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Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA

1. Estado de NAALA NAAT 2 Ensayo APTIMA GC Estado de infecci n del Ensayo APTIMA COMBO 2 s ntomas Total paciente TM OM TM OM OM Sint Asint Infectado 164 8 172 Infectado 1 0 1 Infectado 3 1 4 Infectado 1 0 1 Infectado 2 0 2 Infectado 1 1 2 No infectado 0 1 1 No infectado 2 13 15 No infectado 1 0 1 No infectado 1 0 1 No infectado 0 1 1 No infectado 1 1 2 No infectado 2 2 4 No infectado 3 1 4 No infectado 2 1 3 No infectado 0 3 3 No infectado 386 691 1 077 No infectado 1 2 3 No infectado N C 1 4 5 No infectado 1 4 5 No infectado 1 1 2 No infectado 0 1 1 No infectado N C 0 1 1 No infectado 2 6 8 No infectado 0 2 2 Total 576 745 1 321 QC _ u RRR A A A A zrIJJR ue o Sint sintom tico Asint asintom tico N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TM torunda uretral masculina OM orina masculina Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 54 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 7c Resultados de torundas endocervicales y orina femenina de mujeres infecta
2. Torunda Asintom tico 635 20 5 609 1 95 2 76 2 99 9 99 2 98 1 99 7 Todos 1 440 72 13 1 353 2 97 3 90 6 99 7 99 0 98 4 99 5 Mujeres Sintom tico 810 48 2 755 5 90 6 79 3 96 9 99 7 99 0 100 MR Asintom tico 639 21 1 616 1 95 5 77 2 99 9 99 8 99 1 100 Todos 1 449 69 3 1 371 6 92 0 83 4 97 0 99 8 99 4 100 Recogidas por Torunda Asintom tico 629 21 4 604 0 100 83 9 100 99 3 98 3 99 8 la paciente vaginal Sintom tico 809 52 7 749 1 984 899 100 99 1 98 1 99 6 Recogidaspor Torunda sintom tico 637 21 4 61 1 955 772 999 993 983 998 el cl nico vaginal Todos 1 446 73 11 41 360 2 97 3 90 7 99 7 99 2 98 6 99 6 aa O a PR positivo real PF positivo falso NR negativo real NF negativo falso Resultados para GC del ensayo APTIMA COMBO 2 N de resultados positivos N de muestras analizadas a 2 10 b 1 4 c 1 5 d 2 9 e 5 8 f 2 5 g 7 13 h 1 2 i 1 1 j 2 3 k 3 4 I 8 11 m 6 7 n 3 4 o 9 11 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 48 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Estudio de muestras cl nicas de Pap en medio l quido PreservCyt Se realiz un estudio cl nico multic ntrico prospectivo para evaluar el uso del medio de transporte PreservCyt un componente del sistema ThinPrep 2000 como medio alternativo para muestras ginecol gicas para la detecci n de N gonorrhoeae por el ensayo APTIMA GC En el
3. NS v 0 y O RLU x1 000 Figura 4 Frecuencia de la distribuci n de las RLU para el ensayo APTIMA GC Tabla 3 Distribuci n de las RLU del ensa yO APTIMA GC RLU x 1 000 10 20 30 40 50 100 1 000 2 000 3 000 4 000 5 000 2 lt 20 lt 30 lt 40 lt 50 lt 100 lt 1 000 lt 2 000 lt 3 000 lt 4 000 lt 5 000 lt 6 000 6 000 Total de positivos 45 10 13 23 21 116 408 Total de positivos falsos TVC 1 TVP 0 TF 2 TM 1 0 0 0 10 35 6 2 4 0 3 0 OF OM Total de negativos 6 122 54 24 16 8 Total de negativos falsos TVC TVP TF TM OF OM A AS A Y STA AE SD OO A a E OOLIOLGLLLUUA TVC torunda vaginal recogida por el cl nico TVP torunda vaginal recogida por paciente asintom tica solamente TF torunda endocervical femenina TM torunda uretral masculina de hombres sintom ticos solamente OF orina femenina OM orina masculina Una columna sombreada denota una zona equ voca N o oj oj e Oj ojl ojo alxajojol a O OL GOGG o oj oj oj oj N o O O ojojo 7 2 1 2 1 n olol ol o N o o jo o o o ol o o 0 0 1 0 1 0 oj O O 090 O Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 46 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Rendimiento cl nico en sistemas DTS Consulte el rendimi
4. 3 Mezcle bien cada reactivo mediante inversi n suave antes de cargarlo en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos 4 No llene hasta el borde los frascos de reactivos El sistema PANTHER reconocer y rechazar los frascos que est n llenos hasta el borde D Manipulaci n de muestras 1 Deje que los controles y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes del procesamiento 2 No agite las muestras en un mezclador v rtex 3 Confirme visualmente que cada tubo de muestras satisface uno de los criterios siguientes a La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA azul en un tubo de transporte de muestras de torunda unisex b La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA rosa en un tubo de transporte de muestras de torunda vaginal c Un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina d La ausencia de una torunda en el tubo de transporte de muestras APTIMA con muestras de Pap en medio l quido PreservCyt 4 Inspeccione los tubos de muestras antes de cargarlos en la gradilla a Siun tubo de muestra contiene burbujas en el espacio entre el l quido y el tap n centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para eliminar las burbujas b Si un tubo de muestra tiene un volumen inferior al que se suele observar cuando se siguen las instrucciones de recogida centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para
5. as es 9 0 ES 94 6 100 87 2 100 96 1 100 100 100 100 Sint Mujeres 47 24 0 0 23 85 8 100 85 2 100 92 5 100 PM 98 4 100 98 6 Hane 19 90 1 912 100 66 4 100 92 3 100 l 100 100 100 PreservCyt Mujeres 34 28 0 0 6 87 7 100 54 1 100 89 7 100 100 94 4 97 6 1 gt Mujeres 41 e 9 1 M 85 2 100 72 7 99 9 87 1 99 9 plas 100 100 100 Hombres 4O 8 2 Aw 59 0 100 89 4 100 912 100 100 93 8 96 0 Asint Mujeres 25 9 0 1 15 66 4 100 89 8 99 8 79 6 99 9 sans 100 100 100 Rotes S00 9 9 93 47 8 100 93 5 100 94 0 100 PreservCyt Mujeres 17 12 0 0 5 190 190 190 735 100 47 8 100 80 5 100 indica un resultado positivo un resultado negativo IC intervalo de confianza Muestras de torundas vaginales y endocervicales combinadas Una discordancia en torunda vaginal Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 64 502185ES Rev E Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System Tabla 12 Estudio de concordancia de las muestras cl nicas concordancias positivas negativas y generales por estado de s ntomas continuaci n de concor de concor concor Sintoma Muestra Seko DTS DTS DTS DTS dancia dancia dancia TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva negativa general IC 95 IC 95 IC 95 100 98 0 99 2 1 1 Magis ese na O 1 30 95 4 100 89 6 100 95 8 100 Torunda 100 100 100 Ho
6. e Cargue las TTU en el lumin metro f Inicie sesi n en el ordenador Haga clic en Nuevo ciclo New Run seleccione el protocolo del ensayo APTIMA GC APTIMA GC Assay Protocol e introduzca el n mero de tubos controles y muestras Haga clic en Siguiente Next para iniciar el ciclo Nota El ciclo debe completarse en las 2 horas siguientes a la finalizaci n de la incubaci n del paso de selecci n g Prepare el fluido de desactivaci n mezclando vol menes iguales de soluci n de hipoclorito de sodio del 596 al 796 0 7 M a 1 0 M y tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA en un recipiente de pl stico con tap n grande Etiquete y escriba la fecha de caducidad en el recipiente de pl stico El fluido de desactivaci n Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 18 502185ES Rev E Sistemas DTS permanece estable durante 4 semanas a temperatura ambiente Deseche el fluido de desactivaci n despu s de 4 semanas o despu s de haberse desactivado 100 muestras procesadas lo que suceda primero h Una vez retiradas del lumin metro las TTU utilizadas coloque las TTU en el contenedor del fluido de desactivaci n Deje que las TTU permanezcan en el contenedor durante 15 minutos antes de desecharlas El director del laboratorio debe establecer m todos de manipulaci n y eliminaci n adecuados Notas de procedimiento A Controles Para trabajar correctamente con el software del ensayo APTIMA el control negativo para GC que es
7. Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA Kit de transferencia de muestras APTIMA para uso con muestras ginecol gicas recolectadas en soluci n PreservCyt A Instrucciones de recogida Consulte el prospecto del kit de recogida de muestras pertinente para las instrucciones de recogida B Transporte y almacenamiento de muestras antes de la prueba 1 Muestras de torunda a Una vez recogida la muestra la torunda se debe transportar y almacenar en el tubo de transporte de muestras de torunda a una temperatura entre 2 C y 30 C hasta que se analice Las muestras deben analizarse con el ensayo APTIMA GC en los 60 d as siguientes a su recogida Si fuera necesario ampliar el tiempo de almacenamiento se pueden congelar a una temperatura entre 20 C y 70 C durante un per odo de hasta 12 meses despu s de la recogida consulte Estudios de la estabilidad de las muestras 2 Muestras de orina a Las muestras de orina que todav a se encuentren en el recipiente de recogida principal se deben transportar al laboratorio a una temperatura entre 2 C y 30 C Transfiera la muestra de orina al tubo de transporte de muestras de orina APTIMA en las 24 horas siguientes a su recogida Almacene entre 2 C y 30 C y analice en los 30 d as siguientes a su recogida b Una vez recogidas las muestras de orina procesadas se deben transportar en el tubo de transporte de muestras de orina APTIMA a una temperatura entre 2 C y 30 C
8. Los resultados no v lidos se debieron a la colocaci n incorrecta de una TTU en el Leader HC Los resultados se resumen en la tabla 10 Tabla 10 Datos de precisi n en laboratorio del ensayo APTIMA GC para PreservCyt utilizando un panel de precisi n de 4 muestras con contenido de O a 500 CFU mL de c lulas GC RLU Pentro usuario Entre d a Entre usuario Total de panel NEN den cuerda Concor media Sp SD SD SD dancia x1 000 41 000 Y 4 099 Y 1 0007 CV 4999 CV A 1 04 140 39 27 9 3137 7583 2417 1325 422 00 0 0 7698 2454 B 5 0 5 140 113 807 12111 1 031 33 852 169 8 140 1504 124 1 0560 87 2 C 500 50 140 140 100 5 6368 2207 39 1357 24 0 0 0 0 2591 46 D 0 0 136 136 100 1 2 05 NC 0 N C 0 3 NIC 06 NC A _ _ _ st v Hubo cuatro resultados no v lidos debido a una TTU mal colocada en el Leader HC Nota La variabilidad de algunos factores podr a ser num ricamente negativa lo que puede ocurrir si la variabilidad debida a dichos factores es peque a Cuando esto sucede la variabilidad medida en funci n de la SD y el CV se establece en cero 12 N C no corresponde para muestras de paneles negativos Usuario Ciclo Las muestras con resultados discordantes se incluyeron en el an lisis de variabilidad de la se al Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 58 502185ES Rev E
9. Kit de conservante de fluido del sistema APTIMA 302380 Puntas conductoras de 1 000 uL detectoras de l quido 10612513 Tecan Kit del ciclo del TIGRIS DTS System con 301191 Unidades multitubo Multi tube Unit MTU 104772 02 Kit de bolsa de desechos de MTU puntas 900907 Deflectores de desechos de MTU 900931 Cubiertas del contenedor de desechos de MTU 105523 Kit de transferencia de muestras APTIMA 301154C para utilizar con muestras en soluci n PreservCyt Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA 301162 Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para 301041 muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras 301040 de orina masculina y femenina Tubos de transporte de muestras de orina APTIMA para muestras 105575 de orina masculina y femenina Lej a soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M Agua para el TIGRIS DTS System consulte las especificaciones en el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System Guantes desechables Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Tapones penetrables APTIMA 105668 Tapones no penetrables de repuesto 103036A Tapones de repuesto para los kits de 100 pruebas Soluciones de reconstituci n de los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda CL0041 100 tapones TCR y reactivo de selecci n 501604 100 tapones Tapones de repuesto para los kits de 50 p
10. entre 2 C y 30 C Soluci n de reconstituci n de reactivo de amplificaci n GC APTIMA Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico APTIMA Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda GC APTIMA Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 6 502185ES Rev E Informaci n general Reactivo de selecci n APTIMA C Los siguientes reactivos permanecen estables cuando se almacenan a una temperatura entre 15 C y 30 C temperatura ambiente Reactivo de captura seleccionada GC APTIMA Soluci n de lavado APTIMA Tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA Reactivo de aceite APTIMA D El reactivo de captura seleccionada de trabajo GC wTCR GC se mantiene estable durante 60 d as cuando se almacena a una temperatura entre 15 C y 30 C No lo refrigere E Despu s de la reconstituci n el reactivo enzim tico el reactivo de amplificaci n GC y el reactivo de sonda GC permanecen estables durante 60 d as cuando se almacenan a una temperatura entre 2 C y 8 C F Deseche los reactivos reconstituidos y el wTCR sin usar despu s de 60 d as o una vez pasada la fecha de caducidad del lote maestro lo que suceda primero G Los controles son estables hasta la fecha indicada en los viales H Los reactivos de los frascos para 50 pruebas almacenados en el TIGRIS DTS System son estables durante 48 horas en el instrumento l Los reactivos de los frascos de 100 pruebas almacenados en el TIGRIS DTS System tienen 96 horas de estabi
11. lidos Adem s una lista de trabajo incluy 1 r plica adicional de una muestra del panel con 25 000 fg rRNA de GC ensayo En la misma lista de trabajo faltaba 1 r plica de otra muestra del panel con 25 000 fg rRNA de GC ensayo En una lista de trabajo faltaba 1 r plica de una muestra del panel con 250 000 fg de rRNA de GC ensayo Nota Las muestras con resultados de prueba no v lidos se excluyeron El an lisis de variabilidad de la se al incluye muestras con resultados discordantes Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 66 502185ES Rev E Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System Consulte el rendimiento anal tico espec fico del sistema PANTHER en el apartado Rendimiento anal tico del sistema PANTHER Estudio de equivalencia de la sensibilidad anal tica Los paneles de sensibilidad en mezcla de torundas endocervicales mezcla de muestras vaginales mezcla de muestras de orina y mezcla de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se prepararon a rRNA de GC de 250 fg ensayo y con ellos se analizaron 60 r plicas en el TIGRIS DTS System El porcentaje de positivos IC 9596 en el TIGRIS DTS System para la muestra de torunda endocervical fue del 100 95 1 100 para la muestra de torunda vaginal fue del 100 95 1 100 para la muestra de orina fue del 100 95 1 100 y para la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt fue del 10096 95 1 100 Estudio de panel cl
12. meros de captura y fase s lida Collares de reconstituci n 3 Pipetas de transferencia 2 Hoja de c digos de barras de lote maestro 1 hoja 1 hoja Kit de controles APTIMA almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad PGC Control positivo GC Control negativo CT APTIMA 5x 1 7 mL NCT cido nucleico GC no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC 250 fg ensayo PCT Control positivo CT Control negativo GC APTIMA 5x1 7mL NGC cido nucleico CT no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado 1 IFU CT 5 fg ensayo Los equivalentes de rRNA se calcularon a partir del tama o del genoma y de la raz n DNA RNA por c lula estimada de cada organismo Material necesario que debe adquirirse por separado Nota Se indica el n mero de cat logo de los materiales que pueden adquirirse de Gen Probe a menos que se especifique lo contrario N de cat logo TIGRIS DTS System 105118 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 24 502185ES Rev E TIGRIS DTS System N de cat logo Kit de fluidos del ensayo APTIMA 302382 soluci n de lavado APTIMA tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA y reactivo de aceite APTIMA Kit de Auto Detect APTIMA 301048
13. o de agua a 62 C x 1 C durante 30 5 minutos 12 Retire la gradilla del ba o de agua y seque los fondos de los tubos sobre un material absorbente 13 Aseg rese de que las tarjetas de sellado est n firmemente asentadas Si es necesario sustit yalas por tarjetas de sellado nuevas y selle bien las TTU 14 Agite la gradilla durante 60 segundos en el mezclador v rtex multitubo Consulte Notas de procedimiento Agitaci n con mezclador v rtex para los detalles Comience la agitaci n con mezclador v rtex antes de transcurridos 2 minutos de haber retirado la gradilla del ba o de agua 15 Sin retirar las tarjetas de sellado incube la gradilla a temperatura ambiente durante 30 5 minutos 16 Coloque la gradilla sobre la base magn tica del TCS durante 5 a 10 minutos 17 Cebe la l nea de la bomba de la estaci n de distribuci n bombeando la soluci n de lavado APTIMA a trav s del peine m ltiple de distribuci n Bombee suficiente l quido a trav s del sistema para que no haya burbujas de aire en la l nea y para que las diez boquillas distribuyan un flujo de l quido continuo 18 Encienda la bomba de vac o y desconecte el peine m ltiple de aspiraci n en el primer conector entre el peine m ltiple de aspiraci n y el frasco separador Aseg rese de que Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 16 502185ES Rev E Sistemas DTS el vacu metro cumpla la especificaci n de la prueba de fugas Esta lectura puede tardar 15
14. s informaci n Preparaci n de las gradillas 1 Deje que los controles y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes del procesamiento 2 No agite las muestras en un mezclador v rtex 3 Confirme visualmente que cada tubo de muestras satisface uno de los criterios siguientes a La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA azul en un tubo de transporte de muestras de torunda unisex b La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA rosa en un tubo de transporte de muestras de torunda vaginal c Un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina d La ausencia de una torunda en el tubo de transporte de muestras APTIMA con muestras de Pap en medio l quido PreservCyt 4 Inspeccione los tubos de muestras antes de perforarlos a Si un tubo de muestra contiene burbujas en el espacio entre el l quido y el tap n centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para eliminar las burbujas b Siun tubo de muestra tiene un volumen inferior al que se suele observar cuando se siguen las instrucciones de recogida centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para asegurarse de que no quede l quido en el tap n c Siel nivel de l quido de un tubo de muestra de orina no est entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta la muestra debe rechazarse No perfore un tubo sobrellenado d Siun muestra de orina contiene precipitados caliente la mue
15. y para todos fue del 99 2 129 130 Para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt la concordancia general para sujetos sintom ticos y asintom ticos y para todos los sujetos fue del 10096 Debido al n mero relativamente m s peque o de muestras procedentes de sujetos asintom ticos es posible que estos hallazgos no puedan generalizarse a las pruebas APTIMA GC del TIGRIS DTS System con muestras de sujetos asintom ticos Consulte la tabla 4 para los c lculos estimados del rendimiento del ensayo APTIMA GC para muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina y de orina masculina y femenina y la tabla 5a para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt analizadas en los sistemas DTS Las estimaciones de rendimiento cl nico para el TIGRIS DTS System con muestras de torunda endocervical torunda vaginal de torunda uretral masculina de orina masculina y femenina y de Pap en medio l quido PreservCyt ser n similares dados los resultados de la concordancia Tabla 12 Estudio de concordancia de las muestras cl nicas concordancias positivas negativas y generales por estado de s ntomas de concor de concor concor Sintoma Muestra Sexo N DTS DTS DTS DTS dancia dancia dancia TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva negativa general IC 95 IC 95 IC 95 ATE 100 100 100 Mujeres 88 po a 0 3 93 5 100 894 100 95 9 100 Torunda 100 100 100 LI
16. 99 0 hasta el 100 Tabla 5 Distribuci n de dispositivos de obtenci n de muestras cervicales utilizado para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Dispositivo de obtenci n de muestras Centro de recogida cl nico wa cervicales utilizado 1 2 3 4 5 6 Esp tula Cytobrush 0 124 475 287 57 364 1 307 Dispositivo tipo escobilla 100 0 0 0 240 0 340 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 49 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 5a Sensibilidad y especificidad del ensayo APTIMA GC en relaci n al estado de infecci n del paciente por estado de s ntomas y en general para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt S ntoma Resultado de la soluci n 3 js J Sensibilidad Especificidad 96 PreservCyt APTIMA GC IC 9594 IC 95 Positivo 7 0 0 2 ps 100 7 7 99 4 350 352 Sintom tico Negativo 0 0 0 350 59 0 100 98 0 99 9 Total 7 0 0 352 Positivo 5 0 T 1 m 83 3 5 6 99 8 1 280 1 282 Asintom tico Negativo 1 0 5 1 275 85 9 99 6 99 4 100 Total 6 0 6 1 276 Positivo 12 0 1 3 92 3 12 13 99 8 1 630 1 634 Todos Negativo 1 0 5 1625 640 998 99 4 99 9 Total 13 0 6 1 628 n A DGGGOGa a a EE OE EEoEg amp s gaB X KILLL LLLo AL AS Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Resultado posi
17. 99 3 97 2 99 4 25 97 6 99 3 97 9 99 2 30 97 6 99 3 98 4 99 0 Distribuci n de las RLU del ensayo APTIMA GC La figura 4 muestra la distribuci n RLU del ensayo APTIMA GC para los siguientes tipos de muestras analizadas en el estudio cl nico de sujetos sintom ticos muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico y muestras de orina masculina y femenina recogidas por los pacientes y de sujetos asintom ticos muestras de torunda endocervical y vaginal recogidas por el cl nico y muestras de torunda vaginal y de orina masculina y femenina recogidas por los pacientes La tabla 3 resume la distribuci n RLU para los resultados positivos totales y negativos totales as como para los resultados positivos falsos y negativos falsos para estos tipos de muestras en relaci n con el estado de infecci n del paciente En ciertos tipos de muestras hay una tendencia hacia una proporci n mayor de positivos verdaderos a medida que aumentan los valores de RLU Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 45 502185ES Rev E Valores esperados de los sistemas DTS 7 000 6 122 5 000 E 5 5 000 E Negativo Equivoco RLU baja Positivo 3 positivo O 4 000 Jj o o o 3 000 23 J S zZ 2 000 y 1 000 Jj 408 116 54 24 16 8 4 45 10 13 23 21 il 0 4 ppm Hh T T p e H T T T S E O o o O D B o 8 S S 3 j e y y gt D e e o o o o O o a L 3 4 is 5 v e o o SI o O o d S
18. Cryptococcus neoformans meningitidis serogrupo A Streptococcus mutans Citomegalovirus meningitidis serogrupo B Streptococcus pneumoniae Deinococcus radiodurans meningitidis serogrupo C 4 Streptococcus pyogenes Derxia gummosa meningitidis serogrupo D Streptococcus salivarius Eikenella corrodens meningitidis serogrupo Y Streptococcus sanguis Enterobacter aerogenes N N N N N N meningitidis serogrupo W135 Streptomyces griseinus Enterobacter cloacae Neisseria cinerea 4 Trichomonas vaginalis Entercoccus avium Neisseria dentrificans Ureaplasma urealyticum Entercoccus faecalis Neisseria elongata 3 Vibrio parahaemolyticus Entercoccus faecium Neisseria flava Yersinia enterocolitica Erwinia herbicola Neisseria flavescens 2 Erysipelothrix rhusiopathiae Neisseria lactamica 9 n n mero de cepas analizadas Todos los organismos analizados dieron un resultado negativo en el ensayo APTIMA GC Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 502185ES Rev E Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Substancias interferentes Las siguientes sustancias interferentes se a adieron individualmente a muestras de torunda Pap en medio l quido PreservCyt y orina 1096 de sangre gel anticonceptivo espermicida humectante anest sico hemorroidal aceite corporal polvo crema antif ngica lubricantes vaginales duch
