la recolecci n se identifica la muestra con los datos del usuario y se solicita la firma en el formato de Examen Toxicol gico F FQUI LAC 95 por parte del usuario si sus datos son correctos Este formato debe entregarse a los Qu micos asignados al rea en caso de que no sean ellos los testigos de la recolecci n Esta prueba se realiza de acuerdo con lo establecido en el inserto de la prueba en el cual se describe que el usuario debe orinar directamente en el frasco contenedor de la prueba o en otro frasco est ril marcando est
16. aci n de proteinuria de 24 Horas se obtengan valores de huellas o negativo M todo Se sigue de acuerdo a lo indicado en el instructivo de las tiras de medici n utilizadas ver hojas anexas Resultados Se anotan los valores obtenidos en la prueba en Prote nas de 24 horas microalbuminuria formato F FQUI LAC 36 anotando los valores obtenidos de la albumina creatinina y la relaci n alb crea si as se cuantific CUANTIFICACI N DE CIDO RICO Y UREA Se toma una al cuota de la orina centrifugada para su cuantificaci n y se lleva al departamento de Bioqu mica cl nica para su cuantificaci n y reporte NOTA en caso de que orina sea de 24 horas se mide el volumen total de la orina DEPURACI N DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS Se mide el volumen total de la orina en mL se toma una al cuota de la orina y se lleva al departamento de Bioquimica cl nica para su cuantificaci n y reporte OTRAS CUANTIFICACIONES En el caso de cuantificaciones de otros analitos en orina revisar el instructivo de la prueba y realizar la diluci n indicada si se requiere y midiendo el volumen de la muestra si se requiere En caso de ser una prueba subrogada se sella la orina con papel parafilm y se anota el volumen enviado de orina y la prueba a realizar En caso de que la muestra requiera conservadores estos se adicionan antes de iniciar la recolecci n por lo que el usuario deber acudir al laboratorio para obtenerlos y posterior
17. adicion la prueba del Recuento de Addis Se adicion la manera en la cual se desechan las muestras de orina Secci n 4 Se adicionaron documentos de referencia Todo el Revisi n ortogr fica a todo el texto documento Cambio al nuevo formato de la DGPLANEI Todo el Revisi n ortogr fica 7 de septiembre de 2015 1 2 documento Secci n 7 Se modific el nombre del responsable sanitario Nota sta secci n ser utilizada a partir de la primera modificaci n a este documento La revisi n 00 se mantendr en blanco Elabor Aprob QFB Giovanni J Xool Castellanos EBC Ricardo Jesus May Castillo Dra Zulema Osiris Cantillo Ciau Responsable del rea de Uroan lisis Responsable sanit rio Directora de la Facultad de Qu mica y Coproan lisis Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que elaboran el documento revisan su adecuaci n y aprueban para su implementaci n dentro del Sistema de Gesti n de la Universidad Aut noma de Yucat n F DGPLANEI CC GA 39 REV 01
18. albuminuria F FQUI Hoja estad stica Responsable de z LAC 48 de estudios Area de trabajo area 1 a o Archivo muerto F FQUI Control y LAC 52 Preservaci n de rea de trabajo dede Es 1 a o Archivo muerto reactivos F FQUI Bit cora de uso LAC 55 diario de Urisys rea de trabajo Responsable de 1 a o Archivo muerto rea 2400 F FQUI Reporte Urisys Responsable de z LAC 71 2400 Area de Trabajo rea 1 a o Archivo muerto F FQUI Formato para LAC 95 Examen Area de Trabajo did a oe 1 a o Archivo muerto Toxicol gico 6 GLOSARIO 6 1 SIGLAS UADY Universidad Aut noma de Yucat n LACSC Laboratorio de An lisis Cl nicos de Servicio a la Comunidad g Fuerza Centrifuga Relativa tambien llamada Gravedades rpm Revoluciones por minuto F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 WM 103 i i S N TS D na UADY UNIVERSIDAD AUTONOMA DE YUCATAN Luz Ciencia y Verdad 6 2 DEFINICIONES Muestra biol gica Parte anat mica o fracci n rganos o tejido excresiones o secresiones obtenidas de un ser humano o animal vivo o muerto para su an lisis Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis C digo FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 18 de 19 Fecha de emisi n 5 enero 2009 Fecha de modificaci n 7 de septiembre de 2015 7 CONTROL DE REVISIONES i Secci n y o E E s E Nivel de OY Descripci n de la modificac
