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Ensayo Progensa PCA3

1. d Invierta lentamente los frascos acoplados Deje que la soluci n escurra del frasco al interior del vial de vidrio Figura 2 paso 3 Espere a que el reactivo liofilizado pase a la soluci n y luego agite por rotaci n suave la soluci n en el vial de vidrio para mezclarla Evite que se forme espuma al agitar el frasco Figura 2 paso 4 e Invierta los frascos e incl nelos en un ngulo de 45 para reducir a un m nimo la formaci n de espuma Figura 2 paso 5 Deje que escurra todo el l quido de nuevo en el frasco de pl stico f Retire el collar de reconstituci n y el vial de vidrio Figura 2 paso 6 g Vuelva a tapar el frasco de pl stico Figura 2 paso 7 Escriba las iniciales del usuario y la fecha de reconstituci n en todos los viales de reactivos de reconstituci n Aseg rese de registrar el analito PCA3 o PSA en los viales de los reactivos de sonda h Deseche el collar de reconstituci n y el vial de vidrio Figura 2 paso 8 Los reactivos de sonda de amplificaci n y enzim tico reconstituidos anteriormente deben estar a la temperatura ambiente 15 C a 30 C antes de iniciar el ensayo Consulte Requisitos de almacenamiento y manipulaci n si est agrupando sobrantes de reactivos Si el reactivo de amplificaci n reconstituido contiene precipitados que no se disuelven a temperatura ambiente caliente a 62 C 1 C durante 1 a 2 minutos en el rea de preamplificaci n Si el reactivo de sonda reconstituido co
2. 1995 CLSI document GP10 A Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic ROC Plots CLSI Wayne PA CLSI 2004 CLSI document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation CLSI Wayne PA CLSI 2005 CLSI document EP7 A2 Interference Testing in Clinical Chemistry CLSI Wayne PA CLSI 2005 CLSI document EP15 A2 User Verification of Performance for Precision and Trueness CLSI Wayne PA CLSI 2003 CLSI document EP6 A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Statistical Approach CLSI Wayne PA CLSI 2004 CLSI document EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods CLSI Wayne PA based Molecular Urine Analysis for the Diagnosis of Prostate Cancer European Urology Hologic Inc Add CE IVD 10210 Genetic Center Drive San Diego CA 92121 EE UU Asistencia al cliente 1 844 Hologic 1 844 465 6442 customersupport hologic com Asistencia t cnica 1 888 484 4747 molecularsupport hologic com Para obtener m s informaci n visite www hologic com EMERGO EUROPE Molenstraat 15 2513 BH La Haya Pa ses Bajos Hologic Aptima DTS Leader Progensa y SB100 son marcas comerciales y o marcas comerciales registradas de Hologic Inc y o de sus subsidiarias en los Estados Unidos y o en otros pa ses eppendorf estilizado y REPEATER son marcas comerciales de Ep
3. de 0 7 M a 1 0 M Recipiente de pl stico grande con tapa Recipientes est ndar para la recolecci n de orina sin conservantes Unidades de diez tubos TTU TU0022 Casetes de diez puntas TTC 104578 Patr n de calibraci n SysCheck 301078 Materiales opcionales REF Kit de 100 reacciones Progensa PCA3 302354 Kit de 100 reacciones Progensa PSA 302357 Kit de calibradores y controles Progensa PCA3 302353 Ensayo Progensa PCA3 8 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Materiales Kit de calibradores y controles Progensa PSA Pruebas m ltiples de cualificaci n Progensa PCA3 PSA Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit Kit de fluidos del ensayo Aptima Puntas de pipetas desechables con filtro 1 mL TECAN Freedom EVO 100 4 Conjunto de placa de plataforma PCA3 DTS 800 Recipiente de reactivos cuarto de m dulo de 40 mL Recipiente de reactivos dividido cuarto de m dulo de 19 mL x 2 Tubos de transporte Tapones perforables de repuesto Tapones no perforables de repuesto REF 302356 302350 302351 302002C 10612513 Tecan 900932 302521 302520 103036A Ensayo Progensa PCA3 9 501377ES Rev 001 Advertencias y precauciones Progensa PCA3 Advertencias y precauciones A B Para uso diagn stico in vitro Para exportaci n de EE UU nicamente Relacionadas con el laboratorio C D Utilice nicamente el material desechable de laboratorio suministrado o especificado Siga las precauci
4. espec menes Los espec menes se deben analizar por duplicado No deje tubos de reacci n vac os entre los calibradores controles y espec menes Si usa el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 consulte la Hoja de aplicaci n TECAN Freedom EVO 100 4 para el ensayo Progensa PCA3 Hoja de aplicaci n TECAN Freedom EVO para obtener m s informaci n Ensayo Progensa PCA3 18 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Procedimiento de la prueba Tabla 3 Ejemplo de distribuci n de la gradilla Gradilla Muestra Concentraci n Concentraci n Posici n Descripci n PORS diana PSA diana copias mL copias mL de1a3 Calibrador 1 0 0 de4a6b Calibrador 2 250 7 500 de7a9 Calibrador 3 2 500 75 000 de 10a 12 Calibrador 4 25 000 750 000 de 13a 15 Calibrador 5 125 000 3 000 000 de 16a 17 Control A 1 250 37 500 de 18a 19 Control B 62 500 1 500 000 20an Esp cimen Desconocido Desconocido Los calibradores y controles positivos PCA3 y PSA tienen valores asignados de manera que los valores copias mL reales para los calibradores 2 a 5 y los controles A y B ser n ligeramente diferentes de las concentraciones diana que figuran en la tabla y variar n de un lote a otro La informaci n sobre las concentraciones se proporciona en una tarjeta en el envase de los viales de los calibradores y los controles y se utiliza para la calibraci n y determinaci n de la validez del ciclo D Verificaci n de la informaci n de la concentraci
5. tienen un c digo de an lisis encuentre la combinaci n de ambos analitos en la Tabla 4 o en la Tabla 5 para determinar si es necesario alg n otro procedimiento Nota La presencia de un c digo de estado o de an lisis no significa autom ticamente que sea necesario un nuevo an lisis 3 Interpretaci n de los resultados en el Resumen de excepciones Puede que en el Resumen de excepciones no figure ninguna excepci n En esos casos no es necesario ning n otro procedimiento Si el Resumen de excepciones muestra espec menes para ciclos consecutivos donde los ciclos de ambos analitos son v lidos consulte la Tabla 4 para obtener m s instrucciones Para los ciclos individuales de analitos consulte Interpretaci n de los c digos de estado y de an lisis En los ciclos consecutivos donde un ciclo de analitos no es v lido vuelva a analizar el ciclo no v lido consulte Reevaluaci n para obtener m s informaci n y trate los resultados como si se hubieran realizado ciclos individuales de analitos Ser necesario realizar una correspondencia manual de resultados Un esp cimen se puede etiquetar como no v lido aunque los tubos individuales replicados se etiqueten como v lidos El resultado combinado de los replicados es el que determina la validez del esp cimen mientras que una marcada diferencia entre replicados invalida un esp cimen consulte Procedimientos de control de calidad para obtener m s informaci n Tabla 4 Cond
6. 62 C Prepare el fluido de desactivaci n mezclando vol menes iguales de soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M y tamp n para fluido de desactivaci n en un recipiente pl stico grande con tapa Etiquete el recipiente de Ensayo Progensa PCA3 22 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Procedimiento de la prueba pl stico y anote la fecha de caducidad El fluido de desactivaci n es estable a temperatura ambiente durante 4 semanas Cuando el ciclo haya terminado el software del ensayo generar dos informes de ciclos el Informe de ciclo sin procesar y el Informe de relaci n si los ciclos fueron consecutivos consulte Procedimientos de control de calidad y Interpretaci n de los resultados Cuando el ciclo haya terminado retire las TTU usadas del lumin metro y col quelas en el recipiente con el fluido de desactivaci n Mantenga las TTU en el recipiente durante 15 minutos como m nimo antes de desecharlas El director del laboratorio debe establecer los m todos de manipulaci n y eliminaci n adecuados Notas sobre el procedimiento A Preparaci n del esp cimen 1 Si los espec menes contienen precipitados suspendidos cali ntelos a 37 C no m s de 5 minutos seguidos con un movimiento de inversi n suave En el caso de que el precipitado no se disuelva cerci rese de que el precipitado no obstaculice la entrega del esp cimen Los espec menes congelados deben descongelarse a temperatura ambie
7. correcto Se recomienda verificar visualmente el volumen al final de cada TTU cada 10 tubos Libere lentamente y a ritmo constante el mbolo de la pipeta al extraer una muestra para evitar formar espuma y burbujas C Reactivos 1 La soluci n de reconstituci n de sonda se puede sedimentar mientras est almacenada Caliente la soluci n a 62 C 1 C durante 1 a 2 minutos Despu s de este paso de calentamiento la soluci n de reconstituci n de sonda puede utilizarse aunque queden residuos del precipitado Despu s de la resuspensi n mezcle el vial con un movimiento de inversi n suave Ensayo Progensa PCA3 23 501377ES Rev 001 Procedimiento de la prueba Progensa PCA3 2 Cuando realice el pipeteo de los reactivos que no son enzimas apunte ligeramente hacia el lateral de la parte inferior del tubo de reacci n donde la parte inferior del tubo se curva hacia arriba para encontrarse con las partes laterales Al realizar el pipeteo del reactivo enzim tico apunte directamente al centro del tubo de reacci n Confirme visualmente que los reactivos se est n surtiendo correctamente que no hay una cantidad excesiva de reactivo en los laterales de los tubos y que se produce el cambio de color apropiado D Temperatura 1 Los pasos de captura seleccionada amplificaci n hibridaci n y selecci n dependen de la temperatura Por lo tanto es imperativo que los ba os de agua se mantengan dentro de los rangos de temperatura
8. deben ser ahora de color rosado b Cubra los tubos con una tarjeta de sellado use el agitador de v rtice durante 10 segundos o hasta que el color sea uniforme e incube la gradilla en un ba o de agua a 62 C 1 C durante 10 1 minutos c Retire la gradilla del ba o de agua Incube la gradilla a temperatura ambiente durante 15 3 minutos J Detecci n Para usar el lumin metro Leader HC consulte el Manual del operador del lumin metro Leader HC Para el uso del software Progensa para ensayos PCA3 consulte la Gu a de referencia r pida o el Manual del administrador del sistema y el Manual del operador del software Progensa para ensayos PCAS 1 2 Prepare el lumin metro Leader HC colocando una TTU vac a en la posici n del casete n mero 1 y ejecutando el protocolo WASH LAVADO Aseg rese de que se dispone de vol menes suficientes de Auto Detect 1 y 2 para completar las reacciones Cargue las TTU en el lumin metro usando el diagrama del lumin metro como gu a Si se analizan ambos analitos ciclo consecutivo cargue primero todas las PCA3 seguidas inmediatamente de todas las TTU de PSA Inicie la sesi n en el ordenador Haga clic en NEW RUN NUEVO CICLO y seleccione el protocolo adecuado y las concentraciones de ensayo correspondientes Haga clic en NEXT SIGUIENTE para iniciar el ciclo Nota El ciclo debe completarse en las 2 horas siguientes a la finalizaci n de la incubaci n del paso de selecci n a