19. No infectado N C N C 0 1 1 No infectado 11 10 21 No infectado N C 0 1 1 No infectado 1 1 2 No infectado N C 0 1 No infectado N C N C N C 0 1 No infectado N C 5 4 9 No infectado 1 1 2 Total 811 640 1 451 A Sint sintom tico Asint asintom tico N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TF torunda endocervical femenina OF orina femenina TVP torunda vaginal recogida por la paciente TVC torunda vaginal recogida por el cl nico Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 56 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 7e Resultados del estado de infecci n del paciente en el estudio cl nico de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt para N gonorrhoeae Torunda endocervical Estado de s ntomas Estado de infecci n del paciente Eyed uia ndi uio Sintom tico Asintom tico Infectado Positivo Positivo 7 6 No infectado Negativo Negativo 352 1 276 No infectado Negativo Positivo 0 5 No infectado Equ voco Positivo 0 1 Total 359 1 288 Distribuci n RLU de controles APTIMA La distribuci n de las RLU para el Control positivo GC Control negativo CT de APTIMA y para el Control positivo CT Control negativo GC de APTIMA de todos los ciclos del ensayo APTIMA GC realizados durante l
20. de procedimiento ssssssssssss 19 DA E PARISER Sistema PANTHER eene 31 Reactivos y materiales suministrados 31 Material necesario que debe adquirirse por separado 32 Materiales opcionales sssseseeese 33 Procedimiento de prueba del sistema PANTHER 33 Notas de procedimiento sss 36 Reactivos y materiales suministrados Material necesario que debe adquirirse por separado 24 Materiales opcionales ssssseeeeses 26 Procedimiento de prueba del TIGRIS DTS System 26 Notas de procedimiento ssssssssssss 29 502185ES Rev E Informaci n general Informaci n general Uso previsto El ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA es una prueba de sonda de cido nucleico de amplificaci n seleccionada que utiliza captura seleccionada para la detecci n cualitativa in vitro de RNA ribos mico ribosomal RNA rRNA de Neisseria gonorrhoeae GC para ayudar en el diagn stico de la enfermedad urogenital gonoc cica utilizando el TIGRIS DTS System o el sistema PANTHER o utilizando la instrumentaci n semiautomatizada de los sistemas DTS seg n se especifique El ensayo se puede utilizar para analizar los siguientes muestras de individuos sintom ticos muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico y muestras de orina masculina
21. en el ba o de agua retire con cuidado la tarjeta de sellado y con la pipeta de repetici n a ada 25 uL de reactivo enzim tico reconstituido a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n deben ser ahora naranjas 7 Cubra inmediatamente los tubos con tarjetas de sellado nuevas retire la gradilla del bario de agua y mezcle los tubos de reacci n agitando suavemente la gradilla con la mano 8 Incube la gradilla en un ba o de agua a 42 C 1 C durante 60 15 minutos DE d E Moe 1 Consulte la Hoja de especificaciones del nivel de vac o del sistema de captura seleccionada al final del Target Capture System Operator s Manual Manual del usuario del sistema de captura seleccionada o p ngase en contacto con el servicio t cnico Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 17 502185ES Rev E Sistemas DTS E Ensayo de protecci n de la hibridaci n Hybridization Protection Assay HPA Si se usa el ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 La pipeta de repetici n utilizada en los pasos de hibridaci n y selecci n debe utilizarse de forma dedicada s lo en estos pasos Consulte Advertencias y precauciones 1 Hibridaci n a Retire la gradilla del ba o de agua y transfi rala al rea del HPA Use la pipeta de repetici n para afiadir 100 uL del reactivo de sonda GC reconstituido a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n deben ser ahora amarillas b Cubra los
22. en el medio PreservCyt C psittaci VR601 se analiz a 8 0 x 10 c lulas ensayo y C psittaci VR125 se analiz a 1 0 x 10 c lulas ensayo C pneumoniae se analiz a 4 0 x 10 c lulas ensayo y U urealyticum se analiz a 6 7 x 10 c lulas ensayo Los virus se analizaron como sigue a virus herpes simple I 2 5 x 10 TCIDsg ensayo b virus herpes simple Il 6 0 x 10 TCIDa5o ensayo c papipomavirus humano 16 2 9 x 10 copias de DNA ensayo y d citomegalovirus 4 8 x 10 c lulas ensayo La lista de organismos analizados se muestra en la tabla 11 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 59 502185ES Rev E Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Tabla 11 Especificidad anal tica Organismo Organismo Organismo Achromobacter xerosis Escherichia coli Neisseria mucosa 3 Acinetobacter calcoaceticus Flavobacterium meningosepticum Neisseria sicca 3 Acinetobacter Iwoffi Fusobacterium nucleatum Neisseria subflava 14 Actinomyces israelii Gardnerella vaginalis Neisseria perflava Actinomyces pyogenes Gemella haemolysans Neisseria polysaccharea Aerococcus viridans Haemophilus ducreyi Paracoccus denitrificans Aeromonas hydrophila Haemophilus influenzae Peptostreptococcus anaerobius Agrobacterium radiobacter Virus herpes simple Peptostreptococcus productus Alcaligenes faecalis Virus herpes simple Il Plesiomonas shigelloi
23. estado de infecci n del paciente desconocido si faltaban resultados que hac an imposible alcanzar una determinaci n concluyente sobre el estado de infecci n Los resultados de estos sujetos no se incluyeron en ninguno de los c lculos de rendimiento De los 7 704 resultados del ensayo APTIMA GC hubo 22 muestras 0 2996 que produjeron inicialmente resultados no v lidos o equ vocos Tras repetir la prueba en estas muestras 4 siguieron dando un resultado equ voco y se excluyeron de los an lisis Las 18 muestras restantes produjeron resultados de prueba v lidos al repetir la prueba y se utilizaron en los c lculos de rendimiento cl nico Tabla 4 Sensibilidad y especificidad del ensayo APTIMA GC en relaci n al estado de infecci n del paciente por estado de s ntomas y en general para torunda uretral masculina orina masculina torunda endocervical femenina orina femenina torunda vaginal recogida por paciente asintom tica y torunda vaginal recogida por el cl nico Muestra Estado de N PR PF NR NF Sensibilidad IC 95 Especificidad IC 95 s ntomas Torunda Sintom tico 575 171 10 393 1 99 4 96 8 100 97 5 95 5 98 8 Hombres Sintom tico 576 171 4 400 1 99 4 96 8 100 99 0 97 5 99 7 Orina Asintom tico 745 9 5 730 1 90 0 55 5 99 7 99 3 98 4 99 8 Todos 1 321 180 9 1 130 2 98 9 96 1 99 9 99 2 98 5 99 6 Sintom tico 805 52 8 744 1 98 1 89 9 100 98 9 97 9 99 5
24. estudio cl nico se inscribieron y se evaluaron 1 647 mujeres sintom ticas y asintom ticas que asist an a cl nicas de Obstetricia y Ginecolog a de planificaci n familiar de salud p blica de mujeres y de ETS De estos sujetos 1 288 eran asintom ticos y 359 sintom ticos tabla 7e Los sujetos inscritos proced an de centros con una prevalencia de GC del 0 0 al 5 0 tabla 6a Se recogieron dos muestras de cada sujeto elegible una muestra de Pap en medio l quido PreservCyt y una muestra de torunda endocervical Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se recogieron con la esp tula Cytobrush o con un dispositivo de obtenci n de muestras cervicales de cepillo tipo escobilla La distribuci n de dispositivos de obtenci n de muestras cervicales se resume en la tabla 5 por centro de recogida de muestras y en general Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se procesaron de acuerdo con el ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual del usuario del procesador ThinPrep 2000 y del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA Una vez procesada la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt con el procesador ThinPrep 2000 la muestra se transfiri al kit de transferencia de muestras APTIMA para su an lisis con el ensayo APTIMA GC La sensibilidad y la especificidad del ensayo APTIMA GC en muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se calcularon comparando los resultados con el estado de infecci n de la p
25. infecciones del tracto genital inferior sin complicaciones y pueden ser asintom ticas Sin embargo si se dejan sin tratamiento en las mujeres las infecciones pueden ascender y provocar enfermedad inflamatoria p lvica EIP La enfermedad inflamatoria p lvica EIP se puede manifestar como endometritis salpingitis peritonitis p lvica y abscesos tubo ov ricos Un porcentaje m s pequerio de personas con infecciones gonoc cicas podr an desarrollar infecci n gonoc cica diseminada IGD 8 11 El diagn stico convencional de infecci n por GC requiere aislar el organismo en un medio selectivo o la observaci n de los diplococos en frotis con tinci n de Gram 9 Los m todos de cultivo pueden tener una buena sensibilidad cl nica pero dependen en gran medida de la correcta manipulaci n de las muestras Un almacenamiento y transporte incorrectos de la muestra puede provocar la p rdida de la viabilidad del organismo y producir resultados negativos falsos Adem s una t cnica de obtenci n de muestras deficiente materiales t xicos de recogida de muestras y la inhibici n del crecimiento por componentes de las secreciones corporales pueden provocar tambi n resultados negativos falsos 3 10 Los m todos no de cultivo m s utilizados en la detecci n de GC incluyen pruebas de sonda de DNA directas y pruebas de amplificaci n de cido nucleico nucleic acid amplification test NAAT La primera generaci n de NAAT para GC tiene problemas
26. inspeccione los tubos visualmente para asegurarse de que todo el l quido ha sido aspirado y de que todos los tubos contienen granos de part culas magn ticas Si hay l quido visible coloque la gradilla nuevamente en la base magn tica del TCS durante 2 minutos y repita la aspiraci n de esa TTU con las mismas puntas utilizadas anteriormente para cada muestra Nota Se puede aceptar el tubo si despu s de terminada la aspiraci n se puede ver alg n grano de part culas magn ticas Si no se puede ver ning n grano la muestra debe volverse a analizar Si la misma muestra no contiene un grano de part culas magn ticas en este paso en un ciclo subsiguiente esto podr a ser indicativo de un problema espec fico de la muestra En este caso se recomienda recoger de nuevo la muestra D Amplificaci n Si se usa el bafio de calor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 1 Usela pipeta de repetici n para afiadir 75 uL de reactivo de amplificaci n reconstituido GC a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n en la gradilla deben ser ahora rojas Use la pipeta de repetici n para a adir 200 uL de reactivo de aceite a cada tubo de reacci n Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y ag telos en el mezclador v rtex multitubo Incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C 1 C durante 10 5 minutos Transfiera la gradilla al ba o de agua a 42 C 1 C e inc belo durante 5 2 minutos Con la gradilla
27. n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 S Reactivo de selecci n APTIMA 1x31 mL Soluci n de tamp n borato 600 mM con surfactante Collares de reconstituci n 3 Tarjetas de sellado 1 envase Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad TCR Reactivo de captura seleccionada GC APTIMA 1x22mL Soluci n de tamp n sal con un contenido de olig meros de captura y fase s lida WwW Soluci n de lavado APTIMA 1 x 402 mL 10 mM de soluci n de tamp n HEPES con un contenido de detergente lt 2 DF Tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA 1 x 402 mL Soluci n de tamp n bicarbonato 800 mM 0 Reactivo de aceite APTIMA 1 x 24 6 mL Aceite de silicona Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 11 502185ES Rev E Sistemas DTS Material necesario que debe adquirirse por separado Nota Se indica el n mero de cat logo de los materiales que pueden adquirirse de Gen Probe a menos que se especifique lo contrario N de cat logo Lumin metro LEADER HC 104747 01 Sistema de captura seleccionada Target Capture System TCS 104555 de GEN PROBE Incubadoras y mezcladores v rtex 2 mezcladores v rtex multitubo 102160 3 bafios de agua circulante 104586 62 9C 1 C 42 C 1 C 62 C 1 3 espaciadores de bafio de agua 104627 O 2 bafios de calor seco mezcladores v rtex SB
28. nica estableci la sensibilidad especificidad y valores predictivos del ensayo APTIMA GC utilizando muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente y muestras de orina masculina y femenina La primera investigaci n tambi n evalu la precisi n del ensayo APTIMA GC cuando se realiz de acuerdo con las directrices NCCLS 12 La segunda investigaci n cl nica estableci los valores de la sensibilidad la especificidad y predictivos del ensayo APTIMA GC utilizando PreservCyt un componente del sistema ThinPrep 2000 como medio de transporte Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se evaluaron tambi n para precisi n en laboratorio con el ensayo APTIMA GC Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 43 502185ES Rev E Valores esperados de los sistemas DTS Valores esperados de los sistemas DTS Prevalencia La prevalencia de GC en poblaciones de pacientes depende de factores de riesgo tales como la edad el sexo la presencia de s ntomas el tipo de cl nica y el m todo de prueba En las tablas 1 y 1a se muestra un resumen de la prevalencia de GC en Norteam rica por tipo de muestra de acuerdo con el ensayo APTIMA GC para dos investigaciones cl nicas Consulte los apartados Estudio cl nico de muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina torunda vaginal y orina y Estudio de muestras cl nicas de Pap en medio l quido P
29. para el an lisis de la misma muestra de Pap en medio l quido PreservCyt tanto antes como despu s del procesamiento de la citolog a ThinPrep N No se ha evaluado el uso con los ensayos APTIMA de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt procesadas con instrumentos distintos al procesador ThinPrep 2000 O Las muestras de torunda vaginal recogidas por las pacientes son una opci n para el cribado de mujeres cuando el examen p lvico no est indicado P La aplicaci n de las muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente se limita a centros m dicos que cuentan con recursos y asesoramiento para explicar los procedimientos y las precauciones Q El ensayo APTIMA GC no ha sido validado para su uso con muestras de torunda vaginal recogidas por las pacientes en su domicilio R No se ha evaluado el rendimiento de las muestras de torunda vaginal en mujeres embarazadas S No se ha evaluado el rendimiento de las muestras en torundas endocervicales vaginales o uretrales masculinas las muestras de orina masculina o femenina ni las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt en adolescentes menores de 16 afios T Debido al bajo valor predictivo de un resultado positivo observado en los varones asintom ticos participantes en el estudio cl nico no se recomienda analizar muestras de exudado uretral de varones asintom ticos U No se ha determinado el rendimiento del TIGRIS DTS System a altitudes superiores alos 2 240 m 7 355 p
30. pen ltima posici n de una lista de trabajo Esta etiqueta de control es rosa El texto de la etiqueta es CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC El Control positivo GC Control negativo CT debe estar en la segunda posici n y en la ltima posici n de una lista de trabajo Esta etiqueta de control es azul verdosa El texto de la etiqueta es CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT 2 Cada tubo de control APTIMA se puede analizar una vez Los intentos de pipetear m s de una vez del tubo pueden dar lugar a errores por volumen insuficiente B Temperatura La temperatura ambiente se define como de 15 C a 30 C C Talco de guantes Como sucede en cualquier sistema de reactivos el exceso de talco en algunos guantes puede ser causa de contaminaci n de los tubos abiertos Se recomienda utilizar guantes sin talco Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 29 502185ES Rev E TIGRIS DTS System D Protocolo de supervisi n de la contaminaci n en laboratorios para el TIGRIS DTS System Existen numerosos factores espec ficos de los laboratorios que pueden contribuir a la contaminaci n incluido el volumen de la prueba el flujo de trabajo la prevalencia de la enfermedad y otras actividades de laboratorio Estos factores deben tenerse en consideraci n al establecerse la frecuencia con que se supervisar la contaminaci n Los intervalos para la supervisi n de la contaminaci n deben establecerse en funci n de las pr cticas y proce
31. tecnol gicos que han limitado su rendimiento Estos problemas incluyen el laborioso procesamiento de las muestras y la inhibici n de la muestra lo que puede provocar resultados negativos falsos 6 El ensayo de Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 2 502185ES Rev E Informaci n general Neisseria gonorrhoeae APTIMA ensayo APTIMA GC es una NAAT de segunda generaci n que utiliza las tecnolog as de captura seleccionada amplificaci n mediada por transcripci n Transcription Mediated Amplification TMA y el ensayo de protecci n de la hibridaci n Hybridization Protection Assay HPA para simplificar el procesamiento de las muestras amplificar el rRNA seleccionado y detectar el amplic n respectivamente Ciertos estudios de comparaci n del rendimiento y la inhibici n de muestras en distintos sistemas de amplificaci n han demostrado los beneficios de las tecnolog as de captura seleccionada TMA y HPA 4 7 De acuerdo con las directrices de cribado de 2002 para Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae los CDC recomiendan una serie de opciones para el seguimiento en una prueba de cribado positiva si se puede esperar un valor predictivo positivo bajo o si un resultado positivo falso tendr a graves consecuencias psicosociales o legales 1 Una de estas opciones para pruebas adicionales puede ser una prueba de amplificaci n de cido nucleico aprobada por la FDA diferente que utilice una diana diferente a la de la prueba in
32. testing J Clin Microbiol 36 2356 2358 22 Verkooyen R P A Luijendijk W M Huisman W H F Goessens J A J W Kluytmans J H Rijsoort Vos and H A Verbrugh 1996 Detection of PCR inhibitors in cervical specimens by using the AMPLICOR Chlamydia trachomatis assay J Clin Microbiol 34 3072 3074 23 Vincelette J J Schirm M Bogard A Bourgault D Luijt A Bianchi P C Van Voorst Vader A Butcher and M Rosenstraus 1999 Multicenter evaluation of the fully automated COBAS AMPLICOR PCR test for detection of Chlamydia trachomatis in urogenital specimens J Clin Microbiol 37 74 80 sd CE Gen Probe Incorporated San Diego CA 92121 EMERGO EUROPE Informaci n de contacto para EE UU e internacional Molenstraat 15 Atenci n al cliente 1 858 410 8002 customerservice 2gen probe com 2513 BH La Haya Pa ses Bajos Servicio t cnico 1 858 410 8511 technicalsupport gen probe com Llamadas gratis desde EE UU y Canad Atenci n al cliente 1 800 523 5001 Servicio t cnico 1 888 484 4747 www gen probe com GEN PROBE GEN PROBE y su dise o APTIMA APTIMA y su dise o APTIMA COMBO 2 DTS LEADER PANTHER SB100 y TIGRIS son marcas comerciales de Gen Probe Incorporated eppendorf estilizado y REPEATER son marcas comerciales de Eppendorf AG PRESERVCYT y THINPREP son marcas comerciales de Hologic Inc KOVA TROL es una marca comercial de Hycor Biomedical Inc RAININ es una marca comercial de Raini
33. total de 2 923 muestras negativas La proporci n de arrastre general fue del 096 con un intervalo de confianza del 9596 de O 0 196 Un total de 17 muestras negativas de ciclos de t tulo elevado se registraron como no v lidas y se excluyeron del c lculo Bibliograf a 1 Centers for Disease Control and Prevention 2002 Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections United States Morbid and Mortal Weekly Rep 51 RR 15 2 Centers for Disease Control and Prevention 2011 Sexually Transmitted Disease Surveillance 2010 Atlanta GA U S Department of Health and Human Services November 3 Ching S H Lee E W Hook Ill M R Jacobs and J Zenilman 1995 Ligase chain reaction for detection of Neisseria gonorrhoeae in urogenital swabs J Clin Microbiol 33 3111 3114 4 Chong S D Jang X Song J Mahony A Petrick P Barriga and M Chernesky 2003 Specimen Processing and Concentration of Chlamydia trachomatis Added Can Influence False Negative Rates in the LCx Assay but Not in the APTIMA Combo 2 Assay When Testing for Inhibitors J Clin Microbiol 41 778 782 CUMITECH 31 Verification and Validation of Procedures in the Clinical Microbiology Laboratory ASM PRESS FEBRUARY 1997 6 Farrel D J 1999 Evaluation of AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae PCR using cppB nested PCR and 168 rRNA PCR J Clin Microbiol 37 386 390 7 Gaydos C A T C Quinn D Willis A Weissfeld E
34. 0 5 100 2 0 8 1 124 3 0 8 4 475 4 14 4 287 5 0 0 0 297 6 0 5 2 364 Todos 1 0 16 1647 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 44 502185ES Rev E Valores esperados de los sistemas DTS Valores predictivos positivos y negativos para tasas de prevalencia hipot ticas en Norteam rica Los valores predictivos positivos y negativos VPP y VPN calculados para diferentes tasas de prevalencia hipot ticas con el ensayo APTIMA GC se muestran en la tabla 2 Estos c lculos se basan en las tasas de prevalencia hipot ticas y en la sensibilidad y la especificidad generales calculadas a partir del estado de infecci n de los pacientes La sensibilidad y especificidad generales para GC fueron del 97 696 y del 99 395 respectivamente tabla 2 El VPP y el VPN reales para muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico torunda vaginal recogidas por la paciente y orina masculina y femenina se muestran en la tabla 6 para cada centro cl nico y en general El VPP y el VPN reales para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se muestran en la tabla 6a Tabla 2 Valores predictivos positivos y negativos para tasas de prevalencia hipot ticas en Norteam rica Tasa de prevalencia hipot tica 24 Sensibilidad Especificidad 76 VPP VPN 1 97 6 99 3 58 7 100 0 2 97 6 99 3 74 1 100 0 5 97 6 99 3 88 1 99 9 10 97 6 99 3 94 0 99 7 15 97 6 99 3 96 1 99 6 20 97 6
35. 0 96 7 29 30 100 Orina Seguimiento 1 Baja 250 30 100 100 99 3 96 0 100 femenina Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 18 100 100 Muy baja 25 30 90 27 30 100 Seguimiento 2 Baja 250 30 100 100 97 8 93 8 99 5 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 25 30 100 100 Pap en medio l quido Baja 250 30 100 100 100 97 2 100 PreservCyt Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 No analizadas en los dos sistemas debido a un volumen insuficiente de la muestra Estudio de equivalencia de la especificidad anal tica Para un ensayo de amplificaci n de cidos nucleicos la especificidad anal tica con respecto a organismos individuales est en gran medida determinada por la qu mica del ensayo por ejemplo las secuencias oligonucle tidas m s que por la plataforma Dado que los reactivos del ensayo APTIMA GC son id nticos entre el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS los experimentos de especificidad anal tica del TIGRIS DTS System se dise aron para centrarse en los aislados de cultivo m s desafiantes Estos organismos inclu an los conocidos por sus reacciones cruzadas en otros ensayos de amplificaci n Se seleccionaron 24 aislados de cultivo del panel de organismos de la tabla 11 incluidos 17 organismos que est n ntimamente relacionados con GC Todos los organismos analizados dieron resultados negativos con la excepci n de un 1 648 resultado positivo f