19. alice la transferencia debido a que no se detecto el c digo de barras de la muestra o que no haya disponible las etiquetas con los c digos se procede a realizar la captura del ID de la muestra en el equipo Urisys siguiendo estos pasos 1 En el programa del Syslabs se verifica los datos del paciente Nombre ID y numero de la orden de trabajo y en el urisys posici n de la muestra en el rack y numero de secuencia Se recomienda apuntar los n meros de secuencia del urisys en las hojas de trabajo del rea 2 Se presiona el bot n de Parar en la pantalla principal del Urisys y luego se confirma en la ventana mediante el bot n aceptar para poner el equipo en Standby 3 Se Localiza el suomen de monitor de datos Menu monitor de datos y se presiona el bot n de datos de rutina 4 Utilizando los botones Prev o Post se localiza el numero de secuencia de la muestra que no tenga ID y se presiona el bot n de ID o se puede presionar el bot n de Num de sec para localizar directamente las muestras a las que no se les reconoci el ID 5 Utilizando el teclado alfanum rico se introduce el ID de la muestra se presiona y se confirma mediante el bot n aceptar que aparece en una subventana 6 Se procede de la misma manera con todas las muestras a las cuales no se haya detectado el ID 7 Una vez finalizado la captura de ID en la pantalla de monitor de datos de rutina se localiza el bot n de
20. bo de este modo se forman dos capas de l quido La formaci n de un precipitado blanco en la uni n de ambos l quidos al cabo de tres minutos indica la presencia prote na ELIMINACI N DE MUESTRAS DE ORINA Para poder desechar las muestras de orina una vez que haya finalizado su estudio se transportar n al rea de lavado y se eliminar n mediante la utilizaci n de una soluci n de hipoclorito de sodio F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 UADY C AUTONOMA DE YUCATAN 2 Ciencia y Verdad Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis C digo FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 16 de 19 Fecha de emisi n 5 enero 2009 Fecha de modificaci n 7 de septiembre de 2015 comercial se dejar n reposar 2 minutos y posteriormente el contenido se desechar en la tarja y el frasco en el bote de basura municipal bolsa negra En caso de que se consideren procedente de pacientes con alguna enfermedad infectocontagiosa se depositar n en bolsa de color rojo RPBI 4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA Nombre del documento Lugar de almacenamiento MGC DGPLANEI CC 01 N A N A N A P FQUI LAC 04 N A N A N A N A Manual de Gesti n de la Calidad NOM 007 SSA3 2011 Para la organizaci n y funcionamiento de los laboratorios cl nicos NOM 087 SEMARNAT SSA1 2002 Protecci n ambiental Salud ambiental Residuos Peligrosos biol gico infeccioso
21. de 95 10 mL Oxalato de amonio 0 89 Agua destilada 100 mL Agua destilada 80 mL Se mezclan 3 partes de la soluci n 1 con 97 partes de soluci n 2 y se filtra El colorante es estable durante 1 a o En caso de observarse un precipitado se puede filtrar para utilizarse nuevamente Mantener en frasco color mbar o transparente rotul ndolo con el nombre del colorante su fecha de preparaci n y fecha de caducidad Si el colorante se adquiere de manera comercial rotular el frasco utilizado con el nombre del colorante y la fecha de caducidad se alado por el fabricante M todo de para la tinci n SM Centrifugar la orina 5 min a 1630 rpm 400 gravedades Decantar el sobrenadante y dejar aproximadamente 1 mL Resuspender el sedimento y agregar 2 gotas del colorante Examinar a microscopio ptico con portaobjetos y cubreobjetos METODO DE HAY PARA SALES BILIARES Se refrigera la orina durante 10 min para alcanzar la temperatura de 18 C En el tubo de ensayo se espolvorea una peque a cantidad de azufre pulverizado o resublimado y se observa su comportamiento En caso de observarse precipitaci n en los 30 seg posteriores se reporta como Positivas o en Negativas si no se observa precipitaci n alguna METODO DEL ANILLO DE HELLER Se coloca uno o dos mL de cido n trico concentrado en el fondo de un tubo de ensayo Cubrir el cido con orina centrifugada pero cuidando que esta se deslice lentamente por la pared del tu