9. del reactivo suministrado pueden indicar inestabilidad o deterioro de los materiales Si se observan cambios en la apariencia f sica una vez que se han vuelto a suspender los reactivos ej cambios en el color o turbiedad del reactivo Ensayo Progensa PCA3 13 501377ES Rev 001 Requisitos de almacenamiento y manipulaci n Progensa PCA3 indicativos de contaminaci n microbiana p ngase en contacto con el departamento de asistencia t cnica de Hologic antes de usarlos H Deseche los reactivos reconstituidos despu s de 30 d as o en la fecha de caducidad lo que suceda primero l Los reactivos sobrantes abiertos o reconstituidos se pueden usar en ensayos subsiguientes si se han almacenado de forma apropiada despu s de su uso inicial El reactivo sobrante se puede agrupar con un reactivo reci n preparado o con otro sobrante del mismo lote No intercambie mezcle ni combine reactivos de kits con n meros de lotes diferentes consulte Advertencias y precauciones Ninguno de los componentes del reactivo agrupado puede exceder los l mites de almacenamiento del reactivo abierto o reconstituido Aseg rese de que el reactivo agrupado se ha mezclado bien y de que se ha preparado un volumen adecuado para suministrar la cantidad suficiente de reactivo para un ciclo completo del ensayo Ensayo Progensa PCA3 14 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes Recolecci n transporte y almacenamie
10. especificados 2 La temperatura ambiente se define entre 15 C y 30 C E Tiempo Las reacciones de captura seleccionada amplificaci n hibridaci n y selecci n dependen del tiempo Cumpla con los tiempos especificados en Procedimiento de la prueba F Agitaci n de v rtice La agitaci n de v rtice correcta es importante para el desarrollo satisfactorio del ensayo Progensa PCAS3 Para las reacciones de v rtice seleccione en el mezclador vorticial multitubos la velocidad m s baja fije la gradilla y encienda el aparato Aumente la velocidad lentamente hasta que el l quido suba a la mitad del tubo Agite durante 10 segundos la cantidad de tiempo indicada o hasta que el color sea uniforme Baje la velocidad al m nimo antes de apagar el mezclador vorticial multitubos y retire la gradilla Las mezclas de los reactivos nunca deben tocar las tarjetas de sellado G Ba os de agua 1 El nivel de agua en los ba os de agua debe mantenerse a una profundidad entre 3 8 y 5 0 cm 1 5 y 2 0 pulgadas medido desde la bandeja de metal de soporte en el fondo del ba o de agua hasta la superficie del agua Esto garantiza la transferencia de calor adecuada 2 Para evitar la contaminaci n cruzada los ba os de agua deben estar dedicados a un paso espec fico del ensayo H Descontaminaci n 1 Superficies y pipetadores Las superficies de la mesa del laboratorio y las pipetas se deben descontaminar peri dicamente con una soluci n de
11. gradilla que los espec menes de prueba Para que el ciclo se considere v lido se deben cumplir los criterios siguientes Promedio de RLU del Calibrador 2 gt Punto de corte de RLU Donde Punto de corte de RLU Promedio de RLU del Calibrador 1 1 645 desviaciones est ndar de los replicados de RLU del Calibrador 1 1 645 desviaciones est ndar de los replicados de RLU del Calibrador 2 Promedio interpolado de recuperaci n del Calibrador 5 100 30 Promedio interpolado de recuperaci n del Control A 100 60 Promedio interpolado de recuperaci n del Control B 100 35 El software del PCA3 eval a autom ticamente los resultados contra los criterios anteriores y presenta el estado del ciclo como PASS PASA si se cumplen los criterios de validez o como FAIL NO PASA si los criterios no se cumplen Si el estado del ciclo es FAIL NO PASA los resultados de las pruebas del mismo ciclo no son v lidos para ese analito y no se deben presentar Si el ciclo no es v lido se deber repetir para ese analito consulte Interpretaci n de los resultados Si el ciclo para el otro analito es v lido dichos resultados se pueden usar en el an lisis de datos con el ciclo v lido repetido del primer analito B Validez del esp cimen Dentro de un ciclo v lido los resultados individuales de los espec menes pueden considerarse INVALID NO V LIDOS y as lo indicar el Informe de ciclo sin procesar consulte Interpretaci n de los r
12. hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Deje la soluci n de hipoclorito de sodio en contacto con las superficies durante 1 minuto como m nimo y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Las soluciones de cloro pueden picar el equipo y el metal Enjuague bien el equipo con agua para evitar que se pique 2 Peine m ltiple de aspiraci n del TCS Despu s de cada uso a Aparte el peine m ltiple de distribuci n b Coloque una nueva TTC en la gradilla Encienda la bomba de vac o Conecte el peine m ltiple de aspiraci n a las puntas de la TTC Aspire toda la soluci n de lavado que quede en la estaci n de suministro del colector de cebado Ensayo Progensa PCA3 24 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Procedimiento de la prueba c Vierta al menos 100 mL de soluci n de hipoclorito de sodio del 0 5 al 0 7 de 0 07 M a 0 1 M o si se prefiere del 2 5 al 3 5 de 0 35 M a 0 5 M en el colector de cebado Aspire toda la soluci n mediante el peine m ltiple de aspiraci n d Vierta al menos 100 mL de agua desionizada en el colector de cebado Aspire toda el agua mediante el peine m ltiple de aspiraci n e Expulse las puntas a su TTC original f Deje encendida la bomba de vac o hasta que el tubo del peine m ltiple est seco para evitar que el flujo vuelva unos 3 minutos g Descontamine las superficies del peine m ltiple de aspiraci n tal como se describe en
13. m s largos consulte la Tabla 2 para determinar el tiempo de almacenamiento permitido seg n las diferentes temperaturas Tabla 2 Duraci n del almacenamiento de espec menes de orina procesados Temperatura de almacenamiento Tiempo Almacenamiento y env o de espec menes procesados Hasta 5 d as Despu s de recibido en el laboratorio De2 Ca8 c Hasta 14 d as De 35 C a 15 C Hasta 11 meses A 65 C o menos Hasta 36 meses ad a A O A a Tiempo permitido para env o en las condiciones ambientales o congelados Tiempo permitido despu s de almacenarse congelados Los espec menes de orina procesados no se deben someter a m s de cinco ciclos de congelaci n y descongelaci n C Almacenamiento de espec menes despu s de la prueba 1 2 Las muestras analizadas deben conservarse en posici n vertical en una gradilla Si los tubos de transporte de espec menes de orina no se vuelven a tapar con un tap n intacto deber n cubrirse con una barrera de pl stico o de aluminio limpia Si fuera necesario congelar o enviar los espec menes a los que se les haya realizado el ensayo retire los tapones perforables de los tubos de transporte de los espec menes de orina y sustit yalos por tapones nuevos no perforables Si es necesario enviar los espec menes a otro centro para su an lisis deben mantenerse las temperaturas recomendadas Evite las salpicaduras y la contaminaci n cruzada Nota Los esp
14. mL Soluci n tamponada HEPES con surfactante 10 Triton X 100 y 20 glicerol PR Soluci n de reconstituci n de sonda PCA3 PSA 1x 12 4 mL Soluci n tamponada de succinato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio S Reactivo de selecci n PCA3 PSA 1x31 mL Soluci n tamponada de borato con surfactante 1 Triton X 100 TCR Reactivo de captura seleccionada PCA3 1x22 mL cido nucleico no infeccioso en soluci n tamponada de HEPES con una fase s lida Tarjetas de sellado 1 paquete Collares de reconstituci n 1 paquete Ensayo Progensa PCA3 4 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Reactivos y materiales suministrados Kit de calibradores y controles Progensa PCA3 Almacenar entre 2 C y 8 C tras recibirlo hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo Componente Cantidad CAL Calibrador 1 PCA3 1x2 0 mL Soluci n tamponada de fosfato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio CAL Calibradores 2 5 PCA3 4 x 1 7 mL cido nucleico PCA3 no infeccioso en soluci n tamponada de fosfato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio PC Controles positivos PCA3 2x1 7 mL cido nucleico PCA3 no infeccioso en soluci n tamponada de fosfato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio Hoja de informaci n de concentraciones PCA3 1 hoja Kit de 100 reacciones Progensa PSA Caja refrigerada Progensa PSA Almacenar entre 2 C y 8 C tras recibirla ha
15. n HPA para simplificar el procesamiento de los espec menes de orina amplificar el ARN diana y detectar amplic n respectivamente Ensayo Progensa PCA3 2 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Informaci n general Cuando se realiza el ensayo Progensa PCA3 en el laboratorio las mol culas del ARN diana se a slan de los espec menes de orina por medio de la captura seleccionada Los oligonucle tidos oligonucle tidos de captura complementarios de las regiones espec ficas de la secuencia de las dianas est n hibridizados a las dianas en el esp cimen urinario Se utiliza un oligonucle tido de captura distinto para cada diana La diana hibridada se captura en mi cropart culas magn ticas que se separan del esp cimen urinario en un campo magn tico Las etapas de lavado se utilizan para eliminar los componentes ex genos del tubo de reacci n La separaci n magn tica y las etapas de lavado se realizan con un sistema de captura seleccionada La amplificaci n de las dianas se produce por medio de la TMA que es el m todo de amplificaci n del cido nucleico basado en la transcripci n que utiliza dos enzimas la transcriptasa inversa del virus de la leucemia murina de Moloney MMLV y la polimerasa ARN T7 Se utiliza un solo juego de cebadores para cada diana La transcriptasa inversa se usa para generar una copia de cido desoxiribonucleico ADN que contiene una secuencia promotora de la polimerasa ARN T7 de la secuencia diana L
16. recomienda recolectar nuevamente un esp cimen de orina H Amplificaci n Nota La adici n de enzimas a una gradilla de reacci n Pasos 6 y 7 a continuaci n debe realizarse en 90 segundos o menos Realice los Pasos 6 y 7 en una gradilla antes de repetirlo en la segunda gradilla Si se usa el ba o de calor seco agitador de v rtice SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 Si se usa el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 consulte la Hoja de aplicaci n del TECAN Freedom EVO para obtener m s informaci n 1 Con la pipeta de repetici n a ada 75 uL del reactivo de amplificaci n espec fico del analito reconstituido a cada uno de los tubos de reacci n Todas las mezclas de reacci n de la gradilla deben ser ahora de color rojo Con la pipeta de repetici n a ada 200 uL de reactivo de aceite Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y agite en el mezclador vorticial multitubos Incube la gradilla en un ba o de agua de preamplificaci n a 62 C 1 C durante 10 5 minutos Transfiera la gradilla a un ba o de agua a 42 C 1 C durante 5 2 minutos Con la gradilla en el ba o de agua retire con cuidado la tarjeta de sellado y con el pipetador autom tico a ada 25 uL del reactivo enzim tico reconstituido a cada una de las mezclas de reacci n Todas las reacciones deben ser ahora anaranjadas Cubra los tubos inmediatamente con tarjetas de sellado nuevas retire del ba o de agua y mezcle r pidamente los r
