Disco reactivo con panel lípido Piccolo®
Contents
1. gt HDL complejos no solubles Centrifugaci n Complejos no solubles Sedimentos de complejos no solubles contra la pared de la cubeta de la reacci n i PEG CE Esteres de colesterol HDL H2O gt Colesterol cidos grasos PEG CO Colesterol O gt Colest 4 en 3 ona H O Peroxidasa H20 TOOS 4 AAP gt Desarrollo de color TOOS N etil N 2 hidroxi 3 sulfopropil 3 metilanilina sal de sodio dihidrato 4 AAP 4 Aminoantipirina Los agentes precipitantes sulfato de dextrano y sulfato de magnesio MgSO forman espec ficamente complejos no solubles con quilomicrones CM VLDL y LDL en plasma o suero Los sedimentos de los complejos no solubles se posan en la pared Page 42 of 68 de la cubeta de la reacci n en el interior del analizador El HDL restante es hidrolizado por la PEG CE para formar colesterol y cidos grasos El colesterol reacciona con PEG CO para producir colest 4 en 3 ona y peroxidasa H202 La reacci n de la peroxidasa tiene como resultado la producci n de un producto de color p rpura cuya absorbancia m xima es de 550 nm que se usa como referencia de absorbancia a 630 nm La concentraci n de colesterol de las HDL es directamente proporcional a la absorbancia m xima en esta reacci n de criterio de valoraci n Tambi n se controla una referencia espec fica para el an lisis con objeto de asegurar que ninguna reacci n extra a interfiera con los c lc2. en la tarjeta impresa recoja una nueva muestra y realice de nuevo la prueba Si los resultados de la segunda muestra se vuelven a suprimir p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis Sensibilidad El l mite inferior de los valores din mico notificables para cada an lito es colesterol 20 mg dl 0 52 mmol l HDL 15 mg dl 0 39 mmol l y triglic ridos 20 mg dl 0 23 mmol l Precision Los estudios de precisi n se realizaron siguiendo las recomendaciones NCCLS EP5 A con modificaciones basadas en NCCLS EP18 P para dispositivos a usar con unidad Los resultados para la precisi n intraserial y total fueron determinados con dos muestras de suero Los estudios utilizaron datos de cuatro analizadores dos lotes de discos y dos sitios diferentes durante 10 d as para ambas muestras Los resultados se resumen a continuaci n Page 50 of 68 Tabla 6 Precisi n An lito Tama o dela Intraserial Total muestra Colesterol total CHOL Suero 1 N 160 Media mg dl 223 7 223 7 DE 3 0 5 7 VR 1 3 2 6 Suero 2 N 160 Media mg dl 202 2 202 2 DE 3 1 4 4 VR 1 5 2 2 HDL Suero 1 N 160 Media mg dl 55 3 55 3 DE 1 4 1 9 VR 2 6 3 5 Suero 2 N 160 Media mg dl 38 0 38 0 DE 1 3 1 6 VR 3 5 4 3 Triglic ridos TRIG Suero 1 N 160 Media mg dl 206 8 206 8 DE 4 7 5 5 VR 2 3 2 6 Suero 2 N 160 Media mg dl 163 7 163 7 DE 1 8 2 4 VR 1 1 1 5 Estos datos indican que los tres
3. 129 130 159 160 189 gt 190 lt 30 lt 30 Var n lt 5 gt 5 Umbrales mmol l lt 5 17 5 17 6 18 6 20 lt 1 03 gt 1 55 lt 1 70 1 70 2 25 2 26 5 64 gt 5 65 lt 2 58 2 58 3 33 3 36 4 11 4 13 4 88 gt 4 91 El Piccolo o Piccolo xpress calcula la concentraci n de LDL mediante la ecuaci n Friedewald Para m s informaci n consulte NCEP ATP III Informe 2002 Secci n II L gica para la intervenci n 3 Otros factores de riesgo de l pidos p gina I1 8 Relaci n colesterol total HDL TC H La relaci n entre colesterol total y HDL TC H se calcula como una conveniencia para los usuarios Una relaci n de TC H lt 5 se suele considerar deseable para los varones Como las mujeres suelen tener valores de HDL m s elevados que los varones algunos recomiendan un umbral de 4 5 para las mujeres Esta relaci n fue defendida por algunos como una manera simple y c moda de expresar el riesgo de CVD en un solo n mero incorporando el colesterol total como marcador para las lipoprote nas aterog nicas en el numerador y el colesterol HDL antiaterog nico en el denominador El usuario debe saber que a n cuando la relaci n TC H es un pronosticador importante del riesgo de CVD tal como lo demuestran numerosos estudios epidemiol gicos el NCEP no recomienda su uso en el control de los pacientes Las recomendaciones cl nicas de NCEP basan las decisiones terap uticas en las