22. dros sombreados en la figura 1 Sedimento aumentado se leen 5 ret culos de los cuadros sombreados en la figura 1 de preferencia el ret culo central Fig 1 C mara Kova indicando en gris oscuro los ret culos en los cuales se realiza la lectura Se realiza el conteo de las estructuras C lulas epiteliales pavimentosas de transici n y renales leucocitos y eritrocitos Las otras estructuras presentes en el sedimento se reportan como previamente se ha comentado En caso de existir una gran leucocituria o hematuria se puede realizar el conteo en un nico ret culo y luego multiplicar por 10 para obtener el n mero total de c lulas Si llegar a presentarse una muestra con m s de 60 estructuras por ret culo de cualquier tipo que se realice el conteo se puede omitir y mencionar que se presenta como INCONTABLES 10 Con el conteo total de las estructuras apuntando las lecturas realizadas en cada uno de los 5 F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 2 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis 3 UADY ne AGO yo ADO C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 6 de 19 UTA ad Fecha de modificaci n 7 de AR Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 reticulos de lectura se realiza la conversi n con la tabla proporcionada por el fabricante Si no llegar a presentarse el dato para la conversi n se utiliza la siguiente formula Promedio de c
23. e ltimo con los datos de usuario con un m nimo de 30 mL y un m ximo de 70 mL y posteriormente asegurando la tapa del frasco El frasco contenedor o el cassette contienen las tiras para la medici n de los metabolitos de las drogas Se debe indicar en el F FQUI LAC 95 los mensurandos que se van a analizar En caso de que la recolecci n de la muestra de orina se realice en otro frasco est ril se adicionan de 30 a 40 mL de orina al frasco contenedor de la prueba si se presenta de esta manera Despu s que la muestra de orina sea recolectada y o puesta en el envase recolector se leen los resultados a los 5 minutos No se interpretan los resultados despu s de 10 minutos Los resultados de la prueba se interpretan como 88 0 tel NEGATIVE POSITIVE INVALID Negativo Aparici n de dos l neas una en la regi n del control C y otra l nea adyacente en la regi n de la prueba T NOTA La intensidad de la l nea de control puede variar pero debe considerarse negativa mientras se observ una l nea distinguible de color Positivo Una l nea aparece en la regi n de control No se observa ninguna l nea en la regi n de la prueba Este resultado positivo indica que la concentraci n del analito est por encima de nivel detectable Invalido La l nea de control no se observa Un volumen insuficiente de muestra o un incorrecto procedimiento son las razones m s comunes para la falla de la l nea control Revise el procedimiento y repit
24. g dL x 2 NOTA en caso que la medici n se realice en 24 horas es necesario medir el volumen exacto de la orina Resultados Proteinuria de 24 Horas Se toma el valor obtenido de la alb mina y con el volumen de la orina de 24 horas se lleva el resultado al valor de las 24 horas Los resultados se anotan en el formato F QUI LAC 36 se indica el volumen urinario medido En caso de realizar la medici n con las tiras de microalbuminuria se toma el valor de la albumina y es llevado al valor de las 24 horas y se anota el resultado en el formato F QUI LAC 36 M todo de prote nas totales rojo de pirogalol Se realiza siguiendo las indicaciones del inserto del equipo comercial utilizado ver hojas anexas Se reporta en el formato F QUI LAC36 M todo mediante tira reactiva Se puede realizar tambi n la medici n de proteinuria mediante el empleo de las tiras de microalbuminuria y el valor obtenido es multiplicado por el volumen de la orina de 24 horas F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 e 0 Me 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis 2 UADY Wn yne i SENNIN UNIVERSIDAD OS AUIE C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 11 de 19 y Lun Chacha y Verdad p Fecha de modificaci n 7 de Az Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 MICROALBUMINURIA Esta prueba se realiza cuando se solicita la prueba de microalbuminuria o cuando en la cuantific