17. resultado hasta que se realice una correspondencia manual y el resultado figure en el Informe de relaci n Si solo se analiz un analito o si un ciclo de analitos no es v lido todos los espec menes analizados figurar n en el Resumen de excepciones Informe de relaci n El software del ensayo genera autom ticamente un Informe de relaci n para un ciclo consecutivo donde ambos ciclos de analitos son v lidos El programa calcula y lista el PCA3 Score del esp cimen en el Informe de relaci n Los espec menes del Informe de relaci n no requieren ning n otro an lisis o ambos deben ser analizados nuevamente Los espec menes que no figuran en el Informe de relaci n se encuentran en la secci n Resumen de excepciones del Informe de ciclo sin procesar Tambi n se puede generar un Informe de relaci n despu s de establecer la correspondencia manual consulte Correspondencia manual para obtener m s informaci n Informe de control de calidad QC El informe QC muestra los criterios de validez de un ciclo del ensayo las concentraciones asignadas o interpoladas y las recuperaciones de los calibradores y controles El informe muestra tambi n los par metros que definen la curva 3 de calibraci n de la respuesta a la dosis log stica de los cuatro par metros Para obtener m s informaci n consulte el Manual del usuario del software Progensa para ensayos PCAS B Correspondencia 1 Correspondencia autom tica En ciclos con
18. volver a realizar la prueba Cubra los TTU con las tarjetas de sellado y sacuda suavemente la gradilla con la mano No utilice un agitador de v rtice Incube la gradilla a 62 C 1 C en un ba o de agua durante 30 5 minutos Retire la gradilla del ba o de agua y seque la base de los tubos sobre un material absorbente Aseg rese de que las tarjetas de sellado est n asentadas correctamente De ser necesario reempl celas con tarjetas de sellado nuevas y selle bien las TTU Agite la gradilla durante 60 segundos en el mezclador vorticial multitubos consulte Notas sobre el procedimiento Comience la agitaci n vorticial dentro de los 2 minutos despu s de haber retirado la gradilla del ba o de agua Sin retirar las tarjetas de sellado incube la gradilla a temperatura ambiente durante 30 5 minutos Coloque la gradilla con la ficha delantera hacia adelante sobre la base magn tica del TCS durante 5 a 10 minutos Cargue la gradilla de TTC con las TTC Cebe las l neas de la bomba de la estaci n de suministro bombeando soluci n de lavado a trav s del peine m ltiple de distribuci n Bombee suficiente l quido a trav s del sistema de forma que no haya burbujas de aire en la l nea y que las diez boquillas suministren un flujo continuo de l quido Encienda la bomba de vac o y desconecte el peine m ltiple de aspiraci n de la primera conexi n entre dicho m ltiple y la botella trampa Aseg rese de que el medidor de vac o cu
19. 33 47 61 74 84 95 Ensayo Progensa PCA3 34 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Caracter sticas de rendimiento 2 Estudios de la estabilidad de los especimenes a Estabilidad en orina entera Se realiz la recolecci n del primer chorro de orina de 10 sujetos y se almacen entre 2 C y 8 C o a 30 C antes de procesar por medio de la adici n al medio de transporte de orina Despu s de 4 horas se observ en algunos espec menes almacenados entre 2 C y 8 C una importante degradaci n del ARN de PCA3 y PSA Por lo tanto la orina entera se debe procesar antes de las 4 horas A 30 C se observ una importante degradaci n en menos de una hora Por lo tanto la orina entera se debe refrigerar siempre o mantener sobre hielo antes de procesar Estabilidad en la orina procesada Doce espec menes se incubaron a 4 C o 30 C hasta un m ximo de 38 d as A 4 C los ARN de PCA3 y PSA se mantuvieron estables durante 21 a 30 C 5 d as Los espec menes almacenados a 20 C y 70 C han demostrado la estabilidad del ARN de PCA3 y PSA hasta un m ximo de 90 d as Estabilidad al congelar y descongelar Se sometieron los espec menes a un ciclo de 37 C y 70 C seis veces No se observ disminuci n alguna en los niveles de copia del ARN de PCA3 o PSA B Resultados anal ticos 1 Sensibilidad anal tica Para evaluar la sensibilidad del ensayo se utiliz un panel de sensibilidad anal tica compuesto del trans
20. 599 941 120 1 750 000 1 960 775 112 4 Linealidad y rango 1 4E 05 y 1 28 05 o 2 5 o E E a lt o a 2 0E 04 0 0E 00 1 0E 05 8 0E 04 6 0E 04 4 4 0E 04 El rango lineal del ensayo Progensa PCA3 se determin de acuerdo con CLSI EP6 A 2003 8 basado en el an lisis de regresi n lineal m todo de los m nimos cuadrados Se prepararon dos juegos de series de diluci n de los especimenes con altas concentraciones del ARN de PCA3 y PSA Un juego se diluy en la orina femenina procesada y un juego se diluy en el diluyente de espec menes Las diluciones abarcaron el rango del ensayo completo entre los calibradores positivos m s bajos y m s altos de cada analito Tanto para los analitos PCA3 como para los PSA los resultados medidos por el ensayo mostraron una relaci n de proporci n directa entre las pruebas diluidas y la c mL del analito notificado No se observ efecto alguno de matriz de diluyente significativo Consulte Figura 4 Analito PCA3 Analito PSA 3 0E 06 y 0 9932x 613 87 A y 1 0875x 27939 R 0 9998 n 2 5E 06 R 0 9991 O Diluyente de especimenes A O Diluyente de espec menes _ 7 2 0E 06 1 5E 06 1 0E 06 PSA c mL medido y 0 9663x 27393 y 0 9523x 79 762 5 0E 05 R 0 9973 R2 0 9999 A Orina A Orina 0 0E 00 s 0 0E 00 5 0E 05 1 0E 06 1 5E 06 2 0E 06 2 5E 06 3 0E 06 0 0E 00 3 0E 04 6 0E 04 9 0E 04 1 2E 05 PCA3 c mL
21. A3 38 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Caracter sticas de rendimiento Tabla 12 Reproductibilidad del ensayo Progensa PCA3 An lisis del PCA3 Score Panel Puntuaci n CV intra cv CV inter cv cv r CV Total Miembro media ciclo interciclo operador interequipo interlote 1 34 5 27 26 5 23 8 0 2 34 32 14 9 10 12 0 2 3 32 30 12 7 5 17 7 6 7 32 39 28 24 2 8 11 7 8 34 37 21 14 12 0 0 9 Los miembros del panel 4 a 6 conten an nicamente el transcripto ARN de PCA3 o PSA y por lo tanto no se incluyen en este an lisis Ensayo Progensa PCA3 39 501377ES Rev 001 Bibliograf a Progensa PCA3 Bibliograf a GO 1 97 81 9 Bussemakers M J G A Van Bokhoven G W Verhaegh F P Smit H F M Karthaus J A Schalken F M J Debruyne N Ru and W B Isaacs 1999 DD3 A New Prostate Specific Gene Highly Overexpressed in Prostate Cancer Cancer Res 59 5975 5979 Hessels D J Mt Klein Gunnewiek I van Oort H F M Karthaus G J L van Leenders B van Balken L A Kiemeney J A Witjes and J A Schalken 2003 DD3 44 8 16 Groskopf J S M Aubin I L Deras A Blase S Bodrug C Clark S Brentano J Mathis J Pham T Meyer M Cass P Hodge M L Macairan L S Marks and H Rittenhouse 2006 Aptima PCA3 Molecular Urine Test Development of a Method to Aid in the Diagnosis of Prostate Cancer Clin Chem 52 1089 95 CLSI
22. CR Reactivo de captura seleccionada PSA 1x22mL cido nucleico no infeccioso en soluci n tamponada de HEPES con una fase s lida Tarjetas de sellado 1 paquete Collares de reconstituci n 1 paquete Kit de calibradores y controles Progensa PSA Almacenar entre 2 C y 8 C tras recibirlo hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo Componente Cantidad CAL Calibrador 1 PSA 1x2 0 mL Soluci n tamponada de fosfato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio CAL Calibradores 2 5 PSA 4x 1 7 mL cido nucleico PSA no infeccioso en soluci n tamponada de fosfato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio PC Controles positivos PSA 2x 1 7 mL cido nucleico PSA no infeccioso en soluci n tamponada de fosfato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio Hoja de informaci n de concentraciones PSA 1 hoja Ensayo Progensa PCA3 6 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Reactivos y materiales suministrados Fluidos para ensayos Aptima Almacenar entre 15 C y 30 C 2 cajas tras recibirlos hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo Componente Cantidad WwW Soluci n de lavado 1 x 402 mL Soluci n tamponada de HEPES con un contenido de lt 2 de dodecilsulfato s dico DF Tamp n para fluido de desactivaci n 1 x 402 mL Soluci n tamponada de bicarbonato O Reactivo de aceite 1x 24 6 mL Aceite de siliconas Nota Todos los
23. HOLOGIC Progensa PCA3 Ensayo Progensa PCA3 Para uso diagn stico in vitro Para exportaci n de EE UU nicamente Informaci n general ooooocococcr o 2 USO INAICAdO ooocccocccc ur aas de aeae in a ra EE 2 Resumen y explicaci n de la prueba nsaan nananana 2 Principios del procedimiento o o o oooooooooooooo 2 Reactivos y materiales suministrados o o 4 Materiales iiicioscaa ia a aa e 8 Advertencias y precauciones o cooococooncnnoo o 10 Requisitos de almacenamiento y manipulaci n 13 Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes 15 Procedimiento de la prueba oococooomommnmnos 17 Notas sobre el procedimiento ooocooccccoccccoo 23 Procedimientos de control de calidad 27 Interpretaci n de los resultados 000ooooooo ooo 28 Limitaciones 2 0 is ri a 33 Caracter sticas de rendimiento 0oooocooooooo 34 BibliOgraf a lt ciocrmiocrria ir ri 40 Ensayo Progensa PCA3 1 501377ES Rev 001 Informaci n general Progensa PCA3 Informaci n general Uso indicado El ensayo Progensa PCA3 es una prueba de amplificaci n de cido nucleico NAAT in vitro que detecta el cido ribonucleico ARN del gen 3 del c ncer de pr stata PCA3 en los espec menes de orina de var n para generar un PCA3 Score El PCA3 Score est destinado a usarse en conjunci n con los a
24. PoR PCA r Otra en C digo de C digo de G4 SCOPES Oas Acci n comentario a Poe listado pruebas an lisis an lisis Dentro del rango Dentro del rango No es necesario ning n otro procedimiento sin c digo sin c digo e AG los resultados son notificables No v lido No v lido S Analice nuevamente ambos analitos a b e hoi A B E Hol T s consulte Reevaluaci n S Diluya el esp cimen en diluyente para No v lido eta o S espec menes consulte Diluci n de a b e hoi a ie c a i espec menes que superan el rango F admitido vuelva a evaluar ambos analitos Supera el rango A Diluya el esp cimen en diluyente para Se No v lido A 5 admitido ABE Hol S espec menes vuelva a evaluar ambos f Ar B EROT analitos Supera el rango Supera el rango Diluya el esp cimen en diluyente para admitido admitido S espec menes vuelva a evaluar ambos f F analitos No v lid No alcanza el rango La muestra no tiene suficiente ARN para un E xa g e admitido No an lisis preciso Se debe recolectar un a be h o i G nuevo esp cimen del paciente Dentro del No alcanza el rango La muestra no tiene suficiente ARN para un SAO E admitido os No an lisis preciso Se debe recolectar un sin c digo G nuevo esp cimen del paciente Supera el rango No alcanza el rango La muestra no tiene suficiente ARN para un admitido admitido ae No an lisis preciso Se debe recolectar un f G nuevo esp cimen del paciente No alc
25. Unidad TCS 3 Recipiente de desechos TCS Limpie el frasco de desechos al menos una vez a la semana o cuando alcance el 25 de su capacidad lo que suceda primero a Apague la bomba de vac o y deje que la presi n de vac o se iguale b Libere los accesorios de conexi n r pida entre el frasco de desechos y el frasco de sobreflujo y entre el frasco de desechos y el peine m ltiple de aspiraci n c Retire el frasco de desechos de la cubierta de la trampa de vac o d Retire la tapa y a ada cuidadosamente 400 mL de soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7 de 0 7 M a 1 0 M al frasco de desechos de 4 L Nota Esto se puede llevar a cabo en una campana extractora de humos para evitar liberar gases en el laboratorio e Tape el frasco de desechos y agite con una rotaci n suave el contenido hasta que quede completamente mezclado f Deje que el frasco de desechos repose durante al menos 15 minutos y a continuaci n deseche el contenido los desechos g Enjuague el frasco de desechos con agua para eliminar todo resto de desechos internos h Tape el frasco de desechos vac o y col quelo en la cubierta de la trampa de vac o Conecte los accesorios de conexi n r pida a la unidad TCS Deseche los guantes con cuidado 4 Unidad TCS Limpie las superficies de la unidad TCS el peine m ltiple de aspiraci n y las puntas eyectoras del tamp n de lavado con toallas de papel humedecidas con una soluci n de hipoclorito d