36. 00 99 5 9722 100 66 7 100 6 24 19 5 269 1 68 950 751 999 982 95 8 99 4 792 99 6 7 102 0 0 10 0 00 N C 100 96 4 100 N C 100 8 48 0 47 0 21 100 25 100 100 925 100 4100 100 Todos 1 440 72 13 1353 2 5 97 3 90 6 99 7 99 0 984 995 847 99 9 Mujeres 1 227 11 2 213 41 53 91 7 61 5 99 8 99 1 96 7 99 9 84 6 99 5 2 198 30 0 167 1 15 7 96 8 83 3 99 9 100 97 8 100 100 99 4 3 113 4 0 109 O 35 100 39 8 100 100 96 7 100 100 100 4 265 5 0 260 0 1 9 100 47 8 100 100 98 6 100 100 100 Orina 5 199 2 0 197 O 1 0 100 158 100 100 98 1 100 100 100 6 296 16 1 275 4 68 80 0 563 943 996 980 100 294 1 98 6 7 102 0 0 102 0 00 N C 100 96 4 100 N C 100 8 49 1 0 48 0 20 100 2 5 100 100 92 6 100 100 100 Todos 1449 69 3 1 371 6 52 920 834 97 0 998 994 100 958 99 6 1 70 5 1 64 0 71 100 478 100 98 91 7 100 833 100 2 46 7 1 38 0 152 100 590 100 974 86 5 99 9 87 5 100 3 45 2 0 43 0 44 100 158 100 100 918 100 100 100 UNUS Tana 4 152 1 0 1581 0 07 100 25 100 100 97 6 100 100 100 por la AERA 5 1300 1 0 129 0 08 100 25 100 100 97 2 100 100 100 paciente m tica 6 75 5 2 68 0 67 100 478 100 97 1 90 1 99 7 714 100 7 68 0 0 68 0 00 N C 100 94 7 100 N C 100 8 43 0 0 43 0 00 N C 100 91 8 100 N C 100 Todos 629 21 4 604 0 33 100 839 100 993 98 3 99 8 84 0 100 1 227 12 2 213 0 53 100 735 100 9
37. 05668 Tapones no penetrables de repuesto 103036A Tapones de repuesto para los kits de 100 pruebas Soluciones de reconstituci n de los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda CL0041 100 tapones TCR y reactivo de selecci n 501604 100 tapones Materiales opcionales N de cat logo Kit de controles APTIMA 301110 Potenciador de lej a GEN PROBE 302101 para la limpieza sistem tica de las superficies y el equipo Procedimiento de prueba del sistema PANTHER Nota Consulte el PANTHER System Operator s Manual Manual del usuario del sistema PANTHER para informaci n adicional sobre los procedimientos del sistema PANTHER A Preparaci n del rea de trabajo 1 Limpie las superficies de trabajo en las que van a preparar los reactivos y las muestras Limpie las superficies de trabajo con una soluci n de hipoclorito de sodio al 2 596 3 596 0 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa en la que se vayan a preparar los reactivos y las muestras con cubiertas absorbentes con forro de pl stico que est n limpias para mesas de laboratorio B Reconstituci n y preparaci n de reactivos de un nuevo kit Nota La reconstituci n de los reactivos debe realizarse antes de iniciar cualquier tarea en el sistema PANTHER 1 Para
38. 100 100 99 8 Total 5 0 0 470 Positivo 1 0 0 3 z 100 1 1 99 0 283 286 4 Negativo 0 0 3 280 0 3 2 5 100 97 0 99 8 25 0 100 Total 1 0 3 283 Positivo 0 0 0 0 100 297 297 5 Negativo 0 0 0 297 0 0 N C 98 8 100 N C 100 Total 0 0 0 297 Positivo 1 0 1 0 100 1 1 99 7 362 363 6 Negativo 0 0 2 360 0 3 2 5 100 98 5 100 50 0 100 Total 1 0 3 360 Positivo 12 0 1 3 92 3 12 13 99 8 1 630 1 634 TODOS Negativo 1 0 5 1 625 0 8 64 0 99 8 99 4 99 9 75 0 99 9 Total 13 0 6 1 628 nn n_n o o _ o A _ _ ___ A A e Hr N C no corresponde Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Una muestra tuvo un resultado discordante Resultado equ voco en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo
39. 100 735 100 100 916 100 100 100 8 NC NC NIC NIC NIC NC N C N C N C N C Todos 575 171 10 393 1 299 994 96 8 100 975 95 5 98 8 945 997 Hombres 1 252 53 1 198 O 210 100 933 100 995 9722 100 98 1 100 2 353 68 3 280 2 198 971 9041 997 98 9 96 9 99 8 95 8 993 3 4 0 0 4 0 00 N C 100 39 8 100 N C 100 4 NC NC NIC NIC NIC NC N C N C N C N C Orina 5 20 8 3 189 0 40 100 631 100 984 955 997 72 7 100 6 35 39 2 264 0 128 100 910 100 992 97 3 99 9 95 1 100 7 207 12 0 195 0 58 100 735 100 100 981 100 100 100 8 N C N C N C N C N C N C N C N C N C N C Todos 1 321 180 9 1 130 2 13 8 98 9 96 1 99 9 99 2 98 5 99 6 95 2 99 8 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 50 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 6 Sensibilidad especificidad y valores predictivos del ensayo APTIMA GC en relaci n al estado de infecci n del paciente por centro cl nico y en general para torunda uretral masculina orina masculina torunda endocervical femenina orina femenina torunda vaginal recogida por paciente asintom tica y torunda vaginal recogida por el cl nico continuaci n Muestra Centro N PR PF NR NF jn e co pei pn 1 226 12 2 212 0 53 100 735 100 991 967 999 85 7 100 2 197 29 3 164 1 152 96 7 828 999 982 94 8 99 6 90 6 994 3 14 4 1 10 0 35 100 398 100 991 950 100 80 0 100 4 260 5 1 254 0 19 100 478 100 99 6 97 100 83 3 100 Torunda 5 19 2 1 196 0 10 100 158 1
40. 100 105524 Puede que se requieran ba os SB100 adicionales a medida que aumente el volumen de la prueba Kit de Auto Detect APTIMA 301048 2 pipeteadores eppendorf Repeater Plus 105725 2 pipeteadores 1 000 uL RAININ PR1000 901715 pipeteador eppendorf 20 uL a 200 uL 105726 Puntas de pipeta de repetici n 2 5 mL 21 381 329 Puntas de pipeta de repetici n 5 0 mL 21 381 330 Puntas de pipeta de repetici n 25 0 mL 21 381 115 Puntas estilo P1000 105049 punta de di metro especial distribuida solamente por Gen Probe Puntas de pipeta de 20 uL a 200 uL 705512 Fisher Unidades de diez tubos Ten Tube Unit TTU TUO0022 Casetes de diez puntas Ten Tip Cassette TTC 104578 Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para 301041 muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras 301040 de orina masculina y femenina Tubos de transporte de muestras de orina APTIMA para muestras 105575 de orina masculina y femenina Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA 301162 Kit de transferencia de muestras APTIMA 301154C Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Lej a soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M Recipientes est ndar para recogida de orina sin conservantes Recipiente de pl stico con tap n grande Tapones penetrables APTIMA 105668 Tapones no penetrables de repuesto 103036A Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 12 502185ES
41. 9 1 967 999 85 7 100 2 197 30 3 163 1 157 96 8 83 3 99 9 982 94 8 99 6 90 9 994 3 13 4 0 109 0 35 100 398 100 100 967 100 100 100 Recogida vos 4 263 5 3 255 0 19 100 478 100 98 8 966 998 62 5 100 por el sud 5 19 2 0 197 0 10 100 158 100 100 981 100 100 100 Elingo 6 295 19 3 272 1 68 950 75 1 99 9 989 968 998 86 4 99 6 7 102 0 0 102 0 00 N C 100 96 4 100 N C 100 8 50 1 0 49 0 20 100 25 100 100 927 100 100 100 Todos 1 446 73 11 1360 2 52 97 3 90 7 99 7 99 2 98 6 99 6 86 9 99 9 PR positivo real PF positivo falso NR negativo real NF negativo falso Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 51 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 6a Sensibilidad especificidad y valores predictivos del ensayo APTIMA GC en relaci n al estado de infecci n del paciente por centro cl nico y en general para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Resultado de la soluci n Prev Sensibilidad 96 Especificidad Centro PreservCyt l l 96 IC 9594 IC 9594 VPP VPN APTIMA GC Positivo 5 0 0 0 100 5 5 100 95 95 1 Negativo 0 0 0 95 5 0 47 8 100 96 2 100 100 100 Total 5 0 0 95 Positivo 1 0 0 0 100 1 1 100 123 123 2 Negativo 0 0 0 123 0 8 2 5 100 97 0 100 100 100 Total 0 0 123 Positivo 4 0 0 0 80 0 4 5 100 470 470 3 Negativo 1 0 0 470 1 1 28 4 99 5 99 2
42. 96 vol vol de sangre en muestras de torunda o de Pap en medio l quido PreservCyt o del 30 vol vol de sangre en muestras de orina Todas las muestras que no conten an la diana se identificaron correctamente como negativas Estos resultados son id nticos a los demostrados para el TIGRIS DTS System cuando se enriquecen con las mismas cantidades de sangre La sangre a adida a las muestras de torunda PreservCyt y de orina a concentraciones mucho m s altas de lo que podr a esperarse con la obtenci n normal de muestras no interfiri con los resultados en el sistema PANTHER Estudios de arrastre para el sistema PANTHER Para establecer que el sistema PANTHER reduce al m nimo el riesgo de resultados positivos falsos provocados por contaminaci n de arrastre se realiz un estudio anal tico de varios ciclos utilizando paneles enriquecidos en tres sistemas PANTHER El arrastre se evalu utilizando aproximadamente un 20 de muestras de GC de t tulo elevado dispersadas entre muestras negativas Los ciclos incluyeron grupos de muestras positivas altas con grupos de muestras negativas as como muestras positivas altas individuales dispersadas en un patr n espec fico dentro del ciclo Se hicieron muestras de t tulo elevado utilizando rRNA de GC a adido a STM para dar una concentraci n final de 5 x 10 fg rRNA reacci n equivalente de rRNA de 2 5 x 10 CFU mL Las pruebas se llevaron a cabo utilizando 5 ciclos en tres sistemas PANTHER con un
43. AA GEN PROBE APT MA Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA Para uso diagn stico in vitro Para exportaci n de EE UU solamente Informaci n general leere 2 Uso previsto i db o IRE Re 2 Resumen y explicaci n de la prueba oooococccocooccoco o 2 Principios del procedimiento au ee ee 3 Advertencias y precauciones oooocoococc elles 4 Requisitos de almacenamiento y manipulaci n de los reactivos 6 Recogida y almacenamiento de muestras 8 Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente cesse ee exu Rea Rech ACTA XR 38 Limitaclones ia sa a c 4er ph nx A A A rb RR 41 Resultados del estudio cl nico elles 43 Valores esperados de los sistemas DTS Llluusuuu 44 Rendimiento cl nico en sistemas DTS 0oooooccccoocoo oo 47 Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System 63 Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS SysteM 67 Rendimiento anal tico del sistema PANTHER 71 Bibliograf a isss i a RR rr Rx RR ERREUR ER DRE aa 73 DTS ssa TIGR S 0 ES Sistemas DT iii TIGRIS DTS System Reactivos y materiales suministrados Material necesario que debe adquirirse por separado 12 Materiales opcionales ssssssseeesse 13 Procedimiento de prueba de los sistemas DTS 13 Notas
44. ANH SIE m Lond Eoad MCV x1 000 IEN x1 000 WGV x1 000 AEN 0 859 4 6 100 1 7 N C 0 0 N C 0 3 N C 0 7 N C 2 7 N C 250 429 4 148 100 236 5 7 170 4 1 212 5 1 94 9 2 3 222 5 3 2 500 429 5 361 99 8 275 5 1 145 2 7 273 5 1 25 1 0 5 482 9 0 25 000 430 5 871 100 325 5 5 163 2 8 303 5 2 106 1 8 176 3 0 250 000 431 6 037 100 317 5 2 167 2 8 303 5 0 126 2 1 186 3 1 a O A NwEZEECEBISGAM Concord Concordancia Conc Concentraci n CV Coeficiente de variaci n N C No corresponde para muestras negativas RLU Unidades relativas de luz SD Desviaci n est ndar 1Los valores de SD y CV se establecen en 0 y 0 0 respectivamente de acuerdo con el modelo de efectos aleatorios si la variabilidad debida a esta fuente en relaci n con los errores aleatorios y o la variaci n de otras fuentes es num ricamente negativa Se excluyeron 4 muestras de este an lisis por resultados finales no v lidos Adem s en una lista de trabajo faltaba 1 r plica de cada muestra de un panel negativo para GC Se excluyeron 3 muestras de este an lisis por resultados finales no v lidos Se excluyeron 2 muestras de este an lisis por resultados finales no v lidos Adem s en dos listas de trabajo faltaba 1 r plica de cada muestra de un panel con 2 500 fg rRNA de GC ensayo y una lista de trabajo inclu a 1 r plica adicional de una muestra del panel con 2 500 fg rRNA de GC ensayo Se excluyeron 2 muestras de este an lisis por resultados finales no v
45. APTIMA GC Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 52 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 7a Resultados de torundas uretrales masculinas de pacientes sintom ticos de sujetos infectados o no infectados con N gonorrhoeae de acuerdo con el estado de infecci n del paciente rasis Ensayo os 2 NAAT 2 Ensayo APTIMA GC e paciente TM OM TM OM TM Infectado 164 Infectado 1 Infectado E 3 Infectado 1 Infectado 5 2 Infectado 1 No infectado z x 2 No infectado 2 E Y 1 No infectado S 4 1 No infectado z 1 No infectado X 2 No infectado E 3 3 No infectado z z 2 No infectado z z s 386 No infectado 5 E 1 No infectado N C 1 No infectado f z 1 No infectado E p 1 No infectado z z x 2 Total 576 e a TU EE um m qm t qe t ET E D N C Muestra no obtenida o no disponible para su an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetici n de la prueba TM torunda uretral masculina de paciente sintom tico OM orina masculina Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 53 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 7b Resultados de muestras de orina masculina de sujetos infectados o no infectados con N gonorrhoeae seg n el estado de infecci n del paciente
46. GO La etiqueta del control positivo para el ensayo APTIMA GC es azul verdosa El texto de la etiqueta identifica el control positivo como CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT b Sostenga el tubo de control negativo tubo con la etiqueta rosa en una mano o mant ngalo en una gradilla Utilice un micropipeteador perfore el tap n con cuidado de que la punta no llegue hasta el fondo del tubo A ada 400 uL de control negativo tubo con la etiqueta rosa al primer tubo de reacci n De la misma forma y utilizando una nueva punta de pipeta a ada 400 pL de control positivo tubo con la etiqueta azul verdosa al segundo tubo de reacci n 10 Contin e con el procedimiento de preparaci n de la gradilla a adiendo 400 uL de cada muestra al resto de los tubos de reacci n Utilice una nueva punta de pipeta para cada muestra y control El volumen aceptable de muestra o de control a adido a un tubo de reacci n es 400 uL 100 uL Consulte Notas de procedimiento Pipeteo de controles y muestras para m s informaci n Captura seleccionada El uso del sistema de captura seleccionada GEN PROBE se describe en el Target Capture System Operator s Manual Manual del usuario del sistema de captura seleccionada Si se usa el ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 11 Cubra las TTU con tarjetas de sellado y sacuda suavemente la gradilla con la mano No agite con mezclador v rtex Incube la gradilla en un ba
47. OL CT NCT contiene rRNA de GC no infeccioso Si se desea se pueden solicitar controles adicionales en la forma de kit La preparaci n correcta de las muestras se confirma visualmente por la presencia de una sola torunda de recogida APTIMA en un tubo de transporte de muestras en torunda un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina o la ausencia de una torunda en un tubo de transferencia de muestras APTIMA para muestras de Pap en medio l quido Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 38 502185ES Rev E Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente Los controles positivos deben producir los siguientes resultados de la prueba Control RLU totales x1 000 Resultado de GC Control positivo CT Control negativo GC 0 y 590 Negativo Control positivo GC Control negativo CT 2 100 y 12 000 Positivo Unresultado de cero 0 x 1 000 RLU en el informe del ciclo representa un valor entre cero y 999 RLU Los valores de RLU inferiores a 160 en sistemas DTS o a 690 en el TIGRIS DTS System o el sistema PANTHER se notificar n como no v lidos 1 El software del ensayo APTIMA eval a autom ticamente los controles conforme a los criterios anteriores y presenta el estado del ciclo como aprobado PASS si se cumplen los criterios del control del ciclo o como fallido FAIL si los criterios no se cumplen 2 Siel estado del ci
48. R Los s mbolos de identificaci n de los reactivos tambi n se indican junto al nombre del reactivo Reactivos y materiales suministrados Kit para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 100 pruebas 2 cajas y 1 kit de controles N de cat logo 302927 Caja refrigerada para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA caja 1 de 2 almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad A Reactivo de amplificaci n GC APTIMA 1 vial Acidos nucleicos no infecciosos secados en soluci n de tamp n con un contenido de agente de volumen 5 E Reactivo enzim tico GC APTIMA 1 vial Transcriptasa inversa y RNA polimerasa secadas en soluci n de tamp n HEPES con un contenido de reactivo de volumen 10 P Reactivo de sonda GC APTIMA 1 vial Sondas de DNA quimioluminiscentes y no infecciosas secadas en soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente 5 TCR B Reactivo de captura seleccionada B GC APTIMA 1x0 30 mL cido nucleico no infeccioso en soluci n de tamp n con 5 96 de detergente Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad AR Soluci n de reconstituci n de reactivo de amplificaci n GC APTIMA 1x 11 9 mL Soluci n acuosa con conservantes ER Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico GC APTIMA 1x6 3mL Soluci n de tamp n HEPES
49. Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Consulte el rendimiento anal tico espec fico del TIGRIS DTS System en el apartado Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System a continuaci n del apartado Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System Consulte el rendimiento anal tico espec fico del sistema PANTHER en el apartado Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System Sensibilidad anal tica La sensibilidad anal tica l mite de detecci n de N gonorrhoeae se determin comparando directamente diluciones de 51 aislados cl nicos diferentes en cultivo y en el ensayo APTIMA GC La sensibilidad anal tica declarada para el ensayo es de 50 CFU ensayo 362 CFU torunda 250 CFU mL de orina 487 5 CFU mL de Pap en medio l quido PreservCyt Especificidad anal tica Se evaluaron un total de 154 aislados de cultivo utilizando el ensayo APTIMA GC Estos aislados inclu an 86 organismos que pueden aislarse del tracto genitourinario y 68 organismos adicionales que representan un corte transversal filogen tico de organismos Los organismos analizados inclu an bacterias hongos levadura par sitos y virus Todos los organismos excepto C psittaci C pneumoniae U urealyticum y los virus se analizaron a 1 0 x 10 c lulas ensayo en medios de transporte de orina KOVA Trol y 60 organismos se analizaron en medios de transporte de torunda Los organismos Chlamydia y Neisseria se analizaron
50. Rev E Sistemas DTS Materiales opcionales N de cat logo Kit de controles APTIMA 301110 Fluidos de ensayo APTIMA 302002C Soluci n de lavado APTIMA tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA y reactivo de aceite APTIMA Potenciador de lej a GEN PROBE 302101 para la limpieza sistem tica de las superficies y el equipo Prueba m ltiple de cualificaci n de ETS 102325 Puntas conductoras de 1 000 uL con detecci n de l quido 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 con 900932 Sistemas DTS 800 APTIMA COMBO 2 Placa de la plataforma 105200 Dep sito de reactivos cuarto de m dulo de 40 mL 104765 Dep sito de reactivo dividido cuarto de m dulo de 19 mL x 2 104763 Procedimiento de prueba de los sistemas DTS A Preparaci n del equipo 1 Prepare un ba o de agua a 62 C 1 C para captura seleccionada y anilado del cebador un segundo ba o de agua a 42 C 1 C para amplificaci n y un tercer ba o de agua a 62 C 1 C para HPA Si se usa el ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 consulte la Hoja de aplicaci n del ba o de calor seco mezclador v rtex SB100 Hoja de aplicaci n SB 100 2 Antes de iniciar el ensayo limpie las superficies de trabajo y los pipeteadores con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 596 al 3 596 0 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies y los pipeteadores por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la
51. W Hook D H Martin D V Ferraro and J Schachter 2003 Performance of the APTIMA Combo 2 Assay for Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in Female Urine and Endocervical Swab Specimens J Clin Microbiol 41 304 309 8 Holmes K K H H Handsfield S P Wang B B Wentworth M Turck J B Anderson and E R Alexander 1975 Etiology of nongonococcal urethritis NEJM 292 1199 1205 9 Hooklll E W and H H Handsfield 1999 Gonococcal Infections in the Adult p 458 In K Holmes et al eds Sexually Transmitted Diseases McGraw Hill New York N Y 10 Krauss S J R C Geller G H Perkins and D L Rhoden 1976 Interference of Neisseria gonorrhoeae growth by other bacterial species J Clin Microbiol 4 288 295 11 Masi A T and B I Eisenstein 1981 Disseminated Gonococcal Infections DGI and Gonococcal Arthritis GCA II Clinical Manifestations Diagnosis Complications Treatment and Prevention Semin Arthritis Rheum 10 173 12 National Committee for Clinical Laboratory Standards 1999 NCCLS EP5 A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline Vol 19 No 2 13 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 NCCLS EP12 A User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance Approved Guideline for additional guidance on appropriate internal quality control testing practices 14 National Committee for Clinical Laborato
52. a la botella de la soluci n de reconstituci n correspondiente y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia d Mientras sostiene el frasco con la soluci n de reconstituci n sobre la mesa inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en la abertura del frasco figura 1 paso 2 e Invierta lentamente el conjunto de frasco y vial Deje que la soluci n pase del frasco al vial de vidrio figura 1 paso 3 f Agite con una rotaci n suave la soluci n en el vial para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el vial figura 1 paso 4 g Espere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego invierta de nuevo el conjunto de frasco y vial inclin ndolo a un ngulo de 45 para reducir al m nimo la formaci n de espuma figura 1 paso 5 Deje que todo el l quido regrese al frasco h Retire el collar de reconstituci n del frasco figura 1 paso 6 i Vuelva a tapar el frasco Anote las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n en la etiqueta figura 1 paso 7 j Deseche el collar de reconstituci n y el vial figura 1 paso 8 ra Y 180 ud d JY Figura 1 Proceso de reconstituci n de los sistemas DTS 2 Los reactivos de sonda GC amplificaci n GC y enzim tico previamente reconstituidos deben alcanzar la temperatura ambiente de 15 C a 30 C antes de que se inicie el ensayo Si el reactivo de sonda contiene precipitado que no se disuelv
53. a sonda no hibridada Durante el paso de detecci n la luz emitida por los h bridos RNA DNA marcados se mide como se ales de fotones en un lumin metro y se notifican como unidades relativas de luz Relative Light Units RLU Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 3 502185ES Rev E Informaci n general Advertencias y precauciones A Para uso diagn stico n vitro B Para advertencias precauciones y procedimientos adicionales espec ficos para el control de la contaminaci n del TIGRIS DTS System consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System C Para advertencias precauciones y procedimientos adicionales espec ficos para el control de la contaminaci n del sistema PANTHER consulte el PANTHER System Operator s Manual Manual del usuario del sistema PANTHER Informaci n para los laboratorios D Utilice nicamente el instrumental de laboratorio desechable suministrado o especificado E Tome las precauciones habituales del laboratorio No coma beba ni fume en las reas de trabajo designadas Utilice guantes desechables sin talco protecci n para los ojos y batas de laboratorio al manipular las muestras y los reactivos del kit L vese bien las manos despu s de manipular las muestras y los reactivos del kit F Advertencia irritantes corrosivos Evite el contacto de Auto Detect 1 y Auto Detect 2 con la piel los ojos y las mucosas Si estos fluidos entran en contacto con la pie