25. i n y mejora Fecha de modificaci n revisi n p gina Se describi el proceso de control de calidad en el rea de uroan lisis P ginas 8 y 10 P ginas 11 12 Se modific el diagrama del proceso Se modific el reporte de sedimento urinario referente a los leucocitos P gina 4 Se modific el apartado de examen general de orina para 0 1 P gina 5 incluir los resultados obtenidos por el equipo Urisys 2400 y el 10 de Junio de 2009 m todo Kova Se modific el reporte del sedimento urinario en el examen P gina 8 general de orina 02 Se modific la cuantificaci n de anal tos glucosa cido rico 13 de octubre de 2009 P gina 10 urea y depuraci n de la creatinina P gina 2 Se modific la ltima pol tica P gina 3 03 y 13 Se elimin los m todos de cuantificaci n de analitos que 20 06 ADNl de 2010 P gina 13 describ an las diluciones utilizadas Se adicion el m todo de la prote na de Bence Jones P oi Se adicion el m todo del anillo de Heller gina 16 Se elimin el prefacio y se modific la descripci n del control P gina 4 de calidad interno 04 Se modific la descripci n del Examen general de orina y se 18 de marzo de 2011 Paginas 7 8 y adicion la descripci n del uso de la interface urisys syslabs 10 Pagina 2 Se adicion una pol tica 24 de junio de 2011 Pagina 15 Se adicion la descripci n de las pruebas de drogas de abuso Secci n 3 Se modific la descripci n del E
26. mente iniciar la recolecci n PRUEBA INMUNOL GICA DE EMBARAZO EN ORINA PIE EN ORINA M todo De acuerdo a lo establecido en el instructivo de la prueba de embarazo utilizada ver hojas anexas donde se sumergir la tira reactiva en el muestra de orina y se verificar el resultado en un intervalo de tiempo aproximadamente 5 min Resultados Los resultados de la prueba se anotan en el formato F FQUI LAC 09 Se indica si la prueba es positiva F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 S en y p 2 E Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis ms UADY a HEN UNIVERSIDAD RN m AUT NOMA C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 12 de 19 AS 3 XK A L o y a pi Fecha de modificaci n 7 de Az Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 2 l neas en la tira o si es negativa 1 l nea de acuerdo a lo indicado en el inserto del kit comercial PROTE NA DE BENCE JONES Introducci n La prote na de Bence Jones est formada por d meros de cadenas livianas sea kappa o lambda procedentes de inmunoglobulinas Esta prote na fue reconocida por primera vez por Henry Bence Jones en 1847 debido a sus propiedades inusuales de solubilidad precipita al calentar a 40 60 C pero se solubiliza nuevamente cuando se calienta hasta ebullici n El mieloma multiple es la enfermedad que se asocia m s a menudo con la presencia de prote na de Bence Jones pero no es espec fica
27. modificaci n 7 de Az Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 Cristales dependen del pH urinario y pueden observarse e Orinas cidas de cido rico oxalato de calcio uratos amorfos sulfato de calcio uratos de sodio etc e Orinas alcalinas fosfato am nico magn sico fosfato triple fosfatos amorfos fosfato de calcio carbonato de calcio etc e Maclas de cristales de orinas acidas o alcalinas e N cleos de lito o calculo Para el caso de los cristales de oxalato de calcio se deber indicar si es un cristal de oxalato de calcio monohidratado forma semiesf rica con superficie c ncava o si es dihidratado forma bipiramidal de base cuadrada visto lateralmente o de apariencia de sobre de carta visto de desde arriba Cilindros hialinos granulosos de c lulas epiteliales eritrocitarios leucocitarios y c reos Eritrocitos Un promedio de las c lulas observadas y se alando el porcentaje de eritrocitos dism rficos si llegar n a presentarse Leucocitos Un promedio de las c lulas observadas Se indica si los leucocitos se encuentran como piocitos Si el promedio obtenido de los leucocitos observados se encuentra por debajo del valor observado en la tira reactiva se adiciona la siguiente nota Se observ positividad a esterasas leucocitarias equivalentes a XXX leucos uL adicionando el n mero de leucocitos obtenido en el examen con la tira reactiva Para adicionar la nota se u
28. n 5 enero 2009 septiembre de 2015 describen los pasos para el examen del sedimento ya que el an lisis de las caracter sticas f sicas y qu micas de la orina sigue realiz ndose igual al descrito en el m todo tradicional 1 Se inicia el procesamiento de la muestra de orina siguiendo los 4 primeros pasos del m todo tradicional solamente que se utiliza un tubo Kova en lugar de uno de los tubos tradicionales de vidrio 2 Se llenan los tubos Kova con 12 mL de orina en caso que la muestra sea menor se puede utilizar 6 mL o 1mL y posteriormente se tapan 3 Los tubos se centrifugan a 400 gravedades g por 5 min 4 Se destapan los tubos y se les inserta una pipeta Kova en el tubo procurando que llegue al final del tubo Girar la pipeta para asegurar 5 Decantar 11 mL del sobrenadante del tubo Kova y luego remover la pipeta 6 Para facilitar la observaci n se puede adicionar 2 gotas del colorante Sternheimer Malbin SM y homogenizar Dejar reposar por un tiempo aprox 5 min para permitir que las estructuras se ti an adecuadamente 7 Con la pipeta Kova transfiera una gota a la c mara de lectura adicionando la gota en la esquina del pocillo y permitiendo que difunda por capilaridad 8 Coloque el portaobjeto en el microscopio bajo el objetivo y realice la lectura a 10x y 40x 9 Se realiza la lectura del sedimento tomando en cuenta las siguientes consideraciones Sedimento disminuido escaso se leen 10 ret culos de los cua