26. a ARN polimerasa T7 genera varias copias del amplic n de ARN a partir del molde de copia de ADN La detecci n se logra por medio del ensayo de protecci n de la hibridizaci n HPA con sondas de cido nucleico de cadena nica y quimiluminiscentes que son complementarias del amplic n Se utilizan sondas distintas para cada amplic n diana Las sondas de cido nucleico marcadas se hibridan espec ficamente con el amplic n El reactivo de selecci n diferencia las sondas hibridadas de las no hibridadas inactivando el marcador de las sondas no hibridadas Durante la detecci n la se al quimioluminiscente producida por la sonda hibridada se mide en un lumin metro y su valor se comunica como unidades relativas de luz RLU Los ARN de PCA3 y PSA se cuantifican en tubos separados y se determina el PCA3 Score Los calibradores que contienen cantidades conocidas del transcripto ARN de PCA3 y PSA se incluyen en cada ciclo del ensayo y se usan para generar una curva est ndar Tambi n se incluyen los controles PCA3 y PSA para verificar la precisi n de los resultados interpolados a partir de la curva est ndar Ensayo Progensa PCA3 3 501377ES Rev 001 Reactivos y materiales suministrados Progensa PCA3 Reactivos y materiales suministrados Nota Para obtener informaci n sobre cualquier aviso de riesgo o precauci n que pueda estar asociado a los reactivos consulte la Biblioteca de hojas de datos de seguridad Safety Data Sheet Library
27. a obtener el gt PCA3 Score calculado O BIEN 2 Diluya el esp cimen en diluyente de cd sin c digo calculado Opcional espec menes vuelva a evaluar PCA3 y 1 establezca manualmente la correspondencia de resultados si es necesario un PCA3 Score No alcanza el rango Establezca manualmente la admitido Dentro del rango lt PCA3 Score No correspondencia para obtener el lt PCA3 0 sin c digo calculado Score calculado No alcanza el rango Supera el rango Establezca manualmente la admitido admitido lt PCAS Score No correspondencia para obtener el lt PCA3 9 F calculado Score calculado Consulte el Manual del usuario del software del ensayo Progensa PCA3 para una lista completa de los c digos de an lisis Aplicable nicamente a espec menes no v lidos dentro de un ciclo v lido Para los valores fuera de rango el PCA3 Score calculado se calcula usando el nivel de copia del calibrador positivo m s cercano 4 Interpretaci n de los resultados en el Informe de relaci n Si un esp cimen figura en el Informe de relaci n con un PCA3 Score el resultado es un PCA3 Score notificable y no es necesario ning n otro procedimiento Si no figura ning n PCA3 Score expresado como en la columna PCA3 Score consulte la Tabla 5 para obtener instrucciones Tabla 5 Condiciones del Informe de relaci n del ensayo Progensa PCA3 Resultado PCA3 Resultado PSA Par
28. anza el rango No alcanza el rango La muestra no tiene suficiente ARN para un admitido admitido No an lisis preciso Se debe recolectar un 9 G nuevo esp cimen del paciente Ensayo Progensa PCA3 31 501377ES Rev 001 Interpretaci n de los resultados Progensa PCA3 Tabla 5 Condiciones del Informe de relaci n del ensayo Progensa PCA3 continuaci n Consulte el Manual del usuario del software del ensayo Progensa PCA3 para una lista completa de los c digos de an lisis Aplicable nicamente a espec menes no v lidos dentro de un ciclo v lido Si los especimenes resultaron no v lidos debido a un ciclo no v lido los resultados figuran en el Resumen de excepciones consulte Interpretaci n de los resultados en el Resumen de excepciones para obtener m s informaci n D Reevaluaci n 1 Pautas para la reevaluaci n a Aunque no es imperativo que ambos analitos se analicen durante el mismo ciclo los resultados de ambos analitos deben provenir del mismo vial de muestra para obtener un PCA3 Score notificable Se deben repetir todos los ciclos no v lidos y volver a evaluar todos los espec menes no v lidos procedentes de ciclos v lidos Vuelva a evaluar los espec menes utilizando un nuevo juego de calibradores y controles Es esencial el almacenamiento adecuado del esp cimen sobrante antes de la reevaluaci n consulte Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes para obtener m s informaci n Pued
29. cerosas y benignas los niveles de ARN de PSA pueden as utilizarse para normalizar la cantidad del cido ribonucleico ARN espec fico de la pr stata en muestras de prueba molecular Se ha demostrado la viabilidad de las pruebas moleculares cuantitativas con base PCA3 de los sedimentos urinarios 2 y de orina entera 3 El ensayo Progensa PCA3 utiliza la orina entera recolectada despu s del examen digital rectal DRE consistente en tres presiones por l bulo El DRE libera las c lulas de la pr stata a trav s del sistema de conductos de la pr stata al tracto urinario donde se recolectan con el primer chorro de orina La orina se procesa con el a adido del Medio de transporte de orina UTM que disuelve las c lulas y estabiliza el ARN Los ARN de PCA3 y PSA se cuantifican y el PCA3 Score se determina seg n la proporci n de ARN de PCA3 PSA Adem s de normalizar la se al PCA3 la medici n del ARN de PSA sirve tambi n para confirmar que la liberaci n de ARN espec fico de la pr stata es suficiente para generar un resultado v lido Los PCA3 Score m s altos se correlacionan con una probabilidad m s alta de una biopsia de pr stata positiva Principios del procedimiento El ensayo Progensa PCA3 se compone de dos pruebas cuantitativas de amplificaci n del cido nucleico El ensayo Progensa PCA3 combina las tecnolog as de captura seleccionada amplificaci n mediada por transcripci n TMA y ensayo de protecci n de la hibridizaci
30. cripto del ARN diluido in vitro Un usuario analiz el panel en veinte ciclos de cinco replicados utilizando un solo lote de reactivos El l mite de detecci n y el l mite de cuantificaci n se calcularon de acuerdo con CLSI EP17 A 2004 5 El l mite de detecci n del analito PCA3 fue de 80 c mL y para el analito PSA fue de 1 438 c mL El l mite de cuantificaci n para ambos analitos fue el Calibrador 2 2 Especificidad anal tica a Transcripto sin empalmar El ensayo Progensa PCA3 fue dise ado para detectar nicamente el ARN de PCA3 sin empalmar en ex n 3 ex n 4 espec fico del c ncer de pr stata 2 El ensayo no detect 1 mill n c mL de ARN de PCA3 sin empalmar significativamente sobre el fondo La especificidad prost tica del ARN de PCA3 en orina los espec menes de sujetos con prostatectom a posradical n 97 se analizaron con el ensayo Progensa PCA3 y los niveles del ARN de PCA3 se compararon con aquellos de los sujetos prebiopsia n 464 La media del ARN de PCA3 c mL estuvo por debajo del l mite de detecci n del ensayo de los espec menes de sujetos con posprostatectom a mientras que la media del ARN de PCA3 c mL de los espec menes de sujetos prebiopsia fue de 7 243 c mL estos datos confirman que el ARN de PCA3 en orina proviene de la pr stata Especificidad del tejido Se extrajo el total de ARN de los tejidos de dos donantes nicos por tipo de tejido a adido al diluyente de espec menes 10 ng por reacc
31. damente 20 a 30 mL de la orina inicial en un vaso de recolecci n de orina debidamente etiquetado Este esp cimen debe ser la primera descarga de orina despu s del DRE Use un vaso para recolecci n de orina sin ning n conservante Si el paciente no puede detener el flujo de orina y proporciona m s de los primeros 20 a 30 mL solicitados conserve el volumen total Si el paciente no puede proporcionar el volumen de orina solicitado se requieren por lo menos 2 5 mL de orina para realizar el ensayo Progensa PCA3 De lo contrario el esp cimen debe rechazarse Nota Los vol menes muy grandes de orina pueden disminuir las concentraciones de analitos de PCA3 y PSA y pueden si bien no es frecuente producir un especimen no v lido Por lo tanto el paciente deber tratar de no llenar del todo el vaso de recolecci n de orina Los espec menes de orina no procesados se deben mantener entre 2 C y 8 C o en hielo si no se van a procesar inmediatamente Se debe transferir el esp cimen de orina fr o no procesado al tubo de transporte de espec menes dentro de las cuatro horas despu s de su recolecci n Si no el esp cimen debe rechazarse y obtenerse un nuevo esp cimen No congele espec menes de orina no procesados Ensayo Progensa PCA3 15 501377ES Rev 001 Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes Progensa PCA3 5 Para procesar los espec menes de orina tape bien el tubo e invierta cinco veces los espec menes d
32. de an lisis espec ficos del analito a se muestran despu s a la derecha de los dos puntos Los c digos espec ficos del analito que se muestran en min sculas son para los resultados PCA3 y los que se muestran en may sculas para los resultados PSA Cada uno de los informes contiene las descripciones de los c digos de estado y los an lisis que aparecen en dicho informe Por ejemplo los c digos pueden indicar si el resultado de un esp cimen o replicado es v lido o se encuentra fuera de rango Consulte la Gu a de referencia r pida o el Manual del usuario del software Progensa para ensayos PCA3 para obtener una lista completa de los c digos de estado y de an lisis y m s detalles Si un PCA3 Score aparece en el Informe de relaci n y ning n c digo de estado o an lisis aparece en las columnas Estado de PCA3 o PSA esto indica que el an lisis de ambos analitos es v lido y se encuentra dentro del rango El resultado del esp cimen es notificable y no requiere ning n otro procedimiento Ensayo Progensa PCA3 29 501377ES Rev 001 Interpretaci n de los resultados Progensa PCA3 Si aparece un c digo de estado o an lisis en el Resumen de excepciones o en el Informe de relaci n puede ser necesario un nuevo an lisis consulte Interpretaci n de los resultados en el Resumen de excepciones y Interpretaci n de los resultados en el Informe de relaci n Si los resultados del analito provienen de dos ciclos separados y
33. de recolecci n de espec menes de orina es necesaria porque el sistema de transporte que usa el ensayo Progensa PCA3 no permite la evaluaci n microsc pica de la adecuaci n de los espec menes de orina Consulte Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes Para obtener informaci n detallada consulte el prospecto suministrado con el Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit Los resultados del ensayo Progensa PCA3 deben interpretarse junto con los otros datos de laboratorio y cl nicos que se encuentren a disposici n del cl nico La recolecci n inapropiada de espec menes errores t cnicos o mezcla de espec menes puede afectar los resultados de las pruebas Ensayo Progensa PCA3 33 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Caracter sticas de rendimiento Caracter sticas de rendimiento A Resultados cl nicos 1 Sensibilidad y especificidad del diagn stico Las caracter sticas de rendimiento del ensayo Progensa PCA3 se establecieron mediante el uso de espec menes de sujetos inscritos en cuatro cl nicas de Norte Am rica geogr ficamente diversas La poblaci n de sujetos estaba formada por 529 hombres con biopsia de pr stata programada La informaci n demogr fica de los sujetos es la siguiente a Promedio de edad SD 64 8 a os media 63 intervalo de 32 a 89 b Promedio de nivel de suero PSA 7 9 21 9 ug L 5 6 0 3 a 484 c Promedio del volumen de la pr stata determinado por ultrasonido tran