4. High Blood Cholesterol in Adults Adult Treatment Panel III JAMA 2001 285 2486 97 Warnick GR et al Impact of the third cholesterol report from the Adult Treatment Panel of the National Cholesterol Education Program on the Clinical Laboratory Clin Chem 2002 48 11 17 Kayamori Y et al Endpoint colorimetric method for assaying total cholesterol in serum with cholesterol dehydrogenase Clin Chem 1999 45 2158 2163 Warnick G Nauck M Rifai N Evolution of methods for measurement of high density lipoprotein cholesterol from ultracentrifugation to homogeneous assays Clin Chem 2001 47 1579 96 Klotzsch SG McNamara JR Triglyceride measurements a review of methods and interferences Clin Chem 1990 36 1605 1613 Cole TG Klotzsch SG McNamara JR Measurement of Triglyceride Concentration In Handbook of Lipoprotein Testing 2 ed Rifai N Warnick GR Dominiczak MH comps Washington DC AACC Press 2000 207 219 Friedewald WT Levy RI Fredrickson DS Estimation of the concentration of low density lipoprotein cholesterol in plasma without use of the preparative ultracentrifuge Clin Chem 1972 18 499 502 Bachorik PS Measurement of low density lipoprotein cholesterol In Handbook of Lipoprotein Testing 2 ed Rifai N Warnick GR Dominiczak MH comps Washington DC AACC Press 2000 245 263 Schembri CT et al Centrifugation and capillarity integrated into a multiple analyte whole blood analyser J Automatic Chem 1995 17 99 104
5. cada lote nuevo an lisis exonerados por CLIA en laboratorios en estado exonerado Laboratorios no exonerados Abaxis recomienda que las pruebas de control se hagan conforme a las recomendaciones federales estatales y locales Page 46 of 68 9 Resultados El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress prueba calcula e imprime autom ticamente las concentraciones de an litos en la muestra Para aquellos resultados calculados y no determinados directamente LDL VLDL y TC H se a ade una c a los resultados para indicar que han sido calculados Podr encontrarse informaci n pormenorizada sobre los c lculos del punto final y la velocidad de la reacci n en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress En el manual del usuario se detalla tambi n la interpretaci n de los resultados los cuales se imprimen en tarjetas de resultado proporcionadas por Abaxis La parte posterior de las tarjetas de resultados es adhesiva para facilitar su colocaci n en los archivos del paciente 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se detallan en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress e Fl unico anticoagulante recomendado para usar con el sistema qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress es heparina litio No utilizar heparina s
6. cl nicas para la clasificaci n y el tratamiento del colesterol elevado Las recomendaciones m s recientes las recomendaciones del Panel III para el Tratamiento Page 41 of 68 de Adultos basan las decisiones terap uticas fundamentalmente en los niveles de LDL calculados como parte de un panel de l pidos tras evaluar el colesterol total el HDL y los triglic ridos Los valores l mite de LDL de 100 130 160 y 190 mg dl definen las categor as siguientes ptima l mite alto riesgo alto y riesgo muy elevado Un valor de HDL inferior a 40 mg dl es bajo considerado un factor de riesgo por la ATPIII lo que modifica el objetivo terap utico de las LDL Un valor de HDL superior a 60 mg dl se define como alto lo que se considera deseable y un factor de riesgo negativo rest ndolo del n mero total de factores de riesgo al seleccionarse el objetivo terap utico adecuado para las LDL Para los triglic ridos los valores l mites de 150 200 y 500 mg dl definen los niveles normales l mite alto alto y muy alto Los an lisis de Colesterol total y HDL Piccolo cumplieron los requisitos para certificaci n de precisi n y exactitud de la Red de Laboratorios de M todos de Referencia para el Colesterol CRMLN coordinado por los Centros para el Control de Enfermedades El proceso de certificaci n eval a la exactitud de la calibraci n y precisi n del m todo lo que contribuye a asegurar la clasificaci n confiable de pacientes en funci n de lo
7. concentraciones notificadas de algunos an litos Los ndices de la muestra se imprimen en la parte inferior de cada tarjeta de resultados para informar al usuario sobre los niveles de interferencias presentes en cada muestra e FEl sistema qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress suprime todo resultado que resulte afectado por una interferencia superior al 10 por hem lisis lipidemia o ictericia En lugar del resultado la tarjeta tendr impreso HEM LIP o ICT respectivamente e P ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para informaci n acerca de los niveles m ximos de sustancias end genas Efectos de las sustancias terap uticas Se seleccionaron diecis is sustancias terap uticas como obst culos potenciales para los an lisis de colesterol total HDL y triglic ridos sobre la base de las recomendaciones de Young La interferencia significativa se define como una desviaci n superior al 10 en el resultado para una muestra dentro de los valores normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con una concentraci n conocida de los f rmacos o qu micos y posteriormente fueron analizadas Page 47 of 68 Tabla 2 Sustancias terap uticas evaluadas Acetaminofeno Acetoacetato litio cido acetilsalic lico cido asc rbico Digoxina Glutati n Heparina litio B Hydroxibutarato Ibuprofeno Isoniacida Lactato litio Lidocaina Meticilina s dica Fenitoina Acido