54. abajo la prevalencia de la enfermedad y otras actividades de laboratorio Estos factores deben tenerse en consideraci n al establecerse la frecuencia con que se supervisar la contaminaci n Los intervalos para la supervisi n de la contaminaci n deben establecerse en funci n de las pr cticas y procedimientos de cada laboratorio Para supervisar la contaminaci n del laboratorio se puede realizar el siguiente procedimiento usando el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina 1 Etiquete los tubos de transporte de torunda con los n meros correspondientes a las reas que se van a analizar Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 36 502185ES Rev E Sistema PANTHER 2 Extraiga la torunda para recogida de muestras aplicador azul con impresiones verdes de su envase humedezca la torunda en el medio de transporte de torunda y p sela por el rea designada con un movimiento circular 3 Inserte inmediatamente la torunda en el tubo de transporte 4 Quiebre con cuidado el bastoncillo de la torunda en la l nea con la muesca tenga cuidado de que el contenido no salpique 5 Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de torunda 6 Repita los pasos del 2 al 5 en todas las reas en las que se vaya a aplicar la torunda Si los resultados de GC son positivos o ambiguos consulte nterpretaci n de la prueba Hesultados de control de calidad y del paciente Para obten
55. aciente El algoritmo incluy los resultados del ensayo APTIMA COMBO 2 y del ensayo APTIMA GC en muestras de torunda endocervical Ambas NAAT de referencia necesitaron ser positivas para establecer un estado de infecci n de la paciente Por lo menos una NAAT de referencia necesit ser negativa para establecer un estado de paciente no infectada El nico resultado equ voco que se obtuvo de una NAAT de referencia se consider discordante con el ensayo de investigaci n a efectos del c lculo del rendimiento y en consecuencia el estado de infecci n de la paciente se estableci como no infectada n 1 La tabla 7e resume la frecuencia de los resultados de la prueba para las muestras de torunda endocervical analizadas con el ensayo APTIMA COMBO 2 y el ensayo APTIMA GC La tabla 5a presenta las sensibilidades y especificidades para el ensayo APTIMA GC por estado de s ntomas y en general La sensibilidad general fue del 92 3 12 13 En sujetos sintom ticos y asintom ticos la sensibilidad fue del 100 7 7 y del 83 3 5 6 respectivamente La especificidad general fue del 99 8 1 630 1 634 En sujetos sintom ticos y asintom ticos la especificidad fue del 99 4 350 352 y del 99 8 1 280 1 282 respectivamente La tabla 6a presenta las sensibilidades y especificidades para el ensayo APTIMA GC por centro de recogida de muestras y en general Las sensibilidades abarcaron desde el 80 0 hasta el 100 Las especificidades abarcaron desde el
56. acientes masculinos se recogieron dos torundas uretrales aleatorizadas seguidas por una muestra de orina Para pacientes femeninas se recogi una muestra de orina seguida de una torunda vaginal recogida por la paciente una torunda vaginal recogida por el cl nico y dos torundas endocervicales aleatorizadas Los resultados GC del ensayo APTIMA GC y del ensayo APTIMA COMBO 2 se generaron a partir de las dos torundas vaginales una torunda endocervical una torunda uretral masculina y una al cuota de orina masculina y femenina La otra muestra de torunda endocervical torunda uretral masculina y una al cuota de orina masculina y femenina se analizaron con otra NAAT disponible comercialmente Las muestras de torunda endocervical y uretral masculina y de orina masculina y femenina analizadas en el ensayo APTIMA COMBO 2 y en las otras NAAT disponibles comercialmente se utilizaron como NAAT de referencia para determinar el estado de infecci n de cada sujeto El an lisis de las muestras se realiz en el centro de inscripci n de los sujetos o en un centro de an lisis externo Todos los c lculos de rendimiento se basaron en el n mero total de resultados de muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico y de orina masculina y femenina del ensayo APTIMA GC comparados con el algoritmo del estado de infecci n del paciente para cada sexo En el algoritmo la designaci n de un sujeto como infectado o no infectad
57. aestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados en el kit Abra el frasco de TCR GC y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia Abra el frasco de TCR B y vierta todo su contenido en el frasco de TCR GC Es normal que quede una peque a cantidad de l quido en el frasco de TCR B Tape el frasco de TCR GC y agite con una rotaci n suave la soluci n para mezclar el contenido Evite que se forme espuma durante este paso Anote en la etiqueta las iniciales del usuario y la fecha actual Deseche el frasco y el tap n de TCR B 3 Prepare el TCR de trabajo GC wTCR GC para el kit de 50 pruebas a b Empareje los frascos apropiados del TCR GC y TCR B Compruebe los n meros de lote de los reactivos en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados en el kit Abra el frasco de TCR GC y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 27 502185ES Rev E TIGRIS DTS System d Abra el frasco de TCR B y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia e Extraiga la pipeta de transferencia de su envase f Transfiera aproximadamente 2 mL de TCR GC al frasco de TCR B No deseche la pipeta de transferencia en este paso g Vuelva a tapar el frasco de TCR B y mezcle por inversi n h Transfiera el wTCR GC del frasco de TCR B de vuelta al fr
58. aja 25 29 100 100 Torunda Vaginal Baja 250 30 100 100 100 97 2 100 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 25 30 100 100 Uretral Baja 250 30 100 100 100 97 2 100 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 25 30 63 3 19 30 100 Estudio inicial Baja 250 30 100 100 91 7 85 6 95 8 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 18 100 100 Muy baja 25 30 100 100 d Seguimiento 1 Baja 250 30 100 100 100 97 4 100 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 18 100 100 Muy baja 25 30 100 100 Seguimiento 2 Baja 250 30 100 100 100 97 4 100 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 No analizadas en los dos sistemas debido a un volumen insuficiente de la muestra Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 68 502185ES Rev E Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System Tabla 14 Estudio de concordancia de panel cl nico enriquecido con rRNA de GC continuaci n de de Porcentaje de Muastra Muestra Concentraci n R plicas concor concor concordancia del panel fg rRNA ensayo P dancia dancia general entre TIGRIS TIGRIS DTS y DTS IC 95 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 25 30 13 3 4 30 100 Estudio inicial Baja 250 30 80 24 30 100 75 8 67 5 82 8 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 18 100 100 Muy baja 25 3
59. al figura 2 paso 4 h Espere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego invierta de nuevo el conjunto de los frascos inclin ndolo a un ngulo de 45 para reducir al m nimo la formaci n de espuma figura 2 paso 5 Deje que todo el l quido regrese a la botella de pl stico Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 26 502185ES Rev E j k TIGRIS DTS System Quite el collar de reconstituci n y el vial de vidrio figura 2 paso 6 Vuelva a tapar el frasco Para los frascos para 50 pruebas desprenda y deseche la etiqueta superior Anote las iniciales del usuario la fecha de reconstituci n y el n mero de lote del reactivo liofilizado en la otra etiqueta figura 2 paso 7 Para los frascos de 100 pruebas anote las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n directamente en la etiqueta figura 3 Deseche el collar de reconstituci n y el vial de vidrio figura 2 paso 8 Advertencia Evite que se forme espuma al reconstituir los reactivos La espuma compromete la detecci n de nivel en el TIGRIS DTS System 1 2 A NI a rp NS Q ey o 5 6 S A Ga lt Figura 2 Proceso de reconstituci n del TIGRIS DTS System 2 Prepare el TCR de trabajo GC wTCR GC para el kit de 100 pruebas a b f g Empareje los frascos apropiados del TCR GC y TCR B Compruebe los n meros de lote de los reactivos en la Hoja de c digos de barras del lote m
60. also Esto se observ con C pneumoniae donde 1 de 27 r plicas analizadas dio un resultado falso La repetici n de la prueba no apoy la reactividad cruzada con este organismo C pneumoniae ya que no se observaron pruebas positivas con 6 r plicas de la prueba adicionales Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 69 502185ES Rev E Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System Estudio de equivalencia de las substancias interferentes Se utiliz sangre completa una sustancia frecuentemente hallada en las muestras urogenitales y que se sabe Que interfiere en algunos ensayos de amplificaci n para establecer que el TIGRIS DTS System tolera niveles semejantes de sustancias potencialmente interferentes a los sistemas DTS Se a adi sangre nueva a mezclas de muestras de torundas cl nicas torundas vaginales orina y Pap en medio l quido PreservCyt luego se analizaron para determinar la posible interferencia en el ensayo en ausencia y presencia de GC seleccionado al equivalente de rRNA estimado de 50 CFU GC ensayo 250 fg ensayo Los equivalentes rRNA se calcularon en funci n del tama o del genoma y de la relaci n DNA RNA c lula estimada de cada organismo Las muestras se analizaron en dos TIGRIS DTS Systems Todas las muestras que conten an cido nucleico seleccionado dieron positivo al analizarse a una concentraci n del 1096 de sangre en muestras de torunda muestras de torunda vaginal o muestras de Pap en medio l quido PreservCy
61. ar gases en el laboratorio e Tape la botella de desechos y agite con una rotaci n suave el contenido hasta que est completamente mezclado f Deje que la botella de desechos repose durante 15 minutos y a continuaci n deseche el contenido desecho g Enjuague la botella de desechos con agua para eliminar todo resto de desechos h Tape la botella de desechos vac a y col quela en el alojamiento del dep sito de vac o Conecte el conector de desconexi n r pida a la unidad TCS Deseche los guantes con cuidado 4 Unidad TCS Limpie las superficies de la unidad TCS el peine m ltiple de aspiraci n y las puntas eyectoras del tamp n de lavado con toallas de papel humedecidas con una soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Despu s del paso de hipoclorito de sodio enjuague con agua y luego seque del todo las superficies con toallas de papel 5 Gradillas Sumerja las gradillas en una soluci n de hipoclorito de sodio del 2 596 al 3 596 0 35 M a 0 5 M comprobando que la soluci n las cubra Mantenga las gradillas sumergidas durante 10 minutos Una exposici n m s prolongada puede da arlas Enjuague bien las gradillas con agua col quelas sobre un pafio limpio absorbente y deje que se sequen completamente al aire Para prolongar la vida til de las gradillas s quelas boca arriba no boca abajo l Contaminaci n del ensayo 1 Si no se toman suficientes precauciones durante el protocolo del
62. as burbujas b Siun tubo de muestra tiene un volumen inferior al que se suele observar cuando se siguen las instrucciones de recogida centrif guelo durante 5 minutos a una RCF de 420 para asegurarse de que no quede l quido en el tap n c Siel nivel de l quido de un tubo de muestra de orina no est entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta la muestra debe rechazarse No perfore un tubo sobrellenado d Siun muestra de orina contiene precipitados caliente la muestra a 37 C durante un m ximo de 5 minutos Si el precipitado no se vuelve a disolver aseg rese visualmente de que ste no obstaculice la entrega de la muestra Nota Una incorrecta realizaci n de los pasos 4a c puede provocar una descarga de l quido del tap n del tubo de muestras Nota Se pueden analizar hasta 3 al cuotas independientes de cada tubo de muestra Los intentos de pipetear m s de 3 al cuotas del tubo de muestras pueden dar lugar a errores por volumen insuficiente E Preparaci n del sistema Configure el sistema y la lista de trabajo de acuerdo con las instrucciones del TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System y las Notas de procedimiento Notas de procedimiento A Controles 1 Para trabajar correctamente con el software del ensayo APTIMA del TIGRIS DTS System se requieren controles delantero y de fin El Control positivo CT Control negativo GC debe estar en la primera posici n y en la
63. as femeninas y leucocitos 1 0 x 10 c lulas mL Las siguientes sustancias interferentes se afiadieron individualmente a muestras de orina 3096 de sangre analitos de orina prote na glucosa cetonas bilirrubina nitrato urobilin geno pH 4 cido pH 9 alcalino leucocitos 1 0 x 10 c lulas mL restos celulares vitaminas minerales acetaminof n aspirina e ibuprofeno Todos se analizaron para determinar la interferencia potencial del ensayo en ausencia y presencia de GC al equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC ensayo 250 fg ensayo Los equivalentes rRNA se calcularon en funci n del tamafio del genoma y de la relaci n DNA RNA c lula estimada de cada organismo No se observ ninguna interferencia con ninguna de las sustancias analizadas No se observ ning n inhibidor de amplificaci n en el ensayo APTIMA GC Recuperaci n Se afiadieron Escherichia coli Gardnerella vaginalis Lactobacillus acidophilus Bacteroides ureolyticus y Staphylococcus epidermidis 1 0 x 10 c lulas ensayo a muestras que conten an el equivalente de rRNA de aproximadamente 50 c lulas de GC 250 fg Estas adiciones no interfirieron con la amplificaci n y detecci n de GC rRNA utilizando el ensayo APTIMA GC Estudios de la estabilidad de las muestras A Muestras de torunda y de orina Los datos que apoyan las condiciones de env o y almacenamiento recomendadas para las muestras de torunda endocervical uretral y vaginal se generaron con
64. asco de TCR GC i Repita el paso h varias veces hasta que la mezcla en el frasco de TCR B se haya transferido otra vez al frasco de TCR GC j Tape el frasco de TCR GC y agite con una rotaci n suave la soluci n para mezclar el contenido Evite que se forme espuma durante este paso k Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta Anote el n mero de lote del TCR B l Deseche el frasco y el tap n de TCR B Deseche la pipeta de transferencia 4 Prepare el reactivo de selecci n a Compruebe que el n mero de lote del frasco de reactivo coincida con el n mero de lote de la hoja de c digos de barras del lote maestro b Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta Nota Mezcle bien mediante inversi n suave todos los reactivos antes de cargarlos en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos C Preparaci n de los reactivos para reactivos reconstituidos previamente 1 Los reactivos de amplificaci n GC enzim tico y de sonda GC previamente reconstituidos deben alcanzar la temperatura ambiente de 15 C a 30 C antes de que se inicie el ensayo 2 Si el reactivo de sonda GC reconstituido contiene precipitado que no se disuelve a temperatura ambiente caliente el frasco tapado a una temperatura que no exceda de 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento el reactivo de sonda GC se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Mez
65. asegurarse de que no quede l quido en el tap n c Siel nivel de l quido de un tubo de muestra de orina no est entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta la muestra debe rechazarse No perfore un tubo sobrellenado d Si un muestra de orina contiene precipitados caliente la muestra a 37 C durante un m ximo de 5 minutos Si el precipitado no se vuelve a disolver aseg rese visualmente de que ste no obstaculice la entrega de la muestra Nota Una incorrecta realizaci n de los pasos 4a c puede provocar una descarga de l quido del tap n del tubo de muestras Nota Se pueden analizar hasta 3 al cuotas independientes de cada tubo de muestra Los intentos de pipetear m s de 3 al cuotas del tubo para muestras pueden dar lugar a errores de procesamiento Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 35 502185ES Rev E Sistema PANTHER E Preparaci n del sistema 1 Configure el sistema de acuerdo con las instrucciones del PANTHER System Operator s Manual Manual del usuario del sistema PANTHER y las Notas de procedimiento Aseg rese de que se utilicen las gradillas para reactivos y los adaptadores de TCR del tamario adecuado 2 Cargue las muestras Notas de procedimiento A Controles 1 Para trabajar correctamente con el software del ensayo APTIMA del sistema PANTHER se requiere un par de controles Los tubos de Control positivo CT Control negativo GC y de Control positivo GC Control negativo CT pu
66. ayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 39 502185ES Rev E Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente D Resultados de pruebas de pacientes 1 Silos controles de un ciclo no generan los resultados esperados no deben registrarse los resultados de la prueba en muestras de pacientes en ese mismo ciclo 2 Resultados de muestras de torunda de orina y de Pap en medio l quido PreservCyt Consulte Notas m s abajo a Resultados iniciales GC pos Positivo para rRNA de GC GC neg Supuestamente negativo para GC rRNA GC equiv La muestra debe volverse a analizar No v lido La muestra debe volverse a analizar b Resultados de la prueba repetida GC pos Positivo para GC rRNA GC neg Supuestamente negativo para GC rRNA GC equiv Indeterminado se debe recoger una nueva muestra No v lido Indeterminado se debe recoger una nueva muestra En esta categor a se incluyen los resultados de muestras positivas con RLU bajas Consulte Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente m s arriba Notas El primer resultado v lido y no equ voco de cada analito es el resultado que debe registrarse Serecomienda ponderar cuidadosamente los datos de rendimiento al interpretar los resultados del ensayo APTIMA GC para individuos asintom ticos o para cualquier individuo de poblaciones con baja prevalencia Unresultado negativo no impide la p
67. cci n ya que los resultados dependen de una recogida de muestras correcta Los resultados de la prueba pueden verse afectados por la recogida incorrecta de la muestra un error t cnico la confusi n de muestras o niveles de diana por debajo del l mite de detecci n del ensayo J El ensayo APTIMA GC proporciona resultados cualitativos Por lo tanto no se puede establecer una correlaci n entre la magnitud de una se al positiva del ensayo y el n mero de organismos existentes en la muestra K Para los estudios cl nicos con muestras de torunda vaginal torunda endocervical torunda uretral masculina y muestras de orina el rendimiento para la detecci n de GC se obtuvo de poblaciones con alta prevalencia Los resultados positivos en poblaciones de baja prevalencia deben interpretarse con cautela sin olvidar que la probabilidad de un positivo falso puede ser mayor que la de un positivo real L Para los estudios cl nicos de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt el rendimiento del ensayo APTIMA GC en la detecci n de GC se deriva principalmente de poblaciones con baja prevalencia No obstante los resultados positivos en poblaciones Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 41 502185ES Rev E Limitaciones con baja prevalencia deben interpretarse con cautela sin olvidar que la probabilidad de un positivo falso puede ser mayor que la de un positivo real M No se ha evaluado el rendimiento del kit de transferencia de muestras APTIMA
68. cinato con un contenido de detergente 596 TCR B Reactivo de captura seleccionada B APTIMA 1x0 35 mL cido nucleico no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente 5 6 PGC Control positivo GC Control negativo CT APTIMA 3x 1 7 mL NCT cido nucleico GC no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC 250 fg ensayo PCT Control positivo CT Control negativo GC APTIMA 3x 1 7 mL NGC cido nucleico CT no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado 1 IFU CT 5 fg ensayo Los equivalentes de rRNA se calcularon a partir del tama o del genoma y de la raz n DNA RNA por c lula estimada de cada organismo Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 10 502185ES Rev E Sistemas DTS La caja refrigerada contiene tambi n lo siguiente bandeja de almacenamiento almacenar entre 2 C y 30 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad AR Soluci n de reconstituci n de reactivo de amplificaci n GC 1x9 3 mL APTIMA Soluci n acuosa con conservantes ER Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico APTIMA 1x3 3mL Soluci n de tamp n HEPES con un surfactante y glicerol PR Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda GC APTIMA 1 x 12 4 mL Soluci
69. cle el reactivo GC de sonda por inversi n con cuidado de que no se forme espuma antes de cargarlo en el sistema 3 Mezcle bien cada reactivo mediante inversi n suave antes de cargarlo en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos 4 No llene hasta el borde los frascos de reactivos El TIGRIS DTS System reconocer y rechazar los frascos que est n llenos hasta el borde D Manipulaci n de muestras 1 Deje que los controles y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes del procesamiento 2 No agite las muestras en un mezclador v rtex 3 Confirme visualmente que cada tubo de muestras satisface uno de los criterios siguientes a La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA azul en un tubo de transporte de muestras de torunda unisex b La presencia de una sola torunda de recogida APTIMA rosa en un tubo de transporte de muestras de torunda vaginal c Un volumen final de orina entre las l neas de llenado negras de un tubo de transporte de muestras de orina Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 28 502185ES Rev E TIGRIS DTS System d La ausencia de una torunda en el tubo de transporte de muestras APTIMA con muestras de Pap en medio l quido PreservCyt 4 Inspeccione los tubos de muestras antes de cargarlos en la gradilla a Si un tubo de muestra contiene burbujas en el espacio entre el l quido y el tap n centrif guelo durante 5 minutos con una RCF de 420 para eliminar l
70. clo es FAIL todos los resultados de la prueba en el mismo ciclo son no v lidos y no se deben registrar 3 Cada laboratorio deber poner en pr ctica los procedimientos de control adecuados para satisfacer los requisitos de las normativas CLIA secci n 493 1256 Nota Consulte Identificaci n y soluci n de problemas o p ngase en contacto con el servicio t cnico de Gen Probe para recibir asistencia con los controles fuera de rango de los sistemas DTS 4 Un par metro del TIGRIS DTS System permite a cada centro especificar una frecuencia de encuadre de controles lo cual permite colocar conjuntos de controles adicionales a intervalos definidos dentro de la lista de trabajo Si se especifica este par metro el TIGRIS DTS System requerir que se coloque un conjunto de controles despu s del n mero de muestras definido en el encuadre de control El TIGRIS DTS System eval a autom ticamente cada control de la lista de trabajo de acuerdo con los criterios anteriores e invalidar todas las muestras en el encuadre o los encuadres de controles afectados si no se cumplen los criterios de los controles Consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System para informaci n adicional 5 Los controles negativos puede que no sean efectivos en la supervisi n del arrastre aleatorio Consulte Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System para conocer los resultados procedentes de un estudio de arrastre anal tico