29. o y para la lectura de la tira reactiva 5 Se realiza el examen de tiras reactivas sumergiendo la tira reactiva en el tubo examen visual o mediante el equipo Urisys 2400 y posteriormente se centrifuga a 1630 rom o 400 gravedades en la centrifuga 3 6 Una vez finalizada la centrifugaci n se toma un mililitro de la orina y el sobrenadante restante es decantado En caso de que exista alguna cuantificaci n para albumina o glucosa el sobrenadante es trasvasado a otro tubo marcado con el numero de la orden 8 El sedimento es mezclado con el mililitro de la orina previamente separado se resuspende y se F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 o 3 Ka ETO y SN gt 3 SrA Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis UADY usos C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 3 de 19 DE YUCATAN Luz Ciencia y Verdad Fecha de modificaci n 7 de septiembre de 2015 Fecha de emisi n 5 enero 2009 toman 50 uL y se coloca entre un portaobjeto y un cubreobjeto En el formato se reporta el aspecto de la muestra y el sedimento en base a lo que se observa al microscopio 9 En caso de que exista alguna cuantificaci n de los analitos presentes en la orina se procede a su cuantificaci n utilizando el sobrenadante recolectado previamente siguiendo los pasos indicados en la secci n de cuantificaci n de analitos 10 Se registran los resultados en la hoja de trabajo y
30. para homogenizarla En un tubo KOVA se colocan 10 mL de orina y se centrifuga 5 min a 2000 rpm 500 gravedades g Despu s de la centrifugaci n se adiciona una pipeta KOVA y se separa el sobrenadante reteniendo 1 mL de orina residual Se resuspende con cuidado y se carga en una c mara de lectura KOVA El conteo se realiza de la misma manera que el se alado anteriormente para el Examen General de Orina pero al momento de realizar la conversi n se utiliza un factor de 9 Resultados Para poder reportar los resultados se necesario haber realizado la conversi n por medio del factor antes mencionado y utilizando la formula siguiente N elementos contados X volumen minuto x 1000 para el caso de los eritrocitos y leucocitos N elementos contados X volumen minuto x 250 para el caso de los cilindros Donde los elementos contados son los obtenidos de la conversi n del conteo urinario y el volumen minuto es el que se obtiene de dividir el volumen de orina medido entre el volumen de orina esperado 1440 mL CUANTIFICACI N DE ANALITOS EN ORINA Introducci n La orina es una soluci n acuosa compleja de sustancias org nicas o inorg nicas de las cuales la mayor parte son productos del desecho del metabolismo celular Las cantidades de sustancias var an de modo considerable en efecto la variabilidad de la composici n urinaria es la que ayuda a mantener el resto de los l quidos corporales en un estado de equilibrio denominado homeostasis
31. r ver anexo en caso de encontrarse valores menores de 500 mg dL en estos casos se anota el resultado como Huellas Si el valor es mayor de esta cantidad se procede a su cuantificaci n ver cuantificaci n de prote nas en orina y se reporta en el valor en g dL Urisys 2400 Se confirma la presencia de prote nas en orina mediante la prueba del anillo de Heller ver anexo y se reporta el valor obtenido en el an lisis en g L hasta antes de 500 mg dL En caso de encontrarse ese valor se procede a la cuantificaci n ver m s adelante y se reporta su valor en g L En ambos casos Sales biliares se reporta como Negativa a menos que se presenten positivas las pruebas de bilirrubina y urobilinogeno Si se presentan positivas se realiza la verificaci n con el m todo de Hay y se anota en el formato F FQUI LAC 71 Para la observaci n microsc pica se realiza una lectura en 5 campos y se anotan los elementos observados en el sedimento siguiendo el orden establecido en el formato de reporte de resultados C lulas epiteliales pavimentosas de transici n y renales Bacterias pueden ser m viles y o inm viles Tejido mucoide Se reportar como escaso moderado o abundante F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 2 9 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis G UADY 4 TEN N UNIVERSIDAD O AUT NOMA C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 4 de 19 KOS urady Vesta me Fecha de