8. de una c para indicar que ha sido calculado Relaci n entre colesterol total HDL calculado El analizador Piccolo o el analizador Piccolo xpress calcula autom ticamente la relaci n entre colesterol total HDL abreviada como TC H para cada muestra Si falta el valor de colesterol total o el de HDL medido directamente no se proporciona la CPR relaci n En la tarjeta impresa el valor calculado para TC H est seguido de una c para indicar que ha sido calculado Page 43 of 68 4 Principios de la operaci n Refi rase al manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener informaci n sobre los principios y limitaciones del procedimiento Schembri et l han aportado una descripci n detallada del analizador y del disco reactivo Piccolo 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada disco reactivo con panel l pido Piccolo contiene soportes s lidos reactivos secos espec ficos para la prueba descritos a continuaci n En cada disco se incluye un soporte s lido reactivo seco de muestra de referencia que consta de amortiguador surfactantes excipientes y estabilizadores para usar en el c lculo de las concentraciones de HDL Asimismo en el disco se incluyen soportes s lidos especializados de referencia para calcular concentraciones de CHOL y TRIG Cada disco contiene tambi n un diluyente que consta de un surfactante y estabilizadores Tabla 1 React
9. lipoprote nas individuales Tabla 5 y consideran el uso de la relaci n como una desviaci n posible de las mediciones de las lipoprote nas individuales que reciben la prioridad Page 49 of 68 12 Caracter sticas de eficacia Linealidad La qu mica para cada an lito es lineal a lo largo de los l mites din micos enumerados a continuaci n cuandoel analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se opera de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress Esta evaluaci n utiliz las NCCLS EP6 P2 Tabla 5 L mites din micos de Piccolo An lito Unidades comunes Unidades SI CHOL 20 520 mg dl 0 52 13 5 mmol l HDL 15 100 mg dl 0 39 2 59 mmol l TRIG 20 500 mg dl 0 23 5 65 mmol l Si la concentraci n de an litos es superior a los limites de medici n l mites din micos pero inferior a los limites del sistema en la tarjeta impresa se indicar un signo gt en el l mite superior y un asterisco detr s del n mero como en el ejemplo CHOL gt 520 mg dl Si se encuentra por debajo de los l mites din micos se imprimir lt con un asterisco como en el ejemplo CHOL lt 20 mg dl Para valores que se encuentren excesivamente por encima de los l mites de medici n l mites del sistema se imprimir en lugar del resultado Cada vez que aparezca
10. Disco reactivo con panel l pido Piccolo CE Servicio t cnico y al cliente 800 822 2947 Exoneraci n de la CLIA Usar nicamente sangre entera tratada con heparina litio Complejidad moderada Usar sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o suero Abril 2008 PN 400 7144 Rev J O 2002 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Indicaciones El disco reactivo con panel l pido Piccolo utilizado con el analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress est dise ado para ser usado en la determinaci n cuantitativa in vitro del colesterol total CHOL colesterol transportado por las lipoprote nas de alta densidad HDL y triglic ridos TRIG en un mbito de laboratorio cl nico Partiendo de estas determinaciones el analizador calcula el colesterol transportado por las lipoprote nas de baja densidad LDL el colesterol transportado por las lipoprote nas de muy baja densidad VLDL y la relaci n entre colesterol total y colesterol transportado por las lipoprote nas de alta densidad Esta prueba queda exenta seg n las normativas de CLIA 88 Clinical Laboratory Improvement Amendments En el caso de que un laboratorio modifique las instrucciones del sistema de la prueba sta se considerar de alta complejidad y sujeta a todos los requisitos de CLIA En el caso de laboratorios exentos seg n CLIA s lo se podr n realizar pruebas de sangre entera con heparina de liti
11. an lisis cumplen los criterios de precisi n del NCEP Correlaci n Las muestras de suero fueron obtenidas y analizadas en el analizador qu mico de sangre Piccolo y por m todos de comparaci n Todos los resultados de las pruebas fueron generados en un sitio de campo Las muestras se eligieron a fin de proporcionar una distribuci n de valores siguiendo las recomendaciones NCCLS EP9 A2 como el objetivo para cada analito En la Tabla 8 se muestran las correlaciones estad sticas representativas Page 51 of 68 Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico de sangre Piccolo con m todos de comparaci n Limites de ee Coeficiente de g An lisis vi a la muestra M todo de correlaci n Pendiente Intercepci n VER N a mg dl comparaci n r Colesterol An lisis de CHOL 0 997 1 079 17 1 4 5 174 115 342 Colesterol Bayer en Hitachi 917 Roche 0 965 0 851 8 3 3 9 166 23 97 HDL C plus en Hitachi 917 HDL Triglic ridos An lisis de TRIG 0 999 0 983 8 2 4 4 172 38 487 triglic ridos Bayer en Hitachi 917 Tabla 8 Recuperaci n calculada de los an lisis con panel l pido de Abaxis An lisis Concentraci n Recuperaci n calculada Predisposici n predisposici n Dispositivo de Piccolo a partir delos mg dl predicado datos de regresi n lineal mg dl anteriores mg dl Colesterol 200 199 1 0 5 CHOL 240 242 2 0 8 HDL 40 42 2 5 0 60 59 1 1 7 Triglic ridos 150 156 6 4 0 TRIG 200 205 5 2 5 Preci