71. con un surfactante y glicerol PR Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda GC APTIMA 1x 15 2 mL Soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 S Reactivo de selecci n GC APTIMA 1x43 0 mL Soluci n de tamp n borato 600 mM con surfactante TCR Reactivo de captura seleccionada GC APTIMA 1x 26 0 mL Soluci n de tamp n sal con un contenido de olig meros de captura y fase s lida Collares de reconstituci n 3 Hoja de c digos de barras de lote maestro 1 hoja Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 31 502185ES Rev E Sistema PANTHER Kit de controles APTIMA almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad PGC Control positivo GC Control negativo CT APTIMA 5x1 7 mL NCT cido nucleico GC no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 50 c lulas GC 250 fg ensayo PCT Control positivo CT Control negativo GC APTIMA 5x1 7 mL NGC cido nucleico CT no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Cada muestra de 400 uL contiene el equivalente de rRNA estimado de 1 IFU CT 5 fg ensayo Los equivalentes de rRNA se calcularon a partir del tama o del genoma y de la raz n DNA RNA por c lula estimada de cada organismo Material necesario que debe adquirirse por separado Nota Se indica el n mero de cat logo
72. d porcentaje de concordancia N C no corresponde para el analito negativo Nota La variabilidad de algunos factores podr a ser num ricamente negativa lo que puede ocurrir si la variabilidad debida a dichos factores es muy peque a Cuando esto sucede la variabilidad medida en funci n de la SD y el CV se establece en cero 12 La precisi n en laboratorio de muestras de Pap en medio l quido PreservCyt con el ensayo APTIMA GC se determin afiadiendo a los viales de PreservCyt 20 GC CFU por vial 0 1 CFU por reacci n y 100 GC CFU por vial 0 5 CFU por reacci n Como controles positivos y negativos se analizaron viales con un contenido de 10 000 GC CFU por vial 50 CFU por reacci n y viales de PreservCyt no enriquecidos Se dividieron diez viales enriquecidos a cada nivel CFU y diez viales no enriquecidos entre dos usuarios Los usuarios agitaron con mezclador v rtex los viales y luego transfirieron 14 al cuotas de 1 0 mL cada una por vial a 14 tubos de transferencia APTIMA seg n las instrucciones del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA Los usuarios desconoc an las titulaciones de las muestras muestras ciegas Cada una de las muestras Pap STM resultantes se analiz una vez en el ensayo APTIMA GC Se realizaron un total de cinco ciclos en un per odo de cinco d as para 140 resultados a una concentraci n de 0 1 0 5 y 50 CFU Hubo 136 resultados v lidos y 4 no v lidos para el panel de controles negativos
73. das o no infectadas con N gonorrhoeae seg n el estado de infecci n de la paciente RR Ensayo Posen OMBO 2 NAAT 2 Ensayo APTIMA GC Estado de s ntomas xus paciente TF OF TF OF TF OF Sint Asint Infectado 43 16 59 Infectado 2 0 2 Infectado 2 1 3 Infectado 0 1 1 Infectado N C 1 0 1 Infectado 1 1 2 Infectado 1 1 2 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 2 0 2 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 0 1 1 Infectado 1 0 1 No infectado 4 1 5 No infectado 1 0 1 No infectado 1 0 1 No infectado 1 0 1 No infectado 5 2 7 No infectado 2 2 4 No infectado 1 2 3 No infectado 1 0 1 No infectado 718 589 1 307 No infectado 1 0 1 No infectado N C 2 3 5 No infectado 11 11 22 No infectado 1 1 2 No infectado N C N C 1 1 2 No infectado N C N C 5 4 9 No infectado 1 1 2 Total 811 640 1 451 AA A A A A AA mW Sint sintom tico Asint asintom tico N C muestra no obtenida o no disponible para an lisis El signo de igualdad representa un resultado equ voco o indeterminado en la repetic
74. de diana alta que se realiz para demostrar el control de la contaminaci n cruzada en el TIGRIS DTS System Consulte Rendimiento anal tico del sistema PANTHER para conocer los resultados procedentes de un estudio de arrastre anal tico de diana alta que se realiz para demostrar el control de la contaminaci n cruzada en el sistema PANTHER C Control de preparaci n de muestras opcional El control negativo para GC APTIMA que est etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC y el control positivo para GC APTIMA que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT act an como controles para los pasos de captura seleccionada amplificaci n y detecci n y deben incluirse en cada ciclo del ensayo Si se desea se pueden analizar controles para lisis celular y estabilizaci n del RNA de acuerdo con los requisitos de las organizaciones de acreditaci n pertinentes o los procedimientos de cada laboratorio Las muestras con un resultado positivo conocido pueden servir de controles si se preparan y analizan junto con muestras desconocidas Las muestras utilizadas como controles de preparaci n deben almacenarse manipularse y analizarse conforme a las instrucciones del prospecto Los controles de preparaci n de muestras deben interpretarse de la misma forma que las muestras de pruebas de pacientes Consulte Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente Resultados de pruebas de pacientes Ens
75. de los materiales que pueden adquirirse de Gen Probe a menos que se especifique lo contrario N de cat logo Sistema PANTHER 303095 Kit de fluidos del ensayo APTIMA 303014 1 000 pruebas soluci n de lavado APTIMA tamp n para fluido de desactivaci n APTIMA y reactivo de aceite APTIMA Kit de Auto Detect APTIMA 303013 1 000 pruebas Unidades multitubo Multi tube Unit MTU 104772 02 Juego de bolsas de desechos PANTHER 902731 Cubierta para contenedor de desechos PANTHER 902714 O kit para ciclo PANTHER 303096 5 000 pruebas contiene MTU bolsas de desechos cubiertas para contenedores de desechos fluidos de ensayo y reactivos Auto Detect Puntas conductoras de 1 000 uL detectoras de l quido 10612513 Tecan Kit de transferencia de muestras APTIMA 301154C para utilizar con muestras en soluci n PreservCyt Kit de recogida de muestras de torunda vaginal APTIMA 301162 Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para 301041 muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras de 301040 orina masculina y femenina Tubos de transporte de muestras de orina APTIMA para muestras 105575 de orina masculina y femenina Lej a soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M Guantes desechables Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 32 502185ES Rev E Sistema PANTHER Tapones penetrables APTIMA 1
76. des Bacillus subtilis Virus del papiloma humano 16 Propionibacterium acnes Bacteriodes fragilis Kingella dentrificans Proteus mirabilis Bacteriodes ureolyticus Kingella kingae Proteus vulgaris Bifidobacterium adolescentis Klebsiella oxytoca Providencia stuartii Bifidobacterium brevi Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Branhamella catarrhalis Lactobacillus acidophilus Pseudomonas fluorescens Brevibacterium linens Lactobacillus brevis Pseudomonas putida Campylobacter jejuni Lactobacillus jensonii Rahnella aquatilis Candida albicans Lactobacillus lactis Rhodospirillum rubrum Candida glabrata Legionella pneumophila 2 Saccharomyces cerevisiae Candida parapsilosis Leuconostoc paramensenteroides Salmonella minnesota Candida tropicalis Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium Chlamydia pneumoniae Micrococcus luteus Serratia marcescens Chlamydia psittaci 2 Moraxella lacunata Staphylococcus saprophyticus Chromobacterium violaceum Moraxella osloensis Staphylococcus aureus Citrobacter freundii Morganella morganii Staphylococcus epidermidis Clostridium perfringens Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae Corynebacterium genitalium Mycoplasma genitalium Streptococcus bovis Corynebacterium xerosis Mycoplasma hominis Streptococcus mitis
77. dimientos de cada laboratorio Para supervisar la contaminaci n del laboratorio se puede realizar el siguiente procedimiento usando el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina 1 Etiquete los tubos de transporte de torunda con los n meros correspondientes a las reas que se van a analizar 2 Extraiga la torunda para recogida de muestras aplicador azul con impresiones verdes de su envase humedezca la torunda en el medio de transporte de torunda y p sela por el rea designada con un movimiento circular 3 Inserte inmediatamente la torunda en el tubo de transporte 4 Quiebre con cuidado el bastoncillo de la torunda en la l nea con la muesca tenga cuidado de que el contenido no salpique 5 Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de torunda 6 Repita los pasos del 2 al 5 en todas las reas en las que se vaya a aplicar la torunda Si los resultados son positivos o equ vocos para GC consulte nterpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente Para informaci n adicional sobre la supervisi n de la contaminaci n espec fica del TIGRIS DTS System consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 30 502185ES Rev E Sistema PANTHER Sistema PANTHER pz ER Los reactivos para el ensayo APTIMA GC se indican E a continuaci n para el sistema PANTHE
78. dos iniciales equ vocos en los sistemas DTS tras la repetici n de la prueba todos tuvieron resultados v lidos Una muestra de orina masculina y una femenina tuvieron resultados iniciales no v lidos en el TIGRIS DTS System tras volverse a analizar los resultados de las dos fueron v lidos La tabla 12 presenta las concordancias positivas negativas y generales de todos los resultados emparejados para cada tipo de muestra por estado sintom tico Las muestras de torundas femeninas torundas endocervicales y vaginales combinadas est n desequilibradas en relaci n con las muestras positivas y negativas de pacientes sintom ticas pero la concordancia general para las pacientes sintom ticas fue del 100 para las asintom ticas fue del 97 6 40 41 y para todas sintom ticas y asintom ticas combinadas fue del 99 2 128 129 Para muestras de torunda uretral masculina la concordancia general para sujetos sintom ticos y asintom ticos y para todos los sujetos fue del 100 Para muestras de orina femenina la concordancia general para pacientes sintom ticas fue del 100 para pacientes asintom ticas fue del 96 0 24 25 y para todas fue del 98 6 71 72 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 63 502185ES Rev E Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System Para muestras de orina masculina la concordancia general para pacientes sintom ticos fue del 98 6 69 70 para pacientes asintom ticos fue del 100
79. e con cuidado para que no se forme espuma D Temperatura 1 Los pasos de captura seleccionada amplificaci n hibridaci n y selecci n dependen de la temperatura Por lo tanto es imperativo que los ba os de agua se mantengan dentro de los rangos de temperatura especificados 2 La temperatura ambiente se define como de 15 C a 30 C 3 Los pasos de detecci n en el ensayo se deben realizar a una temperatura entre 18 C y 28 C E Tiempo Las reacciones de captura seleccionada amplificaci n hibridaci n y selecci n dependen todas del tiempo Observe los tiempos especificados en el Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 19 502185ES Rev E Sistemas DTS F Agitaci n con mezclador v rtex Una agitaci n con mezclador v rtex correcta es importante para el resultado satisfactorio del ensayo APTIMA GC Cuando se consigue un movimiento de agitaci n correcto la suspensi n gira a un ritmo que eleva la soluci n a la mitad superior del tubo Esta manipulaci n agitaci n en mezclador v rtex se mantiene durante periodos de tiempo especificados Para agitar en mezclador v rtex las reacciones seleccione en el mezclador v rtex multitubo la velocidad m s baja fije la gradilla y encienda el aparato Aumente lentamente la velocidad hasta que el l quido suba hasta la mitad del tubo Agite durante 10 segundos la cantidad de tiempo indicada o hasta que el color sea uniforme A con
80. e a temperatura ambiente cali ntelo a 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento el reactivo de sonda se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Despu s de la resuspensi n mezcle bien con un movimiento de inversi n suave con cuidado para que no se forme espuma Nota Este paso de inversi n se debe realizar cada vez que el precipitado se vuelva a pasar a la soluci n ya sea mediante calentamiento a 62 C o dej ndolo calentar ala temperatura ambiente 3 Prepare el reactivo de captura seleccionada de trabajo GC wTCR GC a Transfiera 20 mL de TCR GC a un recipiente seco limpio dedicado y del tama o adecuado b Utilizando un micropipeteador a ada 200 uL de TCR B al TCR GC Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 14 502185ES Rev E Sistemas DTS c Mezcle bien la soluci n mediante rotaci n d Etiquete el recipiente Anote las iniciales del usuario la fecha de preparaci n y los dos n meros de lote Nota Para un n mero m s peque o de reacciones muestras y controles utilice el siguiente m todo para calcular los vol menes de TCR GC y TCR B Volumen de TCR mL n mero de reacciones 5 reacciones extra x 0 1 mL Volumen de TCR B mL Volumen de TCR mL 100 C Captura seleccionada La pipeta de repetici n utilizada en la captura seleccionada y la amplificaci n debe utilizarse de forma dedicada s lo en estos pasos Consulte Advertenc as y precauciones para m
81. ecidas cumplieron los criterios de validaci n con una concordancia del 9596 con los resultados esperados Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 62 502185ES Rev E Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System Concordancia del TIGRIS DTS System La concordancia entre los resultados del ensayo APTIMA GC generados en el TIGRIS DTS System totalmente automatizado y en los sistemas DTS semi automatizados se evalu realizando pruebas en muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina orina femenina y masculina torunda vaginal y Pap en medio l quido PreservCyt Cada una de las muestras cl nicas se analiz individualmente con el ensayo APTIMA GC en los dos tipos de sistema el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS en Gen Probe El orden de la prueba no se aleatoriz Las muestras identificadas para inclusi n se analizaron en el TIGRIS DTS System primero y despu s en los sistemas DTS Estudio de concordancia de las muestras cl nicas muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina orina masculina y femenina torunda vaginal y Pap en medio l quido PreservCyt Hombres y mujeres que asist an a cl nicas de ETS planificaci n familiar y de Obstetricia y Ginecolog a de ocho centros en diferentes localidades geogr ficas con baja a alta prevalencia para GC contribuyeron muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina orina ma
82. ecogida de muestras de torunda vaginal APTIMA K Las fechas de caducidad que figuran en los kits de recogida son v lidas para el centro de recogida y no para el laboratorio de an lisis Las muestras recogidas en cualquier momento antes de la fecha de caducidad del kit de recogida y transportadas y Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 4 502185ES Rev E Informaci n general almacenadas de acuerdo con el prospecto son v lidas para el an lisis a n cuando haya pasado la fecha de caducidad en el tubo de recogida L La soluci n PreservCyt se ha validado como medio alternativo para el an lisis con el ensayo APTIMA GC Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt procesadas con el procesador ThinPrep 3000 u otros instrumentos no se han evaluado en pruebas de detecci n de Neisseria gonorrhoeae con el ensayo APTIMA GC M Despu s de a adir la orina el nivel de l quido en el tubo de transporte de orina debe estar entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta del tubo De lo contrario la muestra debe rechazarse N Mantenga las condiciones de almacenamiento apropiadas durante el env o de muestras para garantizar la integridad de las mismas No se ha evaluado la estabilidad de las muestras en condiciones de env o distintas a las recomendadas O Las muestras pueden ser infecciosas Tome las precauciones universales al realizar este ensayo El director del laboratorio debe establecer m todos de manipulaci n y elimi
83. econstituir los reactivos de amplificaci n GC enzim tico y de sonda GC para los kits de 100 pruebas y de 50 pruebas combine los frascos de reactivo liofilizado con la soluci n de reconstituci n Si las soluciones de reconstituci n est n refrigeradas espere a que se equilibren a la temperatura ambiente antes de utilizarlas a Empareje cada soluci n de reconstituci n con su reactivo liofilizado Aseg rese de que existe correspondencia de colores en las etiquetas de la soluci n de reconstituci n y del reactivo liofilizado antes de conectar el collar de reconstituci n b Compruebe los n meros de lote en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados c Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte con firmeza el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial figura 2 paso 1 d Abrala botella de la soluci n de reconstituci n correspondiente y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia e Mientras sostiene el frasco con la soluci n de reconstituci n sobre la mesa inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en la abertura del frasco figura 2 paso 2 f Invierta lentamente el conjunto de los frascos Deje que la soluci n pase del frasco al vial de vidrio figura 2 paso 3 g Agite con una rotaci n suave la soluci n en el vial para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el vi
84. eden cargarse en cualquier posici n de la gradilla o en cualquier carril de la plataforma de muestras en el sistema PANTHER El pipeteado de la muestra del paciente comenzar cuando se cumpla una de las dos siguientes condiciones a El sistema est procesando actualmente un par de controles b Los resultados v lidos para los controles se registran en el sistema 2 Una vez que los tubos de controles se hayan pipeteado y se est n procesando para un kit de reactivos espec fico las muestras de paciente pueden analizarse con el kit de reactivos de ensayo asociado hasta 24 horas a menos que a Los controles son no v lidos b El kit de reactivos de ensayo asociado se ha retirado del sistema c Elkit de reactivos de ensayo asociado ha excedido los l mites de estabilidad 3 Cada tubo de control APTIMA se puede analizar una vez Los intentos de pipetear m s de una vez del tubo pueden dar lugar a errores de procesamiento B Temperatura La temperatura ambiente se define como de 15 C a 30 C C Talco de guantes Como sucede en cualquier sistema de reactivos el exceso de talco en algunos guantes puede ser causa de contaminaci n de los tubos abiertos Se recomienda utilizar guantes sin talco D Protocolo de supervisi n de la contaminaci n en laboratorios para el sistema PANTHER Existen numerosos factores espec ficos de los laboratorios que pueden contribuir a la contaminaci n incluido el volumen de la prueba el flujo de tr
85. el ensayo v lidas no se volvieron a analizar Once muestras tuvieron resultados finales no v lidos y se excluyeron de los an lisis de reproducibilidad La reproducibilidad se determin calculando la concordancia entre los resultados finales del ensayo y el resultado esperado para cada muestra del panel La reproducibilidad tambi n se evalu calculando la SD y el coeficiente de variaci n CV de la se al con respecto a centros usuarios lotes y listas de trabajo No se calcularon los CV de muestras del panel GC negativos debido a valores de se al bajos que podr an ser te ricamente iguales a cero La tabla 13 presenta los resultados de reproducibilidad Todos los resultados del ensayo APTIMA CG en el TIGRIS DTS System concordaron con los resultados esperados para muestras del panel con contenido de 0 250 25 000 y 250 000 fg GC rRNA ensayo Para muestras del panel con 2 500 fg GC rRNA ensayo la concordancia con los resultados esperados fue del 99 8 Los valores de CV fueron inferiores o iguales al 9 0 Estos datos indican una reproducibilidad buena del ensayo APTIMA GC utilizando el TIGRIS DTS System Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 65 502185ES Rev E Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System Tabla 13 Datos de precisi n del TIGRIS DTS System Entre lista Dentro lista Conc RLU Entre centro Entre usuario Entre lote de trabajo de trabajo fg rRNA por N media concor E EH ES el
86. ensayo pueden introducirse materiales contaminantes 2 Las TTU deben descontaminarse en fluido de desactivaci n seg n se describe en el apartado Detecci n No vuelva a usar las TTU 3 Lleve a cabo la descontaminaci n regular del equipo y de las superficies de trabajo seg n se describe en Notas de procedimiento Descontaminaci n 4 Como sucede en cualquier sistema de reactivos el exceso de talco en algunos guantes puede ser causa de contaminaci n de los tubos abiertos Se recomienda utilizar guantes sin talco J Protocolo de supervisi n de la contaminaci n en laboratorios para los sistemas DTS Existen numerosos factores espec ficos de los laboratorios que pueden contribuir a la contaminaci n incluido el volumen de la prueba el flujo de trabajo la prevalencia de la enfermedad y otras actividades de laboratorio Estos factores deben tenerse en consideraci n al establecerse la frecuencia con que se supervisar la contaminaci n Los intervalos para la supervisi n de la contaminaci n deben establecerse en funci n de las pr cticas y procedimientos de cada laboratorio Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 21 502185ES Rev E Sistemas DTS Para supervisar la contaminaci n del laboratorio se puede realizar el siguiente procedimiento usando el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina 1 Etiquete los tubos de transporte de torunda con los n meros co
87. ento cl nico espec fico del TIGRIS DTS System en el apartado Concordancia de las muestras cl nicas del TIGRIS DTS System a continuaci n del apartado Rendimiento anal tico de los sistemas DTS Estudio cl nico de muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina torunda vaginal y orina Se obtuvieron muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico de torunda vaginal recogidas por la paciente y de orina masculina y femenina de 2 787 hombres y mujeres sintom ticos y asintom ticos que asist an a cl nicas de Obstetricia y Ginecolog a de enfermedades de transmisi n sexual ETS de adolescentes y de planificaci n familiar en ocho centros cl nicos en diferentes localidades geogr ficas de Norteam rica Los sujetos se clasificaron como sintom ticos si informaron de s ntomas como secreciones disuria y dolor p lvico Los sujetos se clasificaron como asintom ticos si no informaron s ntomas De los 1 392 sujetos asintom ticos inscritos en el estudio 2 eran menores de 16 a os de edad 237 ten an edades entre 16 y 20 423 entre 21 y 25 y 730 eran mayores de 25 a os de edad De los 1 395 sujetos sintom ticos inscritos en el estudio 211 ten an edades entre 16 y 20 494 entre 21 y 25 y 690 eran mayores de 25 a os de edad Se recogieron tres muestras de cada uno de los 1 322 hombres elegibles Se recogieron cinco muestras de cada una de las 1 465 pacientes femeninas elegibles Para p