34. e orina para volver a suspender las c lulas Quite el tap n del tubo de transporte de los espec menes de orina y transfiera 2 5 mL de la orina recolectada en el tubo con la pipeta de transferencia desechable suministrada El volumen de orina correcto se alcanza cuando el nivel del fluido se encuentra entre las l neas de llenado negras en la etiqueta del tubo de transporte de espec menes de orina Vuelva a tapar bien el tubo de transporte de espec menes de orina e invierta cinco veces para mezclar Esto se conoce ahora con el nombre de esp cimen de orina procesado B Transporte y almacenamiento de espec menes antes de la prueba 1 Los espec menes de orina procesados se deben transportar al laboratorio en el tubo de transporte de espec menes de orina Estos pueden enviarse en las condiciones ambientales sin control de temperatura o congelados Se deber determinar el modo de env o para asegurarse de que el laboratorio reciba los espec menes dentro de los 5 d as despu s de su recolecci n Al recibir el env o el laboratorio debe verificar la fecha de recolecci n del esp cimen en el tubo Si el esp cimen se envi en las condiciones ambientales y se recibe m s de 5 d as despu s de su recolecci n este deber rechazarse y deber pedirse un nuevo esp cimen El laboratorio puede almacenar los espec menes a una temperatura entre 2 C y 8 C hasta 14 d as antes de que deba desecharse Si se necesitan per odos de tiempo
35. e ser necesario establecer una correspondencia manual para los analitos PCA3 y PSA para determinar el PCA3 Score consulte Correspondencia manual para obtener m s informaci n 2 Diluci n de espec menes que superan el rango admitido a Si la concentraci n de un esp cimen se extrapola a un nivel superior del Calibrador 5 en un ciclo v lido el resultado supera el rango admitido y se lo etiqueta con un c digo de an lisis f o F en los informes de ciclo La concentraci n se expresa como gt concentraci n del Calibrador 5 Invierta el esp cimen de orina procesado para mezclarlo antes de diluirlo Una diluci n recomendada pero no necesaria es 1 10 usando el Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit En un vial adecuado a ada 1 800 uL de diluyente para espec menes y 200 uL del esp cimen tape el tubo e invi rtalo cinco veces para mezclar completamente El factor de diluci n ser 10 en la lista de trabajo del ciclo Si se repiten las pruebas de ambos analitos aumentar los vol menes al doble usar 3 600 uL de diluyente de espec menes y 400 uL del esp cimen Consulte el prospecto del empaque del Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit Analice el esp cimen diluido con el ensayo Si despu s de la reevaluaci n el resultado del esp cimen nuevamente supera el rango admitido se deber diluir a n m s hasta que el resultado del esp cimen se interpole dentro del rango de los calibradores Se puede hacer otra diluci n de
36. e sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Despu s del paso de la soluci n de hipoclorito de sodio enjuague con agua y luego seque bien las superficies con toallas de papel 5 Gradillas Sumerja las gradillas en una soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M asegur ndose de que queden cubiertas por la soluci n Mantenga las gradillas sumergidas durante 10 minutos Una exposici n m s prolongada puede da ar las gradillas Enjuague bien con agua y seque con toallas de papel I Contaminaci n de los ensayos 1 Sino se toman suficientes precauciones durante el procedimiento del ensayo pueden introducirse materiales contaminantes Ensayo Progensa PCA3 25 501377ES Rev 001 Procedimiento de la prueba Progensa PCA3 2 Las TTU deben descontaminarse con fluido de desactivaci n tal como se describe en el Procedimiento de la prueba No reutilice las TTU 3 Descontamine peri dicamente el equipo y las superficies de trabajo tal como se describe anteriormente en Descontaminaci n 4 Al igual que en cualquier otro sistema de reactivos el exceso de talco de algunos guantes puede contaminar los tubos abiertos Se recomienda el uso de guantes sin talco Ensayo Progensa PCA3 26 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Procedimientos de control de calidad Procedimientos de control de calidad A Validez del ciclo 1 Los calibradores y los controles se deben operar con todos los ensayos y en la misma
37. eactivos agitando suavemente la gradilla con la mano Nota Reduzca al m nimo el tiempo que la gradilla est fuera del ba o de agua para evitar que los tubos se enfr en Ensayo Progensa PCA3 21 501377ES Rev 001 Procedimiento de la prueba Progensa PCA3 8 Incube la gradilla a 42 C 1 C durante 60 5 minutos Il Post amplificaci n El pipetador autom tico usado en la hibridizaci n y selecci n debe utilizarse solo en estos pasos consulte Advertencias y precauciones En ambiente de postamplificaci n incluso detecci n debe mantenerse de 15 C a 30 C Si se usa el ba o de calor seco agitador de v rtice SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB 100 1 2 Hibridaci n a Retire la gradilla del ba o de agua de preamplificaci n y transfiera al rea de postamplificaci n Use el pipetador autom tico para a adir 100 uL del reactivo de sonda espec fico del analito reconstituido Todas las mezclas de las reacciones deben ser ahora amarillas b Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y agite en el mezclador vorticial multitubos durante 10 segundos o hasta que el color sea uniforme c Incube la gradilla a 62 C 1 C en un ba o de agua durante 20 5 minutos d Retire la gradilla del ba o de agua e incube a temperatura ambiente durante 5 1 minutos Selecci n a Con una pipeta de repetici n a ada 250 uL de reactivo de selecci n a cada uno de los tubos de reacci n Todas las reacciones
38. ec menes deben enviarse de acuerdo con las normativas de transporte nacionales e internacionales aplicables Ensayo Progensa PCA3 16 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Procedimiento de la prueba Procedimiento de la prueba A Preparaci n de la zona de trabajo 1 Prepare un ba o de agua a 62 C 1 C para preamplificaci n un segundo ba o de agua a 42 C 1 C para amplificaci n y un tercer ba o de agua a 62 C 1 C para postamplificaci n Aseg rese de que los ba os contienen agua suficiente consulte Notas sobre el procedimiento Si se usa el Ba o de calor seco Agitador de v rtice SB100 consulte la Hoja de aplicaci n de SB100 Dry Heat Bath Vortexer para el ensayo Progensa PCA3 hoja de aplicaci n SB100 Antes de iniciar el ensayo limpie las superficies de trabajo y las pipetas con una soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M Deje la soluci n de hipoclorito de sodio en contacto con las superficies y las pipetas por lo menos durante 1 minuto y luego enjuague con agua No deje que la soluci n de hipoclorito de sodio se seque Cubra la superficie de la mesa donde se vaya a realizar la reacci n con una cubierta absorbente con forro de pl stico para mesas de laboratorio limpia Coloque una cantidad suficiente de casetes de diez puntas en el sistema de captura seleccionada TCS Aseg rese de que el frasco de lavado del TCS est lleno de soluci n de lavado y de que el aspirado
39. en www hologic com sds A continuaci n se listan los reactivos y materiales provistos en el kit del ensayo Progensa PCA3 PSA para el ensayo Progensa PCA3 Junto al nombre del reactivo se muestran tambi n los s mbolos de identificaci n del reactivo Kit del ensayo Progensa PCA3 2 x 100 reacciones REF 302355 8 cajas Kit de 100 reacciones Progensa PCA3 Caja refrigerada Progensa PCA3 Almacenar entre 2 C y 8 C tras recibirla hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo Componente Cantidad A Reactivo de amplificaci n PCA3 1 vial cidos nucleicos no infecciosos desecados en soluci n tamponada de HEPES con un contenido de lt 10 de agente de volumen Reactivo enzim tico PCA3 PSA 1 vial Transcriptasa inversa y ARN polimerasa secados en soluci n tamponada de HEPES con un contenido de lt 10 de agente de volumen Reactivo de sonda PCA3 1 vial Sondas ADN quimiluminiscentes no infecciosas secadas en soluci n tamponada de succinato con un contenido de lt 5 de agente de volumen y lt 5 de laurilsulfato de litio Caja a temperatura ambiente Progensa PCA3 Almacenar entre 15 C y 30 C tras recibirla hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo Componente Cantidad AR Soluci n de reconstituci n de amplificaci n PCA3 1x9 3 mL Soluci n acuosa con contenido de conservantes lt 1 parabens ER Soluci n de reconstituci n enzim tica PCA3 PSA 1x 3 3
40. esultados Aunque los replicados individuales de un esp cimen sean v lidos el esp cimen se considerar no v lido si la diferencia c mL interpolada entre los replicados excede el 600 Se deben repetir las pruebas del esp cimen para dicho analito Ensayo Progensa PCA3 27 501377ES Rev 001 Interpretaci n de los resultados Progensa PCA3 Interpretaci n de los resultados A Tipos de informes 1 Informe de ciclo sin procesar El Informe de ciclo sin procesar suministra informaci n sobre la validez del ciclo PASS PASA o FAIL NO PASA consulte Procedimientos de control de calidad y sobre los tubos de reacci n individuales analizados con el ensayo Progensa PCA3 Si iun ciclo no es v lido FAIL NO PASAJ todos los tubos del ciclo se etiquetan como no v lidos No obstante los tubos individuales pueden considerarse no v lidos en un ciclo v lido PASS PASA Para ciclos consecutivos ej se analizan los analitos PCA3 y PSA en el mismo ciclo del ensayo el ciclo de un analito puede no ser v lido mientras que el ciclo del otro analito s es v lido El Resumen de excepciones se encuentra al final del Informe de ciclo sin procesar En ciclos consecutivos donde los ciclos de ambos analitos son v lidos los espec menes del Resumen de excepciones pueden necesitar un nuevo an lisis de uno de los analitos Aunque el resultado PCA3 Score puede figurar en el Resumen de excepciones no se considera que se deba incluir este
41. evolverse a una zona donde se realiz un paso anterior El personal no debe volver a las reas de trabajo anteriores sin tomar las medidas de prevenci n contra la contaminaci n adecuadas Relacionadas con las muestras L Despu s de a adir la orina el nivel de l quido en el tubo de transporte del esp cimen de orina debe estar inicialmente entre las dos l neas indicadoras negras de la etiqueta del tubo De lo contrario el esp cimen debe rechazarse Mantenga las condiciones de almacenamiento apropiadas durante el env o de espec menes para garantizar la integridad de los mismos No se ha evaluado la estabilidad de los espec menes en condiciones de env o distintas a las recomendadas Las fechas de caducidad que figuran en los kits de recolecci n son v lidas para los sitios de recolecci n y no para el centro de an lisis Las muestras recolectadas antes de la fecha de caducidad del kit de recolecci n y transportadas y almacenadas de acuerdo con el prospecto son v lidas para los an lisis aunque la fecha de caducidad del tubo de recolecci n haya caducado Almacene todos los espec menes a la temperatura especificada El uso de especimenes no almacenados correctamente puede afectar a los resultados del ensayo Consulte Ensayo Progensa PCA3 10 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Advertencias y precauciones Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes para obtener instrucciones espec ficas Las muestras