12. dica e Las muestras con un hematocrito superior al 62 del volumen de eritrocitos concentrados puede arrojar resultados imprecisos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden centrifugarse para obtener plasma y a continuaci n analizarse otra vez en un disco reactivo nuevo e Cualquier resultado para una prueba en particular que supere los valores de la prueba deber analizarse por otro m todo de prueba aprobado o ser enviado a un laboratorio de referencia No diluya la muestra y vuelva a analizarla en el analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Advertencia En muy raros casos el extenso uso del sistema qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress ha demostrado que una muestra colocada en el disco reactivo puede no fluir de manera adecuada en la c mara de muestras Debido al flujo no uniforme puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y varios de los resultados pueden caer fuera de los valores esperados La muestra puede volverse a analizar con un nuevo disco reactivo Interferencia Se probaron sustancias que interfieren con los an litos Se prepararon mezclas de suero humano La concentraci n a la cual se prob cada obst culo potencial se bas en los niveles de prueba en NCCLS EP7 A Efectos de las sustancias end genas e Los obst culos fisiol gicos hem lisis ictericia y lipidemia provocan cambios en las
13. dio conveniente para evaluar el riesgo de CVD Sin embargo parte del colesterol es transportado por las HDL o part culas antiaterog nicas o se asocian de manera inversa con el riesgo de desarrollar CVD Asi pues la cuantificaci n individual de las principales lipoprote nas transportadoras de colesterol LDL y HDL permite una evaluaci n m s precisa del riesgo general Los triglic ridos el principal combustible del organismo son transportados en el torrente sangu neo por grandes lipoprote nas llamadas quilomicrones CM Las VLDL tambi n transportan triglic ridos fundamentalmente sintetizados en el h gado a partir del exceso de cidos grasos En la circulaci n los triglic ridos son hidrolizados y sus cidos grasos transportados en c lulas perif ricas que dejan part culas remanentes precursoras de las LDL Tras un ayuno de una noche generalmente los quilomicrones desaparecen de la circulaci n Los niveles m s elevados de triglic ridos medidos en una muestra obtenida en condiciones de ayuno indican dificultades en la depuraci n o bien la sobreproducci n lo que puede aumentar el riesgo de desarrollar CVD y hace a su vez que su medici n resulte til en la identificaci n de las enfermedades metab licas y el riesgo general El Instituto Nacional de Coraz n Pulm n y Sangre de los EE UU organiz el Programa Nacional de Educaci n sobre el Colesterol el cual reuni paneles de expertos con objeto de desarrollar recomendaciones
14. ds proposed guideline second edition NCCLS Document EP6 P2 Wayne PA NCCLS 2001 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices approved guideline NCCLS Document EP5 A Wayne PA NCCLS 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Quality management for unit use testing proposed guideline NCCLS Document EP18 P Wayne PA NCCLS 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Method comparison and bias estimation using patient samples approved guideline second edition NCCLS Document EP9 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Page 54 of 68
15. eden ser utilizados hasta la fecha de caducidad impresa en el r tulo de la caja y en cada bolsa La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Indicaciones de inestabilidad deterioro del disco reactivo Una bolsa rasgada o rota puede permitir que la humedad llegue al disco sin usar y afecte de manera negativa la eficacia del reactivo No use discos de bolsas da adas 6 Instrumento Para obtener informaci n completa sobre el uso del analizador consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress 7 Obtenci n y preparaci n de las muestras En la secci n Obtenci n de muestras del manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se describen las t cnicas para la obtenci n de muestras e De acuerdo con las ATP 111 para determinar CHOL HDL TRIG y LDL deben usarse muestras obtenidas bajo condiciones de ayuno entre ocho y doce horas Por lo tanto se recomienda que con el disco con panel l pido se usen muestras obtenidas bajo condiciones de ayuno Si los pacientes no est n en ayunas los valores calculados para TRIG y LDL no ser n v lidos e Para las muestras de sangre entera o plasma use