88. er informaci n adicional espec fica para el sistema PANTHER sobre el control de la contaminaci n consulte al servicio t cnico de Gen Probe Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 37 502185ES Rev E Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente Interpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente A Interpretaci n de la prueba El software del ensayo APTIMA interpreta autom ticamente los resultados de la prueba utilizando el protocolo GC Los resultados de las pruebas pueden ser negativos equ vocos positivos o no v lidos de acuerdo con las RLU totales en el paso de detecci n v ase m s adelante Un resultado de prueba puede ser no v lido por encontrarse algunos valores de RLU fuera de los rangos normales esperados Los resultados iniciales equ vocos o no v lidos de la prueba deben volverse a analizar Interpretaci n de la prueba RLU totales x1 000 Negativo 0 a 50 Equ voco 50 a 100 RLU baja positivo 100 a 2 000 Positivo 2 000 a 12 000 No v lido 0 o 12 000 D A A E MM A Unresultado de cero 0 x 1 000 RLU en el informe del ciclo representa un valor entre cero y 999 RLU Los valores de RLU inferiores a 160 en sistemas DTS o a 690 en el TIGRIS DTS System o el sistema PANTHER se notificar n como no v lidos Seg n las directrices de los CDC se deber an cons
89. estimaci n de la precisi n se realizaron de acuerdo con las directrices NCCLS EP5 A2 14 El n mero total de r plicas para cada panel fue 96 La tabla 17 presenta los datos RLU de precisi n en t rminos de media desviaci n est ndar coeficiente de variaci n CV porcentaje de concordancia con los resultados esperados y c lculos de variabilidad entre instrumento entre lote entre ciclo y dentro ciclo Tabla 17 Precisi n del sistema PANTHER para el ensayo APTIMA GC Entre um RLU instrumente Entre lote Entre ciclo Dentro ciclo Total Matriz crUImL N pa nea SD sD SD SD SD PUR x1 000 ACN x1 000 AON x1 000 uM x1 000 RN x1 000 MGN 0 96 3 100 0 0 0 0 0 0 2 01 72 8 2 72 5 12 5 96 3 951 100 215 14 5 4 0 0 0 0 568 4 14 4 607 6 154 PM 125 95 5 839 100 370 17 6 3 0 0 0 0 772 58 13 2 856 7 147 1 250 96 6 207 100 33825 54 0 0 0 0 787 64 12 7 8572 1398 0 95 3 100 0 69 216 0 81 25 5 0 77 24 2 2 43 76 3 2 8 87 8 om 12 5 96 3 460 100 0 0 195 84 5 7 113 27 3 3 207 53 6 307 8 9 125 96 6 047 100 158 67 2 6 170 32 2 8 0 0 206 24 234 311 5 1 1 250 96 6 737 100 218 35 3 2 23849 3 5 66 22 1 176 72 2 6 374 4 5 6 0 95 6 100 1 9 33 6 0 0 0 54 9 5 5 96 105 2 6 3 111 2 PSC 12 5 96 3 358 100 2579 7 7 0 0 0 0 485 45 145 549 7 164 125 96 5 272 100 243 09 4 6 201 89 3 8 0 0 751 72 14 3 8154 155 1 250 96 5 945 100 35595 6 51 06 0 9 0 0 759 35 12 8 840 2 1441 Nota La variabilidad de algunos factores
90. i n de la prueba TF torunda endocervical femenina OF orina femenina Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 55 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Tabla 7d Resultados de torundas vaginales de mujeres infectadas o no infectadas con N gonorrhoeae de acuerdo con el estado de infecci n de la paciente NAAT 1 SE Ensayo APTIMA COMBO 2 NAAT 2 Ensayo APTIMA GC Estado de s ntomas SN paciente TF OF TF OF TVP TVC Sint Asint Infectado 43 15 58 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado N C 0 1 1 Infectado 2 2 4 Infectado N C 1 0 1 Infectado 1 1 2 Infectado 1 1 2 Infectado 1 0 1 Infectado 2 1 3 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 0 1 1 Infectado 1 0 1 No infectado 5 1 6 No infectado 1 0 1 No infectado 1 0 1 No infectado 5 2 7 No infectado 0 1 1 No infectado 2 1 3 No infectado 2 1 3 No infectado 3 1 4 No infectado 3 1 4 No infectado 696 577 1 273 No infectado N C 0 1 1 No infectado 0 1 1 No infectado N C 16 9 25 No infectado N C N C 1 0 No infectado N C 2 2 4
91. icial El ensayo APTIMA GC y el APTIMA COMBO 2 seleccionan ambos la subunidad 16S rRNA para captura y detecci n La sonda de captura es la misma para los dos ensayos pero el ensayo APTIMA GC reconoce una regi n de la subunidad 16S rRNA diferente que el ensayo APTIMA COMBO 2 para la detecci n Principios del procedimiento El ensayo APTIMA GC combina las tecnolog as de captura seleccionada TMA y HPA Las muestras se recogen y transfieren a sus respectivos tubos de transporte La soluci n de transporte en estos tubos libera el rRNA diana y lo protege de la degradaci n durante el almacenamiento Cuando el ensayo APTIMA GC se realiza en el laboratorio la mol cula de rRNA diana se a sla de las muestras mediante el uso de un olig mero de captura a trav s de un proceso de captura seleccionada que utiliza micropart culas magn ticas El olig mero de captura contiene una secuencia complementaria a una regi n espec fica de la mol cula diana as como una cadena de residuos de deoxiadenosina Durante el paso de hibridaci n la regi n espec fica de la secuencia del olig mero de captura se une a una regi n espec fica de la mol cula seleccionada El complejo olig mero de captura diana se captura y extrae a continuaci n de la soluci n mediante la reducci n de la temperatura de la reacci n hasta alcanzar la temperatura ambiente Esta reducci n de temperatura permite que se produzca la hibridaci n entre la regi n de la deoxiadenosina del
92. iderar an lisis adicionales sistem ticos para personas con pruebas de cribado para CT o GC positivas cuando la informaci n sobre los factores de riesgo o las encuestas actuales indiquen que la prevalencia es baja lo que dar a lugar a VPP m s bajos por ejemplo 9096 Consulte las directrices de los CDC para informaci n detallada sobre pruebas adicionales y tratamiento de pacientes despu s de un cribado positivo 1 Consulte la tabla 3 para la distribuci n de las RLU de los resultados La magnitud de RLU no es indicativa de la concentraci n del organismo en la muestra Enelrango positivo bajo los datos sugieren que los resultados positivos se deber an interpretar con precauci n teniendo en cuenta que la probabilidad de un positivo falso podr a ser superior a la de un positivo verdadero B Resultados del control de calidad y validez El control negativo para GC APTIMA que est etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC y el control positivo para GC APTIMA que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT act an como controles para los pasos de captura seleccionada amplificaci n y detecci n del ensayo En cumplimiento de las directrices o requisitos de las normativas locales regionales y nacionales o de las organizaciones de acreditaci n se pueden incluir controles adicionales para lisis celular y estabilizaci n del RNA EI control positivo para GC que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTR
93. ies En laboratorios situados a altitudes superiores a los 2 240 m 7 355 pies se realizar n verificaciones volum tricas y estudios espec ficos del ensayo adicionales antes de la instalaci n y del proceso de validaci n o como parte de los mismos V No se ha evaluado el rendimiento del sistema PANTHER a altitudes superiores a los 2 000 m 6 561 pies W No hay evidencia de degradaci n de los cidos nucleicos en la soluci n PreservC yt Si una muestra de Pap en medio l quido PreservCyt tiene cantidades peque as de material celular GC puede producirse una distribuci n desigual de este material celular Adem s en comparaci n con la recogida directa de las muestras con los medios de transporte de torunda APTIMA el volumen adicional de la soluci n PreservCyt produce una mayor diluci n del material de la muestra Estos factores pueden afectar a la capacidad para detectar peque as cantidades de organismos en el material recogido Si los resultados negativos de la muestra no concuerdan con la impresi n cl nica puede ser necesario recoger una nueva muestra X Los clientes deber n validar independientemente un proceso de transferencia LIS Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 42 502185ES Rev E Resultados del estudio cl nico Resultados del estudio cl nico Las caracter sticas de rendimiento del ensayo APTIMA GC se establecieron en dos investigaciones cl nicas realizadas en Norteam rica La primera investigaci n cl
94. imiento de prueba adecuado para prevenir este caso Informaci n para los ensayos T No se ha evaluado el rendimiento de las muestras de torunda vaginal en mujeres embarazadas U No se ha evaluado el rendimiento de las muestras en torundas endocervicales vaginales o uretrales masculinas las muestras de orina masculina o femenina ni las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt en adolescentes menores de 16 a os V No utilice este kit despu s de su fecha de caducidad Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 5 502185ES Rev E Informaci n general W No intercambie mezcle ni combine reactivos de ensayo de kits con n meros de lotes diferentes Los controles y fluidos de ensayo APTIMA pueden ser de diferentes n meros de lote Informaci n de los sistemas DTS X Se deben utilizar puntas con tapones hidrof bicos Se necesita un m nimo de dos pipetas de repetici n para su uso de forma dedicada con este ensayo una para uso en los pasos de captura seleccionada y amplificaci n y otra para uso en los pasos del HPA Se deben dedicar dos micropipeteadores para su uso de forma dedicada con este ensayo uno para la transferencia de muestras y el otro para la preparaci n de reactivos Todos los pipeteadores deben limpiarse regularmente seg n se describe en Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Notas de procedimiento Y Cuando se usen pipetas de repetici n para la adici n de reactivos no toque el tubo con la punta de p
95. inal y de Pap en medio l quido PreservCyt no est concebida para sustituir a los ex menes cervicales y a las muestras endocervicales para el diagn stico de infecciones del aparato genitourinario femenino Las pacientes pueden padecer cervicitis uretritis infecciones de las v as urinarias o infecciones vaginales debido a otras causas o infecciones simult neas con otros agentes E El ensayo APTIMA GC no pretende servir para la evaluaci n de sospechas de abusos sexuales ni para otras indicaciones m dico legales En aquellos pacientes en los que un resultado positivo falso pueda tener un impacto psicol gico o social adverso los CDC recomiendan repetir la prueba con un m todo que utilice otra tecnolog a 1 F La fiabilidad de los resultados depende de la recogida adecuada de las muestras Dado que el sistema de transporte que se utiliza para este ensayo no permite la valoraci n microsc pica de la idoneidad de las muestras los cl nicos deben recibir formaci n en las t cnicas de recogida de muestras adecuadas Consulte el prospecto del kit de recogida de muestras APTIMA adecuado G El fracaso o xito terap utico no se puede determinar con el ensayo APTIMA GC ya que el cido nucleico puede persistir tras un tratamiento antimicrobiano adecuado H Los resultados del ensayo APTIMA GC deben interpretarse junto con otros datos de laboratorio y cl nicos a disposici n del cl nico l Un resultado negativo no impide una posible infe
96. ipeta para impedir el arrastre de un tubo a otro Z Es necesaria una mezcla adecuada para lograr resultados exactos en el ensayo Para los detalles completos consulte Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Notas de procedimiento AA Se deben dedicar ba os de agua independientes para los pasos de captura seleccionada amplificaci n y HPA del ensayo AB La reproducibilidad del ensayo se estableci utilizando un medio de transporte de torunda enriquecido con rRNA No se ha determinado la reproducibilidad en el an lisis de muestras de torunda y de orina que conten an el organismo seleccionado AC Las tarjetas de sellado se deben desechar en el contenedor de desechos inmediatamente despu s de retirarlas de los tubos de reacci n Se deben utilizar siempre tarjetas de sellado nuevas no deben reutilizarse nunca las de un paso anterior Las tarjetas de sellado se deben fijar firmemente a la parte superior de todos los tubos de reacci n Requisitos de almacenamiento y manipulaci n de los reactivos A Los siguientes reactivos permanecen estables cuando se almacenan a una temperatura entre 2 C y 8 C refrigerados Reactivo de amplificaci n GC APTIMA Reactivo enzim tico APTIMA Reactivo de sonda GC APTIMA Reactivo de captura seleccionada B APTIMA Control positivo GC Control negativo CT APTIMA Control positivo CT Control negativo GC APTIMA B Los siguientes reactivos permanecen estables cuando se almacenan a una temperatura
97. l o los ojos l velos con agua Si se produce un derrame de estos fluidos diluya el derrame con agua antes de secarlo G Las superficies de trabajo pipetas y otros equipos se deben descontaminar regularmente con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Informaci n de los sistemas DTS H Para reducir al m nimo la contaminaci n por amplicones en el ensayo se recomienda encarecidamente utilizar un rea aparte para el HPA Este rea dedicada debe estar separada de las reas de preparaci n del reactivo de captura seleccionada y de amplificaci n Para evitar que las reas del laboratorio se contaminen con amplicones dichas reas deben organizarse con un flujo de trabajo unidireccional de la preparaci n del reactivo al HPA Las muestras equipos y reactivos no deben devolverse al rea donde se realiz un paso anterior Adem s el personal no debe volver a las reas de trabajo anteriores sin tomar las medidas de precauci n adecuadas contra la contaminaci n Informaci n para las muestras J Para la recogida de muestras de torunda endocervical y uretral masculina utilice s lo el kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para dichas muestras Para la recogida de muestras de orina utilice s lo el kit de recogida de muestras de orina APTIMA para muestras de orina masculina y femenina Para muestras de torunda vaginal recogidas por el cl nico y por la paciente utilice s lo el kit de r
98. las muestras anteriormente analizadas y tapadas se deben centrifugar los tubos de transporte de muestras durante 5 minutos a una fuerza centr fuga relativa Relative Centrifugal Force RCF de 420 para llevar todo el l quido al fondo del tubo Evite salpicaduras y todo tipo de contaminaci n cruzada Nota Las muestras deben enviarse de acuerdo con las normativas de transporte nacionales e internacionales aplicables Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 9 502185ES Rev E Sistemas DTS Sistemas DTS Los reactivos para el ensayo APTIMA GC se indican a continuaci n para los sistemas DTS Los s mbolos de identificaci n de los reactivos tambi n se indican junto al nombre del reactivo DTS saos m Reactivos y materiales suministrados Kit para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 100 pruebas 2 cajas N de cat logo 301091 Caja refrigerada para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA caja 1 de 2 almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla S mbolo Componente Cantidad A Reactivo de amplificaci n GC APTIMA 1 vial Acidos nucleicos no infecciosos secados en soluci n de tamp n con un contenido de agente de volumen 5 E Reactivo enzim tico APTIMA 1 vial Transcriptasa inversa y RNA polimerasa secadas en soluci n de tamp n HEPES con un contenido de reactivo de volumen 10 P Reactivo de sonda GC APTIMA 1 vial Sondas de DNA quimioluminiscentes y no infecciosas secadas en soluci n de tamp n suc
99. le de distribuci n b Vierta al menos 100 mL de soluci n de hipoclorito de sodio del 0 5 al 0 796 0 07 M a 0 1 M o si se prefiere del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M en la cubeta de cebado Aspire toda la soluci n a trav s del peine m ltiple de aspiraci n c Vierta al menos 100 mL de agua desionizada en la cubeta de cebado Aspire toda el agua a trav s del peine m ltiple de aspiraci n Expulse las puntas a su TTC original Deje encendida la bomba de vac o hasta que el tubo del peine m ltiple est seco para evitar el retroflujo f Descontamine las superficies del peine m ltiple de aspiraci n seg n se describe en Unidad TCS 3 Contenedor de desechos del TCS Retire la botella de desechos del sistema de captura seleccionada semanalmente o cuando est llena en un 25 a Apague la bomba de vac o y deje que la presi n de vac o se iguale Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 20 502185ES Rev E Sistemas DTS b Libere los conectores de desconexi n r pida entre la botella de desechos y la botella de derrames y entre la botella de desechos y el peine m ltiple de aspiraci n Retire la botella de desechos del alojamiento del dep sito de vac o Retire el tap n y a ada cuidadosamente 400 mL de soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M al frasco o 1 L si se utiliza una botella de desechos de 10 L Nota Esto se puede llevar a cabo en una campana extractora de humos para no liber
100. lidad cargados J Los reactivos almacenados en el sistema PANTHER tienen 72 horas de estabilidad cargados K Tanto el reactivo de sonda GC como el reactivo de sonda reconstituido GC son fotosensibles Almacene los reactivos al abrigo de la luz L Una vez calentados a temperatura ambiente algunos tubos de controles pueden aparecer turbios o contener precipitados La turbiedad o la precipitaci n asociadas a los controles no afectan al rendimiento del control Los controles se pueden utilizar est n claros o turbios precipitados Si se desean controles claros se puede acelerar la solubilizaci n incub ndolos en el extremo superior del rango de temperatura ambiente 15 C a 30 C M No congele los reactivos Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 7 502185ES Rev E Informaci n general Recogida y almacenamiento de muestras El ensayo APTIMA GC est dise ado para detectar la presencia de GC en muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina recogidas por el cl nico muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente muestras de orina masculina y femenina y muestras de Pap en medio l quido PreservCyt No se ha evaluado el rendimiento con muestras distintas a las recogidas con los siguientes kits de recogida de muestras Kit de recogida de muestras de torunda unisex APTIMA para muestras de torunda endocervical y uretral masculina Kit de recogida de orina APTIMA para muestras de orina masculina y femenina
101. locarse a 2 C 10 C y 30 C Las muestras procesadas se analizaron entonces durante 17 d as almacenadas a 30 C y durante 36 d as almacenadas a una temperatura entre 2 C y 10 C Todas las muestras enriquecidas fueron positivas para GC en todas las ocasiones y temperaturas Los datos que apoyan condiciones de almacenamiento m s prolongadas se generaron de cuatro mezclas de muestras en soluci n PreservCyt procesadas negativas analizadas a temperaturas por debajo del punto de congelaci n Cada mezcla se enriqueci con 50 100 CFU GC ensayo y luego se analiz al inicio del ensayo Cada mezcla se coloc primero a 30 C durante 14 d as y luego se almacen a 20 C o 70 C a lo largo de 106 d as Todas las muestras enriquecidas fueron positivas para GC en todas las ocasiones y temperaturas C Estudio de la estabilidad de las muestras con congelaci n adicional a 20 C Los datos que apoyan las condiciones de almacenamiento recomendadas a una temperatura de 20 C para las muestras de torunda endocervical torunda uretral torunda vaginal orina femenina orina masculina y Pap en medio l quido PreservCyt se generaron con 90 muestras de cada tipo con resultado negativo donde 30 muestras fueron enriquecidas con GC a 50 CFU por reacci n 30 muestras fueron enriquecidas a 5 CFU por reacci n y 30 muestras no fueron enriquecidas Las muestras se almacenaron a 20 C y se analizaron en los d as 0 200 y 400 Todas las muestras enriqu
102. mbres 1337 AS 9 9 99 95 1 100 94 0 100 97 3 100 100 97 4 98 6 Todos Mujeres 72 33 0 1 38 89 4 100 86 5 99 9 92 5 100 Srina 98 5 100 99 2 Hombres ASU OS 9 oa 91 8 100 94 4 100 958 100 100 100 100 PreservCyt Mujeres 51 40 0 0 11 91 2 100 71 5 100 93 0 100 indica un resultado positivo un resultado negativo IC intervalo de confianza Muestras de torundas vaginales y endocervicales combinadas Una discordancia en torunda vaginal Estudio de precisi n El efecto de varios factores en la variabilidad del rendimiento del ensayo APTIMA GC en el TIGRIS DTS System se evalu utilizando paneles de reproducibilidad de ETS de 12 muestras Las muestras del panel conten an de O a 250 000 fg GC rRNA ensayo El panel inclu a muestras con concentraciones de GC a la sensibilidad anal tica declarada de 250 fg GC rRNA ensayo Los paneles se analizaron en 1 centro de an lisis externo y en Gen Probe usando 2 lotes de reactivos de ensayo APTIMA GC En Gen Probe 2 usuarios realizaron cada uno 3 listas de trabajo v lidas por lote de reactivo en 2 instrumentos TIGRIS DTS System por separado En el centro de an lisis externo 2 usuarios realizaron cada uno 3 listas de trabajo v lidas por lote de reactivo en 1 instrumento TIGRIS DTS System Una lista de trabajo consist a de controles de ciclo y seis paneles de 12 muestras Las muestras con resultados iniciales no v lidos o equ vocos de listas de trabajo d
103. n Instrument LLC TECAN y FREEDOM EVO son marcas comerciales de Tecan Group AG Cualquier otro nombre de marca mencionada en este prospecto es propiedad de su correspondiente due o 2003 2013 Gen Probe Incorporated 502185ES Rev E 2013 06 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 74 502185ES Rev E
104. n tiempo de selecci n en el paso de selecci n mayor del recomendado 2 Se pueden producir fondos altos si el tiempo de selecci n en el paso de selecci n se acorta la temperatura de selecci n no es correcta o la mezcla es insuficiente despu s de la adici n del reactivo de selecci n 3 Si el control negativo APTIMA para GC que est etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGO es positivo o equ voco para GC consulte Notas de procedimiento Contaminaci n del ensayo para m s informaci n Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 22 502185ES Rev E TIGRIS DTS System TIGRIS DTS System TIGR S Los reactivos para el ensayo APTIMA GC se indican a continuaci n para e el TIGRIS DTS System Los s mbolos de identificaci n de los reactivos tambi n se indican junto al nombre del reactivo Reactivos y materiales suministrados Kit para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 100 pruebas 2 cajas y 1 kit de controles N de cat logo 303092 2 x 50 pruebas 2 cajas y 1 kit de controles N de cat logo 302225 Caja refrigerada para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA Caja 1 de 2 almacenar entre 2 C y 8 C al recibirla Cantidad S mbolo Componente Kitde 100 Kitde2x 50 pruebas pruebas A Reactivo de amplificaci n GC APTIMA 1 vial 2 viales cidos nucleicos no infecciosos secados en soluci n de tamp n con un contenido de agente de volumen 596 E Reactivo enzim tico APTIMA 1 vial 2 viales T