42. i n y se los analiz con el ensayo Progensa PCA3 El tejido de pr stata fue el nico tipo detectado por encima del l mite de detecci n de los tipos de tejido del ARN de PCA3 que figuran en la Tabla 7 Ensayo Progensa PCA3 35 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Tabla 7 Tipos de tejidos de var n analizados para el ARN de PCA3 Caracter sticas de rendimiento Tipo de tejido Vejiga normal Ri n Vejiga tumor Pene M dula sea Pr stata Canales deferentes Ves cula seminal Epip dimo Test culo d Sustancias de interferencia las sustancias enumeradas en la Tabla 8 se a adieron a las al cuotas de las agrupaciones de orina de var n procesadas Los espec menes se analizaron con el ensayo Progensa PCA3 de acuerdo con CLSI EP7 A2 2005 6 No se observ interferencia al ensayo en las concentraciones listadas Tabla 8 Sustancias analizadas para la interferencia de ensayo Progensa PCA3 Agentes terap uticos Agentes terap uticos continuaci n Concentraci n de Concentraci n de Sustancia prueba Sustancia prueba Acetaminof n y code na 5 34 umol L Uroxatral Alfuzosin 30 mg L Atorvastatina 25 mg L Doxazosina 1 33 umol L Lisinopril 0 74 umol L Terazosina 7 8 umol L Amlodipino 245 umol L Finasterida 15 mg L Atenolol 37 6 mol L Tamsulosina 1 2 ug L Sulfasalazina 754 umol L Metformina 310 umol L Esomeprazol 120 mg L Sildenafil 12 9 p
43. i n de reconstituci n de De 2 C a 30 C hasta la fecha de pi N C uso nico sonda caducidad Soluci n de reconstituci n De 2 C a 30 C hasta la fecha de N C ded enzim tica caducidad uso nico Reactivo de selecci n peA oeras C hastailaTecha de 30 d as de 15 C a 30 C caducidad Calibradores Dear a8 Chasta laifechade N C ciclo nico caducidad Controles De 210 a8 C nasta lafecha de N C ciclo nico caducidad Reactivo de aceite De 13 6 a90 chasta la fecha de 30 d as de 15 C a 30 C caducidad Soluci n de lavado pee 400 C hasta la Techa de 30 d as de 15 C a 30 C caducidad Tamp n para fluido de De 15 C a 30 C hasta la fecha de 28 d as de 15 C a 30 C desactivaci n caducidad Puede utilizarse nuevamente para otros ciclos del ensayo hasta cuatro veces siempre y cuando la cantidad de tiempo total a temperatura ambiente no exceda 24 horas B No almacene el reactivo de captura seleccionada a temperaturas inferiores a los 15 C C Tanto el reactivo de sonda como el reactivo de sonda reconstituido son fotosensibles Proteja estos reactivos de una exposici n prolongada a la luz durante el almacenamiento y la preparaci n para su uso D No congele los reactivos E No use los reactivos o los fluidos despu s de la fecha de caducidad F Los calibradores y controles Progensa PCA3 y PSA son viales para un solo ciclo y se deben desechar despu s de su uso G Los cambios en la apariencia f sica
44. ias del ARN de PSA multiplicada por 1 000 y solo se puede calcular usando resultados de ciclos y especimenes v lidos Se deber n repetir los ciclos o los espec menes no v lidos para ese analito consulte Reevaluaci n para obtener m s informaci n Si el PCA3 Score indicado es inferior al punto de corte el resultado se debe interpretar como NEGATIVO Si el PCA3 Score es superior o igual al punto de corte el resultado se debe interpretar como POSITIVO El director del laboratorio debe establecer el punto de corte consulte Caracter sticas de rendimiento para obtener m s informaci n En ciertas condiciones se suministra un rango PCA3 Score gt PCA3 Score calculado o lt PCA3 Score calculado Si lt PCA3 Score calculado es inferior al punto de corte el resultado se debe interpretar como NEGATIVO Si gt PCA3 Score calculado es superior al punto de corte el resultado se debe interpretar como POSITIVO Si se requiere un valor num rico la diluci n del esp cimen y un nuevo an lisis pueden generar un PCA3 Score en lugar de un rango PCA3 Score consulte Reevaluaci n Diluci n de espec menes que superan el rango admitido Interpretaci n de los c digos de estado y de an lisis La columna Estado en el Informe de ciclo sin procesar y en el Informe de relaci n muestra la informaci n en formato s a Los c digos de estado espec ficos del ciclo s se muestran antes a la izquierda de los dos puntos y los c digos
45. iciones del Resumen de excepciones del ensayo Progensa PCA3 Resultado PCA3 Resultado PSA C digo de C digo de coro Otras Acci n comentario od pia listado pruebas an lisis an lisis Ci Vuelva a evaluar PSA consulte bento del rango N valido S Reevaluaci n y establezca manualmente sin c digo A B E H o1 la correspondencia de resultados No alcanza el E Vuelva a evaluar PSA consulte rango admitido A bs Ed l S Reevaluaci n y establezca manualmente 9 R la correspondencia de resultados ee Vuelva a evaluar PCA3 consulte No yalido a Dentr del rango S Reevaluaci n y establezca manualmente a b e hoi sin c digo la correspondencia de resultados 1 Establezca manualmente la correspondencia para obtener el lt PCA3 Score calculado O BIEN 2 Diluya el esp cimen en diluyente de Dentro del rango Supera el rango lt PCA3 Score espec menes consulte Diluci n de admitido Opcional sin c digo calculado F espec menes que superan el rango admitido vuelva a evaluar PSA y establezca manualmente la correspondencia de resultados si es necesario un PCA3 Score Ensayo Progensa PCA3 30 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Interpretaci n de los resultados Tabla 4 Condiciones del Resumen de excepciones del ensayo Progensa PCA3 continuaci n Supera el rango Dentro del rango gt PCA3 Score 1 Establezca manualmente la correspondencia par
46. la diluci n inicial de 1 10 siempre y cuando la diluci n inicial de 1 10 se haya almacenado adecuadamente consulte Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes para obtener m s informaci n Ensayo Progensa PCA3 32 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Limitaciones Limitaciones A No se debe usar el ensayo Progensa PCA3 para pacientes que est n tomando medicamentos que se sabe que afectan los niveles de PSA como finasterida Proscar Propecia dutasterida Avodart y terapia de antiandr genos Lupron No se ha evaluado el efecto de estos medicamentos en la expresi n del gen PCA3 Ciertos procedimientos terap uticos y de diagn stico como la prostatectom a radiaci n biopsia de pr stata y otros pueden afectar la viabilidad del tejido prost tico y repercutir en el PCA3 Score No se ha evaluado el efecto de estos procedimientos en los resultados del ensayo Las muestras para el an lisis PCA3 deben recolectarse cuando el cl nico considere que el tejido prost tico se ha recuperado El uso del ensayo Progensa PCA3 est limitado al personal capacitado en el procedimiento El incumplimiento de las instrucciones de este prospecto puede dar lugar a resultados err neos Cada laboratorio deber validar independientemente el proceso de transferencia LIS La fiabilidad de los resultados depende de la recolecci n adecuada de los espec menes de orina La capacitaci n de los cl nicos en las t cnicas adecuadas
47. lgoritmos de diagn stico conformes con las normas de atenci n de la salud como ayuda en el diagn stico del c ncer de pr stata Resumen y explicaci n de la prueba El uso de la prueba del suero ant geno prost tico espec fico PSA para la evaluaci n del c ncer de pr stata permite la biopsia de tumores m s peque os anteriormente no detectados 1 creando as un nuevo dilema de diagn stico solo una fracci n de hombres con niveles de suero PSA elevados tienen c ncer de pr stata detectable Los hombres con por lo menos una biopsia negativa a menudo tienen un suero PSA persistentemente elevado principalmente debido a una hipertrofia de la pr stata y a hiperplasias prost ticas benignas BPH No obstante una importante proporci n de hombres con un leve aumento de suero PSA 2 5 4 0 ug L tienen o desarrollar n c ncer de pr stata cl nicamente significativo 1 Aunque la biopsia sigue siendo el patr n de referencia para la detecci n del c ncer de pr stata se necesitan pruebas m s precisas con una mayor especificidad antes de tomar la decisi n de proceder con una biopsia de pr stata El PCA3 tambi n conocido como PCA3 o DD3 es un ARN no codificante espec fico de la pr stata sobre expresado significativamente en las c lulas del c ncer de pr stata con una media 66 veces m s elevada que los tejidos benignos adyacentes 2 En contraste la expresi n del gen PSA es similar en c lulas de pr stata can
48. materiales incluidos en el kit de ensayo Progensa PCA3 tambi n se pueden comprar por separado consulte la Materiales secci n para obtener m s detalles Ensayo Progensa PCA3 7 501377ES Rev 001 Materiales Progensa PCA3 Materiales Nota Para obtener informaci n sobre cualquier aviso de riesgo o precauci n que pueda estar asociado a los reactivos consulte la Biblioteca de hojas de datos de seguridad Safety Data Sheet Library en www hologic com sds Nota Los materiales distribuidos por Hologic figuran con el n mero de cat logo Materiales necesarios pero no suministrados REF Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit 302352 Lumin metro Leader HC 104747 Sistema de captura seleccionada TCS Hologic 104555 Kit de reactivos Auto Detect Aptima 301048 2 pipetas de repetici n eppendorf Repeater Plus 105725 Puntas para pipeta de repetici n 2 5 mL 5 0 mL 25 0 mL Lo siguiente 2 mezcladores vorticiales multitubos 102160F 3 circuladores para ba os de agua 104586F 62 C 1 C 42 C 1 C 62 C 1 C 3 espaciadores para ba os de agua 104627 j 2 ba os de calor seco agitadores vorticiales SB100 105524F Dependiendo de la producci n pueden ser necesarios instrumentos SB100 adicionales throughput Micropipeta de 1 000 uL RAININ PR1000 901715 Puntas de 1 000 uL P1000 105049 Pipeta eppendorf 20 a 200 uL 105726 Puntas pipeta 20 a 200 uL Lej a soluci n de hipoclorito de sodio del 5 al 7
49. mol L Alopurinol 294 pmol L a 1 600 mg L Difenhidramina 19 6 umol L Selenio 0 275 mg L Acetaminof n 1 324 umol L cido acetilsalic lico 3 62 mmol L Constituyentes de la orina Ibuprofeno 2 425 pmol L Sustancia Concentracion de prueba Furosemida 181 umol L cido rico 1 4 mmol L Ciprofloxacina 30 2 mol L Hemoglobina 2 g L Levaquin 48 6 umol L Leucocitos 4 56 x 10 c lulas L Doxiciclina 67 5 mol L Hemat es 3 06 x 10 c lulas L Clorhidrato de fluoxetina 11 2 umol L Alb mina 50 g L Flutamida 1 500 mg L Bilirrubina no conjugado 342 g L Dutasterida 1 5 mg L IgG 60 g L 3 Exactitud La precisi n del ensayo Progensa PCA3 fue evaluada de acuerdo con CLSI EP15 A2 2005 7 Los transcriptos del ARN de PCA3 y PSA se cuantificaron mediante espectrofotometr a UV vis se a adieron a orina femenina normal procesada con ARN de PCA3 y PSA no detectable y se midieron las concentraciones en el ensayo Progensa PCA3 El porcentaje de recuperaci n se calcul como la proporci n de C ml medidos a los s mL a adidos multiplicados por 100 Ensayo Progensa PCA3 36 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Caracter sticas de rendimiento Tabla 9 Recuperaci n de copias del ensayo Progensa PCA3 Concentraci n r 4 Concentraci n de Analito conocida A B lb medida c mL recuperaci n 750 808 108 7 500 7 618 102 PCA3 18 750 18 722 100 75 000 70 287 94 20 000 23 684 118 250 000 278 373 111 PSA 500 000
50. mple las especificaciones de la prueba de fugas Pueden pasar 15 segundos hasta que se alcance esta lectura Vuelva a conectar el peine m ltiple y aseg rese de que el medidor de vac o cumple las especificaciones del nivel de vac o Deje encendida la bomba de vac o hasta que finalicen todos los pasos de la captura seleccionada y el tubo del peine m ltiple de aspiraci n est seco Consulta la Hoja de especificaciones del nivel de vac o de sistema de captura seleccionada al final del Manual del usuario del sistema de captura seleccionada o p ngase en contacto con el departamento de atenci n al cliente de Hologic para obtener m s informaci n Acople firmemente el peine m ltiple de aspiraci n al primer conjunto de puntas Baje las puntas a la primera TTU hasta que entren en contacto con la parte superior del l quido Mientras las puntas descienden mantenga el contacto con la parte superior del l quido hasta que entren en contacto brevemente con las bases de los tubos D golpecitos suavemente con las puntas en las bases de los tubos hasta eliminar todos los restos de l quido No mantenga las puntas en contacto prolongado con las bases de los tubos ni d golpecitos con ellas r pidamente porque puede crearse un exceso de espuma en la trampa de vac o Ensayo Progensa PCA3 20 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Procedimiento de la prueba 12 13 14 15 16 17 Una vez finalizada la aspiraci n expulse las punta