16. es biopeligrosos e Los discos reactivos son de pl stico y pueden romperse o estallarse si se caen Nunca use un disco que se haya ca do ya que puede esparcir material biol gico peligroso en el interior del analizador Page 44 of 68 e FEl reactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o c usticas El usuario no entra en contacto con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso de que se manipule el reactivo en soporte s lido por ejemplo limpieza tras caerse y romperse un disco de reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel y la inhalaci n del mismo Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los discos de reactivo pueden usarse inmediatamente despu s de retirarse del refrigerador sin calentarlos previamente Deseche los discos no usados transcurridos 20 minutos de la apertura de la bolsa No permita que los discos sellados en sus bolsas de aluminio permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes de su uso Abra la bolsa de aluminio sellada saque el disco y util celo de acuerdo con las instrucciones proporcionadas en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Almacenamiento Almacene los discos de reactivo en sus bolsas selladas a 2 8 C 36 46 F No exponga los discos abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C 90 F Los discos reactivos pu
17. grama de Homologaci n de L pidos CDC NHLBI CDC NHLBI Lipid Standardization Program Page 52 of 68 Resultados del estudio usuario inexperto En el estudio usuario inexperto a los participantes nicamente se les facilit las instrucciones de la prueba y se les solicit que realizasen las pruebas de 3 paneles de l pidos con muestras aleatorias ciegas Las muestras constaban de mezclas de suero preparadas a tres niveles para cada uno de los tres an litos colesterol total colesterol de las HDL y triglic ridos No se les imparti a los participantes formaci n alguna en cuanto al uso de las pruebas Participaron 63 personas procedentes de 3 centros diferentes los cuales representaban una poblaci n demogr fica diversa educaci n edad sexo etc En las tablas siguientes se muestra el resumen del comportamiento de cada an lito Colesterol total l mites 11 1 95 IC 91 5 a 100 95 IC 94 3 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 63 63 63 Media 144 2 mg dl 198 4 mg dl 245 1 mg dl VR 2 9 2 3 1 3 Limites observados 122 154 186 222 237 255 Porcentaje de los 98 4 100 100 resultados en los 62 63 63 63 63 63 95 IC 94 3 a 100 2 lt A fi te T Este porcentaje se basa en la premisa de que no es posible realizar una clara distinci n entre los valores normales y anormales cuando los valores superan un cuarto del l mite normal Se cons
18. ider el rango 140 mg dl 220 mg dl Colesterol de las HDL Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 63 63 63 Media 29 4 mg dl 44 4 mg dl 58 9 mg dl VR 3 3 3 2 2 0 L mites observados 28 32 42 48 57 62 Porcentaje de los 100 100 100 resultados en los 63 63 63 63 63 63 l mites 15 0 95 IC 94 3 a100 95 IC 94 3 a100 95 IC 94 3 a 100 Triglic ridos Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 63 63 63 Media 83 4 mg dl 152 7 mg dl 205 6 mg dl VR 3 0 1 5 0 9 L mites observados 77 96 148 164 201 210 Porcentaje de los 100 100 100 resultados en los 63 63 63 63 63 63 limites 15 0 95 IC 94 3 a 100 95 IC 94 3 a 100 95 IC 94 3 a 100 Page 53 of 68 13 Bibliograf a 1 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Castelli WP et al Lipids and risk of coronary heart disease The Framingham Study Ann Epidemiol 1992 2 23 28 National Cholesterol Education Program Expert Panel Third report of the National Cholesterol Education Program NCEP Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults ATP II NIH Publication Bethesda MD National Heart Lung and Blood Institute 2002 Executive summary of the third report of the National Cholesterol Education Program NCEP Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of