32. s Clasificaci n y especificaciones de manejo Gu a para el cumplimiento de la Norma Oficial Mexicana NOM 087 SEMARNAT SSA1 2002 Procedimiento para el an lisis de muestra Urisys 2400 Manual del usuario Gu a practica para la estandarizaci n del procesamiento y examen de las muestras de orina Inserto Sistema Kova para el an lisis de orina estandarizado El laboratorio en la cl nica l vine Enrique Selva Alejandro M dica Panamericana 1979 Sitio web del SGC En l nea y LACSC En l nea En l nea LACSC y en l nea rea de trabajo En l nea LACSC y en l nea LACSC F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis Revisi n 12 P gina 17 de 19 Fecha de modificaci n 7 de septiembre de 2015 5 CONTROL DE REGISTROS UADY UNIVERSIDAD AUTONOMA DE YUCATAN C digo FQUI LAC 03 Luz Ciencia y Verdad Fecha de emisi n 5 enero 2009 Identificaci n Nombre del Lugar de Responsable de Tiempo de Disposici n de registro almacenamiento su protecci n retenci n los registros F FQUI cia z Responsable de LAC 09 Uroan lisis Area de Trabajo Area 1 a o Archivo muerto F FQUI Registro de LAC 24 temperatura del Area de trabajo S g 1 a o Archivo muerto refrigerador F FQUI Prote nas en LAC 36 orina rea de Trabajo E Qe 1 a o Archivo muerto micro
33. sta antes del momento de su recepci n Se correr diariamente un control interno para orinas y mensualmente un control externo Las muestras de control interno se procesar n en el equipo urisys 2400 en el rack 230 e Para el estudio de la muestra el qu mico deber portar su bata utilizar guantes desechables y lentes de seguridad e Se llenar n los formatos de mantenimiento y uso diario del equipo utilizado F FQUI LAC 55 la estad stica de las pruebas realizadas F FQUI LAC 48 y para el control y preservaci n de reactivos F FQUI LAC 52 se llenar cada d a 15 de mes o d a cercano para entregarlo al responsable de seguimiento de este formato F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 O My 2 E Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis oD UA DY f SIS UNIVERSIDAD Sa E E C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 2 de 19 E Y acia y Verdad mm Fecha de modificaci n 7 de Fecha de emisi n 5 enero 2009 septiembre de 2015 CRITERIOS DE RECHAZO DE LAS MUESTRAS DE ORINA e Muestras obtenidas despu s de una ingesta exagerada de l quidos ej preparaci n para estudio de ultrasonido Muestras conservadas a temperatura ambiente con m s de 2 horas de haber sido emitidas En caso de incontinencia se recomienda la segunda orina de la ma ana con una ingesta de 200 mL de agua desde la noche anterior e Muestras visiblemente contaminadas mal tapadas o sin tapa e
34. tilizar la siguiente escala si Visual sedimento 25 leucos uL gt 10 leucos campo 75 leucos uL gt 15 leucos campo 125 leucos uL gt 75 leucos campo 500 leucos uL gt 125 leucos campo Otros elementos como Levaduras pseudohifas de levaduras o fragmentos miceliares posible contaminaci n Cuerpos ovales grasos Par sitos Trichomonas vaginalis Entamoeba histolytica C lulas en Degeneraci n Apoptosis Empeliopolesis vacuolizaci n etc Adherencia bacteriana o Cit lisis Bacteriana Para los elementos formes antes mencionados se utiliza una escala que va de escasos de 0 5 elementos campo moderados 6 10 elementos campo numerosos 11 15 elementos campo y abundantes m s de 15 elementos campo para los elementos antes mencionados a excepci n de los eritrocitos y leucocitos con los cuales se realiza un promedio del n mero de las c lulas observado en los campos revisados y se reporta como cel uL M TODO KOVA El m todo Kova es un m todo estandarizado para la lectura de sedimento el cual utiliza sus propios tubos de 12 mL una pipeta y una c mara para la lectura del sedimento Por lo tanto solamente se F DGPLANEI CC GA 39 REV 01 z YE Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de uroan lisis may VUADY e l AMAR IS UNIVERSIDAD S Turk Za eN im E C digo I FQUI LAC 03 Revisi n 12 P gina 5 de 19 USA Fecha de modificaci n 7 de Az Fecha de emisi
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