51. n Verifique con el administrador del sistema del software Progensa para ensayos PCA3 que se ha ingresado la informaci n de la concentraci n para los lotes de los kits de calibradores y controles de Progensa PCA3 y PSA analizados Para obtener m s informaci n consulte la Gu a de referencia r pida para el ensayo Progensa PCA3 Gu a de referencia r pida o el Manual del administrador del software Progensa para ensayos PCAS Nota La informaci n de la concentraci n se necesita antes de usar por primera vez cada nuevo lote de un kit de calibradores y controles Los ciclos subsiguientes con calibradores y controles del mismo kit no requieren ning n otro procedimiento E Configuraci n de Worklist Editor Genere una lista de trabajo de un ciclo del ensayo con el Hologic Worklist Editor en un ordenador situado en el rea de preamplificaci n Para el uso de Worklist Editor consulte la Gu a de referencia r pida o el Manual del operador de Hologic Worklist Editor Si se usa el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 consulte tambi n la Hoja de aplicaci n del TECAN Freedom EVO para obtener m s informaci n F Preparaci n de la muestra 1 Antes del procesamiento deje que los calibradores y controles alcancen la temperatura ambiente Mezcle bien los viales con un movimiento de inversi n suave 2 Antes del an lisis deje que los espec menes alcancen la temperatura ambiente No agite las muestras en un mezclador v rtex Los espec me
52. nes se deben mezclar por inversi n suave y ocasional durante el periodo de calentamiento Consulte Notas sobre el procedimiento para obtener m s informaci n sobre el precipitado que no pasa a la soluci n y sobre la manipulaci n de espec menes congelados G Preamplificaci n El ambiente de preamplificaci n debe mantenerse de 15 C a 30 C Analice ambas gradillas en paralelo Si se usa el ba o de calor seco agitador de v rtice SB100 consulte la Hoja de aplicaci n SB100 Si se usa el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 consulte la Hoja de aplicaci n del TECAN Freedom EVO para obtener m s informaci n Ensayo Progensa PCA3 19 501377ES Rev 001 Procedimiento de la prueba Progensa PCA3 1 10 11 Mezcle bien los reactivos de captura seleccionada TCR por rotaci n o inversi n Use el pipetador autom tico para a adir 100 uL del TCR espec fico del analito al tubo de reacci n adecuado Perfore el tap n del vial del calibrador con el micropipetador y a ada 400 pL al tubo de reacci n correctamente etiquetado Con la misma punta de pipeta extraiga adiciones de replicado del vial a trav s del tap n perforado Use una punta de pipeta nueva para cada vial de calibrador Repita para la adici n de los controles y espec menes Cubra y guarde cualquier esp cimen sobrante y almacene a 8 C o menos consulte Recolecci n transporte y almacenamiento de espec menes para obtener m s informaci n en caso de que necesite
53. nte entre 15 C y 30 C se puede usar un ba o de agua con inversi n ocasional durante el periodo de descongelaci n para evitar la formaci n de un tap n insoluble Mezcle bien los viales con un movimiento de inversi n suave una vez que el hielo interior se haya descongelado lo suficiente como para quedar suelto y moverse libremente Contin e el calentamiento hasta que el esp cimen est completamente descongelado y vuelva a mezclar los viales con un movimiento de inversi n suave a Si se forman tapones y los espec menes van a ser pipeteados con el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 vuelva a congelarlos y repita las instrucciones de descongelaci n asegur ndose de que no se forman tapones Si fuera imposible eliminar el tap n el esp cimen deber pipetearse manualmente b Si se forma un tap n y los espec menes deben pipetearse manualmente con un micropipetador no se requiere ning n otro procedimiento excepto asegurarse de que el tap n no obstaculice la entrega del esp cimen B Pipetado de controles calibradores y especimenes 1 Se debe a adir un volumen de 400 uL de calibrador control o esp cimen a la TTU Se recomienda comprobar visualmente la cantidad pipeteada en la TTU para asegurarse de que se ha transferido el volumen adecuado Se necesita el volumen adecuado para obtener resultados precisos Aseg rese de que la punta de la pipeta est asentada correctamente en el pipetador y verifique que el volumen sea el
54. ntiene precipitados que no se disuelven a temperatura ambiente caliente a 62 C 1 C durante 1 a 2 minutos en el rea de postamplificaci n Despu s de los pasos de calentamiento los reactivos reconstituidos se pueden usar aunque queden residuos del precipitado Despu s de la resuspensi n mezcle bien los viales con un movimiento de inversi n suave C Preparaci n de las gradillas La pipeta de repetici n usada en la captura seleccionada la transferencia de espec menes y la amplificaci n debe utilizarse solo en estos pasos consulte Advertencias y precauciones 1 Configure una gradilla para el analito PCA3 y otra para el analito PSA Nota Si la cantidad de espec menes es lo suficientemente baja se pueden analizar ambos analitos en una misma gradilla Si se usa el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 se deben mantener gradillas separadas para cada analito No se deben analizar m s de dos gradillas completas 20 TTU a la vez Coloque suficientes TTU en las gradillas de las unidades de 10 tubos TTU para acomodar los calibradores controles y espec menes para cada analito Etiquete las TTU con las identificaciones de las muestras espec imenes En la Tabla 3 se describe la adici n de los calibradores controles y espec menes Inicie los calibradores PSA en una TTU nueva Nota Los calibradores se deben analizar en tres replicados y los controles en dos replicados cada uno y deben analizarse en la misma gradilla que los
55. nto de espec menes El ensayo Progensa PCA3 est dise ado para cuantificar el ARN de PCA3 y PSA del primer chorro de orina recolectada despu s del examen digital rectal DRE consistente en tres presiones por l bulo La orina se procesa con el Progensa PCA3 Urine Specimen Transport Kit La estabilidad del ARN de PCA3 y PSA en la orina y en la orina procesada se estableci realizando la monitorizaci n de los niveles de copia del ARN en espec menes de orina recolectados seg n las instrucciones que figuran a continuaci n A Instrucciones para la recolecci n y el procesamiento de espec menes de orina 1 Se recomienda que el paciente beba una cantidad de agua abundante aproximadamente 500 mL para asegurarse de que la recolecci n de orina sea suficiente Se debe realizar un examen digital rectal DRE tal como se describe a continuaci n inmediatamente antes de la recolecci n de orina Aplique suficiente presi n sobre la pr stata para deprimir la superficie aproximadamente 1 cm desde la base al pice y desde la l nea lateral hacia la l nea media de cada uno de los l bulos como se muestra en la Figura 1 Realice exactamente tres presiones en cada l bulo Esto no pretende ser un masaje de pr stata L bulo Base L bulo izquierdo derecho Apice Figura 1 Direcci n apropiada de la presi n aplicada a la pr stata Despu s del examen digital rectal DRE el paciente debe proporcionar el primer chorro de orina aproxima
56. ones de rutina del laboratorio No coma beba ni fume en las zonas de trabajo designadas Utilice guantes desechables sin talco protecci n ocular y bata de laboratorio cuando manipule los espec menes de orina y los reactivos del kit L vese bien las manos despu s de manipular los espec menes de orina y los reactivos del kit Advertencia irritantes corrosivos Evite el contacto de los reactivos Auto Detect 1 y Auto Detect 2 con la piel los ojos y las membranas mucosas Si estos fluidos entran en contacto con la piel o los ojos lave la zona afectada con agua Si se produce un vertido de estos fluidos diluya el vertido con agua antes de secarlo Las superficies de trabajo las pipetas y otros equipos se deben descontaminar peri dicamente con soluci n de hipoclorito de sodio del 2 5 al 3 5 0 35 M a 0 5 M consulte Notas sobre el procedimiento Para reducir al m nimo la contaminaci n por amplicones en el ensayo se recomienda encarecidamente utilizar un rea aparte para realizar la postamplificaci n Este rea dedicada debe estar alejada del rea de preamplificaci n donde se realiza la preparaci n del reactivo la captura seleccionada y la amplificaci n Para evitar que las reas del laboratorio se contaminen con amplicones dichas reas deben estar dise adas para que el flujo de trabajo sea unidireccional desde la preparaci n del reactivo hasta la postamplificaci n Las muestras el equipo y los reactivos no deben d
57. pendorf AG RAININ es una marca comercial de Rainin Instrument LLC TECAN y FREEDOM EVO son marcas comerciales de Tecan Group AG Todas las dem s marcas comerciales que puedan aparecer en este prospecto pertenecen a de sus respectivos propietarios 2006 2014 Hologic Inc Reservados todos los derechos 501377ES Rev 001 2014 11 Ensayo Progensa PCA3 40 501377ES Rev 001
58. previsto PSA c mL previsto Figura 4 Linealidad del ensayo Progensa PCA3 para los analitos PCA3 y PSA 5 Precisi n La precisi n del ensayo Progensa PCA3 fue evaluada de acuerdo con CLSI EP5 A2 2004 9 La repetibilidad es precisa en condiciones de variabilidad m nima y la reproductibilidad es precisa en condiciones de variabilidad m xima Para la repetibilidad se prepar un panel de tres miembros compuesto de un transcripto del ARN diluido in vitro Un usuario en un laboratorio analiz el panel de 20 ciclos de 5 replicados durante 20 d as usando un calibrador y un lote de control nico un lote de reactivo y un juego de equipo En la Tabla 10 se muestra la precisi n de la repetibilidad del ensayo Progensa PCA3 en los diferentes niveles de concentraci n de la prueba Ensayo Progensa PCA3 37 501377ES Rev 001 Caracter sticas de rendimiento Progensa PCA3 Tabla 10 Repetibilidad del ensayo Progensa PCA3 Analito Panel Medio Repetibilidad Repetibilidad Miembro c mL DE cv 1 1 228 145 12 PCA3 2 12 020 809 71 3 61 108 2 489 4 1 48 091 3 715 8 PSA 2 484 457 41 026 8 3 2 001 430 131 554 71 Para la reproductividad se prepar un panel de prueba de ocho miembros compuesto de espec menes agrupados 1 a 3 y un transcripto del ARN diluido in vitro 4 a 8 Tres usuarios analizaron el panel en 18 ciclos durante tres d as usando un calibrador y un lote de control nico 3 lotes de reac
59. pueden ser infecciosas Siga las precauciones universales para realizar este ensayo El director del laboratorio debe establecer los m todos de manipulaci n y eliminaci n adecuados Estos procedimientos solo los debe realizar personal debidamente cualificado en el uso del ensayo Progensa PCA3 y con la formaci n adecuada para manipular materiales infecciosos Evite la contaminaci n cruzada durante los pasos de manipulaci n de las muestras Los espec menes de orina pueden contener altos niveles de ARN diana Compruebe que los recipientes de los espec menes no entren en contacto unos con otros y deseche los materiales usados sin pasarlos por encima de los recipientes abiertos Se deben cambiar los guantes si entran en contacto con un esp cimen para evitar la contaminaci n cruzada Relacionadas con el ensayo O P No utilice este kit despu s de su fecha de caducidad Para el kit del ensayo Progensa PCA3 no intercambie mezcle ni combine reactivos del ensayo PCA3 con n meros de lotes diferentes esto es para cada analito los reactivos del ensayo en la caja refrigerada y en la caja a temperatura ambiente deben proceder del mismo lote Los reactivos del ensayo pueden utilizarse con diferentes lotes de los kits de calibradores y controles Los kits de fluidos del ensayo Aptima son intercambiables Los kits de reactivos PCA3 y PSA no necesitan emparejarse uno con otro Almacene todos los reactivos del ensayo a la temperat