19. ivos Componente Cantidad disco 4 Aminoantipirina 6 7 ug Adenosina 5 trifosfato sal dis dica 9 2 ug Ascorbato oxidasa 0 042 U Colesterol deshidrogenasa 0 080 U Colesterol esterasa Genzyma N 0 27 U Colesterol esterasa Genzyma P 0 0080 U Sulfato de dextrano 8 4 ug Diaforasa 0 25 U N etil N 2 hidroxi 3 sulfopropil 3 metilanilina sal de sodio dihidrato 79 ug TOOS Glicerol quinasa 0 084 U Glicerol 3 fosfato deshidrogenasa 0 21 U Cloruro de iodonitrotetrazolio INT 8 4 ug Lipasa 16 8 U Cloruro de magnesio hexahidrato 8 6 ug Sulfato de magnesio heptahidrato 197 ug Nicotinamida adenina dinucle tido sal monos dica NAD 455 ug PEG colesterol esterasa 0 013 U PEG colesterol oxidasa 0 089 U Peroxidasa 0 27 U Amortiguadores surfactantes excipientes y estabilizadores Advertencias y precauciones e Para uso diagn stico in vitro e El envase del diluyente del disco reactivo se abre autom ticamente al cerrarse el caj n del analizador Un disco con un contenedor diluyente abierto no puede volver a utilizarse Aseg rese de que la muestra o la prueba est colocada en el disco antes de cerrar el caj n e Los discos de reactivo usados contienen l quidos del cuerpo humano Siga las pr cticas de seguridad del laboratorio cuando manipule y elimine discos usados Consulte el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress para obtener instrucciones sobre la limpieza de derram
20. journal s name changed in 2000 to J Automated Methods amp Management in Chemistry Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Clinical laboratory waste management approved guideline second edition NCCLS Document GP5 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Procedure for the collection of diagnostic specimens by venipuncture approved guideline fourth edition NCCLS Document H3 A4 Wayne PA NCCLS 1998 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Procedures for the handling and processing of blood specimens approved guideline second edition NCCLS Document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Document EP7 A Wayne PA NCCLS 2002 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3rd ed Washington DC AACC Press 1990 and 1991 Supplement Kroll MH et al Standardization of Lipoprotein Reporting Am J Clin Pathol 2000 114 696 702 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of Linearity of Quantitative Analytical metho
21. o En el caso de utilizaci n en laboratorios de complejidad moderada se podr utilizar sangre entera heparinizada con litio plasma heparinizado con litio o suero Es necesario disponer de un Certificado de Exenci n seg n CLIA para realizar la prueba de exenci n de CLIA El Certificado de Exenci n puede obtenerse en los Centros de Medicare amp Medicaid Services CMS P ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis llamando al tel fono 800 822 2947 para recibir m s informaci n acerca de c mo obtener dicho documento 2 Resumen y explicaci n de las pruebas Importancia cl nica La medici n de los l pidos y las lipoprote nas s ricos es muy til en la identificaci n del riesgo de un individuo de desarrollar enfermedades cardiovasculares CVD y en el control de las intervenciones terap uticas Las recomendaciones basadas en el consenso para la interpretaci n de las mediciones y valores l mite han sido proporcionadas por el Programa Nacional de Educaci n sobre el Colesterol Los l pidos circulantes son transportados por las lipoprote nas La fracci n de las LDL la principal lipoprote na que contribuye al desarrollo de la ateroesclerosis y para la cual se demostr de manera concluyente que el tratamiento es efectivo transporta la mayor parte del colesterol circulante en la sangre Durante varios a os se ha venido evaluando el colesterol s rico total para cuantificar la cantidad total de lipoprote nas como me
22. olo xpress e Con cada analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress se suministra una pipeta de transferencia de muestras volumen fijado de aproximadamente 100 pl y puntas y se pueden solicitar repuestos a Abaxis e Reactivos de control disponibles comercialmente recomendados por Abaxis p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para solicitar materiales de control homologados y valores esperados e Cron metro Par metros de prueba El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress funciona a temperaturas ambiente entre 15 C y 32 C 59 90 F El tiempo de an lisis para cada disco reactivo con panel lipido Piccolo es inferior a 15 minutos El analizador mantiene el disco reactivo a una temperatura de 37 C 98 6 F durante el intervalo de medici n Procedimiento de prueba La obtenci n completa de la muestra y los procedimientos de operaci n paso a paso se detallan en el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Calibrado El analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress es calibrado por el fabricante antes de su env o El c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras proporciona al analizador los datos de calibraci n espec ficos del disco Ver el manual del usuario del analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Piccolo xpress Con
