Preparación de muestras de ARN monocatenario TruSeq
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1. n de muestras LT de ARN total monocatenario TruSeq e El Manual del usuario que incluye los protocolos de alto y bajo n mero de muestras e Los distintos kits para completar los protocolos e Otros materiales proporcionados por el usuario que se recogen en la Gu a del usuario Haga clic en cada elemento para obtener informaci n adicional Transcripci n de la formaci n en l nea trainingOillumina com illumina P gina Narraci n 11_ Qu hace falta para completar el protocolo de preparaci n de muestras HT Con el fin de completar el protocolo de preparaci n de muestras de alto rendimiento HT de ARN total monocatenario TruSeq se requieren varios elementos como e El Manual del usuario que incluye los protocolos de alto y bajo n mero de muestras e Los distintos kits para completar los protocolos de ARN total e Otros materiales proporcionados por el usuario que se recogen en la monocatenario Gu a del usuario TruSeq Haga clic en cada elemento para obtener informaci n adicional 12 Flujo de Aqu vemos el flujo de trabajo de preparaci n de muestras de ARNm trabajo de monocatenario TruSeq ei Haga clic en cada paso para obtener informaci n adicional sobre l incluida e m monocatenario TruSeq la siguiente Funcionamiento de cada paso y pr cticas recomendadas directamente asociadas a cada paso 13 Flujo de trabajo de preparaci n de ARN total monocatenar2. RNm monocatenario TruSeq de Illumina ha sido concebido para estudios que se centran en mol culas de ARNm poliadeniladas Requiere utilizar vol menes de entrada de ARN de alta calidad El kit de preparaci n de muestras de ARN total monocatenario TruSeq de Illumina a sla todo el ARN no ribos mico incluidos el ARNm y el ARN no codificante de tejidos frescos o conservados en formol parafina de ratones ratas o humanos Existen dos subcategor as de kits de preparaci n de muestras de ARN total Ribo Zero y Ribo Zero Gold El kit Ribo Zero Gold cuenta con la caracter stica adicional de eliminaci n del ARN ribos mico mitocondrial Transcripci n de la formaci n en l nea training illumina com illumina P gina Narraci n Todos los kits se comercializan en dos configuraciones de tama o distintas de alto rendimiento HT y de bajo rendimiento LT Los kits LT incluyen reactivos suficientes para preparar 48 muestras con 12 ndices nicos ndices HT Los kits HT incluyen reactivos suficientes para preparar 96 muestras con 96 ndices nicos 07_ Cu les son las opciones Illumina ofrece dos protocolos diferentes seg n el n mero de muestras que sea necesario procesar Repase las tablas de esta diapositiva para determinar cu l de los protocolos es el m s adecuado para su experimento Tenga en cuenta que el protocolo utilizado es independiente del kit que adquiera Por ejemplo puede comprar un kit de alto
3. ena cobertura del transcriptoma Los fragmentos de ARN segmentados se copian en el ADNc de la primera cadena utilizando transcriptasa inversa y cebadores aleatorios La especificidad de cadena de las muestras se logra al sustituir dTTP por dUTP en el segundo proceso de s ntesis de cadenas que interrumpe la amplificaci n subsiguiente de esta cadena ya que la polimerasa utilizada en el ensayo no se incorpora m s all de este nucle tido El producto final de este paso son mol culas de ADNc de doble cadena con extremos romos La adici n de una base A a los extremos de las cadenas de ADNc impide que los fragmentos de extremos romos se liguen entre s durante la reacci n de ligadura de adaptadores Transcripci n de la formaci n en l nea trainingOillumina com illumina P gina Narraci n A continuaci n tiene lugar una reacci n de ligadura por la cual se ligan varios adaptadores de indexaci n a los extremos de los fragmentos de ADN prepar ndolos para la hibridaci n en una celda de flujo A continuaci n los productos se purifican y se enriquecen con PCR para crear la biblioteca final de ADNc 05_ Qu es el protocolo de preparaci n de muestras de ARN total monocatenario El primer paso del protocolo de preparaci n de muestras de ARN total monocatenario TruSeq es la eliminaci n del ARN ribos mico del ARN total extra do de tejidos frescos o conservados en formol parafina Despu s del proces