105. naci n adecuados S lo se deber a permitir realizar este procedimiento de diagn stico a personal con la formaci n debida para manipular materiales infecciosos P Evite la contaminaci n cruzada durante los pasos de manipulaci n de las muestras Las muestras pueden contener concentraciones extremadamente altas de organismos Aseg rese de que los recipientes de muestras no entren en contacto unos con otros y deseche los materiales usados sin pasarlos por encima de los recipientes abiertos Cambie los guantes si entran en contacto con la muestra Q Si el laboratorio recibe un tubo de trasporte de muestra en torunda con ninguna torunda dos torundas una torunda de limpieza o una torunda no suministrada por Gen Probe la muestra debe rechazarse Antes de rechazar un tubo de transporte de torunda que no contenga ninguna torunda compruebe que no se trata de un tubo de transferencia de muestras APTIMA ya que este tubo de transporte de muestras no contendr ninguna torunda R Para muestras de Pap en medio l quido PreservCyt recoja la muestra de acuerdo con las instrucciones del fabricante Las al cuotas posteriormente eliminadas del vial PreservCyt para su an lisis con el ensayo APTIMA GC deben procesarse utilizando s lo el kit de transferencia de muestras APTIMA S Una vez realizada la perforaci n el l quido puede salirse de los tapones de los tubos de transporte APTIMA bajo determinadas condiciones Siga las instrucciones en el Proced
106. ndadas para las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt se generaron con muestras de Pap en medio l quido procesadas y sin procesar negativas Para las muestras no procesadas se analizaron cuatro mezclas de muestras en soluci n PreservCyt despu s de haber Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 61 502185ES Rev E Rendimiento anal tico de los sistemas DTS estado almacenadas en el vial con la soluci n Cytyc PreservCyt Cada mezcla de muestras se enriqueci con 50 100 CFU GC ensayo se conserv a 2 C 10 C y 30 C y luego se analiz al inicio del ensayo y en los d as 5 7 8 14 18 21 25 y 36 Todas las muestras enriquecidas fueron positivas para GC en todas las ocasiones y temperaturas Para las muestras procesadas se utilizaron cuatro mezclas de muestras en soluci n PreservCyt para determinar la estabilidad de las muestras procesadas a una temperatura entre 2 C y 30 C Cada mezcla de muestras negativas se enriqueci con 50 100 CFU GC ensayo y luego se analiz al inicio del ensayo Antes del procesamiento las muestras en soluci n PreservCyt se almacenaron a 30 C durante siete 7 d as para simular el lapso de tiempo entre la recogida de las muestras el procesamiento de Pap y el env o a un laboratorio de an lisis microbiol gicos Despu s de siete d as a 30 C se transfirieron al cuotas de 1 mL de cada mezcla a un tubo de transferencia de muestras APTIMA y se analizaron al inicio del ensayo antes de co
107. ndica en el ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual del usuario del procesador ThinPrep 2000 y en el prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA Transfiera 1 mL del fluido restante en el vial de soluci n PreservCyt a un tubo de transferencia de muestras APTIMA de acuerdo con las instrucciones del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA d Una vez transferida la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt al tubo de transferencia de muestras APTIMA la muestra debe analizarse con el ensayo APTIMA GC antes de 30 d as si se ha almacenado a una temperatura entre 2 C y 8 C o antes de 14 d as si se ha almacenado entre 15 C y 30 C Si fuera necesario ampliar el tiempo de almacenamiento se pueden congelar a una temperatura entre 20 C y 70 C durante un per odo de hasta 12 meses despu s de la transferencia consulte Estudios de la estabilidad de las muestras C Almacenamiento de muestras despu s de la prueba 1 Las muestras analizadas deben almacenarse boca arriba en una gradilla 2 Lostubos de transporte de muestras deben cubrirse con una nueva barrera de aluminio o pel cula de pl stico limpias 3 Si es necesario congelar o enviar las muestras analizadas sustituya los tapones penetrables de los tubos de transporte de muestras por tapones nuevos no penetrables Si es necesario enviar las muestras para su an lisis a otro laboratorio se deben mantener las temperaturas recomendadas Antes de destapar
108. nico enriquecido con rRNA de GC El estudio del panel cl nico enriquecido de rRNA de GC evalu la concordancia entre los dos sistemas utilizando seis paneles cl nicos de GC preparados por Gen Probe enriquecidos con O a 250 000 fg rRNA ensayo de GC Los paneles cl nicos de GC se crearon a partir de muestras de torunda endocervical torunda vaginal torunda uretral orina masculina orina femenina y Pap en medio l quido PreservCyt que dieron resultados negativos para el ensayo APTIMA GC en los sistemas DTS cuando se analizaron en Gen Probe Las muestras negativas se mezclaron por tipo de muestra se enriquecieron o no con rRNA de GC y se dividieron en al cuotas como r plicas de cada muestra del panel Las r plicas de cada una de las 6 muestras del panel con diferentes niveles de rRNA enriquecido se combinaron para crear un panel cl nico para cada tipo de muestra Cada panel conten a un total de 132 r plicas Los datos iniciales de orina masculina y femenina muestran que algunas muestras del panel que conten an rRNA a un nivel inferior a la sensibilidad anal tica declarada dieron resultados negativos inesperados en el TIGRIS DTS System Se llevaron a cabo dos estudios de seguimiento para demostrar y confirmar la concordancia con los resultados esperados en paneles de orina masculina y femenina enriquecidos El dise o original del estudio combinaba muestras negativas en una sola mezcla maestra Se enmend el dise o del estudio de seguimient
109. o con GC se bas en los resultados de muestras de torunda y de orina procedentes del ensayo APTIMA COMBO 2 disponible comercialmente y de la otra prueba NAAT disponible comercialmente Los sujetos se consideraron infectados con GC si dos de las cuatro muestras de torunda y de orina dieron positivo en el ensayo APTIMA COMBO 2 y en la otra prueba NAAT de referencia una muestra con resultado positivo en cada NAAT Los sujetos se consideraron no infectados si menos de dos resultados de NAAT de referencia fueron positivos El cultivo no se utiliz como una prueba de referencia Se utilizaron un total de 7 653 resultados del ensayo APTIMA GC para calcular la sensibilidad y la especificidad La sensibilidad y la especificidad para GC por sexo tipo de muestra y estado de s ntomas seg n corresponda se presentan en la tabla 4 La tabla 6 presenta la sensibilidad la especificidad y los valores predictivos del ensayo APTIMA GC comparados con el estado de infecci n del paciente para cada centro cl nico y en general Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 47 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS Las tablas 7a 7e resumen el n mero de resultados de sujetos sintom ticos y asintom ticos designados como infectados o no infectados con GC de acuerdo con el algoritmo de estado de infecci n del paciente De los 2 787 sujetos inscritos 15 eran sujetos con estado de paciente infectado por GC desconocido Los sujetos se designaron con un
110. o para muestras de orina masculinas y femeninas Las muestras se dividieron en al cuotas en minimezclas negativas confirmadas para formar paneles positivos y negativos Se crearon ciento treinta y ocho r plicas para cada panel La tabla 14 presenta el porcentaje de concordancia para cada nivel de rRNA en los paneles de torunda endocervical torunda vaginal torunda uretral orina masculina orina femenina y Pap en medio l quido PreservCyt respectivamente con los resultados GC esperados para el TIGRIS DTS System y para los sistemas DTS La concentraci n abarc desde 1 logaritmo por debajo hasta 3 logaritmos por encima de 250 fg rRNA ensayo para GC En la tabla 14 tambi n se indican los porcentajes de concordancia general del estudio de paneles cl nicos entre el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 67 502185ES Rev E Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System Tabla 14 Estudio de concordancia de panel cl nico enriquecido con rRNA de GC de de Porcentaje de Muestra Muestra Concentraci n R plicas concor concor concordancia del panel fg rRNA ensayo dancia dancia general entre TIGRIS TIGRIS DTS y DTS IC 9594 Sin diana 0 12 100 100 Muy baja 25 30 100 100 Endocervical Baja 250 30 100 100 100 97 2 100 Media 2 500 30 100 100 Alta 250 000 30 100 100 Sin diana 0 12 100 100 Muy b
111. olig mero de captura y las mol culas de polideoxitimidina que est n unidas covalentemente a las part culas magn ticas Las micropart culas incluidas las mol culas diana capturadas unidas a ellas se desplazan al lateral del tubo de reacci n utilizando imanes y se aspira el sobrenadante Las part culas se lavan para eliminar la matriz de muestras residual que puede contener inhibidores de la reacci n de amplificaci n Una vez finalizados los pasos de captura seleccionada las muestras est n listas para la amplificaci n Los ensayos de amplificaci n seleccionada se basan en la capacidad de los cebadores de oligonucle tidos complementarios para anilar de forma espec fica y permitir la amplificaci n enzim tica de las cadenas de cido nucleico seleccionadas La reacci n TMA de Gen Probe replica una regi n espec fica del 16S rRNA de GC a trav s de intermediarios de DNA Se utiliza un solo juego de cebadores para cada mol cula seleccionada La detecci n de las secuencias de producto de amplificaci n de rRNA amplic n se logra mediante la hibridaci n del cido nucleico Una sonda de DNA quimioluminiscente monocatenaria que es complementaria a una regi n del amplic n seleccionado se marca con una mol cula de ster de acridinio La sonda DNA marcada se combina con el amplic n para formar h bridos RNA DNA estables El reactivo de selecci n diferencia la sonda hibridada de la no hibridada eliminando la generaci n de se al de l
112. os estudios de muestras cl nicas se presenta en la tabla 8 Tabla 8 Distribuci n de las RLU de los controles APTIMA durante los estudios de muestras cl nicas incluidos estudios de muestras de torunda endocervical vaginal y uretral masculina muestras de orina masculina y femenina y Pap en medio l quido PreservCyt RLU x1 000 Estudio cl nico Estudio cl nico de Control Estad sticas de muestras de muestras de Pap torunda y de en medio l quido orina PreservCyt N 193 218 Media 5 048 4 561 SD 1 071 1 295 E a M ximo 6 765 6 791 Control positivo GC Control negativo CT 75 percentil 5 763 5 450 Mediana 5 175 4 859 25 percentil 4 645 3 804 M nimo 229 158 N 193 218 Media 2 15 2 60 SD 2 20 2 80 M ximo 20 29 Control positivo CT Control negativo GC 75 percentil Mediana 25 percentil Oj NN N N O M nimo Estudio de precisi n La precisi n del ensayo APTIMA GC esto es su reproducibilidad se evalu en dos centros cl nicos externos y en Gen Probe La precisi n del ensayo APTIMA GC se evalu con tres lotes de kit de ensayo APTIMA GC tres centros de estudio seis usuarios y 108 ciclos del ensayo APTIMA GC Dos usuarios en cada uno de los tres centros de an lisis realizaron un total de seis ciclos de ensayo APTIMA GC por lote de kit sumando un total de 36 ciclos por lote de kit Cada ciclo estaba formado por un panel de precisi n de 12 m
113. pere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego invierta de nuevo el conjunto de los frascos inclin ndolos a un ngulo de 45 para reducir al m nimo la formaci n de espuma figura 3 paso 5 Deje que todo el l quido regrese a la botella de pl stico i Retire el collar de reconstituci n y el vial de vidrio figura 3 paso 6 j Tape la botella de pl stico Anote las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n en la etiqueta figura 3 paso 7 k Deseche el collar y el vial figura 3 paso 8 Advertencia Evite que se forme espuma al reconstituir los reactivos La espuma compromete la detecci n de nivel en el sistema PANTHER 1 ES 5 3 4 d INI e t3 IN NE IN MX 5 6 A T7 8 18 d A9 Bd LH o X OOOO Figura 3 Proceso de reconstituci n del sistema PANTHER 2 Prepare el reactivo de captura seleccionada de trabajo GC WTCR GC a Empareje los frascos apropiados del TCR GC y TCR B b Compruebe los n meros de lote de los reactivos en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados en el kit c Abra el frasco de TCR GC y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia d Abra el frasco de TCR B y vierta todo su contenido en el frasco de TCR GC Es normal que quede una peque a cantidad de l quido en el frasco de TCR B e Tape el frasco de TCR GC y agi
114. podr a ser num ricamente negativa lo que puede ocurrir si la variabilidad debida a dichos factores es muy peque a Cuando esto sucede SD 0 y CV 0 el n de 95 indic 1 r plica no v lida de un total de 96 que no se volvi a analizar Especificidad anal tica La especificidad anal tica no se prob en el instrumento PANTHER Consulte Rendimiento anal tico del TIGRIS DTS System para el Estudio de equivalencia de la especificidad anal tica Estudio de equivalencia de las substancias interferentes La sangre normalmente hallada en muestras genitourinarias podr a interferir en algunos ensayos de amplificaci n Se utiliz sangre completa para establecer el grado de interferencia de la sangre en el sistema PANTHER con respecto a este posible interferente Se a adi sangre nueva a mezclas cl nicas de muestras de torunda vaginal muestras de Pap en medio l quido PreservCyt post procesadas o muestras de orina y luego se analizaron para determinar la posible interferencia en el ensayo en presencia y ausencia de GC seleccionado El equivalente de rRNA estimado de 125 GC CFU mL 250 fg ensayo se utiliz como la concentraci n diana ya que ste representa la sensibilidad anal tica del ensayo Las muestras se analizaron en el sistema PANTHER Todas las muestras que conten an cido nucleico seleccionado dieron positivo al analizarse a una concentraci n del Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 72 502185ES Rev E Bibliograf a 10
115. ranscriptasa inversa y RNA polimerasa secadas en soluci n de tamp n HEPES con un contenido de reactivo de volumen 1096 P Reactivo de sonda GC APTIMA 1 vial 2 viales Sondas de DNA quimioluminiscentes y no infecciosas secadas en soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente 5 6 TCR B Reactivo de captura seleccionada B APTIMA 1x0 30mL 2x0 143 mL cido nucleico no infeccioso en una soluci n de tamp n con un contenido de detergente lt 5 Collares de reconstituci n 6 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 23 502185ES Rev E TIGRIS DTS System Caja a temperatura ambiente para el ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA Caja 2 de 2 almacenar entre 15 C y 30 C al recibirla Cantidad S mbolo Componente Kit de 100 Kitde2x 50 pruebas pruebas AR Soluci n de reconstituci n de reactivo 1 x 11 9 mL 2x6 4 mL de amplificaci n GC APTIMA Soluci n acuosa con conservantes ER Soluci n de reconstituci n de reactivo enzim tico 1x6 3mL 2x3 3mL APTIMA Soluci n de tamp n HEPES con un surfactante y glicerol PR Soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda 1x 15 2 mL 2x 7 7 mL GC APTIMA Soluci n de tamp n succinato con un contenido de detergente lt 5 S Reactivo de selecci n APTIMA 1x43 0 mL 2x20mL Soluci n de tamp n borato 600 mM con surfactante TCR Reactivo de captura seleccionada GC APTIMA 1x26 0 mL 2x17mL Soluci n de tamp n sal con un contenido de olig
116. reconstituir los reactivos de amplificaci n GC enzim tico GC y de sonda GC combine los frascos de reactivo liofilizado con la soluci n de reconstituci n Si est n refrigeradas permita que las soluciones de reconstituci n alcancen la temperatura ambiente antes de usarlas a Empareje cada soluci n de reconstituci n con su reactivo liofilizado Aseg rese de que existe correspondencia de colores en las etiquetas de la soluci n de reconstituci n y del reactivo antes de conectar el collar de reconstituci n b Compruebe los n meros de lote en la Hoja de c digos de barras del lote maestro para asegurarse de que est n emparejados los reactivos adecuados c Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte con firmeza el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial figura 3 paso 1 d Abrala soluci n de reconstituci n correspondiente y ponga el tap n sobre una superficie de trabajo cubierta y limpia e Mientras sostiene el frasco de soluci n sobre la mesa inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en el frasco figura 3 paso 2 f Invierta lentamente el conjunto de los frascos Deje que la soluci n pase del frasco al vial de vidrio figura 3 paso 3 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 33 502185ES Rev E Sistema PANTHER g Agite con una rotaci n suave la soluci n del frasco para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el frasco figura 3 paso 4 h Es
117. resencia de una infecci n GC ya que los resultados dependen de una recogida de muestras correcta de la ausencia de inhibidores y de si se detecta suficiente rRNA Los resultados de la prueba pueden verse afectados por la recogida y almacenamiento incorrectos de la muestra un error t cnico la confusi n de muestras o niveles de diana por debajo del l mite de detecci n del ensayo Serecomienda analizar una muestra endocervical en pacientes femeninas cl nicamente sospechosas de padecer una infecci n clamidial o gonoc cica Si se recogen ambas muestras de Pap y de torunda endocervical la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt debe recogerse antes de la muestra de torunda endocervical Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 40 502185ES Rev E Limitaciones Limitaciones A Eluso de este ensayo est limitado al personal con la debida formaci n para realizar el procedimiento El incumplimiento de las instrucciones indicadas en este prospecto puede producir resultados err neos B No se han evaluado los efectos del uso de tampones lavados vaginales y variables de recogida de muestras para determinar su impacto en la detecci n de GC C La presencia de mucosidad en las muestras endocervicales no interfiere con la detecci n de GC con el ensayo APTIMA GC No obstante para garantizar una obtenci n correcta de muestras endocervicales se debe eliminar el exceso de mucosidad D La recogida de muestras de orina de torunda vag
118. reservCyt en la secci n Rendimiento cl nico en sistemas DTS para una descripci n de las caracter sticas de rendimiento de las muestras cl nicas Tabla 1 Prevalencia de N gonorrhoeae por centro cl nico y general de acuerdo con los resultados del ensayo APTIMA GC N positivas N analizadas Centro TM OM TF OF TVP TVC 1 214 54 2522 214 54 252 61 14 22 57 13 230 64 14 219 61 14 230 2 26 5 93 351 20 71 354 161 32 199 150 30 200 16 2 32 198 16 6 33 199 3 0 0 0 4 0 0 0 4 44 5 114 35 4 113 36 411 35 4 113 4 N C N C 2 3 6 266 19 9 270 2 2 6 267 3 0 8 269 5 5 5 11 200 55 11 200 45 3 199 40 2 199 40 2 199 40 2 199 6 14 5 44 304 134 41 305 82 24 204 5 17 296 83 24 200 7 5 22 295 7 5 8 12 207 58 12 207 o o 0 102 o o 0 102 0 0 0 102 o o 0 102 8 N C N C 2 0 1 49 2 0 1 49 2 1 1 48 2 0 1 51 Todos 16 22 214 1318 44 3 189 1322 5 9 85 1452 4 9 72 1459 5 8 83 1434 5 8 84 1458 TM torunda uretral masculina OM orina masculina TF torunda endocervical femenina OF orina femenina TVP torunda vaginal recogida por la paciente TVC torunda vaginal recogida por el cl nico Tabla 1a Prevalencia de N gonorrhoeae por centro cl nico y general de acuerdo con los resultados del ensayo APTIMA GC utilizando muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Centro N positivas N analizadas 1 5
119. rrespondientes a las reas que se van a analizar 2 Extraigala torunda para recogida de muestras aplicador azul con impresiones verdes de su envase humedezca la torunda en el medio de transporte de torunda y p sela por el rea designada con un movimiento circular 3 Inserte inmediatamente la torunda en el tubo de transporte 4 Quiebre con cuidado el bastoncillo de la torunda en la l nea con la muesca tenga cuidado de que el contenido no salpique 5 Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de torunda Repita los pasos del 2 al 5 en todas las reas en las que se vaya a aplicar la torunda 7 Analice la torunda utilizando el ensayo APTIMA GC de acuerdo con el Procedimiento de prueba de los sistemas DTS e Si los resultados son positivos o equ vocos para GC consulte nterpretaci n de la prueba Resultados de control de calidad y del paciente la superficie podr a estar contaminada Descontamine la superficie con soluci n de hipoclorito de sodio seg n lo recomendado en Procedimiento de prueba de los sistemas DTS Preparaci n del equipo Nota Si se sospecha la existencia de contaminaci n en el ba o de agua ste puede analizarse usando el procedimiento para muestras de orina a adiendo 2 0 mL de agua al tubo de transporte de la muestra de orina K Identificaci n y soluci n de problemas 1 Los valores bajos del control positivo pueden deberse a temperaturas incorrectas durante los distintos pasos del ensayo o a u
120. ruebas Soluciones de reconstituci n de los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda TCR y reactivo de selecci n 501603 100 tapones 501604 100 tapones Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 25 502185ES Rev E TIGRIS DTS System Materiales opcionales N de cat logo Kit de controles APTIMA 301110 Potenciador de lej a GEN PROBE 302101 para la limpieza sistem tica de las superficies y el equipo Procedimiento de prueba del TIGRIS DTS System Nota Consulte el TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual del usuario del TIGRIS DTS System para informaci n adicional sobre los procedimientos del TIGRIS DTS System A Preparaci n del rea de trabajo Limpie las superficies de trabajo en las que van a preparar los reactivos y las muestras Limpie las superficies de trabajo con una soluci n de hipoclorito de sodio al 2 596 3 596 0 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa en la que vayan a preparar los reactivos y las muestras con cubiertas absorbentes con forro de pl stico que est n limpias para mesas de laboratorio B Reconstituci n y preparaci n de reactivos de un nuevo kit Nota La reconstituci n de los reactivos debe realizarse antes de iniciar cualquier tarea en el TIGRIS DTS System 1 Para r
121. ry Standards 2004 NCCLS EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods Approved Guideline 2nd edition Vol 24 No 25 Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 73 502185ES Rev E Bibliograf a 15 Peterson E M V Darrow J Blanding S Aarnaes and L M de La Maza 1997 Reproducibility problems with the AMPLICOR PCR Chlamydia trachomatis test J Clin Microbiol 35 957 959 16 Schachter J 1985 Chlamydiae Psittacosis Lymphogranuloma Venereum Trachoma group p 856 862 In E H Lennette et al ed Manual of Clinical Microbiology 4 ed American Society for Microbiology Washington D C 17 Schachter J and M Grossman 1981 Chlamydial infections Ann Rev Med 32 45 61 18 Schachter J 1978 Medical progress chlamydial infections third of three parts NEJM 298 540 549 19 Schachter J E C Hill E B King V R Coleman P Jones and K F Meyer 1975 Chlamydial infection in women with cervical dysplasia Am J Obstet Gynecol 123 753 757 20 Stary A E Schuh M Kerschbaumer B Gotz and H Lee 1998 Performance of transcription mediated amplification and Ligase chain reaction assays for detection of chlamydial infection in urogenital samples obtained by invasive and noninvasive methods J Clin Microbiol 36 2666 2670 21 Toye B W Woods M Bobrowska and K Ramotar 1998 Inhibition of PCR in genital and urine specimens submitted for Chlamydia trachomatis