23. os proporcionan una medida de los triglic ridos totales sin un glicerol blanco LDL calculadas El analizador Piccolo o el analizador Piccolo xpress calcula autom ticamente la concentraci n de LDL en cada muestra mediante los valores determinados directamente para el colesterol total HDL y triglic ridos y la ecuaci n Friedewald est ndar Esta ecuaci n no es v lida para concentraciones de triglic ridos superiores a los 400 mg dl para pacientes que no se encuentran en condiciones de ayuno y para pacientes con hiperlipoproteinemia tipo III disbetalipoproteinemia No se notifica el valor de LDL en muestras con triglic ridos superiores a 400 mg dl o si no se dispone de otro valor de an litos medido directamente En la tarjeta impresa el valor calculado para LDL est seguido de una c para indicar que ha sido calculado VLDL calculado El analizador Piccolo o el analizador Piccolo xpress calcula autom ticamente la concentraci n de VLDL en cada muestra mediante la ecuaci n est ndar de triglic ridos 5 si las unidades est n en mg dl Esta ecuaci n no es v lida para concentraciones de triglic ridos superiores a los 400 mg dl pacientes que no se encuentran bajo condiciones de ayuno y pacientes con hiperlipoproteinemia tipo III disbetalipo proteinemia Por supuesto si se dispone del valor de los triglic ridos no se calcula el valor de las VLDL En la tarjeta impresa el valor calculado para VLDL est seguido
24. s valores l mite del NCEP Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba antes del diagn stico final hay que considerar todos los dem s procedimientos de prueba incluido el estado cl nico del paciente 3 Principios de los procedimientos Colesterol total CHOL El an lisis CHOL de Abaxis es un m todo con criterio de valoraci n enzim tico que utiliza la enzima colesterol esterasa CE y la deshidrogenasa CHDH CE steres de colesterol HO gt Colesterol cidos grasos CHDH Colesterol NAD gt Colest 4 en 3 ona NADH H La CE hidroliza los steres de colesterol para formar colesterol y cidos grasos La reacci n CHDH convierte el colesterol en colest 4 en 3 ona La NADH se eval a bicrom ticamente a 340 nm y 405 nm La producci n de NADH es directamente proporcional a la cantidad de colesterol presente Tambi n se controla un blanco espec fico para el an lisis a fin de asegurar que ninguna reacci n extra a interfiera con los c lculos de los niveles de CHOL Colesterol transportado por las lipoprote nas de alta densidad HDL El an lisis HDL de Abaxis es un m todo de precipitaci n que utiliza colesterol esterasa y colesterol oxidasa modificados con polietilenglicol PEG CE y PEG CO respectivamente para una mayor especificidad A continuaci n se describe el mecanismo de la reacci n CM LDL VLDL y HDL sulfato de dextrano MgSO
25. salicilico Teofilina Rangos fisiol gico o terap utico gt mg dl 2 10 0 05 3 6 1 2 0 8 1 5 0 21 2 81 0 5 4 2 0 1 0 7 6 12 0 5 0 6 1 2 1 2 Concentraci n m s elevada probada mg dl 4 4 800 U dl 1 000 50 4 84 1 100 3 50 20 Ninguno de los an lisis demostr una interferencia significativa a las concentraciones de sustancias ex genas probadas Tabla 3 Concentraci n de an litos en mezclas s ricas 2 niveles usadas para sustancias ex genas Estudios de interferencia An lito Colesterol CHOL HDL Triglic ridos TRIG 11 Umbrales Concentraci n 163 y 197 mg dl 39 y 52 mg dl 125 y 183 mg dl El Programa Nacional de Informaci n sobre Colesterol ha establecido los umbrales consensuados para los an litos l pidos lipoprote nas de la siguiente manera 2 3 4 Page 48 of 68 Tabla 4 Valores de decisi n m dica Colesterol total CHOL HDL Triglic ridos TRIG LDL VLDL CALC Relaci n colesterol total HDL Interpretaci n Deseables L mite elevado Elevado HDL bajo factor de riesgo HDL alto factor de riesgo negativo deseable Normal L mite elevado Elevado Muy elevado ptimo Casi ptimo L mite elevado Elevado Muy elevado Normal Elevado Bajo riesgo Alto riesgo Umbrales mg dl lt 200 200 239 gt 240 lt 40 gt 60 lt 150 150 199 200 499 gt 500 lt 100 100
26. si n Certificaci n de la Red de Laboratorios del M todo de Referencia del Colesterol CRMLN La precisi n de los an lisis de Piccolo para el colesterol total y el colesterol de las HDL se estableci al finalizar el proceso de certificaci n CRMLN para estos an litos en suero Una parte clave de la certificaci n CRMLN es el an lisis de regresi n lineal del an lisis de Piccolo comparado con los m todos de referencia La precisi n del an lisis de colesterol total en comparaci n con el m todo de referencia de Abell Kendall se indica por el coeficiente de correlaci n R de 0 996 pendiente de 0 972 y la intercepci n de 7 2 mg dl Se determin en 0 8 una interserial n 10 para el an lisis de colesterol total de Piccolo Para el an lisis HDL de Piccolo en comparaci n con el m todo de referencia HDL la precipitaci n seguida por el an lisis de colesterol de Abell Kendall el coeficiente de correlaci n R fue 0 986 pendiente de 0 968 e intercepci n de 2 1 mg dl Se determin en 1 9 una interserial n 20 VR para el an lisis de HDL de Piccolo El rendimiento anal tico observado cumpli los requisitos para la certificaci n CRMLN para el colesterol total y HDL para el suero La certificaci n CRMLN para los triglic ridos a n no est disponible en los Estados Unidos Sin embargo el estudio de correlaci n anteriormente descrito para triglic ridos fue realizado en un laboratorio homologado para triglic ridos mediante el Pro