4. illumina Preparaci n de muestras de ARN monocatenario TruSeg oomocccccccnunnncnnnnncnononocccnnnonos Nombre del curso Preparaci n de muestras de ARN monocatenario TruSeq P gina Narraci n 01_Bienvenida 02_Navegaci n Le damos la bienvenida al curso de preparaci n de muestras de ARN monocatenario TruSeq Haga clic en Siguiente para continuar Familiar cese con las opciones de navegaci n de este curso Puede acceder a estas instrucciones en cualquier momento pulsando el bot n de ayuda situado en la esquina superior derecha de la p gina 03_Objetivos Al final de este curso aprender las respuestas a preguntas como las siguientes Qu es el protocolo de preparaci n de muestras de ARNm monocatenario TruSeq Qu es el protocolo de preparaci n de muestras de ARN total monocatenario TruSeq Haga clic en los v nculos de la parte inferior de la p gina para descargar las gu as de preparaci n de muestras de ARN monocatenario TruSeq 04_ Qu es el protocolo de preparaci n de muestras de ARNm monocatenario TruSeq El primer paso del protocolo de preparaci n de muestras de ARNm monocatenario TruSeq implica purificar las mol culas de ARNm que contienen colas poli A con bolas magn ticas poli T con uni n de oligonucle tidos Tras la purificaci n el ARNm se fragmenta en trozos peque os por medio de cationes divalentes a temperatura elevada lo que garantiza una bu
5. io TruSeq Aqu vemos el flujo de trabajo de preparaci n de muestras de ARN total monocatenario TruSeq Haga clic en cada paso para obtener informaci n adicional sobre l incluida la siguiente Funcionamiento de cada paso y pr cticas recomendadas directamente asociadas a cada paso 14_ Resumen Ahora deber a conocer las respuestas a preguntas como las siguientes e Qu es el protocolo de preparaci n de muestras de ARNm monocatenario TruSeq e Qu es el protocolo de preparaci n de muestras de ARN total monocatenario TruSeq Haga clic en los v nculos de la parte inferior de la p gina para descargar las gu as de preparaci n de muestras de ARN monocatenario TruSeq 15_Finalizaci n de la lecci n Enhorabuena Ha finalizado este curso Si desea obtener m s informaci n sobre la preparaci n de muestras de ARN monocatenario TruSeg visite la p gina de asistencia de kits y reactivos Transcripci n de la formaci n en l nea trainingO illumina com
6. o de eliminaci n el ARN restante se purifica y se fragmenta en trozos peque os por medio de cationes divalentes a temperatura elevada lo que garantiza una buena cobertura del transcriptoma Los fragmentos de ARN segmentados se copian en el ADNc de la primera cadena utilizando transcriptasa inversa y cebadores aleatorios La especificidad de cadena de las muestras se logra al sustituir dTTP por dUTP en el segundo proceso de s ntesis de cadenas que interrumpe la amplificaci n subsiguiente de esta cadena ya que la polimerasa utilizada en el ensayo no se incorpora m s all de este nucle tido El producto final de este paso son mol culas de ADNc de doble cadena con extremos romos La adici n de una base A a los extremos de las cadenas de ADNc impide que los fragmentos de extremos romos se liguen entre s durante la reacci n de ligadura de adaptadores A continuaci n tiene lugar una reacci n de ligadura por la cual se ligan varios adaptadores de indexaci n a los extremos de los fragmentos de ADN prepar ndolos para la hibridaci n en una celda de flujo A continuaci n los productos se purifican y se enriquecen con PCR para crear la biblioteca final de ADNc 06_ Qu kit deber a utilizar Illumina ofrece diversas configuraciones de kits La elecci n del kit depende del tipo de mol cula de ARN que le interese estudiar as como del n mero de muestras que vaya a procesar El kit de preparaci n de muestras de A
7. rendimiento HT y utilizarlo con el protocolo de bajo n mero de muestras LS 08_ Qu hace falta para completar el protocolo de preparaci n de muestras LT de ARNm monocatenario TruSeq Con el fin de completar el protocolo de preparaci n de muestras de bajo rendimiento LT de ARNm monocatenario TruSeq se requieren varios elementos como e El Manual del usuario que incluye los protocolos de alto y bajo n mero de muestras e Los distintos kits para completar los protocolos e Otros materiales proporcionados por el usuario que se recogen en la Gu a del usuario Haga clic en cada elemento para obtener informaci n adicional 09_ Qu hace falta para completar el protocolo de preparaci n de muestras Con el fin de completar el protocolo de preparaci n de muestras de alto rendimiento HT de ARNm monocatenario TruSeq se requieren varios elementos como e El Manual del usuario que incluye los protocolos de alto y bajo n mero de muestras e Los distintos kits para completar los protocolos HT de ARNm e Otros materiales proporcionados por el usuario que se recogen en la monocatenario Gu a del usuario TruSeq Haga clic en cada elemento para obtener informaci n adicional 10_ Qu Con el fin de completar el protocolo de preparaci n de muestras de bajo hace falta para rendimiento LT de ARN total monocatenario TruSeq se requieren varios completar el elementos como protocolo de preparaci
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