122. s se recogieron 120 muestras de orina negativas para GC Los paneles positivos y negativos se analizaron en tres sistemas PANTHER y tres TIGRIS DTS Systems El porcentaje de concordancia positiva entre el sistema PANTHER y el TIGRIS DTS System fue del 100 con un l mite inferior para el intervalo de confianza de 95 de 98 9 El porcentaje de concordancia negativa entre el sistema PANTHER y los TIGRIS DTS System fue del 10096 con un l mite inferior para el intervalo de confianza de 9596 de 98 9 Los resultados del estudio se muestran en la tabla 16 Tabla 16 Estudio de concordancia de panel cl nico enriquecido concordancia con los resultados esperados de GC Concentraci n TIGRIS PANTHER Muestra del panel R plicas 5 A E CFU mL fglensayo concordancia concordancia Positiva muy baja 12 5 25 117 100 100 Positiva baja 125 250 120 100 100 Positiva media 1 250 2 500 120 100 100 Negativo 0 0 360 100 100 Porcentaje de concordancia general positiva entre el TIGRIS DTS System y el sistema PANTHER IC 95 100 98 9 100 Porcentaje de concordancia general negativa entre el TIGRIS DTS System y el sistema PANTHER IC 95 100 98 9 100 Estudio de sensibilidad anal tica La sensibilidad anal tica del ensayo APTIMA GC se prob utilizando tres matrices de muestras representativas Estos fueron orina procesada con medio de transporte de orina Urine Transport Medium UTM soluci n de Pap en medio l quido PreservCyt dil
123. s TIGRIS DTS Systems Estos resultados demuestran que la contaminaci n de arrastre se reduce al m nimo en el TIGRIS DTS System Tabla 15 Resumen de arrastre general del TIGRIS DTS System N de pruebas N total de resultados en Intervalos de confianza Instrumento negativas resultados positivos falsos IC 9594 v lidas positivos falsos GC para GC gt TIGRIS 1 787 0 0 00 0 00 0 38 TIGRIS 2 791 qu 0 13 0 00 0 70 TIGRIS 3 792 4 0 51 0 14 0 29 dodoso 2 370 5 0 21 0 07 0 49 instrumentos AAA _Q_ gt Q _ o ec c _ huhuhhuu t eo _ zz _ gt _ gt gt 02 __ mMI_ _ e nit a TIGRIS DTS System 1 no tuvo ning n resultado positivo GC falso directamente despu s de un positivo de diana alta b TIGRIS DTS System 2 tuvo un resultado positivo GC falso directamente despu s de un positivo de diana alta C TIGRIS DTS System 3 tuvo tres resultados positivos GC falsos directamente despu s de un positivo de diana alta Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 70 502185ES Rev E Rendimiento anal tico del sistema PANTHER Rendimiento anal tico del sistema PANTHER Estudio de concordancia de panel cl nico enriquecido Las muestras de orina negativas individuales se enriquecieron con GC para crear un panel de 120 muestras GC positivas Muestras del panel positivo de GC se enriquecieron con organismos a 12 5 CFU mL 125 CFU mL o 1 250 CFU mL 25 fg ensayo 250 fg ensayo o 2 500 fg ensayo Adem
124. sculina y femenina torunda vaginal y Pap en medio l quido PreservCyt Las muestras se transfirieron directamente a Gen Probe para su an lisis En Gen Probe las muestras de torunda endocervical torunda uretral masculina y orina femenina y masculina se analizaron primero con el ensayo APTIMA COMBO 2 en el TIGRIS DTS System Las muestras de torunda vaginal y de Pap en medio l quido PreservCyt se cribaron con el ensayo APTIMA COMBO 2 en los sistemas DTS Las muestras con resultados finales no v lidos o equ vocos no se seleccionaron para el estudio de concordancia de las muestras cl nicas APTIMA GC Se seleccionaron 129 torundas femeninas 70 endocervicales y 59 vaginales 133 muestras de torunda uretral masculina 72 de orina femenina 130 de orina masculina y 51 de Pap en medio l quido PreservCyt con resultados positivos y negativos para GC en el ensayo APTIMA COMBO 2 para an lisis comparativo entre el TIGRIS DTS System y los sistemas DTS para el ensayo APTIMA GC La mayor a de las muestras 88 torundas femeninas 93 torundas masculinas 47 de orina femenina 70 de orina masculina y 34 de Pap en medio l quido PreservCyt incluidas para an lisis comparativo proced an de individuos sintom ticos Las muestras con resultados iniciales no v lidos o equ vocos volvieron a analizarse utilizando el mismo sistema en el que se gener el resultado Tres muestras de orina femenina 1 de torunda vaginal y 1 de torunda uretral masculina tuvieron resulta
125. segundos Vuelva a conectar el peine m ltiple de aspiraci n y aseg rese de que el vacu metro cumple la especificaci n del nivel de vac o Deje encendida la bomba de vac o hasta que hayan finalizado todos los pasos de captura seleccionada y el tubo del peine m ltiple de aspiraci n est seco 19 Conecte firmemente el peine m ltiple de aspiraci n al primer conjunto de puntas Aspire todo el l quido bajando las puntas para introducirlas en la primera TTU hasta que entren brevemente en contacto con los fondos de los tubos No mantenga las puntas en contacto con los fondos de los tubos 2O Una vez completada la aspiraci n expulse las puntas a su TTC original Repita los pasos de aspiraci n para el resto de las TTU usando una punta dedicada para cada muestra 21 Coloque el peine m ltiple de distribuci n sobre cada una de las TTU y usando la bomba de la estaci n de distribuci n dispense 1 0 mL de soluci n de lavado APTIMA en cada uno de los tubos de la TTU 22 Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y retire la gradilla de la base magn tica del TCS Agite la gradilla una vez en el mezclador v rtex multitubo Consulte Notas de procedimiento Agitaci n con mezclador v rtex para los detalles 23 Coloque la gradilla sobre la base magn tica del TCS durante 5 a 10 minutos 24 Aspire todo el l quido seg n se describe en los pasos 19 y 20 25 Despu s de la aspiraci n final retire la gradilla de la base magn tica del TCS e
126. soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa en la que se vaya a realizar la prueba con cubiertas absorbentes con forro de pl stico que est n limpias para mesas de laboratorio 3 Coloque un n mero suficiente de casetes de diez puntas en el sistema de captura seleccionada Target Capture System TCS Aseg rese de que la botella de lavado del TCS est llena de soluci n de lavado APTIMA y el peine m ltiple de aspiraci n est conectado a la bomba de vac o Consulte el Target Capture System Operator s Manual Manual del usuario del sistema de captura seleccionada B Reconstituci n de reactivos Nota La reconstituci n de los reactivos debe llevarse a cabo antes de iniciar la transferencia de muestras 1 Parareconstituir los reactivos de amplificaci n GC enzim tico y de sonda GC combine los frascos de reactivo liofilizado con la soluci n de reconstituci n Si las soluciones de reconstituci n est n refrigeradas espere a que se equilibren a la temperatura ambiente antes de utilizarlas a Empareje la soluci n de reconstituci n adecuada con el reactivo liofilizado Las etiquetas est n codificadas por color de forma que se puedan emparejar correctamente Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 13 502185ES Rev E Sistemas DTS b Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte con firmeza el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial figura 1 paso 1 c Abr
127. stra a 37 C durante un m ximo de 5 minutos Si el precipitado no se vuelve a disolver aseg rese visualmente de que ste no obstaculice la entrega de la muestra Nota Una incorrecta realizaci n de los pasos 4a c puede provocar una descarga de l quido del tap n del tubo de muestras 5 Sise van a analizar muestras con tapones est ndar no penetrables se deben centrifugar durante 5 minutos a una fuerza centr fuga relativa Relative Centrifugal Force RCF de 420 para llevar todo el l quido al fondo del tubo antes de quitar el tap n Evite salpicaduras y todo tipo de contaminaci n cruzada 6 Coloque suficientes TTU en la gradilla para unidades de diez tubos Ten Tube Unit TTU para contener los controles y las muestras Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 15 502185ES Rev E Sistemas DTS 7 Sise desea disponer de una lista de trabajo debe crearla en este momento Para instrucciones sobre c mo crear una lista de trabajo consulte el APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual del usuario del software del ensayo APTIMA 8 Mezcle bien con el wTCR GC Use la pipeta de repetici n para a adir 100 uL en cada tubo de reacci n 9 El primer tubo de reacci n del ensayo debe contener el control negativo y el segundo tubo de reacci n el control positivo a La etiqueta del control negativo para el ensayo APTIMA GC es rosa El texto de la etiqueta identifica el control negativo como CONTROL CT PCT CONTROL GC N
128. t etiquetado CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC debe estar en la primera posici n de la primera TTU El control positivo para GC que est etiquetado CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT debe estar en la segunda posici n de la primera TTU La colocaci n en la posici n incorrecta provocar el fallo del ciclo Los controles adicionales deben introducirse como muestras de paciente y su validez deber ser supervisada por el usuario El control positivo para CT sirve como control negativo para el ensayo APTIMA GC B Pipeteo de controles y muestras El volumen de control o muestra a adido al tubo de reacci n deber ser de 400 uL 100 uL Se recomienda la inspecci n visual del volumen pipeteado al tubo de reacci n para garantizar que se transfiere el volumen adecuado Se necesita un volumen adecuado de control o de muestra para conseguir resultados exactos Si no se ha pipeteado el volumen correcto vuelva a pipetear el wTCR GC y el control o muestra en un nuevo tubo de reacci n C Reactivos La soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda puede precipitar mientras est almacenada Si esto ocurre caliente la soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda a 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento la soluci n de reconstituci n de reactivo de sonda se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Despu s de la resuspensi n mezcle bien el vial con un movimiento de inversi n suav
129. t y del 30 de sangre en muestras de orina Todas las muestras que no conten an la diana dieron negativo para GC Estos resultados indican que a los niveles analizados no es probable que la sangre completa afecte al resultado GC en el TIGRIS DTS System Estudios de arrastre para el TIGRIS DTS System Para establecer que el TIGRIS DTS System reduce al m nimo el riesgo de resultados positivos falsos provocados por contaminaci n de arrastre se realiz un estudio utilizando paneles enriquecidos en tres TIGRIS DTS Systems El estudio utiliz un 2096 de muestras GC con una diana alta y con un contenido de 1 0 x 10 c lulas reacci n que se distribuyeron aleatoriamente entre un 80 de muestras negativas con un contenido de medios de transporte de torunda A lo largo del estudio se analizaron 576 muestras de diana alta y 2 376 muestras negativas en los tres TIGRIS DTS Systems La tabla 15 presenta la proporci n de arrastre general promediada a 0 2196 5 2 370 Un total de 6 muestras negativas se registraron como no v lidas y se excluyeron del c lculo Se realiz un an lisis independiente de un subconjunto de la poblaci n del estudio compuesto por las muestras negativas que siguieron inmediatamente a un resultado positivo alto La proporci n de arrastre para este subconjunto de la poblaci n se promedi a 0 95 4 422 Para los resultados positivos falsos en este subconjunto la proporci n de arrastre abarc desde el 0 al 2 16 en los tre
130. te con una rotaci n suave la soluci n para mezclar el contenido Evite que se forme espuma durante este paso f Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta g Deseche el frasco y el tap n de TCR B 3 Prepare el reactivo de selecci n a Compruebe que el n mero de lote del frasco de reactivo coincida con el n mero de lote de la hoja de c digos de barras del lote maestro b Anote las iniciales del usuario y la fecha actual en la etiqueta Nota Mezcle bien los reactivos de amplificaci n GC enzim tico GC de sonda GC y de selecci n GC mediante inversi n suave antes de cargarlos en el sistema Evite que se forme espuma durante la inversi n de los reactivos Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 34 502185ES Rev E Sistema PANTHER C Preparaci n de los reactivos para reactivos reconstituidos previamente 1 Los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda previamente reconstituidos deben alcanzar la temperatura ambiente de 15 C a 30 C antes de que se inicie el ensayo 2 Siel reactivo de sonda GC reconstituido contiene precipitado que no se disuelve a temperatura ambiente caliente el frasco tapado a una temperatura que no exceda de 62 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento el reactivo de sonda GC se puede utilizar aunque queden residuos del precipitado Mezcle el reactivo GC de sonda por inversi n con cuidado de que no se forme espuma antes de cargarlo en el sistema
131. tinuaci n reduzca la velocidad al m nimo antes de apagar el mezclador v rtex multitubo y retirar la gradilla Las mezclas de reacci n nunca deben tocar las tarjetas de sellado G Ba os de agua 1 El nivel de agua en los ba os de agua debe mantenerse con una profundidad entre 3 8 y 5 cm de 1 5 a 2 0 pulgadas medido desde la bandeja de metal de apoyo en el fondo del ba o de agua hasta la superficie del agua Esto garantiza la transferencia de calor adecuada 2 Para evitar la contaminaci n cruzada los ba os de agua deben dedicarse a un paso espec fico del ensayo H Descontaminaci n 1 Superficies y pipeteadores Las superficies de las mesas de trabajo del laboratorio y los pipeteadores se deben descontaminar regularmente con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Deje que la soluci n de hipoclorito de sodio permanezca en contacto con las superficies por lo menos 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Las soluciones de cloro pueden picar el equipo y el metal Enjuague a fondo con agua para evitar que se pique 2 Peine m ltiple de aspiraci n del TCS a Coloque un nuevo TTC en la gradilla para TTC Encienda la bomba de vac o Conecte el peine m ltiple de aspiraci n a las puntas del TTC Aspire toda la soluci n de lavado restante en la cubeta de cebado de la estaci n de distribuci n de la soluci n de lavado Aparte el peine m ltip
132. tivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado negativo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Una muestra tuvo un resultado discordante Resultado equ voco en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA COMBO 2 Resultado positivo en muestra de torunda endocervical en el ensayo APTIMA GC Tabla 6 Sensibilidad especificidad y valores predictivos del ensayo APTIMA GC en relaci n al estado de infecci n del paciente por centro cl nico y en general para torunda uretral masculina orina masculina torunda endocervical femenina orina femenina torunda vaginal recogida por paciente asintom tica y torunda vaginal recogida por el cl nico Muestra Centro N PR PF NR NF jon poem Ecc p un 1 145 49 0 96 0 338 100 927 100 100 962 100 100 100 2 177 66 8 102 1 379 985 920 100 927 862 968 892 990 3 NC NC NIC NIC NIC NC N C N C N C N C 4 NC NC NIC NIC NIC NC N C N C N C N C Torunda 5 49 7 1 41 0 143 100 590 100 97 6 87 4 99 9 87 5 100 6 15037 1 1122 0 247 100 90 5 100 991 952 100 974 100 7 54 12 0 42 0 222
133. tubos con una tarjeta de sellado y agite la gradilla en el mezclador v rtex multitubo Incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C 1 C durante 20 5 minutos Retire la gradilla del ba o de agua e inc bela a temperatura ambiente durante 5 1 minutos 2 Selecci n a Use la pipeta de repetici n para a adir 250 uL de reactivo de selecci n a cada tubo de reacci n Todas las mezclas de reacci n deben ser ahora rojas b Cubra los tubos con una tarjeta de sellado agite la gradilla en el mezclador v rtex durante 10 segundos o hasta que el color sea uniforme e incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C x 1 C durante 10 1 minutos c Retire la gradilla del ba o de agua 3 Detecci n La detecci n debe realizarse a una temperatura entre 18 C y 28 C a Incube la gradilla a una temperatura entre 18 C y 28 C durante 15 3 minutos Nota Este rango de temperatura es esencial para el rendimiento del ensayo b Para usar el lumin metro LEADER HC y el software del ensayo APTIMA consulte el LEADER HC Luminometer Operator s Manual Manual del usuario del lumin metro LEADER HC y el APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual del usuario del software del ensayo APTIMA c Aseg rese de que los vol menes de Auto Detect 1 y 2 alcancen para completar las pruebas d Prepare el lumin metro LEADER HC Para ello coloque una TTU vac a en la posici n para casete n mero 1 y realice el protocolo de lavado Wash
134. uestras con un contenido de O a 2 433 fg ensayo de rRNA de GC La reproducibilidad se estableci usando Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 57 502185ES Rev E Rendimiento cl nico en sistemas DTS medio de transporte de torunda enriquecido con rRNA No se ha determinado la reproducibilidad en el an lisis de muestras de torunda y de orina que conten an el organismo seleccionado La tabla 9 presenta los datos RLU de precisi n en t rminos de media desviaci n est ndar coeficiente de variaci n CV y porcentaje de concordancia con los resultados esperados para c lculos de variabilidad entre centro entre usuario entre lote entre ciclo y dentro ciclo Tabla 9 Datos de precisi n del ensayo APTIMA GC utilizando un panel de precisi n de 12 muestras con contenido de O a 2 433 fg ensayo de rRNA de GC Dentro ciclo Entre centro Entre lote Entre usuario Entre ciclo RLU Concentraci n N media concor SD SD SD SD SD x1 000 dancia RLU CV RLU CV RLU CV RLU CV RLU CV x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 Neg 0 fg mL 540 11 7 99 8 233 3 N C 0 N C 0 N C 4 3 N C 0 N C Baja 608 625 fg mL 324 5 574 44 99 7 617 2 411 1 189 2 3 4 518 1 9 3 311 3 5 6 5274 9 5 Medio 6 082 fg mL 108 6 502 06 100 1388 2 1 0 0 0 481 9 7 4 514 8 7 9 579 4 89 Alta 12 500 fg mL 324 6 786 0 100 270 3 4 0 0 0 0 581 3 8 6 410 7 6 1 647 1 9 5 SD desviaci n est ndar CV porcentaje del coeficiente de variaci n e concor
135. uida con medio de transporte de torunda Swab Transport Medium STM y STM Se a adi rRNA de GC a mezclas de estas tres matrices a las concentraciones siguientes 25 fg ensayo 250 fg ensayo y 2 500 fg ensayo equivalentes de rRNA de 12 5 CFU mL 125 CFU mL o 1 250 CFU mL Los equivalentes de rRNA se calcularon en funci n del tama o del genoma y de la relaci n DNA RNA c lula estimada de cada organismo Estos paneles se analizaron en tres instrumentos PANTHER utilizando dos lotes de reactivos en r plicas de 96 Se calcul la concordancia positiva con el resultado esperado La concordancia con los resultados esperados fue del 10096 IC 9596 96 2 10096 para todos los paneles de orina del 100 IC 95 96 2 100 para todos los paneles de soluci n Pap en medio l quido PreservCyt y del 100 IC 9596 96 1 100 para todos los paneles de STM La sensibilidad anal tica para el ensayo es 125 CFU mL Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 71 502185ES Rev E Rendimiento anal tico del sistema PANTHER Estudio de reproducibilidad La precisi n del ensayo APTIMA GC se evalu con tres sistemas PANTHER y dos lotes de kit de ensayo APTIMA GC durante un per odo de 24 d as Se crearon paneles a adiendo rRNA de GC en STM a las concentraciones indicadas en la tabla 17 Los usuarios realizaron dos ciclos por d a analizando cada muestra del panel en r plicas de dos por ciclo El c lculo de la concordancia con el resultado esperado y la
136. una mezcla de muestras de torunda negativas Las muestras mezcladas se enriquecieron con GC a una concentraci n final de aproximadamente 50 CFU por reacci n Las muestras enriquecidas se mantuvieron a 70 C 20 C 4 C y 30 C Las muestras se analizaron por duplicado los d as O 20 77 y 117 Todas las condiciones de la prueba dieron positivo para GC en todas las ocasiones y temperaturas Los datos que apoyan las condiciones de env o y almacenamiento recomendadas para las muestras de orina se generaron con muestras de orina masculinas y femeninas negativas Las muestras de orina se enriquecieron con GC a la concentraci n final de 100 CFU por reacci n Las muestras se conservaron a 30 C durante 24 horas antes de a adirlas a los medios de transporte de orina urine transport media UTM Las muestras UTM se mantuvieron a continuaci n a 4 C y 30 C y se analizaron por triplicado los d as 1 14 32 y 35 Las muestras UTM tambi n se almacenaron a 20 C y 70 C y se analizaron por triplicado los d as 1 35 y 109 Todas las r plicas fueron positivas para GC con las muestras UTM conservadas a 4 C y 70 C Cuando las muestras UTM se mantuvieron a 30 C el 94 de las r plicas dio positivo para GC el d a 35 Cuando las muestras UTM se mantuvieron a 20 C el 9896 de las r plicas dio positivo para GC el d a 109 B Muestras de Pap en medio l quido PreservCyt Los datos que apoyan las condiciones de env o y almacenamiento recome
137. y almacenar entre 2 C y 30 C hasta que se analicen Las muestras de orina procesadas se deben analizar con el ensayo APTIMA CG en los 30 d as siguientes a su recogida Si fuera necesario ampliar el tiempo de almacenamiento se pueden congelar a una temperatura entre 20 C y 70 C durante un per odo de hasta 12 meses despu s de la recogida consulte Estudios de la estabilidad de las muestras 3 Muestras de Pap en medio l quido PreservCyt a Las muestras de Pap en medio l quido PreservCyt destinadas a pruebas de GC se deben procesar para citolog a o transferirse a un tubo de transferencia de muestras APTIMA en los 30 d as siguientes a su recogida si se conservan a una temperatura entre 2 C y 30 C consulte Estudios de la estabilidad de las muestras b Sise va a usar el procedimiento de eliminaci n de al cuotas ThinPrep consulte el ThinPrep 2000 o ThinPrep 3000 Processor Operator s Manual Addendum Manual del usuario del procesador ThinPrep 2000 o ThinPrep 3000 Ap ndice para obtener Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA 8 502185ES Rev E Informaci n general instrucciones al respecto Transfiera 1 mL de la al cuota extra da a un tubo de transferencia de muestras APTIMA de acuerdo con las instrucciones del prospecto del kit de transferencia de muestras APTIMA c Sila muestra se va a analizar despu s del procesamiento con el procesador ThinPrep 2000 procese la muestra de Pap en medio l quido PreservCyt seg n se i
138. y femenina El ensayo se puede utilizar para analizar las siguientes muestras de individuos asintom ticos muestras de torunda endocervicales y vaginales recogidas por el cl nico muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente y muestras de orina masculina y femenina Este ensayo tambi n est indicado para utilizarse en el an lisis de muestras ginecol gicas de pacientes tanto sintom ticas como asintom ticas Estas muestras de cuello uterino recolectadas en viales de soluci n PreservCyt pueden analizarse antes o despu s de procesar la citolog a El an lisis de las muestras procesadas despu s de la citolog a se limita a las muestras procesadas con el sistema ThinPrep 2000 exclusivamente Las muestras de torunda vaginal recogidas por la paciente son una opci n para el cribado de mujeres cuando el examen p lvico no est indicado El kit de recogida de muestras de torunda vaginal no es para uso dom stico Resumen y explicaci n de la prueba Las infecciones por Neisseria gonorrhoeae se cuentan entre las infecciones de transmisi n sexual m s comunes en todo el mundo Solamente en Estados Unidos se calcula que se comunicaron 309 341 casos nuevos 100 8 por cada 100 000 personas de infecciones por GC a los Centros para el control de enfermedades en 2010 2 N gonorrhoeae es el agente causante de la enfermedad gonorreica Neisseria son diplococos gram negativos inm viles La mayor a de las infecciones gonorr icas son

Ensayo de Neisseria gonorrhoeae APTIMA

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