27. solamente tubos para obtenci n de muestras evacuados con heparina litio tap n verde con o sin separados de gel Para las muestras de suero use tubos para obtenci n de muestras sin aditivo tap n rojo o tubos separadores de suero tap n rojo o rojo negro e El tama o m nimo de muestra requerido es 100 ul de sangre entera heparinizada plasma heparinizado suero o material de referencia La c mara de muestra del disco reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben homogeneizarse antes de transferir una muestra al disco reactivo Invierta cuidadosamente el tubo para obtenci n de muestras varias veces antes de transferir la muestra No agite el tubo para obtenci n de muestras esto puede causar hem lisis e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben analizarse a los 60 minutos como m ximo de que fueran obtenidas Si no se puede analizar la muestra en un tiempo l mite de 60 minutos podr separarse en plasma o suero y almacenarse en tubos de muestra con tapa a 2 8 C 36 46 F e Comience la prueba en los 10 minutos siguientes a la transferencia de la muestra al disco reactivo Page 45 of 68 8 Procedimiento Materiales suministrados e Un disco reactivo con panel lipido Piccolo PN 400 1025 una caja de discos PN 400 0025 Materiales necesarios pero no suministrados e Analizador qu mico de sangre Piccolo o el analizador qu mico Picc
28. trol de calidad Consulte la Secci n 2 4 del manual del usuario Piccolo o la Secci n 6 Calibraci n y control de calidad del manual del usuario Piccolo xpress El rendimiento del analizador qu mico de sangre Piccolo o del analizador qu mico Piccolo xpress puede verificarse por medio de controles P ngase en contacto con el Servicio de asistencia t cnica de Abaxis para solicitar una lista de los materiales de control de calidad homologados con los l mites de aceptaci n Otros controles basados en plasma o suero humanos pueden no ser compatibles Los materiales de control de calidad deben almacenarse conforme a las instrucciones del prospecto incluido con los controles Si los controles dan resultados fuera de los l mites repita una vez Si siguen fuera de los l mites llame al servicio de asistencia t cnica Si los controles incumplen los l mites de la etiqueta no utilice sus resultados Consulte el Manual del usuario Piccolo o Piccolo xpress para obtener informaci n m s detallada sobre la realizaci n el registro la interpretaci n y la extrapolaci n de los resultados de control Laboratorios exonerados Abaxis recomienda las pruebas de control de la siguiente manera e Al menos cada 30 d as e Siempre que hayan cambiado las condiciones de laboratorio de manera significativa por ejemplo traslado del Piccolo a otro lugar o cambios en el control de temperatura e Cuando se indique la formaci n o nueva formaci n del personal Con
29. ulos de los niveles de HDL Triglic ridos TRIG El an lisis TRIG de Abaxis es un m todo con criterio de valoraci n enzim tico que utiliza cuatro enzimas A continuaci n se describe el mecanismo de la reacci n Lipasa Triglic ridos 3H 0 Glicerol 3 cidos grasos Glicerol quinasa Mg Glicerol ATP gt G 3 P ADP G 3 PDH G 3 P NAD DAP NADH H Diaforasa NADH H INT gt NAD Formazano G 3 P Glicerol 3 fosfato G 3 PDH Glicerol 3 fosfato deshidrogenasa DAP Dihidroxiacetona fosfato INT Violeta de p iodonitrotetrazolio En el primer paso los triglic ridos son hidrolizados a glicerol y cidos grasos en una reacci n catalizada por la lipasa El glicerol es a continuaci n fosforilado en una reacci n catalizada por la glicerol quinasa GK que requiere la presencia de ATP El glicerolfosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato con la reducci n simult nea de NAD a NADH en una reacci n catalizada por glicerol 3 fosfato deshidrogenasa G 3 PDH La NADH se oxida con la reducci n simult nea de INT en una reacci n catalizada por diaforasa La intensidad del formazano muy coloreado se mide bicrom ticamente a 500 nm y 850 nm y es directamente proporcional a la concentraci n de triglic ridos en la muestra Tambi n se controla una referencia espec fica para el an lisis a fin de asegurar que ninguna reacci n extra a interfiera con los c lculos de los niveles de TRIG Los resultad
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