60. r est conectado a la bomba de vac o Consulte el Manual del usuario del sistema de captura seleccionada Reconstituci n y preparaci n de los reactivos La reconstituci n de los reactivos se debe realizar antes de iniciar la transferencia de los espec menes 1 Para reconstituir los reactivos de amplificaci n enzim tico y de sonda combine los frascos de los reactivos liofilizados con la soluci n de reconstituci n Si est n refrigeradas deje que las soluciones de reconstituci n alcancen la temperatura ambiente antes de utilizarlas j N O e 5 6 e 7 Ja Figura 2 Proceso de reconstituci n a Se debe emparejar la soluci n de reconstituci n adecuada con su reactivo seco Verifique que las etiquetas de los viales tienen correspondencia de colores para asegurarse de que fueron emparejadas correctamente b Abra el vial del reactivo liofilizado e inserte firmemente el extremo ranurado del collar de reconstituci n en la abertura del vial Figura 2 paso 1 c Abra la soluci n de reconstituci n correspondiente y deje el tap n sobre una superficie de trabajo limpia y cubierta A la vez que sujeta el frasco de la Ensayo Progensa PCA3 17 501377ES Rev 001 Procedimiento de la prueba Progensa PCA3 soluci n sobre la mesa del laboratorio inserte firmemente el otro extremo del collar de reconstituci n en la abertura del frasco Figura 2 paso 2
61. s en el casete de puntas original Repita los pasos de aspiraci n con el resto de las TTU usando una punta dedicada para cada tubo de reacci n Coloque el peine m ltiple de distribuci n sobre cada TTU y con la bomba de la estaci n de suministro a ada 1 0 mL de soluci n de lavado a cada uno de los tubos de la TTU Cubra los tubos con una tarjeta de sellado y retire la gradilla del TCS Agite una vez en el mezclador vorticial multitubos Consulte Notas sobre el procedimiento para obtener m s informaci n Coloque la gradilla sobre la base magn tica del TCS entre 5 y 10 minutos Aspire todo el l quido como se indica en Pasos 11 y 12 Despu s de la aspiraci n final retire la gradilla de la base del TCS e inspeccione los tubos visualmente para asegurarse de que todo el l quido se ha aspirado y de que todos los tubos contienen granos de part culas magn ticas Si hay l quido visible coloque la gradilla nuevamente en la base del TCS durante 2 minutos y repita la aspiraci n de la TTU con las mismas puntas utilizadas anteriormente para cada tubo de reacci n Se puede aceptar el tubo si despu s de terminada la aspiraci n se puede ver ALG N grano de part culas magn ticas Si no se puede ver ning n grano el esp cimen debe volverse a evaluar Si el mismo esp cimen no contiene granos de part culas magn ticas en este paso en un ciclo subsiguiente podr amos encontrarnos ante un problema espec fico del esp cimen En este caso se
62. secutivos donde ambos ciclos del analito son v lidos el programa establece la correspondencia autom tica del PCA3 individual y los resultados del analito PSA para espec menes y determina el PCA3 Score si es calculable Los resultados figuran en el Informe de relaci n o Resumen de excepciones del Informe de ciclo sin procesar Ensayo Progensa PCA3 28 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Interpretaci n de los resultados 2 Correspondencia manual Cuando se analizan los analitos PCA3 y PSA en ciclos diferentes el programa no puede determinar autom ticamente el PCA3 Score La correspondencia manual de los resultados del analito es necesaria para determinar el PCA3 Score o el rango del PCA3 Score consulte la Gu a de referencia r pida o el Manual del usuario del software Progensa para ensayos PCA3 La correspondencia manual puede ser tambi n necesaria para los resultados que figuran en el Resumen de excepciones del Informe de ciclo sin procesar Una vez terminada la correspondencia manual los PCA3 Score de dichos espec menes figuran en el Informe de relaci n C Informes de interpretaci n 1 PCA3 Score Nota Solo se generan datos para los PCA3 Score y los rangos PCA3 Score que figuran en el Informe de relaci n No se generan datos para los resultados que aparecen en el Resumen de excepciones ya que pueden requerir otros procedimientos El PCA3 Score se calcula como la proporci n de las copias del ARN de PCA3 con las cop
63. srectal 44 25 cc 39 5 a 225 d 34 180 529 con biopsia positiva para c ncer de pr stata En la Figura 3 se muestra la correlaci n de PCA3 Score con la probabilidad de una biopsia de pr stata positiva A medida que aumenta el PCA3 Score aumenta tambi n la aparici n de biopsias de c ncer positivas en los sujetos r 70 60 o g 5 50 fe 0 40 1 E an 2 30 9 20 10 0 PCA3 Score lt 5 5 9 10 19 20 34 35 49 50 100 gt 100 N de sujetos 58 85 104 97 57 86 42 Figura 3 Correlaci n de PCA3 Score con la probabilidad de biopsias de pr stata positivas Se realiz el an lisis de la caracter stica de receptor operativo ROC por medio de una biopsia de pr stata como m todo de referencia de acuerdo con CLSI GP10 A 1995 4 En el ensayo Progensa PCA3 el rea debajo de la curva AUC fue 0 685 95 intervalo de confianza 0 637 a 0 733 En la Tabla 6 se muestra la sensibilidad y especificidad del diagn stico en diferentes valores de punto de corte de PCA3 Score Cada laboratorio debe establecer el punto de corte para la sensibilidad o especificidad del diagn stico consulte Interpretaci n de los resultados Tabla 6 Sensibilidad y especificidad del diagn stico del ensayo Progensa PCA3 en diferentes puntos de corte de PCA3 Score Punto de corte de PCA3 Score 5 10 15 25 35 50 95 Sensibilidad 96 85 17 63 53 41 17 Especificidad 14
64. sta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo A Componente Cantidad Reactivo de amplificaci n PSA 1 vial cidos nucleicos no infecciosos desecados en soluci n tamponada de HEPES con un contenido de lt 10 de agente de volumen Reactivo enzim tico PCA3 PSA 1 vial Transcriptasa inversa y ARN polimerasa secados en soluci n tamponada de HEPES con un contenido de lt 10 de agente de volumen Reactivo de sonda PSA 1 vial Sondas ADN quimiluminiscentes no infecciosas secadas en soluci n tamponada de succinato con un contenido de lt 5 de agente de volumen y lt 5 de laurilsulfato de litio Ensayo Progensa PCA3 5 501377ES Rev 001 Reactivos y materiales suministrados Progensa PCA3 Caja a temperatura ambiente Progensa PSA Almacenar entre 15 C y 30 C tras recibirla hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta S mbolo Componente Cantidad AR Soluci n de reconstituci n de amplificaci n PSA 1x9 3 mL Soluci n acuosa con contenido de conservantes lt 1 parabens ER Soluci n de reconstituci n enzim tica PCA3 PSA 1x3 3 mL Soluci n tamponada HEPES con surfactante 10 Triton X 100 y 20 glicerol PR Soluci n de reconstituci n de sonda PCA3 PSA 1x12 4 mL Soluci n tamponada de succinato con un contenido de lt 5 de laurilsulfato de litio S Reactivo de selecci n PCA3 PSA 1x31 mL Soluci n tamponada de borato con surfactante 1 Triton X 100 T
65. tivos y 3 juegos de equipos En las Tablas 11 y 12 figura un resumen de la precisi n total intraciclo e interciclo del usuario del equipo y del lote del ensayo Progensa PCA3 para el c mL del analito y el PCA3 Score La variabilidad de la intraciclo interoperador e interciclo fueron en orden descendiente los contribuyentes m s importantes en la variaci n general del ensayo El lote de reactivos y los equipos contribuyeron muy poco en la variaci n general del ensayo Los resultados demuestran que el ensayo Progensa PCA3 se comporta de manera reproducible y la fuente principal de la variaci n se debe a errores aleatorios intraciclo Tabla 11 Reproductibilidad del ensayo Progensa PCA3 An lisis de copias mL Analito Panel i Medido CV Total CV intra a CV inter CV inter CV Miembro c mL ciclo ciclo operador equipo interlote 1 36 248 27 24 7 15 11 0 2 36 7 021 11 6 9 9 0 0 3 36 31 469 8 6 5 9 0 4 PCA3 4 36 1 469 15 13 71 6 0 1 5 36 14 844 71 5 2 6 0 4 6 36 72 372 71 4 6 0 1 0 7 36 430 26 26 0 11 0 1 8 36 62 274 13 8 8 3 0 5 1 34 52 739 9 6 6 71 4 2 2 34 218 789 10 6 71 71 4 0 3 32 1 073 920 11 4 6 9 8 0 PSA 4 34 37 185 9 5 71 3 0 1 5 32 386 504 10 4 8 6 3 4 6 34 1 518 748 12 5 8 4 3 7 7 32 11 007 14 8 9 0 6 0 8 34 1 694 404 11 71 71 0 1 6 Ensayo Progensa PC
66. ura especificada El uso de reactivos del ensayo no almacenados correctamente puede afectar a los resultados del ensayo Consulte Requisitos de almacenamiento y manipulaci n and Notas sobre el procedimiento para obtener instrucciones espec ficas Para la desactivaci n del ensayo consulte Procedimiento de la prueba la concentraci n m nima de soluci n de hipoclorito de sodio debe ser de 2 5 0 35 M despu s de una diluci n de 1 1 con el tamp n de desactivaci n Por lo tanto la soluci n de hipoclorito de sodio inicial debe ser del 5 al 7 0 7 M a 1 0 M para obtener la concentraci n final necesaria para la desactivaci n Se deben utilizar puntas con tapones hidr fobos Se debe dedicar un m nimo de dos pipetadores autom ticos para su uso en este ensayo uno para los pasos de preamplificaci n y el otro para los pasos de postamplificaci n Se debe dedicar un micropipetador al uso de la transferencia de espec menes a menos que se use el instrumento TECAN Freedom EVO 100 4 Todas las pipetas se deben limpiar peri dicamente tal como se describe en Notas sobre el procedimiento Cuando se usen pipetadores autom ticos para la adici n de reactivos no debe tocarse el tubo de reacci n con la punta del pipetador para evitar la contaminaci n cruzada de un tubo a otro Es necesaria una mezcla adecuada para lograr el resultado preciso del ensayo Consulte Notas sobre el procedimiento para conocer los detalles completos Ensa
67. yo Progensa PCA3 11 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Advertencias y precauciones V Se deben dedicar ba os separados para los pasos de preamplificaci n amplificaci n y postamplificaci n en el ensayo W Algunos reactivos de este kit est n etiquetados con s mbolos de riesgo y seguridad de acuerdo con la Directiva Europea 1999 45 EC y se deben manipular seg n la misma Las Hojas de informaci n de seguridad sobre materiales se encuentran en www hologic com y est n disponibles bajo pedido Ensayo Progensa PCA3 12 501377ES Rev 001 Progensa PCA3 Requisitos de almacenamiento y manipulaci n Requisitos de almacenamiento y manipulaci n A Consulte Tabla 1 para obtener m s informaci n sobre el almacenamiento de los reactivos Tabla 1 Almacenamiento de reactivos Reactivo fluido Almacenamiento sin abrir Abierto Estabilidad reconstituida hasta la fecha de caducidad Reactivos de amplificaci n De 2 C a 8 C hasta la fecha de 30 d as de 2 C a 8 C caducidad Reactivos de sonda De20 20 0 hasta la fecha de 30 d as de 2 C a 8 C caducidad Reactivo enzim tico De 2496 hasta la fecha de 30 d as de 2 C a 8 C caducidad Reactivos de captura De 15 C a 30 C hasta la fecha de 30 d as de 15 C a 30 C seleccionada caducidad Soluci n de reconstituci n de De 2 C a 30 C hasta la fecha de PEN ENE A N C uso nico amplificaci n caducidad Soluc

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